Cytoplasmic 15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase from swine kidney was purified to specific activity of 1.2 U per mg protein, by chromatographic techniques. Native molecular weight of enzyme was estimated at 45,000. Enzyme was inhibited by sulfhydryls, diuretics, and various fatty acids. Substrate studies indicated NAD+ specificity and ability to catabolize prostaglandins, except prostaglandin B and thromboxane B. Initial velocity studies gave intersecting plots conforming to a sequential mechanism. 15-keto-prostaglandin exhibited linear noncompetitive production inhibition with respect to either prostaglandin or NAD+; NAD yielded linear competitive production inhibition with respect to NADH. Results, and those of dead-end inhibition and alternated substrate studies, are consistent with an ordered Bi-Bi mechanism: NAD+ is added first, then prostaglandin; then 15-keto-rostaglandin is released, then NADH.

Filamentous aeroterestrial green algae genus Klebsormidium occurs in a very wide range of freshwater and terrestrial habitats. Recent results of molecular investigations led to the finding that the diversity within this genus is far greater than expected on the basis of the morphological features, and that the traditional phenotypic species concept is insufficient. I tried to differentiate phylogenetic lineages within the genus Klebsormidium by thein different biogeographical distribution and environmental preferences. Since no study dealing with the biogeographic pattern of aeroterrestrial algae was so far undertaken, another aim of this work was to test validity of the protist ubiquity model in aeroterrestrial habitats. I studied this issues based on the chloroplast rbcL molecular marker. Based on the obtained data I found that the geographic definition of particular Klebsormidium lineages turns out to be unusable because of the cosmopolitan occurrence of almost all genotypes. However, the data obtained from the substrate specificity study shows that clear ecological preferences exist within the genus Klebsormidium and could be simply used to define different lineages within the genus.

Les gènes Hox sont responsables de l’identité des segments le long de l’axe antéro-postérieur. Ils sont évolutivement conservés et codent des facteurs de transcription. In vitro, toutes les protéines Hox se lient à des séquences nucléotidiques très similaires via un domaine de liaison à l’ADN très conservé, l’homéodomaine (HD). Cette faible spécificité de liaison à l’ADN in vitro contraste avec leur spécificité d’action in vivo. Une manière d’expliquer ce paradoxe est que les protéines Hox agissent en interaction avec des protéines cofacteurs, dont le mieux caractérisé est Extradenticle (Exd) chez la drosophile, Pbx chez les mammifères (collectivement appelés PBC). L’interaction Hox-PBC s’appui sur un motif conservé chez la presque totalité des protéines Hox, situé en amont de l’HD, le motif Hexapeptide (HX). Des travaux récents au sein de notre équipe ont montré l’existence d’un nouveau mode d’interaction Hox-PBC, non-générique, médié par un motif spécifique à certains groupes de paralogies seulement, et situé en en C-terminal de l’HD. Ceci souligne que les interactions Hox-PBC, qui spécifient la fonction des protéines Hox, reposent sur de modes multiples d’interaction.Mes travaux de thèse ont porté sur le mode d’action des protéines Hox, en étudiant la fonction de trois motifs ayant un rôle démontré ou potentiel dans le recrutement du cofacteur Exd par la protéine Hox de drosophile AbdominalA (AbdA). L’approche empruntée visait à analyser de manière globale la manière dont chacun de ces motifs pris isolément, ou en interaction, définit la fonction d’AbdA. Les conclusions de ce travail soulignent l’absence de pléiotropie fonctionnelle et un haut degré d’interactivité entre ces motifs. Le second volet de ma thèse a été d’initier la découverte de nouveaux motifs fonctionnels au sein des protéines Hox. J’ai abordé cette question en sélectionnant des modules phylogénétiquement conservés. Afin d’évaluer leur fonction, ces motifs ont été mutés et l’impact de leur mutation a été analysé in vitro et in vivo. Les résultats obtenus ont permis l’identification d’au moins un domaine protéique qui contribue de manière prédominante à la fonction de la protéine Dfd. / Hox genes are responsible for the identity of segments along the antero-posterior axis. They are evolutionarily conserved and encode transcription factors. In vitro, all Hox proteins bind to a similar nucleotide sequence via a highly conserved DNA binding domain, the homeodomain (HD). This low specificity of DNA binding in vitro contrasts with their specificity in vivo. One way to explain this paradaox is that Hox protein function with protein cofactors, best represented by Extradenticle (Exd) in Drosophila, Pbx in mammals (collectivaly refered as PBC). Hox-PBC interaction relies on a motif located upstream of the HD, conserved in most Hox proteins, the Hexapeptide (HX). Recent work in our group identified a novel mode of Hox-PBC interaction, non-generic, specific to a subset only of Hox paralog groups, and relying on a motif located C-terminal to the HD. This highlight plasticity in Hox-PBC interaction.My PhD work aimed at investigating the mode of action of Hox protein, by studying the function of three protein motifs, with known or putative role in Exd recruitment by the Drosophila Hox protein AbdominalA (AbdA). The approach taken aimed at analyzing, using a large functional window, how these motifs, taken in isolation or collectively, define AbdA protein activity. Conclusions highlight the absence of pleitropy and a high degree of functional interaction for these protein motifs. The second part of my PhD work has been to initiate the search for novel functionally important protein motifs within Hox proteins. This was approached by selecting phylogenetically conserved motifs, and addressing their function in vitro and in vivo following motif mutations. At least one functional domain was isolated, that contributes predominantly to Dfd protein function.

Orientador: Daniel Júnior de Andrade / Resumo: O ácaro-da-ferrugem-dos-citros Phyllocoptruta oleivora é uma das principais pragas dos citros no Brasil. Os problemas atribuídos a P. oleivora têm se intensificado e suspeita-se que os danos estejam relacionados a uma nova espécie de eriofiídeo descrita recentemente, o ácaro-marrom-dos-citros Tegolophus brunneus. No entanto, não há estudos com essa espécie e informações sobre sua distribuição, características bioecológicas, danos, suscetibilidade a acaricidas e inimigos naturais associados são ausentes. O objetivo principal do projeto foi estudar a distribuição de T. brunneus na principal região citrícola brasileira e sobre as principais espécies e variedades cítricas. Além disso, estudou-se a biologia de T. brunneus em laboratório, determinou-se a suscetibilidade desse ácaro aos principais acaricidas, caracterizando seus danos em plantas cítricas, bem como o potencial de predação das principais espécies de predadores associadas ao ácaro e seu potencial para o uso no controle biológico. As coletas realizadas em vários municípios do estado São Paulo e Triângulo Mineiro demonstraram que T. brunneus infestou apenas lima ácida ‘Tahiti’, enquanto P. oleivora infestou todas as outras espécies e variedades cítricas. O ácaro completa o desenvolvimento em 7 dias, com período de incubação de 3 dias, duração de larva de 2,1 dias e de ninfa 2,8 dias e as fêmeas apresentam fecundidade de 8,5 ovos a 25°C. Os danos da espécie caracterizam-se pelo prateamento dos frutos e formação de manchas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Membros do gênero Potamotrygonocestus (Eucestoda: Tetraphyllidea: Onchobothriidae) são parasitas exclusivos de raias da família Potamotrygonidae, endêmica da região Neotropical. Atualmente, são reconhecidas 7 espécies nominais para o gênero (P. magdalenensis, P. travassosi,P. amazonensis, P. maurae, P. fitzgeraldae, P. chaoi e P. marajoara), além de duas linhagens não descritas terem sido apontadas na última revisão taxonômica disponível. A taxonomia destes parasitas é tradicionalmente baseada em caracteres morfométricos e sofre com a plasticidade que a estrutura corpórea destes animais apresenta pois acaba dependente da fixação do espécime. Somada à prática comum de basear descrições em um número restrito de espécies coletados em regiões geograficamente isoladas, esta plasticidade corpórea resultou na premissa que estes parasitas apresentam baixa variabilidade morfológica. Neste estudo, foram analisados 1753 espécimes de Potamotrygonocestus, coletados amplamente na América do Sul. A análise dos parâmetros morfométricos tradicionalmente utilizados na taxonomia do gênero não mostrou utilidade na diagnose das espécies, porém os parâmetros discretos observados na morfologia do gancho mostraram-se informativos. Os ganchos são estruturas esclerotizadas cuja forma não depende da fixação do espécime, portanto possuem um enorme potencial para a resolução taxonômica destes parasitas. Baseadas na morfologia do gancho, as espécies de Potamotrygonocestus válidas foram redescritas e 4 novas linhagens foram observadas. Dentre todos os táxons observados, apenas P.chaoi e P. marajoara ainda necessitam o refinamento de sua diagnose, pois não foi possível diferenciá-los através da morfologia do gancho. Assim, uma nova chave de identificação foi proposta para Potamotrygonocestus, baseada nos caracteres discretos dos ganchos. Entre os 32 morfotipos de potamotrigonídeos amostrados neste estudo, em apenas 5 não havia infestação por Potamotrygonocestus. Estes hospedeiros restringem-se as regiões dos rios Madeira e Purus e a P. leopoldi no Xingu. Os padrões de especificidade estrita observados para grupos marinhos que se julga serem próximos a Potamotrygonocestus não se refletem no grupo dulcícola, e inclusive mais de uma espécie do gênero foi encontrada em um mesmo indivíduo hospedeiro, fato até então inédito para o gênero. / The members of the Potamotrygonocestus genus (Eucestoda: Tetraphyllidea: Onchobothriidae) are parasites that infect exclusively the stingrays of the family Potamotrygonidae, which are endemic of the Neotropical region. To date, seven species are recognized for this genus (P. magdalenensis, P. travassosi, P. amazonensis, P. maurae, P. fitzgeraldae, P. chaoi and P.marajoara) and two undescribed lineages were cited in the last taxonomic revision published. The taxonomy of these parasites is traditionally based on morphometric characters and therefore relies on soft tissue structures whose observed morphology is highly dependent on the fixation method used. This, in addition to the use of a restricted number of specimens from distant localities on taxonomic studies, led researchers to believe in a low morphological variation for the genus. In this study, 1753 Potamotrygonocestus specimens were examined from almost all of the South American basins. The traditional morphometric parameters for the genus taxonomy were not useful for species diagnosis, but the discrete parameters from the morphology of the hooks were shown to be informative characters. The hooks are sclerotized structures and its shape is not dependent on the fixation of the specimen, therefore having a great potential to distinguish species. Based on the morphology of the hooks, the Potamotrygonocestus nominal species that were recognized were redescribed and four new lineages were found. Among all the taxa examined, only P. chaoi e P. marajoara still need a detailed diagnosis, because it was not possible to distinguish these two species based on the morphology of the hooks. Based on the data at hand, an inference key for species of Potamotrygonocestus is proposed based on the morphology of the hooks. Among the 32 potamotrygonids morphotypes obtained for this study, only five were not infected by Potamotrygonocestus. These hosts were restricted to the Madeira and Purus basins and for P.leopoldi from the Xingu River. The host-specificity observed for the parasite worms of marine elasmobranchs closely related to Potamotrygonocestus were nor found in this freshwater genus Additionally, more than one species of Potamotrygonocestus were found infecting the same host specimen, an occurrence never noted for this parasite taxon.

O treinamento de força promove hipertrofia muscular esquelética e aumento da capacidade de gerar força. É preconizado que a ocorrência dessas adaptações depende da especificidade do estímulo de treinamento. De acordo com esse princípio, é esperado que as respostas adaptativas fossem específicas ao estímulo aplicado. Entretanto, tem sido observado, por exemplo, que os modelos de treinamento de força e treinamento de potência, relacionados especificamente a adaptações centrais, induzem semelhantes ganhos em força e hipertrofia. Diante dessas evidências, surgiram questionamentos sobre a validade desse princípio. Nesse sentido, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito do treinamento de força e potência sobre a expressão do gene da miostatina (MSTN), associada ao controle do tamanho do músculo esquelético, e de genes relacionado a essa via de sinalização: FLST, FL3, GASP-1, ActIIB, SMAD-7 e FOXO-3A. Homens saudáveis, fisicamente ativos, foram randomicamente distribuídos, de forma balanceada, em três grupos: controle, força e potência. Os grupos treinados foram submetidos a oito semanas de intervenção (treinamento de força e treinamento de potência). Foram coletadas amostras de tecido muscular (vasto lateral) via biópsia percutânea nas condições pré e pós-treinamento. Essas amostras foram utilizadas para a análise da expressão de genes envolvidos na sinalização da MSTN por meio da PCR em tempo real. Não foi verificada alteração na expressão gênica de MSTN, ActIIB, GASP-1 e FOXO-3A após o treinamento de força e o treinamento de potência. Porém, foram observadas alterações no conteúdo de RNAm para FLST, FL3 e SMAD-7. Essas alterações foram semelhantes entre os distintos protocolos de treinamento. Os resultados do presente estudo sugerem que ambos os modelos de treinamento de força são capazes de induzir resposta similar sobre a expressão de genes envolvidos na sinalização da MSTN. A ausência de respostas específicas dentro do período investigado aponta para a necessidade de investigar o curso temporal das adaptações aos diferentes modelos de treinamento de força em longo prazo / Resistance training promotes skeletal muscle hypertrophy and increased ability to generate force. It is recommended that the occurrence of these adaptations depend on the specificity of the training stimulus. According to this principle, it is expected that the adaptive responses were specific to stimuli applied. However, it has been observed, for example, that models of strength training and power training, specifically related to central adaptations, induce similar gains in strength and hypertrophy. Given this evidence, questions arose about the validity of this principle. In this sense, the present study aimed to evaluate the effect of strength training and power on the expression of the myostatin gene (MSTN) associated with the control of skeletal muscle size and genes related to this signaling pathway: FLST, FL3, GASP-1, ActIIB, SMAD-7 and FOXO-7-3A. Men healthy, physically active, were randomly divided into three groups: control, strength and power. The trained groups underwent eight weeks of intervention (strength training and power training). Samples pre-and post-training were collected from muscle tissue by percutaneous biopsy of the vastus lateralis. These samples were used for analysis of the expression of genes involved in signaling MSTN by real time PCR. No change was observed in gene expression of MSTN, ActIIB, GASP-1 and FOXO-3A after strength training and power training. However, changes were observed in the content of mRNA for FLST, FL3 and SMAD-7. These changes were similar among the different training protocols. The results of this study suggest that both models of resistance training are able to induce a similar response on the expression of genes involved in signaling MSTN. The absence of specific responses within the investigated period points to the need to investigate the time course of adaptations to different models of resistance training in the long term

O óxido nítrico (NO) é um mensageiro biológico que tem importância vital em muitos processos fisiológicos e apresenta uma multiplicidade de funções de regulação no corpo humano, tais como neurotrasmissão, vasodilatação, participa nas respostas imunes e em vários processos associados com o desenvolvimento dos tumores. Vários estudos fornecem evidências sobre as propriedades tumoricidas do óxido nítrico e doadores de NO que podem ser usados para o tratamento de tumores malignos e são objetos de interesse na atualidade. Baseado nisto o objetivo deste trabalho foi de sintetizar e descrever aspectos estruturais dos compostos [Ru(bpy)2(dcbpy)] (dcbpy = ácido 4,4\'-dicarboxi-2,2\'-bipiridina, bpy = 2,2\'-bipyridina) [Ru(bpy)(dcbpy)2], cis-[RuCl2(dcbpy)2], cis-[Ru(dcbpy)2NO(L)]n+ (L = cloreto), [Ru(TERPY)(dcbpy)Cl] (TERPY = 2,2\': 6\'\', 2\'\' - terpiridina) and [Ru(TERPY)(dcbpy)NO], além de ensaios de citotoxicidade in vitro para alguns dos complexos sintetizados. Ensaios de citotoxicidade com solução aquosa de complexos rutênio-nitrosilo em linhagem de células metastáticas B16-F10 mostrou resultados relativamente baixos. Medidas de viabilidade celular mostrou que estes decrescem cerca de 10 % em relação ao controle. Este resultado foi interpretado como sendo devido a baixa interação entre o complexo e a célula. Bioconjugação de rutênio-nitrosilo com anticorpo policlonal IgG foi obtido por interação convalente e mostrou maior especificidade com um alvo na célula. Cromatografia de exclusão foi utilizada para separar o bioconjugado --IgG, que foi caracterizado por teste Western Blotting. Após a bioconjugação, o --IgG foi submetido a estudos de citotoxicidade com células metastáticas e a viablidade celular avaliada com ensaios MTT. Os resultados exibiram um incrível aumento na citotoxicidade de células B16-F10. Viabilidade celular foi determinada e valores de morte celular de cerca de 90 % obtida para uma das frações de --IgG. Nossos resultados demonstraram que o bioconjugado --IgG pode aumentar a resposta citotóxica e quiçá ser útil em terapia clínica. / Nitric oxide (NO) is a biological messenger that has vital importance in many physiological processes and shows a multitude of regulatory roles in the human body, such as neurotrasmission, vasodilatation, immune responses and also participates in various processes associated with cancer development. Several studies provide evidences of the tumoricidal properties of NO donors that can be used for the treatment of malignant tumors and nowadays are objects of interest. Based on this the aim of this work was synthesize compounds that in a controlled manner can deliver NO in a biological process. The synthesis, structural aspects, and in vitro cytotoxic properties of [Ru(bpy)2(dcbpy)] (dcbpy = 2,2\'-bipyridine-4,4\'-dicarboxylic acid), 2\'-bipyridine; bpy = 2,2\'-bipyridine) [Ru(bpy)(dcbpy)2], cis-[RuCl2(dcbpy)2], cis-[Ru(dcbpy)2NO(L)]n+ (L = chloride), [Ru(TERPY)(dcbpy)Cl] (TERPY = 2,2\': 6\'\', 2\'\' - terpiridine) and [Ru(TERPY)(dcbpy)NO] are described. Citotoxicity assays with aqueous nitrosyl ruthenium complex in metastatic B16-F10 cells displayed very little effect. Cell viability measurement showed decrease around 10 % in comparison to the control. It was associated due to the low interaction between nitrosyl ruthenium specie and the cell. Bioconjugation of nitrosyl ruthenium specie with polyclonal antibody IgG was achieved by covalent interaction and showed more specific interaction between bioconjugated and target cell. Exclusion chromatography was used to isolate --IgG conjugated, which was characterized by Western Blotting test. Following bioconjugation, the --IgG was submitted to cytotoxic studies with metastatic cells and the viability evaluated by MTT assay. The results displayed incredible increase of citotoxicity for B16F10 cells. Cell viability was achieved to decrease until to 90 % in comparison to the control when one fraction of --IgG was used. Taken together, the present findings demonstrate that the --IgG complex may elicit citotoxicity responses that may find useful applications in clinical therapy.

Membros de Acanthobothrium (Cestoda: Tetraphyllidea: Onchobothriidae) são primariamente parasitas elasmobrânquios em todos os oceanos. No entanto, algumas linhagens são encontradas em arraias de água doce da família Potamotrygonidae da região Neotropical. O reconhecimento das entidades taxonômicas que participam de um sistema parasita/hospedeiro é essencial para que estudos comparativos que visam elucidar os padrões e processos responsáveis pela diversificação destes systemas. Atualmente, 175 espécies são reconhecidas para o gênero, das quais apenas seis parasitam exclusivamente potamotrigonídeos (A. terezae, A. quinonesi, A. amazonensis, A. regoi, A. ramiroi e A. peruviense). Historicamente, a maioria das espécies de Acanthobothrium, em particular as espécies parasitas de potamotrigonídeos, foi descrita baseandose em um número restrito de exemplares provindos de localidades muito distantes umas das outras e coletados em poucas espécies de potamotrigonídeos. Esta prática tem conduzido pesquisadores a denominar novos táxons sob a premissa de que estas linhagens exibem pouca variação morfológica. Neste trabalho, foram examinados 649 espécimes de hospedeiros, representando 10 espécies e 14 morfo-espécies de potamotrigonídeos, provenientes de 10 sub-bacias hidrográficas. Somente cinco espécies de Acanthobothrium são reconhecidas neste trabalho para o sistema de água doce, A. terezae (sinônimo A. ramiroi), A. quinonesi (sinônimos A. regoie A. peruviense), A. amazonensis e duas novas espécies A. sp. n.1 e A. sp. n. 2. Verificouse que estas cinco espécies de Acanthobothrium parasitam 27 espécies de potamotrigonídeos em quase todas as sub-bacias hidrográficas da América do Sul, demonstrando um padrão de especificidade distinto de seus congêneres marinhos. As diferenças observadas nos padrões de especificidade entre estes dois ambientes pode decorrer da inexistência de amostras representativas de grupos monofiléticos de hospedeiros marinhos e/ou a despreocupação em obter amostragens adequadas de espécimens seja de hospedeiros ou parasitas. Novas fontes de dados (e.g., molecular) são necessárias para entender melhor os limites do atual status taxonômico das espécies de água doce de Acanthobothrium. Outra recomendação para acessar a variabilidade morfológica de tetrafilídeos, em geral, é o aumento do tamanho amostral considerando diferentes áreas e hospedeiros. A representatividade biogeográfica é fundamental para a compreensão da biodiversidade. Sistematas que trabalham com a taxonomia de tetrafilídeos devem ter cautela no uso de dados morfométricos e merísticos na diagnose de espécies que são descritas com base um material biológico reduzido. / Members of Acanthobothrium (Eucestoda: Tetraphyllidea: Onchobothriidae) are mainly parasites marine elasmobranchs throughout the oceans. However, few lineages are found in freshwater stingrays of the family Potamotrygonidae, which members are restricted to the Neotropic. The recognition of taxonomic units involved in a host/parasite system is essential for comparative studies so that the diversification process resulting from historic associations can be accurately elucidated. Currently, 175 species are recognized for the genus, but only six parasite potamotrygonids (A. terezae, A. quinonesi, A. amazonensis, A. regoi, A. ramiroi e A. peruviense). Historically, most species of Acanthobothrium, including freshwater ones, has been described based on a restricted number of specimens from distant localities and few potamotrygonid species. This practice has led researchers to describe new species based on the premises that those lineages present low morphological variation. In this study, 649 host specimens were examined, representing 10 species and 14 morphotypes of potamotrygonids from 10 river sub basins of South America. Only five Acanthobothrium species were recognized as valid for the freshwater system, Acanthobothrium terezae (synonym A. ramiroi), A. quinonesi (synonyms A. regoi and A. peruviense), A. amazonensis and two new species A. sp. n.1 and A. sp. n. 2. These five species of Acanthobothrium parasite 27 species of potamotrygonids in almost all river basins of South America, presenting a distinct host specificity pattern from their marine counterparts. The differences in the diversity patterns observed for marine and freshwater lineages could be due to inadequate sampling of monophyletic marine groups and/or to the lack of concern with obtaining a representative number of specimens attributed to one species (host or parasite). New sources of data (e.g., molecular) are necessary to better understand the limits of the present taxonomic status of freshwaters species of Acanthobothrium. Another recommendation to access morphological variability of tetraphyllideans is to increase the sample size to different areas and hosts. Meaningful biogeographical representation is fundamental to the comprehension of biodiversity. Systematists working on the taxonomy of tetraphyllideans should also be cautious when using morphometric and meristic characters to distinguish species, which are described based on reduced biological material.

Introdução: A avaliação de fragilidade requer medidas mensuráveis de alguns critérios. Em nosso meio, sabe-se que a utilização destas medidas, em larga escala, não será facilmente operacionalizada por dificuldades logísticas. Diante disso, estuda-se a possibilidade de identificação da síndrome de fragilidade por meio de questões subjetivas. Objetivo: Validar componentes subjetivos para avaliação de fragilidade. Método: Este estudo é parte do Estudo SABE - Saúde, Bem-estar e Envelhecimento, realizado no município de São Paulo, Brasil. Trata-se de um corte transversal, com 433 idosos (idade 75 anos), em 2009. Foi adotado o Fenótipo de fragilidade proposto por Fried e colaboradores como padrão-ouro (avaliando objetivamente 5 critérios: perda de peso não intencional, fadiga relatada, redução da força de preensão, redução da velocidade de caminhada e baixa atividade física). Neste modelo, o idoso com um ou dois componentes foi considerado frágil, e com três ou mais era frágil. A avaliação subjetiva foi realizada por meio de questões dicotômicas referentes a cada componente. Calculou-se confiabilidade, sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivo e negativo, para análise psicométrica da avaliação subjetiva. Resultados: A avaliação subjetiva é confiável e válida. Para os idosos classificados como pré-frágeis a sensibilidade foi de 89,7 por cento e especificidade de 24,3 por cento ; enquanto para os frágeis, a sensibilidade foi de 63,2 por cento e especificidade de 71,6 por cento . Ao analisar o processo de fragilização (pré-frágil+frágil) quase 90 por cento dos idosos frágeis foram detectados na avaliação subjetiva, 85,2 por cento foram preditos positivamente e 32,7 por cento foram preditos negativamente. Conclusão: A avaliação subjetiva de fragilidade é uma boa ferramenta para identificar processo de fragilidade em idosos / Introduction: The evaluation of frailty measures requires some measurable criteria. In our environment, it is known that the use of these measures on a large scale is not easily operationalized, due to logistical difficulties. Thus, we study the possibility of identifying the syndrome of frailty through subjective questions. Objective: To validate the subjective components for evaluation of frailty. Method: This study is part of the SABE Study - Health, Well-being and Ageing, held in São Paulo, Brazil. This is a cross sectional study of 433 elderly (age 75 years) in 2009. We adopted the phenotype of frailty proposed by Fried and colleagues as a gold standard (measuring objectively 5 criteria: unintentional weight loss, fatigue reported, reduced grip strength, reduced walking speed and low physical activity). In this model, elderly with one or two components were considered frail, and those with three or more were considered frail. Subjective evaluation was performed using dichotomous questions for each component. We calculated the reliability, sensitivity, specificity and positive and negative predictive values for psychometric analysis of subjective evaluation. Results: The subjective evaluation is reliable and valid. For the pre-frail elderly the sensitivity was 89.7 per cent and specificity of 24.3 per cent , while for the frail, the sensitivity was 63.2 per cent and specificity of 71.6 per cent . When analyzing frailty process (pre-frail+frail) almost 90 per cent of the frail elderly were detected in the subjective assessment, 85.2 per cent were predicted positively and 32.7 per cent were predicted negatively. Conclusion: The subjective evaluation of frailty is a good tool to identify frailty process in elderly

Poon Kwok Man. / Thesis submitted in: December 1999. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2000. / Includes bibliographical references (leaves 118-123). / Abstracts in English and Chinese. / ABSTRACT --- p.ii / 摘要 --- p.iv / DECLARATION --- p.vi / ACKNOWLEDGEMENTS --- p.vii / TABLE OF CONTENTS --- p.viii / LIST OF FIGURES --- p.xii / LIST OF TABLES --- p.xv / ABBREVIATIONS --- p.xvi / Chapter CHAPTER 1: --- INTRODUCTION / Chapter 1.1. --- Antibody structure and diversity --- p.1 / Chapter 1.2. --- Antibody genes --- p.5 / Chapter 1.3. --- The antibody response to phosphorylcholine --- p.10 / Chapter 1.3.1. --- Group I antibodies --- p.11 / Chapter 1.3.2. --- Group II antibodies --- p.14 / Chapter 1.3.3. --- Fine specificity of group I antibodies --- p.14 / Chapter 1.4. --- Anti-phosphorylcholine antibody structure --- p.15 / Chapter 1.5. --- Recombinant antibody --- p.22 / Chapter 1.5.1. --- Phage biology --- p.24 / Chapter 1.5.2. --- Phage-displayed antibodies --- p.29 / Chapter 1.5.3. --- Helper phage --- p.32 / Chapter 1.6. --- Objectives and scope of study --- p.34 / Chapter CHAPTER 2 --- METHODOLGY / Chapter 2.1. --- Antibody --- p.41 / Chapter 2.1.1. --- Hybridoma culture --- p.41 / Chapter 2.1.2. --- Production of antibody by induction of ascitic fluid --- p.41 / Chapter 2.1.3. --- Antibody purification --- p.41 / Chapter 2.1.3.1. --- Ammonium sulfate precipitation --- p.42 / Chapter 2.1.3.2. --- Affinity purification by Protein A-sepharose --- p.42 / Chapter 2.1.4. --- Production of Fab fragment by papain digestion --- p.43 / Chapter 2.2. --- Antigens --- p.43 / Chapter 2.2.1. --- Preparation of TsAg form infected ICR mouse --- p.44 / Chapter 2.2.2. --- Purification of Trichinella spairalis PC antigen --- p.44 / Chapter 2.2.2.1. --- Preparation of Mab2 affinity column --- p.44 / Chapter 2.2.2.2. --- Purification of TsAg --- p.45 / Chapter 2.2.3. --- Preparation of PC-HSA --- p.45 / Chapter 2.2.3.1. --- Preparation of p-diazonium phenylphosphorylcholine (DPPC) --- p.45 / Chapter 2.2.3.2. --- Conjugation of PC to HSA --- p.45 / Chapter 2.2.4. --- Commercial available antigens --- p.46 / Chapter 2.2.4.1. --- Pneumovax® 23 --- p.46 / Chapter 2.2.4.2. --- Lipopolysaccharide --- p.46 / Chapter 2.2.5. --- Standardization of PC-antigens --- p.46 / Chapter 2.3. --- Cloning of Mab2-scFv into phage display form --- p.47 / Chapter 2.3.1. --- Total RNA extraction --- p.50 / Chapter 2.3.2. --- cDNA synthesis --- p.50 / Chapter 2.3.3. --- Heavy chain variable region gene amplification --- p.51 / Chapter 2.3.4. --- Light chain variable region gene amplification --- p.51 / Chapter 2.3.5. --- Joining of heavy and light chain gene with linker --- p.52 / Chapter 2.3.6. --- Ligation of scFv gene with pCANTAB-5E vector --- p.52 / Chapter 2.3.7. --- Transformation --- p.53 / Chapter 2.3.7.1. --- E.coli strains --- p.53 / Chapter 2.3.7.2. --- E.coli cell preparation for electroporation --- p.54 / Chapter 2.3.7.3. --- Electroporation --- p.54 / Chapter 2.3.7.4. --- Competent E.coli preparation by CaCl2 --- p.55 / Chapter 2.3.7.5. --- Heat shock --- p.55 / Chapter 2.4. --- Expression of phage display scFv --- p.55 / Chapter 2.5. --- Enrichment and screening of Mab2-scFv phage --- p.56 / Chapter 2.5.1. --- Biopanning --- p.56 / Chapter 2.5.2. --- Restricition fragment analysis --- p.58 / Chapter 2.5.3. --- PCR screening --- p.58 / Chapter 2.5.4. --- DNA sequencing --- p.58 / Chapter 2.5.4.1. --- Manual sequencing --- p.58 / Chapter 2.5.4.2. --- Auto sequencing --- p.59 / Chapter 2.6. --- Mutagenesis --- p.59 / Chapter 2.6.1. --- Preparation of Uracil containing ssDNA --- p.60 / Chapter 2.6.2. --- Phosphorylation of mutagenic oligonucleotide --- p.60 / Chapter 2.6.3. --- Hybridization and secondary strand synthesis...…… --- p.60 / Chapter 2.6.4. --- Transfection and screening of mutants --- p.61 / Chapter 2.7. --- Expression of soluble scFv-E-tag --- p.61 / Chapter 2.7.1. --- SDS-PAGE analysis --- p.62 / Chapter 2.7.2. --- Anti-E-tag ELISA --- p.62 / Chapter 2.8. --- ELISA binding assay --- p.63 / Chapter 2.8.1. --- Specificity of Mab2 antibody Fab --- p.63 / Chapter 2.8.1.1. --- Carrier specifcity assay --- p.63 / Chapter 2.8.1.2. --- Free hapten inhibition assay --- p.64 / Chapter 2.8.2. --- Specificity of the scFv --- p.64 / Chapter 2.8.2.1. --- Antigen binding assay --- p.65 / Chapter 2.8.2.2. --- Free hapten inhibition assay --- p.65 / Chapter 2.8.2.3. --- Inhibition on Ts2 and Mab2 antibody assay --- p.65 / Chapter 2.9. --- Affinity assay --- p.66 / Chapter 2.10. --- Mutants analysis --- p.66 / Chapter CHAPTER 3 --- RESULTS / Chapter 3.1. --- Cloning VH and VL gene of Mab2 into scFv --- p.67 / Chapter 3.1.1. --- Amplification of variable region of H and L chain --- p.67 / Chapter 3.1.2. --- Biopanning --- p.70 / Chapter 3.1.3. --- Genetic composition of isolated clones --- p.70 / Chapter 3.2. --- Mutagenesis --- p.84 / Chapter 3.3. --- Expression and characterisation of wild-type scFv --- p.88 / Chapter 3.3.1. --- ScFv soluble protein --- p.88 / Chapter 3.3.2. --- Phage displayed scFv --- p.91 / Chapter 3.3.3. --- Standardization of PC antigens --- p.91 / Chapter 3.3.4. --- Binding acticity of scFv --- p.94 / Chapter 3.3.4.1. --- Influence of the avidity on carrier specificity binding --- p.96 / Chapter 3.4. --- Antigen specificity --- p.99 / Chapter 3.4.1. --- Free hapten inhibiton --- p.99 / Chapter 3.4.2. --- Inhibition on the binding of Ts2 --- p.102 / Chapter 3.4.3. --- Binding affinity --- p.104 / Chapter 3.5. --- Binding activities of mutants --- p.106 / Chapter CHAPTER 4 --- GENERAL DISCUSSION --- p.109 / REFERENCE --- p.118