Made available in DSpace on 2019-03-29T23:20:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-18 / Este trabalho, que se situa na área de estudos da Economia Solidária, busca responder a seguinte questão: como as práticas de cooperação, sustentabilidade e desenvolvimento humano existentes na rede Justa Trama influenciam a atuação dos trabalhadores rurais nela inseridos? Para o desenvolvimento da pesquisa procurou-se analisar essas três dimensões encontradas no conceito da Economia Solidária - cooperação, sustentabilidade e desenvolvimento humano - e assim investigar a influência de cada uma na atividade que caracteriza a primeira etapa de produção da rede Justa Trama - Rede Solidária do Algodão Agroecológico que atua desde a produção do algodão, até a confecção e comercialização das roupas e acessórios. É um estudo qualitativo, caracterizado como estudo de caso, a coleta de dados foi realizada através de entrevistas semi-estruturadas aplicada aos informanteschave,ou seja, integrantes do processo de produção do algodão na rede, tais como: membros da Associação de Desenvolvimento Educacional e Cultural (ADEC) e produtores rurais. A análise de dados foi realizada através de uma análise de conteúdo, que confirmou a existência das três dimensões (categorias), e sobre a influência de cada uma no trabalho desenvolvido, a sustentabilidade mostrou-se a categoria mais representativa no estudo e desenvolvimento humano a que obteve menos representatividade.

Toxinas Cry provenientes de Bacillus thuringiensis, também denominadas de δ- endotoxinas, possuem ampla atividade inseticida e são específicas para insetos de diferentes ordens, não sendo nocivas a mamíferos, aves, anfíbios ou répteis. Devido a esta característica, seus genes vêm sendo utilizados no desenvolvimento de plantas transgênicas, visando o controle de insetos-praga de culturas de importância econômica. Dentre estas, destaca-se o algodoeiro que tem como principais pragas o bicudo-do-algodoeiro (Anthonomus grandis) e a lagarta-do-cartucho (Spodoptera frugiperda), ambas causadoras de grandes prejuízos econômicos. Assim, este trabalho objetivou: caracterizar uma estirpe de Bt (S811) tóxica contra S. frugiperda e A. grandis, identificar e clonar os genes codificadores de toxinas Cry potenciais para o controle dessas pragas, expressar os genes em sistema heterólogo Escherichia coli e testar a toxicidade das toxinas contra as pragas em questão. Os resultados obtidos nas análises da estirpe por microscopia eletrônica revelaram a presença de cristais esféricos e bipiramidais, enquanto que a análise de SDS-PAGE detectou proteínas de massa molecular com cerca de 140 kDa e 80 kDa. Posteriormente, uma caracterização gênica, utilizando oligonucleotídeos específicos para genes cry, identificou três genes, cry1Ab, cry1Ia e cry8, sendo estes dois últimos de maior interesse. O gene cry8, que foi isolado pela técnica TAIL-PCR, codifica uma proteína com 58% de identidade de aminoácidos com outras toxinas Cry8, enquanto que o gene cry1Ia12 (isolado com oligonucleotídeos específicos) codifica uma proteína que possui 99% de identidade com as outras proteínas do tipo Cry1Ia descritas na literatura. As porções tóxicas dos genes foram clonadas e expressadas em E. coli produzindo as proteínas recombinantes Cry8 e Cry1Ia12 de aproximadamente 70 kDa (cada uma). As proteínas recombinantes causaram mortalidade de 50% para larvas de A. grandis com 230 μg/ml e 160 μg/ml de Cry1Ia12 e Cry8, respectivamente, enquanto que para larvas de S. frugiperda, apenas Cry1Ia12 foi tóxica causando mortalidade de 50% com 5 μg/ml. Todos estes estudos contribuirão para o desenvolvimento de plantas transgênicas de algodão, bem como para a geração de novas moléculas com maior toxicidade e especificidade utilizando a evolução molecular in vitro (DNA shuffling) destes genes. / Cry toxins or δ-endotoxins, produced by Bacillus thuringiensis, show broad activity against several orders of insects. In addition, they are harmless to mammals, birds, amphibian, and reptiles. Because of these characteristics, several genes have been used in the development of transgenic plants to control pests in important crops. Among them, the cotton crop is very important in Brazil and it has the cotton boll weevil, Anthonomus grandis, and the fall armyworm, Spodoptera frugiperda, as the major pests in this crop, which cause several economic damages. The objective of this work was: to characterize a Bt strain (S811), which is toxic towards S. frugiperda and A. grandis, to identify and clone the coding genes of the Cry toxins with potential to control these pests, to express the genes in Escherichia coli heterologous system, and to test the toxicity of the recombinant proteins towards the reported pests. Electronic microscopic analysis revealed the presence of bipyramidal and spherical crystals and SDS-PAGE analysis showed proteins with 140 kDa and 80 kDa of molecular weight mass. Further gene characterization, using specific primer sets to detect cry genes, identified three genes, cry1Ab, cry1Ia e cry8, although the cry1Ia e cry8 were the genes of major interest. The cry8 gene was isolated through TAIL-PCR techniques and encodes a protein 58% identical to other Cry8 toxins, while the protein deduced from cry1Ia12 gene showed 99% identity with other Cry1Ia toxins previously described. The cry1A12 and cry8 gene toxic fragments were cloned and expressed in E. coli, and the 70 kDa recombinant proteins of were tested against A. grandis and S. frugiperda. Cry1Ia12 toxin caused 50% mortality at 230 μg/ml and 5 μg/ml towards both A. grandis and S. frugiperda, respectively. Cry8 toxin caused 50% mortality only against A. grandis at 160 μg/ml. In addition to the transgenic cotton development program, these results will permit the generation of new molecules with higher toxicity and specificity for these pests through in vitro molecular evolution (DNA shuffling) of these genes.

Orientador: Mário De Beni Arrigoni / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento ingestivo e a saúde ruminal de bovinos Nelore em confinamento alimentados com fontes de lipídios. O estudo foi conduzido no confinamento experimental da FMVZ, UNESP- Botucatu. Noventa e seis bovinos machos, não castrados, Nelore, com peso corporal inicial de 399,9 ± 19,32 kg e idade média de 22 ± 2 meses foram distribuídos em um delineamento experimental em blocos casualizados. Os animais foram separados de acordo com o peso corporal inicial e divididos em quatro tratamentos: COP, dieta com adição de fontes naturais de lipídios, provenientes de caroço de algodão e gérmen de milho; NUTR, dieta com inclusão de fonte de lipídios protegidos da degradação ruminal provenientes de óleo de soja; BLEND, dieta com inclusão da combinação de óleos protegidos da degradação ruminal; MIX, dieta com adição de fontes naturais de lipídios, provenientes de caroço de algodão e gérmen de milho e Blend. Os animais foram alocados em confinamento coberto, sendo 4 animais por baia, totalizando 6 baias por tratamento, que foram consideradas as unidades experimentais. Os animais foram abatidos após 108 dias de estudo. Os dados foram analisados pelo PROC MIXED do SAS e as médias comparadas pelo teste Tukey a 10% de significância. Para a ingestão de massa seca dos animais na fase de terminação houve uma redução (P=0,0003), ocasionado pelo baixo nível de volumoso e alta concentração energética das dietas. As relações ELm:ELme e ELg:ELge foram maiores (P<... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Toxinas Cry provenientes de Bacillus thuringiensis, também denominadas de δ- endotoxinas, possuem ampla atividade inseticida e são específicas para insetos de diferentes ordens, não sendo nocivas a mamíferos, aves, anfíbios ou répteis. Devido a esta característica, seus genes vêm sendo utilizados no desenvolvimento de plantas transgênicas, visando o controle de insetos-praga de culturas de importância econômica. Dentre estas, destaca-se o algodoeiro que tem como principais pragas o bicudo-do-algodoeiro (Anthonomus grandis) e a lagarta-do-cartucho (Spodoptera frugiperda), ambas causadoras de grandes prejuízos econômicos. Assim, este trabalho objetivou: caracterizar uma estirpe de Bt (S811) tóxica contra S. frugiperda e A. grandis, identificar e clonar os genes codificadores de toxinas Cry potenciais para o controle dessas pragas, expressar os genes em sistema heterólogo Escherichia coli e testar a toxicidade das toxinas contra as pragas em questão. Os resultados obtidos nas análises da estirpe por microscopia eletrônica revelaram a presença de cristais esféricos e bipiramidais, enquanto que a análise de SDS-PAGE detectou proteínas de massa molecular com cerca de 140 kDa e 80 kDa. Posteriormente, uma caracterização gênica, utilizando oligonucleotídeos específicos para genes cry, identificou três genes, cry1Ab, cry1Ia e cry8, sendo estes dois últimos de maior interesse. O gene cry8, que foi isolado pela técnica TAIL-PCR, codifica uma proteína com 58% de identidade de aminoácidos com outras toxinas Cry8, enquanto que o gene cry1Ia12 (isolado com oligonucleotídeos específicos) codifica uma proteína que possui 99% de identidade com as outras proteínas do tipo Cry1Ia descritas na literatura. As porções tóxicas dos genes foram clonadas e expressadas em E. coli produzindo as proteínas recombinantes Cry8 e Cry1Ia12 de aproximadamente 70 kDa (cada uma). As proteínas recombinantes causaram mortalidade de 50% para larvas de A. grandis com 230 μg/ml e 160 μg/ml de Cry1Ia12 e Cry8, respectivamente, enquanto que para larvas de S. frugiperda, apenas Cry1Ia12 foi tóxica causando mortalidade de 50% com 5 μg/ml. Todos estes estudos contribuirão para o desenvolvimento de plantas transgênicas de algodão, bem como para a geração de novas moléculas com maior toxicidade e especificidade utilizando a evolução molecular in vitro (DNA shuffling) destes genes. / Cry toxins or δ-endotoxins, produced by Bacillus thuringiensis, show broad activity against several orders of insects. In addition, they are harmless to mammals, birds, amphibian, and reptiles. Because of these characteristics, several genes have been used in the development of transgenic plants to control pests in important crops. Among them, the cotton crop is very important in Brazil and it has the cotton boll weevil, Anthonomus grandis, and the fall armyworm, Spodoptera frugiperda, as the major pests in this crop, which cause several economic damages. The objective of this work was: to characterize a Bt strain (S811), which is toxic towards S. frugiperda and A. grandis, to identify and clone the coding genes of the Cry toxins with potential to control these pests, to express the genes in Escherichia coli heterologous system, and to test the toxicity of the recombinant proteins towards the reported pests. Electronic microscopic analysis revealed the presence of bipyramidal and spherical crystals and SDS-PAGE analysis showed proteins with 140 kDa and 80 kDa of molecular weight mass. Further gene characterization, using specific primer sets to detect cry genes, identified three genes, cry1Ab, cry1Ia e cry8, although the cry1Ia e cry8 were the genes of major interest. The cry8 gene was isolated through TAIL-PCR techniques and encodes a protein 58% identical to other Cry8 toxins, while the protein deduced from cry1Ia12 gene showed 99% identity with other Cry1Ia toxins previously described. The cry1A12 and cry8 gene toxic fragments were cloned and expressed in E. coli, and the 70 kDa recombinant proteins of were tested against A. grandis and S. frugiperda. Cry1Ia12 toxin caused 50% mortality at 230 μg/ml and 5 μg/ml towards both A. grandis and S. frugiperda, respectively. Cry8 toxin caused 50% mortality only against A. grandis at 160 μg/ml. In addition to the transgenic cotton development program, these results will permit the generation of new molecules with higher toxicity and specificity for these pests through in vitro molecular evolution (DNA shuffling) of these genes.

Bacillus thuringiensis é uma bactéria gram-positiva que produz cristais protéicos durante a fase de esporulação. Os cristais, são formados por proteínas Cry e apresentam atividade tóxica específica a determinadas classes de insetospraga, sendo o seu uso bastante difundido na agricultura. O presente trabalho teve como objetivo gerar uma biblioteca de variantes, do gene cry8Ha1, isolado da estirpe S811 de B. thuringiensis e selecionar variantes com atividade melhorada para pragas do algodoeiro. A biblioteca foi construída por meio da técnica de DNA shuffling e selecionada contra os insetos-praga Anthonomus grandis e Spodoptera frugiperda pela técnica de Phage display. As variantes foram selecionadas pela afinidade aos receptores presentes nas membranas dos intestinos do bicudo-do-algodoeiro (A.grandis) e da lagarta-do-cartucho (S. frugiperda), principais pragas do algodoeiro. Após expressão em fago, proteínas variantes foram testadas em bioensaios contra larvas dos insetos-alvo (A. grandis e S. frugiperda) e seqüenciadas. Os resultados de atividade, mostraram variantes mais efetivas para as duas pragas-alvo, quando comparado com a proteína original Cry8Ha1. O mutante Cry/BI-25 (ativo contra A. grandis) foi selecionado, por diferir estatisticamente do controle, e subclonado no vetor de expressão em bactéria. A proteína foi purificada e utilizada em bioensaio contra larvas de A. grandis. Os resultados indicaram um aumento de atividade entomotóxica de 333% da proteína mutante (Cry/BI-25) quando comparada com a proteína original (Cry8Ha1). A nova molécula, Cry/BI-25, está sendo utilizada em programas de melhoramento de plantas de algodão visando a obtenção de plantas resistentes à praga-alvo. / Bacillus thuringiensis is a gram-positive bacterium that produces protein crystals during its sporulation phase. These crystals are formed by Cry proteins that show specific toxicity to some insect-pest classes, which makes their use very common in agriculture. This work aimed at obtaining a library of cry8Ha1 gene variants, isolated from B. thuringiensis S811 and the selection of gene variants, whose products would have an improved insecticidal activity against cotton insect-pests. The library was constructed using DNA shuffling and selected against the insectpests Anthonomus grandis and Spodoptera frugiperda using Phage display. The variants were selected by affinity to Brush Border Membrane Vesicles (BBMVs) of A. grandis and S. frugiperda midguts. After phage expression, variant proteins were tested in bioassays against the target insects and their genes sequenced. The mutant Cry/BI-25 showed higher insecticidal activity against A. grandis and was subcloned to a bacterium expression vector. The purified expressed protein Cry/BI-25 is 333% more active when compared with protein original (Cry8Ha1). Gene variants selected against S. frugiperda are still under analysis. The new improved protein Cry/BI-25 will be used in cotton plant transformation experiments, with the purpose of developing insect-pest resistant GM cotton plants.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-10T16:41:13Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 698102 bytes, checksum: ad7f11d01304cd78c757e0ec400a1be2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-10T16:41:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 698102 bytes, checksum: ad7f11d01304cd78c757e0ec400a1be2 (MD5) Previous issue date: 2003-07-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Este trabalho teve como objetivos avaliar as alterações fisiológicas e bioquímicas em sementes do algodoeiro durante o envelhecimento natural e artificial, verificar se as avaliações bioquímicas podem se constituir em alternativa eficiente para avaliação do vigor e avaliar o potencial de armazenamento destas sementes. Para tanto, sementes de duas variedades (IAC-20 RR e Fabrika) foram armazenadas no Setor de Armazenamento da Unidade de Beneficiamento de Sementes do DFT/UFV durante 12 meses, a partir de maio/2001, em condições de ambiente e em câmara fria. Para provocar o envelhecimento artificial, as sementes foram submetidas a 42oC e 100% UR por períodos de 0, 24, 48, 72, 96 e 120 horas. A qualidade fisiológica (teste de germinação, envelhecimento acelerado, germinação a baixa temperatura) e as avaliações bioquímicas (atividade das enzimas lipoxigenase e fosfatase ácida, inibidor de tripsina, teor de lipídios e ácidos graxos) foram feitas aos 0, 2, 4, 6, 8, 10, e 12 meses de armazenamento e após cada período de envelhecimento artificial. As sementes armazenadas em ambiente e em câmara fria foram ainda avaliadas pelos testes de condutividade elétrica e emergência das plântulas em leito de areia. Observou-se que os envelhecimentos natural e artificial acarretaram decréscimos na viabilidade, no vigor, nas atividades de lipoxigenase, fosfatase ácida e inibidor de tripsina e nos teores de lipídios das sementes. No entanto, não foi possível determinar associação entre as alterações fisiológicas e bioquímicas ocorridas nas sementes em ambos os processos de envelhecimento. Para as sementes armazenadas em ambiente, maior similaridade entre os resultados de envelhecimento acelerado e natural ocorreu quando se avaliou a germinação a baixa temperatura e a atividade de fosfatase ácida. Os testes de envelhecimento acelerado e de germinação a baixa temperatura, realizados antes do armazenamento, estimaram a viabilidade das sementes, respectivamente, após oito e dez meses de armazenamento em ambiente. As determinações bioquímicas realizadas antes do armazenamento não permitiram prever o potencial de conservação das sementes do algodoeiro; no entanto, estas determinações foram eficientes para monitorar o processo de deterioração durante o armazenamento. / This study was done to evaluate the physiological and biochemical changes during natural and artificial aging of cotton seed and to determine if the biochemical evaluations can act as efficient alternative vigor and the storage potential evaluation. The cotton seeds of two cultivars (IAC-20 RR and Fabrika) were stored from May 2001, for 12 months, under ambient conditions and in a cold room at the storage facility of the seed processing Unit of DFT/UFV. The artificial aging was induced by storing the seeds for 0, 24, 48, 72, 96 and 120 hours at 42oC and 100% relative humidity. The changes in the physiological quality (germination, accelerated aging and cool germination tests) and the biochemical parameters (lipoxygenase and acid phosphatase activity, trypsin inhibitor, lipid and fatty acid content) were determined after each artificial aging period and at two month interval in stored seeds. Electrical conductivity and seedling emergence in sand was also determined for stored seeds. The viability, vigor, lipoxygenase and acid phosphatase activity, trypsin inhibitor, and lipid content of the cotton seed decreased by natural or artificial aging. However, there was no association between these alterations and the accelerated or natural aging processes. For seeds stored under ambient conditions, maximum similarity with accelerated aging occurred for cool germination and activity acid phosphatase. The accelerated aging and cool germination tests before storage estimated seed viability of eight and ten months, respectively, storage under ambient conditions. The pre-storage biochemical parameters storage did not predict storage potential of cotton seed, but these evaluations can efficiently monitor the deterioration process during storage.

Toxinas Cry provenientes de Bacillus thuringiensis, também denominadas de δ- endotoxinas, possuem ampla atividade inseticida e são específicas para insetos de diferentes ordens, não sendo nocivas a mamíferos, aves, anfíbios ou répteis. Devido a esta característica, seus genes vêm sendo utilizados no desenvolvimento de plantas transgênicas, visando o controle de insetos-praga de culturas de importância econômica. Dentre estas, destaca-se o algodoeiro que tem como principais pragas o bicudo-do-algodoeiro (Anthonomus grandis) e a lagarta-do-cartucho (Spodoptera frugiperda), ambas causadoras de grandes prejuízos econômicos. Assim, este trabalho objetivou: caracterizar uma estirpe de Bt (S811) tóxica contra S. frugiperda e A. grandis, identificar e clonar os genes codificadores de toxinas Cry potenciais para o controle dessas pragas, expressar os genes em sistema heterólogo Escherichia coli e testar a toxicidade das toxinas contra as pragas em questão. Os resultados obtidos nas análises da estirpe por microscopia eletrônica revelaram a presença de cristais esféricos e bipiramidais, enquanto que a análise de SDS-PAGE detectou proteínas de massa molecular com cerca de 140 kDa e 80 kDa. Posteriormente, uma caracterização gênica, utilizando oligonucleotídeos específicos para genes cry, identificou três genes, cry1Ab, cry1Ia e cry8, sendo estes dois últimos de maior interesse. O gene cry8, que foi isolado pela técnica TAIL-PCR, codifica uma proteína com 58% de identidade de aminoácidos com outras toxinas Cry8, enquanto que o gene cry1Ia12 (isolado com oligonucleotídeos específicos) codifica uma proteína que possui 99% de identidade com as outras proteínas do tipo Cry1Ia descritas na literatura. As porções tóxicas dos genes foram clonadas e expressadas em E. coli produzindo as proteínas recombinantes Cry8 e Cry1Ia12 de aproximadamente 70 kDa (cada uma). As proteínas recombinantes causaram mortalidade de 50% para larvas de A. grandis com 230 μg/ml e 160 μg/ml de Cry1Ia12 e Cry8, respectivamente, enquanto que para larvas de S. frugiperda, apenas Cry1Ia12 foi tóxica causando mortalidade de 50% com 5 μg/ml. Todos estes estudos contribuirão para o desenvolvimento de plantas transgênicas de algodão, bem como para a geração de novas moléculas com maior toxicidade e especificidade utilizando a evolução molecular in vitro (DNA shuffling) destes genes. / Cry toxins or δ-endotoxins, produced by Bacillus thuringiensis, show broad activity against several orders of insects. In addition, they are harmless to mammals, birds, amphibian, and reptiles. Because of these characteristics, several genes have been used in the development of transgenic plants to control pests in important crops. Among them, the cotton crop is very important in Brazil and it has the cotton boll weevil, Anthonomus grandis, and the fall armyworm, Spodoptera frugiperda, as the major pests in this crop, which cause several economic damages. The objective of this work was: to characterize a Bt strain (S811), which is toxic towards S. frugiperda and A. grandis, to identify and clone the coding genes of the Cry toxins with potential to control these pests, to express the genes in Escherichia coli heterologous system, and to test the toxicity of the recombinant proteins towards the reported pests. Electronic microscopic analysis revealed the presence of bipyramidal and spherical crystals and SDS-PAGE analysis showed proteins with 140 kDa and 80 kDa of molecular weight mass. Further gene characterization, using specific primer sets to detect cry genes, identified three genes, cry1Ab, cry1Ia e cry8, although the cry1Ia e cry8 were the genes of major interest. The cry8 gene was isolated through TAIL-PCR techniques and encodes a protein 58% identical to other Cry8 toxins, while the protein deduced from cry1Ia12 gene showed 99% identity with other Cry1Ia toxins previously described. The cry1A12 and cry8 gene toxic fragments were cloned and expressed in E. coli, and the 70 kDa recombinant proteins of were tested against A. grandis and S. frugiperda. Cry1Ia12 toxin caused 50% mortality at 230 μg/ml and 5 μg/ml towards both A. grandis and S. frugiperda, respectively. Cry8 toxin caused 50% mortality only against A. grandis at 160 μg/ml. In addition to the transgenic cotton development program, these results will permit the generation of new molecules with higher toxicity and specificity for these pests through in vitro molecular evolution (DNA shuffling) of these genes.

Bacillus thuringiensis é uma bactéria gram-positiva que produz cristais protéicos durante a fase de esporulação. Os cristais, são formados por proteínas Cry e apresentam atividade tóxica específica a determinadas classes de insetospraga, sendo o seu uso bastante difundido na agricultura. O presente trabalho teve como objetivo gerar uma biblioteca de variantes, do gene cry8Ha1, isolado da estirpe S811 de B. thuringiensis e selecionar variantes com atividade melhorada para pragas do algodoeiro. A biblioteca foi construída por meio da técnica de DNA shuffling e selecionada contra os insetos-praga Anthonomus grandis e Spodoptera frugiperda pela técnica de Phage display. As variantes foram selecionadas pela afinidade aos receptores presentes nas membranas dos intestinos do bicudo-do-algodoeiro (A.grandis) e da lagarta-do-cartucho (S. frugiperda), principais pragas do algodoeiro. Após expressão em fago, proteínas variantes foram testadas em bioensaios contra larvas dos insetos-alvo (A. grandis e S. frugiperda) e seqüenciadas. Os resultados de atividade, mostraram variantes mais efetivas para as duas pragas-alvo, quando comparado com a proteína original Cry8Ha1. O mutante Cry/BI-25 (ativo contra A. grandis) foi selecionado, por diferir estatisticamente do controle, e subclonado no vetor de expressão em bactéria. A proteína foi purificada e utilizada em bioensaio contra larvas de A. grandis. Os resultados indicaram um aumento de atividade entomotóxica de 333% da proteína mutante (Cry/BI-25) quando comparada com a proteína original (Cry8Ha1). A nova molécula, Cry/BI-25, está sendo utilizada em programas de melhoramento de plantas de algodão visando a obtenção de plantas resistentes à praga-alvo. / Bacillus thuringiensis is a gram-positive bacterium that produces protein crystals during its sporulation phase. These crystals are formed by Cry proteins that show specific toxicity to some insect-pest classes, which makes their use very common in agriculture. This work aimed at obtaining a library of cry8Ha1 gene variants, isolated from B. thuringiensis S811 and the selection of gene variants, whose products would have an improved insecticidal activity against cotton insect-pests. The library was constructed using DNA shuffling and selected against the insectpests Anthonomus grandis and Spodoptera frugiperda using Phage display. The variants were selected by affinity to Brush Border Membrane Vesicles (BBMVs) of A. grandis and S. frugiperda midguts. After phage expression, variant proteins were tested in bioassays against the target insects and their genes sequenced. The mutant Cry/BI-25 showed higher insecticidal activity against A. grandis and was subcloned to a bacterium expression vector. The purified expressed protein Cry/BI-25 is 333% more active when compared with protein original (Cry8Ha1). Gene variants selected against S. frugiperda are still under analysis. The new improved protein Cry/BI-25 will be used in cotton plant transformation experiments, with the purpose of developing insect-pest resistant GM cotton plants.

Submitted by GABRIEL FERNANDES DE MELO (gabrielnanico5@hotmail.com) on 2018-04-26T00:10:33Z No. of bitstreams: 1 Melo, GF.pdf: 959985 bytes, checksum: ab25bbbc1a40e3c73fac3d7043f7a8de (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Lucia Martins Frederico null (mlucia@fca.unesp.br) on 2018-04-26T11:55:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 melo_gf_me_botfca.pdf: 843997 bytes, checksum: 1a0afab3c0bc425054b45e4e07f29608 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-26T11:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 melo_gf_me_botfca.pdf: 843997 bytes, checksum: 1a0afab3c0bc425054b45e4e07f29608 (MD5) Previous issue date: 2018-04-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento ingestivo e a saúde ruminal de bovinos Nelore em confinamento alimentados com fontes de lipídios. O estudo foi conduzido no confinamento experimental da FMVZ, UNESP- Botucatu. Noventa e seis bovinos machos, não castrados, Nelore, com peso corporal inicial de 399,9 ± 19,32 kg e idade média de 22 ± 2 meses foram distribuídos em um delineamento experimental em blocos casualizados. Os animais foram separados de acordo com o peso corporal inicial e divididos em quatro tratamentos: COP, dieta com adição de fontes naturais de lipídios, provenientes de caroço de algodão e gérmen de milho; NUTR, dieta com inclusão de fonte de lipídios protegidos da degradação ruminal provenientes de óleo de soja; BLEND, dieta com inclusão da combinação de óleos protegidos da degradação ruminal; MIX, dieta com adição de fontes naturais de lipídios, provenientes de caroço de algodão e gérmen de milho e Blend. Os animais foram alocados em confinamento coberto, sendo 4 animais por baia, totalizando 6 baias por tratamento, que foram consideradas as unidades experimentais. Os animais foram abatidos após 108 dias de estudo. Os dados foram analisados pelo PROC MIXED do SAS e as médias comparadas pelo teste Tukey a 10% de significância. Para a ingestão de massa seca dos animais na fase de terminação houve uma redução (P=0,0003), ocasionado pelo baixo nível de volumoso e alta concentração energética das dietas. As relações ELm:ELme e ELg:ELge foram maiores (P<0,0001) para os tratamentos COP e MIX, com 11% maior para o MIX e 21% maior para o COP, em relação a ELg esperada para esses tratamentos. No comportamento ingestivo o tempo total de mastigação foi maior (P= 0,004) para COP, o baixo tempo de ruminação e mastigação nos tratamentos NUTR e BLEND no período de terminação proporcionaram queda (P=0,002) no pH sanguíneo (7,31 e 7,33 respectivamente), sendo encontrada maior concentração de lactato (P<0,0001), menores concentrações de bicarbonato (P=0,0012) e bases no sangue (P=0,007). Para os parâmetros de saúde ruminal o tratamento BLEND apresentou maior índice de rumenites (P=0,08) com escore 1,5 diferindo de COP e NUTR. A incidência de abscessos hepáticos foi maior (P=0,08) para o tratamento NUTR com 47,83%. Conclui-se que a utilização de COP como fonte de lipídios em dietas com baixa inclusão de volumoso proporcionou melhor tempo de ruminação e mastigação, com melhor pH sanguíneo e níveis mais baixos de lactato no sangue. / The objective of this study was to evaluate the effects of different fat sources on feeding behavior and ruminal health of feedlot Nellore cattle. The study was conducted in experimental feedlot in FMVZ, UNESP- Botucatu. Nelore bulls (n = 96), with an initial body weight of 399.9 ± 19.32 kg and 22 ± 2 months of age, were allocated in feedlot barn and divided into 24 pens, where pen was considered the experimental unit. The experimental was a randomized block design, separated according the initial body weight, divided in four treatments: COP, diet with natural lipids sources, from cottonseed and corn germ; NUTR diet with rumen protected fat from soybean oil; BLEND, diet with rumen protected fat from oils combination; MIX, diet with natural lipids source plus Blend. . After 108-day of feeding, the animals were slaughtered. The data were analyzed by PROC MIXED of SAS and the averages compared to the Tukey test at P ≤ 0.10 . There was a decrease (P=0.0003) in the feeding intake during the finishing period, caused by low roughage level and high energy diets. The NEm: NEme and NEg: NEge were superior (P < 0.0001) to COP and MIX treatment, 11% higher to MIX and 21% to COP, compared with the NEg of these treatments. In feeding behavior, chewing time was higher (P=0.004) to COP, than the low rumination time and chewing for NUTR and BLEND treatments in the finish diet caused a decrease (P=0.002) in the pH (7.31 and 7.33 respected), there was found more blood lactate (P=0.0001), low bicarbonate (P=0.0012) and blood bases (P=0,007). To ruminal heath, the BLEND treatment was more to ruminitis index (P=0.08), with 1.5 score there was different of COP and NUTR. Liver abscesses index was higher (P=0.08) in the NUTR treatment, with 47.83%. In conclusion the cottonseed and corn germ as lipids sources in low roughage diets was better to rumination time and chewing, with better blood pH and low blood lactate. / CAPES: Vigência de 03/2016 à 03/2018

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-01-29T12:24:37Z No. of bitstreams: 1 2014_EsdrasHenriqueSilva_Parcial.pdf: 1455835 bytes, checksum: f13ea5b9310477f8d5f474487a41a55c (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2015-01-29T12:53:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_EsdrasHenriqueSilva_Parcial.pdf: 1455835 bytes, checksum: f13ea5b9310477f8d5f474487a41a55c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-29T12:53:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_EsdrasHenriqueSilva_Parcial.pdf: 1455835 bytes, checksum: f13ea5b9310477f8d5f474487a41a55c (MD5) / CAPÍTULO 2 - O nematoide das galhas Meloidogyne incognita (Kofoid & White) Chitwood, 1949 é um dos mais importantes patógenos na cultura do algodão (Gossypium spp.), além de ser amplamente distribuído. Os objetivos deste estudo foram avaliar a variabilidade genética entre populações brasileiras de M. incognita e agressividade/virulência dessas populações em diferentes cultivares de algodoeiro. Cinco isolados de M. incognita e um isolado de M. enterolobii (outgroup) foram utilizados nas análises moleculares. Os resultados mostraram que apenas 2,7% dos fragmentos de DNA foram polimórficos. Apesar da existência de duas raças (raças 3 e 4) e dois fenótipos de esterase (I1 e I2), foi observada uma baixa variabilidade genética entre os isolados, o que pode ser devido ao modo de reprodução partenogenético mitótico do patógeno. A agressividade/virulência entre os isolados em relação a diferentes genótipos de algodoeiros também foi estudada. Nenhuma das populações foi virulenta aos genótipos de algodoeiros resistentes M-315 RNR, TX-25, CIR1343, Wild mexicano Jack Jones e CIR1348, que apresentaram FR <1.0. Duas populações de M. incognita dos estados de Mato Grosso do Sul e Paraná (Umuarama) (raças 4 e 3, respectivamente) foram altamente agressivas em relação ao controle suscetível FM966 e virulentas para os acessos LA-887 e Clevewilt-6 que mostraram resistência moderada a outras populações testadas. / The root-knot nematode Meloidogyne incognita (Kofoid & White) Chitwood, 1949 is widely distributed and a major pathogen of cotton (Gossypium spp.) worldwide. The objectives of this study were to assess the genetic variability and aggressiveness/virulence among Brazilian populations of M. incognita in cotton. Five isolates of M. incognita and one isolate of M. enterolobii (outgroup) were used in the molecular analyses. Our results showed that only 2.7% of the fragments of DNAwere polymorphic. Despite the existence of two races (races 3 and 4) and two esterase phenotypes (I1 and I2), a low genetic variability among isolates was observed, which might be due to the mitotic parthenogenetic mode of reproduction of this pathogen. The aggressiveness/virulence among isolates towards different cotton genotypes was also studied. None of the populations was virulent to the resistant cotton genotypes M-315 RNR, TX-25, CIR1343, Wild Mexican Jack Jones and CIR1348, that presented RF<1.0. Two populations of M. incognita from the states of Mato Grosso do Sul and Paraná (Umuarama) (races 4 and 3, respectively) were highly aggressive to the susceptible control FM966 and virulent to the accessions LA-887 and Clevewilt-6 that showed moderate resistance to the other populations tested.