Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2017-01-26T14:49:44Z No. of bitstreams: 2 CAMILAROSSONI.pdf: 1294639 bytes, checksum: 538f9294b9d60404e90aa394ac241b9e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-26T14:49:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 CAMILAROSSONI.pdf: 1294639 bytes, checksum: 538f9294b9d60404e90aa394ac241b9e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-08-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Hymenoptera parasitoids have been reported as natural enemies, among these, the parasitoids Palmistichus elaeisis Delvare and Lasalle, 1993, Tetrastichus howardi (Olliff, 1893) and Trichospilus diatraeae Cherian and Margabandhu, 1942 (Hymenoptera: Eulophidae) are reported in the control of pests of agricultural importance, especially, Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae). Along with the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin, 1912 (Cordycipitaceae) and Metarhizium anisopliae (Metchnikoff, 1879) Sorokin, 1883 (Clavicipitaceae) these parasitoids can regulate insects populations after inundative and inoculative applications. Therefore, the objective of this study was to evaluate whether the entomopathogenic fungi B. bassiana and M. anisopliae detrimental to the development of these Eulophidae parasitoids and the survival of adult females. In the experiment I first work, females of each species of parasitoid were individualized in glass tubes, containing a contact surface of filter paper (3 cm wide × 3 cm length) treated with concentrations of 1 × 109con. mL-1, 5 × 109con. mL-1, 10 × 109con. mL-1 of products based on B. bassiana and M. anisopliae, and the daily and confirmed mortality were assessed. In the experiment II, the females of Eulophidae parasitoids were exposed to the same three concentrations of biopesticides for 48 hours. After exposure, five female parasitoids of each treatment were individualized in test tubes along with a pupa of D. saccharalis and the parasitism was allowed for 24 hours. In the second work, pupae of the host were exposed to parasitism by three females of each species of parasitoid for 72 h, after the parasitized pupae were placed individually, in glass tubes and capped with cotton, and inside each tube, It was inserted a contact surface treated with 1 mL of fungal suspension with concentrations of 1 × 109con. mL-1, 5 × 109con. mL-1, 10 × 109con. mL-1 of products based on B. bassiana and M. anisopliae and placed in a growth chamber (BOD). Finally, in the third work, pupae of D. saccharalis were individualized and inserted into pre-drilled holes in stalks of the sugarcane plant, were subsequently sprayed formulations of two entomopathogens separately at a concentration of 5.5 × 109 con. mL-1 and then the sugarcane plant was covered individually with a cage of fabric "voil", and later 102 parasitoids female per pupae was separately released. The parasitism was allowed for four days and after this period, the pupae were removed from the stalks and taken to the laboratory for evaluation of parasitism, emergence percentage, the duration of the life cycle, progeny and the sex ratio. In the first study it was concluded that the entomopathogenic fungi reduced the longevity of females of P. elaeisis and T. diatraeae with higher mortality for the species T. howardi. However, this fact did not influence the parasitism and the emergence of P. elaeisis, T. howardi and T. diatraeae in pupae of D. saccharalis. In the second work, the emergence of T. howardi and T. diatraeae was not compromised by entomopathogenic fungi. However the species P. elaeisis was affected, but the duration of the life cycle, the progeny of these parasitoids and sex ratio were not affected after exposure to entomopathogens inside the pupae. In the third work, the entomopathogenic fungi at a concentration of 5.5 × 109 con. mL-1 did not prevent the parasitism of pupae of D. saccharalis by Eulophidae parasitoids in sugarcane plants. In general, the fungi B. bassiana and M. anisopliae in the tested concentrations are compatible with the parasitoid P. elaeisis, T. howardi and T. diatraeae. / Himenópteros parasitoides têm sido relacionados como inimigos naturais, dentre esses, os parasitoides Palmistichus elaeisis Delvare e Lasalle, 1993, Tetrastichus howardi (Olliff, 1893) e Trichospilus diatraeae Cherian e Margabandhu, 1942 (Hymenoptera: Eulophidae) são relatados no controle de pragas de importância agrícola, especialmente, Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera:Crambidae). Juntamente com os fungos entomopatogênicos Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin, 1912 (Cordycipitaceae) e Metarhizium anisopliae (Metchnikoff, 1879) Sorokin, 1883 (Clavicipitaceae) estes parasitoides podem regular populações de insetos após aplicações inundativas e inoculativas. Por isto, o objetivo deste trabalho foi avaliar se os fungos entomopatogênicos B. bassiana e M. Anisopliae prejudicam o desenvolvimento destes eulofídeos e a sobrevivência de fêmeas adultas. No primeiro trabalho experimento I, fêmeas de cada espécie de parasitoide foram individualizadas em tubos de vidro, contendo uma superfície de contato de papel filtro (3 cm de largura × 3 cm de comprimento) tratada com as concentrações de 1 × 109con. mL-1, 5 × 109con. mL-1, 10 × 109con. mL-1 dos produtos à base de B. bassiana e M. anisopliae , sendo as mortalidades diária e confirmada avaliadas. No experimento II, as fêmeas dos eulofídeos foram expostas as mesmas três concentrações dos bioinseticidas por 48 horas. Após a exposição, cinco fêmeas dos parasitoides de cada tratamento foram individualizadas em tubos de ensaio juntamente com uma pupa de D. saccharalis e o parasitismo foi permitido por 24 horas. No segundo trabalho, pupas do hospedeiro foram expostas ao parasitismo por três fêmeas de cada espécie de parasitoide por 72 h, depois, as pupas parasitadas foram acondicionadas, individualmente, em tubos de vidro e tampados com algodão, sendo que no interior de cada tubo, foi inserido uma superfície de contato tratada com 1 mL de suspensão fúngica nas concentrações de 1 × 109con. mL-1, 5 × 109con. mL-1, 10 × 109con. mL-1 dos produtos à base de B. bassiana e M. anisopliae e acondicionados em câmara climatizada (BOD). Por fim, no terceiro trabalho, pupas de D. saccharalis foram individualizadas e inseridas em orifícios pré-perfurados em um colmo amarrado na planta de cana-de-açúcar, posteriormente foram pulverizadas as formulações dos dois entomopatógenos separadamente na concentração de 5,5 × 109 con. mL-1 e então a touceira de cana foi coberta, individualmente, com uma gaiola de “voil”, sendo posteriormente liberadas 102 fêmeas dos parasitoides por pupa separadamente. O parasitismo foi permitido por quatro dias e, após esse período, as pupas foram retiradas dos colmos e levadas ao laboratório para avaliação da porcentagem de parasitismo, porcentagem de emergência, a duração do ciclo de vida, progênie e a razão sexual. No primeiro trabalho foi possível concluir que os fungos entomopatogênicos reduziram a longevidade de fêmeas de P. elaeisis e T. diatraeae com maior mortalidade para a espécie T. howardi. No entanto, este fato não influenciou o parasitismo e a emergência de P. elaeisis, T. howardi e T. diatraeae em pupas de D. saccharalis. No segundo trabalho, a emergência de T. howardi e T. diatraeae não foi comprometida pelos fungos entomopatogênicos, porém a espécie P. elaeisis foi afetada, no entanto, a duração do ciclo de vida, progênie e razão sexual destes parasitoides não foram afetadas após exposição aos entomopatógenos no interior das pupas. No terceiro trabalho, os fungos entomopatogênicos na concentração de 5,5 × 109 com. mL-1 não prejudicaram o parasitismo de pupas D. saccharalis pelos parasitoides da família Eulophidae em plantas de cana-de-açúcar. De maneira geral, os fungos B. bassiana e M. anisopliae nas concentrações testadas são compatíveis com os parasitoides P. elaeisis, T. howardi e T. diatraeae.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-24T15:20:41Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 490085 bytes, checksum: aee05299fbca9ca829816b7f973e717d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-24T15:20:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 490085 bytes, checksum: aee05299fbca9ca829816b7f973e717d (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A monocultura reduz o equilíbrio ambiental, o que favorece o surgimento de pragas. O uso de biopesticidas no controle biológico é uma alternativa eficiente, mas pode afetar inimigos naturais, o que tem motivado a busca de métodos seletivos aos organismos alvo. Insetos têm sistema imunológico para combater entomopatógenos, mas a tolerância e a dinâmica do sistema imune em vespas sociais são, ainda, pouco conhecidas. Vespas sociais são predadores importantes no controle biológico e estão em constante contato com organismos entomopatogênicos. O objetivo do trabalho foi caracterizar as células da hemolinfa de fêmeas adultas de Polybia platycephala Richards (Hymenoptera: Vespidae) e avaliar o impacto dos fungos Beauveria bassiana (isolado ESALQ PL 63) e Metarhizium anisopliae (isolado ESALQ E9) na sobrevivência e na resposta hemocitária desta vespa social. A descrição morfológica dos hemócitos foi realizada por meio de microscopia de luz. Alterações na sobrevivência e dinâmica hemocitária de P. platycephala foram estudadas em duas categorias: 1) diferentes concentrações de solução fúngica e 2) diferentes intervalos de tempo. Quatro tipos de hemócitos foram identificados durante a descrição da morfologia dessas células: prohemócitos, plasmatócitos, granulócitos e oenocitóides. Os hemócitos de P. platycephala apresentaram o mesmo padrão morfológico de outras espécies da ordem Hymenoptera. Nas maiores concentrações de M. anisopliae no tratamento tópico (1 x 108 e 1 x 109 esporos/mL) reduziram a sobrevivência e o número de granulócitos e prohemócitos de P. platycephala. O fungo B. bassiana foi patogênico em todas as concentrações testadas por contato, diminuindo a sobrevivência e o número de granulócitos de P. platycephala. Nos tratamentos por ingestão, B. bassiana mostrou-se patogênico com 1 x 109 esporos/mL. Metarhizium anisopliae (isolado ESALQ E9) não reduziu a sobrevivência das vespas nas concentrações 1 x 106 e 1 x 107 esporos/mL, o que é importante para programas de manejo integrado de pragas. No entanto, o impacto negativo de B. bassiana (isolado ESALQ PL 63) em todas as concentrações testadas indica a incompatibilidade deste fungo com P. platycephala. / Monoculture reduces the environmental equilibrium, which favors the emergence of pests. The use of biopesticides in biological control is an effective alternative, but can affect natural enemies, which has motivated the search for selective methods to target organisms. Insects have immune system to defend against entomopathogen, but tolerance and the dynamics of the immune system in social wasps are still little known. Social wasps are important predators in biological control and are in constant contact with entomopathogenic organisms. The aim of the study was to identify and characterize the hemolymph cells of adult female Polybia platycephala Richards (Hymenoptera: Vespidae) and evaluate the impact of fungi Beauveria bassiana (isolated ESALQ PL 63) and Metarhizium anisopliae (isolated ESALQ E9) on survival and response hemocyte this social wasp. The morphological description of the hemocytes was performed by light microscopy. The dynamic changes in survival of P. platycephala hemocyte were studied in two categories: 1) different concentrations of fungal solution and 2) different time intervals. Four types of hemocytes were identified during the description of the morphology of these cells: prohemocytes, plasmatocytes, granulocytes and oenocytoids cells. The hemocytes of P. platycephala showed the same morphological pattern of other species of Hymenoptera. M. anisopliae high concentrations in the topical treatment (1 x 108 and 1 x 109 spores/ml) decreased survival and the number of granulocytes and prohemocytes P. platycephala. B. bassiana is pathogenic at all concentrations by contact, reducing the survival and the granulocyte number of P. platycephala. In the treatments if swallowed, B. bassiana was shown to be pathogenic to 1 x 109 spores/mL. Metarhizium anisopliae (isolated ESALQ E9) did not reduce the survival of wasps in low concentrations, which is important for integrated pest management programs. However, the negative impact of B. bassiana (isolated ESALQ 63) at all concentrations tested indicates incompatibility this fungus with P. platycephala.

The bluegrass billbug (Sphenophorus parvulus Gyllenhal) and hunting billbug (Sphenophorus venatus vestitus Chittenden) have become important pests of orchardgrass (Dactylis glomerata L.) grown in Virginia, causing 40 - 100% stand losses according to a 2005 survey of over 324 ha (800 ac) of orchardgrass. Their sheltered feeding habits combined with a lack of labeled insecticides for orchardgrass make billbug control extremely difficult for this crop. Over two seasons, orchardgrass fields were surveyed for paired feeding holes caused by feeding of the billbug spring adult. Simultaneously, barrier pitfall traps, a standard method for determining the presence of billbugs in orchardgrass, were used to trap billbug adults in the fields. A comparison of these methods using a Wilcoxon sign-ranked test found no significant differences in the time when paired feeding holes were first observed in fields and when billbug adults were first trapped, showing that the methods are equally satisfactory for determining the presence of billbugs in orchardgrass. In addition, temperature data from SkyBit E-Weather® service, which are currently used to alert growers and other interested parties of pertinent billbug activity in orchardgrass, was compared to data from a field-based weather data logger over the two seasons. A comparison of these data showed high coefficients of correlation, indicating a close relationship between these two degree-day collection methods. Therefore, the SkyBit system can continue to be used for the alert system. A field-border application of Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) Sorokin strain F52 (Met-52), an entomopathogenic fungus, was evaluated against billbug adults as they enter orchardgrass fields in the spring. Randomized pairs of treated and untreated plots were placed along the edge of an orchardgrass field in studies over two seasons. Plots were monitored for billbug adults using barrier pitfall traps, and billbug adults were checked for Met-52 infection. The Met-52 proved unsatisfactory for controlling billbugs in this study. A field efficacy trial was used to evaluate several insecticides and Met-52 against billbug adults in orchardgrass over two seasons. A randomized complete block design, four insecticide treatments and an untreated control were used in each of two trials. Samples from each treatment plot were dissected and checked for billbug life stages and for injury to orchardgrass plants. In one trial, plants in the Sevin XLR Plus® treatment were found to have a significantly higher percentage of injury to the crowns than all other treatments except Mustang Max. No other significant differences were seen in this study. / Master of Science in Life Sciences

Conídios são estruturas especializadas, produzidas assexuadamente pelo micélio de muitas espécies de ascomicetos. A produção dos conídios requer o controle espacial e temporal da expressão gênica e a formação de estruturas específicas durante o desenvolvimento. Os conídios estão envolvidos na reprodução, dispersão e persistência ambiental dos fungos. Em espécies patogênicas como Aspergillus fumigatus e Metarhizium anisopliae, os conídios também são responsáveis pela infecção do hospedeiro. Um dos principais fatores ambientais capazes de matar e / ou danificar os conídios é a radiação solar. Os dímeros de pirimidina ciclobutano (CPDs) são os principais fotoprodutos do DNA induzidos pela radiação UVB. Os principais objetivos deste trabalho foram: (1) estimar as frequências de CPDs em conídios expostos a doses subletais de radiação UVB, (2) correlacionar a frequência de CPDs com a cinética de germinação dos conídios, (3) comparar a frequência de CPDs em conídios selvagens com a frequência em conídios mutantes para a pigmentação, (4) identificar genes diferencialmente expressos durante as fases da conidiogênese de A. fumigatus e (5) identificar genes modulados pela radiação UVB em micélio jovem de A. fumigatus. Conídios de M. anisopliae, A. nidulans e A. fumigatus foram expostos à irradiância de 1000 mW m-2 de UVB por 15, 30, 60 e 90 min. As doses totais ao final das exposições foram 0,9, 1,8, 3,6 e 5,4 kJ m-2. O aumento na frequência de CPDs foi linear e diretamente proporcional à dose, com 0,215, 0,455, 0,803 e 1,628 CPDs 10 kb-1 induzidos pelas doses de 0,9, 1,8, 3,6 e 5,4 kJ m-2 em A. fumigatus, 0,037, 0,077, 0,142 e 0,202 CPDs 10 kb-1 em A. nidulans e 0,041, 0,085, 0,155 e 0,255 CPDs 10 kb-1 em M. anisopliae. A frequência de CPDs no mutante albino de M. anisopliae (0,552 10 kb-1) foi aproximadamente dez vezes maior do que na linhagem selvagem (0.057 10 kb-1) após exposição à dose de 1,8 kJ m-2. Esta é a primeira evidência direta de que a pigmentação dos conídios protege o DNA contra os danos induzidos pela radiação UVB. Microarranjos genômicos de DNA foram utilizados para comparar os transcriptomas de micélios com 20 h (início da conidiogênese), 24 h (fase intermediária) e 25 h (fase final) com o transcriptoma de micélio jovem. Foram identificados 34 genes diferencialmente expressos (7 com aumento e 27 com diminuição) com 20 h de desenvolvimento, 101 genes (12 com aumento e 89 com diminuição) com 24 h e 76 genes (oito com aumento e 68 com diminuição) com 25 h. Alguns genes que apresentaram aumento na expressão (stuA e o gene da scytalone dehydratase) já haviam sido associados com fases específicas da conidiogênese, entretanto a maioria dos genes que apresentou aumento na expressão não tem função conhecida. A análise de transcriptomas com microarranjos de DNA também foi utilizada para identificar genes com expressão modulada por exposições à radiação UVB (1,8 kJ m-2) em micélio jovem de A. fumigatus. Foram identificados 101 genes diferencialmente expressos ao final da exposição à radiação UVB (51 genes com aumento e 50 com redução). O gene radc apresentou o maior aumento na expressão (aproximadamente 16 ×). A maioria dos genes com aumento na expressão não possui função conhecida. Foram identificados 418 genes diferencialmente expressos 30 min após o termino da exposição (51 genes com aumento e 367 com redução na expressão). / Conidia are specialized structures produced asexually during mycelia growth of many ascomycete species. The process of conidiation involves temporal and spatial regulation of gene expression, cell specialization, intercellular communication, and formation of specific structures during fungal growth. Conidia are responsible for the reproduction, dispersal and environmental persistence of many fungal species. In pathogenic species like Aspergillus fumigatus and Metarhizium anisopliae, conidia are also responsible for host infection. One of the main environmental factors that can kill and/or damage conidia is solar UV radiation. Cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs) are the major DNA photoproducts induced by UVB. The principal goals of the present study were to: (1) estimate the frequency of CPDs induced by sublethal doses of UVB radiation in conidial DNA of three selected ascomycetes, (2) examine correlation of CPD frequencies with germination speed, and (3) estimate the protective effect of the wild-type green conidial pigmentation on DNA in M. anisopliae var. anisopliae, (4) identify differentially expressed genes during the different phases of A. fumigatus conidiogenesis and (5) identify genes regulated by UVB radiation in A. fumigatus young mycelia. A. fumigatus, A. nidulans, and M. anisopliae conidia were exposed to 1000 mW m-2 UV irradiance for 15, 30, 60 and 90 min. Total Quaite-weighted doses were 0.9, 1.8, 3.6 and 5.4 kJ m-2, respectively. The frequencies of dimers were linear and directly proportional to the doses, with 0.215, 0.455, 0.803 and 1.628 CPDs 10 kb-1 detected at the doses of 0.9, 1.8, 3.6 and 5.4 kJ m-2 in A. fumigatus, 0.037, 0.077, 0.142 and 0.202 CPDs 10 kb-1 in A. nidulans, and 0.041, 0.085, 0.155 and 0.255 CPDs 10 kb-1 in M. anisopliae. The frequency of dimers in the M. anisopliae albino mutant DWR 180 (0.552 10 kb-1) was approximately ten times higher than of the wild-type ARSEF 23 strain (0.057 10 kb-1) after exposure to doses of 1.8 kJ m-2. DNA microarrays carrying sequence of 11,000 genes of A. fumigatus were used to compare transcriptomes of 20 h-old mycelia (initial phase of the conidiogenesis), 24 h (intermediate phase) e 25 h (final phase) with young mycelia transcriptome. Thirty-four genes displayed a statistically significant difference in expression (7 with increase and 27 with decrease mRNA expression) in 20 h-old mycelia, 101 genes (12 with increase and 89 with decrease) in 24 h-old mycelia and 76 genes (8 with increase and 68 with decrease) in 25 h-old mycelia. Some overexpressed genes (stuA ad the scytalone dehydratase gene) were previously related to specific phases of conidiogenesis but the function of most of them is unknown. Transcriptome analysis using microarrays was also used to identify genes modulated by exposures to UVB radiation (1,8 kJ m-2) in A. fumigatus young mycelia. One hundred and one differentially expressed genes were identified at the end of the exposure to UVB radiation (51 genes with increase and 50 with decrease). The radc gene displayed the higher increase in expression (approximately 16 ×). The function of most of the overexpressed genes is unknown. Four hundred and eighteen differentially expressed genes were identified 30 min after the end of exposure (51 genes with increase and 367 with decrease in expression).

O aumento significativo de micoses decorrentes do crescimento do número de indivíduos imunocomprometidos, da emergência de novas espécies de fungos patogênicos e do surgimento de patógenos resistentes aos antifúngicos atualmente utilizados é um sério problema de saúde pública. Nesse contexto, é extremamente desejável o desenvolvimento de novas técnicas para o controle de fungos. A TFD (terapia fotodinâmica), inicialmente desenvolvida como uma alternativa terapêutica para o câncer, é um processo que envolve a administração de um fotossensibilizador que se acumula preferencialmente nas células-alvo e que pode ser ativado por exposições à luz. A ativação do fotossensibilizador leva à formação de espécies reativas de oxigênio que são capazes de danificar lipídios, proteínas e ácidos nucléicos, provocando a morte da célula. A TFDA (terapia fotodinâmica antimicrobiana) pode ser utilizada tanto para o controle de micoses localizadas como para a eliminação de espécies patogênicas de fungos do ambiente. Neste estudo, foi avaliada a atividade fotossensibilizadora e foram testados parâmetros funcionais como concentração do fotossensibilizador (1 a 400 g mL-1); tempo de pré-incubação com o fotossensibilizador (0 a 60 min.); doses (90 e 180 kJ m-2) e intensidade de luz visível (50 W m-2) para a fotossensibilização de: (1) fotossensibilizadores comerciais atualmente utilizados na TFDA, como o azul de metileno (MB) e o azul de ortotoluidina (TBO), e (2) complexos nitrosilos de rutênio. Os experimentos foram conduzidos com conídios dos fungos-modelo Metarhizium anisopliae e Aspergillus nidulans. Tanto o MB como o TBO, na presença da luz, foram capazes de inativar os conídios das duas espécies de fungos. A inativação foi próxima de 100%, para ambas as espécies, quando a combinação apropriada (concentração do fotossensibilizador e tempo de exposição à luz) foi utilizada. Nenhum dos dois corantes, na ausência da luz, inativou os conídios das duas espécies. O tempo de pré-incubação com os fotossensibilizadores (MB e TBO) não foi um parâmetro determinante para a eficiência da fotoinativação dos conídios. De maneira geral, a inativação dos conídios foi maior nas fotossensibilizações com MB e TBO por 60 min do que nas por 30 min. Os conídios verdes e amarelos foram mais tolerantes à fotossensibilização com MB e TBO do que os conídios brancos e violetas, indicando que a pigmentação dos conídios influencia na fotoinativação. O nitrosilo de rutênio [Ru(NH.NHq)(tpy)NO](PF6)3 não foi capaz de inativar os conídios de nenhuma das espécies, em nenhuma das condições avaliadas. A fotoinativação dos conídios de M. anisopliae com MB e TBO não ocorreu quando a fotossensibilização foi conduzida em meio de cultura líquido PDB. / The significative increase of mycoses resulting from the growing number of immunocompromised individuals, from the emerging of new species of pathogenic fungi, and from the emerging of pathogens resistant to the antimycotics used nowadays is a serious public health problem. In such scenario, the development of new fungal control techniques is highly desirable. Initially developed as a therapeutical alternative for cancer, PDT (photodynamic therapy) is a process that involves the use of a photosensitizer that preferrably accumulates in the target-cells and that can be light-activated. The activation of the photosensitizer leads to the generation of reactive oxygen species that damage lypids, proteins, and DNA, and kills the cell. APDT (antimicrobial photodynamic therapy) can be used to control localized infections as well as to kill pathogenic fungi in the environment. In this study, we evaluated the photoinactivation by MB (methylene blue), TBO (toluidine blue), and nitrosyl ruthenium complexes in Metarhizium anisopliae and Aspergillus nidulans conidia. We also tested parameters such as photosensitizer concentration (1 to 400 g mL-1), pré-incubation time with the photosensitizer (0 to 60 min.), light doses (90 and 180 kJ m-2), and visible light irradiance (50 W m-2). Both MB and TBO photoinactivated the conidia of the two species of fungi. Inactivation was close to 100% for both species when the appropriate combination between photosensitizer concentration and light exposure time was used. None of the two dyes in the dark inactivated the conidia of the two species. Pre-incubation time with the photosensitizers (MB and TBO) was not a determinant parameter for photoinactivation efficiency. Conidia inactivation was higher in photosensibilizations with MB and TBO for 60 min than in those for 30 min. Green and yellow conidia were more tolerant to photosensibilization than mutants with white and violet conidia, indicating that conidia pigmentation influences photosensibilization. Nitrosyl ruthenium [Ru(NH.NHq)(tpy)NO](PF6)3 was not capable to photoinactivate conidia of any of the species, in any of the evaluated conditions. M. anisopliae conidia photoinactivation with MB and TBO did not occur when photosensibilization was conducted in PDB media.

Made available in DSpace on 2016-12-23T14:37:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Larrissa Bernardino Moro.pdf: 381207 bytes, checksum: 5b08b4099b28c73e3fab34be979d1512 (MD5) Previous issue date: 2009-12-10 / O Brasil é o primeiro produtor mundial e terceiro exportador de mamão Carica papaya L., com destaque para o Estado do Espírito Santo que responde a 70% da exportação. As condições climáticas necessárias ao desenvolvimento do mamoeiro são altamente favoráveis para a ocorrência de problemas fitossanitários, sendo a espécie Tetranychus urticae (KOCH, 1836) (Acari: Tetranychidae) uma das pragas-chave, infestando o mamoeiro durante todo o ano. Este ácaro tem sido controlado por agrotóxicos, mas o uso em larga escala destes produtos pode levar ao rápido desenvolvimento de resistência, além de serem danosos ao ambiente. A utilização de cultivares resistentes e de fungos entomopatogênicos são alternativas de controle para esta praga, reduzindo os riscos de resistência do ácaro a acaricidas e a toxicidade ao ambiente. Este trabalho avalia o desenvolvimento e reprodução de T. urticae em cultivares de mamão e verifica se essas cultivares interferem na patogenicidade de Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae e Lecanicillium longisporum. Foram utilizados quatro cultivares de mamão, dois do grupo Formosa (Tainung 01 e Calimosa) e dois do grupo Solo (Golden e Sunrise). Para iniciar o bioensaio foi transferida uma fêmea fertilizada de T. urticae ao disco de folhas e a mesma foi retirada após um período de 12 horas, deixando um ovo por disco, que foi avaliado a cada 12h, registrando-se o período de incubação, duração do estágio de imaturo, longevidade e fecundidade dos adultos e viabilidade desses estágios. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey, a 5% de probabilidade. Para o bioensaio com fungos entomopatogênicos foram utilizadas fêmeas adultas de T. urticae provenientes da criação sobre feijão-de-porco Canavalia ensiformis (L.) e ácaros que permaneceram sobre folhas das cultivares de mamão por pelo menos uma geração. Foram transferidas dez fêmeas para as placas de Petri com disco de folha de C. ensiformis ou de C. papaya com a face abaxial voltada para cima sobre uma camada de algodão hidrófilo umedecida. Em seguida, os ácaros foram pulverizados com suspensões de conídios em Torre de Potter, utilizando-se volume de 5 mL de suspensão 5x107 conídios.mL-1. As suspensões de conídios foram preparadas a partir das formulações comerciais (Boveril® B. bassiana; Metarril® M. anisopliae; Vertirril® L. longisporum). Foi avaliada a mortalidade corrigida e confirmada. A duração do período de ovo na variedade Tainung 01 foi menor (4,0 dias) em relação às outras variedades. O mesmo ocorreu para a duração dos estágios de larva, protoninfa e período ovo-adulto entre as variedades analisadas, sendo maior para as variedades Calimosa, Sunrise e Golden. Esses resultados indicam que as variedades de mamão, Tainung 01, Calimosa, Sunrise e Golden são bons hospedeiros para T. urticae com destaque para Tainung 01, pois esta apresentou menor duração aos estágios de ovo, larva, protoninfa e período ovo-adulto. Os resultados indicaram que os fungos entomopatogênicos comerciais são promissores para o controle de T. urticae em mamoeiro. Testes de estimativa da CL50 e bioensaios em semi-campo e campo são necessários para a adoção desta tática de controle microbiano / Brazil is the worlds largest producer and third exporter of Papaya Carica papaya L., especially the state of Espírito Santo, which accounts for about 70% of exports. Climatic conditions necessary to the development of papaya are also highly favorable for the occurrence of phytosanitary problems, and the species Tetranychus urticae (Koch, 1836) (Acari: Tetranychidae) one of the key pest, infesting papaya plant throughout the year. This mite has been controlled by pesticides, but the widespread use of these products can lead to rapid development of resistance, besides being harmful to the environment. The use of resistant cultivars and entomopathogenic fungi are alternatives to control this pest, reducing the risk of mite resistance to acaricides and also the toxicity to the environment. The study was conducted to evaluate the development and reproduction of T. urticae in papaya cultivars and to verify if these cultivars interfere with the pathogenicity of Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae and Lecanicillium longisporum. Were assayed four varieties of papaya, two of the group "Formosa" (Tainung 01 and Calimosa) and two from the "Solo" (Golden and Sunrise). To initiate the bioassay, it was transferred a fertilized female T. urticae to a leaf dish and the female was removed after a period of 12 hours, leaving one egg per disc, that was evaluated every 12 hours recording the incubation period, length of immature stage, longevity and fecundity of adults and viability of these stages. Data were subjected to analysis of variance and means compared by Tukey test at 5% probability. For the bioassay with entomopathogenic fungi were used adult females of T. urticae from the rearing of jack bean Canavalia ensiformis (L.) and mites that remained on leaves of cultivars of papaya for at least a generation. Ten females were transferred to Petri dishes with leaf disk of C. ensiformis or C. papaya with the abaxial side up on a layer of cotton wool moistened. After that mites were sprayed with conidial suspension in a Potter Tower, using a volume of 5 mL of inoculum suspension 5x107 conidia.mL-1. Conidial suspensions were prepared from the commercial formulations (Boveril ® B. bassiana, Metarril ® M. anisopliae; Vertirril ® L. longisporum). We evaluated the mortality corrected and confirmed. The duration of the egg in the variety Tainung 01 was smaller (4.0 days) than to the other varieties. The same occurred for the duration of the larval stages, protonymph and egg-adult period between the varieties analyzed, being higher for varieties Calimosa, Sunrise and Golden. These results indicate that the varieties of papaya, Tainung 01, Calimosa, Sunrise and Golden are good hosts for T. urticae, especially Tainung 01, which showed a shorter duration of the egg, larva, protonymph and egg-adult period. The results also indicate that the fungi are promising for commercial control of T. urticae in papaya. Tests of estimation of the CL50 bioassays and in semi-field and field are required to use this tactic of microbial control

O aumento significativo de micoses decorrentes do crescimento do número de indivíduos imunocomprometidos, da emergência de novas espécies de fungos patogênicos e do surgimento de patógenos resistentes aos antifúngicos atualmente utilizados é um sério problema de saúde pública. Nesse contexto, é extremamente desejável o desenvolvimento de novas técnicas para o controle de fungos. A TFD (terapia fotodinâmica), inicialmente desenvolvida como uma alternativa terapêutica para o câncer, é um processo que envolve a administração de um fotossensibilizador que se acumula preferencialmente nas células-alvo e que pode ser ativado por exposições à luz. A ativação do fotossensibilizador leva à formação de espécies reativas de oxigênio que são capazes de danificar lipídios, proteínas e ácidos nucléicos, provocando a morte da célula. A TFDA (terapia fotodinâmica antimicrobiana) pode ser utilizada tanto para o controle de micoses localizadas como para a eliminação de espécies patogênicas de fungos do ambiente. Neste estudo, foi avaliada a atividade fotossensibilizadora e foram testados parâmetros funcionais como concentração do fotossensibilizador (1 a 400 g mL-1); tempo de pré-incubação com o fotossensibilizador (0 a 60 min.); doses (90 e 180 kJ m-2) e intensidade de luz visível (50 W m-2) para a fotossensibilização de: (1) fotossensibilizadores comerciais atualmente utilizados na TFDA, como o azul de metileno (MB) e o azul de ortotoluidina (TBO), e (2) complexos nitrosilos de rutênio. Os experimentos foram conduzidos com conídios dos fungos-modelo Metarhizium anisopliae e Aspergillus nidulans. Tanto o MB como o TBO, na presença da luz, foram capazes de inativar os conídios das duas espécies de fungos. A inativação foi próxima de 100%, para ambas as espécies, quando a combinação apropriada (concentração do fotossensibilizador e tempo de exposição à luz) foi utilizada. Nenhum dos dois corantes, na ausência da luz, inativou os conídios das duas espécies. O tempo de pré-incubação com os fotossensibilizadores (MB e TBO) não foi um parâmetro determinante para a eficiência da fotoinativação dos conídios. De maneira geral, a inativação dos conídios foi maior nas fotossensibilizações com MB e TBO por 60 min do que nas por 30 min. Os conídios verdes e amarelos foram mais tolerantes à fotossensibilização com MB e TBO do que os conídios brancos e violetas, indicando que a pigmentação dos conídios influencia na fotoinativação. O nitrosilo de rutênio [Ru(NH.NHq)(tpy)NO](PF6)3 não foi capaz de inativar os conídios de nenhuma das espécies, em nenhuma das condições avaliadas. A fotoinativação dos conídios de M. anisopliae com MB e TBO não ocorreu quando a fotossensibilização foi conduzida em meio de cultura líquido PDB. / The significative increase of mycoses resulting from the growing number of immunocompromised individuals, from the emerging of new species of pathogenic fungi, and from the emerging of pathogens resistant to the antimycotics used nowadays is a serious public health problem. In such scenario, the development of new fungal control techniques is highly desirable. Initially developed as a therapeutical alternative for cancer, PDT (photodynamic therapy) is a process that involves the use of a photosensitizer that preferrably accumulates in the target-cells and that can be light-activated. The activation of the photosensitizer leads to the generation of reactive oxygen species that damage lypids, proteins, and DNA, and kills the cell. APDT (antimicrobial photodynamic therapy) can be used to control localized infections as well as to kill pathogenic fungi in the environment. In this study, we evaluated the photoinactivation by MB (methylene blue), TBO (toluidine blue), and nitrosyl ruthenium complexes in Metarhizium anisopliae and Aspergillus nidulans conidia. We also tested parameters such as photosensitizer concentration (1 to 400 g mL-1), pré-incubation time with the photosensitizer (0 to 60 min.), light doses (90 and 180 kJ m-2), and visible light irradiance (50 W m-2). Both MB and TBO photoinactivated the conidia of the two species of fungi. Inactivation was close to 100% for both species when the appropriate combination between photosensitizer concentration and light exposure time was used. None of the two dyes in the dark inactivated the conidia of the two species. Pre-incubation time with the photosensitizers (MB and TBO) was not a determinant parameter for photoinactivation efficiency. Conidia inactivation was higher in photosensibilizations with MB and TBO for 60 min than in those for 30 min. Green and yellow conidia were more tolerant to photosensibilization than mutants with white and violet conidia, indicating that conidia pigmentation influences photosensibilization. Nitrosyl ruthenium [Ru(NH.NHq)(tpy)NO](PF6)3 was not capable to photoinactivate conidia of any of the species, in any of the evaluated conditions. M. anisopliae conidia photoinactivation with MB and TBO did not occur when photosensibilization was conducted in PDB media.

Conídios são estruturas especializadas, produzidas assexuadamente pelo micélio de muitas espécies de ascomicetos. A produção dos conídios requer o controle espacial e temporal da expressão gênica e a formação de estruturas específicas durante o desenvolvimento. Os conídios estão envolvidos na reprodução, dispersão e persistência ambiental dos fungos. Em espécies patogênicas como Aspergillus fumigatus e Metarhizium anisopliae, os conídios também são responsáveis pela infecção do hospedeiro. Um dos principais fatores ambientais capazes de matar e / ou danificar os conídios é a radiação solar. Os dímeros de pirimidina ciclobutano (CPDs) são os principais fotoprodutos do DNA induzidos pela radiação UVB. Os principais objetivos deste trabalho foram: (1) estimar as frequências de CPDs em conídios expostos a doses subletais de radiação UVB, (2) correlacionar a frequência de CPDs com a cinética de germinação dos conídios, (3) comparar a frequência de CPDs em conídios selvagens com a frequência em conídios mutantes para a pigmentação, (4) identificar genes diferencialmente expressos durante as fases da conidiogênese de A. fumigatus e (5) identificar genes modulados pela radiação UVB em micélio jovem de A. fumigatus. Conídios de M. anisopliae, A. nidulans e A. fumigatus foram expostos à irradiância de 1000 mW m-2 de UVB por 15, 30, 60 e 90 min. As doses totais ao final das exposições foram 0,9, 1,8, 3,6 e 5,4 kJ m-2. O aumento na frequência de CPDs foi linear e diretamente proporcional à dose, com 0,215, 0,455, 0,803 e 1,628 CPDs 10 kb-1 induzidos pelas doses de 0,9, 1,8, 3,6 e 5,4 kJ m-2 em A. fumigatus, 0,037, 0,077, 0,142 e 0,202 CPDs 10 kb-1 em A. nidulans e 0,041, 0,085, 0,155 e 0,255 CPDs 10 kb-1 em M. anisopliae. A frequência de CPDs no mutante albino de M. anisopliae (0,552 10 kb-1) foi aproximadamente dez vezes maior do que na linhagem selvagem (0.057 10 kb-1) após exposição à dose de 1,8 kJ m-2. Esta é a primeira evidência direta de que a pigmentação dos conídios protege o DNA contra os danos induzidos pela radiação UVB. Microarranjos genômicos de DNA foram utilizados para comparar os transcriptomas de micélios com 20 h (início da conidiogênese), 24 h (fase intermediária) e 25 h (fase final) com o transcriptoma de micélio jovem. Foram identificados 34 genes diferencialmente expressos (7 com aumento e 27 com diminuição) com 20 h de desenvolvimento, 101 genes (12 com aumento e 89 com diminuição) com 24 h e 76 genes (oito com aumento e 68 com diminuição) com 25 h. Alguns genes que apresentaram aumento na expressão (stuA e o gene da scytalone dehydratase) já haviam sido associados com fases específicas da conidiogênese, entretanto a maioria dos genes que apresentou aumento na expressão não tem função conhecida. A análise de transcriptomas com microarranjos de DNA também foi utilizada para identificar genes com expressão modulada por exposições à radiação UVB (1,8 kJ m-2) em micélio jovem de A. fumigatus. Foram identificados 101 genes diferencialmente expressos ao final da exposição à radiação UVB (51 genes com aumento e 50 com redução). O gene radc apresentou o maior aumento na expressão (aproximadamente 16 ×). A maioria dos genes com aumento na expressão não possui função conhecida. Foram identificados 418 genes diferencialmente expressos 30 min após o termino da exposição (51 genes com aumento e 367 com redução na expressão). / Conidia are specialized structures produced asexually during mycelia growth of many ascomycete species. The process of conidiation involves temporal and spatial regulation of gene expression, cell specialization, intercellular communication, and formation of specific structures during fungal growth. Conidia are responsible for the reproduction, dispersal and environmental persistence of many fungal species. In pathogenic species like Aspergillus fumigatus and Metarhizium anisopliae, conidia are also responsible for host infection. One of the main environmental factors that can kill and/or damage conidia is solar UV radiation. Cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs) are the major DNA photoproducts induced by UVB. The principal goals of the present study were to: (1) estimate the frequency of CPDs induced by sublethal doses of UVB radiation in conidial DNA of three selected ascomycetes, (2) examine correlation of CPD frequencies with germination speed, and (3) estimate the protective effect of the wild-type green conidial pigmentation on DNA in M. anisopliae var. anisopliae, (4) identify differentially expressed genes during the different phases of A. fumigatus conidiogenesis and (5) identify genes regulated by UVB radiation in A. fumigatus young mycelia. A. fumigatus, A. nidulans, and M. anisopliae conidia were exposed to 1000 mW m-2 UV irradiance for 15, 30, 60 and 90 min. Total Quaite-weighted doses were 0.9, 1.8, 3.6 and 5.4 kJ m-2, respectively. The frequencies of dimers were linear and directly proportional to the doses, with 0.215, 0.455, 0.803 and 1.628 CPDs 10 kb-1 detected at the doses of 0.9, 1.8, 3.6 and 5.4 kJ m-2 in A. fumigatus, 0.037, 0.077, 0.142 and 0.202 CPDs 10 kb-1 in A. nidulans, and 0.041, 0.085, 0.155 and 0.255 CPDs 10 kb-1 in M. anisopliae. The frequency of dimers in the M. anisopliae albino mutant DWR 180 (0.552 10 kb-1) was approximately ten times higher than of the wild-type ARSEF 23 strain (0.057 10 kb-1) after exposure to doses of 1.8 kJ m-2. DNA microarrays carrying sequence of 11,000 genes of A. fumigatus were used to compare transcriptomes of 20 h-old mycelia (initial phase of the conidiogenesis), 24 h (intermediate phase) e 25 h (final phase) with young mycelia transcriptome. Thirty-four genes displayed a statistically significant difference in expression (7 with increase and 27 with decrease mRNA expression) in 20 h-old mycelia, 101 genes (12 with increase and 89 with decrease) in 24 h-old mycelia and 76 genes (8 with increase and 68 with decrease) in 25 h-old mycelia. Some overexpressed genes (stuA ad the scytalone dehydratase gene) were previously related to specific phases of conidiogenesis but the function of most of them is unknown. Transcriptome analysis using microarrays was also used to identify genes modulated by exposures to UVB radiation (1,8 kJ m-2) in A. fumigatus young mycelia. One hundred and one differentially expressed genes were identified at the end of the exposure to UVB radiation (51 genes with increase and 50 with decrease). The radc gene displayed the higher increase in expression (approximately 16 ×). The function of most of the overexpressed genes is unknown. Four hundred and eighteen differentially expressed genes were identified 30 min after the end of exposure (51 genes with increase and 367 with decrease in expression).

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-04-26T19:53:52Z No. of bitstreams: 1 2012 - Simone Quinelato Bezerra.pdf: 1703088 bytes, checksum: c39ad4f0bc5fb8b05085a7e4684060b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T19:53:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012 - Simone Quinelato Bezerra.pdf: 1703088 bytes, checksum: c39ad4f0bc5fb8b05085a7e4684060b9 (MD5) Previous issue date: 2012-03-30 / FAPERJ / Aiming to decrease the chemicals acaricide use and their damages, new alternatives for ticks control has been studied. Metarhizium anisopliae s.l. is one of the most studied fungi in agricultural pest management programs, since it has great acaricide potential. Therefore, this study aimed to characterize molecular and morphologically, as well as evaluate the virulent potential of 30 M. anisopliae s.l. isolates from different geographical regions, hosts or substrates allowing the selection of virulent isolates in order to be further investigated for field programs of microbial control of pests. Initially, the analyses of morphological characterizations of the isolates were made to confirm their identification. Each isolate had its conidial potential production evaluated. The colonies studied showed morphological characteristics consistent with those described in the literature. The colonies diameter varied between 29.66 mm and 51.33 mm among isolates. There was both length and width variation in the conidia and phialides in the same isolate, as well as the presence of grouped and solitary phialides. The conidial production potential was variable among isolates, but both conidial size and colonies diameter did not influence the conidial production; isolates with low conidial production showed similar colony size in comparison to isolates with high potential. In a second stage of the study, the virulence of these isolates was evaluated to Rhipicephalus microplus larvae treated with one of the four different conidial concentrations (105, 106, 107 or 108 conidia.mL-1). The lethal action of Brazilian M. anisopliae s.l isolates to R. microplus larvae were confirmaded with high mortality among the isolates, which in general was proportional to the conidia concentration of the treatments. Most isolates killed larvae population with 107 conidia.mL-1 concentration, however the most virulent isolates presented lethal concentration of 106 conidia.mL-1 with main percentages of mortality nearly 100% at day 20 after treatment. In addition, the genetic variability of these isolates was performed to evaluate their relationship with other species of Metarhizium sp. through RFLP-PCR analysis and ITS1-5.8S-ITS2 rDNA sequencing. No specificity pattern was observed when isolates from the same region, host or substrate were grouped. Low genetic variability was observed among isolates, which were basically grouped into two groups. The CG 344 isolate was shown to be genetically distant from the remaining Brazilian isolates studied, but according to the ?GenBank? sequences comparison, it was related to the Metarhizium genus. It is suggested that this variation occured owing the lack of procedures that could generated morphological and molecular changes, which probably contribute to this low genetic variability. The present study allowed the detection of M. anisopliae s.l. isolates with highly virulence to R. microplus larvae, that may be considered potential biocontrol agents for this tick species, emphasizing the importance of molecular tools for identification and characterization of fungal isolates, ensuring the product quality, their success implement and the environmental track of the fungi at field biological control programs. / Na tentativa de diminuir a utiliza??o de produtos qu?micos e os danos por eles causados, novas alternativas para o controle de carrapatos vem sendo estudadas. O fungo Metarhizium anisopliae ? um dos mais estudados em programas agropecu?rios de manejo de pragas, pois apresenta grande potencial acaricida. Baseado nisso, o presente estudo objetivou a caracteriza??o morfol?gica, molecular e a avalia??o da virul?ncia de 30 isolados brasileiros de M. anisopliae s.l. provenientes de diferentes regi?es geogr?ficas, hospedeiros ou substratos, com a finalidade de selecionar isolados mais virulentos para utiliza??o em futuros programas de biocontrole de carrapatos. Inicialmente os isolados foram caracterizados morfologicamente para confirma??o de sua identifica??o, tamb?m sendo avaliado o potencial de produ??o de con?dios de cada isolado. As col?nias estudadas apresentaram caracter?sticas morfol?gicas compat?veis com as descritas na literatura. O tamanho das col?nias variou entre 29,66 mm e 51,33 mm de di?metro. Houve varia??o no comprimento e na largura de con?dios e fi?lides num mesmo isolado, assim como a presen?a de fi?lides agrupadas e solit?rias. O potencial de produ??o de con?dios foi vari?vel entre os isolados, por?m tanto o tamanho dos con?dios quanto o di?metro das col?nias n?o influenciaram a produ??o de con?dios. Numa segunda etapa do estudo, foi avaliada a virul?ncia destes isolados sobre larvas de Rhipicephalus microplus tratadas com uma das quatro diferentes concentra??es de con?dios (105, 106, 107 ou 108 con?dios/mL). Foi confirmada a a??o letal dos isolados brasileiros de M. anisopliae s.l. sobre larvas de R. microplus, geralmente ocorrendo de forma diretamente proporcional a concentra??o conidial dos tratamentos. A maioria dos isolados ocasionou a morte de metade da popula??o de larvas com a concentra??o de 107 con?dios/mL; os isolados mais virulentos apresentaram esta concentra??o letal com 106 con?dios/mL, com percentuais m?dios de mortalidade de larvas pr?ximos de 100% ao 20? dia ap?s tratamento. Al?m disso, buscou-se avaliar a variabilidade gen?tica destes isolados e sua rela??o com outras esp?cies do g?nero Metarhizium atrav?s da an?lise de RFLP-PCR e do sequenciamento da regi?o ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA. N?o foi observado um padr?o de especificidade para o agrupamento entre isolados oriundos de mesma regi?o, hospedeiro ou substrato. Foi observada variabilidade gen?tica entre os isolados que basicamente se agruparam em dois grupos. O isolado CG 344 mostrou-se geneticamente distante de todos os outros, mas de acordo com a compara??o com sequ?ncias obtidas do ?GenBank? mostrou-se relacionado ao g?nero Metarhizium. Esta varia??o pode ser devido ao fato deste isolado ter sido poupado de processos que gerassem altera??es morfol?gicas e moleculares, o que possivelmente contribuiu para a pequena variabilidade gen?tica obsevada. O presente estudo possibilitou a detec??o de isolados brasileiros de M. anisopliae s.l. com elevada virul?ncia para larvas de R. microplus, podendo ser considerados potenciais agentes no biocontrole desta esp?cie de carrapato, ressaltando a import?ncia da utiliza??o de ferramentas moleculares para identifica??o e caracteriza??o destes isolados, contribuindo para a qualidade do produto, o sucesso de sua aplica??o e o monitoramento de um isolado introduzido no ambiente com finalidade de controle biol?gico.

Laboratory bioassay was used to determine the pathogenicity of nine isolates of fungi of the genera Metarhizium, Beauveria and Clonostachys to the parasitic mite, Varroa destructor. All nine isolates were pathogenic to V. destructor with Metarhizuim anisopliae UAMH 9198, Clonostachys rosea UAMH 9161 and Beauveria bassiana GHA being the most pathogenic within their respective species. Metarhizium anisopliae UAMH 9198 was more lethal to V. destructor than B. bassiana GHA and C. rosea UAMH 9161 with LC50 values of 1.6 x 10(5), 9.6 x 10(6) and 5.4 x 10(6) conidia/mL, respectively. Metarhizium anisopliae and B. bassiana significantly affected brood and adult honey bee survivorship and their immune responses. They were lethal to the bees with LC50s of 3.70 x 10(6) and 2.62 x 10()5 conidia/mL, respectively. The effect of temperature and thymol on conidia germination, production and colony growth of the fungal isolates was determined. Temperature significantly affected conidia germination, production and colony growth (P < 0.05) but thymol did not. Efficacy of the two most promising isolates (M. anisopliae UAMH 9198 and B. bassiana GHA) as potential bio-control agents against V. destructor in hives was evaluated. Fungal inocula were applied as dry formulation, with corn flour as carrier, using dispenser tray and dusting applications. Treatments were either applied alone or in combination with thymol to determine any synergistic effects. All treatments significantly increased mite mortality (P < 0.05), however, the mite control efficacy varied between fungal treatments and application methods. Combined treatments of fungi and thymol caused significantly higher mite mortality than single fungal treatments, which showed control levels of ≤61%. Significant differences in mite mortality were found between the two delivery methods with the differences depending on the fungal isolate. The results suggest that M. anisopliae UAMH 9198 would be a more effective bio-control agent for the management of V. destructor in honey bee colonies than the other isolates tested when dispensed continuously in hives using delivery methods such as a dispenser tray. However, future research is needed to improve delivery methods and investigate the effect of carriers used in the formulation on the efficacy of such entomopathogenic fungi. / Ontario Ministry of Agriculture and Food (OMAF), University of Guelph