O urubu-de-cabeça-preta (Coragyps atratus) é uma ave de vida livre com ampla distribuição no Brasil. Esta espécie é comumente encontrada em áreas urbanas concentrando-se em locais de deposição de lixo. O fato de se alimentarem de carcaças em decomposição facilita o contato de urubus-de-cabeça-preta com muitos patógenos. No entanto, ainda não está clara qual a real implicação de muitos desses microrganismos para a saúde dos mesmos. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar a ocorrência de alguns patógenos selecionados, avaliar o perfil hematológico e a microbiota cloacal de C. atratus em ambiente urbano. Para isso, amostras de sangue, soro e swab cloacal foram obtidos de 120 urubus de vida-livre capturados na Fundação Parque Zoológico de São Paulo, SP. A prova de soroaglutinação rápida (SAR) foi utilizada na detecção de anticorpos contra Salmonella Pullorum/Gallinarum, Mycoplasma synoviae e M. gallisepticum. O teste de aglutinação em látex (AL) foi utilizado para a pesquisa de antígeno de Cryptococcus neoformans. Foram utilizadas técnicas convencionais de hematologia, microbiologia e testes de sensibilidade microbiana. Das amostras de soro analisadas pela SAR, 15% foram reagentes para M. gallisepticum. Anticorpos contra S. Pullorum/Gallinarum e M. synoviae não foram detectados. Nenhuma amostra foi positiva para C.neoformans ou para hemoparasitas. A média e o desvio padrão dos seguintes valores hematológicos foram obtidos para 61 aves: eritrócitos (1.8x10¹²/L); leucócitos (13,11x10/L); hemoglobina (10,4 g/dL); hematócrito (48,44%); VCM (275,1 fL); HCM (42 pg); CHCM (15,8 g/dL); proteína sérica total (3,76 g/dL); heterófilos (78%); linfócitos (13,5%); eosinófilos (5,4%); monócitos (2,8%); basófilos (0,1%); trombócitos (14,14x10/L). De 75 colônias bacterianas isoladas de 20 swabs cloacais, 78,7% foram Gram-positivas e 21,3% Gram-negativas, sendo Enterococcus sp. o gênero mais frequente. Aproximadamente 86,7% das cepas isoladas foram resistentes a pelo menos um dos antibióticos testados. Cepas de Bacillus sp. e Enterococcus casseliflavus apresentaram resistência a sete dos oito antibióticos testados. Leveduras não foram isoladas em nenhumas das culturas. As informações obtidas nessa pesquisa são de suma importância, uma vez que poucos estudos avaliam o estado de saúde de urubus no mundo. / Black vulture (Coragyps atratus) is a free-living bird widely distributed across Brazil. These birds feed on rotting carcasses and large groups are commonly found in urban areas, including rubbish dumps. By feeding on decomposing carcasses, they are often exposed to innumerous pathogens. However, the role of infectious microorganisms on vultures health still need to be clarify. Thus, the aim of this study was to investigate the occurrence of selected infectious agents, the hematological profile and cloacal microbiota of black vulture in urban areas. Therefore, blood, serum and cloacal swabs were obtained from 120 free-living vultures trapped in Fundação Parque Zoológico de São Paulo, SP. The rapid seroagglutination test (RST) was performed for detection of antibodies against Salmonella Pullorum/Gallinarum, M. synoviae and M. gallisepticum. Furthermore, latex agglutination test was used to detect Cryptococcus neoformans \' antigen. Conventional techniques for hematology, microbiology and antimicrobial susceptibility testing were performed. From the serum samples analyzed by RST, 15% were positive for M. gallisepticum, antibodies against S. Pullorum/Gallinarum and M. synoviae were not detected. None sample was positive to Cryptococcus neoformans or hemoparasites. Mean and standard deviation from the following hematological values were obtained for 61 birds: erythrocytes (1.8x10¹²/L); leukocytes (13.11x10/L); hemoglobin (10.4 g/dL); hematocrit (48.44%); MCV (275,1 fL); MCH (42 pg); MCHC (15,8 g/dL); total serum protein (3.76 g/dL); heterophils (78%); lymphocytes (13.5%); eosinophils (5.4%); monocytes (2.8%); basophils (0,1%); thrombocyte (14.14x10/L). From 75 bacterial colonies isolated from 20 cloacal swabs, 78.7% were Gram-positive and 21.3% were Gram-negative. Enterococcus sp. was the most frequent genus. Approximately 86.7% of the isolated strains were resistant to at least one of the antibiotic tested. Bacillus sp. and Enterococcus casseliflavus strains shown resistance to seven in eight antibiotics tested. Yeasts were not isolated. The information obtained in this research is of paramount important since few studies have been carried out on the vultures health condition in the world.

Objetivando-se avaliar variáveis hemato-bioquímicas, digestibilidade aparente dos nutrientes e desempenho animal, assim como, o metabolismo e a cinética do fósforo (P) em cordeiros infectados experimentalmente com Trichostrongylus colubriformis, foram realizados dois experimentos. No primeiro estudo, foram utilizados 18 cordeiros machos, da raça Santa Inês, distribuídos em dois tratamentos experimentais: grupo infectado (I, n=9) e grupo controle (C, n=9) sem infecção. Os cordeiros do grupo I receberam aproximadamente 5000 L3, três vezes por semana, durante três semanas, totalizando 45000 L3 de T. colubriformis. O controle do consumo do alimento foi diário, utilizando a metodologia do tipo pair-fed (para eliminar efeito de consumo). Foram avaliados quinzenalmente, durante 75 dias, os dados de peso vivo, escore de condição corporal e amostras de sangue e fezes foram colhidas para determinação do hemograma, bioquímica sérica e contagem de ovos por grama de fezes (OPG), respectivamente. Também foi avaliado a digestibilidade aparente dos nutrientes e os parâmetros ruminais dos cordeiros. Os cordeiros apresentaram infecção moderada (OPG = 620,3 ± 594,98) com redução de eritrócitos, hemoglobina, hematócrito, volume corpuscular médio, concentração de hemoglobina corpuscular média e proteínas totais (P < 0,1). Por outro lado, houve aumento do número de plaquetas, bem como a quantidade de eosinófilos circulantes quando comparado aos cordeiros do grupo C (P < 0,1). Não houve alteração no consumo voluntário dos cordeiros I (P > 0,05), porém houve menor digestibilidade da MS (P < 0,1). Diante disso, conclui-se que a infecção por T. colubriformis alterou parâmetros hematológicos, bioquímicos, não interferindo no consumo de matéria seca, mas, reduzindo digestibilidade da MS em cordeiros infectados. No segundo estudo, objetivou-se avaliar o metabolismo e a cinética do P em cordeiros infectados experimentalmente com T. colubriformis utilizando a técnica de diluição isotópica e modelagem. Para tanto, foram utilizados 15 cordeiros distribuídos nos tratamentos infectado (I, n=8) e controle (C, n=7) como descrito acima. Após 66 dias da última inoculação foi injetado 6,6 MBq de 32P/cordeiro para avaliar a cinética do mineral. Amostras de sangue, fezes e urina foram coletados nos sete dias seguintes, com abate dos cordeiros no último dia para colheita de amostras dos tecidos ósseo e moles (fígado, rim, coração e músculo). Para análises dos fluxos de P foi utilizado o modelo biomatemático descrito por Lopes et al. (2001). Foi verificado consumo semelhante de P (VI) entre os cordeiros dos dois tratamentos (P > 0,1), menor absorção das frações do P endógeno (Vaf) e dietético (Vaa) bem como maior excreção do P de origem dietético (VFD) nos cordeiros I (P < 0,1). Com a menor absorção (VaT) de P em cordeiros I, houve, consequentemente, menor distribuição e menor incorporação de P nos ossos (VO+D). Conclui-se que o metabolismo de P de cordeiros infectados por T. colubriformis foi alterado, com redução da sua absorção intestinal e biodisponibilidade, com aumento da perda fecal e redução do fluxo de P para ossos / Aiming to evaluate hemato-biochemical variables, apparent digestibility and performance as well as the metabolism and kinetic of phosphorus (P) in lambs experimentally infected with Trichostrongylus colubriformis, two experiments were conducted. At the first study, 18 male lambs were distributed in two experimental treatments: infected group (I, n=9) and control group (C, n=9) unaffected. Infected lambs received approximately 5000 T. colubriformis infective larvae (L3), three times per week, during three weeks, totalling 45 000 T. colubriformis L3. The control of daily feed intake was performed (pair-fed). Data of live weight, body condition score and samples of blood and faeces were collected fortnightly, during 75 days to analyze the hemogram, biochemical variables and faecal egg count (FEC), respectively. In addition, apparent digestibility and ruminal parameters of lambs were determined. Lambs presented moderate infection (FEC = 620.3 ± 594.98) with decreased erythrocytes, haemoglobin, hematocrit, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin concentration and total protein. On the other hand, increased platelets counts as well as the amount of circulating eosinophils when compared to the group C (P < 0.1). The voluntary intake of infected lambs was not altered, but there was lower dry matter digestibility. It was concluded that T. colubriformis infection altered haematological and biochemical parameters. It did not interfere in dry matter intake, but decreased digestibility in infected lambs. In the second study, the objective was to study the metabolism and kinetic of P in lambs experimentally infected with T. colubriformis using isotope dilution technique and modelling. For this, 15 lambs distributed in the infected treatment (I, n=8) e control (C, n=7) as described above were used. After 66 days of the last inoculation was injected 6.6 MBq of 32P/lamb to evaluate the kinetics of the mineral. Blood, faeces and urine samples were collected in the following seven days and the slaughter of lambs was carried out on the last day in order to collect bone and soft tissues (Liver, kidney, heart and muscle) samples. To analyze P flows the biomathematical model described by Lopes et al. (2001) was used. Similar P intake between treatments was verified (VI) (P > 0.1), lower absorption of endogenous (Vaf) and dietary P (Vaa) as well as higher excretion of dietary P (VFD) in infected lambs (P < 0.1). With the lower absorption (VaT) of P in infected lambs, there was, consequently, lower distribution and lower incorporation of P in the bones (VO+D). It was concluded that P metabolism of lambs infected with T. colubriformis was altered, with reduced intestinal absorption and bioavailability, increased faecal loss and reduced P flow to bone

Foram coletadas 137 amostras sanguíneas de 132 espécimes diferentes, pertencentes a sete espécies de Strigiformes (n=92) e onze espécies de Falconiformes (n=45), entre os meses de setembro de 2008 e julho de 2009. As amostras foram submetidas a hemograma completo, pesquisa de hemoparasitos através da avaliação do esfregaço sanguíneo, sexagem através da técnica de PCR e mensuração da atividade de colinesterases plasmáticas através do método de Ellman (1961). Apenas sete corujinhas-do-mato (Megascops choliba) apresentaram hemoparasitos (5,3 % do total de rapinantes). Houve diferença significativa conforme o estado de saúde da ave, sendo que a todos os animais clinicamente hígidos não estavam infectados, porém 20,4% dos animais com desordens clínicas apresentavam hemosporídeos. Quantitativamente, a parasitemia mediana dos animais infectados foi de 3,8 hemácias parasitadas por 10.000 hemácias, um índice de infecção relativamente baixo. A grande maioria dos parâmetros hematológicos não apresentou diferenças estatísticas em função da presença ou ausência de hemoparasitos, o que na maioria dos casos caracterizou uma infecção branda e pouco patogênica. A atividade de colinesterases plasmáticas apresentou uma distribuição normal, com uma média geométrica de 0,8333 micromoles/mL e desvio padrão geométrico de 1,7087 µmols/mL. A atividade de colinesterases plasmáticas apresentou diferenças estatísticas significativas entre Falconiformes (0,5705±1,6497 µmols/mL) e Strigiformes (1,0070±1,5620 µmols/mL). Não houve diferenças significativas entre machos ou fêmeas e adultos ou jovens dentre os Falconiformes ou Strigiformes. Falconiformes não hígidos apresentaram valores surpreendentemente mais baixos do que os clinicamente hígidos. Entre os Strigiformes, os espécimes de cativeiro apresentaram valores mais baixos de atividade de colinesterases plasmáticas do que os de vida livre. A atividade de colinesterases plasmáticas foi significativamente diferente entre os animais com hemoparasitos (mediana geométrica = 2,0132 µmols/mL) e sem hemoparasitos (mediana geométrica = 0,8331 µmols/mL). Este estudo contribui com informações relevantes sobre a ocorrência de hemosporídeos em aves de rapina do Estado de São Paulo, alertando as Instituições sobre a necessidade de monitoração destes protozoários sanguíneos. Além disso, contribui com dados inéditos sobre a atividade de colinesterases plasmáticas em rapinantes. / 137 blood samples were collected from 132 different specimen, belonging to seven species of Strigiformes (n=92) and eleven species of Falconiformes (n=45), from September 2008 to July 2009. Samples were submitted to complete hemogram, survey for hemoparasites through evaluation of blood smears, sex identification by PCR and measurement of plasmatic cholinesterases by the method of Ellman (1961). Only seven black-capped-screech-owls (Megascops choliba) were positive for hemoparasites (5,3% of total raptors). There were significative difference according to avian health status; all the clinicaly higid animal were not infected, but 20,4% of animals with clinical desorders presented haemosporidians. Quantitatively, the average parasitemia was 3,8 parasited erythrocytes in 10.000 erythrocytes, a infection rate relatively low. The most of hematologic parameters did not present statistic differences in function of presence or absence of hemoparasites, what in most of the cases characterized a low and not much pathogenic infection. The plasmatic cholinesterase activity presented normal distribution, with geometric average of 0,8333 micromoles/mL and geometric standard deviation of 1,7087 µmols/mL. The plasmatic cholinesterase activity presented statistic differences between Falconiformes (0,5705±1,6497 µmols/mL) and Strigiformes (1,0070±1,5620 µmols/mL). There were not significative differences between males of females and adults or youngs between Falconiformes or Strigiformes. Non-higid Falconiformes presented surprisiling much low values than those clinically higid. Between Strigiformes, the captivity specimens present much lower plasmatic cholinesterase activity values than free ranging animals. The plasmatic cholinesterase activity was signifactively different among animal with hemoparasites (geometric average = 2,0132 µmols/mL) and without hemoparasites (geometric average = 0,8331 µmols/mL). This research contributes with relevant information about the haemosporidian occurence in raptors of State of São Paulo, alerting the Institutions about the necessity of monitorizing haemoprotozoa. Besides that, contributes with unpublished data about the plasmatic cholinesterase activity in raptors.

Introdução: A diarréia por Clostridium difficile é uma das principais causas de diarréia infecciosa associada à assistência à saúde. Objetivo: Descrever os casos e a incidência de diarréia por C. difficile em pacientes hematológicos e TCTH internados na enfermaria da Hematologia e do Transplante de Medula óssea do Hospital das Clinicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP). Métodos: Foi utilizada uma ficha para coleta de dados de todos os pacientes na unidade de hematologia e TCTH do HC-FMUSP que tinham resultado positivo para toxina A/B do C. difficile durante o período de janeiro 2007 a junho de 2011 e criado um banco de dados no programa Epiinfo. Os desfechos avaliados foram forma grave de doença e óbito até 14 dias da diarréia. Qui-quadrado para tendência foi usado para avaliar a incidência de diarréia por C. difficile durante o período do estudo. Resultados: Um total de 69 episódios foi identificado em 64 pacientes em 439 pacientes suspeitos. Na distribuição temporal o qui-quadrado para tendência evidenciou que o número de casos suspeitos de diarréia por C. difficile permaneceu estável (p=0,418), em contraste com o aumento do número de casos confirmados (p=0,0006). A incidência de diarréia por C. difficile por 1.000 pacientes variou de 0,65 a 5,45 durante o período do estudo. O qui-quadrado para tendência evidenciou aumento do número de casos confirmados de C. difficile nas unidades de TMO (p=0,00004) e Hematologia (p=0,006). Já, a incidência de diarréia por C. difficile por 1.000 neutropênicos dia variou de 0,78 a 5,45 durante o período do estudo. A maioria 68% dos pacientes era do gênero masculino, a média de idade foi 38 anos. A doença de base mais comum foi Leucemia mielóide aguda (44%), destes 46% estavam neutopênicos, 45% TCTH alogênicos, 88% dos pacientes usaram antibióticos prévios. A maioria dos pacientes 88% recebeu tratamento com metronidazol via oral, 37% tiveram resposta parcial nos primeiros sete dias de tratamento, 57% terminaram o tratamento e três pacientes tiveram recidiva, 24% evoluíram para óbito. A análise bivariada dos fatores de risco associados com a forma grave de diarréia por C. difficile, identificou o tipo de transplante alogênico como o único fator de risco significantivo, já a análise multivariada não identificou nenhum fator de risco independente. A análise bivariada de fatores de risco associados com óbito até 14 dias do diagnóstico de diarréia por C. difficile, identificou o tipo de transplante alogênico, forma grave de doença, internação em UTI e uso de linezolida como fatores de risco para óbito e Linfoma como protetor. Os fatores de risco independentes associados com óbito foram forma grave de doença, internação em UTi e uso de linezolida. Conclusão: A incidência de infecção por C. difficile durante o período do estudo aumentou, entretanto, a manifestação da forma grave da doença se manteve estável. Os fatores de risco independentes associados com óbito foram forma grave de doença, internação em UTI e uso de linezolida / Introduction: Diarrhea caused by Clostridium difficile is one of the main causes of infectious diarrhea associated with healthcare. Objective: To describe cases and the incidence of diarrhea by C.difficile in hematological and HSCT inpatients of the infirmary of Hematology and Bone Marrow Transplant of the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP). Methods: A form was used to collect data from all patients in the hematology and HSCT unit of the HCFMUSP who showed positive results for toxin A/B of the C. difficile during the period from January 2007 to June 2011, and to create a databank in the Epiinfo program. The outcomes evaluated were the severe form of the disease and death within 14 days of the [onset of] diarrhea. The Chi-squared test for tendency was used to evaluate the incidence of diarrhea by C. difficile during the study period. Results: A total of 69 episodes were identified in 64 patients in 439 suspect patients. In the temporal distribution, the chi-squared test for tendency evidenced that the number of cases of suspected diarrhea due to C. difficile remained stable (p=0.418), in contrast with the increase in number of confirmed cases (p=0.0006). The incidence of diarrhea by C. difficile per 1,000 patients varied from 0.65 to 5.45 during the study period. The chi-squared test for tendency demonstrated an increase in number of cases confirmed of C. difficile in the BMT TMO (p=0.00004) and Hematology (p=0.006) units. On the other hand, the incidence of diarrhea by C. difficile per 1,000 neutropenic individualsday varied from 0.78 to 5.45 during the study period. Most of the 68% of patients were of the male gender; the average age was 38 years. The most common underlying disease was acute myeloid leukemia (44%); of these, 46% were neutropenic, 45% HSCT allogeneic, and 88% of the patients had previously used antibiotics. Most of the patients (88%) received treatment with oral metronidazole, 37% had a response in the first seven days of treatment, 57% finished the treatment, three patients experienced relapse, and 24% died. The bivariate analysis of the risk factors associated with the severe form of diarrhea by C. difficile, identified the type of allogeneic transplant as the only significant risk factor, whereas the multivariate analysis did not identify any independent risk factor. Bivariate analysis of risk factors associated with death within 14 days of the diagnosis of diarrhea due to C. difficile, identified the type of allogeneic transplant, severe form of the disease, stay in the ICU, and use of linezolide as risk factors for death, and Lymphoma as a protector. Independent risk factors associated with death were the severe form of the disease, stay in the ICU, and use of linezolide. Conclusion: The incidence of infection by C. difficile during the study period increased; nevertheless, the manifestation of the severe form of the disease remained stable. The independent risk factors associated with death were the severe form of the disease, stay in the ICU, and use of linezolide

O objetivo do presente trabalho foi avaliar os parâmetros de vitalidade, comportamentais, laboratoriais e perfil oxidativo de neonatos muares, comparando-os com os equinos, durante o primeiro mês de vida. Os neonatos foram acompanhados logo após o nascimento, sendo avaliado o escore Apgar nos momentos 0, 5, 10, 30 e 60 minutos pós-parto, além do comportamento (tempo para se posicionar em decúbito esternal, iniciar reflexo de sucção, levantar, iniciar ingestão de colostro e eliminar mecônio) e a necessidade de realização de enema. Observou-se o tempo de delivramento e peso dos anexos fetais e dos potros. A proporção do peso dos potros em relação aos anexos fetais foi calculada no grupo dos muares. Foram realizados exames hematológicos e bioquímicos. Para a avaliação do perfil oxidativo foi mensurada a peroxidação lipídica utilizando o TBARS e a oxidação de proteína. Como sistema antioxidante foi mensurada a atividade enzimática da glutationa peroxidase e superóxido dismutase, e não enzimática as quantidades séricas de bilirrubinas total, indireta e direta. O escore Apgar ao nascimento, 5, 10 e 30 minutos de vida foi maior nos muares. Os muares iniciaram a ingestão de colostro mais precocemente que os equinos, e demoraram mais para eliminar o mecônio. O tempo para delivramento dos anexos fetais foi menor nas éguas gestantes de muar. Os demais parâmetros comportamentais e os pesos dos potros e anexos foram semelhantes nos dois grupos. Não houve correlação entre os pesos dos neonatos e dos anexos fetais nos muares. Nos muares, CHCM, plaquetas, albumina, cálcio, cloro, ferro e magnésio foram maiores. A contagem dos leucócitos totais, neutrófilos segmentados, linfócitos, assim como a relação neutrófilo:linfócito, fibrinogênio, BT, BD, BI, colesterol e CK foi menor nos muares quando comparado aos equinos. Houve interação entre grupo e tempo na contagem de hemácias, hematócrito, hemoglobina, leucócitos totais, neutrófilos segmentados, glicose, ureia, albumina, triglicérides, colesterol, CK e ferro. No perfil oxidativo não houve interação entre grupo e tempo para nenhuma variável analisada. O TBARS foi menor no grupo dos muares, enquanto que a atividade enzimática da GPx foi maior. Ocorreu uma queda progressiva do TBARS nos neonatos, sendo que a GPx se manteve constante do nascimento até os 7 dias, tendo um aumento significativo aos 30 dias. A oxidação de proteína não teve efeito de tempo e de grupo. A SOD não foi influenciada pelo grupo, permanecendo constante nos tempos analisados, com exceção da 1 hora, com menor atividade em relação às 6 horas, 7 e 30 dias. As concentrações das bilirrubinas foram menores nos muares. Tendo em vista os resultados encontrados, este estudo oferece dados de referência comportamentais, hematológicos, bioquímicos e oxidativos para muares saudáveis no primeiro mês de vida, podendo ser útil para o diagnóstico e tratamento de neonatos comprometidos. / The aim of the present study was to evaluate vitality, behavioral and laboratory parameters and oxidative profile of newborn mules, comparing with horses during the first month of life. The foals were monitored just after delivery and Apgar score was assessed at 0, 5, 10, 30 and 60 minutes postpartum. Foals postpartum behavior were timed (time to get in sternal recumbency, to start suckle reflex, to stand, to ingest colostrum and to eliminate meconium) and the need of enema was evaluated. Time to eliminate placenta and weight were recorded and foals weight. The relationship between placental and foal weight was calculated for the mules group. Laboratory evaluation included hematological and biochemical parameters, while lipid peroxidation was measured using TBARS and protein oxidation. Glutathione peroxidase activity, superoxide dismutase and total, indirect and direct bilirubin were used to evaluate the antioxidant profile. Apgar score at birth, 5, 10 and 30 minutes after birth was higher in mules. Mules started nursing colostrum earlier than horses, however elimination of meconium started later. Mares pregnant with mules eliminated fetal membranes earlier. Foals and placental weight were similar between groups. There was no correlation between placental and foals weight. Mules had higher MCHC, platelets, albumin, calcium, chloride, iron and magnesium, while total leukocytes, segmented neutrophils, lymphocytes, neutrophil:lymphocyte ratio, fibrinogen, BT, BD, BI, cholesterol and CK were lower in mules compared to horses. Interaction was found between group and time for red blood cells, hematocrit, hemoglobin, total leukocytes, segmented neutrophils, glucose, urea, albumin, triglycerides, cholesterol, CK and iron. Oxidative profile results showed no interaction between group and time for the analyzed variables. TBARS was lower in mules, while GPx activity was higher. There was a progressive TBARS decrease over time in the studied neonates, with GPx remaining constant at birth and 7 days, with a significant increase at 30 days. Time and group did not affect protein oxidation. SOD did not have a group effect and its activity was constant between analyzed times, except at 1 hour, when activity was lower than 6 hours, 7 and 30 days. Bilirrubins were lower in mules. Based on the differences found between species, this study offers reference values for behaviour, hematology, biochemistry and oxidative aspects in healthy mule neonates during the first month of life, and it can be useful for diagnosis and treatment of compromised neonates.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-09-26T18:59:48Z No. of bitstreams: 1 EMANUELLE DAL PONTE.pdf: 853027 bytes, checksum: 3383ad493f7b637d87265a5e9064c8f0 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-09-26T19:00:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EMANUELLE DAL PONTE.pdf: 853027 bytes, checksum: 3383ad493f7b637d87265a5e9064c8f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-26T19:00:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EMANUELLE DAL PONTE.pdf: 853027 bytes, checksum: 3383ad493f7b637d87265a5e9064c8f0 (MD5) Previous issue date: 2017-07-03 / O traço falciforme (HbAS) é o heterozigoto da anemia falciforme, portador do gene S assintomático e considerado, ainda, clinicamente normal. Estudos epidemiológicos mostram sua alta prevalência na população brasileira sendo que, em determinadas cidades do Rio Grande do Sul, estima-se uma frequência de 1:75 habitantes. Novos estudos têm apontado que o portador do traço falciforme, por apresentar aproximadamente 40% de HbS, tem envolvimento com estresse oxidativo, o qual pode atuar na progressão da doença. A Superóxido Dismutase (SOD) é uma enzima antioxidante que pode ter sua atividade diminuída em algumas patologias. O polimorfismo mais comum da MnSOD é o Ala16Val, que é resultado de uma mutação que substitui o códon original GCT (alanina) para GTT (valina). O alelo valina (V) dificulta o transporte e a entrada da enzima para dentro da mitocôndria diminuindo, assim, a capacidade antioxidante do indivíduo e favorecendo as vias de estresse oxidativo. O objetivo deste trabalho foi analisar a presença do polimorfismo Ala16Val MnSOD em portadores do traço falciforme e associá-lo com biomarcadores de estresse oxidativo. Os participantes do estudo foram recrutados junto ao Banco de Sangue do Hospital da Santa Casa de Caridade de Uruguaiana. Ao total obteve-se 102 indivíduos, sendo 50 do grupo controle e 52 do grupo traço falciforme (HbAS). Após a assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido, foi realizada a coleta de sangue venoso. Dois tubos contendo EDTA foram coletados para as análises hematológicas, genômicas e de estresse oxidativo. Os resultados encontrados apontam que os portadores do traço falciforme apresentam as atividades da catalase, superóxido dismutase e glutationa peroxidase significativamente diminuídas (p<0,001) em relação ao grupo controle. O mesmo também foi observado com os níveis de compostos antioxidantes como a glutationa, vitamina C e status antioxidante total (p<0,001). Entretanto, os portadores do traço falciforme apresentam aumento estatisticamente significativo (p<0,001) no dano oxidativo a biomoléculas como carbonilação de proteínas, lipídeos e o DNA. A análise do polimorfismo Ala16Val MnSOD mostrou 100% do genótipo AV no grupo controle e 21% do genótipo AA e 79% do genótipo AV no grupo HbAS. O presente estudo não conseguiu, todavia, associar o polimorfismo com os biomarcadores de estresse oxidativo. Sugere-se, dessa forma, que o portador do traço falciforme possui aumento do estresse oxidativo e o polimorfismo Ala16Val MnSOD parece não estar associado aos parâmetros analisados. Entretanto, por esse estudo ser o primeiro a ser relatado, espera-se que em uma população maior de HbAS seja possível ampliar o conhecimento acerca dessa alteração genética. / Sickle cell trait (SCT) is the heterozygote of sickle cell anemia (HbAS), which carries the asymptomatic S gene and is considered clinically normal. Epidemiological studies show its high prevalence in the overall Brazilian population, and in certain cities such as Rio Grande do Sul, where a frequency of 1:75 is estimated. Recent studies have pointed out that the SCT because it represents approximately 40% of hemoglobin S (HbS), is involved with oxidative stress, which can act in the progression of the disease. Superoxide dismutase (SOD) is an antioxidant enzyme that may have decreased activity in some pathologies. The most common MnSOD polymorphism is Ala16Val, which is the result of a mutation that replaces the original GCT (alanine) codon for GTT (valine). The valine allele (V) hinders the transport and entry of the enzyme into the mitochondria, thereby both reducing the antioxidant capacity of the individual and favoring oxidative stress pathways. The aim of this study is to analyze the presence of the Ala16Val MnSOD polymorphism in patients with SCT and to associate it with biomarkers of oxidative stress. The study participants were recruited from the Blood Bank of the Santa Casa de Caridade Hospital of Uruguaiana. A total of 102 individuals were enrolled, 50 in the control group and 52 in the SCT group. After obtaining written informed consent, venous blood was collected. For each one, two tubes containing EDTA were collected for hematological, genomic, and oxidative stress analyses. The results showed that sickle cell carriers exhibit significantly decreased (p < 0.001) catalase, superoxide dismutase, and glutathione peroxidase activities compared with the control group. The same was also observed for the levels of antioxidant compounds such as glutathione, vitamin C, and total antioxidant status (p < 0.001). However, patients with SCT presented a statistically significant increase (p < 0.001) in oxidative damage to biomolecules such as protein carbonylation, lipid peroxidation, and DNA. Analysis of the Ala16Val MnSOD polymorphism showed 100% of the AV genotype in the control group, and 21% of the AA genotype and 79% of the AV genotype in the HbAS group. Although the current study could not associate the polymorphism with oxidative stress biomarkers, it suggested the SCT increased oxidative stress, and the Ala16Val MnSOD polymorphism was not associated with the parameters analyzed. However, because this study is the first to report these findings regarding the Ala16Val MnSOD polymorphism, it is expected that in a larger HbAS population, it will be possible to gain a better understanding of this genetic alteration.

O aborto espontâneo recorrente (AER) é caracterizado pela ocorrência de três ou mais abortos consecutivos e acomete 2-4% das mulheres em idade fértil. A etiologia está associada a vários fatores de risco, tais como anomalias uterinas, aberrações cromossômicas, autoimunidade, trombofilias, elevação na concentração de homocisteína (tHcy), porém cerca de 40% dos casos permanece sem causa definida. O metabolismo de unidades de carbono desempenha papel fundamental na disponibilidade de folato na célula, sendo essencial para o desenvolvimento placentário e fetal. Deficiência de vitaminas que regulam este metabolismo, como o ácido fólico, e polimorfismos em genes que codificam enzimas relacionadas ao metabolismo de folato (MTHFR, RFC1, GCP2 e MTHFD1) podem levar à redução das concentrações desta vitamina e ao aumento das concentrações de tHcy. Objetivo foi avaliar a associação entre polimorfismos em genes relacionados ao metabolismo do folato (RFC1, GCP2, MTHFR e MTHFD1) e o risco de se ter AER, bem como avaliar a associação entre estes polimorfismos e as alterações nas concetranções de folato, cobalamina e homocisteína. Foram constituídos três grupos: AER primário: 117 mulheres com AER e nenhum feto viável; AER secundário: 139 mulheres com AER e pelo menos um feto viável; e Controle: 264 mulheres sem história de aborto espontâneo. Nenhuma das mulheres estava grávida no momento da coleta do sangue. Amostras de sangue foram obtidas para dosagens bioquímicas (folato, Cbl, tHcy, entre outras), imunológicas e extração de DNA genômico. As genotipagens foram feitas por PCR-RFLP ou PCR em tempo real. As concentrações séricas de folato e Cbl foram maiores no AER primário e secundário (p<0,05). A distribuição dos genótipos de todos os polimorfismos foi semelhante nos três grupos. O aumento nas concentrações de folato sérico (OR: 1,05, 95% IC: 1,03 - 1,07, p<0,001), Cbl (OR: 1,00, 95% IC: 1,00 - 1,00, p= 0,016), tHcy (OR: 1,03, 95% IC: 0,97 - 1,11, p= 0,033) e T4 (OR: 1,02, 95% IC: 1,00 - 1,03, p= 0,006) e a presença de FAN reagente (1:160) (OR: 2,90, 95% IC: 1,25 - 6,75, p= 0,013) foram considerados fatores de risco para aborto primário. Para o aborto secundário, foram considerados fatores de risco o aumento nas concentrações de folato sérico (OR: 1,04, 95% IC: 1,02 - 1,05, p<0,001), Cbl (OR: 1,00, 95% IC: 1,00 - 1,00, p= 0,019) e tHcy (OR: 1,05, 95% IC: 1,00 - 1,09, p= 0,039), maiores idades (OR: 1,02, 95% IC: 0,98 - 1,06, p= 0,031), hábito de fumar (OR: 2,54, 95% IC: 1,41 - 4,60, p= 0,002) e ter maior IMC (OR:1,42, 95% IC: 1,07 - 1,88, p= 0,015). Os polimorfismos estudados não foram associados ao maior risco de se ter AER, quando analisados isoladamente, e também não foram associados a alterações nas concentrações séricas de folato, Cbl e tHcy, com exceção do genótipo MTHFR 677TT, cujas portadoras apresentaram maior concentração de tHcy, quando comparadas com as portadoras de genótipos 677CC e 677CT nos três grupos. As variáveis concentrações de folato, Cbl, tHcy e T4 e presença de FAN reagente foram associadas ao maior risco de se ter aborto primário. As variáveis idade, IMC, tabagismo, concentrações de folato, Cbl e tHcy foram associadas ao maior risco de aborto secundário. / The recurrent spontaneous abortion (RSA) is characterized by the occurrence of three or more consecutive miscarriages and affects 2-4% of women of childbearing age. The etiology is associated with several risk factors such as uterine abnormalities, chromosomal aberrations, autoimmunity, thrombophilia, increased concentration of homocysteine (tHcy). About 40% of cases remains unknown cause. The units of carbon metabolism plays an essential role in the availability of the cell folate, is essential for the placental and fetal development. A deficiency of the vitamins that regulate this metabolism, like folic acid, and polymorphisms in genes encoding enzymes related to folate metabolism (MTHFR, RFC1, and GCP2 MTHFD1) may lead to decreased concentrations of this vitamin and increased concentrations of tHcy. Objective was to evaluate the association between polymorphisms in genes related to folate metabolism (RFC1, GCP2, MTHFD1 and MTHFR) and the risk of having AER, and to evaluate the association between these polymorphisms and changes in concetranções folate, cobalamin, and homocysteine. Three groups were divided: AER primary: 117 women with RSA and no viable fetus, AER secondary: 139 women with RSA and at least one viable fetus and Control: 264 women with no history of miscarriage. None of the women was pregnant at time of blood collection. Blood samples were taken for biochemical (folate, Cbl, tHcy, etc.), immunological and genomic DNA extraction. The genotyping were carried out by PCR-RFLP or real time PCR. Serum concentrations of folate and Cbl were higher in groups 1 and 2 (p <0.05). The distribution of genotypes of MTHFR c.677C> T, MTHFR c.1298A> C, MTHFD1 c.1958G> A, RFC1 c.80G>GCP2 A and c.1561C> T was similar among the three groups. The increased concentrations of serum folate (OR: 1.05, 95% CI: 1.03 - 1.07, p <0.001), Cbl (OR: 1.00, 95% CI: 1.00 to 1.00, p = 0.016), tHcy (OR: 1.03, 95% CI: 0.97 to 1.11, p = 0.033) and T4 (OR: 1.02, 95% CI: 1.00 to 1.03, p = 0.006) and the presence of ANA (1:160) (OR: 2.90, 95% CI: 1.25 - 6.75, p = 0.013) were considered risk factors primary for abortion. For secondary abortion, were considered risk factors increased the concentrations of serum folate (OR: 1.04, 95% CI: 1.02 - 1.05, p <0.001), cobalamin (OR: 1.00, 95 % CI: 1.00 to 1.00, p = 0.019) and tHcy (OR: 1.05, 95% CI: 1.00 to 1.09, p = 0.039), higher age (OR: 1.02, 95% CI: 0.98 to 1.06, p = 0.031), cigarette smoking (OR: 2.54, 95% CI: 1.41 to 4.60, p = 0.002) and had a higher BMI (OR : 1,42,95% CI: 1.07 to 1.88, p = 0.015). The studied polymorphisms were not associated with increased risk of having RSA when analyzed separately, and were not associated with changes in serum folate, Cbl and tHcy, with the exception of the MTHFR 677TT genotype, whose patients had a higher concentration of total tHcy compared with those with 677CC and 677CT genotypes in the three groups. The variable concentrations of folate, Cbl, tHcy, and T4, presence of ANA and have been associated with increased risk for miscarriage primary. The variables age, BMI, smoking, concentrations of folate, Cbl and tHcy were associated with increased risk of secondary miscarriage.

Para o estabelecimento do quadro sangüíneo de eqüinos durante a hiperimunização para produção de soro hiperimune anti-crotálico e após as sangrias de produção e a plasmaferese, foram utilizados 20 animais, obedecendo as normas do protocolo de hiperimunização do Instituto Butantan. As amostras foram colhidas antes das inoculações do antígeno (veneno crotálico), antes e depois das sangrias de produção, após as plasmafereses e 15, 30 e 45 dias após a última sangria, totalizando 340 colheitas, realizadas em 17 momentos. Nas amostras, foram determinados valores do hemograma (número de hemácias, volume globular, teor de hemoglobina, VCM, HCM, CHCM, número de leucócitos, contagem diferencial de leucócitos) e de alguns parâmetros de bioquímica sérica (ferro, transferrina e bilirrubinas). Significativas variações no quadro hematológico dos eqüinos foram observadas na fase de hiperimunização, caracterizando anemia normocítica, normocrômica, sem alterações significativas do leucograma. Além disso, verificou-se diminuição significativa da sideremia associada ao aumento da concentração de transferrina sérica, permitindo classificar-se a anemia, como do tipo ferropriva. Nas fases de sangrias, observou-se evidentes variações no quadro hematológico demonstrando uma anemia hipocitêmica normocítica hipercrômica pós-sangrias, sem variações nos valores do leucograma, mas com significativas variações nos constituintes bioquímicos (diminuição do ferro sérico e aumento da concentração de transferrina). No período de repouso foi evidente a eficácia da plasmaferese, com pronta , mas parcial recuperação do hemograma e da sideremia dos animais anêmicos, facilitando o rápido retorno para normalidade hematológica, tornando-os aptos a nova produção de soro hiperimune. / Twenty animals were used to assess the blood profile of horses during hyperimmunization for anticrotalic hyperimmune serum production and after the bleedings of production and the plasmapherese, obeying the protocol schedule of Instituto Butantan. The samples were obtained before the antigen inoculations (crotalic poison), before and after the bleedings of production, right after the plasmapherese and 15, 30 and 45 days after the last one, making a total of 340 collections in 17 moments. Samples were analyzed for hemogram (number of erythrocytes, packed cell volume, hemoglobin, MCV, MCH, MCHC, white cell count, differential leukocytes count) and some serum biochemical components (iron, transferrin and bilirrubin). Significant variations were observed on the blood profile of the horses throughout the hyperimmunization, showing normocytic, normochromic anemia, without significant alterations on leukogram. Beside that, a significant reduction of the hemosiderin was observed in association with the elevation of the serum transferrin concentration, making possible its classification as an iron deficiency-like anemia. During the bleedings phases, evident variations were observed on the blood profile showing pos-sangrias hypocitemic normocytic, hyperchromic anemia without changing the leukogram values, but with significant variations on the biochemical components (reduction of serum iron and increase of transferrin concentrations). During rest periods, the efficacy of plasmapherese was evident with a rapid but partial recuperation of the hemogram and the hemosiderin of the anemic animals, making easier the fast return of hematologic normality and making them capable to a new hyperimmune serum production.

O jacaré-de-papo (Caiman latirostris) é considerado um crocodiliano de médio porte que apresenta uma ampla distribuição latitudinal na América do Sul. Possivelmente a espécie possui a situação mais complexa entre os crocodilianos brasileiros quanto ao aspecto da conservação, basicamente porque suas populações encontram-se fragmentadas em grande parte de sua área de distribuição original e por utilizarem áreas com fortes atividades antrópicas. Embora a espécie possua aparentemente um processo adaptativo frente a estas pressões, um aspecto fisiológico pode ainda sofrer rápida alteração quando submetido a elas: o estado sanitário. Desta maneira, este estudo objetivou determinar o estado sanitário do maior predador aquático, utilizando duas áreas distintas no Estado de São Paulo, através da determinação dos perfis hematológicos e bioquímicos do sangue, além da caracterização da microbiota oral, servindo de modelo à conservação da espécie em ambientes alterados. No primeiro capítulo foram determinados o perfil hematológico e bioquímico do sangue utilizando-se 29 indivíduos (19 machos e 10 fêmeas) capturados em Angatuba e 11 indivíduos (2 machos, 4 fêmeas e 5 filhotes) capturados em Cubatão. Diferenças estatísticas significativas foram encontradas nos valores de creatinina na comparação entre fêmeas de ambas as áreas de estudo (p = 0,033) e nos valores de alanina aminotransferase (p = 0,003), hemácias (p = 0,034), hemoglobina (p = 0,049) e volume corpuscular médio (p = 0,027) quando da comparação entre sexos. No segundo capítulo determinou-se a microbiota oral destes animais através do isolamento, identificação e caracterização bacteriana, em conjunto com o teste de perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos. Foram determinados 14 diferentes tipos de bactérias na área de Angatuba, sendo uma classificada como baciliforme aeróbio Gram-positivo, uma como bacilo Gram-negativo e 12 classificadas como Enterobactérias Gram-negativas. Na área de Cubatão foram isolados cinco tipos de bactérias, sendo quatro classificadas como Enterobactérias Gram-negativas e uma como baciliforme aeróbio Gram-positivo. Considerando que o uso de antimicrobianos é um processo primário no tratamento de animais e pessoas, principalmente nos casos que envolvam infecções provocadas pela interação homem x animais, para ambas as áreas de estudo, as quinolonas Enrofloxacina e Norfloxacina, além do aminoglicosídeo Gentamicina, foram os antimicrobianos que apresentaram os menores índices de resistência frente aos isolados testados. / The broad-snouted caiman (Caiman latirostris) is considered a medium-sized crocodilian, which has a wide latitudinal distribution in South America. The species may possibly have a more complex situation among Brazilian crocodilians on the aspect of conservation, basically, because their populations are fragmented in much of their original range, forcing these animals to disperse through areas with strong human activities. Although the species apparently went through an adaptive process against these pressures, a physiological aspect may undergo rapid change when subjected to them: the health status. Thus, this study aimed to determine the health status of the largest aquatic predator, using two distinct areas in São Paulo State, through the determination of hematological and biochemical profiles of blood, in addition to the characterization of oral microbiota, serving as a model for conservation of the species in anthropic habitats. In the first chapter were determined the hematological and biochemical blood profiles of 29 individuals (19 males and 10 females) captured in Angatuba and 11 individuals (2 males, 4 females and 5 hatchlings) captured in Cubatão. Statistically significant differences were found in creatinine values when comparing females of both areas of the study (p = 0.033) and in alanine aminotransferase values (p = 0.003), erythrocytes (p = 0.034), hemoglobin (p = 0.049) and mean corpuscular volume (p = 0.027) when comparing genders. In the second chapter the oral microbiota of these animals was determined by isolation, identification and characterization of the bacteria, besides the antimicrobial susceptibility profile compared to the isolates tested. The results showed growth of 14 different species of bacteria in the Angatuba area, one classified as Aerobic Grampositive Bacilliform, one as Gram-negative Bacilli and 12 classified as Gram-negative Enterobacteria. In the Cubatão area five species of bacteria were isolated, four classified as Gram-negative Enterobacteria and one as Aerobic Gram-positive Bacilliform. Considering that the use of antimicrobials is a primary process in the treatment of animals and people, especially in cases involving infections caused by human x animal interaction for both study areas, quinolones Enrofloxacin and Norfloxacin, and the aminoglycosides Gentamicin were the antimicrobials that had the lowest resistance rates against the tested isolates.

A erliquiose monocítica canina (EMC) é uma doença infecciosa de ocorrência mundial e transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus. As manifestações clínicas são inespecíficas e multissistêmicas. Pode apresentar as fases aguda, assintomática e crônica, as quais podem cursar com alterações hematológicas como trombocitopenia, discreta anemia e leucopenia durante a fase aguda, discreta trombocitopenia na fase assintomática, e pancitopenia nos casos crônicos graves. O estabelecimento de indicadores prognósticos para a doença pode ser de grande valia para o direcionamento do tratamento clínico. O estudo do título de anticorpos em cães infectados poderia auxiliar no diagnóstico da EMC bem como no monitoramento do tratamento. A fim de identificar as principais alterações clínicas, hematológicas e sorológicas de cães infectados por E. canis, foram selecionados 82 animais com diagnóstico etiológico de EMC (positivos a Reação em Cadeia da Polimerase PCR). Os cães foram subdivididos em grupos de animais assintomáticos (n=12), doentes e sobreviventes (n=51) e doentes e não sobreviventes (n=19). Foi realizado ainda acompanhamento clínico, hematológico e sorológico de 28 animais tratados com medicação preconizado, no período de até 180 dias após o tratamento. Na análise clínica, não houve predisposição sexual ou racial, porém cães maiores de 8 anos de idade apresentaram maior frequência. Os sintomas observados mais frequentemente em todos os cães, exceto nos assintomáticos, foram palidez de mucosas, apatia, hiporexia, letargia e gastrenterite. As alterações hematológicas encontradas no grupo dos cães doentes foram anemia e trombocitopenia, que variaram apenas na intensidade quando da comparação dos animais sobreviventes com os não sobreviventes, porém apenas a anemia e a leucopenia apresentaram-se como fatores prognósticos negativos para a doença. Altos títulos de anticorpos (&ge; 2.560) foram observados em grande parte dos animais infectados, porém não puderam ser considerados indicadores de persistência da infecção. Em dois dos 28 animais com monitoramento pós tratamento houve reinfecção, face aos resultados novamente positivos na pesquisa de material genético para E.canis, associados à recidiva de alterações hematológicas em um dos dois animais, e abrupto novo aumento do título de anticorpos. Em outros animais, apesar da rápida ascensão do título concomitante à recidiva de alterações hematológicas, não houve amplificação de DNA erliquial, sugerindo diagnóstico molecular falso negativo. Concluiu-se que alterações clínicas e hematológicas sugestivas da doença foram encontradas nos animais doentes, apenas a anemia e leucopenia podem ser indicadores prognósticos da doença, e que a interpretação do título de anticorpos deve ser feita em consonância com alterações clínicas e hematológicas do cão suspeito. / The canine monocytic ehrlichiosis (CME) is an infectious disease occurring worldwide and is transmitted by the tick Rhipicephalus sanguineus. The clinical manifestations are nonspecific and multisystemic. It may present acute, asymptomatic and chronic phases, which may be presented with haematological changes such as thrombocytopenia, mild anemia and leukopenia during the acute phase, mild thrombocytopenia in asymptomatic phase, and pancytopenia in severe chronic cases. The establishment of prognostic indicators for the disease may be of great value to guide clinical treatment. The study of antibodies titer in infected dogs could help in the diagnosis of CME and in monitoring treatment. In order to identify the main clinical, hematological and serological changes in dogs infected with E. canis, 82 animals were selected with etiologic diagnosis of a CME (positive to Polymerase Chain Reaction - PCR). The dogs were subdivided into groups of asymptomatic animals (n = 12), sick and survivors (n = 51) and sick and non-survivors (n = 19). It was also conducted clinical, hematological and serological monitoring of 28 animals treated with recommended medication for the period until 180 days after treatment. In clinical analysis, there was no racial or sexual predisposition, however dogs older than 8 years of age had a higher frequency. The most frequently reported symptoms in all dogs except the asymptomatic patients were pale mucous membranes, apathy, appetite loss, lethargy and gastroenteritis. Hematological changes found in the group of sick dogs were anemia and thrombocytopenia, which varied only in intensity when comparing the survivors to the nonsurvivors, but only anemia and leukopenia were presented as negative prognostic factors for the disease. High titers of antibodies (2560 &ge;) were observed in most infected animals, but they could not be considered indicators of persistent infection. In two out of the 28 monitored animals after treatment there was reinfection, compared to positive results back on the research of genetic material to E.canis, associated with relapse of hematological changes in one of the two animals, and sudden new increase in antibody titer. In other animals, despite the rapid rise of the concurrent title of relapse hematological changes, there was no erliquial DNA amplification, suggesting molecular diagnostic to be false negative. It was concluded that clinical and hematologic changes suggestive of the disease were found in sick animals, only anemia and leukopenia may be prognostic indicators of the disease, and that the interpretation of antibody titers should be done in line with clinical and hematologic changes of the suspect dog.