PEREIRA, Samuel Arruda Rodrigues. Adenovírus em infecções respiratórias agudas infantis em Fortaleza-Ce, de 2001 a 2013. 2014. 84 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T16:03:18Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_sarpereira.pdf: 1580211 bytes, checksum: 9d5e0e702f11da8e7784d09fe1eea6f8 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T16:31:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_sarpereira.pdf: 1580211 bytes, checksum: 9d5e0e702f11da8e7784d09fe1eea6f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T16:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_sarpereira.pdf: 1580211 bytes, checksum: 9d5e0e702f11da8e7784d09fe1eea6f8 (MD5) Previous issue date: 2014 / 4 ABSTRACT Human adenovirus (HAdV) is commonly viral agent associated with infections of the respiratory tract, both upper and lower, mainly in children under the age of five. HAdV are cl assified into seven species (A - G) and divided into 54 types. Hexon protein is primarily responsible for inter - and intra - group antigenic variation of the virus. The aim s of this study ware to characterize the periods of circulation and the diversity of species and types of HAdV found in Fortaleza, Ceará - Brazil, for 150 consecutive months (from January 2001 to June 2013). Indirect immunofluorescence assay (IFA) was used for the detection o f HAdV, respiratory syncytial virus, influenza A and B, parainfluenza virus 1, 2 and 3; and direct immunofluorescence assay (DFA) was used for detection of human metapneumovirus (HMPV). PCR and nested PCR followed by sequencing the six hypervariable region s of the hexon gene were used to characterize the species and types of HAdV. HAdV were detected 290 (3.41%) of the 8,517 samples, 60 (20.69%) of those found in coinfection with one, two or three viruses. A total of 190 (65,52%) HAdV were molecularly charac terized: 162 HAdV belonging to species B (85.72%), 21 to HAdV - C (11.11%) and 6 to HAdV - 3 (3, 17%), getting a strain without identification. The species circulated throughout the period the predominance of species B in almost all years analyzed. Seven diff erent types were identified circulating in Fortaleza during the analysis period. The predominant types were 3 (67.73%) and 7 (17.80%). HAdV - 3 was found in all the years and the HAdV - 7 was not observed in years 2006, 2010 and 2011. Only in 2011, all kinds o f species identified C circulated, and the only representative of the species and the HAdV - 4, began to be identified in our population only from 2007. Better understanding of the circulation of HAdV can be achieved if the monitoring is continuous and asso ciated with the use of methods of greater sensitivity in the detection of these viruses. / O adenovírus humano (ADVh) é um agente viral comumente relacionado a infecções do trato respiratório, tanto superior quanto inferior, principalmente em crianças com idade inferior a cinco anos. Os ADVh são classificados em sete espécie (A-G) e divididos em 54 tipos. A proteína hexon é a principal responsável pela variação antigênica inter e intragrupos desse vírus. O objetivo desse estudo foi caracterizar os períodos de circulação e a diversidade de espécie e tipos de ADVh encontrados em Fortaleza, Ceará – Brasil, durante 150 meses consecutivos (janeiro de 2001 a junho de 2013). A imunofluorescência indireta (IFI) foi utilizada para a detecção dos ADVh, vírus sincicial respiratório, influenza A e B, parainfluenza 1, 2 e 3, já a imunofluorescência direta (IFD) foi utilizado na detecção do metapneumovírus humano (MPVh) . A PCR e Nested-PCR seguida do sequenciamento das seis primeiras regiões hipervariável do gene Hexon foram utilizadas para caracterizar as espécies e tipos dos ADVh. Os ADVh foram detectados 290 (3,41%) das 8.517 amostras, sendo 60 (20,69%) destas encontradas em coinfecção com um, dois ou três vírus. Um total de 190 (65,52%) ADVh foram molecularmente caracterizados, sendo 162 pertencente à espécie ADVh-B (85,72%), 21 à ADVh-C (11,11%) e 6 à ADVh-E (3,17%), ficando um cepa sem identificação. As espécies circularam durante todo o período analisados sendo observado o predomínio da espécie B em quase todos os anos. Sete diferentes tipos foram identificados circulando em Fortaleza durante o período analisado. Os tipos predominantes foram o 3 (67,73%) e o 7 (17,80%). O ADVh-3 foi encontrado em todos os anos, já o ADVh-7 não foi observado nos anos de 2006, 2010 e 2011. Somente em 2011 todos os tipos identificados da espécie C circularam, e o único representante da espécie E, o ADVh-4, começou a ser identificado na nossa população apenas a partir de 2007. O melhor conhecimento da circulação de ADVh poderá ser alcançado se a vigilância for contínua e associada ao uso de métodos de maior sensibilidade na detecção desses vírus.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Grandes avanços no desenvolvimento de metodologias laboratoriais para a investigação de vírus respiratórios tem ocorrido nos últimos anos. No primeiro experimento, mostramos que as técnicas de RT-PCR, "shell vial" e isolamento viral em cultura de células obtiveram limites de detecção de Influenza A e B comparáveis, mas todos os testes rápidos comerciais avaliados tiveram baixo desempenho. Em segundo experimento, foram comparadas diferentes técnicas para a detecção de vírus respiratórios em 412 amostras de lavado nasal coletados de adultos com infecção respiratória aguda (2001-¬2003). As técnicas de RT-PCR e imunofluorescência direta (IFD) foram comparadas com 0 isolamento de Influenza A e B em cultura de células. A concordância geral entre os três ensaios foi de 96 por cento, sendo a sensibilidade obtida para a RT-PCR de 92,3 por cento e a especificidade de 98,5 por cento e para a IFD os valores de 93,6 por cento e 97,2 por cento, respectivamente. Para a detecção de Adenovírus foram comparados os testes de PCR, nested-PCR e IFD, sendo obtida positividade (4,1 por cento) somente na nested-PCR. Amostras negativas nos ensaios anteriores foram submetidas a detecção de Metapneumovirus humano por imunofluorescência indireta (IFI) em comparação com a RT-PCR e demonstrou sensibilidade de 45 por cento. Os ensaios de IFD e RT-PCR demonstraram boa ap1icação na rotina diagnóstica de Influenza, mas os testes rápidos devem ser aplicados com cautela. Para a detecção de Adenovírus e Metapneumovirus humano os ensaios de imunofluorescência obtiveram baixos desempenhos, devendo ser aplicado as metodologias moleculares para esse vírus / Laboratory tests performance for respiratory viruses has shown substantial increase in the past years. A first step experiment for comparison of influenza virus limit of detection resulted in similar values for RT-PCR, shell vial and cell cultures methods, but worse values for all commercial rapid antigen detections kits evaluated with same control strains. In a second step, 412 nasal washes from adults presenting with acute respiratory symptoms (2001-2003) were submitted to comparative studies for respiratory viruses detection. A duplex RT-PCR and direct immunofluorescence (DFA) assays were compared to Influenza A and B virus isolation (reference method) in MDCK cells. The overall concordance between the three assays was 96%. RT-PCR reached 92.3% sensitivity and 98.5% specificity and for DFA the corresponding values were 93.6% and 97.2%, respectively. A PCR, nested-PCR, and DFA assays were evaluated for detection of Adenovirus and positivity (4.1%) were only obtained on Nested-PCR. Selected negative samples were evaluated for human Metapneumovirus by indirect fluorescence assay (IFA) in comparison with RT-PCR and sensitivity was 45%. DFA and RT-PCR could be applied in different routine sets for influenza diagnosis and rapid antigen detection kits may be used with caution. For Adenovirus and Metapneumovirus fluorescence assays detection were disappointed and molecular tests are recommended for these viruses. / FAPESP: 01/125796 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

MESQUITA, Jacó Ricarte Lima de. Perfil clínico-epidemiológico de Infecções respiratórias agudas causadas por adenovírus em crianças atendidas em hospital de referência da cidade de Fortaleza - CE. 2007. 129 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2007. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-04T16:52:46Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_jrlmesquita.pdf: 2245768 bytes, checksum: 086a0b17335d4e5f2a595a2fb4c67791 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:24:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_jrlmesquita.pdf: 2245768 bytes, checksum: 086a0b17335d4e5f2a595a2fb4c67791 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:24:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_jrlmesquita.pdf: 2245768 bytes, checksum: 086a0b17335d4e5f2a595a2fb4c67791 (MD5) Previous issue date: 2007 / Adenoviruses (Ad) are important etiological agents of acute respiratory infections (ARI) in children, particularly between six months and five years old. This was a retrospective study, whose objectives were: to perform clinical and epidemiologic profile of adenoviral respiratory infections in children attended in Hospital Infantil Albert Sabin, in the city of Fortaleza, from January 2001 to December 2006; to observe the detection frequency of Ad in cases of ARI in children attended in that hospital; to describe the main clinical features of adenoviral respiratory infections; to search for the existence of a seasonal pattern of adenoviral infections in the city of Fortaleza; to determine the isolation rate of Ad in HEp-2 cell lines inoculated with samples of nasopharyngeal secretions (NPS) considered positive to Ad by indirect immunofluorescence (IIF); and to create a collection of Ad strains for future studies on antigenic and genomic diversity of these agents. NPS samples of 3,070 children with ARI up to seven days of the onset of symptoms were collected. IIF was applied to all of the samples, and among them, 54 were positive to Ad. Forty one of those positive samples were inoculated into HEp-2 cells, resulting in 32 viral isolations. Other 103 randomly choosen negative samples were also inoculated, resulting in more three isolations, reaching the number of 57 confirmed cases of Ad infections. The detection frequency of Ad was 1.86% of total number of cases of ARI and 6.1% of cases of viral ARI. It was not observed any seasonal pattern or correlation to rainy or dry season. Most cases of adenoviral ARI occurred in children aged seven to 24 months, representing 63.15% of cases. Ad ARI was observed mainly in children attended in the out-patient facility (50.88%), and the predominant diagnosis was upper respiratory tract infection (70.18%). The main clinical features in Ad patients were fever, cough, rhinorrhea, anorexia, vomiting or diarrhea, nasal obstruction, and dyspnea. The main therapeutic management for Ad patients was use of nebulization (about 42% of patients) / Os adenovírus (Ad) são agentes importantes de infecções respiratórias agudas (IRAs) em crianças, especialmente entre seis meses e cinco anos de idade. Este foi um estudo retrospectivo que teve como objetivos: estabelecer o perfil epidemiológico e clínico das infecções respiratórias agudas causadas por Ad em crianças atendidas no Hospital Infantil Albert Sabin, na cidade de Fortaleza, no período de janeiro de 2001 a dezembro de 2006; observar a freqüência de detecção de Ad em casos de IRAs em crianças atendidas nesse hospital; descrever as principais características clínicas das infecções respiratórias causadas por Ad; pesquisar a existência de padrão de sazonalidade do Ad na cidade de Fortaleza; determinar a taxa de isolamento do Ad em cultura de células HEp-2 inoculadas com amostras de secreções de nasofaringe (SNF) consideradas positivas para Ad por imunofluorescência indireta (IFI); e criar um banco de cepas de Ad para futuros estudos sobre diversidade antigênica e genômica desses agentes. Foram coletadas nesse período, amostras de SNF de 3070 crianças com até sete dias de sintomas de IRA. Todas as amostras foram submetidas a IFI e, dessas, 54 se mostraram positivas para Ad. Quarenta e uma dessas amostras positivas foram inoculadas em monocamadas de células HEp-2, obtendo-se isolamento viral em 32 delas. Outras 103 amostras negativas por IFI, escolhidas aleatoriamente, foram inoculadas, resultando em três isolamentos adicionais, totalizando 57 casos confirmados de infecção por Ad. A freqüência de detecção de Ad foi de 1,86% em relação ao total de casos de IRAs e 6,1% das IRAs virais. Não foi observado um padrão de sazonalidade nem correlação com período chuvoso ou seco. A maior parte das IRAs por Ad ocorreu em crianças na faixa etária entre sete e 24 meses com 63,15% dos casos. As IRAs por Ad foram observadas principalmente em crianças atendidas em ambulatórios (50,88%), e o diagnóstico predominante foi a infecção de vias aéreas superiores (70,18%). Os principais sintomas e sinais apresentados pelos pacientes com IRA por Ad foram febre, tosse, coriza, anorexia, vômitos e/ou diarréia, obstrução nasal e dispnéia. A principal conduta terapêutica aplicada em casos de IRAs por Ad foi o uso de aerossol / salbutamol (42,11%)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-03-04T20:33:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 313813.pdf: 1957580 bytes, checksum: c466ffed4187341cf53bf6eaeeb68449 (MD5) / Dentre os patógenos humanos de veiculação hídrica, destacam-se os vírus de transmissão fecal-oral, como é o caso dos adenovírus (HAdV), rotavírus-A (RVA), vírus da hepatite A (HAV) e urino-oral como o poliomavírus (JCPyV). Estes vírus estão envolvidos, principalmente em episódios de gastroenterites, podendo causar ainda infecções respiratórias, conjuntivites, meningite asséptica, encefalites e sérias complicações em pacientes imunocomprometidos, além do que, possuem a característica de serem estáveis e permanecerem longos períodos no ambiente e por isso são apontados como potenciais indicadores ambientais de contaminação por efluentes humanos. Nesse contexto, a hipótese desse estudo foi que os vírus de transmissão fecal e urinária são prevalentes nas águas de consumo humano, não possuem correlação com perfis físico-químicos e de nutrientes, além de possuírem potencial infeccioso. Assim os principais objetivos desse trabalho foram: 1) Estudar a incidência de HAdV, JCPyV, HAV e RVA em águas de mananciais superficiais utilizadas para consumo humano; 2) Analisar a correlação viral com parâmetros físico-químicos e de nutrientes da água; 3) Estudar a relação da sazonalidade com a presença de contaminação viral 4) Avaliar a integridade, infecciosidade e realizar estudos filogenéticos de HAdV nas matrizes aquáticas estudadas. Três sítios de coletas, na cidade de Florianópolis-SC, foram selecionados: Sítio 1) Lagoa do Peri (em quatro Micro-ambientes (MA): i) MA1 centro ii), MA2 local preservado, iii) MA3 local degradado e iv) MA4 local de coleta de água para consumo humano e atividades recreacionais); Sítio 2) Fonte/Nascente natural de água, utilizada para consumo humano sem tratamento prévio e Sítio 3) Solução Alternativa de Abastecimento Coletivo (SAC), água utilizada para abastecimento humano, previamente clorada. Para as análises virais, dois litros de água foram coletados mensalmente, durante um ano e processadas (método de adsorção-eluição e reconcentração em dispositivo Centriprep®). Posteriormente, o material genético foi extraído e a presença e quantificação viral determinada por qPCR. As análises físico-químicas e de nutrientes das águas contemplaram todos os Micro-ambientes da Lagoa do Peri (físico-químicas foram realizadas in situ, utilizando Sonda Multiparâmetros (YSI-85) e as de nutrientes determinadas em laboratório). Os HAdVs detectados nas amostras provenientes do Micro-ambiente 4 da Lagoa do Peri, Fonte/Nascente e da SAC foram avaliados quanto a sua integridade (por meio de tratamento com enzimático com DNAse), infecciosidade (por meio do ensaio de placa de lise (EPL) e por cultura celular integrada ao RT-qPCR (ICC-et-RT-qPCR), bem como submetidos a estudos filogenéticos. Das amostras analisadas 93% (67/72) foram positivas para HAdV, 45,8% (33/72) para RVA, 13,8% (10/72) para JCPyV e 12,5% (9/72) para HAV. A distribuição sazonal viral foi determinada e o HAdV mostrou-se o mais prevalente em todas as estações. Os estudos físico-químicos e de nutrientes nos MAs da Lagoa do Peri não apresentaram diferenças espaciais significativas, concluindo que a lagoa é homogênea em sua coluna d'água. Quanto a correlação viral com parâmetros físico-químicos e de nutrientes, apenas JCPyV e nitrito correlacionaram-se positivamente no MA4. A integridade e infecciosidade de HAdV foi determinada, sendo que nas amostras do MA4 da Lagoa do Peri 83% (10/12) continham partículas íntegras, 66% ( 8/12) infecciosas por EPL e 75% (9/12) infecciosas por ICC-et-RT-qPCR; Na Fonte/Nascente 66% (8/12) continham partículas íntegras, 33% (4/12) infecciosas por EPL e 58% (7/12) infecciosas por ICC-et-RT-qPCR; Na SAC 58% (7/12) continham partículas de HAdV íntegras, 8% (1/12) infecciosas por EPL e 25% (3/12) infecciosas por ICC-et-RT-qPCR. Os estudos filogenéticos de HAdV demonstraram que o sorotipo circulante prevalente foi o 2 (HAdV-2 respiratório). Em conclusão, estes resultados demonstraram a fragilidade do sistema de segurança sanitária, principalmente em águas de mananciais superficiais utilizadas para abastecimento e consumo da população. Frente a ampla distribuição e persistência dos vírus de veiculação hídrica, há necessidade de implementar o monitoramento e remoção viral no processo de potabilização da água, o que traria reflexos positivos na manutenção da saúde humana e ambiental

Made available in DSpace on 2016-05-11T13:01:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 ana_teixeira_ioc_dout_2014.pdf: 2210367 bytes, checksum: 5beb9168ee6e8a292a1d6f9e977c6f99 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os fômites desempenham um papel importante na disseminação de diferentes patógenos, em ambientes hospitalares. Atualmente, o Programa Nacional de Controle de Infecção Hospitalar (PCIH) dispõe sobre a obrigatoriedade dos hospitais manterem uma Comissão de Controle de Infecções Hospitalares (CCIH) para execução do controle das infecções adquiridas durante as hospitalizações. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel de vírus gastroentéricos, não incluído nestas normas, como potenciais marcadores biológicos de contaminação hospitalar. Com este propósito foram realizados estudos para demonstrar a disseminação e a infecciosidade de rotavírus da espécie A (RVA) e adenovírus humanos (HAdV) em superfícies e fômites de unidades de tratamentos intensivos (UTI) adulto e neonatal e enfermaria pediátrica da rede privada e pública. O primeiro estudo realizado em uma UTI de adultos detectou HAdV em 44,7% (63/141) dos fômites investigados com carga viral variando entre 2,48 x 101 e 2,1 x 103 cópias genômicas por mililitro (gc/mL), incluindo uma contaminação mista com HAdV e RVA. Pode-se observar uma diminuição significativa no percentual de detecção de HAdV (p <0,05) a partir de intervenções realizadas no processo de limpeza e desinfecção da UTI de adultos da rede privada. Embora a detecção de HAdV tenha sido significativamente maior (p <0,05) que RVA nos primeiros dois meses do estudo, os RVA apresentaram uma maior carga viral Tanto os HAdV quanto os RVA coletados dos fômites hospitalares puderam ser isolados em cultura celular, indicando que os vírus permanecem infecciosos nessas superfícies, apesar dos processos de desinfecção utilizados. Os dados referentes às unidades hospitalares infantis da rede pública revelaram uma maior taxa de detecção de HAdV [26,6% (128/480)] quando comparada com RVA [3,4% (16/480)] (p <0,001). Na unidade de terapia intensiva neonatal, 4,5% (7/156) das amostras foram positivas. Na enfermaria pediátrica, 42,3% foram positivas (137/324), sendo 4,3% (14/324) RVA positivas e 38% (123/324) HAdV positivas. Realizou-se uma avaliação da metodologia utilizada, determinando a recuperação de vírus a partir de superfícies porosas (fórmica porosa e emborrachado) e não porosas (fórmica lisa). A metodologia de amostragem por swab utilizada para coleta das amostras a partir dos fômites foi avaliada e a análise por PCR quantitativa (qPCR) revelou uma eficiência de recuperação variável, entre 0,6 e 77% de acordo com os vírus e as superfícies testadas. PP7 e MNV-1 foram recuperados em 100% das superfícies (P e NP) contaminadas artificialmente e indicou o MNV-1 como potencial controle interno para o monitoramento de todas as etapas da metodologia utilizada Concluindo, os resultados apontam os HAdV como potenciais marcadores de contaminação hospitalar, uma vez que: i) as superfícies analisadas apresentaram uma maior contaminação por estes vírus; ii) foi comprovada a infecciosidade destas amostras; iii) esses vírus podem ser isolados mais facilmente em culturas celulares. O monitoramento de fômites hospitalares mostra-se fundamental para demonstrar a dispersão dos vírus no ambiente hospitalar, podendo contribuir de forma mais eficaz na avaliação da qualidade microbiológica dos ambientes hospitalares, na elucidação de surtos hospitalares e, principalmente, na tomada de medidas eficazes para a prevenção e tratamento de doentes / Hospital fomites can play an important role in the spread of pathogens such as gastroenteric virus. Currently, the National Program of Hospital Infection Control requires hospitals to maintain a Committee of Nosocomial Infection Control for preventing infections acquired during hospitalization. In this context, the aim of this study was to evaluate the role of gastroenteric viruses as potential biomarkers of hospital contamination. For this purpose studies were performed to demonstrate the spread and infectivity of rotavirus species A (RVA) and human adenoviruses (HAdV) on surfaces and fomites of two hospitals: one private and one public, including adult, neonatal-Intensive care units (ICU) and pediatric ward. The first study conducted in an adult ICU, detected HAdV in 44.7% (63/141) of investigated fomites, with the viral load ranging from 2.48 x 101 to 2.1 x 103 genomic copies per milliliter (gc/mL), including a mixed contamination with HAdV and RVA. Furthermore, it can be observed a significant decrease in the percentage of detection of HAdV (p <0.05) from the cleaning and disinfection interventions of the adult ICU, similar to that previously observed for RVA. Although the detection of HAdV was significantly higher (p <0.05) than the RVA at the first two months of the study, the RVA showed a higher viral load. Both the RVA as HAdV collected from hospital fomites could be isolated in cell culture, indicating that those viruses remain infectious at this surfaces despite the disinfection processes used. Data regarding pediatric's public hospitals revealed a higher detection rate of HAdV [26.6% (128/480)] compared to RVA [3.4% (16/480)] (p <0.001). Only 4.5% (7/156) of the samples were positive in the neonatal intensive care unit. In the pediatric ward, 42.3% were positive (137/324), 4.3% (14/324) RVA positive samples and 38% (123/324) HAdV positive samples. Additionally, it was performed an evaluation of the methodology used in this study, determining the recovery of virus from porous surfaces (porous formica and rubber) and nonporous (nonporous formica) using murine norovirus 1 (MNV-1) and bacteriophage PP7 as internal process controls. The swab sampling methodology used for collecting samples from fomites was evaluated, quantitative PCR (qPCR) showed variable recovery efficiency, between 0.6 and 77% according to viruses and surfaces tested. PP7 and MNV-1 were recovered in 100% of the artificially contaminated surfaces (P and NP), and the MNV-1 was indicated as a potential internal control to monitor all stages of the methodology. In conclusion, the results indicate the HAdV as potential markers of nosocomial infection, since: i) the studied surfaces showed greater HAdV contamination; ii) the infectivity of these samples was proven; iii) these viruses can be more easily isolated in cell cultures. Therefore, the monitoring of hospital fomites proven to be crucial and helps to enhance the dispersion of the virus in the hospital environment, and could contribute more effectively in the evaluation of the microbiological quality of the hospital environment, at the elucidation of hospital outbreaks, and especially in the measured of prevention and treatment of patients.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:30Z : No. of bitstreams: 1 Publico-00376a.pdf: 1954101 bytes, checksum: ab9812845158d2c4c296f255d1304dac (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:30Z : No. of bitstreams: 2 Publico-00376a.pdf: 1954101 bytes, checksum: ab9812845158d2c4c296f255d1304dac (MD5) Publico-00376b.pdf: 1910033 bytes, checksum: 3104d18a155b521c486f36410aae2b4c (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:30Z : No. of bitstreams: 3 Publico-00376a.pdf: 1954101 bytes, checksum: ab9812845158d2c4c296f255d1304dac (MD5) Publico-00376b.pdf: 1910033 bytes, checksum: 3104d18a155b521c486f36410aae2b4c (MD5) Publico-00376c.pdf: 1815310 bytes, checksum: ed9fd0e797e536bfb039209f57c2ba21 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:30Z : No. of bitstreams: 4 Publico-00376a.pdf: 1954101 bytes, checksum: ab9812845158d2c4c296f255d1304dac (MD5) Publico-00376b.pdf: 1910033 bytes, checksum: 3104d18a155b521c486f36410aae2b4c (MD5) Publico-00376c.pdf: 1815310 bytes, checksum: ed9fd0e797e536bfb039209f57c2ba21 (MD5) Publico-00376d.pdf: 1673355 bytes, checksum: 0f8e3c112d9bf024a9c7e52fb4859991 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:31Z : No. of bitstreams: 5 Publico-00376a.pdf: 1954101 bytes, checksum: ab9812845158d2c4c296f255d1304dac (MD5) Publico-00376b.pdf: 1910033 bytes, checksum: 3104d18a155b521c486f36410aae2b4c (MD5) Publico-00376c.pdf: 1815310 bytes, checksum: ed9fd0e797e536bfb039209f57c2ba21 (MD5) Publico-00376d.pdf: 1673355 bytes, checksum: 0f8e3c112d9bf024a9c7e52fb4859991 (MD5) Publico-00376e.pdf: 1965795 bytes, checksum: 373c9589bb7d477fe5d31f7838237e5b (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:31Z : No. of bitstreams: 6 Publico-00376a.pdf: 1954101 bytes, checksum: ab9812845158d2c4c296f255d1304dac (MD5) Publico-00376b.pdf: 1910033 bytes, checksum: 3104d18a155b521c486f36410aae2b4c (MD5) Publico-00376c.pdf: 1815310 bytes, checksum: ed9fd0e797e536bfb039209f57c2ba21 (MD5) Publico-00376d.pdf: 1673355 bytes, checksum: 0f8e3c112d9bf024a9c7e52fb4859991 (MD5) Publico-00376e.pdf: 1965795 bytes, checksum: 373c9589bb7d477fe5d31f7838237e5b (MD5) Publico-00376f.pdf: 1677823 bytes, checksum: d93d3b40f2c273e474e7fef525f351c8 (MD5) / E2F1 pertence a uma família de fatores de transcrição e possui papel central no controle da expressão de genes relacionados à regulação da proliferação celular, pois ativa genes que participam da síntese de DNA. A atividade de E2F1 é regulada por meio da proteína pRB que, quando fosforilada por quinases associadas à ciclinas (Ciclinas/CDK) libera este fator de transcrição, promovendo assim a proliferação. A disfunção da complexa via de regulação da divisão celular pode acarretar em proliferação exacerbada, sendo a superexpressão de E2F1 bastante comum em diferentes tipos de tumores. Este fenômeno pode ser o principal fator para a alta proliferação de células tumorais. Desta forma, a inibição da atividade de E2F1 através de RNA de interferência (RNAi) pode ser promissora como tratamento para a diminuição da proliferação de células de melanoma. Assim sendo, objetiva-se neste trabalho inativar por RNAi o gene E2f1 em células B16mCAR, derivadas de melanoma de C57BL/6 e que superexpressam o receptor CAR, e averiguar os efeitos de sua ausência na proliferação celular, tanto in vitro como in vivo. / E2F1 belongs to a family of transcription factors and plays a central role in controlling the expression of genes related to regulation of the cell-cycle progression, since it activates genes involved in DNA synthesis. The activity of E2F1 is regulated by pRB protein, that when phosphorylated by cyclin-dependent kinases cyclins (Cyclins/CDK) releases this transcription factor, thereby promoting proliferation. The dysfunction of the complex regulatory pathway of cell division can lead to excessive proliferation, which overexpression of E2F1 is quite common in different types of tumors. This phenomenon may be the main factor for the high proliferation of tumor cells. Thus, inhibition of E2F1 activity by RNA interference (RNAi) may be promising as a treatment for decreased proliferation of melanoma cells. Therefore, the purpose of this work is the inactivation of the E2f1 gene through RNAi in B16mCAR cells, derived from C57BL/6’s melanoma and overexpresses the CAR receptor, and also verifies the effects of its absence on cell proliferation in vitro and in vivo. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-29T11:10:52Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hugo César Pereira Santos - 2015.pdf: 3535564 bytes, checksum: 4fc7d88b1da6008bc42c01f46e4f8d7a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-29T11:20:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hugo César Pereira Santos - 2015.pdf: 3535564 bytes, checksum: 4fc7d88b1da6008bc42c01f46e4f8d7a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-29T11:20:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hugo César Pereira Santos - 2015.pdf: 3535564 bytes, checksum: 4fc7d88b1da6008bc42c01f46e4f8d7a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-19 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The human adenoviruses (HAdV) infect people of all ages worldwide, causing a wide range of clinical syndromes, depending on the viral type. In immunocompromised hosts, as transplanted patients, HAdV infection can result in a bad prognosis. Some aspects of viral pathogenesis, such as the association between viremia and/or viral load with disseminated disease and the optimal moment to start the therapy, are still not well established in adult patients that have undergone allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (ASCT). Therefore, the main objective of this study was to monitor ASCT recipients for HAdV occurrence, and also correlate viral positivity, viral load and molecular variant with clinical symptoms and patients’ prognosis. For this, stool and serum from 21 patients were monitored in a 2 years period (from October/2012 to October/2014). Serum and fecal samples were screened by Nested-PCR, using primers targeting a partial region of the hexon gene (143bp). Fecal samples were further screened by a commercial enzyme immunoassay (EIA). In total, 57% of the patients had at least one positive sample (serum or stool) for HAdV. Patients presented high viral load (varying from 7,7x103 to 2x108 copies/mL), with a higher viral load in stool when compared to serum. Positive samples were submitted to genomic sequencing, revealing the occurrence of HAdV from C, D and F species. The main clinical symptom presented by infected patients was diarrhea, and graft-versus-host disease was the main intercurrence; however it was not possible to directly associate viral positivity to cause of death. We hope to contribute for a better understanding of the HAdV infection pattern in patients submitted to ASCT. Our data highlights the importance of the inclusion of HAdV testing in the routine laboratory exams of this group of patients. / Os adenovírus humanos (HAdV) podem infectar pessoas de todas as idades, causando uma ampla gama de quadros clínicos. Em pacientes imunocomprometidos, como os indivíduos que receberam transplante, a infecção por esses vírus pode resultar em pior prognóstico para o paciente. Determinados aspectos da patogenia viral, como a associação entre viremia e/ou carga viral com a doença disseminada, bem como o melhor momento para o início da terapia, não estão ainda bem esclarecidos em pacientes que foram submetidos ao transplante de células progenitoras hematopoiéticas (TACPH), principalmente em indivíduos adultos. Dessa forma, o principal objetivo deste estudo foi realizar o monitoramento da infecção por HAdV e a caracterização molecular das variantes virais em pacientes submetidos ao TACPH, bem como determinar a carga viral e correlacionar a infecção com o quadro clínico e prognóstico dos pacientes. Foram analisadas amostras de soro e fezes de 21 pacientes submetidos ao TACPH no período de dois anos (de outubro/2012 a outubro/2014). As amostras de fezes foram triadas por ensaio imunoenzimático e por Nested-PCR, enquanto as amostras de soro foram triadas somente por Nested-PCR de uma região parcial do gene hexon (produto esperado de 143 pb). Foram detectadas amostras positivas de soro e/ou fezes de 57% dos pacientes. De forma geral, os pacientes do presente estudo apresentaram elevadas cargas virais (variando de 7,7x103 à 2x108 CG/mL), que foram mais elevadas nas fezes. As amostras positivas foram submetidas ao sequenciamento genômico e resultados revelaram a ocorrência de adenovírus das espécies C, D e F. O principal quadro clínico apresentado pelos pacientes foi a diarreia e a principal intercorrência observada, a doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH). Dez pacientes foram a óbito durante o período de estudo, entretanto, não foi possível associar a infecção por HAdV diretamente à causa mortis. Esperamos que os dados obtidos possam auxiliar no melhor entendimento do padrão da infecção dos HAdVs em pacientes submetidos ao TACPH, de forma a contribuir para que a pesquisa de adenovírus seja incluída na rotina de exames desses pacientes.

Orientadores: Clarice Weis Arns, Fernando Rosado Spilki / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T19:38:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_LucianaHelenaAntoniassida_D.pdf: 3352165 bytes, checksum: 1c8836441214fc41a7890899268f1163 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Os membros da família Paramyxoviridae são vírus que causam infecções em humanos e animais de importância econômica global. Entre os membros desta família incluem patógenos de importância mundial para os humanos, como o vírus respiratório sincicial humano (hRSV), o metapneumovírus humano (hMPV) e vírus de importância em Medicina Veterinária, como o vírus respiratório sincicial bovino (bRSV) e o metapnemovírus aviário (aMPV). Os membros da família Paramyxoviridae, subfamília Pneumovirinae são vírus envelopados, não-segmentados dotados de genoma de RNA de fita simples com sentido negativo. Na primeira parte do estudo, desenvolvemos um adenovírus recombinante expressando a proteína F do aMPV. A expressão da proteína F foi determinada por Western Blot. Os níveis de transcrição do gene F foram avaliados por RT-PCR em tempo real, em células HEK-293 e células HEP-2. Foi realizada a imunização experimental de Ad-aMPV-F e foi analisada a indução de resposta de anticorpos em camundongos BALB/c. Os títulos de anticorpos neutralizantes foram detectados após a imunização com Ad-aMPV-F. Na segunda parte do trabalho o objetivo foi à construção de adenovírus recombinantes expressando a proteína F do bRSV. A proteína F parece ser um antígeno ideal para fins de diagnóstico. Utilizando anticorpo anti-V-5, uma banda de ~90 kDa foi detectada no sobrenadante de cultura de células HEK-293 infectadas com Ad-bRSV-F. Na terceira parte do estudo, o objetivo foi à construção de dois vetores adenovirais expressando as proteínas G do aMPV e bRSV, a expressão destas proteínas em células HEK-293 infectadas foi analisada pela expressão do gene repórter, da proteína verde fluorescente (GFP) / Abstract: The members of the family Paramyxoviridae are viruses that cause infectious in human and animals of importance to global economics. Among the member of this family include pathogens of importance global for humans such as human respiratory syncytial virus (hRSV), the human and metapneumovirus (hMPV) and of viruses importance in veterinary medicine, such as bovine respiratory syncytial virus (bRSV) and avian metapnemovírus (aMPV). The members of the Paramyxoviridae are enveloped, non-segmented viruses, with negative-sense single stranded genomes. In the first part of the study, we developed a recombinant adenovirus expressing the F protein of AMPV. The expression of F gene was determined by Western Blot. The levels of transcription were evaluated by RT-PCR in real time in HEK-293 cells and HEP-2 cells. Immunization experiment was carried out Ad-AMPV-F was analyzed and the induction of antibody response in BALB/c mice. The neutralizing antibody titers detected after immunization with Ad-AMPV-F. In the second part, the objective was to construct recombinant adenoviruses expressing the F protein of bRSV. Protein F appears to be an ideal antigen for diagnostic purposes. Using the anti-antibody AdV-5, a single band of ~ 90 kDa was detected in the culture supernatant in 293 cells infected with Ad-bRSV-F. In the third part of the study, the objective was to build two adenoviral vectors expressing the G protein of aMPV and bRSV and the expression of these proteins in infected HEK-293 cells were analyzed for expression of the reporter gene, green fluorescent protein (GFP) / Doutorado / Microbiologia / Doutora em Genética e Biologia Molecular