El presente estudio tuvo como objetivos determinar y comparar los niveles de expresión relativa de ARN mensajero (ARNm) de IgA en el epitelio intestinal de las crías de alpacas sanas y enfermas con enteropatía hasta los 45 días de edad. Se muestrearon 70 animales: 35 sanas y 35 enfermas; 5 crías antes del consumo de calostro y 5 por cada semana de edad hasta la sexta semana. Las muestras consistieron en 2 cm de longitud del yeyuno, la cual fue inmediatamente conservada en nitrógeno líquido (-196°C). Se realizó la extracción de ARN total con Trizol®, luego se sintetizó ADN complementario (ADNc). Posteriormente se realizó la PCR convencional y la RT- PCR Tiempo Real empleando oligonucleótidos diseñados para la detección del exón 1 de de la región Fc IgA de alpaca. Se realizó la cuantificación de la expresión relativa mediante normalización con ARNm del gen GAPDH y los cálculos de la expresión relativa se realizaron utilizando el método 2-ΔΔCt. Se identificó y demostró mediante la técnica de RT PCR tiempo real que las alpacas codifican y transcriben ARNm del exón 1 de la región Fc de IgA desde el primer día de edad, mas no al nacimiento; siendo su expresión relativa detectada y producida en el epitelio intestinal de crías de alpacas a partir de un día de edad, tanto en animales sanos como enfermos. Los animales sanos presentan una tendencia de expresión constante de ARNm de IgA hasta la cuarta semana de edad, con disminución discreta en las semanas subsiguientes, mientras que en los cuadros entéricos la producción de ARNm de IgA siempre es superior a lo expresado por los animales sanos, habiendo diferencias significativas (p<0.05) entre ambos grupos sanitarios (sanos 38.8 y enfermos 113 veces respectivamente, respecto del calibrador), desde la primera hasta la sexta semana de edad. Palabras claves: Camélidos sudamericanos, inmunidad de mucosa intestinal, Inmunoglobulina A, PCR, RTPCR tiempo real, cuantificación relativa. / --- The present study had as objectives to determine and compare the levels of relative expression of messenger RNA (mRNA) of IgA in intestinal epithelium of newborn alpaca healthy and sick with enteropathy until 45 days old. Surveyed 70 animals: 35 sick and 35 healthy; 5 pups before the consumption of colostrum and 5 for each week of age until the sixth week. The samples consisted in 2 cm of length of the jejunum, which was immediately preserved in liquid nitrogen (- 196°C). The extraction was conducted with Trizol®, then was synthesized complementary DNA (cDNA). Subsequently, it was made the conventional PCR and real time RT - PCR using oligonucleotides designed for detecting the exon 1 of the Fc IgA region of alpaca. The quantification of the relative expression was made through normalization with the GAPDH gene mRNA and the relative expression calculations were conducted using method 2-ΔΔCt. It was identified and demonstrated through the real time RT - PCR technique that alpacas encoded and transcribed mRNA of exon 1 of the IgA Fc region from the first day of age, but not at the birth; being it relative expression detected and produced in intestinal epithelium of newborn alpaca from a day of age, both in healthy animals as sick. Healthy animals have a tendency of constant expression of mRNA of IgA until the fourth week of age, with slightly decrease in the subsequent weeks, whereas in enteric diseases IgA mRNA production is always superior than the expressed by the healthy animals, having significant differences (p < 0.05) between the two groups (healthy 38.8 and sick 113 times respectively, with regard to the calibrator), from the first to the sixth week of age. Key words: South American camelids, intestinal mucosal immunity, immunoglobulin A, real time RT –PCR, relative quantification.

Evalúa la dinámica de expresión de inmunoglobulinas IgG específicas a Sarcocystis sp. en crías de alpaca durante el primer año de edad, con la finalidad de determinar los sucesos que acontecen durante la exposición a este parásito así como el perfil de anticuerpos transmitidos por calostro. Para ello, se utiliza 54 crías de alpacas provenientes del departamento de Huancavelica, Perú. Se realizan tomas de muestra de sangre (6 a 8 ml) en las crías de alpaca recién nacidas antes de la toma de calostro, 15 días después y posteriormente se realizan muestreos aproximadamente cada dos meses hasta el primer año de edad. Las muestras fueron analizadas mediante la prueba de ELISA SarcoTest para el diagnóstico de inmunoglobulinas IgG específicas a Sarcocystis sp. cuya expresión es obtenida a partir de valores de densidad óptica (nm), a partir de los cuales se consideran como seropositivos a Sarcocystis sp a valores de densidad >0.2 nm. / Tesis

Identifica los serotipos de Escherichia coli presentes en muestras diarreicas de crías de alpacas provenientes de Cerro de Pasco. Para lo cual se toman hisopados rectales a 150 animales que se encontraban padeciendo de dicho cuadro clínico. Aisla Escherichia coli identificada a través de pruebas bioquímicas convencionales en el 78% (117/150) de animales muestreados; utiliza el método de serotipificación por aglutinación en placas. Del total de muestras evaluadas encuentra 33.3% (39/117) serogrupos y 60.68% (71/117) serotipos. Los serogrupos con mayor frecuencia son O8 (9.4%), ONT (8.55%), O118 (7.69%) y O24 (7.69%), en lo que respecta a serotipos los más frecuentes son O118:H21 (7.69%), O24:H18 (6.84%) y O74:H39 (6.84%). El 42.25% (30/71) de los serotipos encontrados posee reportes en la literatura y/o tienen relación con cepas patógenas para las especies animales incluyendo el humano. Concluye que el cuadro diarreogénico en crías de alpacas se encuentra relacionado con una gama de serotipos con potencial patógeno tanto para los animales como para el ser humano.

Evalúa la expresión génica de las citoquinas IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, TGF- y el factor transcripcional GATA3 en la mucosa intestinal de crías de alpacas clínicamente sanas de 2 a 47 días de edad. Para lo cual se formaron grupos etarios conformados por alpacas de 2 a 8 días (grupo 1), 10 a 21 días (grupo 2) y 26 a 47 días de edad (grupo 3) sin importar sexo, raza y desprovistos de signos clínicos de enfermedad. Se tomó la porción media del yeyuno de cada animal de las cuales se extrajeron el ARN total y se realizó la técnica RT-PCR en tiempo real con cebadores específicos para los genes en estudio. La expresión de genes fue determinado por el método comparativo 2-ΔΔ Ct usando como gen endógeno a Gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) y como calibrador fetos de 11 meses. La expresión de los genes de las citoquinas y el factor de transcripción se caracterizó por un temprano incremento de la expresión en todos los genes en evaluación en los animales de 2 a 8 días de edad y una mayor expresión en los animales de 10 a 21 días, asociándose al desarrollo del sistema inmune y a una respuesta estimulada por la colonización de microorganismos del ambiente. En los animales de 26 a 47 días de edad la expresión de los genes de IL-4, IL-5 y GATA3 se vio reducida ligeramente y la expresión de los genes de IL-10 y TGF-β siguió incrementándose; ambas respuestas inmunes estarían asociadas a un proceso de adaptación y regulación frente a los microorganismos saprófitos y antígenos alimenticios. Sin embargo, IL-6 sigue aumentando su expresión en los animales de 26 a 47 días de edad, asociándose a una respuesta inflamatoria contra patógenos del ambiente. El análisis histopatológico mostró un aumento de individuos con presencia de leve enteritis catarral aguda difusa al aumentar la edad, alcanzando un 84% (5/6) en los animales de 26 a 47 días de edad, asociado a la presencia de patógenos como Cryptosporidium spp y Eimeria spp encontrados en este análisis, influyendo en la expresión de los genes de las citoquinas en estudio.

Identifica y describe las características macroscópicas y microscópicas de la anatomía del páncreas de la alpaca en fetos del último tercio de gestación y neonatos, ya que existe poca información acerca de la anatomía del páncreas de la alpaca. Para el estudio se utiliza 21 animales: 3 fetos del último tercio de gestación, 3 con 0 días de nacidas, 5 con 7 días de nacidas, 5 con 15 días de nacidas y 5 con 30 días de nacidas, a las cuales se les toma medidas biométricas (longitud corporal, altura a la cruz, perímetro torácico y perímetro abdominal) a su vez también se registra edad y peso vivo. En la evaluación macroscópico se observa el páncreas in situ, conductos y su relación con otros órganos; los cual se hallan similares al de las alpacas adultas; en el estudio microscópico se realizan técnicas histológicas rutinarias en los fetos y los recién nacidos, el páncreas presenta una citoarquitectura celular definida, formada por acinos tubulares de citoplasma acidofilo, elongado de núcleos basales e islotes irregulares (en cuanto a tamaño y forma), además de grupos celulares no diferenciados. Esta citoarquitectura varia en la primera semana de edad, donde la conformación de los acino e islotes es irregular, presentando una alta tasa de división celular y gran cantidad de células precursoras distribuidas por todo el campo, la actividad celular disminuye con la edad, encontrándose en los animales de 30 días de nacidas una citoarquitectura bastante similar al de las alpacas adultas. / Tesis

La criptosporidiosis es una enfermedad ocasionada por varias especies del género Cryptosporidium, se caracteriza por producir diarrea, sobre todo en neonatos y, dependiendo de la especie involucrada, puede ser zoonótica, llegándose a considerar un problema de salud pública. Diversos estudios fueron realizados en el Perú para poder determinar la prevalencia del Criptosporidium sp. encontrándose los mayores casos en los lugares que contaban con la mayor cantidad de animales. / Cryptosporidiosis is a disease caused by different species of the Cryptosporidium genus it overall produces diarrhea in newborns and depending on the specie involved, these can be involved in a problem of public health. Many studies were performed in Peru to determine the prevalence of Cryptosporidium and they showed that a major number of cases were in an area with a higher number of animals. The aim of this study was to establish if presence of Cryptosporidium parvum in mothers is a risk factor for presentation of Cryptosporidium parvum in offsprings.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina la prevalencia de Cryptosporidium en alpacas crías menores de 3 meses de edad y en adultos (hembras y machos). Con este fin se toma un total de 898 muestras de alpacas al azar del Banco de Especímenes del Laboratorio de Epidemiología y Economía Veterinaria. La temporada de parición considerada es la del 2012 y las muestras son de La Raya en el departamento de Cusco. Las muestras se procesan con la coloración de Ziehl-Neelsen modificado y el criterio de diagnóstico es el hallazgo de estructuras ovoides, de color fucsia, refringente y con un glóbulo obscuro en su interior. Cada ooquiste hallado es medido con el programa de medición LAS EZ de la cámara (Leica ICC50). Se encuentra una prevalencia de 18.46 ± 4,07% en alpaca cría, 10.25 ± 3% en hembras adultas y 60,49 ± 7,67% en machos reproductores. / Tesis

Determina la expresión de genes del receptor TCRɣδ (gamma y delta) en el epitelio yeyunal de crías de alpaca aparentemente sanas, de 2 a 47 días de edad, mediante la cuantificación de ARN mensajero (ARNm) de los genes antes mencionados utilizando cebadores específicos. Se toma porciones de yeyuno, de 2 cm de longitud, de crías de alpacas aparentemente sanas (n=16). Se obtiene el ARNm total de la mucosa de la porción media del yeyuno, el cual actúa como molde para la síntesis de ADNc mediante transcripción reversa (RT), seguida de un PCR en Tiempo Real para la amplificación y cuantificación de los ARNm de los polipéptidos que conforman las cadenas gamma y delta del TCR. Se utiliza el método 2-ΔΔCt para la cuantificación relativa de ARNm teniendo como calibrador a dos crías recién nacidas sin consumo de calostro. / Tesis

El documento digital no refiere asesor (asesor) / Determina el grado de asociación con la medida del diámetro de su respectiva fibra en cada raza y entre ambas razas. Para ello se tomaron muestras de fibra y piel mediante biopsia de la zona del costillar medio. Las muestras de fibra fueron medidas a través del laserscan, mientras que las biopsias de piel fueron procesadas mediante estudio histológico. La histología demostró que los folículos primarios pueden ser solitarios denominados folículo primario extra grupo folicular (FPEGF) o formando parte de un grupo folicular compuesto denominado folículo primario intra grupo folicular (FPIGF). Además estos últimos pueden distribuirse de manera central (FPC) y lateral (FPL) mientras que los secundarios pueden ser solitarios formando grupos foliculares simples o formando parte de los grupos foliculares compuestos. Los valores promedio de relación folicular S/P fueron de 13.9 ( ± 4.7) para la raza huacaya y de 14.5 ( ± 6.3) para la raza suri , mientras que el diámetro de fibra para la raza huacaya fue de 20.8 micras ( ± 1.9) y para la raza suri de 21.4 micras ( ± 2.0 ). No se encontró diferencia estadística para los valores de relación folicular S/P ni para los valores de medida del diámetro medio de fibra entre ambas razas de alpacas. Sin embargo al hacer el análisis de correlación, los resultados indican que a mayor relación folicular S/P el diámetro de fibra de alpaca es menor en ambas razas, debido a que ambas variables presentan una correlación negativa (r = - 0.72). / Tesis

Evalúa la presencia de Cryptosporidium spp. en alpacas y su relación con las variables diarrea y relación madre/cría, durante la temporada de parición de alpacas del 2011. Estudia muestras de heces de 1650 alpacas, 825 madres y 825 crías de hasta 15 días de edad, de las localidades de Keyosenca, Colores, U.N.A. Chuquibambilla y Santa Rosa en la provincia de Melgar del departamento de Puno. Realiza la coloración de las muestras utilizando la tinción de Ziehl–Neelsen modificado y las examina en un microscopio para su diagnóstico. Los resultados se evalúan en tablas de contingencia, con intervalos de confianza del 95%. Los datos son analizados utilizando una regresión logística múltiple. En este análisis no se encuentra relación entre la presencia de diarrea (liquida y pastosa) con la presencia de Cryptosporidium spp. La prevalencia en las crías es de 5%, porcentaje que se puede considerar como relativamente bajo. En el caso de las madres la prevalencia es del 11%. Las crías y sus madres se muestrearon a los 15 días de la parición, tiempo después de la depresión inmune periparto lo cual indica que la presencia de Cryptosporidium en las madres no es un factor de riesgo para la presencia en las crías. La baja prevalencia de Cryptosporidium parvum puede deberse a buenas condiciones de manejo, como la rotación periódica de dormideros, la utilización de estercoleros o la ingestión de calostro después del parto. Al no encontrarse relación madre/cría con la presencia de Cryptosporidium se sugiere estudiar las prevalencia de Cryptosporidium en las alpacas madres y las crías durante la depresión inmune periparto, secuenciando las cepas para ver si existe relación entre los Cryptosporidium de las madres y sus crías. / Tesis