Made available in DSpace on 2014-06-12T22:58:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2810_1.pdf: 2283343 bytes, checksum: ca8cbd5bb4e2ceac8a7c25a7641281a7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / O Glioblastoma multiforme é uma neoplasia astrocitária maligna e infiltrativa que se torna mais freqüente com a idade e tem uma incidência de 12% a 15% dentre as neoplasias intracranianas com uma sobrevida pós-operatória de 12 meses. Angiogênese é um dos principais pré-requisitos para o crescimento tumoral e para metástase. Em glioblastomas, a presença de vascularização atípica estabelece de forma marcante a malignidade de suas células que secretam fatores próangiogênicos alterando totalmente a estrutura do vaso, tornando-o similar a um glomérulo renal. O estudo dos indicadores de anaplasia (mitose, celularidade e necrose em paliçada) em região circunvizinha a angiogênese típica e atípica, em glioblastomas, esclarecerá a importância da estrutura vascular normal ou alterada para o desenvolvimento deste tipo de tumor. O presente estudo teve por objetivo avaliar a influência dos parâmetros histopatológicos de hipercelularidade, mitose e necrose em paliçada na vasculatura dos glioblastomas. Foram utilizados blocos de parafina com fragmentos teciduais cujos diagnósticos histopatológicos foram de glioblastomas. Foram preparadas lâminas e, após análise histológica, selecionados os casos que apresentaram vasculatura atípica. Em cada caso foram analisados os parâmetros de malignidade: hipercelularidade, mitose e presença de necrose em paliçada em áreas vasculares típicas para comparação com áreas vasculares atípicas. Após essa análise, a morfometria gerou as médias da contagem do número de células tumorais e número de mitoses que foram comparadas intra-grupo e esses achados foram correlacionados com a presença ou ausência de necrose em paliçada. O número de mitoses e células em regiões circunvizinhas a vasos atípicos foi estatisticamente superior, estando fortemente relacionados entre si. Constatou-se, que regiões onde há o aumento do número de células e mitoses predispõem a formação de vascularização atípica. A necrose em paliçada não teve correlação com o aumento do número de mitoses em áreas vasculares típicas ou atípicas, mas sua presença foi significativa quanto ao número de células, sendo encontrada uma maior celularidade nos casos em que estava presente esse tipo de necrose. Há interferência dos parâmetros histopatológicos relacionados a hipercelularidade e número de mitoses na áreas vasculares atípicas dos glioblastomas em relação às áreas vasculares típicas

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-09-21T20:49:46Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Evandro Valentim da Silva.pdf: 4870288 bytes, checksum: df2b2f27d9c6c0e2bbf13e414f63b156 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-24T22:27:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Evandro Valentim da Silva.pdf: 4870288 bytes, checksum: df2b2f27d9c6c0e2bbf13e414f63b156 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-24T22:27:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Evandro Valentim da Silva.pdf: 4870288 bytes, checksum: df2b2f27d9c6c0e2bbf13e414f63b156 (MD5) Previous issue date: 2016-09-13 / CNPq / Dentre muitos mecanismos, a estimulação da angiogênese leva ao aumento da secreção de fatores vaso-indutores e diminuição dos inibidores. O presente estudo avaliou as interferências dos extratos hidroalcóolico (EHA - 50 μg/mL) e metanólico (EM - 50 μg/mL) de Caulerpa taxifolia no metabolismo energético e na Angiogênese de embriões de Gallus gallus domésticos L. Ovos vermelhos da raça Rhode Island Red de quatro lotes, foram incubados a 37º C, com viragem automática, para o estudo do metabolismo energético e da angiogênese. Os grupos foram distribuídose divididos em grupos controle, tratados EHA (50 μg/mL) e ME (50 μg/mL), e controle enriquecidos com ω-3, com e sem tumor. No estágio de 288 horas, o desenvolvimento foi interrompido. Os vasos foram quantificados e caracterizados morfologicamente e os embriões fotografados, fixados e processados. Os resultados do metabolismo energético indicaram que não houve diferença significativa entre grupos controle e tratado normal, contudo os animais com tumores induzidos com EHA e ME e os enriquecidos com ω-3 apresentaram resposta significativa quando comparados ao controle (p≤ 0,05). Foi observado que as propriedades físicas e a integridade estrutural da casca dos animais controle tumorado apresentaram anomalias de formação: casca rugosa, áspera e mole. Os parâmetros morfométricos não apresentaram significância entre os grupos (p≤ 0,05). Em relação a vasculogênese e angiogênese houve uma redução significativa entre grupos normais e tumorados. Os vasos apresentaram uma discreta redução do calibre quando comparado ao grupo controle (p≤ 0,05). O aspecto microscópico da membrana amniótica dos organismos tratados com o EHA e ME, dos grupos normal e tumorado mantiveram a morfologia preservada ao longo do tratamento. O tecido cardiovascular de embriões controle com tumor apresentou pontos hemorrágicos e uma congestão no lúmen do vaso, talvez em função da presença da malignidade das células. A microscopia da medula encefálica se manteve preservada. Nos embriões controle tumorados ela se apresentou pouco conservada, com vasos congestos na região do manto, possivelmente por interferência da ação do tumor no tecido analisado. Estes biocompostos apresentaram ainda efeito antivasculogênico e antiangiogênico, sem comprometer a anatomia macroscópica e microscópica dos organismos tratados durante o desenvolvimento embrionário. Diante do presente exposto, conclui-se que os compostos presentes nos extratos de Caulerpa taxifolia pode ser considerada um potencial agente antitumoral de origem marinha, que talvez atue nos mecanismos intrínsecos relacionados com a matriz extracelular, estabilizando e remodelando a estrutura vascular e a capacidade de indução da neovasculogênese. / The neovascularization is an important mechanism in tumor development, is responsible for nutritional support to cancer cells proliferating and establishing favorable conditions for metastatic spread. Among many mechanisms, stimulation of angiogenesis leads to increased secretion of vaso-inducing factors and decreased inhibitors. This study evaluated the interference of hydroalcoholic extracts (EHA - 50 mg / mL) and methanol (MS - 50 ug / ml) of Caulerpa taxifolia in energy metabolism and angiogenesis of Gallus gallus domesticus embryos L. Red breed eggs Rhode Island Red four batches were incubated at 37 C with automatic turning, for study of energy metabolism and angiogenesis. The groups were divided in control groups treated EHA (50 g / mL) and ME (50 ug / ml) and control enriched with ω-3, with and without tumor. In stage age of 288 hours, the development was stopped. The vessels were quantified and characterized morphologically and photographed embryos, fixed and processed. The results of energy metabolism showed no significant difference between control group and the normal treaty, yet tumorados animals treated with EHA and ME and enriched with ω-3 showed significant response compared to control (p ≤ 0.05). It was observed that the physical properties and structural integrity of the shell tumorado control animals showed formation of defects: rough skin, rough and soft. The morphometric parameters showed no significant difference between the groups (p ≤ 0.05). For vasculogenesis and angiogenesis was significantly reduced between normal groups and tumorados. The vessel had a slight reduction in size compared with the control group (p ≤ 0.05). The microscopic aspect of amniotic membrane bodies treated with EHA and ME, the tumorado groups remained normal and preserved morphology throughout the treatment. The cardiovascular tissue with tumor control embryos showed bleeding points and congestion in the vessel lumen, perhaps due to the presence of malignant cells. The brain marrow microscopy remained preserved. However, in tumorados control embryos she had just saved with congested vessels in the mantle region, possibly by tumor action of interference in the analyzed tissue. These biocompounds still had antivasculogênico and antiangiogenic effect without compromising the macroscopic and microscopic anatomy of organisms treated during embryonic development. Given the above this, it is concluded that the compounds present solution in taxifolia Caulerpa extracts can be considered as a potential antitumor agent of marine origin, which may act on the intrinsic mechanisms related to the extracellular matrix, stabilizing and reshaping the vascular structure and inducibility of neovasculogenesis.

Endostatina é um inibidor específico de proliferação de células endoteliais, migração e um potente inibidor de angiogênese. Foi demonstrado que a administração contínua de endostatina é mais efetiva na supressão tumoral do que a mesma dose administrada s.c. diariamente. Encontrar a concentração de endostatina para combater o crescimento tumoral é complicado pela pequena meia vida da proteína. O transplante de células encapsuladas em dispositivos de imunoisolamento é uma abordagem promissora para muitas doenças, pois permite uma liberação por longo tempo da proteína com propriedades terapêuticas. A membrana semipermeável pode proteger as células da rejeição do sistema imune, para evitar o problema de toxicidade, meia vida limitada e variação nos níveis circulantes. O dispositivo Theracyte® é um sistema de membranas semipermeáveis para macroencapsulamento que permite o implante de células geneticamente modificadas para liberação de proteínas terapêuticas in vivo sem a necessidade de imunosupressão do hospedeiro. Foi demonstrado neste estudo que fibroblastos murinos (células LM) expressando 0,4 µg de endostatina murina/106 células em 24 horas se apresentam como uma abordagem promissora para terapia tumoral. O sistema de liberação é composto de células LM produtoras de endostatina encapsuladas em macrocápsulas Theracyte para imunoisolamento de células. Para demonstrar a utilidade deste sistema, modelos de camundongos com tumores de Ehrlich e melanoma foram tratados com 107 células encapsuladas expressando endostatina. Foram analisados dois protocolos para o implante dos dispositivos: No primeiro, os dispositivos foram implantados nos animais e após 14 dias (cicatrização das feridas), as células expressando endostatina foram implantadas no interior destes dispositivos. Em um segundo, os dispositivos contendo as células foram implantados nos animais. O crescimento do tumor melanoma foi reduzido de 42% pela utilização do primeiro protocolo de implante e de 54% quando o segundo protocolo foi utilizado. O crescimento do tumor de Ehrlich foi reduzido de 25% utilizando o primeiro protocolo de implante. A imunohistoquímica utilizando anticorpo anti-endostatina demonstrou a liberação da endostatina para o estroma ao redor do dispositivo, mostrando que a endostatina, secretada pelas células recombinantes confinadas permeou através da membrana, atingindo os tecidos adjacentes. A efetividade da ação da endostatina na neovascularização de melanoma (B16-F10) foi determinada pela análise do número de estruturas vasculares, analisadas por imunohistoquímica utilizando anticorpo anti-CD34. Foi demonstrado um decréscimo de 41,5% no número de estruturas vasculares, 35,9% no número de vasos viáveis e de 33,5% na extensão da área vascular no grupo tratado. Os resultados descritos são promissores e podem oferecer uma alternativa para uma variedade te tipos de tumores. / Endostatin is a specific inhibitor of endothelial cell proliferation, migration and a potent angiogenesis inhibitor. It has been shown that continuous administration of endostatin is more effective in tumor suppression than the same dose administered s.c. daily. Achieving concentration of endostatin to combat tumor growth is complicated by the short life of the protein. Transplantation of encapsulated cells in immunoisolation devices is a promising approach for many diseases since it allows a long-term delivery of the therapeutic protein and the semi-permeable membrane can protect cell from host’s immune rejection, to circumvent the problem of toxicity, limited half life and variation in circulating levels. The Theracyte® device is a semi-permeable membrane macroencapsulation system for implantation of genetically engineered cells for therapeutic proteins delivery in vivo and which does not require host immunosuppression. It was shown in this study that encapsulated recombinant murine fibroblasts (LM) expressing 0.4µg of murine endostatina/106 cells in 24 hours presents a feasible approach to tumor therapy. The delivery system was composed of recombinant endostatin-producing LM murine cells encapsulated into Theracyte macrocapsule for immunoisolation of cells. To demonstrate the usefulness of this system, experimental mice models with Ehrlich and Melanoma tumors were treated with 107 encapsulated endostatin-expressing cells. Two protocols were used for the implant of the devices: 1) The devices were implanted in the animals and after 14 days (wound healing), the cells expressing endostatin were implanted into the device and 2) the devices were implanted in the animals containing the cells. Melanoma tumor growth was reduced by 42% using the first implant protocol and by 54% when the second protocol was used. Ehrlich tumor growth was reduced by 25% using the first device implant protocol. As revealed by anti-endostatin immunostaining, there was a release of endostatin to the tissue outside the devices, demonstrating that endostatin, secreted by the confined recombinant cells, permeated trough the membrane, reaching the surrounding tissues. The effectiveness of endostatin delivery on the neovascularization of melanoma (B16-F10) was determined by analysis of the number of vascular structures, accessed by immunohistochemistry using anti-CD-34 antibody. It was shown that there was a decrease of 41.5% in the number of vascular structures, 35.9% in the number of viable vessels and 33.5% in the extension of vascular area in the treated group. The results described are quite promising and may offer an alternative for the treatment of a variety of tumor types. LISTA

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:56:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARAISA DELMUT BORGES.pdf: 2802865 bytes, checksum: 16472cb529ca2063653b711ead77427b (MD5) Previous issue date: 2011-08-12 / INTRODUCTION: The snake bites caused by Bothrops snakes constitute a major public health problem in tropical regions around the world. Research is being developed with the goal of finding therapies and substances that can be used to decrease local reaction caused by the snake bite, among them is the use of medicinal plants such as Cassia occidentalis. OBJECTIVES: Evaluate the healing activity of ethanolic extracts of roots and leaves of Cassia occidentalis in skin wounds in mice induced by the venom of Bothrops moojeni. METHODS: The hydroalcoholic extract was obtained by the method of percolation. The extracts of leaves and root of C. occidentalis a occidentalis at 10% were incorporated in Lanette cream. The study used 36 female Swiss albino mice, 60 days old, divided randomly into two groups (n = 18) and subdivided into three subgroups (n = 6). For the wound induction, the animals were anesthetized the dorsal-cervical region was shaved and intradermal inoculation was made with 4 mg of the venom of Bothrops moojeni diluted in saline in order to cause local necrosis.RESULTS: The leaves extract of C. occidentalis at 10% cream Lanette stimulated angiogenesis in wounds at the 7th and 14th day after the inoculation of the venom of Bothrops moojeni. CONCLUSIONS: The leaf extract of Cassia occidentalis at 10% cream Lanette, had a positive effect on healing, that justifies the use of this plant in the treatment of snakebites wounds. / INTRODUÇÃO:Os acidentes ofídicos provocados por serpentes do gênero Bothrops constituem importante problema de Saúde Pública em regiões tropicais de todo o mundo. Pesquisas estão sendo desenvolvidas com o objetivo de diminuir a reação local provocada pelo envenenamento botrópico, com o uso de várias substâncias e terapias e entre elas, o uso de plantas medicinais, como a Cassia occidentalis usada popularmente para picada de cobra.OBJETIVOS:Avaliar a atividade cicatrizante dos extratos etanólicos da raiz e das folhas da Cassia occidentalis em feridas cutâneas em camundongos induzidas pelo veneno da Bothrops moojeni.METODOLOGIA:O extrato hidroalcoólico foi obtido através do método de percolação,10% dos extratos de folhas e raiz da C. occidentalis foram incorporados em creme Lanette. Foram utilizados 36 camundongos albinos Swiss, fêmeas, com 60 dias de idade, peso entre 20 a 40 g. Os animais (n=36) foram pesados e divididos de forma aleatória, em dois grupos (n=18) e subdivididos em três subgrupos (n=6), Para a indução da ferida, os animais foram anestesiados, por via muscular, com uma associação de cloridrato de cetamina e cloridrato de xilazina nas doses de 70 mg Kg-1 e 10 mg Kg-1, respectivamente. Após a tricotomia da região dorsocervical, foram inoculados intradermicamente com 4 µg da peçonha da B. moojeni diluída em salina, a fim de se provocar uma necrose local.RESULTADOS:O extrato das folhas da C. occidentalis a 10% em creme Lanette estimulou a angiogênese em feridas na derme de camundongos no 7º e 14º dias após a inoculação do veneno da B. moojeni.CONCLUSÕES:Dessa forma, a atividade angiogênica do extrato da folha da Cassia occidentalis evidenciada pode justificar os achados observados na macroscopia, onde foi evidenciada melhor resolução do processo cicatricial.

Endostatina é um inibidor específico de proliferação de células endoteliais, migração e um potente inibidor de angiogênese. Foi demonstrado que a administração contínua de endostatina é mais efetiva na supressão tumoral do que a mesma dose administrada s.c. diariamente. Encontrar a concentração de endostatina para combater o crescimento tumoral é complicado pela pequena meia vida da proteína. O transplante de células encapsuladas em dispositivos de imunoisolamento é uma abordagem promissora para muitas doenças, pois permite uma liberação por longo tempo da proteína com propriedades terapêuticas. A membrana semipermeável pode proteger as células da rejeição do sistema imune, para evitar o problema de toxicidade, meia vida limitada e variação nos níveis circulantes. O dispositivo Theracyte® é um sistema de membranas semipermeáveis para macroencapsulamento que permite o implante de células geneticamente modificadas para liberação de proteínas terapêuticas in vivo sem a necessidade de imunosupressão do hospedeiro. Foi demonstrado neste estudo que fibroblastos murinos (células LM) expressando 0,4 µg de endostatina murina/106 células em 24 horas se apresentam como uma abordagem promissora para terapia tumoral. O sistema de liberação é composto de células LM produtoras de endostatina encapsuladas em macrocápsulas Theracyte para imunoisolamento de células. Para demonstrar a utilidade deste sistema, modelos de camundongos com tumores de Ehrlich e melanoma foram tratados com 107 células encapsuladas expressando endostatina. Foram analisados dois protocolos para o implante dos dispositivos: No primeiro, os dispositivos foram implantados nos animais e após 14 dias (cicatrização das feridas), as células expressando endostatina foram implantadas no interior destes dispositivos. Em um segundo, os dispositivos contendo as células foram implantados nos animais. O crescimento do tumor melanoma foi reduzido de 42% pela utilização do primeiro protocolo de implante e de 54% quando o segundo protocolo foi utilizado. O crescimento do tumor de Ehrlich foi reduzido de 25% utilizando o primeiro protocolo de implante. A imunohistoquímica utilizando anticorpo anti-endostatina demonstrou a liberação da endostatina para o estroma ao redor do dispositivo, mostrando que a endostatina, secretada pelas células recombinantes confinadas permeou através da membrana, atingindo os tecidos adjacentes. A efetividade da ação da endostatina na neovascularização de melanoma (B16-F10) foi determinada pela análise do número de estruturas vasculares, analisadas por imunohistoquímica utilizando anticorpo anti-CD34. Foi demonstrado um decréscimo de 41,5% no número de estruturas vasculares, 35,9% no número de vasos viáveis e de 33,5% na extensão da área vascular no grupo tratado. Os resultados descritos são promissores e podem oferecer uma alternativa para uma variedade te tipos de tumores. / Endostatin is a specific inhibitor of endothelial cell proliferation, migration and a potent angiogenesis inhibitor. It has been shown that continuous administration of endostatin is more effective in tumor suppression than the same dose administered s.c. daily. Achieving concentration of endostatin to combat tumor growth is complicated by the short life of the protein. Transplantation of encapsulated cells in immunoisolation devices is a promising approach for many diseases since it allows a long-term delivery of the therapeutic protein and the semi-permeable membrane can protect cell from host’s immune rejection, to circumvent the problem of toxicity, limited half life and variation in circulating levels. The Theracyte® device is a semi-permeable membrane macroencapsulation system for implantation of genetically engineered cells for therapeutic proteins delivery in vivo and which does not require host immunosuppression. It was shown in this study that encapsulated recombinant murine fibroblasts (LM) expressing 0.4µg of murine endostatina/106 cells in 24 hours presents a feasible approach to tumor therapy. The delivery system was composed of recombinant endostatin-producing LM murine cells encapsulated into Theracyte macrocapsule for immunoisolation of cells. To demonstrate the usefulness of this system, experimental mice models with Ehrlich and Melanoma tumors were treated with 107 encapsulated endostatin-expressing cells. Two protocols were used for the implant of the devices: 1) The devices were implanted in the animals and after 14 days (wound healing), the cells expressing endostatin were implanted into the device and 2) the devices were implanted in the animals containing the cells. Melanoma tumor growth was reduced by 42% using the first implant protocol and by 54% when the second protocol was used. Ehrlich tumor growth was reduced by 25% using the first device implant protocol. As revealed by anti-endostatin immunostaining, there was a release of endostatin to the tissue outside the devices, demonstrating that endostatin, secreted by the confined recombinant cells, permeated trough the membrane, reaching the surrounding tissues. The effectiveness of endostatin delivery on the neovascularization of melanoma (B16-F10) was determined by analysis of the number of vascular structures, accessed by immunohistochemistry using anti-CD-34 antibody. It was shown that there was a decrease of 41.5% in the number of vascular structures, 35.9% in the number of viable vessels and 33.5% in the extension of vascular area in the treated group. The results described are quite promising and may offer an alternative for the treatment of a variety of tumor types. LISTA

Os vasos sanguíneos são formados, entre outros componentes, por células endoteliais as quais fazem parte da microvasculatura óssea e são capazes de regular o desenvolvimento ósseo tendo em vista de que os processos de osteogênese e angiogênese estão interligados. Os leucotrienos (LTs) são mediadores lipídicos envolvidos no recrutamento de leucócitos e na regulação da síntese de citocinas. O tratamento com o leucotrieno B4 (LTB4) induz a angiogênese pela superexpressão do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF). Assim, o objetivo do trabalho foi investigar o efeito das células endoteliais reguladas pelo LTB4 na diferenciação osteogênica. Para isso, células endoteliais primárias de aorta foram isoladas e cultivadas por até 4 dias e, quando apropriado, foi realizado o tratamento das mesmas com o LTB4. O meio condicionado das células endoteliais foi armazenado para os experimentos com osteoblastos. Células osteoblásticas foram isoladas da calvária e cultivadas por até 21 dias, avaliando-se, portanto, os efeitos das células endoteliais reguladas ou não pelo LTB4 e a resposta dos estímulos exógenos LTB4, o inibidor da síntese de LTs MK 886 e o antagonista do receptor do LTB4, o U75302. Tais respostas foram observadas na fase de crescimento celular, por meio da viabilidade, proliferação e produção de marcadores osteogênicos e angiogênicos como o RANKL, OPG e o VEGF por meio da redução do MTT, citometria de fluxo e western blotting, respectivamente. A diferenciação foi avaliada por meio dos ensaios de fosfatase alcalina (ALP) e expressão gênica por meio de ensaio enzimático e qRT-PCR e mineralização por Vermelho de alizarina. Resultados mostraram que tanto as células endoteliais, mediadas ou não pelo LTB4, quanto os estímulos exógenos não foram capazes de modular a proliferação dos osteoblastos. Porém, durante a diferenciação, o LTB4 inibiu a atividade da ALP, a expressão gênica do BLT1, ALP, BGLAP (osteocalcina) e OPG (osteoprotegerina) foi aumentada, e os genes RANKL e VEGF tiveram a sua expressão diminuída pelo tratamento com o meio condicionado das células endoteliais, mediadas ou não pelo LTB4 (P<0,05). Além disso, a mineralização dos osteoblastos foi aumentada pelas células endoteliais e diminuída pelas células endoteliais mediadas pelo LTB4 (P<0,05). Assim, podemos concluir que os fatores angiogênicos das células endoteliais, mediadas ou não pelo LTB4, exercem um papel importante na regulação da diferenciação osteogênica e formação óssea contribuindo, portanto, para a compreensão de mecanismos que regulam a patofisiologia de doenças ósseas. / Endothelial cells make blood vessels and are involved in the regulation of tissue metabolism. Endothelial cells from bone microvasculature are capable of regulating bone development in view of the fact that the processes of osteogenesis and angiogenesis are interconnected. Leukotrienes (LTs) are lipid mediators involved in leukocyte recruitment and regulation of cytokine synthesis. It is known that the treatment with LTB4 induces angiogenesis by overexpression of vascular endothelial growth factor (VEGF). Thus, the aim of this study was to investigate the effect of LTB4-regulated endothelial cells on osteogenic differentiation. For this, primary endothelial cells from aorta were isolated and cultured for up to 4 days and, where appropriate, the treatment with LTB4 was done. The conditioned medium of these cells was stored for osteoblast experiments. Osteoblastic cells were isolated from calvaria and cultured for up to 21 days, assessing the effects of endothelial cells regulated or not by LTB4 and the response of exogenous LTB4 stimuli, the inhibitor of LTs synthesis MK 886 and the antagonist of LTB4 receptor, U75302. Such responses were observed in the cell growth phase through the viability, proliferation and production of osteogenic and angiogenic markers such as RANKL, OPG and VEGF by MTT assay, flow cytometry and western blotting, respectively. The cell differentiation was evaluated by alkaline phosphatase (ALP), gene expression and mineralization assay through ALP enzymatic assay, qRT-PCR and Alizarin Red staining. Results showed that both endothelial cells, mediated or not by LTB4 and exogenous stimuli were not able to modulate the osteoblasts proliferation. However, during the differentiation, LTB4 inhibited ALP activity, the gene expression of BLT1, ALP, BGLAP (osteocalcin) and OPG (osteoprotegerin) was increased, and the RANKL and VEGF genes had their expression decreased by the treatment with the endothelial cells conditioned medium, mediated or not by LTB4 (P <0.05). In addition, the osteoblasts mineralization was increased by endothelial cells conditioned medium (CM-EC) and decreased by LTB4-mediated endothelial cells conditioned medium (CM-EC-LTB4) (P <0.05). Thus, we can conclude that the angiogenic factors of the endothelial cells, mediated or not by LTB4, play an important role in the regulation of osteogenic differentiation and bone formation, thus contributing to the understanding of mechanisms that regulate the pathophysiology of bone diseases.

As junções GAP são canais intercelulares responsáveis pela comunicação de células vizinhas, por onde passam pequenas moléculas e íons que mantêm a homeostasia celular. A junção GAP é formada seis proteínas, as conexinas. Na célula endotelial encontram-se as conexinas 37, 40 e 43. Nesse estudo, estimulamos a angiogênese em córnea de camundongos, através da cauterização com cristal de nitrato de prata. Foram utilizados camundongos heterozigotos para o gene da conexina 43 (Cx43+/-) e camundongos selvagens (Cx43+/+). As córneas foram analisadas 2 e 6 dias após a cauterização atravéspor meio da morfologia vascular, detecção das Cx37, Cx40, Cx43, PCNA por meio de Western Blot e avaliação ultraestrutural das células endoteliais. Como resultado obtivemos uma menor área de preenchimento vascular nos animais Cx43+/- em 2 e 6 dias após a lesão corneal, porém, em relação a extensão dos vasos não foi observado diferenças entre os grupos. Uma menor proliferação celular foi verificada através da detecção do PCNA, nos animais heterozigotos, somente após 2 dias da lesão corneal. Não houve alteração da Cx37 e Cx40 entres os grupos. A Cx43 parece ser uma conexina importante para a célula endotelial durante o processo de angiogênese. / The GAP junctions are intercellular streams responsible for the communication between close cells, which allow small molecules and ions to pass through them maintaining the cellular homeostasis. The GAP junction is formed of six proteins, the connexin. In the endothelial cell, there are the connexin 37, 40 and 43. In this study, we stimulated the angiogenesis in the mice\'s cornea through its cauterization using silver\'s crystal glass. It was used heterozygote mice to the gene of connexin 43 (Cx43+/-) and wild mice (Cx43+/+). The corneas were analyzed 2 and 6 days after the cauterization through the vascular morphology, detection of Cx37, Cx40, Cx43, PCNA through Western Blot and ultrastructural evaluation of the endothelial cells. As a result, we obtained a smaller area of vascular fillness in the animals Cx43+/- with 2 and 6 days of corneal injury, however, in regard to the extensions of the vessels, it wasn\'t observed any changes between the groups. A smaller proliferation of cells was verified, through the detection of PCNA, in the heterozygote animals only 2 days after the corneal injury. There wasn\'t any modification of the Cx37 and Cx40 between groups. The Cx43 seems to be an important connexin to the endothelial cell during the process of angiogenesis.

Este estudo analisou o efeito do ultra-som terapêutico na vascularização pós lesão muscular experimental em coelhos. Foram utilizados 10 coelhos da raça Nova Zelândia, com peso médio de 2,5 kg. Os animais foram submetidos à lesão por esmagamento do músculo reto femoral em ambas as coxas e, após 24 horas um dos lados foi tratado com ultra-som terapêutico e o outro serviu como controle. A freqüência utilizada foi de 1 MHz e intensidade de 0,5 W/cm2 por 5 minutos, durante 10 dias consecutivos. Após 48 horas do término do período de tratamento, os animais foram sacrificados. Foi feita a lavagem do sistema vascular com solução fisiológica, e depois, feita a injeção de uma solução de sulfato de bário e tinta da China. Os músculos foram ressecados do fêmur e submetidos ao processo de diafanização de acordo com a técnica de Spalteholz. Depois que as peças ficaram transparentes, foram examinadas por microscópio cirúrgico. Os resultados não mostraram diferenças no padrão da vascularização (artérias e arteríolas) entre os lados tratados e não tratados, sugerindo que o ultra-som terapêutico não provocou mudanças no padrão vascular após aplicação precoce em lesão muscular. / The effects of therapeutic pulsed ultrasound was investigated on experimental muscular lesions of rabbits. Ten white New Zealand rabbits weighing 2,5 kg were operated on and a crush injury of the rectus femoris of both hind limbs was performed. Twenty-four hours later therapeutic ultrasound was applied on one side and the other side was kept as a control. The following parameters were used: frequency 1 MHz, intensity 0,5 W/cm2, treatment time 5 minutes and a whole of 10 sessions were completed. Two days after completion of the treatment the animals were killed and the arterial system of the hind limbs was injected with a mixture of barium sulphate and Indian ink. The quadriceps was harvested and processed according the Spalteholz technique. The vasculature of the specimens, specially in the local of the injury was studied. The results showed no difference in the vascular pattern between the treated and untreated sides.

A terapia fotodinâmica é uma técnica que utiliza uma substância fotossensibilizadora, luz de comprimento de onda adequado e oxigênio para produzir um efeito citotóxico, sendo uma alternativa aos tratamentos convencionais para o câncer. Este tratamento, quando realizado nos vasos sanguíneos, leva à destruição deles. No entanto, a recuperação dos vasos é observada algum tempo depois, o que pode ser um processo angiogênico (formação de novos vasos sanguíneos) induzido pela própria terapia. Os vasos sanguíneos fornecem oxigênio e nutrientes às células, levando ao crescimento de tecidos, inclusive tumorais. Para a investigação da angiogênese após a terapia fotodinâmica, foi utilizado o modelo de membrana corioalantoica de ovos de galinha, pois possui alta vascularização e fácil acesso aos vasos sanguíneos. A terapia fotodinâmica foi feita nos vasos da membrana com o fotossensibilizador Photogem&reg;, em uma concentração de 10 &mu;g/mL, e subdoses de luz para não levar o embrião à morte. As doses de luz de 6 e 15 J/cm2 foram estabelecidas para os experimentos e foi observada diminuição na densidade de vasos 3 horas após a terapia fotodinâmica, com um aumento 24 horas depois. Para a quantificação desses efeitos, uma rotina no MATLAB&reg; foi elaborada para determinar a porcentagem de área ocupada pelos vasos sanguíneos nas imagens da membrana, que foram realizadas antes, a cada 30 minutos durante as primeiras 3 horas após o tratamento e 24 horas depois. Além disso, para uma análise da distribuição de grandes e pequenos vasos, o comprimento e o diâmetro de cada vaso nas imagens foram medidos com o software ImageJ&reg;, que permitiu verificar que os menores vasos são os mais afetados 3 horas depois da terapia, com aumento no número desses vasos após 24 horas. Como isso poderia ser um indício de um processo angiogênico após a terapia fotodinâmica, marcadores de angiogênese foram utilizados em Western Blot. Apesar de esse método molecular não ter mostrado diferença entre o grupo com terapia fotodinâmica e os grupos controle, as análises por imagem indicam a formação de novos vasos 24 horas após a terapia, com uma rede vascular diferente da que havia antes. / Photodynamic therapy is a technique that uses a photosensitizing substance, light of adequate wavelength and oxygen to produce a cytotoxic effect, being an alternative to conventional treatments for cancer. This treatment, when carried out in the blood vessels, leads to their destruction. However, vessel recovery is observed some time later, which may be an angiogenic process (formation of new blood vessels) induced by the therapy itself. The blood vessels supply oxygen and nutrients to the cells, leading to tissue growth, including tumoral. For the investigation of angiogenesis after photodynamic therapy, the chorioallantoic membrane model of chicken eggs was used, because it has high vascularization and easy access to the blood vessels. Photodynamic therapy was performed on membrane vessels with the Photogem&reg; photosensitizer, at a concentration of 10 &mu;g/mL, and light subdoses to avoid leading the embryo to death. Light doses of 6 and 15 J/cm2 were established for the experiments and a decrease in vessel density 3 hours after photodynamic therapy was observed, with an increase 24 hours later. For quantification of these effects, a routine in MATLAB&reg; was designed to determine the percentage of area occupied by blood vessels in the membrane images, which were performed before, every 30 minutes for the first 3 hours after treatment and 24 hours later. Furthermore, for an analysis of the distribution of large and small vessels, the length and diameter of each vessel in the images were measured with the ImageJ&reg; software, which allowed to verify that the smaller vessels are most affected 3 hours after the therapy, with an increase in the number of these vessels after 24 hours. Since this could be an indication of an angiogenic process after photodynamic therapy, angiogenesis markers were used in Western Blot. Although this molecular method showed no difference between the group with photodynamic therapy and the control groups, the image analysis indicates the formation of new vessels 24 hours after the therapy, with a vascular network different from before.

As proteínas S100A8/A9 são expressas em diferentes tipos celulares e quando sozinhas ou complexadas e em baixas concentrações, promoveram proliferação, migração celular e formação de estruturas capilares. Por outro lado, quando em altas concentrações, esse complexo inibe o crescimento de diversos tipos de células tumorais murinas e humanas. Ainda, tanto a proteína S100A9 humana, quanto um peptídeo sintético idêntico a porção C-terminal da proteína S100A9 murina (pS100A9m) possuem efeitos antinociceptivo e imunorregulatório. Apesar dessas evidencias, até o momento não foi investigado o efeito do pS100A9m sobre a angiogênese e a tumorigênese. Portanto, o objetivo do presente estudo foi investigar, in vitro, o efeito do pS100A9m sobre os eventos fundamentais envolvidos com a angiogênese e o desenvolvimento tumoral. Para tanto, a fim de avaliar o efeito do pS100A9m sobre a angiogênese foi utilizada a linhagem de células endoteliais tímicas murinas (tEnd.1) nos ensaios de proliferação, migração da célula endotelial em meio de cultura, avaliada nos modelos de wound healing e transwell ou migração em meio condicionado, obtido de células tumorais LLC WRC256, avaliada no modelo de transwell, ensaio de adesão (aos componentes de matriz, tais como o colágeno tipo I, fibronectina e laminina) e formação de tubos em matrigel tridimensional (3D). Para os estudos sobre o efeito do pS100A9m sobre as células tumorais, foi utilizada a linhagem de células LLC WRC256 para realização dos ensaios funcionais de proliferação, migração (wound healing) e adesão (sobre os componentes da matriz extracelular). Os resultados obtidos demonstraram que o pS100A9m inibe a proliferação, migração, adesão sobre os componentes de matriz e, consequentemente, a formação de estruturas capilares em matriz 3D. Em relação às células tumorais LLC WRC256, foi observada, novamente, a ação inibitória do pS100A9m sobre os eventos de proliferação e migração. Em relação à adesão, o peptídeo aumentou a capacidade de adesão das células tumorais sobre o colágeno tipo I e fibronectina, porém inibiu a adesão dessas células sobre laminina. Em conclusão, os dados aqui obtidos demonstram que o pS100A9m inibe in vitro os eventos fundamentais envolvidos com a angiogênese e com a progressão tumoral. Desta forma, o peptídeo da porção C-terminal da proteína S100A9 pode ser considerado uma nova ferramenta para o estudo da angiogênese e tumorigênese, além apresentar potencial para uma possível aplicação terapêutica nesses processos / The S100A8/A9 proteins are expressed in different cell types and alone or when complexed, and at low concentrations promoted proliferation, cell migration and formation of capillary structures. On the other hand, at higher concentrations, this compound inhibits the growth of many types of murine and human tumor cells. Moreover, both human S100A9 protein and a synthetic peptide identical to the C-terminal portion of murine S100A9 (mS100A9p) present antinociceptive and immunomodulatory effects. Despite these evidences, the effect of mS100A9p on angiogenesis and tumorigenesis has not been investigated. Therefore, the aim of this study was to investigate the in vitro effect of mS100A9p on crucial events involved in angiogenesis and tumor development. For this, in order to evaluate the effect of mS100A9p on angiogenesis was used the murine endothelial cell line derived from thymus hemangioma (tEnd.1) for proliferation assays, endothelial cell migration in the presence of culture medium (scratch wound healing and chemotaxis assays) or in conditioned medium prevenient from LLC WRC256 tumor cells (chemotaxis assays), adhesion assay (on extracellular matrix components, such as type I collagen, fibronectin and laminin) and tube like-structure formation in 3D matrix. For the analyzes of the effect of mS100A9p on tumor cells, the cell line LLC WRC256 was used to perform functional assays such as proliferation, migration (scratch wound healing model) and adhesion (on components of the extracellular matrix). The results showed that the mS100A9p inhibits the proliferation, migration and adhesion of endothelial cells to the matrix components and consequently the formation of capillary structures in 3D matrix. Regarding LLC WRC256 tumor cells, it was observed again the inhibitory action of the mS100A9p on proliferation and migration events. In relation to cellular adhesion, this peptide increased this parameter of tumor cells on type I collagen and fibronectin. However mS100A9p inhibited the adhesion of these cells on laminin. In conclusion, the data obtained show that the mS100A9p inhibits in vitro crucial events involved in angiogenesis and tumor progression. Thus, the C-terminal portion of murine S100A9 protein may be considered as a new tool for the study of tumorigenesis and angiogenesis besides presenting potential to a possible therapeutic application in these processes