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Empiric antimicrobial therapy often consists of the combination of Gram-positive coverage with vancomycin (VAN) and Gram-negative coverage, specifically an anti-pseudomonal beta-lactam, such as piperacillin-tazobactam (PTZ). Nephrotoxicity is commonly associated with VAN therapy; however, recent reports demonstrate increasing nephrotoxicity rates among patients treated with the combination of VAN and PTZ. This study evaluated the effect of the VAN/PTZ combination on acute kidney injury (AKI), as defined by the RIFLE criteria, compared to VAN and PTZ monotherapies. Overall, 11,650 patients were analyzed, with 1,647 (14.1%) AKI cases occurring. AKI was significantly more frequent in the VAN/PTZ group (21%) compared to either monotherapy group (VAN 8.3%, PTZ 7.8%, p<0.001 for both). Combination therapy was independently associated with higher AKI odds compared to monotherapy with either agent (aOR=2.03; 95% CI 1.74-2.39; aOR=2.31; 95% CI 1.97-2.71, for VAN and PTZ, respectively). Receipt of concomitant nephrotoxic drugs were independently associated with increased AKI rates, as were increased duration of therapy, length of hospital stay, increasing severity of illness, and increasing baseline renal function. VAN combined with PTZ was associated with twice the odds of AKI development compared to either agent as monotherapy. This demonstrates the need for judicious use of combination empiric therapy.

Os rins são órgãos responsáveis por gerir um conjunto de tarefas fisiológicas que mantém a homeostase do organismo, dentre elas a remoção de metabólitos tóxicos do sangue, produção de hormônios e a regulação do balanço de eletrólitos. As lesões renais agudas (LRA) levam a uma rápida perda das funções do órgão, em horas ou dias. Durante o processo de lesão tecidual, o sistema imune atua, muitas vezes, de forma prejudicial ao órgão. Uma das principais células envolvidas nesse processo de lesão tecidual são os macrófagos, que participam durante a primeira fase da LRA, já diferenciados em um perfil mais pró-inflamatório, descritos como macrófagos M1, e, também, durante a fase de reparo do tecido, diferenciados em macrófagos M2. Produtos como o acetato, um dos os ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) mais abundantes, oriundos do metabolismo de bactérias pertencentes à microbiota intestinal são capazes de modular a resposta inflamatória em modelos de lesão tecidual, porém a influência desses produtos, na função, migração e diferenciação dos macrófagos no contexto da LRA ainda não foi bem descrita. Desta forma o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do acetato nas funções biológicas dos macrófagos na LRA. Para isso, desenvolvemos um modelo de LRA induzida por cisplatina em peixes Danio rerio adultos, injetando intraperitonealmente (ip) diferentes doses de cisplatina e avaliando sobrevida e progressão da doença por histologia, imunofluorescência e análise do infiltrado celular. Em seguida para avaliar o efeito do acetato na LRA, os animais foram submetidos ao tratamento com acetato, por gavagem, e depois, injetados com cisplatina para analise de sobrevida, extensão da lesão renal por histologia e infiltrado de células do sistema imune no rim. Os resultados mostraram que a injeção de cisplatina (0,1275 mg/g) induz lesão tecidual no rim 24 hrs pós-injeção com perda de estrutura tubular, levando a morte de 80% dos animais. Porém, os animais sobreviventes foram capazes de regenerar o tecido lesado oito dias após a injeção. Também se observou aumento do infiltrado inflamatório e alta taxa de morte celular, concomitantes a altas taxas de proliferação de células não imunes. O acetato foi capaz de aumentar a sobrevida dos animais injetados com cisplatina e reduzir o dano induzido pela droga no rim, por outro lado, não alterou a atuação das células inflamatórias do sistema imune. Em conclusão, o modelo de injeção intraperitoneal de cisplatina foi capaz de induzir uma LRA em zebrafish adulto, com o máximo de prejuízo às 24 hpi e com recuperação e regeneração do tecido renal em uma semana, demonstrando ser um ótimo modelo para o estudo da regeneração no rim. O acetato parece ser promissor no tratamento da LRA experimental, pois diminui a taxa de morte induzida pela cisplatina. / The kidneys are organs responsible for managing a set of physiological tasks that maintain the homeostasis of the organism, among them the removal of toxic metabolites from the blood, production of hormones and the regulation of electrolyte balance. Acute kidney injury (AKI) leads to a rapid loss of organ function in hours or days. During the process of tissue injury, the immune system often initially acts in a detrimental way to the organ. One of the main cells involved in this process of tissue injury are macrophages, which participate during the first phase of AKI, already differentiated in a more proinflammatory profile, described as macrophages M1, and then during the tissue repair phase, differentiated into macrophages M2. Products derived from the metabolism of bacteria belonging to the intestinal microbiota, such as acetate, one of the main short chain fatty acids (SCFA), are able ofmodulating the inflammatory response in tissue injury models, but the influence of these products on the function, migration and differentiation of macrophages in the context of the AKI has not yet been well described. Thus the objective of this work was to evaluate the effect of acetate on the biological functions of macrophages in AKI. First, we developed a cisplatin-induced AKI model in Danio rerio adult fish, injecting different doses of cisplatin intraperitoneally (ip) and evaluating the survival and progression of the disease by histology, immunofluorescence and analysis of the cellular infiltrate. Subsequently, the animals were treated with acetate by gavage and then injected with cisplatin and analyzed for survival, the extent of the renal lesion by histology and the immune cell infiltrate in the kidney. The results showed that the injection of cisplatin (0,1275 mg/g) induced tissue damage in the kidney 24 h post-injection with loss of tubular structure, leading to the death of 80% of the animals. However, the surviving animals were able to regenerate the injured tissue eight days after the injection. There was also an increase in inflammatory infiltrate and a high rate of cell death, concomitant with high rates of proliferation of non-immune cells. The acetate was able to increase the survival of the animals injected with cisplatin and reduce the damage induced by the drug in the kidney, on the other hand, did not alter the performance of inflammatory cells of the immune system. In conclusion, the intraperitoneal cisplatin injection model was able to induce AKI in adult zebrafish, with maximum damage at 24 hpi and recovery and regeneration of renal tissue in one week, proving to be a good model for the study of regeneration in the kidney. Acetate appears to be promising in the treatment of experimental AKI, as it decreases the rate of cisplatin-induced death.

Introdução: A Lesão renal aguda (LRA) é uma síndrome de alta incidência (23,2%) e mortalidade (23,0%), que acomete principalmente pacientes críticos, internados em unidades de terapia intensiva (UTI). A sepse é a principal causa de LRA (40,0%). A infecção por microrganismos multirresistentes exige o uso de agentes antimicrobianos potencialmente nefrotóxicos, como as polimixinas (Pmxs). Dentre elas, destaca-se a Pmx B e a colistina (Pmx E) utilizadas no controle de infecções por bacilos gram negativos (BGN). Objetivos: avaliar a incidência de LRA associada ao uso de Pmxs e identificar os fatores de risco para desenvolvimento de LRA associada ao uso de Pmxs. Métodos: Trata-se de um estudo transversal, retrospectivo, de abordagem quantitativa. A amostra foi composta por 1009 pacientes internados em UTI, provenientes de um banco de dados universal (BDU) organizado no período de abril a dezembro de 2012. Resultados: Foram incluídos 936 pacientes. A incidência geral de LRA na amostra foi de 43,1%, enquanto que para pacientes que receberam Pmxs foi de 87,0%. O principal fator de risco para LRA geral foi a pré existência de Doença Renal Crônica. Dentre os pacientes com LRA e que fizeram uso de Pmxs, a maioria era do sexo masculino (69,2%); 54,4±15,7 anos, internação do tipo clínica e com o maior tempo de internação em UTI, as características clínicas mais prevalentes foram o estado de choque (81,5%), a hipertensão arterial sistêmica (35,3%), o Diabetes Mellitus (20,0%) e a sepse (23,0%). Esse grupo apresentou maiores índices de gravidade SAPS II e LODS e o choque se confirmou como fator de risco nesse grupo. Conclusões: As Pmxs confirmaram-se como medicamento nefrotóxico em pacientes críticos (87%), tendo o choque como fator de risco. / Introduction: Acute kidney injury (AKI) is a syndrome of high incidence (23.2%) and mortality (23.0%), which affects mainly critically ill patients admitted to intensive care units (ICUs). Sepsis is the main cause of AKI (40.0%). Infection with multiresistant microorganisms requires the use of potentially nephrotoxic antimicrobial agents, such as polymyxins (Pmxs). Among them, Pmx B and colistin (Pmx E) are used to control gram-negative bacilli (GNB) infections. Objectives: to evaluate the incidence of AKI associated with the use of Pmxs and to identify the risk factors for the development of AKI associated with the use of Pmxs. Methods: It´s a cross-sectional, retrospective, quantitative approach The sample consisted of 1009 patients hospitalized in ICUs from a universal database (BDU) organized from April to December 2012. Results: A total of 936 patients were included. The overall incidence of AKI in the sample was 43.1%, whereas for patients receiving Pmxs it was 87.0%. The main risk factor for overall AKI was the pre-existence of Chronic Kidney Disease. Among the patients with AKI who used Pmxs, the majority were male (69.2%); 54.4 ± 15.7 years, hospitalization of the clinical type and with the longer ICU stay. The most prevalent clinical characteristics in the AKI and Pmx groups were shock state (81.5%), systemic arterial hypertension (35.3%), Diabetes Mellitus (20.0%) and sepsis (23.0% ). This group presented highest SAPS II and LODS severity indexes and the shock was confirmed as a risk factor. Conclusions: Pmxs were confirmed as nephrotoxic drugs in critical patients (87%), with shock as a risk factor.

Os rins desempenham um papel fundamental no sistema urinário e sua principal função é a filtração do sangue. Uma das causas que podem comprometer o funcionamento dos rins é a Insuficiência Renal Aguda (IRA) que é definida como a diminuição da taxa de filtração glomerular (TFG) de forma rápida e inesperada, causando a perda da função renal. Essa doença apresenta um número significativo de internações e também óbitos. O marcador padrão usado nos exames laboratoriais é a creatinina sérica, no entanto, a concentração da creatinina sérica pode variar dependendo de vários fatores, como idade, sexo, nutrição, entre outros. Além disso, sua concentração não varia consideravelmente nas primeiras indicações da lesão renal. Dessa forma, o diagnóstico é tardio e a função renal já pode estar comprometida. A proteína cistatina C (CST3) vem sendo indicada como um novo marcador para a doença, mostrando superioridade especialmente para detectar pequenas variações da TFG. A concentração da cistatina C não varia significativamente com a idade, sexo e massa muscular. Assim, foi desenvolvido um imunossensor para detectar a cistatina C, usando a configuração de transistor de efeito de campo de porta estendida e separada (SEGFET). Os eletrodos foram caracterizados por várias técnicas como MEV, microscopia de força atômica, técnicas eletroquímicas e também foi analisada a sensibilidade do ouro. As etapas de construção do imunossensor, e a interação do anticorpo com concentrações crescentes da proteína foram verificadas através de técnicas eletroquímicas, na faixa de concentração de 3 a 100 ng.mL-1. Nas medidas no SEGFET observou-se uma mudança significativa da corrente após a adição da cistatina C e para as substâncias interferentes não. O imunossensor apresentou alta sensibilidade detectando concentrações bem baixas da proteína alvo. A curva analítica &#916;IDS% x [CST3] obteve-se L.D. = 0,75 ng.mL-1, L.Q. = 2,27 ng.mL-1 e r = 0,98122. A curva analítica &#916;VGS% x [CST3] obteve-se L.D. = 0,28 ng.mL-1, L.Q. = 0,87 ng.mL-1 e r = 0,99846. Embora tenha algumas limitações o imunossensor é inovador e apresenta muitas vantagens podendo ser aplicado futuramente para o diagnóstico da doença. / The kidneys play a key role in the urinary system and its main function is the filtration of blood. One of the causes that can compromise the functioning of the kidneys is the Acute Kidney Injury (AKI), which is defined as the quickly and unexpected decrease in Glomerular Filtration Rate (GFR), causing the loss of kidney function. This disease presents a significant number of hospitalizations and also deaths. The standard marker used in laboratory tests is serum creatinine, however, serum creatinine concentration may vary depending on a number of factors, such as age, sex, nutrition, and so on. In addition, its concentration does not vary considerably in the first indications of renal injury. Thus, the diagnosis is delayed and renal function may already be compromised. The cystatin C protein (CST3) has been indicated as a new marker for the disease, showing superiority especially for detecting small variations in GFR. The concentration of cystatin C does not vary significantly with age, sex and muscle mass. Thus, an immunosensor was developed to detect cystatin C using the extended and a separate gate field effect transistor (SEGFET) configuration. The electrodes were characterized by several techniques such as SEM, atomic force microscopy, electrochemical techniques and also the sensitivity of gold was analyzed. The construction of the immunosensor, and the interaction of the antibody with increasing concentrations of the protein were verified by electrochemical techniques, in the concentration range of 3 to 100 ng.mL-1. In the measurements in the SEGFET a significant change of the current was observed after the addition of cystatin C and for the interfering substances there was no difference. The immunosensor showed high sensitivity detecting very low concentrations of the target protein. The analytical curve &#916;IDS% x [CST3] was obtained L.D. = 0,75 ng.mL-1, L.Q. = 2,27 ng.mL-1 and r = 0,98122. The analytical curve &#916;VGS% x [CST3] was obtained L.D. = 0,28 ng.mL-1, L.Q. = 0,87 ng.mL-1 and r = 0,99846. Although it has some limitations the immunosensor is innovative and presents many advantages and can be applied in the future to diagnose the disease.

A gravidade da síndrome isquemia/reperfusão determina o prognóstico da lesão renal aguda (LRA). Agentes como o citrato de sildenafil (Sil) e a N-acetilcisteína (NAC) tem demonstrado efeito renoprotetor na LRA isquêmica com resultados ainda inconclusivos. Esse estudo investigou o efeito do Sil e da NAC na LRA com diferentes tempos de isquemia. Foram utilizados grupos de ratos Wistar, adultos e machos: SHAM; Isquemia 30 min (clampeamento dos pedículos renais por 30 min); Isquemia 30 + Sil (Sil 0,25 mg/kg 60 min antes da isquemia renal); Isquemia 30 + NAC (NAC 150 mg/kg antes e após a isquemia renal); Isquemia 45 (clampeamento dos pedículos renais por 45 min); Isquemia 45 + Sil e Isquemia 45 + NAC. Foram avaliadas a função renal (clearance de creatinina e fração de excreção de sódio-FENa); a lesão oxidativa (peróxidos urinários; substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico - TBARS; óxido nítrico - NO e tióis no tecido renal); a síntese protéica da óxido nítrico sintase induzível iNOS e da heme oxigenase-1 HO-1 (western blotting) e análise histológica renal (área intersticial relativa - AIR e lesão tubulointersticial). Os grupos 30 min tratados com Sil e NAC demonstraram melhora da função renal, redução dos índices oxidantes e NO, ausência de iNOS e presença de HO-1. Nos grupos 45 min, o Sil manteve a função renal, porém demonstrou proteção tubular e oxidante; a NAC não demonstrou efeito protetor em nenhum dos parâmetros avaliados. Quanto à histologia, apenas o Sil induziu redução da AIR e da lesão tubulointersticial nos tempos 30 e 45 min. O estudo confirmou que as características funcionais e histológicas induzidas pelo tempo de isquemia na LRA determinam as respostas às manobras farmacológicas de prevenção. A expressão HO-1 pode ser considerada um mediador de proteção renal. / Severity of ischemic/reperfusion injury syndrome determines the prognosis of acute kidney injury (AKI). Agents such as sildenafil citrate (Sil) and N-acetylcysteine (NAC) have demonstrated renoprotective effect on ischemic AKI which data is still inconclusive. This study investigated the protective action of Sil and NAC in the AKI with different time of ischemia. Adult, male, Wistar rats were divided: SHAM, Ischemia 30 min (renal pedicles clamping for 30 min), Ischemia 30 + Sil (Sil 0,25 mg/kg 60 min before renal ischemia), Ischemia 30 + NAC (NAC 150 mg/kg before and after renal ischemia), Ischemia 45 min (renal pedicles clamping for 45 min), Ischemia 45 + Sil, Ischemia 45 + NAC. Renal function (creatinine clearance and urine sodium fractional excretion - FENa); oxidative injury (urinary peroxides, thiobarbituric acid reactive substances - TBARS, nitric oxide - NO and thiols in renal tissue); expression of inducible nitric oxide synthase - iNOS and heme oxygenase-1 HO-1 (western blotting) and kidney histological analysis (fractional interstitial area - FIA and tubuleinterstitial injury) were evaluated. Sil and NAC treatment in 30 min renal ischemia induced increase in renal function, decrease in the rate of oxidation and NO levels, iNOS absence and HO-1 expression. In the Ischemia 45 groups, Sil it maintained renal function, however demonstrated tubular and oxidative protection; NAC produced no renoprotective effect on any of the parameters evaluated. Histology studies showed that, only Sil induced reduction in FIA and tubuleinterstitial injury at 30 and 45 min ischemic time. The study confirmed that the functional and histological characteristics induced by time of ischemia determine the renoprotective pharmacological agent action in the AKI. HO-1 expression can be a renal protection mediator.

A Lesão Renal Aguda (LRA) é a complicação mais grave da rabdomiólise. Nessa síndrome, a liberação do pigmento heme desencadeia uma lesão que se caracteriza por vasoconstrição glomerular e toxicidade celular direta com componente oxidativo. A lesão oxidativa desencadeada é uma das linhas fisiopatológicas mais intrigantes. A renoproteção com antioxidantes tem demonstrado efeito satisfatório. As proantocianidinas são antioxidantes naturais encontrados no extrato da semente da uva. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antioxidante da Vitis vinifera (extrato da semente de uva) sobre a função renal de ratos submetidos à lesão por rabdomiólise. Foram utilizados ratos Wistar, adultos machos, pesando entre 250-300 gramas. A LRA foi induzida pela administração de glicerol 50% i.m (intramuscular). Os animais foram distribuídos em 4 grupos: grupo Salina (6ml/Kg de NaCl 0,9% via intraperitoneal (i.p) 1 vez ao dia), grupo Glicerol (6ml/Kg de glicerol i.m, cada região femoral recebeu 3ml/Kg de glicerol, 1 vez ao dia), grupo Vitis vinifera (3mg/Kg v.o por 5 dias) e grupo Glicerol+Vitis vinifera que recebeu Vitis vinifera por 5 dias antes do glicerol. Foram avaliados o marcador de lesão muscular (CK), a função renal (FR), a função tubular (FENa e FEK), o perfil oxidativo (peróxidos urinários-FOX-2 e MDA-TBARS) , a histologia e morfometria renal. O grupo Glicerol tratado com Vitis vinifera apresentou melhora da FR e tubular, redução dos níveis da peroxidação lipídica e melhora da histologia renal. Os resultados deste estudo confirmaram a proteção antioxidante, com repercussão histológica, da Vitis vinifera na LRA induzida por glicerol. / The Acute Kidney Injury (AKI) is the worst complication of rhabdomyolysis. In this syndrome, the delivery of heme pigment induces an injury that distinguishes itself by glomerular vasoconstriction and direct cellular toxicity with oxidative component. The oxidative injury is an intriguing one of the pathophysiological mechanism. The renoprotection with antioxidants has demonstrated satisfactory effect. The proanthocyanidins are natural antioxidants found in grape seed extract. The aim of this study was to evaluate the antioxidant effect of Vitis vinifera (grape seed extract) on the renal function of rats submitted to the injury by rhabdomyolysis. Wistar rats, male, adults, weight ranging from 250-300 g were used. The AKI was induced intramuscular (i.m.) administration of glycerol 50%. The animals were distributed in 4 groups: Saline group (6ml/Kg of NaCl 0,9% intraperitoneal (i.p) once a day), Glycerol group (6ml/Kg of glycerol i.m, each femoral region received 3ml/Kg of glycerol, once a day), Vitis vinifera group (3mg/Kg v.o by 5 days) and Glycerol+Vitis vinifera group that has received Vitis vinifera by 5 days before glycerol. Marker of muscular injury (CK), renal function (RF), the tubular function (FENa and FEK), the oxidative profile (urinary peroxides -FOX-2 and MDA-TBARS), the histological and kidney morphometric were evaluated. The Glycerol group treated with Vitis vinifera has shown improvements in RF and tubular, reduction of levels of lipid peroxidation and amelioration of kidney histology. The results of this study have confirmed the antioxidant protection, with histological repercussion of Vitis vinifera in AKI induced by glycerol.

Introdução: Injúria renal aguda (IRA) é uma síndrome cuja etiologia mais frequente é isquemia reperfusão. Diversos estudos clínicos e pré-clínicos sobre IRA têm sido desenvolvidos no sentido de esclarecer os seus mecanismos fisiopatológicos e as possíveis intervenções farmacológicas com efeito renoprotetor. Merecem destaque os resultados renoprotetores de alguns fitomedicamentos. Esse estudo avaliou o efeito da Justicia acuminatissima, planta da região amazônica com propriedades anti-inflamatória e antioxidante, sobre o modelo experimental mencionado. Objetivo: Avaliar a função renal, o perfil oxidativo e a histologia renal dos ratos submetidos à isquemia/reperfusão renal, tratados com Justicia acuminatissima (sara tudo). Métodos: ensaio pré-clínico com Ratos Wistar, adultos, machos (250-350g), distribuídos nos grupos SHAM, Isquemia 30 minutos e Isquemia + sara tudo (1,0g/kg, via oral, 1 vez). Foram avaliados os parâmetros hemodinâmicos (pressão arterial média - PAM, frequência cardíaca - FC, resistência vascular renal RVR e fluxo sanguíneo renal FSR), função renal - FR (clearance de creatinina - Clcr), estresse oxidativo (peróxidos urinários PU, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico TBARs, óxido nítrico NO e tióis no tecido renal) e histologia renais. Resultados: O grupo Isquemia demonstrou declínio na FR, associado ao aumento de PU, TBARs e NO, além da redução dos tióis. O pré-tratamento com sara tudo atenuou a lesão funcional, com elevação do Clcr, redução dos marcadores oxidativos (PU, TBARs e NO) e elevação de tióis. Quanto à hemodinâmica renal, o grupo Isquemia demonstrou elevação da RVR e redução do FSR (p<0,05), enquanto que o tratamento com sara tudo induziu melhora significativa desses parâmetros. A análise histológica confirmou edema, infiltrado, achatamento e necrose tubular no grupo Isquemia, enquanto que o grupo tratado com sara tudo apresentou melhora desses parâmetros. Conclusão: A proteção renal da Justicia acuminatissima, na IRA isquêmica, caracterizou-se por melhora significativa da função renal, reduzindo a lesão oxidativa, com impacto positivo na histologia renal. / Introduction: Acute Kidney Injury (AKI) is a syndrome with growing prevalence, which ischemic-reperfusion is most frequent cause. Several clinical and pre-clinical studies about AKI have been developed to verify the pathophysiological mechanisms and the possible pharmacological interventions. The renoprotector effect of some phytomedicine in AKI induced by ischemia in rats model must be highlighted. This study evaluated the effect of Justicia Acuminatissima (sara tudo), plant from the Amazon region with antiinflammatory and antioxidant properties, in experimental model of AKI. Objective: To evaluate renal function, oxidative profile and renal histology in rats submitted to renal ischemia-reperfusion treated with Justicia Acuminatissima. Method: pre-clinical trial with Wistar rats, adult, male (250-350g), divided into groups: SHAM, Ischemia 30 minutes and Ischemia + (sara tudo) (1,0g/Kg, gavage, once). Hemodynamics parameters (medium arterial pressure-MAP; heart rate-HR; renal vascular resistance-RVR and renal blood flow- RBF), renal function - RF (creatinine clearance), oxidative stress (urinary peroxides-UP, thiobarbituric acid reactive substances- TBARS, nitric oxide- NO and thiols in renal tissue) and kidney histological analysis were evaluated. Results: The ischemia group demonstrated a decline on renal function (RF) associated with increase in UP, NO and TBARS and reduction in thiols levels. The pre-treatment with sara tudo resulted in understatement of functional injury, increase of crCl and reduction of oxidative biomarkers (UP, TBARS and NO) and enhancement of thiols levels. Considering renal hemodynamics, the ischemia group demonstrated increase in RVR with the decrease in RBF. The treatment with sara tudo induced significant improvement in these parameters. Histological analysis confirmed edema, infiltrated, flatness and tubular necrosis in ischemia group, while the sara tudo group presented amelioration in these parameters. Conclusion: The renoprotective effect of Justicia Acuminatissima, in ischemic AKI, features significant improvement in renal function, reducing the oxidative damage with positive impact in renal histology.

As células necessitam do contato com outras células e com a matriz extracelular, para a formação de tecidos. As junções gap são estreitos canais que conectam o citoplasma de células adjacentes, promovendo a passagem de íons orgânicos, aminoácidos, nucleotídeos e outros metabólitos. Estas junções são compostas por dois conexons ou hemicanais, que atravessam a membrana plasmática da célula a que pertencem, e são compostos por seis proteínas integrais de membrana denominadas conexinas (Cxs). A Cx43 é a mais expressa, e é fosforilada ao longo do ciclo de vida, sofrendo mudanças conformacionais, resultando em diferentes isoformas (P0, P1 e P2), apresentando propriedades distintas. A Cx43 apresenta-se distribuída em todo o rim adulto. A injúria renal aguda (IRA) é uma síndrome metabólica em que ocorre redução aguda da função renal e rápida diminuição da taxa de filtração glomerular, sendo hipóxia decorrente da isquemia sua causa principal. A restrição de oxigênio e nutrientes, e o acúmulo de metabólitos, resultam na injúria das células epiteliais tubulares. A depleção dos níveis de ATP, aumento nos níveis de cálcio intracelular, alterações na membrana e deformações no citoesqueleto caracterizam esta injúria. A reoxigenação tecidual atua como agressão adicional devido à liberação de radicais livres. Estudos sugerem que a ativação de hemicanais de Cx43, resultante da desfosforilação da proteína, durante depleção de ATP, esteja envolvida na IRA. Este trabalho verificou o envolvimento da Cx43 em modelo murino desta injúria, ocasionada por isquemia/reperfusão. Foram utilizados camundongos machos da linhagem C57BL/6J. A isquemia foi induzida por clampeamento das artérias renais por 45 minutos. A reperfusão ocorreu durante 24 horas após cirurgia. Foram utilizados 6 animais por grupo (isquêmicos, reperfundidos e controle). Após sacrifício, fragmentos dos rins foram submetidos a ensaios de western blot, PCR em tempo real, imuno-histoquímica e imunofluorescência. O modelo experimental foi validado através da dosagem de uréia e creatinina plasmática. As análises estatísticas foram realizadas pela análise de variância (ANOVA), seguido do teste de Bonferroni. Observou-se aumento significativo dos níveis de uréia e creatinina nos animais isquêmicos e reperfundidos, em relação ao controle. A expressão gênica apresentou aumento significativo apenas nos rins de camundongos reperfundidos (1,9 vezes; P<0,01 vs controle). No western blot verificou-se aumento na quantidade da isoforma hiperfosforilada da Cx43 (P2) em rins isquêmicos (2,73 vezes; P<0,05 vs controle), com diminuição significativa nos reperfundidos (2,37 vezes; P<0,05 vs isquêmico). Nas isoformas menos fosforiladas (P1/P0), observou-se aumento nos rins isquêmicos (2,33 vezes; P<0,05 vs controle), com diminuição nos reperfundidos (10 vezes; P<0,01 vs isquêmico). Nos ensaios imuno-histológicos verificou-se diferentes localizações da Cx43 nas células epiteliais de túbulos corticais nos grupos comparados. Nos controles verificou-se distribuição difusa, e nos isquêmicos observou-se intensa marcação em superfície celular apical. Nos rins reperfundidos, a distribuição da Cx43 foi basolateral. As alterações observadas na expressão gênica, fosforilação protéica e distribuição da Cx43 nos rins foram semelhantes às mudanças observadas na isquemia cardíaca. Este estudo mostrou pela primeira vez a regulação da Cx43 em níveis transcricionais e pós-traducionais, e sua localização celular na IRA ocasionada por isquemia/reperfusão, indicando sua participação neste processo. / The cells require contact with other cells and the extracellular matrix for tissue formation. Gap junctions are narrow channels connecting the cytoplasm of two adjacent cells, promoting the passage of inorganic ions, amino acids, nucleotides and other metabolites. These junctions are composed of two conexons or hemichannels, crossing the cell plasma membrane where they belong, and consist of six integral membrane proteins called connexins (Cxs). The Cx43 is the most expressed, and is phosphorylated throughout the life cycle, undergoing conformational changes, resulting in different isoforms (P0, P1 and P2) that have different properties. The Cx43 is distributed throughout the adult kidney. The acute kidney injury (AKI) is a metabolic syndrome that occurs in acute reduction of renal function and rapid decline in glomerular filtration rate. Hypoxia resulting from ischemia is its principal cause. The restriction of oxygen and nutrients, and accumulation of metabolites, result in the injury of tubular epithelial cells. The depletion of ATP levels, increased levels of intracellular calcium, changes in the membrane and cytoskeleton deformation characterize this injury. Reoxygenation tissue acts as additional injury due to release of free radicals. Studies suggest that activation of Cx43 hemichannels, resulting from dephosphorylation of the protein during ATP depletion, is involved in the AKI. This study investigated the involvement of Cx43 in a murine model of this injury, caused by ischemia/ reperfusion. We used male mice of strain C57BL/6J. Ischemia was induced by clamping the renal arteries for 45 minutes. Reperfusion occurred 24 hours after surgery. We used six animals per group (ischemic, reperfused, and sham). After sacrifice, kidney fragments were tested for western blot, real-time PCR, immunohistochemistry and immunofluorescence. The levels of plasma urea and creatinine were measured to validate the experimental model. Statistical analysis was performed by analysis of variance (ANOVA) followed by Bonferroni test. We observed significant increase in serum urea and creatinine in ischemic and reperfused animals compared to sham. Gene expression increased significantly only in the reperfused kidneys (1.9 fold, P <0.01 vs sham). The western blot showed an increase in the amount of hyperphosphorylated isoform of Cx43 (P2) in ischemic kidneys (2.73 times, P <0.05 vs sham), with significant reduction in reperfused (2.37 times, P <0 05 vs ischemic). In the less phosphorylated isoforms (P1/P0), we observed an increase in ischemic kidneys (2.33 times, P <0.05 vs sham), with a decrease in reperfused (10 times, P <0.01 vs ischemic). In immuno-histological tests we verified different locations of Cx43 in the epithelial cells of cortical tubules. In normal kidneys there was patchy distribution, while in ischemic there was intense staining in the apical cell surface. In the reperfused kidney, the distribution of Cx43 was basolateral. The changes in gene expression, protein phosphorylation and distribution of Cx43 in the kidney observed in this study were similar to changes observed in cardiac ischemia. This study showed for the first time the regulation of Cx43 in transcriptional and post-translational levels, and its cellular localization in acute renal failure caused by ischemia/reperfusion, indicating its involvement in this injury.

INTRODUÇÃO: O corte manual da cana-de-açúcar é uma atividade que impõe ao cortador uma elevada carga física, pois requer a execução de movimentos vigorosos, rápidos e repetitivos. Trabalham em condições de elevadas temperaturas ambientais e baixa umidade relativa do ar que, com o uso de vestimentas aumenta risco de sobrecarga térmica, bem como se expõem aos poluentes gerados pela queima da cana-de-açúcar. OBJETIVO: avaliar os efeitos agudos e em longo prazo do trabalho na colheita de cana-de-açúcar queimada nas concentrações da proteína CC16, na função renal e em marcadores inflamatórios sistêmicos, em um grupo de cortadores de cana-de-açúcar. MÉTODOS: Foram avaliados 78 homens, cortadores de cana-de-açúcar empregados em uma usina de açúcar e álcool localizada na Região Oeste do Estado de São Paulo. Eles foram submetidos a avaliações clínicas e à coleta de amostras de sangue e de urina, utilizadas para análises de marcador de toxicidade pulmonar (proteína CC16), de marcadores renais e inflamatórios sistêmicos, em três momentos distintos ao longo do ano: 1) Pré-Safra, (Abril de 2014), no início da jornada de trabalho (7h00min); 2) Três meses após o início da safra, antes e após uma jornada diária de trabalho (7h00min e 16h00min); 3) Após seis meses do início da safra, antes do início da jornada de trabalho (7h00min). Foram realizados registros da concentração de material particulado (MP2,5), temperatura e umidade relativa do ar. RESULTADOS: A concentração de MP2,5 foi de 27,0 (23,0-33,0) ug/m3 e 101,0 (31,0-139,5) ?g/m3 no período da pré-safra e na safra respectivamente. A mediana da temperatura e umidade relativa do ar no período da pré-safra foram de 32,6 (25,4-37,4)°C e 45,4 (35,0-59,7)% respectivamente; no período da Safra foram de 29,7 (24,1-34,0)°C e 54,9 (34,7-63,2)% respectivamente. A idade dos trabalhadores foi de 37,9±11,0 anos, eles cortam, em média, nove toneladas de cana-de-açúcar/dia. Foram observadas reduções agudas e ao longo da safra nas concentrações plasmáticas e urinárias da proteína CC16. Após uma jornada diária de trabalho observou-se evidências de desidratação, queda da filtração glomerular, aumento de biomarcadores de injúria e reparação tubular renal (NGAL, KIM-1, IL-18, calbindina, MCP-1, osteopontina, e TFF-3) e aumento de marcadores inflamatórios sistêmicos (leucócitos, ácido úrico, LDH). Ao longo da safra observou-se aumento significante de cistatina C, ureia, CPK, NGAL e monócitos no sangue e de marcadores urinários como NGAL, MCP-1, TFF-3, fósforo, magnésio e densidade. CONCLUSÃO: O trabalho no corte manual de cana-de-açúcar submete os trabalhadores à sobrecarga física, exposição a poluentes e à elevadas temperaturas. Foi observado efeito agudo e ao longo da safra nas concentrações da proteína CC16, na alteração de biomarcadores inflamatórios sistêmicos, de equilíbrio hidroeletrolítico e na função renal, incluindo alterações de marcadores que sugerem lesão estrutural renal / INTRODUCTION: The manual sugarcane harvesting is an activity that requires considerable physical exertion, involves vigorous, quick, repetitive cutting movements. They work under conditions of high temperatures and low relative air humidity that, with the use of clothing, increases the risk of thermal overload, as well as expose themselves to the pollutants from burning of sugarcane. AIM: To evaluate the short and long-term effects of harvesting burnt sugarcane on the CC16 protein concentrations, renal function, and systemic inflammatory markers in a group of sugarcane cutters. METHODS: A total of 78 sugarcane cutters employed in a sugar-alcohol mill in the state of São Paulo, Brazil were evaluated. They underwent clinical evaluations and the collection of both blood and urine samples, used for analysis of pulmonary toxicity (CC16 protein), renal markers and systemic inflammatory markers performed at three different times throughout the year: 1) In the pre-harvest period (April 2014), at the onset of the working shift (7h00 am); 2) Three months after the onset of the harvest, before and after the daily work shift (7h00 a.m. and 4h00 p.m.); 3) Six months after the onset of the harvest, before the work shift (7h00 am). The concentrations of particulate matter (MP2.5), temperature and relative air humidity were recorded. RESULTS: The concentrations of PM2.5 were 27.0 (23.0-33.0) and 101.0 (31.0-139.5) ?g/m3 in the pre-harvest and harvest periods, respectively. The medians temperature and relative air humidity in the pre-harvest period were 32.6 (25.4-37.4) °C and 45.4 (35.0-59.7) % respectively; in the harvest period were 29.7 (24.1-34.0) °C and 54.9 (34.7-63.2) % respectively. The age of the workers was 37.9 ± 11.0 years, they cut, on average, nine tons of sugarcane/day. Short and long-term reductions in plasmatic and urinary concentrations of CC16 protein were observed. There was an acute increase in the concentrations of markers suggestive of dehydration, decreased glomerular filtration, increased biomarkers of injury and renal tubular repair (NGAL, KIM-1, IL-18, calbindin, MCP-1, osteopontin, and TFF-3 ) and increased systemic inflammatory markers (leukocytes, uric acid, DHL). Six months after the onset of the harvest, a significant increase of cystatin C, urea, CPK, NGAL and monocytes in the blood and urinary markers such as NGAL, MCP-1, TFF-3, phosphorus, magnesium and density were observed. CONCLUSION: The manual sugarcane harvesting exposes workers to physical overload, pollutants and high temperatures. It was observed an acute and chronic effects in the concentrations of CC16 protein, in systemic inflammatory biomarkers, hydroelectrolytic balance and renal function, including changes in markers that suggest renal structural damage