Trematode peptidases are important molecules responsible for biocatalysis in many basal biological processes and are crucial in host-parasite interactions. Therefore, these enzymes are intensively studied in order to characterize their biological functions and to use them as potential diagnostic or therapeutic targets. Lately, investigation of transcriptome and secretome revealed, that adult Fascioloides magna (giant liver fluke) expresses and secretes a variety of peptidases. Thus, this thesis focuses on three newly identified enzymes: cathepsin L (FmCL), cathepsin B (FmCB) and cathepsin D (FmCD). In other trematode species, these cathepsins are being linked mainly with the digestion of host blood. We applied quantitative PCR (qPCR) to investigate relative expression levels of the three enzymes among three developmental stages - egg, miracidium and adult. It was revealed that all cathepsins have the highest expression in adult flukes in comparison to eggs and miracidia. We also localized the place of transcription of FmCL, FmCB and FmCD in adult fluke using RNA in situ hybridization. All of the peptidases were detected in gastrodermis, and in addition, they were localized in the reproductive system. The latter surprising finding is suggesting that these enzymes might have multiple functions in adult F....

A distrofia muscular do Golden Retriever é uma doença degenerativa de caráter hereditário com alterações musculares semelhantes às descritas na distrofia muscular de Duchenne, sendo comprovada a existência de alterações na musculatura lisa do trato gastrointestinal destes animais. Alguns autores sugerem que um dos fatores responsáveis por essas alterações possa estar relacionado com a motililidade intestinal. Este trabalho tem como objetivo estudar os neurônios nitrérgicos e colinérgicos, além da expressão do receptor P2X7, no plexo mioentérico do cólon descendente de cães afetados e não afetados pela distrofia muscular. Foram utilizadas técnicas de imunohistoquímica para marcação das enzimas Óxido Nítrico Sintase (NOS) e Acetilcolina Transferase (ChAT) e da população neuronal total pelo HuC/D e analisada a presença do receptor P2X7. Também foram utilizadas técnicas de microscopia eletrônica de transmissão e histologia básica. Os resultados indicam que neurônios nitrérgicos tendem a ser maiores em cães distróficos e apresentam morfologia Dogiel tipo I; neurônios que expressam o receptor P2X7 colocalizam com neurônios nitrérgicos e colinérgicos. As análises qualitativas demonstram que cães distróficos apresentam maior quantidade de colágeno entre as fibras musculares, entre as camadas musculares circular e longitudinal e, ainda, no interior dos gânglios mioentéricos. Este estudo fornece base para futuras pesquisas e tratamentos da distrofia muscular do Golden Retriever e mais futuramente da Distrofia Muscular de Duchenne, além de poder auxiliar no entendimento das desordens gastrointestinais que são observadas nesta última. / The golden retriever muscular dystrophy is a hereditary degenerative disease characterized by muscle changes similar to those described in Duchenne muscular dystrophy, as well as by alterations in the smooth muscles of the gastrointestinal tract. Some authors suggest that these abnormalities may be associated with intestinal motility. This study evaluated nitrergic and cholinergic neurons in the myenteric plexus of the descending colon of dogs with and without muscular dystrophy, in addition to P2X7 receptor expression. Immunohistochemical techniques were used to label nitric oxide synthase (NOS) and acetylcholine transferase (ChAT), as well as to label total HuC/D-immunoreactive neurons and neurons containing the P2X7 receptor. Transmission electron microscopy and basic histology were used for analysis. Results showed that nitrergic neurons tend to be larger in dystrophic dogs and to be characterized by Dogiel type I morphology, and neurons that express the P2X7 receptor colocalize with nitrergic and cholinergic neurons. Transmission and light microscopy revealed higher collagen density between muscle fibers, between circular and longitudinal muscle layers and within myenteric ganglia of affected dogs. These findings provide support for future research and treatment of the golden retriever muscular dystrophy and hence of the Duchenne muscular dystrophy and contribute to the understanding of the gastrointestinal disorders found in these patients.

INTRODUÇÃO: O papel da linfangiogênese no transplante renal em humanos é desconhecido até o momento. As poucas publicações disponíveis acerca do assunto revelam resultados controversos. O presente estudo visa a avaliar a influência dos vasos linfáticos sobre aspectos clínicos e patológicos no transplante renal. MÉTODOS: Biópsias de indicação clínica de pacientes submetidos a transplante renal com enxertos oriundos de doadores falecidos na Unidade de Transplante Renal do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo de janeiro de 2007 a dezembro de 2009 foram selecionadas e os dados clínicos destes pacientes foram coletados do banco de dados. Estas biópsias foram classificadas de acordo com a Classificação de Banff. Reação imuno-histoquímica foi empregada para identificar vasos linfáticos, linfócitos T, linfócitos B e macrófagos. Análise histomorfométrica foi empregada para quantificar estes quatros elementos e a fibrose intersticial cortical. RESULTADOS: A presença de vasos linfáticos foi significativamente mais intensa em biópsias com rejeição aguda mediada por linfócitos T e com distúrbios infecciosos (nefropatia do poliomavírus e pielonefrite), quando comparadas à expressão de linfáticos com biópsias sem rejeição e com biópsias com fibrose intersticial e atrofia tubular de etiologia indeterminada. Biópsias com expressão de vasos linfáticos apresentaram escores semiquantitativos da Classificação de Banff mais altos. Os linfócitos B túbulo-intersticiais apresentaram maior concentração em amostra com presença de vasos linfáticos. A linfangiogênese não demonstrou influência sobre desfechos clínicos relevantes, como função renal e sobrevida do enxerto. CONCLUSÃO: O presente estudo associa a linfangiogênese com distúrbios inflamatórios túbulo-intersticiais do enxerto (rejeição aguda mediada por linfócitos T e infecções) e com infiltrado de linfócitos B. No entanto, a expressão de linfáticos não foi associada à influência sobre a função e a sobrevida do enxerto / INTRODUCTION: The role of lymphangiogenesis in human kidney allograft is currently unknown. Controversial results have arisen from few publications available. This study intends to evaluate the influence of lymphatics on relevant clinical and pathological aspects of renal transplantation. METHODS: Clinically indicated biopsies from patients who underwent renal transplantation with allografts from deceased donors at the Renal Transplantation Unit of the Clinics Hospital of the University of São Paulo Medical School from January of 2007 to December of 2009 were selected and clinical data of these patients were retrieved from the database. These biopsies were classified according to the Banff Classification. Immunohistochemistry was used to identify lymphatic vessels, T lymphocytes, B lymphocytes, and macrophages. Morphometric analysis was employed to quantify their expression and cortical interstitial fibrosis. RESULTS: Lymphatic vessel formation was significantly higher in biopsies with acute T-cell mediated rejection and infectious disorders (polyomavirus-associated nephropathy and pyelonephritis) compared with no rejection and interstitial fibrosis and tubular atrophy without evidence of any specific etiology. Biopsies with expression of lymphatics presented higher levels of semiquantitative scores of the Banff Classification. B lymphocytes infiltrate was more intense in biopsies with lymphatics compared with those without the vessels. Lymphangiogenesis had no effect on important clinical parameters examined (graft function and graft survival two years post transplant). CONCLUSION: The present results associate lymphangiogenesis with kidney allograft tubulointerstitial inflammation (ATCMR and infectious disorders) and with B lymphocytes infiltrate. However, the presence of lymphatic vessels was not associated with any influence on graft function and survival

INTRODUÇÃO: O papel da linfangiogênese no transplante renal em humanos é desconhecido até o momento. As poucas publicações disponíveis acerca do assunto revelam resultados controversos. O presente estudo visa a avaliar a influência dos vasos linfáticos sobre aspectos clínicos e patológicos no transplante renal. MÉTODOS: Biópsias de indicação clínica de pacientes submetidos a transplante renal com enxertos oriundos de doadores falecidos na Unidade de Transplante Renal do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo de janeiro de 2007 a dezembro de 2009 foram selecionadas e os dados clínicos destes pacientes foram coletados do banco de dados. Estas biópsias foram classificadas de acordo com a Classificação de Banff. Reação imuno-histoquímica foi empregada para identificar vasos linfáticos, linfócitos T, linfócitos B e macrófagos. Análise histomorfométrica foi empregada para quantificar estes quatros elementos e a fibrose intersticial cortical. RESULTADOS: A presença de vasos linfáticos foi significativamente mais intensa em biópsias com rejeição aguda mediada por linfócitos T e com distúrbios infecciosos (nefropatia do poliomavírus e pielonefrite), quando comparadas à expressão de linfáticos com biópsias sem rejeição e com biópsias com fibrose intersticial e atrofia tubular de etiologia indeterminada. Biópsias com expressão de vasos linfáticos apresentaram escores semiquantitativos da Classificação de Banff mais altos. Os linfócitos B túbulo-intersticiais apresentaram maior concentração em amostra com presença de vasos linfáticos. A linfangiogênese não demonstrou influência sobre desfechos clínicos relevantes, como função renal e sobrevida do enxerto. CONCLUSÃO: O presente estudo associa a linfangiogênese com distúrbios inflamatórios túbulo-intersticiais do enxerto (rejeição aguda mediada por linfócitos T e infecções) e com infiltrado de linfócitos B. No entanto, a expressão de linfáticos não foi associada à influência sobre a função e a sobrevida do enxerto / INTRODUCTION: The role of lymphangiogenesis in human kidney allograft is currently unknown. Controversial results have arisen from few publications available. This study intends to evaluate the influence of lymphatics on relevant clinical and pathological aspects of renal transplantation. METHODS: Clinically indicated biopsies from patients who underwent renal transplantation with allografts from deceased donors at the Renal Transplantation Unit of the Clinics Hospital of the University of São Paulo Medical School from January of 2007 to December of 2009 were selected and clinical data of these patients were retrieved from the database. These biopsies were classified according to the Banff Classification. Immunohistochemistry was used to identify lymphatic vessels, T lymphocytes, B lymphocytes, and macrophages. Morphometric analysis was employed to quantify their expression and cortical interstitial fibrosis. RESULTS: Lymphatic vessel formation was significantly higher in biopsies with acute T-cell mediated rejection and infectious disorders (polyomavirus-associated nephropathy and pyelonephritis) compared with no rejection and interstitial fibrosis and tubular atrophy without evidence of any specific etiology. Biopsies with expression of lymphatics presented higher levels of semiquantitative scores of the Banff Classification. B lymphocytes infiltrate was more intense in biopsies with lymphatics compared with those without the vessels. Lymphangiogenesis had no effect on important clinical parameters examined (graft function and graft survival two years post transplant). CONCLUSION: The present results associate lymphangiogenesis with kidney allograft tubulointerstitial inflammation (ATCMR and infectious disorders) and with B lymphocytes infiltrate. However, the presence of lymphatic vessels was not associated with any influence on graft function and survival

A distrofia muscular do Golden Retriever é uma doença degenerativa de caráter hereditário com alterações musculares semelhantes às descritas na distrofia muscular de Duchenne, sendo comprovada a existência de alterações na musculatura lisa do trato gastrointestinal destes animais. Alguns autores sugerem que um dos fatores responsáveis por essas alterações possa estar relacionado com a motililidade intestinal. Este trabalho tem como objetivo estudar os neurônios nitrérgicos e colinérgicos, além da expressão do receptor P2X7, no plexo mioentérico do cólon descendente de cães afetados e não afetados pela distrofia muscular. Foram utilizadas técnicas de imunohistoquímica para marcação das enzimas Óxido Nítrico Sintase (NOS) e Acetilcolina Transferase (ChAT) e da população neuronal total pelo HuC/D e analisada a presença do receptor P2X7. Também foram utilizadas técnicas de microscopia eletrônica de transmissão e histologia básica. Os resultados indicam que neurônios nitrérgicos tendem a ser maiores em cães distróficos e apresentam morfologia Dogiel tipo I; neurônios que expressam o receptor P2X7 colocalizam com neurônios nitrérgicos e colinérgicos. As análises qualitativas demonstram que cães distróficos apresentam maior quantidade de colágeno entre as fibras musculares, entre as camadas musculares circular e longitudinal e, ainda, no interior dos gânglios mioentéricos. Este estudo fornece base para futuras pesquisas e tratamentos da distrofia muscular do Golden Retriever e mais futuramente da Distrofia Muscular de Duchenne, além de poder auxiliar no entendimento das desordens gastrointestinais que são observadas nesta última. / The golden retriever muscular dystrophy is a hereditary degenerative disease characterized by muscle changes similar to those described in Duchenne muscular dystrophy, as well as by alterations in the smooth muscles of the gastrointestinal tract. Some authors suggest that these abnormalities may be associated with intestinal motility. This study evaluated nitrergic and cholinergic neurons in the myenteric plexus of the descending colon of dogs with and without muscular dystrophy, in addition to P2X7 receptor expression. Immunohistochemical techniques were used to label nitric oxide synthase (NOS) and acetylcholine transferase (ChAT), as well as to label total HuC/D-immunoreactive neurons and neurons containing the P2X7 receptor. Transmission electron microscopy and basic histology were used for analysis. Results showed that nitrergic neurons tend to be larger in dystrophic dogs and to be characterized by Dogiel type I morphology, and neurons that express the P2X7 receptor colocalize with nitrergic and cholinergic neurons. Transmission and light microscopy revealed higher collagen density between muscle fibers, between circular and longitudinal muscle layers and within myenteric ganglia of affected dogs. These findings provide support for future research and treatment of the golden retriever muscular dystrophy and hence of the Duchenne muscular dystrophy and contribute to the understanding of the gastrointestinal disorders found in these patients.

O músculo cricofaríngeo desempenha um importante papel na deglutição. Acredita-se que seu comportamento elástico seja dependente não apenas do componente muscular, mas também do tecido conectivo intramuscular. O objetivo desse estudo foi analisar a presença e a distribuição do colágeno total, colágenos tipo I e III, fibras elásticas, fibronectina e versican no endomísio do músculo cricofaríngeo em cadáveres de diferentes idades. Vinte e sete músculos foram obtidos mediante autópsia de indivíduos de ambos os sexos com idades entre 28 e 92 anos. Foram realizadas colorações histoquímicas, Método Picrossírius e Método Resorcina-fuccina com oxidação prévia pela oxona, e imunoistoquímicas, para colágeno tipo I, tipo III, fibronectina e versican. A medida dos elementos estudados foi feita por meio de um sistema de análise de imagens que incluía um microscópio, conectado a um computador por meio de uma câmera de vídeo. Foi utilizado o software Image pro Plus, versão 4.1. Para cada caso, quinze imagens não sobrepostas de cada coloração no aumento de 400x foram analisadas. A área de marcação positiva dentro do endomísio do músculo cricofaríngeo foi determinada por um padrão de cor específico para cada coloração. A área de cada elemento da matriz extracelular foi expressa como porcentagem da área total do estudada. Os dados foram expressos em medianas e intervalos interquartílicos. A correlação entre idade e os diferentes elementos da matriz extracelular foi realizada por meio da correlação de Spearman. O teste de Mann-Whitney para distribuição não paramétrica foi utilizado para comparar as áreas porcentuais e os indivíduos de diferente sexo. Todos os testes foram realizados pelo software SPPS versão 13.0 e foi admitido um calor de significância com p < 0,05. O colágeno foi o elemento mais abundante dentre os estudados. Encontrou-se fibras elásticas longitudinais à fibra muscular, finas fibras transversais entre as fibras musculares e espessamento as fibras elásticas nos pólos da fibra muscular. Foi encontrada uma grande variação no conteúdo de fibronectina e versican entre os casos. Não foi evidenciada diferença estatisticamente significativa entre os elementos estudados, o sexo e a idade. Os resultados sugerem que a presença e distribuição desses elementos são importantes para a função do músculo cricofaríngeo e para a manutenção da homeostase. A porcentagem de colágeno encontrada é condizente com a característica esfinctérica do músculo e o arranjo de fibras elásticas contribui para o comportamento elástico e a capacidade de rapidamente reassumir a posição tônica após a abertura durante as deglutições. As variações da quantidade de fibronectina e versican, podem ser resultante da susceptibilidade a fatores agressores. A ausência de alterações com a idade pode significar que o músculo não esteja sujeito às mesmas alterações decorrentes da idade que outros músculos esqueléticos / The cricopharyngeus muscle is thought to play an important role in swallowing and related activities. Its elastic behavior is likely to depend not only on its muscular components, but also on the intramuscular connective tissue. Our objective is to analyze the presence and distribution of total collagen, type I and III collagen, elastic fibers, fibronectin and versican in cricopharyngeus muscle endomysium in adults of a wide age range. Twenty-seven cricopharyngeus muscles obtained from male and female cadavers (age range, 28-92 years-old) were analyzed with the Picrosirius method, oxidized Weigert resorcin-fuchisin, immunohistochemistry. Quantification of stained areas in the cricopharyngeus endomysium with different techniques was performed by an image analysis system connected to a light microscope. The correlation between age and the density of different extracellular matrix proteins was tested using Spearman test. T-tests for independent samples were used to analyze the influence of gender and smoking habit on the fractional areas of extracellular matrix. Collagens had the highest density among the analyzed components. Elastic fibers surrounded each muscle cell, longitudinal to their long axis, associated to traversing fibers, forming a fiber network embedding muscle cells. There was a wide variation on fibronectin and versican content among cases. There were no statistical significance for analysis made between those components of extracellular matrix and age andgender. Our findings suggest that presence and distribution of these extracellular matrix components are important to cricopharyngeus muscle homeostasis. The elastic fibers arrangement can contribute for the cricopharyngeus muscle elastic behavior and ability to rapidly reassume its tonic position after opening during swallows. Variations in the expression of fibronectin and versican can beresultant of its injury susceptibility. The absence of changes on extracellular components during aging could mean that cricopharyngeus muscle is not susceptible to similar age changes as other skeletal muscles

INTRODUÇÃO: Meduloblastoma é o tumor cerebral embrionário maligno mais comum da infância. O esquema de tratamento atual inclui ressecção cirúrgica, radioterapia e quimioterapia. Embora a taxa de sobrevida global tenha aumentado nos últimos anos, em decorrência do tratamento os sobreviventes frequentemente sofrem com sequelas de ordem neurológica, endocrinológica e social. O esquema de classificação de risco atual não considera a heterogeneidade existente entre os pacientes e entre os tumores. No entanto, estudos recentes reconheceram quatro subgrupos moleculares distintos de meduloblastomas (WNT, SHH, Grupo 3 e Grupo 4), que confirmam essa heterogeneidade e formam, em conjunto, o melhor fator definidor de prognóstico para essa neoplasia. Esses subgrupos poderiam ser identificados através de marcadores imuno-histoquímicos representativos para cada um deles. O presente estudo teve como objetivo definir a frequência dos subgrupos de meduloblastomas na população brasileira através da positividade imuno-histoquímica para esses marcadores e analisar a frequência de positividade de outros marcadores também descritos como tendo importância prognóstica. MÉTODOS: 61 casos de meduloblastoma foram submetidos a estudo imuno-histoquímico para 5 marcadores descritos como tendo importância prognóstica (p53, ciclinaD1, p16, bcl2 e HER2) e para 5 marcadores descritos como representativos dos subgrupos moleculares de meduloblastoma (DKK1 e ?-catenina (subgrupo WNT), SFRP1 (subgrupo SHH), NPR3 (Grupo 3) e KCNA1 (Grupo 4). Os resultados foram correlacionados com os dados demográficos, histológicos e clínicos. RESULTADOS: Nenhum dos 10 marcadores imuno-histoquímicos revelou-se fator prognóstico em meduloblastoma. Os 5 marcadores representativos dos subgrupos moleculares apresentaram positividade para mais de 1 marcador ou negatividade para todos os marcadores na maioria dos casos. Apesar disso, foi possível classificar 22 casos nos quatro subgrupos de meduloblastomas por meio da positividade exclusiva para esses marcadores. Os resultados das análises entre os subgrupos e as respectivas frequências quanto às variáveis demográficas, histológicas, clínicas e prognósticas foram semelhantes aos descritos na literatura. CONCLUSÕES: Os marcadores imuno-histoquímicos analisados não apresentaram valor prognóstico nesta casuística, e os marcadores descritos como representativos dos quatro subgrupos moleculares mostraram-se pouco sensíveis e específicos para classificar os meduloblastomas / INTRODUCTION: Medulloblastoma, a malignant embryonal brain tumor, is the most frequently occurring brain tumor in children. Treatment strategy involves surgery, radiotherapy and chemotherapy. Overall survival rate has increased in recent years, but survivors often present neurological sequelae, as well as endocrine and social disorders, as a result of the treatment. Medulloblastoma is no longer consider a single disease: standard risk stratification disregards heterogeneity related to both patients and tumors, and recent work has generated a molecular stratification of the medulloblastomas into 4 distinct subgroups (WNT, SHH, Group 3 and Group 4), currently considered the best prognostic factor. Representative immunohistochemical markers could help identify each one of those subgroups. Our study aimed to establish the frequency of subgroups of medulloblastomas, in brazilian population, by immunohistochemical positivity for its specific markers, and also analyze the frequency of positivity for other markers that are equally implicated in prognosis. METHODS: We evaluated immunohistochemistry expression of 5 markers - DKK1 and ?-catenin (subgroup WNT), SFRP1 (subgroup SHH), NPR3 (Group 3) and KCNA1 (Group 4) - to determine molecular subgroup affiliation of 61 cases of medulloblastomas, along with 5 other markers widely used in daily practice that may have prognostic value in medulloblastomas (p53, cyclinD1, p16, bcl2 and HER2). Results were correlated to demographic, histological and clinical data. RESULTS: None of the 10 immunohistochemical markers investigated proved to be significant prognostic factor in our series. Five representative immunohistochemical markers of the molecular subgroups exhibited positivity for more than one marker or negativity for all markers in most cases. Nevertheless, we manage to determine molecular affiliation in one of the 4 subgroups in 22 cases, due to their exclusive positivity related to the representative markers. Regarding frequencies of occurrence, demographics, histological characteristics, clinical aspects and prognosis, our results related to the 22 cases were similar to those reported in the literature. CONCLUSIONS: Immunohistochemical markers considered representative for each of the 4 molecular subgroups were poorly sensitive and specific, and others markers evaluated did not reveal prognostic value in our series

INTRODUÇÃO: Meduloblastoma é o tumor cerebral embrionário maligno mais comum da infância. O esquema de tratamento atual inclui ressecção cirúrgica, radioterapia e quimioterapia. Embora a taxa de sobrevida global tenha aumentado nos últimos anos, em decorrência do tratamento os sobreviventes frequentemente sofrem com sequelas de ordem neurológica, endocrinológica e social. O esquema de classificação de risco atual não considera a heterogeneidade existente entre os pacientes e entre os tumores. No entanto, estudos recentes reconheceram quatro subgrupos moleculares distintos de meduloblastomas (WNT, SHH, Grupo 3 e Grupo 4), que confirmam essa heterogeneidade e formam, em conjunto, o melhor fator definidor de prognóstico para essa neoplasia. Esses subgrupos poderiam ser identificados através de marcadores imuno-histoquímicos representativos para cada um deles. O presente estudo teve como objetivo definir a frequência dos subgrupos de meduloblastomas na população brasileira através da positividade imuno-histoquímica para esses marcadores e analisar a frequência de positividade de outros marcadores também descritos como tendo importância prognóstica. MÉTODOS: 61 casos de meduloblastoma foram submetidos a estudo imuno-histoquímico para 5 marcadores descritos como tendo importância prognóstica (p53, ciclinaD1, p16, bcl2 e HER2) e para 5 marcadores descritos como representativos dos subgrupos moleculares de meduloblastoma (DKK1 e ?-catenina (subgrupo WNT), SFRP1 (subgrupo SHH), NPR3 (Grupo 3) e KCNA1 (Grupo 4). Os resultados foram correlacionados com os dados demográficos, histológicos e clínicos. RESULTADOS: Nenhum dos 10 marcadores imuno-histoquímicos revelou-se fator prognóstico em meduloblastoma. Os 5 marcadores representativos dos subgrupos moleculares apresentaram positividade para mais de 1 marcador ou negatividade para todos os marcadores na maioria dos casos. Apesar disso, foi possível classificar 22 casos nos quatro subgrupos de meduloblastomas por meio da positividade exclusiva para esses marcadores. Os resultados das análises entre os subgrupos e as respectivas frequências quanto às variáveis demográficas, histológicas, clínicas e prognósticas foram semelhantes aos descritos na literatura. CONCLUSÕES: Os marcadores imuno-histoquímicos analisados não apresentaram valor prognóstico nesta casuística, e os marcadores descritos como representativos dos quatro subgrupos moleculares mostraram-se pouco sensíveis e específicos para classificar os meduloblastomas / INTRODUCTION: Medulloblastoma, a malignant embryonal brain tumor, is the most frequently occurring brain tumor in children. Treatment strategy involves surgery, radiotherapy and chemotherapy. Overall survival rate has increased in recent years, but survivors often present neurological sequelae, as well as endocrine and social disorders, as a result of the treatment. Medulloblastoma is no longer consider a single disease: standard risk stratification disregards heterogeneity related to both patients and tumors, and recent work has generated a molecular stratification of the medulloblastomas into 4 distinct subgroups (WNT, SHH, Group 3 and Group 4), currently considered the best prognostic factor. Representative immunohistochemical markers could help identify each one of those subgroups. Our study aimed to establish the frequency of subgroups of medulloblastomas, in brazilian population, by immunohistochemical positivity for its specific markers, and also analyze the frequency of positivity for other markers that are equally implicated in prognosis. METHODS: We evaluated immunohistochemistry expression of 5 markers - DKK1 and ?-catenin (subgroup WNT), SFRP1 (subgroup SHH), NPR3 (Group 3) and KCNA1 (Group 4) - to determine molecular subgroup affiliation of 61 cases of medulloblastomas, along with 5 other markers widely used in daily practice that may have prognostic value in medulloblastomas (p53, cyclinD1, p16, bcl2 and HER2). Results were correlated to demographic, histological and clinical data. RESULTS: None of the 10 immunohistochemical markers investigated proved to be significant prognostic factor in our series. Five representative immunohistochemical markers of the molecular subgroups exhibited positivity for more than one marker or negativity for all markers in most cases. Nevertheless, we manage to determine molecular affiliation in one of the 4 subgroups in 22 cases, due to their exclusive positivity related to the representative markers. Regarding frequencies of occurrence, demographics, histological characteristics, clinical aspects and prognosis, our results related to the 22 cases were similar to those reported in the literature. CONCLUSIONS: Immunohistochemical markers considered representative for each of the 4 molecular subgroups were poorly sensitive and specific, and others markers evaluated did not reveal prognostic value in our series

O músculo cricofaríngeo desempenha um importante papel na deglutição. Acredita-se que seu comportamento elástico seja dependente não apenas do componente muscular, mas também do tecido conectivo intramuscular. O objetivo desse estudo foi analisar a presença e a distribuição do colágeno total, colágenos tipo I e III, fibras elásticas, fibronectina e versican no endomísio do músculo cricofaríngeo em cadáveres de diferentes idades. Vinte e sete músculos foram obtidos mediante autópsia de indivíduos de ambos os sexos com idades entre 28 e 92 anos. Foram realizadas colorações histoquímicas, Método Picrossírius e Método Resorcina-fuccina com oxidação prévia pela oxona, e imunoistoquímicas, para colágeno tipo I, tipo III, fibronectina e versican. A medida dos elementos estudados foi feita por meio de um sistema de análise de imagens que incluía um microscópio, conectado a um computador por meio de uma câmera de vídeo. Foi utilizado o software Image pro Plus, versão 4.1. Para cada caso, quinze imagens não sobrepostas de cada coloração no aumento de 400x foram analisadas. A área de marcação positiva dentro do endomísio do músculo cricofaríngeo foi determinada por um padrão de cor específico para cada coloração. A área de cada elemento da matriz extracelular foi expressa como porcentagem da área total do estudada. Os dados foram expressos em medianas e intervalos interquartílicos. A correlação entre idade e os diferentes elementos da matriz extracelular foi realizada por meio da correlação de Spearman. O teste de Mann-Whitney para distribuição não paramétrica foi utilizado para comparar as áreas porcentuais e os indivíduos de diferente sexo. Todos os testes foram realizados pelo software SPPS versão 13.0 e foi admitido um calor de significância com p < 0,05. O colágeno foi o elemento mais abundante dentre os estudados. Encontrou-se fibras elásticas longitudinais à fibra muscular, finas fibras transversais entre as fibras musculares e espessamento as fibras elásticas nos pólos da fibra muscular. Foi encontrada uma grande variação no conteúdo de fibronectina e versican entre os casos. Não foi evidenciada diferença estatisticamente significativa entre os elementos estudados, o sexo e a idade. Os resultados sugerem que a presença e distribuição desses elementos são importantes para a função do músculo cricofaríngeo e para a manutenção da homeostase. A porcentagem de colágeno encontrada é condizente com a característica esfinctérica do músculo e o arranjo de fibras elásticas contribui para o comportamento elástico e a capacidade de rapidamente reassumir a posição tônica após a abertura durante as deglutições. As variações da quantidade de fibronectina e versican, podem ser resultante da susceptibilidade a fatores agressores. A ausência de alterações com a idade pode significar que o músculo não esteja sujeito às mesmas alterações decorrentes da idade que outros músculos esqueléticos / The cricopharyngeus muscle is thought to play an important role in swallowing and related activities. Its elastic behavior is likely to depend not only on its muscular components, but also on the intramuscular connective tissue. Our objective is to analyze the presence and distribution of total collagen, type I and III collagen, elastic fibers, fibronectin and versican in cricopharyngeus muscle endomysium in adults of a wide age range. Twenty-seven cricopharyngeus muscles obtained from male and female cadavers (age range, 28-92 years-old) were analyzed with the Picrosirius method, oxidized Weigert resorcin-fuchisin, immunohistochemistry. Quantification of stained areas in the cricopharyngeus endomysium with different techniques was performed by an image analysis system connected to a light microscope. The correlation between age and the density of different extracellular matrix proteins was tested using Spearman test. T-tests for independent samples were used to analyze the influence of gender and smoking habit on the fractional areas of extracellular matrix. Collagens had the highest density among the analyzed components. Elastic fibers surrounded each muscle cell, longitudinal to their long axis, associated to traversing fibers, forming a fiber network embedding muscle cells. There was a wide variation on fibronectin and versican content among cases. There were no statistical significance for analysis made between those components of extracellular matrix and age andgender. Our findings suggest that presence and distribution of these extracellular matrix components are important to cricopharyngeus muscle homeostasis. The elastic fibers arrangement can contribute for the cricopharyngeus muscle elastic behavior and ability to rapidly reassume its tonic position after opening during swallows. Variations in the expression of fibronectin and versican can beresultant of its injury susceptibility. The absence of changes on extracellular components during aging could mean that cricopharyngeus muscle is not susceptible to similar age changes as other skeletal muscles

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Light and ultraestructural changes of central and peripheral nervous system lesions in mice KO for connexin-32 and submitted to the ethidium bromide gliotoxic demyelinating model are described. Their KO condition was tested with PCR and a negative connexin-32 labelling was performed by immunofluorescence. The experimental animals were C57BL/6 normal mice and C57BL/6 KO for connexin-32. For all groups the animals were maintained in cages of 5 individuals within a temperature controlled room and had ration and filtered water ad libitum. A single local injection of either 0,1% ethidium bromide in normal saline (5 μl in the brainstem and 1 μl in the sciatic nerve) or normal saline was performed as described for Wistar rats. The injected mice were observed daily until euthanasia was performed at 24, 48 hours and 3, 7, 15, 21 and 30 days after injection. The mice were perfused through the heart with either neutral 10% formalin or 2,5% glutaraldehyde. Histochemical, immunohistochemical, immunofluorescence and transmission electron microscopic methods were used to analyze the development of the lesions after differentiated processing. Hematoxylin- eosine, luxol fast blue and toluidine blue methods and immunolabelling with anti-GFAP, anti-CNPase, anti-S100 protein and anti-OSP, anti Cx32 and anti Cx43 antibodies were used. Within the CNS the lesions showed an acute degenerative phase with disappearance of glial cells, and myelin sheaths were withdrawn by a scant number of macrophages. In KO mice some granulocytes were detected within the lesions in tight contact with decaying myelin sheaths. Remyelination was carried out by oligodendrocytes since no Schwann cells were seen during the regenerating process of KO mice. Occasional remyelinating Scwann cells were seen in normal mice. For the sciatic nerves, Schwann cells initially showed signs of intoxication and rejected their sheaths; after seven days, some thin newly formed myelin sheaths with uneven compaction and redundant loops (tomacula) were conspicuous. Mast cells degranulated or not were seen in all BE- induced lesions and after saline injection. It is concluded that the repair of the CNS demyelinated lesions differs from the observed in normal and immunosupressed rats because Schwann cells remyelination was absent; the absence of connexin-32 may have caused that absence. The regeneration of lost myelin sheaths within the PNS followed the pattern already reported for this model in other species. It is suggested that the absence of connexin-32 determined the different repair of the myelin sheaths within the CNS whereas for the PNS, the normal pattern of tissue response might be due to the early age of the injected mice. / São descritas as alterações de microscopia de luz e ultra-estruturais induzidas pelo brometo de etídio no sistema nervoso central e periférico de camundongos KO para conexina 32. O genótipo KO foi testado por PCR e confirmado por imunofluorescência negativa para conexina 32. Os animais dos experimentos foram camundongos C57BL-6 normais (controles) e KO para conexina 32. Todos os camundongos foram mantidos em gaiolas de 5 indivíduos em sala climatizada e receberam ração e água à vontade. Uma única injeção de BE 0,1% em salina 0,9% ou de salina 0,9% (5 μl na cisterna basal e 1μl no nervo ciático) foi realizada como descrita em ratos Wistar. Os camundongos eram observados diariamente até ser realizada a eutanásia às 24 e 48 h, 3, 7, 15, 21 e 30 dias após a injeção. Os camundongos foram perfundidos através do coração; um grupo com glutaraldeído 2,5% visando o processamento para microscopia eletrônica; um outro grupo com solução salina com EDTA e posterior fixação em metacarn para inclusão em parafina. As amostras incluídas em parafina foram analisadas através dos métodos de hematoxilina e eosina, luxol fast blue e azul de toluidina. Foram realizadas imunoistoquímica e imunofluorescência visando a marcação de GFAP, CNPase, OSP, S100, e Cx43 e Cx32, respectivamente. As lesões do SNC eram discretas e tiveram uma fase ativa com desaparecimento das células gliais; os debris celulares e de mielina foram retirados por um reduzido número de fagócitos. Nos camundongos KO foram vistos granulócitos em estreito contato com bainhas de mielina em degradação. A remielinização dos axônios desmielinizados foi realizada exclusivamente por oligodendrócitos nos camundongos KO; nos camundongos normais, ocasionais células de Schwann podiam ser encontradas remielinizando axônios do SNC. No nervo ciático, as células de Schwann intoxicadas rejeitaram seus internodos de mielina; após sete dias, finas bainhas reparadas eram encontradas, com compactação irregular da mielina e alças redundantes (tomacula). Mastócitos, desgranulados ou não, eram vistos nas lesões do BE e após a injeção de solução salina. Conclui-se que o reparo das lesões do SNC difere do observado em ratos normais e imunossuprimidos devido à ausência de remielinização por células de Schwann; a falta de expressão da Cx 32 e o tamanho reduzido das lesões podem ter contribuído para essa ausência. A regeneração das bainhas perdidas no SNP obedeceu ao padrão descrito para esse modelo em outras espécies. Sugere-se que a ausência da Cx 32 não afetou o reparo do SNP devido à idade precoce dos animais.