Orientador: Ana Liz Garcia Alves / Coorientador: Carlos Alberto Hussni / Banca: Alexandre Secorun Borges / Banca: Elenice Deffune / Banca: Anna Paula Balesdent Barreira / Banca: Rafael Resende Faleiros / Resumo: A lesão do tendão flexor digital superficial (TFDS) é uma importante causa de claudicação em equinos. Embora existam diversos tratamentos descritos, poucos são eficazes na melhora significativa da qualidade da matriz extracelular. Recentemente, diversos experimentos vêm focando no potencial terapêutico das células-tronco mesenquimais (CTMs) e do plasma rico em plaquetas (PRP) em casos de lesões de difícil cicatrização. O objetivo geral deste estudo foi a obtenção, cultivo e caracterização das células tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo (AdCTMS), a adoção de uma nova técnica de indução de lesão tendínea utilizando colagenase em gel e a avaliação da reparação tendínea após terapia com a associação terapêutica de AdCTMs e PRP através da análise clínica, ultrassonográfica, histopatológica, imunoistoquímica (colágeno tipo III e fator VIII) e da expressão gênica (COL1A1, COL3A1, TNC, TNMD, SCX). Foi possível isolar e cultivar as AdCTMs, concluir sua caracterização através da diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica, além da confirmação da expressão destas células aos marcadores CD44, CD90 e CD105 na citometria de fluxo. A indução da lesão do TFDS foi realizada com sucesso, sendo observado na avaliação clínica e ultrassonográfica o desenvolvimento de tendinite focal similar a lesão de ocorrência natural. O uso das AdCTMs associadas ao PRP demonstrou ser viável e resultou na prevenção da progressão da área da lesão no grupo tratado na avaliação ultrassonográfica, maior fluxo sanguíneo do grupo tratado na avaliação com Power Doppler, e melhora da organização cicatricial, com diminuição do infiltrado inflamatório na avaliação histopatológica. Não foram observadas diferenças entre os grupos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Superficial digital flexor tendon (SDFT) lesion is an important cause of lameness in horses. Although there are many treatments described, few are effective in maintain the quality of the extracellular matrix. Recently several studies have focused on the therapeutic potential of mesenchymal stem cells (MSCs) and platelet-rich plasma (PRP) in some damage tissues. The aim of this study was to perform the isolation, cultivation and characterization of mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (AdMSCs), the adoption of a new tendon lesion induction technique using collagenase in gel, and evaluation of tendon repair after treatment with the AdMSCs and PRP association by clinical, ultrasonographic, histopathological, immunohistochemical (collagen type III and factor VIII) and gene expression (COL1A1, COL3A1, TNC, TNMD, SCX) analysis. It was possible to isolate, cultivate and perform the characterization of AdMSCs by adipogenic, osteogenic, chondrogenic differentiation, and to confirm the expression of CD44, CD90 and CD105 cell markers on flow cytometry. The SDFT injury induction was successful observed in clinical and ultrasonographic evaluation, with development of focal lesion similar to naturally occurring. The use of AdMSCs and PRP association proved to be feasible and resulted in preventing the progression of the lesion area in the treated group on ultrasound evaluation, increased blood flow on the Power Doppler evaluation and decreased inflammatory infiltrate and improved the organization on histopathological evaluation. No differences were observed between the groups regarding the immunohistochemistry evaluation and the expression of the tested genes. It can be concluded based on the results observed: (1) that the AdMSCs were properly processed and characterized with the methods employed; (2) tendon.. (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Diante da importância do baço, deve-se tentar a sua preservação sempre que possível e, nas situações em que a esplenectomia total é inevitável, a única alternativa para a preservação de sua função parece ser a realização do autoimplante esplênico. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi analisar o desenvolvimento da regeneração morfológica do tecido autoimplantado, sob microscopia de luz e por imunomarcação, e avaliar a regeneração funcional, por meio da depuração dos corpúsculos de Howell-Jolly, em ratos submetidos a esplenectomia total combinada com autoimplante esplênico. Foram utilizados 112 ratos Wistar albinos machos adultos, distribuídos aleatoriamente em 16 grupos. Semanalmente, durante 16 semanas, os sete animais de cada grupo foram submetidos a coleta sanguínea, sendo preparadas lâminas para avaliação da presença de corpúsculos de Howell-Jolly (avaliação funcional), que estiveram presentes durante as 15 primeiras semanas, sendo que, a partir da oitava semana, houve uma diminuição significativa, mas somente não foram mais identificados na 16 semana. Em seguida à coleta sanguínea, os animais correspondentes a cada semana foram mortos por sobredose anestésica e submetidos a relaparotomia para retirada do tecido esplênico autoimplantado regenerado. Posteriormente, esse tecido regenerado foi analisado sob microscopia de luz, onde, sob coloração de hematoxilina-eosina, observou-se regeneração morfológica completa do tecido autoimplantado a partir da oitava semana, sendo encontrado um tecido morfologicamente idêntico ao baço normal. Com a técnica de resorcina-fucsina de Weigert, identificaram-se fibras do sistema elástico, demonstrando elastogênese intensa no processo de regeneração do tecido esplênico autoimplantado. Na imunomarcação com antígeno de proliferação celular nuclear (PCNA), observou-se proliferação celular, evidenciando uma expressão gradativa das células a partir da 2 semana, sendo que, nas 9 e 10 semanas, observou-se aumento significativo na imunodensidade, quando comparadas às demais, o que não ocorreu com a técnica para caspase-3, onde a apoptose mais intensa ocorreu nas primeiras semanas. Nossos resultados mostram que, com oito semanas, existe regeneração morfológica do autoimplante esplênico, assemelhando-se a um baço normal, no mesmo momento em que parece iniciar-se a sua regeneração funcional. / Given the importance of the spleen, it should be preserved whenever possible. If splenectomy is crucial, the only alternative to preserve spleen function is to perform a splenic auto-implantation. The aim of the present study was to assess the morphological regeneration of an auto-implanted spleen and to correlate it to its functional regeneration in a model of splenectomy combined with splenic auto-implantation in rats. Three-month old male Wistar rats (n=112) were randomly allocated into 16 groups (n=7). During 16 weeks, blood was collected to evaluate the presence of Howell-Jolly bodies (functional evaluation). These structures were found during the 15 first weeks, but decreased progressively starting at the 8th week, and were no longer found at the 16th week. In each specific week, after blood collection, rats were killed by anesthetic overdose and subjected to relaparotomy in order to retrieve the regenerated auto-implanted splenic tissue. The tissue was stained by hematoxylin and eosin and analyzed under the light microscope. Full morphological regeneration of the auto-implanted tissue was seen at the 8th week. Intense elastogenesis was detected by the Weigert resorcin-fuchsin stain during regeneration. Cell proliferation was increased starting at the 2nd week, and the highest density was seen at the 9th and 10th weeks (assessed by the immunohistochemistry of the proliferating cell nuclear antigen [PCNA]). Caspase-3 stain indicated higher apoptosis at the first weeks of experiment. The present data show that there is a morphological regeneration of the splenic auto-implant after 8 weeks of implantation, resulting in a morphologically healthy spleen, and it matches the initiation of the functional regeneration.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-06-15T17:26:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1210635 bytes, checksum: faa77275e981ba4294b9cf265ef13720 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-15T17:26:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1210635 bytes, checksum: faa77275e981ba4294b9cf265ef13720 (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O tecido muscular é um dos tecidos de maior importância ao nível de produção animal, tendo-se em vista o fornecimento de micronutrientes e proteínas para o consumo humano. A miogênese é o processo responsável pela formação e manutenção do tecido muscular, sendo influenciado por fatores genéticos e ambientais. Nesse sentido, pesquisas nas áreas de genética e nutrição têm contribuído de forma expressiva para a produção de animais mais eficientes e, consequentemente, produtivos. A utilização de agonistas β-adrenérgicos é uma importante estratégia neste processo, uma vez que os aditivos participam da repartição energética dos nutrientes dietéticos, contribuindo para o anabolismo do tecido muscular. As vias de sinalização intracelular AMPK (proteína quinase ativada por AMP) e mTOR (proteína alvo da rapamicina em mamíferos) são sensíveis ao status energético e exercem grande influência sobre o desenvolvimento e crescimento muscular. No entanto, poucas pesquisas têm sido desenvolvidas a fim de elucidar os mecanismos moleculares pelos quais os agonistas β-adrenérgicos atuam sobre o anabolismo do tecido muscular. As técnicas de cultivo celular se caracterizam como um importante modelo de estudos dos mecanismos moleculares envolvidos na sinalização intracelular para a manifestação de um fenótipo de interesse. No presente trabalho, a utilização do agonista β-adrenérgico ractopamina aumentou a viabilidade de mioblastos C2C12, regulando o status energético via AMPK, reduzindo, dessa forma, a apoptose das células. Portanto, sugere-se que o fenótipo muscular observado na presença de ractopamina deve-se, em partes, à atuação do aditivo sobre vias de sinalização intracelular que regulam a expressão de importantes genes envolvidos no anabolismo de células miogênicas. / One of the most important tissues in animal production is muscle tissue, due to supply of micronutrients and proteins for human consumption. Myogenesis is the process involved in the development and maintenance of muscle tissue, being influenced by genetic and environmental factors. Therefore, researches in the areas of genetics and nutrition have contributed significantly to the production of more efficient and consequently, productive animals. The use of β-adrenergic agonists is an important strategy in this process, because the additives participate in energy distribution of dietary nutrients, contributing to anabolism of muscle tissue. AMPK (protein kinase AMP-activated) and mTOR (mammalian target protein of rapamycin) are important intracellular signaling pathways sensitive to energy status and exert great influence on development and growth of muscle tissue. However, few studies have been developed to elucidate the molecular mechanisms by which β-adrenergic agonists act on muscle tissue anabolism. Cell culture techniques are characterized as an important model for molecular mechanisms studies involved in the intracellular signaling to manifestation of the phenotype of interest. In the present study, the use of the β-adrenergic agonist ractopamine increased the viability of C2C12 myoblasts, regulating energetic status via AMPK, reducing, this way, cellular apoptosis. Therefore, these results suggest that the muscle phenotype observed in the presence of ractopamine is in part due to the action of the additive on intracellular signaling pathways that regulate the expression of important genes involved in myogenic anabolism.

A aplicação de corrente elétrica na pele humana estimula alguns dos nervos periféricos e fibras do corpo humano, causando diversas reações tais como o aumento da produção de suor. Além disso, a análise dessas reações pode ser usada para diagnosticar doenças como diabetes. No entanto, grande parte dos aparelhos de estimulação elétrica comerciais utilizam sinais de onda quadrada. Esses sinais não são ideais uma vez que estimulam não somente as glândulas desejadas (fibras C), mas também as fibras A-delta do corpo, responsáveis pela sensação rápida de dor. Neste contexto, este trabalho apresenta o desenvolvimento de um sistema eletrônico para controlar a estimulação elétrica da pele humana. O objetivo do sistema é tornar possível o teste diferentes padrões de pulsos de corrente elétrica, a fim de obter a forma ideal para maximizar os efeitos desejados com um mínimo de dor. Como resultado do projeto tem-se o desenvolvimento de um dispositivo eletrônico microcontrolado que gera pulsos elétricos baseados em sinais pré-programados recebidos de um PC via USB. Além disso, o sistema é capaz de medir o valor da impedância da pele durante a estimulação elétrica, o que pode complementar o processo de diagnóstico. Os resultados dos testes realizados com o sistema mostraram que a intensidade da dor durante a estimulação pode ser minimizada apenas com a forma do pulso, sem a alteração da amplitude e da energia do sinal. Além disso, uma pequena diferença na impedância da pele foi observada quando diferentes formas de onda foram aplicadas. / It has been found that electrical current applied to the human skin stimulates some of the peripheral nerves and fibers of the human body, causing several reactions such as the increase of sweat production. Moreover the analyses of such reactions can be used to diagnose some diseases, for example diabetes. Nevertheless, most of the electrical stimulation devices, which use mostly square wave signals, are not optimal since they stimulate not only the desired glands (C-fiber) but also the Aδ-fibers of the body, responsible for the fast pain sensation. In this context, this work presents the development of a microcontroller based electronic system for controlling the electrical stimulation of human skin. The objective of the system was to make it possible to test different patterns of electric current pulses, in order to obtain the ideal shape for maximizing the desired stimulation effects with minimal pain. The result of the project was an electronic device that generates electrical pulses based on pre-programmed signals, which are received through a USB interface from a PC. Moreover the system was able to measure the skin impedance value during the electrical stimulation, complementing the diagnosis. The results of the tests carried out with the system showed that the pain intensity during the stimulation could be minimized according to the pulse shape not changing the amplitude and energy of the signal. Moreover a slight difference in the skin impedance was observed when different shapes were applied.

A aplicação de corrente elétrica na pele humana estimula alguns dos nervos periféricos e fibras do corpo humano, causando diversas reações tais como o aumento da produção de suor. Além disso, a análise dessas reações pode ser usada para diagnosticar doenças como diabetes. No entanto, grande parte dos aparelhos de estimulação elétrica comerciais utilizam sinais de onda quadrada. Esses sinais não são ideais uma vez que estimulam não somente as glândulas desejadas (fibras C), mas também as fibras A-delta do corpo, responsáveis pela sensação rápida de dor. Neste contexto, este trabalho apresenta o desenvolvimento de um sistema eletrônico para controlar a estimulação elétrica da pele humana. O objetivo do sistema é tornar possível o teste diferentes padrões de pulsos de corrente elétrica, a fim de obter a forma ideal para maximizar os efeitos desejados com um mínimo de dor. Como resultado do projeto tem-se o desenvolvimento de um dispositivo eletrônico microcontrolado que gera pulsos elétricos baseados em sinais pré-programados recebidos de um PC via USB. Além disso, o sistema é capaz de medir o valor da impedância da pele durante a estimulação elétrica, o que pode complementar o processo de diagnóstico. Os resultados dos testes realizados com o sistema mostraram que a intensidade da dor durante a estimulação pode ser minimizada apenas com a forma do pulso, sem a alteração da amplitude e da energia do sinal. Além disso, uma pequena diferença na impedância da pele foi observada quando diferentes formas de onda foram aplicadas. / It has been found that electrical current applied to the human skin stimulates some of the peripheral nerves and fibers of the human body, causing several reactions such as the increase of sweat production. Moreover the analyses of such reactions can be used to diagnose some diseases, for example diabetes. Nevertheless, most of the electrical stimulation devices, which use mostly square wave signals, are not optimal since they stimulate not only the desired glands (C-fiber) but also the Aδ-fibers of the body, responsible for the fast pain sensation. In this context, this work presents the development of a microcontroller based electronic system for controlling the electrical stimulation of human skin. The objective of the system was to make it possible to test different patterns of electric current pulses, in order to obtain the ideal shape for maximizing the desired stimulation effects with minimal pain. The result of the project was an electronic device that generates electrical pulses based on pre-programmed signals, which are received through a USB interface from a PC. Moreover the system was able to measure the skin impedance value during the electrical stimulation, complementing the diagnosis. The results of the tests carried out with the system showed that the pain intensity during the stimulation could be minimized according to the pulse shape not changing the amplitude and energy of the signal. Moreover a slight difference in the skin impedance was observed when different shapes were applied.

Made available in DSpace on 2016-12-23T14:37:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao.pdf: 478233 bytes, checksum: 59f53a87f76279d2bcf9fe36ad7f2a18 (MD5) Previous issue date: 2006-02-23 / Experiments were accomplished in establishment and multiplication medium with the objective of evaluating the micropropagation of the papaya tree (Carica papaya L.) Hybrid 'Tainung 01', generation F1, being used apical sections and apical sections of lateral buds of juvenile plants, cultivated in greenhouse. In the MS establishment medium, being used apical sections, different combinations of growth regulators were tested NAA (0.093; 0.931 and 1.862 mg L-1) and kinetin (5.38; 10.76 and 21.52 mg L-1) for identification of the best relationship for the survival, reactivity and callus mass. With the use of 0.093 mg L-1 of NAA combined with 5.38 mg L-1 of kinetin was obtained the best rosette of leaves formation with 100% of cultures reactivate, indicating there to be adaptation of the explants in vitro, besides to smallest callus formation, could be proven with the good reaction of these explants in MS multiplication medium with NAA to 0.093 mg L-1 and BAP to 0.45 mg L-1 during five subculture, with rate of constant multiplication of 5.288:1. In a second stage, with the use of apical sections of lateral buds, the adenine sulfate was evaluated in the multiplication medium. For the preparation of the establishment medium the best combination of the growth regulators was used NAA and kinetin obtained previously, while for the multiplication medium NAA was used to 0.093 mg L-1 and BAP to 0.45 mg L-1, and different levels of adenine sulfate (0; 30; 60; 90 and 120 mg L-1), associated with removal or not of the leaves of the rosette of leaves formed in the establishment medium. The tufts of shoots were subculture every 30 days in smaller tuft and, at the end of the fourth subculture they were made the evaluations of the fresh mass of the aerial part, number of capable shoots (&#8805; 5 mm) and no capable (< 5 mm) to the promoting root formation, and the visual aspect of the tufts of shoots. The best answers for the number of capable shoots to the promoting root formation (&#8805; 5 mm) they were found with the presence of the leaves, for the treatments 0, 30, 60 and 90 mg L-1 of adenine sulfate. It is recommended to use 30 mg L-1 of adenine sulfate in the multiplication medium for the quality and homogeneity of the produced aerial parts, with prolonged shoots and long petiole, with good pattern for subsequent promoting root formation. / Foram realizados experimentos em meio de estabelecimento e de multiplicação com o objetivo de avaliar a micropropagação do mamoeiro (Carica papaya L.) Híbrido Tainung 01 , geração F1, utilizando-se segmentos apicais e segmentos apicais de brotações laterais provenientes das plantas juvenis cultivadas em casa de vegetação. No meio de estabelecimento MS, utilizando-se segmentos apicais, foram testadas diferentes combinações dos reguladores de crescimento ANA (0,093; 0,931 e 1,862 mg L-1) e Cinetina (5,38; 10,76 e 21,52 mg L-1) para identificação da melhor relação para a sobrevivência, a reatividade e a massa de calo. Com a utilização de 0,093 mg L-1 de ANA combinado com 5,38 mg L-1 de Cinetina, obteve-se a melhor formação de roseta foliar com 100% de culturas reativas, indicando haver adaptação dos explantes in vitro, além da menor formação de calo, podendo ser comprovado com a boa reação destes explantes em meio de multiplicação MS com ANA a 0,093 mg L-1 e BAP a 0,45 mg L-1, durante cinco subcultivos, com taxa de multiplicação constante de 5,288:1. Numa segunda etapa, com a utilização de segmentos apicais de brotações laterais, avaliou-se a multiplicação em meio MS com diferentes níveis de sulfato de adenina. Para o preparo do meio de estabelecimento, utilizou-se a melhor combinação dos reguladores de crescimento ANA e Cinetina obtidos anteriormente, enquanto que para o meio de multiplicação, usou-se ANA a 0,093 mg L-1, BAP a 0,45 mg L-1 e diferentes níveis de sulfato de adenina (0; 30; 60; 90 e 120 mg L-1), associados com remoção ou não das folhas da roseta foliar formada no meio de estabelecimento. Os tufos de ramos foram subcultivados a cada 30 dias em tufos menores, e ao final do quarto subcultivo, foram feitas as avaliações da massa fresca da parte aérea, número de ramos aptos (&#8805; 5 mm) e não aptos (< 5 mm) ao enraizamento e o aspecto visual dos tufos de ramos. As melhores respostas para o número de ramos aptos ao enraizamento (&#8805; 5 mm) foram encontradas com a presença das folhas para os tratamentos 0, 30, 60 e 90 mg L-1 de sulfato de adenina. Recomenda-se utilizar 30 mg L-1 de sulfato de adenina no meio de multiplicação pela qualidade e homogeneidade das partes aéreas produzidas, com ramos alongados e pecíolos longos, com bom padrão para posterior enraizamento.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T17:31:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ExpressaoGenicaViabilidade.PDF: 2527584 bytes, checksum: a92c30bb13a081c6f66b18e729cf04d0 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-19T14:44:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ExpressaoGenicaViabilidade.PDF: 2527584 bytes, checksum: a92c30bb13a081c6f66b18e729cf04d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-19T14:44:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ExpressaoGenicaViabilidade.PDF: 2527584 bytes, checksum: a92c30bb13a081c6f66b18e729cf04d0 (MD5) Previous issue date: 2012-05-25 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A vitrificação é uma biotécnica que tem se mostrando cada vez mais promissora em várias espécies, dentre elas ruminantes domésticos (como ovelhas, cabras e vacas), e em primatas não humanos (PNH) (como o cynomologus e rhesus), e consiste na redução ultra-rápida da temperatura mediante a presença de altas concentrações de agentes crioprotetores (ACP’s) em nitrogenio liquido. Desta forma o objetivo deste estudo foi o desenvolvimento de uma metodologia de criopreservação por vitrificação de Folículos Ovarianos Pré-antrais (FOPA’s) em Sapajus apella. Para tanto, foram utilizadas femêas (n=9) adultas de Sapajus apella pertencentes ao plantel do Centro Nacional de Primatas (CENP). Foram realizadas coletas de córtex de tecido ovariano por meio de laparotomia exploratória de modo a não inviabilizar o animal reprodutivamente. Os fragmentos expostos a 8 tratamentos diferentes: Etilenoglicol (EG) 40% + Sacarose (Sac) 0,5 M dissolvidos em TCM-199 adicionados ou não de Selenio (2,5, 5 ou 10 ng/ml) ou Trolox (25, 50 ou 100 mM). Após a exposição aos agentes crioprotetores foi analisada a viabilidade folicular antes e após a vitrificação, a partir da morfologia folicular, expressão dos genes Hsp70, Erp29, Erp60 e Sod1 através da análise por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), além de realizar a dosagem de estresse oxidativo atravéz da TEAC (do inglês Total Equivalent Antioxidant Activity). As análises mostraram que a vitrificação permitiu a manutenção da viabilidade folícular mediante a exposição previa a elevadas concentrações de ACP’s, principalmente quando suplementados com trolox a 50 μM (que resultou em elevadas taxas de sobrevivência folicular) e aumento na expressão da enzima antioxidante Sod1. Enquanto na ausência do mesmo foi observado o aumento nas taxas de folículos degenerados e com vacuolização citoplasmática, além da redução na expressão da enzima antioxidante Sod1 e elevação da expressão da chaperona Erp29. / Vitrification is a biotech that has been increasingly showing promise in several species, among them domestic ruminants (such as sheep, goats and cows) and in nonhuman primates (NHP) (as cynomologus and rhesus), and consists in reducing ultra-rapid temperature by the presence of high concentrations of cryoprotective agents (PCA's) in liquid nitrogen. Thus the aim of this study was to develop a methodology for cryopreservation by vitrification of preantral follicles (PF's) in Sapajus apella. For this purpose, we used females (n = 9) adult Sapajus apella squad belonging to the National Primate Center (CENP). Samples were taken from the ovarian cortex by laparotomy so as not to destabilize the animals reproducibly. The fragments exposed to 8 different treatments: Ethylene glycol (EG) + 40% Sucrose (Sac) dissolved in 0.5 M TCM-199, added to Selenium (2,5, 5 or 10 ng / ml) or Trolox (25, 50 or 100 mM). Following exposure to cryoprotective agents was analyzed follicular viability before and after vitrification, from the follicular morphology, expression of Hsp70 genes, Erp29, Erp60 SOD1 and through the analysis by Polymerase Chain Reaction (PCR), in addition to performing measurement of oxidative stress thru the TEAC (English Total Equivalent Antioxidant Activity). The analyzes showed that vitrification allowed the maintenance of follicular viability by previous exposure to concentrations of ACP's alevadas, especially when supplemented with 50 mM trolox (which resulted in high follicular survival rates) and increased expression of the antioxidant enzyme SOD1. While in the absence of it was observed an increase in rates of follicles degenerate and vacuolated, and reduced expression of the antioxidant enzyme SOD1 and increased expression of chaperone Erp29.

Tese de mestrado integrado. Bioengenharia. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2012

CAPES / Estudos realizados com cães apontam que dos grupos tumorais analisados, os de mama representam cerca de 25% a 50% dos tipos de tumores. Deste total, metade é considerado maligno. Apesar de representar um valor considerável de malignidade, estudos nesta área são poucos representativos e escassos na literatura. É de conhecimento que os tumores são causados por mudanças químicas e bioquímicas que ocorrem na célula. Atualmente, pesquisas são realizadas para entender o comportamento dessas alterações e por este motivo é de grande valia conhecer os elementos traço presentes nestes tecidos. Para esta finalidade a técnica mais empregada é a de ED-XRF (Fluorescência de Raios X de Dispersão de Energia), uma vez que é uma técnica analítica não destrutiva que permite determinar e quantificar a composição elementar das amostras, porém não identifica elementos com baixos números atômicos (menor que Z=10). Foram analisadas 56 amostras de tecido mamário canino benignas e malignas, fixadas em formalina a 10% tamponada e mantida à temperatura ambiente. Primeiramente para a quantificação dos elementos traço Ca, Fe, Cu e Zn foram determinadas as curvas de calibração de padrões diluídos em água, com concentrações de Ca, Fe, Cu e Zn, variando de 400 mg/kg a 35 mg/kg, de 20 mg/kg a 2 mg/kg, de 10 mg/kg a 1 mg/kg e de 100 mg/kg a 9 mg/kg, respectivamente. As medições foram submetidas à técnica de ED-XRF utilizando um tubo de raios X com ânodo de prata e técnica de exposição de 30 kV e 100uA e um tempo de exposição de 1000 segundos (incerteza ≤ 3%). O código XRMC (X-Ray Monte Carlo) foi utilizado para validação do método experimental, que tem o objetivo de simular computacionalmente as respostas esperadas para os ensaios experimentais validando assim a eficácia da metodologia. As concentrações dos elementos traço obtidas foram analisadas estatisticamente onde verificou-se uma variação significativa do elemento Zn, estando este presente em maior concentração no tecido mamário maligno do que no benigno. Este resultado pode estar relacionado à presença deste elemento nas matrizes de metaloproteinases, e em neoplasias malignas estão mais concentradas porque há característica de invasão tumoral neste tipo de neoplasia. Em outra comparação estatística pode-se verificar que os elementos traços Fe, Cu e Zn tem concentração equivalente tanto na região central do tumor tanto quanto na periferia, com exceção do Ca, este concentrando-se mais na região tumoral o que pode se dever às calcificações. Estudos nessa área são de grande potencial por permitir um melhor entendimento do processo patológico em tumores mamários caninos. / Studies with dogs show that the breast cancer represent about 25% to 50% of tumor types. Of this total, half is considered malignant. Despite representing a considerable amount of malignancy, studies in this area are few representative and scarce in the literature. It is known that tumors are caused by chemical and biochemical changes that occur in the cell. Currently, surveys are conducted to understand the behavior of these changes and for this reason, it is of great value to know the trace elements present in these tissues. For this purpose, the most common technique is to ED-XRF (X-Ray Fluorescence Energy Dispersion) since it is a non-destructive analytical technique to determine and quantify the elemental composition of the samples, although it doesn’t identify elements with low atomic numbers (less than Z= 10). Were analyzed 56 samples of canine breast tissue benign and malignant, fixed in 10% buffered formalin and kept at ambient temperature. First, for the measurement of trace elements Ca, Fe, Cu and Zn were determined standards for calibration curves diluted in water to concentrations of Ca, Fe, Cu and Zn, ranging from 400 mg/kg to 35 mg/kg, from 20 mg/kg to 2 mg/kg, from 10 mg/kg to 1 mg/kg and from 100 mg/kg to 9 mg/kg, respectively. Measurements were subjected to ED-XRF technique using an X-ray tube with silver anode and exposure technique of 30 kV and 100 uA and exposure time of 1000 seconds (uncertainty ≤ 3%). The XRMC code (X-Ray Monte Carlo) was used for validation of experimental method, which is intended to simulate by computer the expected responses for experimental tests, therefore validating the methodology efficiency. The concentrations of trace elements obtained were analyzed statistically where there was a significant variation of Zn element, the latter being present in higher concentration in malignant breast tissue than benign. This result may be related to the presence of this element in the matrix metalloproteinases, and malignant neoplasms are more concentrated because there are characteristic of tumor invasion in this type of neoplasm. In another statistical comparison it can be seen that the trace elements Fe, Cu and Zn is equivalent concentration both in the central region of the tumor as well as in the periphery, with the exception of Ca, this focusing more on the tumor region may be due to calcifications. Studies in this area are of great potential for allowing a better understanding of the disease process in canine mammary tumors.

A queimadura de 3º grau é um dos maiores traumas a que um ser humano pode ser submetido e em geral são as lesões mais frequentes na população mundial, tratando-se de um importante problema de saúde pública. Pensando neste problema, observou-se que a utilização da membrana amniótica (MA) pode ser o melhor tratamento que esses pacientes possam receber. Ela atua em benefício da epitelização, facilita a migração e a adesão das células epiteliais basais, a matriz estromal possui inibidores de proteases que previne a apoptose e restaura o fenótipo epitelial, antibacteriana do córion e âmnion, além de proteger a ferida e atuar na redução da dor. A descelularização, trata-se da retirada de todas as células e núcleo da MA utilizada, como forma de se evitar qualquer tipo de histoincompatibilidade. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia do uso da membrana amniótica descelularizada (MAD) no tratamento de queimaduras de 3o grau em humanos, testada em ratos da linhagem Wistar. Trata-se de uma pesquisa descritiva, a qual investiga fundamentalmente a especificação e a disposição de dados acerca dos resultados obtidos a partir de um processo regenerativo de queimaduras utilizando-se a MAD. A amostra foi constituída de constituída por 20 ratos machos adultos da linhagem Wistar, dividida em 2 grupos (n=10): grupo controle (GC)–sem MA e grupo transplantado–com MA (TMAD). Os dois grupos foram submetidos a um processo padronizado de queimadura térmica, sendo retiradas duas amostras de tecido para análise, no 14º dia e no 30º dia. As amostras foram analisadas com o emprego de técnicas anatomopatológicas onde foram montadas em lâminas fragmentos de MA corados com solução Hematoxilina Eosina (HE) e, para análise histomorfométrica,as lâminas foram coradas com picro sirius red sob luz polarizada para verificação da descelularização e quantificação de colágeno do tipo I, II e III. As imagens foram quantificadas utilizando o programa Image Pro Plus®, versão 5.0 para Windows®. Os dados estatísticos foram analisados utilizando o programa computacional SSPS v.21.0. Observou-se um aumento significativo da quantificação de colágenos do tipo III no 14º dia no grupo TMAD em relação ao GC, do colágeno do tipo II no 14º e 30º dia comparado ao GC e do colágeno tipo I no 14º e 30º dia, mostrando que a utilização da MA foi eficaz no grupo TMAD. Concluiu-se que a MAD, aplicada topicamente, demonstrou eficácia no processo cicatricial em queimaduras de 3º grau. Esperava-se que a mesma promovesse a aceleração de cicatrização dos ferimentos, mas, o que se observou ao término do trabalho é que a MAD não só promoveu a cicatrização como foi mais eficiente no processo de regeneração dos tecidos lesados. / 3rd degree of burns are one of the greatest injury that a human being can be submitted and generally are the most frequent injuries in the world population, in the case of a major public health problem. Thinking this problem, it has been observed that the use of amniotic membrane (AM) may be the best treatment these patients can receive. It acts on behalf of epithelialization, facilitates migration and adhesion of basal epithelial cells, stromal matrix has protease inhibitors which prevent apoptosis and restores epithelial, antibacterial phenotype of the chorion and amnion, and protect the wound and act on reducing pain. The decellularization, it is the withdrawal of all cells and core AM used as a way to avoid any kind of histoincompatibility. This study aimed to evaluate the efficacy of the decellularized amniotic membrane (DAM) in the treatment of third degree burns in humans, tested in Wistar rats. It is a descriptive research which investigates mainly the specification and the arrangement of data on the results obtained from a regenerative process burns using DAM. The sample consisted of consisted of 20 Wistar adult male rats, divided into 2 groups (n = 10): control group (CG) - without MA, and group transplanted - with AM (TDAM). The two groups were submitted to a standard process of thermal burn, two samples being removed tissue for analysis on day 14 and day 30. Samples were analyzed with the use of pathological techniques which were mounted on slides DNA fragments stained with solution hematoxylin eosin (HE) for histomorphometric analysis, the slides were stained with picrosirius red under polarized light for verification of decellularization and quantifying collagen type I, II and III. Images were quantified using Image Pro Plus ®, version 5.0 for Windows. Statistical data were analyzed using the computer program SPSS v.21.0. There was a significant increase in type III collagen quantification on the 14th day in TDAM group compared to CG, type II collagen in the 14th and 30th day compared to the CG and type I collagen in the 14th and 30th day, showing that the use of MA were effective in TDAM group. It was concluded that the DAM, applied topically, has shown efficacy in the healing process in 3rd degree burns. It was expected that it would promote accelerated wound healing but which was observed at the end of work that MAD is not only promoted as the healing was more efficient the regeneration process of the damaged tissues.