Diss. (sammanfattning) Alnarp : Sveriges lantbruksuniv. / Härtill 4 uppsatser.

Universiẗat, Diss--Karlsruhe, 2002.

Stuttgart, Univ., Diss., 2004.

Stuttgart, Univ., Diss., 2006.

Thesis (Ph. D.)--University of Chicago, Dept. of Chemistry, December 2000. / Includes bibliographical references. Also available on the Internet.

Techn. Universiẗat, Diss., 2003--Berlin.

Thesis (Ph.D. (Biochemistry, Microbiology & Biotechnology)) - Rhodes University, 2007.

O objetivo do presente trabalho foi otimizar o sistema de transformação genética de embriões somáticos de soja [Glycine max (L.) Merr.] utilizando a biolística e o sistema Agrobacterium de maneira integrada. Os antibióticos, adicionados ao meio de cultura para supressão da bactéria após a transferência do transgene, foram o alvo do estudo. Inicialmente, comparou-se o efeito de diferentes tratamentos com antibióticos sobre o tecido embriogênico de soja e sua eficiência na supressão da linhagem LBA4404 de Agrobacterium tumefaciens durante o processo de transformação. A carbenicilina (500 mg/l) apresentou efeitos diferentes sobre o tecido vegetal das duas cultivares testadas. Os tecidos embriogênicos da cv. IAS5 não apresentaram diferenças significativas em relação ao controle, enquanto que a proliferação dos embriões somáticos da cv. Bragg foi três vezes maior com a adição deste antibiótico ao meio de cultura. Contudo, a presença da carbenicilina nas duas concentrações testadas (500 e 1000 mg/l) não foi eficiente para supressão de Agrobacterium. Por outro lado, nos tratamentos com cefotaxima sozinha (350 e 500 mg/l), ou cefotaxima (250 mg/l) + vancomicina (250 mg/l) esta bactéria foi completamente suprimida da superfície dos embriões somáticos após 49 dias de tratamento. No entanto, enquanto a presença de cefotaxima, em qualquer concentração, foi prejudicial à sobrevivência do tecido embriogênico, a combinação de cefotaxima + vancomicina não afetou significativamente os embriões somáticos de soja até os 63 dias de tratamento. Portanto, os resultados indicam que o tratamento com cefotaxima + vancomicina por um período de 49 - 63 dias é o mais adequado para a transformação genética de soja, por suprimir Agrobacterium e apresentar mínimos efeitos sobre o tecido embriogênico. Por fim, conjuntos de embriões somáticos de soja foram transformados e tratados com a combinação recomendada de antibióticos para avaliação da eficiência do método na obtenção de transformantes estáveis. Foram obtidos 48 e 232 clones higromicina-resistentes para Bragg e IAS5, respectivamente. Para cv. Bragg, 26 plantas foram obtidas de um único clone, enquanto 580 plantas foram regeneradas de 105 clones da cv. IAS5. As plantas transgênicas eram férteis e morfologicamente normais. A presença do transgene no genoma destas plantas foi confirmada por análises moleculares. Portanto, a adequação dos antibióticos permitiu o desenvolvimento de um método de transformação altamente eficiente para soja. Os resultados do presente trabalho constituem o primeiro registro (1) do efeito de antibióticos sobre tecidos de soja ou de leguminosas e (2) de obtenção de transformantes estáveis de soja utilizando a biolística e o sistema Agrobacterium de maneira integrada.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-24T12:12:21Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1281900 bytes, checksum: 4472f78480864646e3d483fe0dffb30a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T12:12:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1281900 bytes, checksum: 4472f78480864646e3d483fe0dffb30a (MD5) Previous issue date: 1999-12-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Foram realizados dois trabalhos no laboratório de testes de progênie do Departamento de Fitotecnia da Universidade Federal de Viçosa, em Viçosa-MG. Um com a finalidade de desenvolver um protocolo de transformação de plantas de mandioca (Manihot esculenta Crantz) via Agrobacterium rhizogenes resistente à canamicina, e o outro para avaliar o efeito de fotoperíodo, filtros coloridos, nitrato de amônio, 2,4-D, picloram, ABA, AgNO 3 e STS na micropropagação de plântulas de mandioca. Na transformação da mandioca foram testados: a) meio seletivo com canamicina (0,0; 100; 200; 300; 400; 500; 600; 700; 800; 900; e 1.000 mg/L), b) influência da idade e luz nos discos foliares co-cultivados com a bactéria, c) efeito do ANA (0,0; 0,1; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; e 5,0 mg/L) no co- cultivo, d) efeito de concentrações de BAP (1,0; 10,0; 50; e 100,0 mg/L), e) efeito do GA 3 (0,05) + BAP (2,0 mg/L) e picloram (8,0 mg/L). Foi também realizada a análise isozimática do material. Avaliaram-se: peso da matéria seca, número de folhas e raízes, comprimento da parte aérea, presença de injúrias e coloração de folhas e caule. A partir de 100 mg/L de canamicina, as plântulas apresentaram fitotoxidez; folhas novas e no claro apresentam os melhores resultados; o melhor resultado com ANA foi obtido a 2,0 mg/L; calos transformados apresentaram maior peso de matéria seca com 10 mg/L de BAP e com picloram; na análise isozimática constatou-se diferença no padrão de bandas. Na micropropagação, avaliaram-se as mesmas características dos experimentos de transformação; nos experimentos com STS e AgNO 3 foram avaliados também o teor de clorofila, e nos de nitrato de amônio, fotoperíodo, filtros coloridos e ABA foi feita também uma análise mineral do material vegetal. Avaliou-se o efeito do nitrato de amônio (0; 1/8; 1/4; 1/2; 3/4; 1; e 2 da concentração original) com e sem BAP. Estudou-se o efeito dos fotoperíodos: 0; 8 e 16 h luz. Quanto ao efeito do STS e AgNO 3, as concentrações utilizadas foram: de STS (0, 20, 30 e 50 μM) e de AgNO 3 (0, 10, 30 e 50 μM). Foram avaliados os efeitos de 2,4-D (0; 4,4; e 8,8 mg/L) e picloram (0; 4,8; e 9,6 mg/L) no claro e no escuro. Verificou-se também o efeito de 2,4-D (0; 2,2; 4,4; 6,6; e 8,8 mg/L) e ABA (0,0; 1,0 e 10 mg/L). Para avaliar o efeito da qualidade de luz, as plântulas foram colocadas sob filtros de acrílico vermelho, amarelo e azul. Os resultados obtidos indicaram que, com ou sem o BAP, pode-se usar uma concentração de nitrato de amônio abaixo da normalmente utilizada; o 2,4-D teve efeito melhor na concentração de 4,4 mg/L no escuro; e o picloram não induziu nenhum tipo de mudança morfogênica. O ABA impediu o crescimento da mandioca. O filtro amarelo foi o mais indicado para um estudo na área de enraizamento. O fotoperíodo age diferente conforme, o cultivar. Tanto para o AgNO 3 como para o STS a resposta da mandioca não foi benéfica. / There were two researches done in the progenie test laboratory at the Plant Technology Department at the Federal University of Viçosa, in Viçosa-MG. One of them had as its aim to develop a manioc plant transformation protocol (Manihot esculenta Crantz) by means of Agrobacterium rhizogenes which is resistant to kanamicine, and the other was to evaluate the effect of the photoperiod, colour filters, ammonium nitrate; 2,4-D, picloram, ABA, AgNO 3 and STS in the small plant of cassava. The following were tested during the cassava transformation: a) selective means with kanamicine (0,0; 100; 200; 300; 400; 500; 600; 700; 800; 900; and 1.000 mg/L), b) the influence of age and light over the leaf disks which were cultivated in bacteria, c) the effect of ANA (0,0; 0,1; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; and 5,0 mg/L) in the co-cultivate, d) the effect of the BAP (1,0; 10,0; 50; and 100,0 mg/L) concentrations, e) the effect of the GA3 (0,05) + BAP (2,0 mg/L) and picloram (8,0 mg/L). There was also a isozimatic analysis of the material. The following were evaluated: dry matter weight, the number of leaves and roots, the length of the aerial part, the presence of damage and the coloring of the leaves and stem. With 100 mg/L of kanamicine, the small plants presented phitotoxidity; the new leaves and under light present better results; the best result with ANA was obtained with 2,0 mg/L; the calluses that were formed presented heavier weight, 10 mg/L of BAP, within the dry matter and with picloram; there was a difference with the band pattern in the isozimatic analysis. The same characteristics of the transformation experiments were evaluated; the chlorophyll content was evaluated in the experiments that had STS and AgNO 3, and there was also a mineral analysis of the vegetal material done for the photoperiod, colored filters and ABA. The effect of the ammonium nitrate (0; 1/8; 1/4; 1/2; 3/4; 1; and 2 from the original concentration) with and without BAP was evaluated. The effects of the photoperiods of light were studied : 0; 8 and 16 light hours. For the effect of the STS and the AgNO 3, the concentrations that were used were: STS (0, 20, 30 e 50 μM) and AgNO 3 (0, 10, 30 and 50 μM). The effects of the 2,4-D (0; 4,4; and 8,8 mg/L) and picloram (0; 4,8; and 9,6 mg/L) in the light and in the dark were evaluated. The effect of 2,4-D (0; 2,2; 4,4; 6,6; and 8,8 mg/L) and ABA (0,0; 1,0 and 10 mg/L) was verified. To evaluate the light quality effect, the small plants were put under red, yellow and blue acrylic filter. The results that were obtained indicated that, with or without BAP, a ammonium nitrate concentration can be used below the usual amount that is used; the 2,4-D had a better effect in the concentration of 4,4 mg/L in the dark; and the picloram did not induce any type of morphogenic change. The ABA inhibited the growth of the manioc. The yellow filer was more indicated for a study in the rooting area. The photoperiod works differently according the cultivar. Either for the AgNO 3 or for the STS the return from the cassava was not beneficial.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-02T14:57:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 287684 bytes, checksum: c5eb42af7676e85b16363c3edd753449 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-02T14:57:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 287684 bytes, checksum: c5eb42af7676e85b16363c3edd753449 (MD5) Previous issue date: 2004-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A transformação genética está se tornando, cada vez mais, uma ferramenta importante em programas de melhoramento genético de diversas espécies, sendo uma alternativa para a incorporação de gene(s) exógeno(s) no genoma da planta, modificando características de interesse. Para citros, essa ferramenta permite romper barreiras naturais dessa espécie, visto que o desenvolvimento de novas variedades pelo melhoramento convencional possui uma série de limitações impostas pela sua biologia reprodutiva. Entretanto, os protocolos de transformação genética requerem, primariamente, o estabelecimento de um eficiente sistema de morfogênese in vitro para que o sucesso do método de transformação seja alcançado. Portanto, o objetivo deste trabalho foi o estabelecimento das melhores condições de cultivo in vitro para a organogênese e a posterior adequação de uma metodologia eficiente de transformação genética para a variedade de laranja-doce [Citrus sinensis (L.) Osb.] ‘Pêra’. Na avaliação das melhores condições da organogênese in vitro, segmentos de epicótilos foram introduzidos em meio de cultura MT contendo diferentes concentrações de BAP. A concentração de 1,0 mg L -1 de BAP utilizada na fase de indução de brotações assegurou as melhores freqüências de organogênese. Foram também estudados fatores que possam influenciar o processo de transformação genética de citros via Agrobacterium tumefaciens, utilizando epicótilos de laranja ‘Pêra’ como fonte de explante. Os fatores testados foram: tempo de inoculação com Agrobacterium, o período de co-cultivo e a presença de auxina no meio de pré-cultivo. O protocolo otimizado para a transformação genética de laranja ‘Pêra’ foi a imersão do explante em uma solução contendo Agrobacterium, por um tempo de 5 minutos, seguido de um período de co-cultivo de 2 dias em meio de cultura contendo 100 μM de acetoseringona e transferidos para o meio de seleção, constituído do meio MT e ainda de 75 mg L -1 de canamicina, 500 mg L -1 de Timetin ® e 1 mg L -1 de BAP. / Genetic transformation is a technique whose importance is increasing as an important tool for breeding programs of several species, being a reliable alternative for introducing characteristics of interest. For citrus, this tool helps to overcome natural reproductive barriers, the obtention of new cultivars by conventional breeding methods has several constraints, mainly linked to its reproductive biology. However, genetic transformation protocols demand, primarily, the establishment of efficient regeneration systems, in order to guarantee the success of transformation method. The objective of the present work was to establish promotive conditions for a reliable in vitro regeneration system from epicotyl explants, and further adequate an efficient and reproducinle transformation methodology for a sweet orange variety [Citrus sinensis L. (Osb.) ‘Pêra’]. For organogenesis, epicotyl explants were cultured onto a MT medium containing different BAP concentrations. For induction phase, 1.0 mg L -1 BAP enabled higher regeneration frequencies of adventitious shoots. Also, factors affecting Agrobacterium-mediated transformation efficiency were tested, as follows: incubation period with bacteria, co-culture period, and the presence of auxin in the pre-culture step. The following conditions generated and optimized protocol for ‘Pêra’ transformation: immersion for 5 minutes of the explants in a diluted Agrobacterium suspension; a 2-days co-culture period in a 100 μM acetoseryngone-supplemented medium; transfer for a selective regeneration MT-based medium, supplemented with 1.0 mg L -1 BAP, 75 mg L -1 kanamycin, and 500 mg L -1 Timentin ® .