Em bovinos, o sucesso no estabelecimento da gestação depende de interações entre o concepto e o útero. Tais interações ocorrem através de moléculas presentes no ambiente uterino. Falhas nesse processo causam 30-40% de perdas de gestação. As proteínas são constituintes desse ambiente e possuem um importante papel nesse processo. Objetivou-se na presente dissertação caracterizar o perfil protéico do ambiente uterino de fêmeas bovinas, ciclando ou prenhes, durante o período crítico, utilizando eletroforese bidimensional. O objetivo específico foi comparar a composição protéica de lavados uterinos obtidos in vivo, por sonda de folley ou post-mortem no dia 18 após o estro de vacas não inseminadas ou gestantes. Para a obtenção das amostras, 48 fêmeas bovinos tiveram seu ciclo estral sincronizado e foram alocadas aleatoriamente para receberem lavagens in vivo por sonda de folley (12 inseminadas e sete não inseminadas) ou para receberem lavagens post-mortem (12 inseminadas e cinco não inseminadas) no dia 18 após o estro. Após a coleta, os lavados foram processados e submetidos à eletroforese bidimensional. Os géis foram analisados utilizando o programa Image Master-2D ELITE V. 4.01 (GE Healthcare) para determinação do ponto isoelétrico (PI) e peso molecular relativo (PMR) das proteínas nos diferentes grupos e análise da densidade óptica. Foram selecionadas 178 proteínas presentes nos lavados. Em relação à distribuição das proteínas de acordo com o ponto isoelétrico, 74% (132/178) apresentaram PI entre 5,5 e 8, em relação ao peso molecular, 44% (79/178) das proteínas possuíam PMR menor que 50KDa enquanto 54% (95/178) entre 50 e 100KDa. Nos lavados realizados por sonda de folley (FC ou FP) foram selecionadas 151 proteínas, sendo 96 nos lavados de animais cíclicos e 86 nos prenhes. Os lavados realizados post-mortem (PMC ou PMP) apresentaram apenas 54 proteínas, das quais 24 estiveram presentes nos lavados PMC e 36 nos lavados PMP. Em relação ao estado reprodutivo 115 proteínas foram encontradas nos lavados dos animais cíclicos (FC ou PMC), enquanto 104 proteínas foram selecionadas nos lavados de animais prenhes (FP e PMP). Entre os lavados realizados por sonda de folley (FC e FP) 31 proteínas foram comuns entre os estados, enquanto entre os lavados realizados post-mortem (PMC e PMP) apenas seis proteínas estiveram presentes em ambos os lavados. Nos lavados realizados em animais ciclando (FC e PMC) cinco proteínas estiveram presentes em ambos os tipos de lavados, enquanto nos lavados realizados em animais prenhes (FP e PMP) 18 proteínas foram comuns em ambos os tipos de lavado. Entre os lavados FC e PMP ou FP e PMC, 15 e 6 proteínas, respectivamente, foram comuns. As proteínas presentes exclusivamente nos lavados de vacas prenhes, possivelmente estão envolvidas no diálogo materno-embrionário durante o processo de estabelecimento da gestação. Proteínas detectadas exclusivamente nos lavados obtidos via sonda de folley podem ser devidas ao influxo de proteínas do soro sanguíneo em resposta à manipulação do trato reprodutivo durante a obtenção dos lavados. Esperava-se uma maior efetividade dos lavados realizados post-mortem em relação aos realizados por sonda de folley. Entretanto os lavados obtidos por sonda de folley foram melhores por identificar um maior numero de proteínas, permitindo identificar diferenças maiores entre os lavados de animais ciclando e prenhes. Concluiu-se que a eletroforese bidimendional constitui um método adequado para avaliar quantitativamente o perfil protéico do ambiente uterino bovino e que tanto o estado reprodutivo quanto o método de obtenção de lavados uterinos modificam sua composição protéica. Novos estudos são necessários para se obter a seqüência de aminoácidos das proteínas localizadas para que se conheça sua identidade e função na gestação inicial de bovinos. / In the cattle, the outcome for the establishment of pregnancy depends on interactions between conceptus and uterus. These interactions occur through molecules presents in the uterine environment. Failure in this process causes 30-40% of loss in gestation. The proteins are component of this environment and have a important role in this process. The aim of this dissertation was to characterize the protein profile of the uterine environment in cows, cyclic or pregnant, during the critical period, using two-dimensional electrophoresis. The specific aim was to compare the protein composition of uterine washings recovered in vivo, through a folley catheter, with washings recovered post-mortem at day 18 after estrus of not inseminated or pregnant cows. To obtain the samples 48 cows had their estrous synchronized and here aleatoric put in the group to receive washings in vivo through the folley catheter (12 inseminated and seven not inseminated) or to be washed post-mortem (12 inseminated and five not inseminated) at day 18 after estrus. After the recover, the washings were proceeded and submitted to two-dimensional electrophoresis. The gels were analyzed using the software Image Master-2D ELITE V. 4.01 (GE Heathcare) to determine the isoelectric point (PI) and relative molecular weight (PMR) of the proteins presents in the different groups and analysis of the optical density. One hundred and seventy eight proteins were presents in the washings. The distribution of the proteins according to the PI, 74% (132/178) had PI between 5,5 and 8 and according to the PMR 44% (79/178) of the proteins showed PMR lower than 50KDa, while 54% (95/178) had PMR between 50 and 100KDa. In the washings recovered through the folley catheter (FC and FP) 151 proteins were selected, being 96 from the cyclic cows and 86 from the pregnant cows. The washings recovered post-mortem (PMC and PMP) showed only 54 proteins, from those 24 were present in the cyclic animals and 36 in the pregnant animals. According to the reproductive status 115 proteins were found in the washings from the cyclic animals (FC and PMC), while 104 proteins were selected from the washings of the pregnant animals (FP and PMP). Among the washings recovered through the folley catheter (FC and FP) 31 proteins were the same between the reproductive status. While in the washings recovered post-mortem (PMC and PMP) only six proteins were present in both washings. In washings done in the cyclic animals (FC and PMC) five proteins were presents in both kind of washings, while in washings done in the pregnant animals (FP and PMP) 18 proteins were the same in both kind of washings. Among the washings FC and PMP or FP and PMC, 15 and six proteins, respectively were the same. The proteins presents exclusively in the washings of the pregnant animals are probably involved with the embryo-maternal interplay during the process of pregnancy establishment. Proteins detected exclusively in the washings recovered through the folley catheter may be inflow of proteins from the serum, in response to the uterine manipulation during the process of washing. It was expected a better effect from the washings post-mortem than the ones through the folley catheter. However the washings from the folley catheter had a better result, because they identified a greater number of proteins which allowed identify greater differences between the washings from cyclic and pregnant animals. In conclusion, the two-dimensional electrophoresis is a adequate method to analyze the quantitatively proteins profile of the uterine environment in the cow and that both the reproductive status and the method to obtain the uterine washings modify the proteins composition. New studies are necessary to obtain the amino acids sequence of the proteins found so that we know their identity and function in the beginning of pregnancy in the cow.

O objetivo do presente trabalho foi comparar os efeitos dos distintos ambientes endócrinos peri-ovulatórios na proliferação celular, no metabolismo das poliaminas e no ambiente redox do útero bovino durante o diestro inicial. Para isso, controlou-se farmacologicamente o crescimento do folículo objetivando induzir a ovulação de folículos de maior diâmetro (grupo folículo grande-CL grande, FG-CLG) ou de menor diâmetro (grupo folículo pequeno-CL pequeno, FP-CLP). Trinta vacas multíparas Nelore, foram pré-sincronizadas, metade destes animais foram destinados para o grupo FG-CLG e receberam uma dose de prostaglandina F2&#945; (PGF) e um dispositivo de progesterona, juntamente com benzoato de estradiol no D10. No momento da retirada dos dispositivos de progesterona (entre D1,75 e D2,5) todos os animas receberam uma dose de PGF. A ovulação foi induzida com acetato de buserelina (D0). O que diferiu entre os tratamentos foi que os animais do grupo FP-CLP não receberam uma dose de PGF no D10 e o momento da retirada dos dispositivos foi entre D1,25 e o D1,5. No D7 um subgrupo dos animais foi abatido e amostras de endométrio e lavado uterino foram coletadas para as análises laboratoriais. Os animais do grupo FG-CLG apresentaram no D0 um folículo 1,2 vezes maior e estradiol 2,3 vezes maior em relação ao FP-CLP. Consequentemente, as vacas do FG-CLG desenvolveram CL maiores (1,6 vezes) e mais pesados (1,4 vezes) o que proporcionou no D7 concentrações de P4 1,5 vezes maior em relação ao FP-CLP. Primeiramente, uma análise do transcriptoma endometrial foi realizada e indicou que processos celulares como proliferação, composição de matrix extracelular, processos metabólicos e processos de oxirredução foram afetados pelo modelo experimental. Para avaliar a condição proliferativa e/ou apoptótica endometrial análises de imunomarcação foram realizadas (Ki-67, marcador de proliferação e caspase 3 ativada, marcador de apoptose). O número de células positivas para Ki-67 no epitélio luminal foi 4,1 vezes maior no FP-CLP, porém não houve diferença na marcação da caspase 3 ativada. No epitélio glandular tanto o ki-67 (1,4 vezes) como a caspase 3 ativada (2,6) estavam aumentados no grupo FG-CLG. Em relação à síntese das poliaminas não houve diferença entre os grupos nas concentrações das poliaminas e abundância dos transcritos e proteína das enzimas de síntese. Por outro lado, foi detectada uma forte associação entre a expressão do gene SAT1 com o gene ODC1 (r2: 0,73; P<0,01) e também entre os genes AZIN1 e AMD1 (r2: 0,61; P<0,01). Quanto ao ambiente redox não houve diferença entre os tratamentos no lavado uterino mas no endométrio, no grupo FP-CLP, houve redução da atividade das enzimas Catalase (0,5 vs 0,79 U/mg proteína; P<0,01), glutationa peroxidase (2,0 vs 2,43 nmol NADPH/min/mg proteína; P<0,01), aumento da atividade da Superóxido dismutase (44,77 vs 37,76 U; P=0,04) e da peroxidação lipídica (28,5 vs 17,43 nmol/MDA/mg proteína; P<0,001), mas sem alterar as quantidades da espécies reativas. De acordo com os resultados obtidos, pode-se concluir que o ambiente endócrino peri-ovulatório regula a proliferação endometrial mas sem alterar a via de síntese das poliaminas e modula também o ambiente redox uterino / This work aimed to compare the effects of the different periovulatory endocrine milieu on the several molecular pathways: as cellular proliferation, polyamine metabolism and redox environment of the bovine uterus during the early diestrus. For this, we controlled pharmacologically the follicular growth to induce the ovulation of larger follicle (Large Follicle-Large Corpus lutem group LF-LCL) or smaller follicle (Small follicle-Small Corpus luteum group SF-SCL). Thirty multiparous Nelore cows were synchronized. Fifteen cows were assigned for each group. On the LF-LCL, the cows received a dose of prostaglandin F2&#945; (PGF), a progesterone device and an estradiol benzoate on D10. On the time of progesterone device was withdraw (between D1.75 e D2.5) all the animals received a dose of PGF. The ovulation was induced with buserelin acetate (D0). The unique difference between the groups was that animals of SF-SCL did not received a dose of PGF on D10 and the progesterone device withdraw was between D1.25 e o D1.5. On D7 a subset of animals was slaughtered and the endometrial and uterine washings samples were collected for laboratorial analyses. On D0 the animals of LF-LCL had a 1.2 times larger follicles and 2.3 times higher levels of estradiol than animals of SF-SCL. Firstly, an endometrial transcriptome analyses was realized and suggested that several cellular processes as proliferation, metabolic processes and oxi-reduction processes were affected by experimental model. To evaluate the proliferative and/or apoptotic condition, endometrial immunohistochemistry analyses were realized (ki-67, proliferation marker and caspase 3 activated, apoptose marker). The number of Ki-67 positive cells in the luminal epithelium was 4.1 times higher on SF-SCL. However, there was no difference in caspase 3 activated analyses. On the glandular epithelium both ki-67 (1.4) and caspase 3 activated (2.6) were increased on LF-LCL. About polyamine synthesis pathway there was no difference in polyamines levels and gene and protein expression of synthesis enzymes between the groups. In other hand, it was detected a strong association between SAT1 gene expression and ODC1 gene expression (r2: 0.73; P<0.01) and also between AZIN1 and AMD1 gene expression (r2: 0.61; P<0.01). On the redox environment analysis there was no difference between the groups on the uterine washings but the SF-SCL group had lower endometrial catalase (0.5 vs. 0.79 U/mg protein, P<0.001) and glutathione peroxidase (GPx; 2.0 vs. 2.43 nmol NADPH/min/mg protein, P=0.04) activity, as well as higher lipid peroxidation (28.5 vs. 17.43 nmol MDA/mg of protein, P < 0.001) and superoxide dismutase (SOD) activity (44.77 vs. 37.76 U; P=0.04). There were no differences in the endometrial reactive species (RS) between the groups. In conclusion, the periovulatory endocrine milieu regulates the endometrial proliferation but without alterations in polyamine metabolism and also modulates the uterine redox environment in beef cattle

O objetivo do presente trabalho foi comparar os efeitos dos distintos ambientes endócrinos peri-ovulatórios na proliferação celular, no metabolismo das poliaminas e no ambiente redox do útero bovino durante o diestro inicial. Para isso, controlou-se farmacologicamente o crescimento do folículo objetivando induzir a ovulação de folículos de maior diâmetro (grupo folículo grande-CL grande, FG-CLG) ou de menor diâmetro (grupo folículo pequeno-CL pequeno, FP-CLP). Trinta vacas multíparas Nelore, foram pré-sincronizadas, metade destes animais foram destinados para o grupo FG-CLG e receberam uma dose de prostaglandina F2&#945; (PGF) e um dispositivo de progesterona, juntamente com benzoato de estradiol no D10. No momento da retirada dos dispositivos de progesterona (entre D1,75 e D2,5) todos os animas receberam uma dose de PGF. A ovulação foi induzida com acetato de buserelina (D0). O que diferiu entre os tratamentos foi que os animais do grupo FP-CLP não receberam uma dose de PGF no D10 e o momento da retirada dos dispositivos foi entre D1,25 e o D1,5. No D7 um subgrupo dos animais foi abatido e amostras de endométrio e lavado uterino foram coletadas para as análises laboratoriais. Os animais do grupo FG-CLG apresentaram no D0 um folículo 1,2 vezes maior e estradiol 2,3 vezes maior em relação ao FP-CLP. Consequentemente, as vacas do FG-CLG desenvolveram CL maiores (1,6 vezes) e mais pesados (1,4 vezes) o que proporcionou no D7 concentrações de P4 1,5 vezes maior em relação ao FP-CLP. Primeiramente, uma análise do transcriptoma endometrial foi realizada e indicou que processos celulares como proliferação, composição de matrix extracelular, processos metabólicos e processos de oxirredução foram afetados pelo modelo experimental. Para avaliar a condição proliferativa e/ou apoptótica endometrial análises de imunomarcação foram realizadas (Ki-67, marcador de proliferação e caspase 3 ativada, marcador de apoptose). O número de células positivas para Ki-67 no epitélio luminal foi 4,1 vezes maior no FP-CLP, porém não houve diferença na marcação da caspase 3 ativada. No epitélio glandular tanto o ki-67 (1,4 vezes) como a caspase 3 ativada (2,6) estavam aumentados no grupo FG-CLG. Em relação à síntese das poliaminas não houve diferença entre os grupos nas concentrações das poliaminas e abundância dos transcritos e proteína das enzimas de síntese. Por outro lado, foi detectada uma forte associação entre a expressão do gene SAT1 com o gene ODC1 (r2: 0,73; P<0,01) e também entre os genes AZIN1 e AMD1 (r2: 0,61; P<0,01). Quanto ao ambiente redox não houve diferença entre os tratamentos no lavado uterino mas no endométrio, no grupo FP-CLP, houve redução da atividade das enzimas Catalase (0,5 vs 0,79 U/mg proteína; P<0,01), glutationa peroxidase (2,0 vs 2,43 nmol NADPH/min/mg proteína; P<0,01), aumento da atividade da Superóxido dismutase (44,77 vs 37,76 U; P=0,04) e da peroxidação lipídica (28,5 vs 17,43 nmol/MDA/mg proteína; P<0,001), mas sem alterar as quantidades da espécies reativas. De acordo com os resultados obtidos, pode-se concluir que o ambiente endócrino peri-ovulatório regula a proliferação endometrial mas sem alterar a via de síntese das poliaminas e modula também o ambiente redox uterino / This work aimed to compare the effects of the different periovulatory endocrine milieu on the several molecular pathways: as cellular proliferation, polyamine metabolism and redox environment of the bovine uterus during the early diestrus. For this, we controlled pharmacologically the follicular growth to induce the ovulation of larger follicle (Large Follicle-Large Corpus lutem group LF-LCL) or smaller follicle (Small follicle-Small Corpus luteum group SF-SCL). Thirty multiparous Nelore cows were synchronized. Fifteen cows were assigned for each group. On the LF-LCL, the cows received a dose of prostaglandin F2&#945; (PGF), a progesterone device and an estradiol benzoate on D10. On the time of progesterone device was withdraw (between D1.75 e D2.5) all the animals received a dose of PGF. The ovulation was induced with buserelin acetate (D0). The unique difference between the groups was that animals of SF-SCL did not received a dose of PGF on D10 and the progesterone device withdraw was between D1.25 e o D1.5. On D7 a subset of animals was slaughtered and the endometrial and uterine washings samples were collected for laboratorial analyses. On D0 the animals of LF-LCL had a 1.2 times larger follicles and 2.3 times higher levels of estradiol than animals of SF-SCL. Firstly, an endometrial transcriptome analyses was realized and suggested that several cellular processes as proliferation, metabolic processes and oxi-reduction processes were affected by experimental model. To evaluate the proliferative and/or apoptotic condition, endometrial immunohistochemistry analyses were realized (ki-67, proliferation marker and caspase 3 activated, apoptose marker). The number of Ki-67 positive cells in the luminal epithelium was 4.1 times higher on SF-SCL. However, there was no difference in caspase 3 activated analyses. On the glandular epithelium both ki-67 (1.4) and caspase 3 activated (2.6) were increased on LF-LCL. About polyamine synthesis pathway there was no difference in polyamines levels and gene and protein expression of synthesis enzymes between the groups. In other hand, it was detected a strong association between SAT1 gene expression and ODC1 gene expression (r2: 0.73; P<0.01) and also between AZIN1 and AMD1 gene expression (r2: 0.61; P<0.01). On the redox environment analysis there was no difference between the groups on the uterine washings but the SF-SCL group had lower endometrial catalase (0.5 vs. 0.79 U/mg protein, P<0.001) and glutathione peroxidase (GPx; 2.0 vs. 2.43 nmol NADPH/min/mg protein, P=0.04) activity, as well as higher lipid peroxidation (28.5 vs. 17.43 nmol MDA/mg of protein, P < 0.001) and superoxide dismutase (SOD) activity (44.77 vs. 37.76 U; P=0.04). There were no differences in the endometrial reactive species (RS) between the groups. In conclusion, the periovulatory endocrine milieu regulates the endometrial proliferation but without alterations in polyamine metabolism and also modulates the uterine redox environment in beef cattle

Em bovinos, o sucesso no estabelecimento da gestação depende de interações entre o concepto e o útero. Tais interações ocorrem através de moléculas presentes no ambiente uterino. Falhas nesse processo causam 30-40% de perdas de gestação. As proteínas são constituintes desse ambiente e possuem um importante papel nesse processo. Objetivou-se na presente dissertação caracterizar o perfil protéico do ambiente uterino de fêmeas bovinas, ciclando ou prenhes, durante o período crítico, utilizando eletroforese bidimensional. O objetivo específico foi comparar a composição protéica de lavados uterinos obtidos in vivo, por sonda de folley ou post-mortem no dia 18 após o estro de vacas não inseminadas ou gestantes. Para a obtenção das amostras, 48 fêmeas bovinos tiveram seu ciclo estral sincronizado e foram alocadas aleatoriamente para receberem lavagens in vivo por sonda de folley (12 inseminadas e sete não inseminadas) ou para receberem lavagens post-mortem (12 inseminadas e cinco não inseminadas) no dia 18 após o estro. Após a coleta, os lavados foram processados e submetidos à eletroforese bidimensional. Os géis foram analisados utilizando o programa Image Master-2D ELITE V. 4.01 (GE Healthcare) para determinação do ponto isoelétrico (PI) e peso molecular relativo (PMR) das proteínas nos diferentes grupos e análise da densidade óptica. Foram selecionadas 178 proteínas presentes nos lavados. Em relação à distribuição das proteínas de acordo com o ponto isoelétrico, 74% (132/178) apresentaram PI entre 5,5 e 8, em relação ao peso molecular, 44% (79/178) das proteínas possuíam PMR menor que 50KDa enquanto 54% (95/178) entre 50 e 100KDa. Nos lavados realizados por sonda de folley (FC ou FP) foram selecionadas 151 proteínas, sendo 96 nos lavados de animais cíclicos e 86 nos prenhes. Os lavados realizados post-mortem (PMC ou PMP) apresentaram apenas 54 proteínas, das quais 24 estiveram presentes nos lavados PMC e 36 nos lavados PMP. Em relação ao estado reprodutivo 115 proteínas foram encontradas nos lavados dos animais cíclicos (FC ou PMC), enquanto 104 proteínas foram selecionadas nos lavados de animais prenhes (FP e PMP). Entre os lavados realizados por sonda de folley (FC e FP) 31 proteínas foram comuns entre os estados, enquanto entre os lavados realizados post-mortem (PMC e PMP) apenas seis proteínas estiveram presentes em ambos os lavados. Nos lavados realizados em animais ciclando (FC e PMC) cinco proteínas estiveram presentes em ambos os tipos de lavados, enquanto nos lavados realizados em animais prenhes (FP e PMP) 18 proteínas foram comuns em ambos os tipos de lavado. Entre os lavados FC e PMP ou FP e PMC, 15 e 6 proteínas, respectivamente, foram comuns. As proteínas presentes exclusivamente nos lavados de vacas prenhes, possivelmente estão envolvidas no diálogo materno-embrionário durante o processo de estabelecimento da gestação. Proteínas detectadas exclusivamente nos lavados obtidos via sonda de folley podem ser devidas ao influxo de proteínas do soro sanguíneo em resposta à manipulação do trato reprodutivo durante a obtenção dos lavados. Esperava-se uma maior efetividade dos lavados realizados post-mortem em relação aos realizados por sonda de folley. Entretanto os lavados obtidos por sonda de folley foram melhores por identificar um maior numero de proteínas, permitindo identificar diferenças maiores entre os lavados de animais ciclando e prenhes. Concluiu-se que a eletroforese bidimendional constitui um método adequado para avaliar quantitativamente o perfil protéico do ambiente uterino bovino e que tanto o estado reprodutivo quanto o método de obtenção de lavados uterinos modificam sua composição protéica. Novos estudos são necessários para se obter a seqüência de aminoácidos das proteínas localizadas para que se conheça sua identidade e função na gestação inicial de bovinos. / In the cattle, the outcome for the establishment of pregnancy depends on interactions between conceptus and uterus. These interactions occur through molecules presents in the uterine environment. Failure in this process causes 30-40% of loss in gestation. The proteins are component of this environment and have a important role in this process. The aim of this dissertation was to characterize the protein profile of the uterine environment in cows, cyclic or pregnant, during the critical period, using two-dimensional electrophoresis. The specific aim was to compare the protein composition of uterine washings recovered in vivo, through a folley catheter, with washings recovered post-mortem at day 18 after estrus of not inseminated or pregnant cows. To obtain the samples 48 cows had their estrous synchronized and here aleatoric put in the group to receive washings in vivo through the folley catheter (12 inseminated and seven not inseminated) or to be washed post-mortem (12 inseminated and five not inseminated) at day 18 after estrus. After the recover, the washings were proceeded and submitted to two-dimensional electrophoresis. The gels were analyzed using the software Image Master-2D ELITE V. 4.01 (GE Heathcare) to determine the isoelectric point (PI) and relative molecular weight (PMR) of the proteins presents in the different groups and analysis of the optical density. One hundred and seventy eight proteins were presents in the washings. The distribution of the proteins according to the PI, 74% (132/178) had PI between 5,5 and 8 and according to the PMR 44% (79/178) of the proteins showed PMR lower than 50KDa, while 54% (95/178) had PMR between 50 and 100KDa. In the washings recovered through the folley catheter (FC and FP) 151 proteins were selected, being 96 from the cyclic cows and 86 from the pregnant cows. The washings recovered post-mortem (PMC and PMP) showed only 54 proteins, from those 24 were present in the cyclic animals and 36 in the pregnant animals. According to the reproductive status 115 proteins were found in the washings from the cyclic animals (FC and PMC), while 104 proteins were selected from the washings of the pregnant animals (FP and PMP). Among the washings recovered through the folley catheter (FC and FP) 31 proteins were the same between the reproductive status. While in the washings recovered post-mortem (PMC and PMP) only six proteins were present in both washings. In washings done in the cyclic animals (FC and PMC) five proteins were presents in both kind of washings, while in washings done in the pregnant animals (FP and PMP) 18 proteins were the same in both kind of washings. Among the washings FC and PMP or FP and PMC, 15 and six proteins, respectively were the same. The proteins presents exclusively in the washings of the pregnant animals are probably involved with the embryo-maternal interplay during the process of pregnancy establishment. Proteins detected exclusively in the washings recovered through the folley catheter may be inflow of proteins from the serum, in response to the uterine manipulation during the process of washing. It was expected a better effect from the washings post-mortem than the ones through the folley catheter. However the washings from the folley catheter had a better result, because they identified a greater number of proteins which allowed identify greater differences between the washings from cyclic and pregnant animals. In conclusion, the two-dimensional electrophoresis is a adequate method to analyze the quantitatively proteins profile of the uterine environment in the cow and that both the reproductive status and the method to obtain the uterine washings modify the proteins composition. New studies are necessary to obtain the amino acids sequence of the proteins found so that we know their identity and function in the beginning of pregnancy in the cow.