Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-03-28T20:21:25Z No. of bitstreams: 1 2015_PauloHenriqueSilvaRibeiro.pdf: 10102032 bytes, checksum: 686e512f84476c253b39b708c60a2c9a (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-04-11T18:29:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_PauloHenriqueSilvaRibeiro.pdf: 10102032 bytes, checksum: 686e512f84476c253b39b708c60a2c9a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-11T18:29:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_PauloHenriqueSilvaRibeiro.pdf: 10102032 bytes, checksum: 686e512f84476c253b39b708c60a2c9a (MD5) / O presente trabalho investigou a composição química dos óleos essenciais (OE) das folhas das espécies Eugenia langsdorffii (ELA), Eugenia dysenterica (EDY) e Eugenia lutescens (ELU) coletados nos períodos chuvoso (PC) e seco (PS) dos anos de 2012 e 2014. Os OE foram extraídos por hidrodestilação e os rendimentos percentuais observados para EDY e ELU, foram muito semelhantes nos dois anos/períodos de coleta e os melhores rendimentos foram observados em PC. Ao contrário, foi observada uma grande variação percentual para ELA, que exibiu maiores teores em PS. A composição química foi determinada por cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massa (CG-EM), onde se observou uma grande variabilidade sazonal intraespécie no quantitativo de monoterpenos e sesquiterpenos. De forma geral, os OE apresentaram notáveis teores de β-cariofileno, δ-cadineno, α e β-pineno, limoneno, biciclogermacreno e espatulenol. O sesquiterpeno β-cariofileno foi encontrado com elevado percentual em todos OE, independente da fase de coleta, podendo ser considerado como um marcador químico das espécies. Os OE obtidos no ano de 2012 foram testados contra Tetranychus urticae (ácaro rajado) e, interessantemente, todos apresentaram atividade acaricida, sendo que E. langsdorffii (PS/2012) exibiu o melhor resultado (CL50 = 1,58 μL.L-1 de ar). β-Cariofileno, um dos componentes majoritário e comum a todas as espécies, foi isolado do OE de E. dysenterica por cromatografia em coluna dopada com nitrato de prata e comparado com padrão adquirido comercialmente por IV, CG-EM, RMN 1H e 13C bem como testado sua atividade acaricida, exibindo CL50 = 4,7 x 10-2 μL.L-1 de ar. Adicionalmente, o β-cariofileno comercial foi submetido a diversas modificações químicas para fornecer cinco derivados, os quais foram caracterizados por métodos espectrométricos como sendo óxido de cariofileno; 4,5-dihidróxi-cariofil-8(15)-eno; acetato de 4,8-dihidróxi-cariof-5-ila; aldeído β-nocariofilon e ácido β-nocariofilônico. A atividade acaricida destes derivados somente foi observada na CL95 do β-cariofileno (97,78 ± 1,11 % de letalidade), sendo o melhor resultado de letalidade observada para o aldeído β-nocariofilon (5,71 1,20 %). Além da determinação da composição química, este estudo mostrou os períodos de maior produção e atividade acaricida dos OE das três espécies de Eugenia. / The present work investigated the chemical composition of the leaf essential oils (EO) of the species Eugenia langsdorffii (ELA), Eugenia dysenterica (EDY) and Eugenia lutescens (ELU) collected during the rainy (RS) and dry (DS) seasons of the years 2012 and 2014. The EO were extracted by hydrodistillation and the percentage yields observed for EDY and ELU were very similar in both years/collection periods and the best yields were observed in RS. Unlike, it was observed a large variation for ELA which exhibited higher amount in DS. The chemical composition was determined by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS), where it was observed a large seasonal variability intra species. The global data show that the chemical profile of the EO varied in quantity of monoterpenes and sesquiterpenes. Overall, the EO featured notable amount of β-caryophyllene, δ-cadinene, α and β-pinene, limonene, bicyclogermacrene and spathulenol. The sesquiterpene β-caryophyllene can be considered as a chemical marker for the species, as it was found with high percentage in all EO, independent of the collection phases. The EO obtained in 2012 were tested against Tetranychus urticae (spotted spider mite) and, interestingly, all showed acaricide activity, being E. langsdorffii (DS/2012) that exhibited best result (CL50 = 1,58 μL.L-1 of air). The β-caryophyllene, one of the major component and common to all species, isolated from E. dysenterica by chromatography column doped with silver nitrate, compared to stand purchased commercially by IR-FT, GC-MS, and NMR (1H and 13C) and also tested for acaricide activity, displaying CL50 = 4,7 x 10-2 μL.L-1 of air. Additionally, the commercial β-caryophyllene was subjected to various chemical modifications to afford five derivatives, which were characterized by spectrometric methods as being caryophyllene oxide; 4,5-dihydroxy-caryophyl-8(15)-ene; caryoph-4,8-dihydroxy-5-yl acetate; β-nocaryophyllone aldehyde and β-nocaryophyllonic acid. The acaricide activity against T. urticae of these derivatives was only observed at β-caryophyllene CL95 (97,78 ± 1,11% of lethality), and the best result of lethality was for the β-nocaryophyllone aldehyde (5,71±1,20%). Beyond the chemical composition, this study showed periods of increased oil production and acaricidal activity.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-05T20:21:29Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danillo Ramos de Oliveira - 2016.pdf: 3328781 bytes, checksum: a9a77fd6d62aba93833d8451de1e5f75 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-08T14:14:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danillo Ramos de Oliveira - 2016.pdf: 3328781 bytes, checksum: a9a77fd6d62aba93833d8451de1e5f75 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-08T14:14:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danillo Ramos de Oliveira - 2016.pdf: 3328781 bytes, checksum: a9a77fd6d62aba93833d8451de1e5f75 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Spiranthera odoratissima A. St.-Hil., popularly known as “manacá”, is a vegetal specie found in Cerrado regions. The chemical composition of essential oil of “manacá” (OEM) by gas chromatography and mass spectrometry (GC/MS) identified -caryophyllene (BCP) as the majority constituent. Pre-clinical studies indicated the anxiolytic like effect of OEM is associated with serotonergic system. Some data revealed that depression and anxiety disorders often coexist together instead only one in the patient and some drugs are effective for both disturbs. In this context, we created the hypothesis that OEM and BCP should present antidepressant like effect. This study was conducted for evaluate the antidepressant like activity of OEM and the phytoconstituent β-caryophyllene and verified the possible mechanisms involved in this activity. Male Albino Swiss mice were used in the open field (OFT), forced swim (FST) and tail suspension test (TST). The animals were treated with increasing doses of OEM (125, 250 and 500 mg/kg) and of BCP (25, 50, 70, 100 and 140 mg/kg). The treatment with OEM at doses of 250 and 500 mg/kg, BCP at doses of 50, 70 and 100 mg/kg reduced the immobility time of animals in the TST without alteration in the exploratory activity in the OFT. The dose of 500 mg/kg of OEM and dose of 100 mg/kg of BCP showed the best effect and were chosen to continue the study. Possible alterations in the levels of serotonin (5 – HT), noradrenaline (NE) and in the brain derived neurotrophic factor (BDNF) were verified in the mechanisms of action. The anti-immobility time of OEM was reverted by the pre-treatment with NAN- 190 (0,5 mg/kg i.p., 30 minutes before – 5-HT1A antagonist), PCPA (100 mg/kg i.p., during 4 days – inhibitor of serotonin synthesis), AMPT (100 mg/kg i.p., 4 h before – inhibitor of catecholamines), ioimbine (1 mg/kg i.p., 15 minutes before - 2 adrenergic antagonist) and propranolol (2 mg/kg i.p., 15 minutes before -  adrenergic antagonist), but was not reverted by the pretreatment with prazosin (1 mg/kg i.p., 15 minutes before - α1 adrenergic antagonist), suggesting the involvement of serotonergic and catecholaminergic systems in the antidepressive like activity. About the BCP, the pre-treatment with NAN-190, in the conditions described above, did not block the antidepressive like activity of this compound, suggesting the absence of participation of serotonergic system in this activity. The prazosin did not reverse the effect of BCP. However, the previous administration of AMPT, ioimbine and propranolol in the same conditions described above, prevents the antidepressant like activity of BCP in the FST, suggesting the involvement of catecholamines, specifically of NE, in the antidepressive like effect of the BCP. In relation with the capacity to alter the hipocampal levels of BDNF, BCP showed this activity after 14 days of treatment. In this sense we conclude that OEM and the phytoconstituent (BCP) showed antidepressant like effect with involvement of serotonergic system and of the 5-HT1A receptor in the action of OEM, but not of the BCP. Moreover, a activation of α2 and β-adrenergic receptors, but not of 1, are involved in the activity of OEM and of the BCP found in this study. Additionally, the increase in the hippocampal levels of BDNF, can be the responsible, at least in part, with the antidepressant like activity of BCP. / A espécie vegetal Spiranthera odoratissima A. St.-Hil., popularmente conhecida como manacá, é um arbusto encontrado em região de Cerrado. A análise da composição química do óleo essencial das folhas de manacá (OEM) por Cromatografia Gasosa acoplada à espectrometria de Massas (CG/EM) identificou β- cariofileno (BCP) como fitoconstituinte majoritário. Estudos pré-clínicos indicam que o OEM possui atividade tipo ansiolítica, havendo o envolvimento do sistema serotoninérgico nessa ação. Sabendo que os transtornos depressivos e os de ansiedade muitas vezes coexistem juntos, ao invés de afetar o paciente de forma isolada, e que alguns fármacos são eficazes no tratamento de ambos os distúrbios, resolvemos testar a hipótese de que o OEM e o BCP poderiam apresentar efeito tipo antidepressivo. O presente trabalho investigou a atividade do tipo antidepressiva do OEM e do fitoconstituinte BCP, e verificou o envolvimento do sistema monoaminérgico no efeito destes. Adicionalmente, os níveis hipocampais do fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) foram quantificados após 14 dias de tratamento com BCP 100 mg/kg. Foram utilizados camundongos albinos Swiss machos nos testes do campo aberto (TCA), nado forçado (TNF) e suspensão pela cauda (TSC). Os animais foram tratados, pela via oral, com doses crescentes do OEM (125, 250 e 500 mg/kg) e de BCP (25, 50, 70, 100 e 140 mg/kg). O tratamento tanto com o OEM nas doses de 250 e 500 mg/kg, quanto com BCP nas doses de 50, 70 e 100 mg/kg reduziram o tempo de imobilidade dos animais no TNF, sem alterar a atividade exploratória no TCA, sendo que a dose de 500 mg/kg do OEM e 100 mg/kg de BCP apresentaram melhor efeito e foram escolhidas para dar continuidade ao estudo. Possíveis alterações nos níveis de serotonina (5-HT), norepinefrina (NE) e do fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) foram verificadas no estudo dos mecanismos de ação. O efeito anti-imobilidade do OEM foi revertido pelo pré- tratamento com NAN-190 (0,5 mg/kg i.p., 30 minutos antes – antagonista 5-HT1A), PCPA (100 mg/kg i.p., durante 4 dias – inibidor da síntese de serotonina), AMPT (100 mg/kg i.p., 4 h antes – inibidor da síntese de catecolaminas), ioimbina (1 mg/kg i.p., 15 minutos antes – antagonista α2-adrenérgico) e propranolol (2 mg/kg i.p., 15 minutos antes – antagonista β-adrenérgico), mas não foi revertido pelo pré- tratamento com prazosina (1 mg/kg i.p., 15 minutos antes – antagonista α1- adrenérgico), sugerindo o envolvimento do sistema serotoninérgico e catecolaminérgico na atividade observada. Em relação ao BCP, o pré-tratamento com NAN-190, nas mesmas condições descritas acima, não bloqueou a atividade tipo antidepressiva deste composto, sugerindo a ausência da participação do sistema serotoninérgico nessa ação. A prazosina também não reverteu o efeito de BCP. Entretanto, a administração prévia, de AMPT, ioimbina e propranolol, nas mesmas condições supracitadas, impediu a ação tipo antidepressiva de BCP no TNF, sugerindo o envolvimento de catecolaminas, especificamente de NE, no efeito do fitoconstituinte. Quanto à capacidade de aumentar os níveis hipocampais BDNF, BCP se mostrou ativo após tratamento repetido por 14 dias. Deste modo, concluímos que o OEM e BCP apresentaram efeito do tipo antidepressivo, havendo participação do sistema serotoninérgico e do receptor 5-HT1A na ação do OEM, mas não na de BCP. Além disso, uma ativação de receptores α2 e β-adrenérgicos, mas não de α1, parece estar envolvida nas ações do OEM e de BCP encontradas neste estudo. Adicionalmente, um aumento no nível hipocampal de BDNF, parece ser responsável, ao menos em partes, pela ação do tipo antidepressiva de BCP.