Made available in DSpace on 2014-07-29T16:11:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao arquivo - Mariana.pdf: 540089 bytes, checksum: 5343cfe8c00b56324e8aa56928e80786 (MD5) Previous issue date: 2011-05-31 / Mikania laevigata Sch.Bip. ex Baker., popularly known as guaco, is a Brazilian medicinal plant belonging to Asteraceae family and widely used in medicine to treat coughs and respiratory disorders. It presents bronchodilator and antiulcer activities among others. Coumarins, terpenes and organic acids are the main chemical constituents of this specie. In the literature no studies were found concerning the production of standardized dried extracts from this plant specie, therefore the aim of this study was the obtaining and the characterization of standardized dry extract of this plant specie. M. laevigata leaves were collected, dried and crushed, resulting in the plant drug. The hydroalcoholic extract was obtained by percolation of the drug plant and the extraction liquid used was ethanol 80% (v/v). After drying experiments were carried out in order to investigate the influences of the extract feed rate and the drying adjuvant ratio in the characteristics of the dried extracts obtained.-coumaric acid and coumarin were used as chemical markers and were quantified by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) in all stages of the process. An analytical method was validated following the criteria proposed by the Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), proving to be selective, linear, precise, accurate, sensitive and robust. In the characterization of plant drug the volatile content obtained was 9.00 ± 1.75%, the coumarin content was 0.72 ± 0.02% and the acid -coumaric content was 0.13 ± 0.005%. The average particle size was 444.823 m and swelling index was 3.2 in ethanol 80%, 4.27 in ethanol 50% and 10.13 in water. The hydroalcoholic extract presented a density of 0.9256 ± 0.0006 g / mL, total solids content of 5.18 ± 0.21%, pH 6.1 ± 0.00, alcohol content of 56% and viscosity of 5.57 mPas. The drying yields ranged from 11.35 to 54.11%, and all dried products presented volatiles content and water activity below 5% and 0.5, respectively. The selected condition to be used to obtain standardized dried extracts of M. laevigata was that performed with a smaller proportion of colloidal silicon dioxide (15%) and increased extract feed rate (6mL/min), in which levels were obtained coumarin and -coumaric acid content of 1.83 ± 0.004% and 0.80 ± 0.012%, respectively. The dry extract obtained in these conditions showed spherical particles and their antiulcer activity in the model of indomethacin induced ulcers was demonstrated, suggesting a gastroprotective effect of this extract. Comparison of powder, hydroalcoholic and dry extract chromatographic (TLC and HPLC) show that the hydroalcoholic extraction was suitable for the extraction of coumarin and -coumaric acid and the drying process did not cause changes in the chemical profile of the extract in relation to these substances. Thus, the production of dried extracts by spray drying from the leaves of M. laevigata can be an interesting and promising alternative for obtaining such an intermediate product. / Mikania laevigata Sch.Bip. ex Baker., conhecida popularmente como guaco, é uma planta medicinal brasileira, pertencente à família Asteraceae, muito utilizada em medicamentos para tratar a tosse e distúrbios respiratórios. Apresenta atividades broncodilatadora, antiulcerogênica entre outras. Cumarinas, terpenos e ácidos orgânicos são os principais constituintes químicos desta espécie. Na literatura pesquisada não foram encontrados trabalhos abordando a produção de extratos secos padronizados de guaco, por isso o objetivo deste trabalho foi a obtenção e a caracterização do extrato seco padronizado desta espécie vegetal. As folhas de guaco foram coletadas, secas em estufa e trituradas, obtendo-se a droga vegetal. O extrato hidroalcoólico foi obtido através da percolação da droga vegetal utilizando como líquido extrator etanol 80%(v/v). Em seguida foram realizados diversos experimentos de secagem por spray drying com o intuito de investigar as influências da vazão de alimentação do extrato e da proporção de diferentes adjuvantes de secagem nas características dos extratos secos obtidos. A cumarina e o ácido -cumárico foram utilizados como marcadores químicos e foram quantificados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) em todas as etapas do processo. Foi validado um método analítico seguindo os critérios propostos pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), o qual foi seletivo, linear, preciso, exato, sensível e robusto. Na caracterização da droga vegetal o teor de voláteis obtido foi de 9,00 ± 1,75%, o teor de cumarina foi de 0,72 ± 0,02% e o teor de ácido -cumárico foi de 0,13 ± 0,005%. O tamanho médio de partículas foi de 444,823 μm e o índice de intumescência foi de 3,2 em etanol 80%, 4,27 em etanol 50% e 10,13 em água. O extrato hidroalcoólico apresentou densidade 0,9256 ± 0,0006 g/mL, teor de sólidos totais de 5,18 ± 0,21%, pH 6,1 ± 0,00, teor alcoólico de 56% e viscosidade de 5,57 mPas. Os rendimentos de secagem variaram de 11,35 a 54,11%, sendo que em todos os produtos secos, foram observados teores de voláteis e atividade de água abaixo de 5% e 0,5, respectivamente. A condição selecionada para ser empregada na obtenção de extratos secos padronizados de guaco foi aquela realizada com menor proporção de dióxido de silício coloidal (15%), maior vazão de alimentação do extrato (6mL/min), na qual obteve-se teores de cumarina e ácido cumárico de 1,83 ± 0,004 e 0,80 ± 0,012, respectivamente. O extrato seco obtido nestas condições apresentou partículas esféricas e a sua atividade antiulcerogênica no modelo de úlceras induzidas por indometacina foi demonstrada, sugerindo-se um efeito gastroprotetor. O perfil cromatográfico (CCD e CLAE) do pó, do extrato hidroalcoólico e do extrato seco demonstrou que a extração hidroalcoólica foi adequada para a extração de cumarina e ácido-cumárico e o processo de secagem não ocasionou alterações no perfil químico do extrato em relação a estas substâncias. Dessa forma, a produção de extratos secos por spray drying a partir das folhas de M. laevigata pode ser uma alternativa interessante e promissora para a obtenção desse produto intermediário.

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:11:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissertacaoLiuba_Final_Corrigida_2009.pdf: 1243448 bytes, checksum: a9a3811f0c73f5c17c672063bf78489f (MD5) Previous issue date: 2009-06-16 / The Rudgea viburnoides (Cham.) Benth. (Rubiaceae), popularly known as "congonha, congonha-de-Bugre or Bugre" is used in folk medicine as diuretic, hypotensive, anti-rheumatic and depurative of blood (leaves tea). This species is being traded as "porangaba" and used in weight loss programs. This work aimed to study the acute toxicity, the diuretic and antioxidant activities of R. viburnoides. The test for acute toxicity in single dose was performed with the ethanolic crude extract, administered orally, at concentrations of 2000mg/kg and 5000mg/kg in mice and rats of both sexes by the testo of Class.To test for diuretic activity in rats, it was used the crude ethanolic extract of the leaves at concentrations of 40mg/kg, 80mg/kg and 160mg/kg, and furosemide 20mg/kg as positive control. The determination of total phenols of the crude extract and fractions (hexane, dichloromethane, ethyl acetate and methanol/water) was performed by the method of Butler and Hargerman and the evaluation of antioxidant activity performed by the method of 2,2-diphenyl-1- picryl -hidrazil (DPPH). There was no acute toxicity of crude ethanolic extract of the leaves and it was classified as non toxic.The results has shown that the ethanolic extract presented dependent dose diuretic effect higher than furosemide, used as positive control. The crude ethanolic extract showed 0.84% of total phenols, the fraction hexanic 0.44%, the dichloromethane fraction 1.91%, the fraction of ethyl acetate fraction 15.43% and the fraction methanol/water 7.92%. The ethyl acetate fraction showed better antioxidant action. The results obtained so far may justify the popular use of Rudgea viburnoides as diuretic / A Rudgea viburnoides (Cham.) Benth. (Rubiaceae), popularmente conhecida como congonha, congonha-de-bugre ou bugre , é utilizada na medicina popular como diurética, hipotensora, anti-reumática e depurativa do sangue (chá das folhas). Essa espécie vem sendo comercializada como porangaba e utilizada em regimes de emagrecimento. Este trabalho teve como objetivos estudar a toxicidade aguda e as atividades diurética e antioxidante da R. viburnoides. O teste de toxicidade aguda, em dose única, foi realizado com o extrato etanólico bruto, administrado por via oral, nas concentrações de 2000 mg/kg e 5000 mg/kg em camundongos e ratos, de ambos os sexos pelo teste de Classe. Para o teste de atividade diurética, em ratas, utilizou-se o extrato etanólico bruto das folhas nas concentrações de 40 mg/kg, 80 mg/kg e 160 mg/kg e a furosemida 20 mg/kg como controle positivo. O doseamento dos fenóis totais do extrato bruto e das frações (hexânico, diclorometano, acetato de etila e metanol/água) foi realizado pelo método de Hagerman e Butler e a avaliação da atividade antioxidante realizada pelo método do 2,2-difenil-1-picril-hidrazil (DPPH). Os resultados possibitaram concluir que o extrato etanólico bruto das folhas não provocou toxicidade aguda nas doses testadas, podendo ser classificado como atóxico; que o extrato etanólico apresentou efeito diurético dose dependente e superior à furosemida utilizada como controle positivo. O extrato etanólico bruto apresentou 0,84% de fenóis totais, a fração hexânica 0,44%, a fração diclorometano 1,91%, a fração acetato de etila 15,43% e a fração metanol/água 7,92%. A fração acetato de etila apresentou melhor ação antioxidante. Os resultados obtidos até o momento podem justificar a utilização popular da Rudgea viburnoides como diurética

Made available in DSpace on 2015-04-20T12:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigo Cesar das Neves Amorim.pdf: 5191612 bytes, checksum: 928eb24ece47b6a34630736ce7c58e0c (MD5) Previous issue date: 2009-09-11 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Isobrucein B (2) and neosergeolide (5) are quassinoids which are obtained from Picrolemma sprucei. These compounds have proven in vitro antitumor, antimalarial, anthelminthic, cytotoxic, insecticide and leishmanicidal activities. Herein, in vitro techniques were used to investigate a range of biological activities of 2 and 5 and known semi-synthetic derivative 1,12-diacetylisobrucein B (21) and 12-acetylneosergeolide (22). These compounds were evaluated for general toxicity toward the brine shrimp species Artemia franciscana, cytotoxicity toward human tumour cells, larvicidal activity toward the dengue fever mosquito vector Aedes aegypti and antimalarial activity against the human malaria parasite Plasmodium falciparum. 2 and 5 exhibited the greatest antimalarial activity against multidrug-resistant P. falciparum K1 strain. 2 and 5 (LC50 = 3.2-4.4 mg/L) displayed greater lethality than derivative 22 (LC50 = 75.0 mg/L) toward A. aegypti larvae, while derivative 21 was inactive. Biological assays were also performed with extracts and fractions obtained from P. sprucei fruit. A TLC densitometry method was developed to mensurate the quassinoids content in fruits extracts and fractions. This analysis determinate that only chloroform fractions presents significative content of 2 and 5 and this data is related to the biological activities. Infusions of the stems of P. sprucei are used in the Amazon region as antimalarials. They contain 2 and 5. An LC-(+)-ESI-MS/MS method was developed and applied to the determination of 2 and 5 in P. sprucei infusions. The concentrations of 2 and 5 in the stem infusion were found to be 60.1 and 774 μg L-1, respectively / Isobruceína B (2) e a neosergeolida (5) são quassinóides obtidos de Picrolemma sprucei. Essas substâncias possuem atividade antitumoral, antimalárica, anti-helmíntica, citotóxica, inseticida e leishmanicida in vitro já comprovadas. Neste trabalho, técnicas in vitro foram utilizadas para investigar uma variedade de atividades biológicas de 2 e 5 e dos derivados semi-sintéticos 1,12-diacetilisobruceína B (21) e 12-acetilneosergeolida (22). Essas substâncias foram avaliadas quanto à sua toxicidade geral frente a larvas do microcrustáceo Artemia franciscana, citotoxicidade frente a células tumorais humanas em colaboração com o laboratório de Oncologia da UFC, sob coordenação da Profa. Cláudia Pessoa, atividade larvicida frente a larvas do mosquito vetor da dengue Aedes aegypti e atividade antimalárica frente ao parasita causador da malária humana Plasmodium falciparum. 2 e 5 exibiram elevada atividade antimalárica frente à cepa multiresistente de P. falciparum K1 (CI50 1,0-4,0 ng/mL). 2 e 5 (CL50 3,2-4,4 mg/L) apresentaram letalidade bem mais elevada do que o derivado 22 frente a larvas de A. aegypti, ao passo que o derivado 21 se mostrou inativo. Ensaios biológicos também foram realizados com extratos e frações obtidos de frutos de P. sprucei. Um método baseado em CCD-densitometria foi desenvolvido para mensurar o teor de quassinóides nos frutos e frações destes frutos. Essas análises determinaram que apenas as frações obtidas em clorofórmio apresentam teores significativos de 2 e 5 e esses teores estão relacionados às atividades biológicas. Infusões dos caules de P. sprucei são utilizadas na Amazônia . Um método baseado em LC-(+)-ESI-MS/MS foi desenvolvido e aplicado para determinar o teor de 2 e 5 em infusões de P. sprucei. As concentrações de 2 e 5 nas infusões de caules são de 60,1 e 774 μg L-1, respectivamente

Os envenenamentos ofídicos constituem um problema relevante de saúde pública em diversas regiões do mundo, particularmente em países da zona tropical e neotropical. A fisiopatologia do acidente ofídico é constituída por uma série de eventos complexos tanto a nível local quanto sistêmico, e o soro antiofídico é o único tratamento utilizado. No entanto, os efeitos tóxicos locais induzidos durante o envenenamento por serpentes, principalmente do gênero Bothrops, não são eficientemente neutralizados pela soroterapia tradicional. Por esta razão, procuram-se alternativas complementares, como as plantas medicinais antiofídicas que são usadas por comunidades que não têm acesso a soroterapia. A flora brasileira possui uma ampla variedade de plantas medicinais com potencial antiofídico, as quais têm sido pouco estudadas cientificamente. Neste estudo foram realizados ensaios in vitro e in vivo de neutralização de peçonhas ofídicas com o extrato aquoso das entrecascas de Anacardium humile (EAAh), e, o isolamento e a caracterização fitoquímica de um inibidor de miotoxinas, o ácido gálico (AG). Para os ensaios de inibição, foram utilizadas soluções contendo peçonha bruta ou toxina isolada misturadas com diferentes quantidades de extrato vegetal que foram previamente incubadas por 30 min a 37°C. Também foi realizada administração do extrato após o envenenamento em diferentes intervalos de tempo para os testes de inibição da miotoxicidade. Observou-se que EAAh tem atividade inibitória sobre os efeitos tóxicos (letalidade, miotoxicidade, e hemorragia) e farmacológicos/enzimáticos (edema, atividade fosfolipásica e coagulante) induzidos pelas peçonhas de serpentes dos gêneros Bothrops, Crotalus, Lachesis e das toxinas isoladas. O extrato vegetal inibiu 100% a letalidade induzida pela peçonha de C. d. terrificus e sua principal neurotoxina, a crotoxina. O EAAh foi submetido a fracionamento cromatográfico analítico, e em condições polares foi possível identificar e isolar o ácido gálico, o qual demonstrou tempo de retenção e espectros de ressonância magnética nucleares similares ao padrão comercial e a dados de literatura deste mesmo composto, respectivamente. O ácido gálico isolado foi capaz de inibir a atividade miotóxica induzida pela peçonha bruta de B. jararacussu e sua principal miotoxina, a bothropstoxina-I, uma PLA2-símile Lys49. A análise dos espectros de dicroísmo circular e os estudos de interação por modelagem molecular sugerem que o ácido gálico forma um complexo com a BthTX-I de B. jararacussu em seu sítio ativo, inibindo sua atividade tóxica. A ligação do ácido gálico com as miotoxinas não modificou nem a forma e nem a intensidade dos espectros de dicroísmo circular, não induzindo alterações significativas na porcentagem dos diversos domínios que constituem a estrutura secundária destas proteínas. O ácido gálico assim como outros taninos, tem revelado-se um bom inibidor das ações tóxicas de peçonhas de serpentes e está relacionado com a ação inibitória do extrato de Anacardium humile. / Ophidian envenomations are a significant problem of public health in several regions of the world, particularly in tropical and neotropical countries. The pathophysiology of snakebite accidents is constituted by a complex series of events both locally and systemically, and the antivenom serum is the only treatment used. However, local toxic effects induced during envenomation by snakes, especially from the genus Bothrops, are not effectively neutralized by the traditional serum therapy. For this reason, additional alternatives are made necessary, such as the use of medicinal plants that are used by communities with no access to serum therapy. The Brazilian flora possesses a wide variety of medicinal plants with antiophidian potential, which have been little-studied scientifically. In the present study, we performed in vitro and in vivo neutralization of snake venoms with the aqueous extract of inner bark of Anacardium humile (EAAh), and the isolation and phytochemical characterization of an inhibitor of myotoxins, the gallic acid (GA). For the inhibition assays, we used solutions containing crude venom or isolated toxin mixed with different amounts of plant extracts that were previously incubated for 30 min at 37°C. Administration of the extract after envenomation was also performed at different time intervals for myotoxicity inhibition assays. It was observed that EAAh has inhibitory activity against the toxic (lethality, myotoxicity and hemorrhage) and pharmacological/enzymatic effects (edema-inducing, coagulant and phospholipase activities) induced by snake venoms of the genera Bothrops, Crotalus, Lachesis and isolated toxins. The plant extract inhibited 100% of the lethality induced by C. d. terrificus venom and its major neurotoxin, crotoxin. The EAAh was subjected to analytical chromatographic separation, and in polar conditions, it was possible to identify and isolate the gallic acid, which showed retention time and nuclear magnetic resonance spectra similar to the commercial standard and to literature data of this same compound, respectively. Gallic acid alone was able to inhibit the myotoxic activity induced by crude venom of B. jararacussu and its main myotoxin, BthTX-I, a Lys49 PLA2-like enzyme. The analysis of circular dichroism spectra and interaction studies by molecular modeling suggest that gallic acid forms a complex with BthTX-I in its active site, which inhibits its toxic activity. The binding of gallic acid to myotoxins did not change neither the form nor the intensity of circular dichroism spectra, not inducing significant changes in the percentage of the various domains that form the secondary structure of these proteins. The gallic acid and other tannins have been showed to be good inhibitors of the toxic effects of snake venoms, and our study showed that this acid is related to the inhibitory action of the Anacardium humile extract.

O extrato bruto da planta inteira (Peperomia trineura) foi submetido à cromatografia de adsorção em sílica gel, cromatografia em camada delgada preparativa (CCDP) e CLAE semipreparativa, resultando no isolamento de cinco policetídeos inéditos em função do comprimento ou presença da insaturação na cadeia alquílica. A elucidação estrutural destes policetídeos foi realizada com base nas analises espectroscópicas de RMN 1D e 2D, infravermelho e espectrometria de massas de baixa e alta resolução. As frações provenientes do extrato bruto foram testadas frente a duas linhagens de células leucêmicas (K-562 e Nalm 6), apresentando atividades consideráveis. Já os policetídeos tiveram seu potencial antifúngico avaliado frente a duas espécies de fungos fitopatogênicas - Cladosporium cladosporioides e C. sphaerospermum - e apresentaram atividade fraca e média variando de acordo com suas estruturas. / The crude extract of whole plant (Peperomia trineura) was subjected to adsorption chromatography on silica gel, preparative thin-layer chromatography (CCDP) and semi-preparative HPLC, resulting in the isolation of five novel polyketides with variable chain lenght or presence of unsaturation in the alkyl chain. The structural elucidation of these compounds was based on spectroscopic techniques for 1D and 2D NMR, infrared and low and high resolution mass spectrometry. The fractions from the crude extract were tested against the two leukemic cell lines (K-562 and Nalm 6), showing considerable activities. The polyketides were evaluated against the phytopathogenic fungi - Cladosporium cladosporioides and C. sphaerospermum - and displayed low and medium activity.

As espécies do gênero Smilax L., conhecidas pelos nomes vulgares japecanga, cipó japecanga, salsaparrilha e aputá, são amplamente utilizadas como plantas medicinais, para os mais variados tipos de tratamentos. O presente estudo apresenta a análise dos caracteres anatômicos e do perfil químico de indivíduos da espécie Smilax syphilitica Humboldt & Bonpland ex Willdenow coletados em área de Mata Atlântica, em Santa Tereza ES e Smilax aff. syphilitica Humboldt & Bonbland ex Willdenow coletados na Floresta Amazônica, em Manaus. O material botânico foi herborizado e identificado pela especialista Profa. Dra. Regina Helena Potsch Andreata. As exsicatas foram registradas e incorporadas ao acervo do Herbário da Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz da Universidade de São Paulo, sob os números 107665 e 111412. As amostras de folhas (região mediana: internervural, nervura central e bordo), de caules não espessados (terceiro entrenó, próximo ao solo, subterrâneo), de rizóforos e raízes adventícias foram fixadas em FAA 50 (1:1:8 formaldeído, ácido acético glacial e álcool etílico 50%), infiltradas em historesina (Leica Historesin), seccionadas em micrótomo rotativo, coradas e montadas em resina sintética. Também foram realizados testes histoquímicos usuais. Para realizar as análises da ornamentação cuticular ao microscópio eletrônico de varredura, amostras de folhas foram fixadas em Karnovsky, desidratadas em série de acetona e pelo método do ponto crítico do CO2, montadas em suporte de alumínio e revestidas com ouro. Os perfis cromatográficos de ambas as espécies foram analisados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência Acoplada à Detector Diodo, utilizando-se extratos metanólicos (MeOH) de raízes e rizóforos. Observou-se que as espécies diferem com relação à ornamentação e à espessura cuticular, arranjo e espessamento parietal das células epidérmicas, tipos de estômatos, localização e natureza de conteúdos celulares, presença de idioblastos com ráfides, cristais prismáticos, e cristais de areia, presença de grãos de amido, e tipo de colênquima e presença de bainha esclerenquimática no pecíolo. As duas espécies apresentam rizóforos formadores de raízes adventícias, que podem ser brancas ou marrons dependendo do seu revestimento. Os perfis cromatográficos revelaram presença de substâncias fenólicas em ambas as espécies, porém, em rizóforos de amostras de S. syphilitica, foi observada maior complexidade química. As características anatômicas e químicas encontradas nas espécies estudadas proporcionarão uma base mais segura para a certificação e comercialização dessas plantas medicinais. / Species of the genus Smilax L., popularly known as japecanga, salsaparrilha and aputá are widely used as medicinal plants in many kinds of treatments. This study presents anatomical features and chemical profiles of the Smilax syphilitica Humboldt & Bonpland ex Willdenow from Atlantic Forest (Santa Teresa Espírito Santo) and S. aff. syphilitica Humboldt & Bonpland ex Willdenow from Amazon Forest (Manaus Amazonas). The botanical material was herborized and identified by the genus specialist, Prof. Dr. Regina Helena Potsch Andreata. The collection was registered in the Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz herbarium under the numbers 107665 and 111412. Leaf blades (median region: intervascular, midvein and edge), stems (third internode region, close to the ground internode and underground internode), rhizophores and adventitious roots were fixed in FAA 50 (1:1:8 formaldehyde, glacial acetic acid and 50% ethylic alcohol), embedded in Historesin (Leica Historesin), sectioned by rotary microtome, stained and mounted in synthetic resin. Also, usual histochemical tests were performed. To perform cuticle the cuticle ornamentation analyses under a scanning electron microscopy. Leaf samples were fixed in Karnovsky, dehydrated in acetone series and subjected to critical point method of CO2, mounted on aluminum stubs and coated with gold. Chemical profile of both species was analyzed by High Performance Liquid Chromatography Coupled with Diode Array Detector using methanol extracts (MeOH) of roots and rizophores. The studied species differ regarding cuticle thickness and ornamentation, cell wall thickness and arrangement in the epidermis, stomata classification, location and nature of chemical cell contents, presence of idioblasts with raphides, prismatic crystals, crystal sands, presence of starch grains, presence of collenchyma and thickened cells around vascular bundles in the petiole. Both species have rhizophores forming white and brown adventitious roots whose color depends on their covering tissue. Chemical profile showed presence of phenolic compounds in both species, although in S. syphilitica it was observed higher chemical complexity. The anatomical and chemical characteristics found in the studied species will provide a more secure basis for the certification and commercialization of these medicinal.

A atual Política Nacional de Plantas Medicinais e Fitoterápicos prevê investimentos em pesquisa e desenvolvimento para suprir a necessidade da indústria nacional em adquirir a matéria prima para a produção de novos fitoterápicos de maneira segura e controlada. As espécies do gênero Smilax, conhecidas popularmente como salsaparrilha, são empregadas na medicina popular como fortificante, antirreumático e antissifilítico e são vendidas em farmácias, casa de ervas e mercados públicos sem que exista um controle de qualidade de sua origem e eficácia. Além disso, a procedência do material é baseada principalmente no extrativismo. O controle de qualidade das drogas vegetais deveria ter uma base mais segura de identificação das drogas através da caracterização e definição de particularidades anatômicas e químicas. Este estudo teve como objetivo apresentar a quantidade, o valor, o modo de preparo, utilização e a procedência da salsaparrilha comercializada no Estado de São Paulo, bem como analisar a anatomia e o perfil químico de 44 amostras de salsaparrilha comercializada. Amostras de raiz foram submetidas às técnicas convencionais de microscopia de luz e eletrônica de varredura. Também foram realizados testes histoquímicos. Para determinar o perfil químico por Cromatografia em Camada delgada (CCD), foram realizados extratos etanólicos de amostras de raízes. O perfil químico do material comercializado foi comparado com o perfil das espécies de Smilax previamente identificadas (S. goyazana A. De Candolle, S. rufescens Grisebach, S. brasiliensis Sprengel, S. campestris Grisebach, S. cissoides Martius ex Grisebach, S. fluminensis Steudel, S. oblongifolia Pohl ex Grisebach e S. polyantha Grisebach). A quantidade média de salsaparrilha comercializada nas farmácias (400g) e nas casas de ervas (20Kg) é elevada se for considerado o fato de que as raízes não são procedentes de cultivo. Embora tenha sido observada grande semelhança entre a estrutura anatômica das amostras de salsaparrilha comercializadas e a estrutura já descrita na literatura para as espécies de Smilax, houve diferenças em relação à organização do floema, à presença de séries de idioblastos contendo ráfides na medula, à ausência de idioblastos fenólicos na medula e presença de metaxilema no centro da estrutura. O teste histoquímico confirmou a presença de amido em todas as amostras comerciais. As análises em CCD dos extratos etanólicos das amostras comerciais evidenciaram diversas manchas com tonalidades variando de amarelo a verde. Além disso, as manchas apresentaram componentes de mesmo Fator de retenção (Rf), indicando semelhança química entre as diversas amostras. No entanto, o padrão de distribuição de manchas, bem como o Rf das amostras comerciais diferiu daqueles obtidos para as oito espécies de Smilax, os quais foram muito similares entre si. / The current National Policy on Herbal Medicine provides investments in drug research and development to supply the need of national industry to acquire the raw material for production new herbal medicines in a safe and controlled way. The species of Smilax, popularly known as sarsaparilla, are used in folk medicine to be effective as tonic, antirheumatic and antisyphilitic properties and they are commercialized in pharmaceutical stores, natural products stores and public markets in Brazil with no quality control of its origin and efficacy. In addition, these plants are still harvested in extractive way. The quality control of herbal drugs should have more secure identification of drugs through the characterization and definition of anatomical and chemical peculiarities. This study aims to present the quantity, value, method of preparation, use and origin of the commercialized sarsaparilla in cities from the São Paulo state and to investigate the anatomy and chemical profile of 44 samples of the commercialized sarsaparilla. Root samples were processed and analyzed using conventional light and scanning electron microscopy techniques. Usual histochemical tests were also performed. Chemical profiles of samples were analyzed by thin layer chromatography (TLC) using ethanolic extracts of the roots. The chemical profile of the commercialized material was compared with profiles of previously identified species of Smilax (S. goyazana A. De Candolle, S. rufescens Grisebach, S. brasiliensis Sprengel, S. campestris Grisebach, S. cissoides Martius ex Grisebach, S. fluminensis Steudel, S. oblongifolia Pohl ex Grisebach and S. polyantha Grisebach). The average amount of sarsaparilla sold in pharmaceutical stores (400g) and natural products stores (20kg) is high if one considers the fact that the roots are not found under cultivation. Although there was a great similarity between the anatomical structure of commercialized sarsaparilla and the structure already described in literature for the Smilax species, there were found some differences in the organization of the phloem, the occurrence of series of idioblasts containing raphides in the pith, the absence of phenolic idioblasts in the pith and the presence of metaxylem in the center of the organ. The histochemical tests confirmed the presence of starch in all commercialized samples. Chemical profile showed several spots with colors ranging from yellow to green. Moreover, the spots showed the same components retention factor (Rf), indicating chemical similarity between the different samples. However, the distribution pattern of spots, Rf value of commercial samples differed from the eight species of Smilax, which were very similar to each other.

Este trabalho apresenta o desenvolvimento de uma metodologia experimental visando à produção de extratos secos padronizado de Bidens pilosa L. Esta planta, conhecida popularmente como picão-preto, é utilizada na medicina tradicional devido à suas propriedades antimalárica, antioxidante, antimicrobiana, hepatoprotetora e para o tratamento da icterícia. A primeira etapa deste trabalho foi a caracterização do material vegetal quanto ao perfil farmacognóstico, tamanho de partícula, perda por dessecação, teores de flavonoides e polifenóis totais. Foram coletadas populações de diferentes locais dividindo as plantas em raízes, caules e folhas-flores analisando-se comparativamente os extratos quanto ao teor de polifenóis, flavonoides totais e atividade antioxidante. A partir dos resultados obtidos selecionou-se o local de coleta onde a planta apresentou os maiores teores dos compostos estudados, os quais estão associados à atividade antioxidante e observou-se que as folhas-flores são as partes da planta que apresentam os maiores teores destes compostos. Uma vez selecionado o material vegetal foram estudadas a influência da temperatura e concentração de etanol no processo extrativo de compostos antioxidantes por meio de um planejamento experimental associado à análise de superfície de resposta. Complementando esta etapa, foi analisada a atividade antifúngica das soluções extrativas encontrando-se uma relação inversa com a atividade antioxidante. As condições ótimas de extração foram selecionadas baseando-se nos resultados do planejamento experimental e nas análises comparativas com outros métodos de extração. O extrato, assim otimizado foi utilizado no estudo do processo da secagem. Inicialmente foram realizados ensaios preliminares de secagem pelos métodos de spray drying e leito de jorro avaliando diferentes composições de secagem, empregando-se o extrato liofilizado como referência. Os extratos secos foram caracterizados em relação ao teor de flavonoides, distribuição granulométrica, solubilidade, umidade e propriedades de fluidez. Compostos previamente isolados desta planta reportados na literatura foram utilizados como marcadores e monitorados utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). O desempenho do processo de secagem foi avaliado mediante a determinação da recuperação, acúmulo e elutriação do produto. Estes ensaios permitiram selecionar como adjuvantes de secagem a composição de Aerosil® e Celulose microcristalina a qual foi avaliada em diferentes condições operacionais, utilizando a técnica de planejamento experimental. Os extratos secos foram analisados física e quimicamente para definir as condições ótimas de secagem. Os resultados mostraram uma menor degradação dos compostos secos pelo método de spray drying assim como uma melhor eficiência de secagem. As análises antimicrobianas dos extratos secos mostraram que a atividade antifúngica do extrato liofilizado da infusão aquosa da planta foi superior à dos extratos secos por spray drying e leito de jorro obtidos a partir das condições de extração otimizadas para a atividade antioxidante. / This work presents the development of an experimental methodology in order to produce a standardized dried extract of Bidens pilosa L. This plant is commonly known as picão-preto and is used in traditional medicine due to its biological activities as antimalaric, antioxidant, antimicrobial, hepatoprotector and for jaundice treatment. The first stage of this work was the characterization of the plant material, regarding to pharmacognostic profile, particle size, drying loss, total flavonoids and polyphenol content. Different populations of B. pilosa were collected from different places and the plants were divided in roots, steams and leaves-flowers. Extracts were analyzed comparatively with respect to flavonoid and polyphenol content and antioxidant activity. Based on the results was selected the plant material that presented the higher content of compounds analyzed which were associated to the antioxidant activity. It was also determined that the leaves-flowers were the plant part that presented the higher antioxidant activity, flavonoid and polyphenols content. Once selected the plant material, an experimental design associated to response surface was employed in order to analyze the temperature and ethanol concentration influence on the extraction process of antioxidants. Antifungic activity of the extracts was determined presenting and inverse relationship with antioxidant activity. Optimum conditions were selected based on the results of the experimental design and a comparative study with others extractions methods. The selected solution was employed in the drying process stage. Initially, preliminary studies were performed by spray drying and spouted bed drying testing different drying carriers, freeze dried extract was set as reference. Dried extracts were characterized in flavonoid content, particle size, solubility, water content and the flowing properties. Compounds previously isolated from this plant and reported in the literature were set as markers and its degradation were monitored by high performance liquid chromatography (HPLC). Drying efficiency was also assessed by product recovery, elutriation and accumulation. These experiments allowed to select a blend of Aerosil® and microcrystalline cellulose as the best drying carrier and were tested in different operational conditions using an experimental design. Extracts from those planed experiments were characterized by its physicsl and chemical properties in order to define the optimum drying conditions. Results showed lower compounds degradation by spray drying and a better drying efficiency. Finally antifungal activity of a freeze dried water infusion was higher than the antifungal activity of spray and spouted bed dried extracts obtained at the optimized conditions for antioxidant extraction

Costus arabicus L. é uma espécie herbácea, nativa da Mata Atlântica, conhecida popularmente como costus, canela-de-ema, cana-do-brejo, cana-de-macaco e gengibre-espiral, que é comumente utilizada como planta ornamental e na medicina popular. O órgão subterrâneo (rizoma) dessa espécie acumula amido como principal carboidrato de reserva. O estresse hídrico por falta de água é um dos fatores ambientais mais importantes que podem regular o crescimento e desenvolvimento das plantas, limitando sua produção e levando também a alterações nas características fisiológicas, bioquímicas e anatômicas. Desse modo, a deficiência hídrica destaca-se como fator adverso ao crescimento e à produção vegetal por alterar a eficiência com que os fotoassimilados são convertidos para o crescimento e desenvolvimento das plantas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do déficit hídrico no crescimento e acúmulo de carboidratos de reserva em plantas de Costus arabicus L., assim como na anatomia e ultra-estrutura do rizoma. O déficit hídrico foi imposto às plantas em duas épocas diferentes (inverno e verão) através dos seguintes tratamentos: plantas irrigadas diariamente (controle) e irrigadas a cada 7 (7d) e 15 dias (15d). Foram avaliados a umidade do solo, o teor relativo de água nas folhas (TRA), o potencial hídrico foliar (w), o potencial osmótico da seiva do rizoma (s), crescimento vegetativo, teores dos açúcares solúveis totais (AST) e redutores (AR), amido, aminoácidos livres totais e prolina, assim como, aspectos anatômicos e ultra-estruturais do rizoma. A umidade do solo manteve-se praticamente constante nas plantas irrigadas diariamente e superior a das plantas irrigadas a cada 7 e 15 dias nos dois experimentos. O déficit hídrico afetou o crescimento de Costus arabicus e os menores valores de w e s das plantas tratadas coincidiu com os menores valores de massa seca e número total de folhas verdes e aumentos do número de folhas senescidas. O baixo teor de prolina presente nas plantas sob déficit hídrico sugere que esse aminoácido não atuou na osmorregulação dessas plantas. Os menores teores de AST, AR e a manutenção dos teores de amido nos rizomas, associados ao menor crescimento das plantas dos tratamentos 7d e 15d em relação às plantas controle, sugerem a ocorrência de dormência do órgão subterrâneo em resposta ao déficit hídrico imposto, evidenciando uma estratégia de evitação à seca. As análises anatômicas mostraram que o rizoma é revestido pela epiderme ou súber estratificado e que existe uma delimitação entre as regiões cortical e vascular. Também foi observada a presença de numerosos grãos de amido e de idioblastos com conteúdo fenólico no parênquima dessas duas regiões. Entre os tratamentos, os rizomas das plantas irrigadas a cada 7 dias apresentaram características anatômicas semelhantes aos das plantas controle. No entanto, nos rizomas das plantas irrigadas a cada 15 dias, as células do tecido de revestimento e das camadas corticais mais externas tornaram-se mais achatadas e com paredes sinuosas. Através das análises em microscópio eletrônico de varredura, observou-se que os grãos de amido das plantas irrigadas diariamente e daquelas submetidas ao déficit hídrico apresentaram os mesmos formatos. / Costus arabicus L. is an herbaceous species, native to the Atlantic Forest, known popularly as costus, canela-de-ema, cana-do-brejo, cana-de-macaco and gengibreespiral, that is commonly used as an ornamental plant and in popular medicine. The underground organ (rhizome) of this species accumulates starch as the main reserve carbohydrate. Water stress, due to low water availability, is one of the most important environmental factors that regulates plant growth and development, limiting the production and leading to changes in physiological, biochemical and anatomical features. Thus, water deficit stands out as a factor adverse to growth and crop production by altering the efficiency by which photoassimilates are converted for growth and development of plants. The aim of this study was to evaluate the effect of water deficit on growth and accumulation of reserve carbohydrates in plants of Costus arabicus L., as well as on the anatomy and ultrastructure of the rhizome. Water deficit was imposed on plants in two seasons (winter and summer) through the following treatments: daily irrigation (control) and irrigation every 7 (7d) and 15 days (15d). We evaluated soil moisture, relative water content in leaves (RWC), leaf water potential (w), osmotic potential of sap from the rhizome (o), vegetative growth, levels of total soluble sugars (TSS), reducing sugars (RS), starch, amino acids and proline, as well as anatomical and ultrastructural characteristics of the rhizome. Soil moisture remained mostly constant in irrigated plants and higher than that of plants irrigated every 7 to 15 days in both experiments. Water deficit affected plant growth; low values of w and o of treated plants coincided with the low values of dry weight and total number of green leaves and with increases in the number of senesced leaves. The low content of proline found in plants under water deficit suggests that this amino acid did not act in the osmoregulation of these plants. The lowest levels of TSS, RS and the maintenance of starch levels in rhizomes, associated with low rates of plant growth in treatments 7d and 15d, compared to control plants suggest the occurrence of dormancy of the underground organ in response to water deficit, indicating a strategy of drought avoidance. The anatomical analysis showed that the rhizome is covered by epidermis or stratified cork and there is a delimitation between the cortical and vascular regions. We detected the presence of numerous starch grains and idioblasts with phenolic content in the parenchyma of these two regions. The rhizomes of plants irrigated every 7 days showed anatomical features similar to control plants. However, in the rhizomes of plants irrigated every 15 days, the cells of covering tissue and of the outer cortical layers became more flattened and sinuous. Analysis of scanning electron microscopy showed that the starch grains of irrigated plants and of plants submitted to drought presented the same shape.

Orientadores: Silmara Marques Allegretti, Vera Lúcia Garcia Rehder / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T02:12:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_ClaudineideNascimentoFernandesde_D.pdf: 6645819 bytes, checksum: c09a778f460110b77585bd22b8da5344 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A propagação da esquistossomose e a ameaça de tolerância e resistência ao fármaco de escolha, o praziquantel, têm intensificado as pesquisas utilizando plantas medicinais com o intuito de promover o desenvolvimento de novos fármacos esquistossomicidas. A planta Phyllanthus amarus (quebra-pedra) possui atividades antiinflamatória e hepatoprotetora já comprovadas cientificamente, o que fez com que a mesma fosse selecionada para este estudo, uma vez que a principal patologia da esquistossomose é a formação de granulomas (processo inflamatório) no fígado. Esse trabalho teve como objetivo fazer um fracionamento biomonitorado do extrato etanólico de P. amarus por meio de ensaios in vitro e in vivo com o intuito de verificar a ação esquistossomicida dessa planta contra o S. mansoni linhagem BH. Para a realização dos testes in vitro, os vermes adultos coletados foram incubados em placas contendo meio de cultura RPMI 1640, um casal de verme e amostras de extrato etanólico bruto, frações de diferentes polaridades ou lignanas isoladas nas concentrações 200, 100, 50 e 25 ?g/mL. Os vermes foram observados por um período de 72 horas, sendo avaliados a taxa de mortalidade, a oviposição, o acasalamento e as alterações tegumentares. A melhor atividade in vitro foi observada com a fração 2 butanólica, pois foi letal para 100% dos vermes em 48 h de observação, sendo assim selecionada para os testes in vivo. A fração 2 butanólica é composta majoritariamente por lignanas, por isso algumas delas (nirantina, filantina + nirantina e filantina + filtetralina + nirtetralina), mesmo não sendo efetivas nos testes in vitro, foram selecionadas para avaliação in vivo. Nos testes in vivo camundongos Balb/c foram tratados oralmente, 45 ou 60 dias após a infecção. No 45° dia de infecção os animais foram tratados com 100 e 200 mg/kg da fração 2 butanólica, 100 mg/kg das lignanas nirantina, filantina + nirantina e filantina + filtetralina + nirtetralina em dose única e 100 mg/kg da fração 2 butanólica distribuídos em 3 dias consecutivos. Já no 60° dia de infecção o tratamento foi feito em dose única com a fração 2 butanólica, nirantina, filantina + nirantina e filantina + filtetralina + nirtetralina (100mg/kg). A atividade in vivo foi avaliada com base nos seguintes parâmetros: ação sobre os vermes adultos, ovos eliminados nas fezes, oograma, formação das reações granulomatosas, e ação sobre o tegumento (feita por microscopia eletrônica de varredura - MEV). Os tratamentos mais efetivos no 45° dia de infecção foram apresentados pelos grupos tratados com filantina + nirantina e nirantina (100mg/kg). A lignana nirantina apresentou taxa de redução do número de ovos de 90,3% e a associação da filantina + nirantina, 63,8%. Os resultados referentes aos demais parâmetros (redução do total de vermes, de vermes fêmeas e do número de granulomas) foram semelhantes, apresentando taxas de redução em torno de 58%. Além dessas alterações, as imagens obtidas por MEV mostraram extensas lesões no tegumento dos vermes machos. No 60° dia de infecção, a associação de lignanas filantina + nirantina e a fração 2 butanólica (100mg/kg) apresentaram as taxas de redução mais significativas: 50,8% e 46,7% para o número total de vermes, 47,2% e 42,7% para o número de vermes fêmeas, 87,5% e 98,3% para o número de ovos e 44% e 18% para o número de granulomas, respectivamente. Assim sendo, de acordo com os parâmetros biológicos avaliados neste trabalho, a associação das lignanas filantina: nirantina na concentração de 100 mg/kg revelou um efeito esquistossomicida promissor, uma vez que foi efetiva nos dois períodos estudados / Abstract: The dissemination of schistosomiasis and the threat of its causing agents becoming resistant to the drug of choice, i.e., praziquantel, have intensified the research with medicinal plants to promote the development of new schistosomicidal drugs. Phyllanthus amarus (stone-breaker) is a plant whose anti-inflammatory and hepatoprotective activities have already been attested, which is the reason why it was chosen for this study, as the main pathology of schistosomiasis is the formation of granulomas (inflammatory process) in the liver. The aim of this work was to carry out a bioguided fractionation of the ethanol extract of P. amarus by means of in vitro and in vivo assays in order to verify the schistosomicidal potential of that plant against S. mansoni, BH strain. To carry out the in vitro assays, the collected adult worms were incubated in plates containing RPMI 1640 medium, a pair of mating worms, and samples of crude ethanol extract, fractions of different polarities or isolated lignans at the concentrations of 200, 100, 50 and 25 ?g/mL. The worms were observed over a period of 72 hours, in which mortality rate, egg laying, mating, and tegumentary changes were evaluated. The best in vitro activity was provided by butanol fraction 2, as it proved lethal for 100% of the worms over 48 hours of observation, and so it was used in the in vivo assays. Butanol fraction 2 is mainly composed of lignans, and some of them (nirantin, filantin: nirantin, and filantin + filtetralin + nirtetralin), albeit not effective in the in vitro assays, were selected for in vivo evaluation. In the in vivo assays, Balb/c mice were treated orally 45 or 60 days following infection. On the 45th day following infection, the animals were treated with 100 and 200 mg/kg of butanol fraction 2, 100 mg/kg of filantina:nirantin and filantin + filtetralin + nirtetralin in a single dose, and 100 mg/kg of butanol fraction 2 distributed over 3 consecutive days. On the 60th day following infection, the treatment was carried out in a single dose with 100 mg/kg of butanol fraction 2, nirantin, filantina:nirantin, and filantin + filtetralin + nirtetralin. The in vivo activity was evaluated based on the following parameters: action on adult worms, eggs eliminated in the stool, egg counting, granulomatous reactions, and action on the tegument of the worms (using scanning electron microscopy (SEM). The most effective treatments on the 45th day were those carried out with 100 mg/kg of filantina:nirantin, and nirantin. The association of filantina:nirantin provided a reduction of 63.8% in the number of eggs, whereas nirantin achieved a reduction rate of 90.3%. The results for the other parameters (reduction in the total number of worms, number of females, and number of granulomas) were similar with reduction rates around 58%. In addition to such changes, images obtained by SEM showed extensive lesions on the tegument of male worms. On the 60th day following infection, the filantin + nirantin association and butanol fraction 2 at 100 mg/kg achieved the most significant xxiii reduction rates: 50.8% and 46.7% in the total number of worms, respectively; 47.2% and 42.7% in the number of females, respectively; 87.5% and 98.3% in the number of eggs, respectively; and 44% and 18% in the number of granulomas, respectively. Therefore, according to the biological parameters evaluated in this work, the association of the lignans filantina:nirantin at 100 mg/kg has a promising schistosomicidal activity, as it was effective over two periods of treatment / Doutorado / Parasitologia / Doutora em Parasitologia