O objetivo deste estudo foi de tentar isolar e cultivar células da polpa de dentes decíduos humanos hígidos com diferentes graus de rizólise e avaliá-las após a expansão in vitro para parâmetros apresentados por células-tronco. Para tanto, o tecido pulpar foi obtido a partir de 30 dentes de crianças de 6 a 12 anos. A exodontia dos dentes foi indicada pelo cirurgião-dentista responsável pelo tratamento da criança. Os responsáveis pelos pacientes assinaram um termo de doação de material biológico aprovado pelo comitê de ética da UFRGS. Do total de dentes, 21 estavam em processo avançado de rizólise (grupo I), sendo que 17 possuíam raiz totalmente reabsorvida e 4 apresentavam cerca de de raiz residual. Os 9 dentes restantes não apresentavam reabsorção visível (grupo II). Todos os dentes extraídos foram imersos em meio de cultura para o transporte ao laboratório. Na capela de fluxo laminar, o tecido pulpar foi removido e incubado com colagenase tipo I e submetido a dissociação mecânica. A suspensão obtida foi semeada em placa de 12 poços e o meio de cultura trocado após 24 horas e após a cada 4 dias até a confluência de 90% ser atingida, quando eram realizadas as passagens. Na quinta e décima passagens, as células foram avaliadas pela citometria de fluxo quanto a seu fenótipo para CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 e HLA-DR e para determinar a presença/ausência da expressão gênica de OCT4, por meio de RT-PCR. Nas mesmas passagens, as células foram submetidas a avaliação do seu crescimento in vitro e foram induzidas à diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. O isolamento das células foi considerado com sucesso em 25 amostras nas quais células aderidas foram verificadas após 24h. Apenas 17 destas atingiram confluência de 90%. Não foi possível estabelecer cultura do grupo II (n=9). O estabelecimento das culturas e a capacidade de proliferação foram independentes da quantidade de tecido pulpar remanescente coletado. As células nas quinta e décima passagens foram positivas para CD29, CD44 e CD90 (>95%) e para a expressão gênica de OCT-4. Positividade moderada foi vista para CD117 e CD133 e expressão inferior a 3% para CD34, CD45, HLA-DR, CD184 e STRO-1 em todas as análises. Foi pequena também, a marcação de CD146. O CD146 está relacionado com as células-tronco localizadas nos pericitos, sendo descrito como possível nicho das células-tronco pulpares. Todas as culturas foram capazes de diferenciação nas 3 linhagens celulares citadas. Portanto, as células isoladas eram células-tronco, pois foram aderentes ao plástico, positivas para marcadores característicos de células-tronco mesenquimais e pluripotentes. Considerando os baixos níveis de expressão de CD146, nós podemos sugerir que o nicho perivascular não é o único provedor das células-tronco pulpares. A facilidade de obtenção das células parece estar ligada ao processo de rizólise, visto que as células do tecido pulpar do grupo I apresentaram-se capazes de proliferação in vitro, enquanto que no grupo II esta não foi suficiente para permitir o estabelecimento das culturas. / The aim of this study was to isolate and grow cells from the pulp of human sound deciduous teeth with different levels of resorption, and evaluate stem cell parameters after growing them in vitro. Pulp tissue was removed from 30 different patients, aged from 6 to 12. A free informed term of consent was signed by the patient’s next of kin, approved by UFRGS’s Ethical Committee. From all the teeth, 21 were in advanced levels of resorption (group I): 17 had completely reabsorbed roots and 4 had ⅓ of residual roots. The 9 teeth left did not show any visible re-absorption (group II). The teeth were immersed in culture medium to be transported to the lab. In aseptic conditions, pulp tissue was removed, incubated with type I collagenase and mechanically dissociated. The suspension was seeded onto 12 well plates and the medium was changed every 4 days until the culture reached 90% confluence, when a passage was performed. The phenotype of the cells was analyzed on fifth and tenth passages, by flow cytometry for the following markers: CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 and HLA-DR; and RT-PCR for OCT-4. On the same passages, cells were differentiated into adipocytes, osteoblasts and chondrocytes. Cell isolation was successful in 25 samples, where adherent cells were observed after 24h. Only 17 of these samples reached 90% confluence. It was not possible to establish cell culture from group II teeth (n=9). Cell growth and ability to proliferate in vitro were not dependent on the amount of pulp tissue that was collected. Cells on both fifth and tenth passages were positive for CD29, CD44 and CD90 (>95%) and also for the expression of OCT-4. Moderate labelling was observed for CD117 and CD133, while an expression lower than 3% for CD34, CD45, HLA-DR, CD 184 and STRO-1 was detected. Low amounts of CD146 were found in all analysis. CD146 is related to pericytes stem cells and therefore can be pulp stem cells niche. All cultures were able differentiate into all 3 cell types. According to these findings, the isolated pulp cells can be considered stem cells: they were adherent to plastic, positive for stem cell related markers and pluripotent. Considering the cells expressed low levels of CD146, we can infer that the perivascular niche isn’t the only source of pulpar stem cells. The easiness to obtain cells seems to be related to the root resorption process, because the cells from group I were able to proliferate in vitro, while group II cells were not.

As células-tronco provenientes da polpa de dentes decíduos esfoliados (SHED) são uma fonte promissora de células-tronco para a terapia regenerativa. Já foi demonstrado que elas podem se diferenciar em células endoteliais, mas os mecanismos envolvidos nesse processo ainda são desconhecidos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo elucidar os mecanismos moleculares relacionados à diferenciação endotelial dessas células. Para isso, um meio de cultura para células endoteliais (EGM-2MV), suplementado por 50ng/mL rhVEGF, foi utilizado com sucesso como estímulo para as SHED se diferenciarem em células endoteliais em cultura de monocamada. Uma vez que, elas expressaram os marcadores endoteliais VEGFR-2 e CD-31. Além disso, quando as SHED foram expostas ao meio de diferenciação, a fosforilação de STAT-3 (um marcador de células-tronco) foi inibida de acordo com a concentração utilizada, enquanto a fosforilação de ERK e AKT foi estimulada. Quando um inibidor de ERK foi adicionado ao meio, a fosforilação de STAT-3 aumentou. Por outro lado, quando um inibidor de STAT-3 foi adicionado ao meio de cultura, a fosforilação de ERK aumentou. A inibição de ERK também impediu a diferenciação endotelial. Para confirmar esse resultado, shRNA MEK-1 SHED também falharam em expressar VEGFR-2 quando estimuladas. Além disso, scaffolds de fatias dentais foram semeadas com shRNA VEGFR-1 SHED ou shRNA controle e implantadas no subcutâneo de camundongos imunodeficientes. Após recuperados, um tecido muito semelhante à polpa dental foi formado no interior das fatias. No entanto, havia menos células CD-31 positivas nos vasos sanguíneos dos implantes semeados com VEGFR-1 shRNA SHED, sugerindo um papel do VEGFR-1 na formação de vasos sanguíneos. Em conclusão, o VEGFR-1 e a via de sinalização de ERK estão envolvidos no processo de diferenciação das SHED em células endoteliais. / Stem Cells from Exfoliated Deciduous Teeth (SHED) are a promising source of stem cells for regenerative therapy. It was already shown they can differentiate into endothelial cells, but the mechanisms involved in this process remain unclear. Therefore, the following study aimed to elucidate the molecular mechanisms related to endothelial differentiation of SHED. For this purpose, a culture media for endothelial cells (EGM-2MV), supplemented with 50ng/ml rhVEGF, was successfully used as stimuli for SHED to undergo endothelial differentiation in monolayer culture, as they expressed the endothelial markers VEGFR-2 and CD- 31. Moreover, when SHED were exposed to the differentiation medium, STAT-3 phosphorilation (a stemness marker) was inhibited while the ERK and AKT phosphorilation was stimulated. When an ERK inhibitor was added to the medium, the STAT-3 phosphorilation increased in a dependent concentration manner. On the other hand, when a STAT-3 inhibitor was added the ERK phosphorilation increased. The ERK inhibition also arrested endothelial differentiation. To confirm this results, shRNA MEK-1 SHED also failed to express VEGFR-2 when stimulated. Additionally, tooth slice scaffolds were seeded with shRNA VEGFR-1 SHED or shRNA control SHED and implanted, subcutaneously, into immunodeficient mice. After retrieved, a dental pulp-like tissue had been formed inside the tooth slice. However, there were fewer CD-31 positive blood vessels in the shRNA VEGFR-1 implants suggesting a role of VEGFR-1 in the formation of blood vessels by SHED. In conclusion, the VEGFR-1 and ERK pathway are involved in the process of differentiation of SHED into endothelial cells.

Este ensaio clinico randomizado controlado avaliou a eficácia do uso da proteção pulpar indireta com cimento de hidróxido de cálcio (HC) ou sistema adesivo universal (AU) num período de seis meses de acompanhamento em lesões profundas de cáries em dentes permanentes após a remoção seletiva de tecido cariado (RSTC). Métodos: Participaram do estudo 48 pacientes, (mediana de idade de 27 anos [distribuição 7-54 anos]), com 41 molares e 15 premolares com lesões profundas de cárie (envolvimento radiográfico ≥50% de profundidade de dentina), sensibilidade pulpar positiva ao teste frio (gás refrigerado, -50°C, Maquira, PR, Brasil), ausência de dor espontânea, sensibilidade negativa aos testes de percussão, ausência de perda cuspídea e ausência de imagem radiográfica sugestiva de lesão periapical (radiografia periapical - VistaScan®). Após a remoção seletiva de tecido cariado para dentina amolecida, o grupo teste do ensaio recebeu um sistema adesivo universal (Universal single bond, 3M Espe, Brasil), enquanto o grupo controle recebeu a proteção pulpar indireta com cimento de hidróxido de cálcio (Dycal, Dentisply, Rj, Brasil). Todos os dentes foram imediatamente restaurados seguindo o condicionamento ácido seletivo em esmalte, aplicação de um sistema adesivo universal (AU) e resina composta nanoparticulada (Filtek Z350, 3M Espe, SP, Brasil). O desfecho de sucesso para vitalidade pulpar avaliou após seis meses: sensibilidade pulpar positiva ao teste frio, ausência de imagem sugestiva de lesão periapical (radiografia periapical - VistaScan®), ausência de dor espontânea e sensibilidade negativa à percussão vertical. Os dados foram submetidos à análise de sobrevida de Kaplan-Meier e teste Log Rank, e as variáveis idade (mediana), gênero, escolaridade, IPV, ISG, CPO-D, CPO-S, número de faces da restauração, tipo do dente, proteção pulpar indireta, profundidade da lesão (≥50% da profundidade da dentina ou ≥75% da profundidade da dentina) e presença de antagonista, quanto as suas distribuições nos dois grupos de tratamento pelos testes qui-quadrado e de Mann-Whitney. Resultados: As taxas de sucesso foram de 93.3% para o grupo controle (HC) e de 95.8% para o grupo teste (AU) (P=0.976). Dois casos de insucesso foram registrados, sendo necrose pulpar (grupo controle) e pulpite (grupo teste). As variáveis analisadas no início do estudo mostram uma amostra igualmente distribuída entre os grupos de tratamento. Nenhuma das variáveis foi relacionada ao insucesso. Os resultados sugerem que não há diferença entre o uso ou não de HC na proteção pulpar indireta após remoção 7 seletiva de tecido cariado em seis meses de acompanhamento, apresentando uma taxa de sucesso alta independente do tratamento. / This randomized controlled clinical trial evaluated the effectiveness of using indirect pulp protection with calcium hydroxide liner (CH) or universal adhesive (UA) over a period of 6 months in deep caries lesions on permanent teeth after selective removal to soft dentin (SCRSD). Methods: The sample consisted of 41 molars and 15 premolars (with radiographic involvement of the inner half of the dentin), from 48 patients, (median age 27 [distribution 7-54 years]), with positive response to cold test (refrigerated gas, -50 °C, Maquira, PR, Brazil), absence of spontaneous pain, negative sensitivity to percussion tests, absence of cuspid loss and absence of radiographic imaging suggestive of periapical lesion (periapical radiography). After the selective removal to soft dentin, the test group received a universal adhesive system (Universal Single Bond, 3M Espe, Brazil) whereas the control group received indirect pulp protection with calcium hydroxide liner (Dycal, Dentisply, Rj, Brazil). All teeth were restored following selective acid condition for enamel, adhesive system (UA) and nanoparticulate composite resin (Filtek Z350, 3M Espe, SP, Brazil). The successful outcome for pulp vitality assessed after six months: positive pulpal sensitivity to the cold test, absence of image suggestive of periapical lesion (periapical radiography - VistaScan®), absence of spontaneous pain and negative response to vertical percussion test. The results were submitted to the Kaplan-Meier survival analysis and the Log Rank test and the variables: age of subjects, gender, schooling, plaque index, gingival bleeding index, DMF-T, DMF-S, number of surfaces involved in the filling, type of the tooth, indirect pulp material, size of lesion (≥50% of dentine or ≥75% of dentine) and antagonist, analyzed for their distribution in the two treatment groups by the tests chi-square and Mann-Whitney. Results: The success rates were 93.3% for the control group (CH) and 95.8% for the test group (UA) (P=0,976). Only two cases of failure were recorded, one pulp necrosis (control group) and pulpitis (test group). The variables analyzed at the beginning of the study show a similarly distributed sample between treatment groups. The results suggest that there is no difference between the use of CH or UA in indirect pulp protection after SCRSD followed by composite restoration at six months of follow-up, showing a high rate of success for both treatments.

Embora diferentes estudos indiquem que há um aumento da resistência dos microrganismos aos agentes antimicrobianos prescritos, pouco se sabe a respeito da sua distribuição na cavidade oral. A presente dissertação está dividida em dois capítulos, representados por dois diferentes manuscritos. No manuscrito I, uma revisão sistemática foi realizada e teve como objetivo determinar quais genes de resistência a antimicrobianos foram pesquisados em saliva (S), no biofilme supragengival (SB) e canal radicular (RC). Os termos foram usados em várias combinações nas seguintes bases de dados eletrônicas (MEDLINE, EMBASE, ISI, SCOPUS e OPENGREY). Após seleção dos títulos e análise dos resumos, o texto integral de cada estudo foi obtido. Foram estabelecidos critérios de inclusão e exclusão. Dados epidemiológicos, características metodológicas e os resultados foram obtidos a partir dos estudos. Devido à falta de padronização da metodologia entre os trabalhos, não foi possível realizar uma meta-análise. Realizou-se análise descritiva dos dados. Um total de 151 títulos foram identificados para análise preliminar. Quarenta e nove resumos foram selecionados e 22 textos completos foram obtidos. Sete artigos contemplavam aos critérios de inclusão (S = 2; SB = 0 , e RC = 5). Vinte e seis diferentes genes-alvo foram avaliados. Os genes de resistência mais frequentemente descritos foram os relacionados às tetraciclinas e lactâmicos (5/7). Observa-se que poucos artigos foram selecionados pela estratégia de busca adotada para esta revisão sistemática. Este fato demonstra a falta de padronização nas metodologias dos estudos que utilizam técnicas moleculares para a detecção de genes de resistência bacteriana, tanto em condições de saúde ou doença. No manuscrito II, um estudo de observação clínica e laboratorial foi desenvolvido para detectar a presença de espécies-alvo de Prevotella e o gene cfxA/cfxA2 em amostras de saliva (S), biofilme supragengival (SB) e canais radiculares infectados (RC). Amostras pareadas de S, SB e RC foram coletadas de 42 indivíduos. Os pacientes foram divididos em três grupos: Grupo I - sem infecção aguda/crônica primária do canal radicular (n = 15), Grupo II - presença de infecção aguda primária no canal radicular (n = 12 ) e Grupo III - presença de infecção crônica no canal radicular (n = 15). Foram coletadas amostras de RC apenas para os Grupos II e III. Após o isolamento do DNA, a presença de Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi detectada através de PCR. Comparou-se a frequência das espécies e do gene de resistência, considerando diferentes ambientes e condições clínicas. A análise estatística foi realizada. Todas as amostras de S, SB e RC foram positivos para a detecção de DNA bacteriano. As taxas de detecção para espécies de Prevotella foram: S= 53,97%; SB=47,62%, e RC=34,56%. O gene cfxA não foi detectado simultaneamente em três ambientes do mesmo paciente. A presença ou ausência de sintomas espontâneos não influenciou as taxas de detecção para as espécies-alvo e para o gene cfxA/A2 em amostras de RC (teste exato de Fisher , P> 0,05). Espécies de Prevotella e o gene cfxA/cfxA2 foram frequentemente detectados na saliva, placa dental e amostras de canais radiculares. / Although different studies indicate that there is an increased resistance of microorganisms to antimicrobial agents prescribed in Endodontics, little is known about their distribution in the oral cavity. The present dissertation was divided into two chapters, represented by two different manuscripts. In manuscript I, a systematic review was conducted and aimed to determine which antimicrobial resistance genes were investigated in saliva (S), the supragingival biofilm (SB) and root canal (RC). The terms were used in various combinations in the following electronic databases (MEDLINE, EMBASE, ISI, SCOPUS and OPENGREY). After title screening and abstract analysis, the full text of each study was obtained. The relevance of each study to the question of interest was determined through inclusion and exclusion criteria. Epidemiologic data, methodological characteristics and results were collected from the studies. Due to lack of methodology standardization among the papers, it was not possible to perform a meta-analysis. Descriptive data analysis was performed. A total of 151 titles were identified for preliminary analysis. Forty-nine abstracts were selected, and full texts of 22 studies were obtained. Seven articles matched the inclusion criteria (S=2; SB= 0; and, RC=5). Twenty-six different targeted genes have been evaluated. The most frequently investigated groups of resistance genes were related to tetracycline and lactamics (5/7). Few articles in the literature fit in the search strategy adopted by this systematic review, demonstrating the lack of standardization in the methodologies of studies using molecular techniques for the detection of bacterial resistance genes to antibiotics in oral cavity, either in health or disease conditions. In the manuscript II, an observational clinical and laboratorial study was developed to identify the presence of targeted Prevotella species and the cfxA/cfxA2 gene in samples from saliva (S), supragingival biofilm (SB) and infected root canals (RC). Paired samples of S, SB and RC were collected from 42 subjects. Patients were divided into three groups: Group I - no acute or chronic root canal infection (n = 15); Group II - presence of acute root canal infection (n = 12), and Group III - presence of chronic root canal infection (n=15). RC samples were collected for Groups II and III. After DNA isolation, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and the cfxA/cfxA2 gene was detected through gene-specific PCR. The frequency of the species and of the resistance was compared, considering different environments and clinical conditions. Statistical analysis was carried out. All samples from S, SB and RC were positive for the presence of bacteria. The overall detection rates for Prevotella species were: S = 53.97%; SB = 47.62%; and, RC = 34.56%. The cfxA gene was not detected simultaneously in the three environments from the same patient. The presence of absence of spontaneous symptoms had not influenced the detection rates for the targeted species and for the cfxA/A2 gene in RC samples (Fisher Exact Test, P>.05). Prevotella species and the gene cfxA/cfxA2 were frequently detected in saliva, dental plaque and root canal samples.

As gorduras são componentes importantes em dietas para carnívoros, porém o aproveitamento pelos animais sofre influência de fatores inerentes à composição das dietas, principalmente fibras e minerais, que precisam ser melhor estudados. Os trabalhos que avaliam as perdas endógenas de gordura nas fezes (PEGF) e os efeitos na digestibilidade aparente da gordura são escassos e divergentes. Desta forma, os objetivos destes estudos foram: determinar as PEGF em cães e mink; utilizar as PEGF para obtenção dos valores de digestibilidade verdadeira da gordura; além de avaliar os efeitos da composição de fibras dietéticas e a inclusão de emulsificantes no aproveitamento da gordura por cães. No primeiro estudo, as PEGF foram mensuradas em cães adultos. Dietas com níveis crescentes de gordura de frango foram utilizadas e as PEGF dos cães foram determinadas a partir de análises de regressão. As PEGF foram expressas em relação ao peso corporal (PC) dos animais, 155 mg/kg PV/dia, ou em relação ao consumo de gordura na matéria seca (MS), 7,9 g/kg MS consumida. A digestibilidade aparente total da gordura apresentou aumento conforme o consumo. A digestibilidade verdadeira total da gordura, corrigida para PEGF, não variou mediante o consumo de gordura. A relação entre PEGF e consumo de gordura foi maior em dietas com baixa gordura e explica o aumento na digestibilidade aparente da gordura quando concentrações maiores são consumidas. No segundo estudo, as PEGF foram determinadas em mink. Dietas com níveis crescente de óleo de soja foram formuladas e as PEGF avaliadas por regressão. Foi obtido o valor de 0,5 g/100g MS consumida, próximo ao relatado em cães. No terceiro estudo foi avaliada a influência das fibras dietéticas e da lecitina de soja na digestibilidade aparente da gordura em dietas para cães adultos. Foram avaliadas três fontes de carboidratos, amido de milho, celulose e polpa de beterraba, combinadas ou não à lecitina de soja. A polpa de beterraba reduziu a digestibilidade aparente e verdadeira da gordura em cães, aumentou o teor de umidade e elevou o escore fecal, porém ainda dentro da faixa considerada ideal. A lecitina de soja não apresentou efeito de melhora na digestibilidade dos macronutrientes e da energia das dietas. / Fats are important components of carnivores diets, however inherent factors of diets composition, mainly fibers and minerals, may affect its use by the animals, requiring further studies. Studies evaluating endogenous fat loss (EFL) and the effects on apparent total tract digestibility of fat are limited and divergent. The objectives of these studies were: to determine the EFL in dogs and mink; apply the EFL to calculated the true total tract digestibility of fats; and to evaluate the effects of dietary fiber composition and an emulsifying agent on fats digestibility in dogs. On the first study, the EFL was evaluated in adult dogs. Diets with increasing levels of poultry fat were used and the EFL was determined by regression analysis. The EFL was obtained according to the dogs’ body weight (BW) as 155 mg/kg BW/day, or according to dry matter (DM) fat intake, as 7.9 g/kg DM intake. The apparent total tract digestibility of fat increases according to the intake level. However, the true total tract digestibility of fat, EFL corrected, remained unaffected by fat intake. The relation between EFL and fat intake is higher for low fat diets and explains why the apparent digestibility increases according to intake. On the second study, the EFL was measured in mink. Diets with graded levels of soybean oil were offered and the EFL evaluated by regression. The value of 0.5 g/100 g DM intake was obtained, close to the reported with dogs. The third study assessed the influences of dietary fibers and soy lecithin on apparent total tract digestibility of fat in adult dog diets. Were evaluated three carbohydrate sources; corn starch, cellulose and beet pulp; combined or not with soy lecithin. The beet pulp decreased apparent and true total tract digestibility of fat in dogs, increased the moisture level of faeces and the faecal score, yet the faeces still had good quality. The soy lecithin did not improve digestibility of macronutrients and energy of diets.

As células-tronco mesenquimais (CTMs) tornaram-se um grande interesse para a ciência por serem capazes de estimular a regeneração tecidual, apresentarem habilidade de se expandir e diferenciar em cultura e, consequentemente, apresentarem diversas possibilidades terapêuticas, bem como para a engenharia de tecidos. Muitos dos tecidos dentários também apresentam nichos de CTMs. O fácil acesso à polpa dos dentes decíduos, em virtude da esfoliação dental, a torna uma fonte muito atraente para a terapêutica e a engenharia de tecidos. Todos os avanços advindos das terapias baseadas em células-tronco tornam a preservação das fontes celulares, por longos períodos de tempo, um assunto de suma importância. Para que isso possa ocorrer, métodos de armazenamento devem ser adotados, tanto para as culturas celulares já estabelecidas, quanto para os tecidos inteiros. Uma das formas mais comuns de manutenção de culturas e de tecidos é a criopreservação em nitrogênio líquido. Contudo, existem poucas evidências no sentido de estabelecer um protocolo eficaz para o congelamento do dente decíduo intacto. Dessa forma, esse trabalho objetivou isolar, cultivar e caracterizar, para parâmetros apresentados para CTMs, as células pulpares após a criopreservação de dentes decíduos intactos por 7 dias. Para isso, vinte e seis dentes decíduos foram alocados em 2 grupos experimentais, sendo: grupo 1, células pulpares de dentes decíduos criopreservados intactos (grupo Crio) e grupo 2, células pulpares de dentes decíduos isoladas imediatamente após a exodontia (grupo fresco - controle). As células pulpares de ambos os grupos foram isoladas, cultivadas, analisadas por citometria de fluxo (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 e HLA-DR), submetidas aos protocolos de diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica, e aos ensaios de proliferação celular (WST-8). A morfologia celular de ambos os grupos foi avaliada por microscopia confocal. Os resultados demonstraram uma taxa de cultivo de 30% para o grupo Crio e 61% para o grupo Fresco. Não houve diferença estatística entre os grupos para os marcadores de superfície analisados. As células de ambos os grupos foram capazes de se diferenciar em células das 3 linhagens testadas. Para o ensaio de proliferação, não houve diferença estatística entre os grupos ao longo dos tempos testados (p>0,05), embora a média de dias entre o isolamento e a quinta passagem foi menor para o grupo controle (p=0,035). As células do grupo Crio mostraram morfologia alterada. Assim, conclui-se ser possível obter células-tronco da polpa de dentes decíduos congelados pelo protocolo sugerido, sem alterações imunofenotípicas. No entanto, esse protocolo demonstrou baixas taxas de sucesso de isolamento, menor capacidade de diferenciação e de proliferação, além de alteração da morfologia celular. / Mesenchymal stem cells (MSC) became of great value for science for being capable of stimulating tissue regeneration and showing ability to proliferate and differentiate when cultured properly. Dental tissues also present MSC niches as well. Mesenchymal stem cells from the pulp of deciduous teeth are considered an easy access source during a specific period of time in the patients life, when teeth are undergoing exfoliation; therefore, very attractive for cell based therapeutics and tissue engineering. All advances seen in cell based therapies for the last years depend on cell or tissue preservation for long periods of time. Thus, storage methods must be adopted for cultures of cells and whole tissues. The most common technique to preserve cell cultures and tissues is cryopreservation with liquid nitrogen. However, fragile evidence concerns the cryopreservation of intact deciduous teeth. This research aimed to isolate, cultivate and characterize the dental pulp cells of intact cryopreserved deciduous teeth and compare to the dental pulp cells of non-cryopreserved deciduous teeth. Thirteen pairs of deciduous teeth were donated from patients in orthodontic treatment and were randomly allocated in two different groups. The first group was made of cryopreserved intact deciduous teeth (Cryo group), and in second group pulp cells were isolated from fresh teeth (Fresh group). The cells of both groups were isolated, cultivated and characterized for mesenchymal stem cell parameters, and then compared for isolation and proliferation rates, surface markers expression (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 and HLA-DR), differentiation ability and morphology. The culture rate was 30% for the cryopreserved group and 61% for the fresh. There were no statistical differences between the groups for the surface markers tested. Cells in both groups were capable of differentiating in the 3 mesenchymal lineages. For the proliferation assay, there was no statistical difference between groups throughout the time tested although the mean time between isolation and the fifth passage was lower for the control group (p=0,035). Cells from Cryo group showed altered morphology. The present study showed that Dental Pulp Stem Cells can be obtained from cryopreserved intact deciduous teeth without changes in the immunophenotypical profile, however low success rates for isolation, differentiation ability and morphological alterations were observed.

As evidências, até então disponíveis, revelam o sucesso de tipos diferentes de abordagem conservadora de lesões de cárie profundas e as reações do complexo dentino-pulpar, entre elas a formação de dentina reacional. O objetivo do presente estudo foi avaliar histologicamente o tecido pulpar de dentes decíduos humanos submetidos a diferentes abordagens conservadora. A amostra foi composta por 25 molares decíduos, divididos em 5 grupos, sendo os primeiros tratados com remoção total de tecido cariado sem exposição pulpar (RTTC), remoção parcial de tecido cariado em sessão única (RPTC) e tratamento expectante (TE), além dos controles positivo (molares hígidos) e negativo (molares com lesão de cárie ativa profunda em dentina sem tratamento restaurador). Foi realizada a quantificação de dentina reacional, da presença ou não de inflamação e reabsorção pulpar e uma análise descritiva da morfologia pulpar através da observação de cada lâmina ao microscópio. Não foi encontrada diferença estatisticamente significativa entre os grupos, entretanto houve maior formação de dentina reacional no grupo de RPTC, nos levando a entender que o tratamento menos invasivo pode ser uma alternativa terapêutica definitiva para o tratamento das lesões profundas de cárie em dentina de dentes decíduos. / The evidence available so far shows the success of the conservative approach of deep carious lesions and the reactions of the pulp-dentin complex, including the formation of reactionary dentin. The aim of this study was to evaluate histologically the pulp tissue of human deciduous teeth undergoing different conservative treatments. The sample was composed of 25 primary molars, divided into 5 groups, the first being treated with total caries removal without pulp exposure (TCR), partial caries removal in one session (PCR) and stepwise excavation (SW), and positive controls (sound molars) and negative (molars with active deep caries lesion without restorative treatment). Quantification of reactive dentin was performed, the presence or absence of resorption and inflammation and pulp descriptive analysis of the morphology of pulp through observation of each slide under a microscope. There was no statistically significant difference between the groups, but there was more reactionary dentin formation in PCR group, leading us to understand that the less invasive treatment may be an alternative therapy for the definitive treatment of deep caries lesions in dentin of deciduous teeth.

No Brasil, tanto o agronegócio quanto a fabricação de celulose trazem resultados relevantes para a economia. Sob uma perspectiva de sustentabilidade, as indústrias beneficiadoras de materiais vegetais geram grande volume de resíduos, os quais podem servir de fonte de celulose, configurando-se numa alternativa atraente para gerar lucros e diminuir impactos ambientais negativos. O objetivo geral desta dissertação é realizar um estudo exploratório de extração de celulose a partir de resíduo do processo produtivo de empresa beneficiadora de material vegetal, sob perspectiva das dimensões ambiental e econômica da sustentabilidade. O estudo foi desdobrado em cinco etapas: i) identificação na literatura das diretrizes para os processos produtivos sustentáveis, por meio das abordagens que tratam da sustentabilidade; ii) identificação dos processos industriais de extração de celulose e suas características operacionais; iii) definição da empresa para realização do estudo, a sazonalidade e o volume disponível dos resíduos vegetais provenientes do processo de beneficiamento de vegetais; iv) adaptação do processo industrial de extração de celulose para uso com resíduos vegetais e atendimento às restrições da fábrica definida para o estudo e v) realização de testes de extração com o uso de projeto de experimentos para posterior caracterização da polpa de celulose obtida do resíduo. Neste último, foi empregado um Projeto Fatorial Composto de Segunda Ordem (PSCO) com Metodologia de Superfície Resposta (MSR) para analisar a influência dos fatores controláveis sobre as variáveis de resposta. Os fatores controláveis foram definidos de acordo com dados da literatura específica e foram analisadas as variáveis de resposta que caracterizam polpa de celulose, aplicáveis a fins sanitários, como Número Kappa, capacidade de absorção, velocidade de absorção e densidade. Resultados indicaram que limitações quanto ao uso de altas temperaturas no processo de extração é um fator relevante, para atingir maiores teores de deslignificação. Os estudos mostraram a influência do uso de aditivo de processo, antraquinona, carga alcalina e tempo de polpeamento, bem como, tratamento de hidrólise ácida no resíduo na qualidade da polpa. / Agribusiness and pulp production bring both relevant results to the Brazilian economy. In a sustainable perspective, the wastes of Industries that benefit vegetable materials may serve as pulp’s source, configuring itself as an attractive alternative for profit generation and reduction of negative environmental impacts. The aim in this dissertation is to carry out an exploratory study of pulp extraction from the waste of productive process of a firm which processes vegetal material, under the perspective of environmental and economic dimensions of sustainability. The study was unfolded in five steps: i) identification, in literature, the guidelines for sustainable productive processes, through approaches that embrace sustainability; ii) identification of industrial processes of pulp extraction and respective operational features; iii) definition of an industrial unit to perform the study, as well as the seasonality and the availability of vegetal wastes coming from the vegetable process; iv) adaptation of the industrial process of pulp extraction for using with vegetable wastes, and attendance to constraints of the current process in the industrial unit chosen for the study; and v) the performance of extraction tests using a project of experiments for further characterization of the cellulose pulp resulting from the waste. It was employed a Factorial composite second-order design in a Surface Response Methodology (SRM) in order to analyze the influence of the controlled variables over the response variables. Variables of the extraction process were defined according with the specific literature’s data, and response variables, adequate to the cellulose pulp characterization as Kappa Number, capability, absortion speed and apparent density were analyzed. Results indicate that constraints related to the high temperature used in the equipment available for extraction is a relevant factor in the process for obtaining higher contents of delignification. Studies show the influence of using additive process, anthraquinone, load time and alkaline pulping, as well as treatment of hydrolysis in the waste of pulp quality. The remarkable difference in the quality of vegetable waste after hydrolysis treatment indicates that a pretreatment stage of such waste is interesting, since the fiber is resistant and requires high alkali and addictive charges.

Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar morfologicamente os tecidos pulpar e periapical de molares de ratos com a polpa vital e expostos ao meio bucal durante o desenvolvimento radicular, além de detectar a localização do STRO-1 e do BMP4 nos mesmos. Métodos: Foram utilizados 24 ratos machos da linhagem Wistar com quatro semanas de idade. A fim de induzir a necrose, foi realizada a exposição pulpar dos primeiros molares inferiores esquerdos em condições não-assépticas e deixando a polpa exposta ao ambiente oral (grupo teste). Os molares inferiores do lado direito não sofreram intervenção e serviram como grupo controle. A eutanásia dos animais foi realizada nos tempos de 7, 10, 13 e 16 semanas de vida (o equivalente a 3, 6, 9 e 12 semanas após a intervenção). Após, as mandíbulas foram dissecadas e processadas para a análise histológica através de Hematoxilina-Eosina e Imunohistoquímica. Foram comparadas, entre os grupos, em cada um dos períodos, a reação inflamatória periapical, as características do tecido pulpar (células inflamatórias, vascularização, odontoblastos, degeneração, destruição tecidual), fechamento do forame e presença de reabsorções. Resultados: Todos os dentes do grupo teste apresentaram necrose pulpar e a interrupção do desenvolvimento radicular. Enquanto isso, os dentes do grupo controle apresentaram o desenvolvimento normal dos tecidos dentários. Quanto à imunohistoquímica, foi constatada a marcação pelo BMP-4 no tecido pulpar dos dentes do grupo controle. Não houve, no entanto, marcação nos dentes do grupo teste. Para o STRO-1, a marcação foi mais evidente na região dos vasos sanguíneos, tanto no grupo controle, quanto no grupo teste. Para nenhum dos anticorpos, foi constatada marcação na região da papila apical. Conclusão: No presente estudo, a técnica imunohistoquímica não foi suficiente para a avaliação da presença de células-tronco na região da papila de dentes com rizogênese incompleta e necrose pulpar. É possível que a presença de infecção e a reação inflamatória tenham bloqueado a expressão do STRO-1 e do BMP-4. / Objective: the aim of this study was to characterize the features of live and necrotic dental pulps of molar teeth in rats with developing roots, and to assess the expression of STRO-1 and BMP-4. Methods: twenty-four 4-month-old male Wistar rats were used. To induce necrosis, the pulps of the first lower left molars were exposed to the oral environment. The lower right molars served as the control non-operated group. Euthanasia of animals was carried out at 7, 10, 13 and 16 weeks and the jaws were dissected and processed for histological analysis by hematoxylin-eosin and immunohistochemistry. The periapical inflammatory reaction, the characteristics of the pulp tissue (inflammatory cells, vascularity, odontoblasts, degeneration, tissue destruction), closure of the foramen and presence of resorptions were described at each period. Results: all teeth from the test group presented pulp necrosis, occurring discontinuation of root development. Meanwhile, the teeth of the control group showed normal development of dental tissues. BMP-4-positive cells were detected in the pulp of teeth from the control group. However, there was no expression in teeth of the test group. For STRO-1, expression was more evident in the blood vessels, both for the control group and for the test group. Apical papilla evidenced no BMP-4 nor STRO-1 expression. Conclusion: Immunohistochemistry was not sufficient to evaluate the presence of stem cells in the apical papilla region of nonvital immature teeth. It is possible that the inflammatory process has blocked the expression of STRO-1 and BMP-4., Probably, infection has negatively modulated this expression.

The aim of this Master thesis was to investigate if the xylan content had any influence on the physical properties of softwood kraft pulps. To achieve pulps with different xylan content different kraft cooking conditions were used; two different temperatures and two different effective alkali levels. The cooking conditions used were 160°C with 30% effective alkali (EA) referred to as reference cook and 145°C with 17% effective alkali (EA) referred to as the mild cook. The first step in this study was to determine the cooking time needed for reaching a certain kappa number, i.e.30. It was also determined whether the difference in xylan content between the pulp samples was sufficient when these cooking conditions were used. When the correct cooking time and cooking conditions had been found new cooks were made using these conditions. All cooks were made at a liqour to wood ratio of 4:1.   The difference in xylan content between the corresponding pulp samples was found to be 3%. The physical testing showed no significant difference in the tensile strength between the two pulps after beating. There was a difference in tear index however and the pulp with the highest content of xylan had the lowest tear index. Zero-span index was the same for the two pulps when unbeaten. After beating the zero-span index decreased for the pulp with highest xylan content but stayed unchanged for the pulp with the lower amount of xylan. These results can be explained by the results from the fibre analysis which showed that the fibres with high xylan content were longer, thicker and had a higher coarseness. Thicker fibres are probably stiffer than thinner fibres which gives the paper fewer bonding points and a lower strength. The result from the zero-span test indicated that the fibres with higher xylan content are affected more by beating than fibres with the lower xylan content. / Målet med examensarbetet var att undersöka om och hur mycket xylaneti pappersmassan påverkar fiberns och därmed papperets fysikaliska egenskaper. Egenskaperna som undersöktes var drag- och rivstyrka samt zero-spanstyrka. Xylaninnehållet skulle varieras genom att kokförhållandena förändrades dels genom olika koktemperaturer dels olika satsningar av effektivt alkali vid given sulfiditet. Dessa var 160ºC med 30% effektivt alkali(EA) hädanefter benämnd referenskoket och 145ºC med 17% effektivt alkali(EA) som benämns det milda koket i fortsättningen.En bestämning av koktiden gjordes för att nå 30 i kappatal och två provkok, ett vid varje temperatur behövde göras.Skillnaden i xylanhalt mellan de slutliga massaproverna låg på c:a 3% enheter.   Styrkeproverna gav inga entydiga svar på om skillnaden i xylanhalt gav någon effekt på massastyrkan. Dragproverna visade att för omald massa var massan från referenskoket starkast men att massan från det mildare koket reagerade kraftigare på malningen. Redan vid 1000 varv hade den i princip samma dragindex som referensmassan vid samma malgrad. Zero-span mätningarna visade att fibrerna hade samma styrka när de var omalda.   Resultaten från fiberanalysenverifierade resultaten från styrketesterna eftersom en tjockare fiber bör ge en styvare fiber och därmed erhålls färre bindningspunkter.  Färre bindningspunkter ger en lägre dragstyrka och det krävs mindre energi för att bryta bindningarna. Efter malningen kan man se att zero-span styrkan har minskat betydligt för massan med högre xylanhalt medan referensmassan behöll styrkan. Dessutom har dragstyrkan ökat för båda massorna men mest för massan med högre xylanhalt. Det kan förklaras med att malningen ger små fibriller på ytan av fibern och en mjukare och böjligare fiber. Därmed ökar bindningsstyrkan då bindningsarean ökar och fibern blir mjukare och böjligare. Den ökade bindningsgraden samt den minskade fiberstyrkan kan förklara varför rivindex fortfarande var lägre för massan med högre xylanhalt trots att dragindex ökade med ökad malning.En annan förklaring kan vara att vid ett långt kok med låg temperatur är det troligt att lignin adsorberas på fibrerna.Ligninet på ytan ger en sämre bindningsförmåga vilket leder till att de är lättare att dra ur nätverket med lägre energiåtgång som följd.