Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-29Bitstream added on 2015-01-26T13:30:39Z : No. of bitstreams: 1 000795829_20150729.pdf: 90879 bytes, checksum: 3ee660d26bb3b9dddcc85651f3dde8ae (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-03T12:21:07Z: 000795829_20150729.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-03T12:22:20Z : No. of bitstreams: 1 000795829.pdf: 452230 bytes, checksum: cdf5d7e5715c64c8ee94bbd4a41efb11 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A hanseníase, causada pelo Mycobacterium leprae, apresenta diferentes quadros clínicos que refletem o perfil de resposta imunológica do hospedeiro. As células dendríticas (DCs) possuem um papel crucial na imunidade por induzirem o desenvolvimento da resposta imune adaptativa, porém a interação do M. leprae com estas células ainda é pouco entendida. Neste estudo buscamos contribuir para o entendimento da geração da resposta imune específica na hanseníase tendo como foco o papel das DCs frente ao M. leprae. DCs foram diferenciadas in vitro a partir de monócitos de pacientes tuberculóides e virchowianos, estimuladas com antígeno sonicado do M. leprae e analisadas quanto à expressão de marcadores de diferenciação e maturação. A expressão de genes de citocinas e receptores foi avaliada por qPCR. Paralelamente, monócitos de indivíduos saudáveis foram pré-incubados com o antígeno sonicado do bacilo e submetidos à diferenciação em DCs e à avaliação dos marcadores de superfície. A diferenciação de monócitos em DCs foi similar entre pacientes e controles saudáveis. A estimulação com o antígeno sonicado do M. leprae levou ao aumento na expressão de CD40, CD80, CD86 e HLA-DR tanto nos pacientes hansenianos como em indivíduos saudáveis. Entretato, este estímulo parece ser insuficiente para a completa ativação das DCs uma vez que não resultou em aumento significativo nos níveis de CD83. A análise da expressão gênica também demonstrou estimulação parcial das DCs pelo M. leprae. A pré-incubação de monócitos com o antígeno sonicado do bacilo comprometeu o processo de diferenciação em DCs e a maturação destas. Em conjunto, nossos resultados sugerem que o antígeno sonicado do M. leprae prejudicou a diferenciação de monócitos em DCs e desencadeou uma ativação incompleta das DCs tanto em pacientes quanto em controles saudáveis o que pode contribuir para os mecanismos de escape do bacilo / Leprosy is caused by Mycobacterium leprae and characterized by distinct clinical manifestations that reflect the immune response of the host. Dendritic cells (DCs) play a crucial role in immunity inducing the development of adaptive immune response, however the interaction of DCs with M. leprae is poorly understood. This study aims to contribute to the understanding of the generation of specific immune response in leprosy patients focusing on the role of DCs against the M. leprae. DCs were differentiated in vitro from monocytes of lepromatous and tuberculoid patients, stimulated with sonicated antigen of M. leprae and analyzed for the expression of differentiation and maturation markers. The expression of mRNA to cytokines and receptors was assessed by qPCR. In parallel, monocytes from healthy controls were preincubated with the sonicated antigen of M. leprae, differentiated into DCs and evaluated in respect to the expression of surface markers. Differentiation of monocytes into DCs was similar between patients and healthy controls. After stimulation with sonicated antigen of M. leprae DCs from leprosy patients and healthy controls showed increased expression of CD40, CD80, CD86 and HLA-DR but this stimulation seems to be insufficient for complete activation of DCs since it was not observed an increase in the level of CD83. The analysis of gene expression also showed partial stimulation of DCs by M. leprae. The pre-incubation of monocytes with sonicated antigen of M. leprae resulted in impairment in the differentiation into DCs and maturation. Altogether our results suggest that the sonicated antigen of M. leprae impaired differentiation of monocytes into DCs and triggered an incomplete activation of DCs both in patients and healthy controls that may contribute among the mechanisms of escape used by M. leprae / FAPESP: 09/01436-1

Orientador: Helio Langoni / Banca: Márcia Marinho / Banca: Antônio Carlos Paes / Resumo: A toxoplasmose é uma protozoonose causada pelo Toxoplasma gondii, de distribuição mundial e que acomete todos os animais homeotérmicos, incluindo o homem. Apresenta desde quadros assintomáticos a manifestações sistêmicas graves. Nos seres humanos a infecção atinge com maior gravidade principalmente indivíduos imunocomprometidos e gestantes, sendo que a primoinfecção, pode levar a óbitos, abortamentos, natimortos além de lesões severas do sistema nervoso central. Técnicas sorológicas precisas de fácil aplicação a campo e de menores custos, podem auxiliar na promoção de medidas de prevenção e controle, mas para isso é importante garantir a produção de antígenos em quantidade e de qualidade, a fim de atender as necessidades do método empregado, para garantir a sua padronização. A produção in vitro de taquizoítos de T.gondii usando células de sarcoma murino TG180 em histoculturas, mostra-se uma alternativa viável para a produção de antígeno de T. gondii, em quantidade e qualidade para uso no diagnóstico dessa infecção utilizando-se o Método de Aglutinação Direta, o que pode permitir sua difusão como um teste rápido a campo, possibilitando a sua utilização por profissionais autônomos ou unidades de saúde, podendo-se assim agilizar com uma maior rapidez as ações de prevenção dessa zoonose. / Abstract: Toxoplasmosis is one protozoonosis caused by Toxoplasma gondii, of world-wide distribution and that acomete to all the animals, including the man. It presents since without symptoms until serious clinical manifestations. In the human beings the infection reaches with bigger gravity immunocompromised patients individuals mainly and pregnant woman, being that the primary infecction, it can take the deaths, abortions, stillborn beyond severe injuries of the central nervous system. Serologicals techniques of easy application in the field and of lesser costs, can assist in the promotion of measures of prevention and control, but for this it is important to guarantee the production of antigens in amount and quality, in order to take care of the necessities of the employed method to guarantee its standardization. The production in vitro of taquizoitos of T.gondii using cells of sarcom murine TG180 in histoculture, reveals to a viable alternative for the antigen production of T. gondii, in amount and quality for use in the diagnosis of this infection by the Direct Agglutination Test, what it can allow its diffusion as a fast test in the field, allowing its use for independent professionals or units of health, and thus allowing to a bigger rapidity in the actions of prevention of this zoonose. / Mestre

Orientador: Gervásio Henrique Bechara / Banca: Gustavo Seron Sanches / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Maria Izabel Camargo Mathias / Banca: Beatriz Rossetti Ferreira / Resumo: O controle de carrapatos à base de acaricidas químicos tem levado a seleção de ectoparasitos resistentes além de contaminação ambiental e de produtos de origem animal. Frente a isso, há crescente incentivo na busca por alternativas de controle do ectoparasito, como o desenvolvimento de vacinas. O presente estudo teve como objetivo avaliar a utilização de uma proteína recombinante da aquaporina do Rhipicephalus (Boophilus) microplus como antígeno em uma vacina contra R. sanguineus, em cães domésticos. A investigação foi realizada em cooperação científica com o United States Department of Agriculture/Agricultural Research Service (USDA/ARS). Os efeitos da vacina foram avaliados nos diferentes estádios do ectoparasito em cães previamente vacinados com o antígeno + adjuvante (Montanide) (G1) e em animais de um grupo controle inoculados apenas como adjuvante (G2). Foram avaliados: i. potencial biótico (parâmetros biológicos) dos carrapatos; ii. Título de anticorpos séricos (IgG) de cães por meio do ensaio imunoenzimático indireto (Teste ELISA) pós imunização; iii. Avaliação histopatológica do sitio de fixação dos carrapatos em diversos momentos pós-fixação na pele dos hospedeiros, incluindo a contagem de células inflamatórias migradas para o foco inflamatório; iv. Histologia do ovário dos carrapatos para observação de possíveis danos causados pela ação do imunógeno; v. locais de ação do antígeno no corpo do carrapato por meio de ensaio imunohistoquímico. Os principais resultados o... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tick control based on chemical acaricides has led to rapid selection of resistant ectoparasites as well as environmental and animal products contamination. Therefore, there is an increasing incentive in the search for alternatives to the parasite's control, such as the development of vaccines. This study aimed to evaluate the use of a recombinant aquaporin R.(Boophilus) microplus protein as antigen in a vaccine against R. sanguineus in domestic dogs. The research was conducted on scientific cooperation with the United States Department of Agriculture / Agricultural Research Service (USDA / ARS). The vaccine's effects were evaluated at different stages of the ectoparasite in dogs previously vaccinated with antigen + adjuvant (Montanide) (G1) and in animals of a control group inoculated only with adjuvant (G2). It was evaluated: i. biotic potential (biological parameters) of ticks; ii. serum antibodies (IgG) titers of the dogs after immunization, by indirect enzymelinked immunosorbent assay (ELISA); iii. Histopathological evaluation of the tick's attachment site at various times post-fixation on the host's skin, including the inflammatory cell counts migrated into the inflammatory site; iv. Tick's ovarian histology for observation of possible damage caused by the action of the immunogen; v. possible antigen action sites in the tick's body by immunohistochemical assay. The main results were: 1) The engorgement period of adult females from the immunized group was 12% lower than the control group; 2) Larvae from the immunized group had 8.7% higher engorgement period than the control group and weighed 7.2% less; 3) Nymphs from the immunized group had 4.5% lower engorgement period and weighed 3.6% less than the control group; 4) Although the animals showed increased antibodies titer post-second immunization, these titers decreased rapidly; 5) The (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-03Bitstream added on 2014-06-13T20:29:34Z : No. of bitstreams: 1 pinto_jras_me_rcla.pdf: 1057969 bytes, checksum: 2e29026d533c6190983ed253a062779d (MD5) / Os venenos dos insetos da ordem Hymenoptera contêm uma variedade de proteínas alergênicas. As ferroadas desses insetos podem induzir reações alérgicas e ocasionalmente, anafilaxias fatais. Há um crescente interesse nos componentes químicos dos venenos desses insetos, sobretudo no campo da alergia e imunologia clínica. As principais reações desses venenos são as reações inflamatórias e/ou imunológicas em suas vítimas, podendo ocorrer alguns efeitos sistêmicos. Dentre os Hymenoptera sociais, os venenos de abelhas e vespas têm sido extensivamente estudados e muitos de seus componentes moleculares já foram isolados e identificados. Fosfolipase, hialuronidase, antígeno-5 e serinoprotease são proteínas antigênicas de elevada massa molecular que, quando injetadas durante o ato de ferroar, iniciam uma resposta imune peculiar, sensibilizando alguns indivíduos. Porém, poucos estudos têm sido realizados para a identificação e o mapeamento dos epítopos desses alérgenos. O conhecimento sobre a interação molecular dos principais alérgenos destes venenos certamente deverá contribuir para o aperfeiçoamento dos diagnósticos de alergia, bem como para o desenvolvimento de tratamentos mais seletivos de reações alérgicas mediadas por IgE. No presente estudo identificamos e mapeamos os epítopos lineares de células-B do antígeno-5 do veneno da vespa social Polybia paulista. O antígeno-5 é conhecido como um dos principais alérgenos do veneno de Hymenoptera com massa molecular em torno de 23 kDa e função biológica desconhecida, porém muitos estudos demonstram a sua alergenicidade. Tendo conhecimento da sequência primária do antígeno-5, a identificação e o mapeamento dos epítopos foram realizados através da síntese múltipla de peptídeos, utilizando as técnicas do SPOT-Synthesis, imunodetecção e método indireto do ELISA com soro de pacientes sensíveis... / The venom insects of Hymenoptera order contain a variety of allergenic proteins. The stings of these insects can induce allergic reactions and occasionally fatal anaphylaxis. There is a growing interest in the knowledge about the chemical components of the venom of these insects, especially in the field of allergy and clinical immunology. The main reactions of these venoms are inflammation and / or the induction of immune process in the victims; sometimes systemic effects also may be observed. Among the social Hymenoptera, the venoms of bees and wasps have been extensively studied and many of their molecular components have been isolated and identified. Phospholipase, hyaluronidase, antigen-5 and serine protease are antigenic proteins of high molecular weight, which may initiate a peculiar immune response to sensitize some individuals. However, few studies have been performed for the identification and mapping of the epitopes these allergens. The knowledge about the molecular interaction of the major allergens of these venoms with IgG and/or IgE will certainly contribute for improving the diagnosis of allergy, as well as to develop more selective treatments of reactions IgE-mediated allergy. In this study we identified and mapped the linear epitopes of B-cells of the antigen-5 from the venom of the social wasp Polybia paulista. The antigen-5 is known as one of the major allergens from Hymenoptera venoms with molecular weight around 23 kDa and unknown biological function, but many studies show its allergenicity. The aim of this study was to identify and to map the linear epitopes of B-cells of this allergen. Taking into account the knowledge the primary sequence of antigen-5, the identification and mapping of epitopes was performed by using multiple synthesis of peptides with the combination of different protocols: SPOT-Synthesis, immunoblotting and indirect method of ELISA with the sera... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-06Bitstream added on 2014-06-13T20:11:35Z : No. of bitstreams: 1 bicalho_sr_me_jabo.pdf: 151294 bytes, checksum: 550621907917717519898ec20c136186 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Tendo em vista a alta incidência das neoplasias mamárias e metástases em cadelas e objetivando contribuir com a oncologia veterinária na padronização de um teste simples, eficaz e acessível no diagnóstico precoce destas metástases, esse estudo teve como meta avaliar o marcador tumoral CA 15.3 no soro de cadelas saudáveis e investigar a viabilidade da quimioluminescência e do kit de reagentes desenvolvido para a espécie humana como ferramenta neste processo. Numa primeira etapa avaliou-se o soro de 100 cadelas saudáveis, de raças e idades variadas. Numa segunda etapa o soro de 10 cadelas saudáveis foi submetido ao processo de concentração de proteínas e posteriormente avaliado. Nas amostras não concentradas os níveis do marcador ficaram abaixo do limiar de detecção do kit. Nas amostras concentradas, o valor médio e respectivo desvio padrão observados foram 0,4140 ± 0,25 U/mL nas amostras com o dobro da concentração inicial e 0,5170 ± 0,25 U/mL nas amostras quatro vezes mais concentradas. Com base nos resultados obtidos neste estudo concluiu-se que o método empregado, ensaio imunoluminométrico por quimioluminescência e o kit de reagentes desenvolvido para a detecção do CA 15.3 na espécie humana mostram-se viáveis para utilização na espécie canina, necessitando entretanto de adequação da técnica / Given the high incidence of mammary tumors and metastases in female dogs and trying to contribute with the veterinary oncology in standardization of a simple, effective and affordable technique in the early diagnosis of these metastases, this study was aimed to evaluate the tumor marker CA 15.3 in serum of healthy dogs and to investigate the feasibility and the chemiluminescence reagent kit designed for the human species as a tool in this process. In a first step we evaluated the serum of 100 healthy female dogs of different breeds and ages. In a second step, the serum of 10 healthy female dogs was subjected to the process of proteins concentration and subsequently evaluated. In samples not concentrated, the levels were below the detection of the kit. In concentrated samples, the average value and its standard deviation observed were 0.4140 ± 0.25 U/mL in the samples with at double the initial concentration, and 0.5170 ± 0.25 U/mL in samples four times more concentrated. Based on the results of this study it is concluded that the method employed, chemiluminescent immunoluminometric assay, and the reagents kit designed for detection of the CA 15.3 in humans appear to be viable for use in dogs, however requiring adjustment of the technique

Orientador: Vânia Nieto Brito de Souza / Coorientador: Ana Carla Pereira Latini / Banca: Ângela Maria Vasconcelos de Campos Soares / Banca: Maria Renata Sales Nogueira / Resumo: A hanseníase, causada pelo Mycobacterium leprae, apresenta diferentes quadros clínicos que refletem o perfil de resposta imunológica do hospedeiro. As células dendríticas (DCs) possuem um papel crucial na imunidade por induzirem o desenvolvimento da resposta imune adaptativa, porém a interação do M. leprae com estas células ainda é pouco entendida. Neste estudo buscamos contribuir para o entendimento da geração da resposta imune específica na hanseníase tendo como foco o papel das DCs frente ao M. leprae. DCs foram diferenciadas in vitro a partir de monócitos de pacientes tuberculóides e virchowianos, estimuladas com antígeno sonicado do M. leprae e analisadas quanto à expressão de marcadores de diferenciação e maturação. A expressão de genes de citocinas e receptores foi avaliada por qPCR. Paralelamente, monócitos de indivíduos saudáveis foram pré-incubados com o antígeno sonicado do bacilo e submetidos à diferenciação em DCs e à avaliação dos marcadores de superfície. A diferenciação de monócitos em DCs foi similar entre pacientes e controles saudáveis. A estimulação com o antígeno sonicado do M. leprae levou ao aumento na expressão de CD40, CD80, CD86 e HLA-DR tanto nos pacientes hansenianos como em indivíduos saudáveis. Entretato, este estímulo parece ser insuficiente para a completa ativação das DCs uma vez que não resultou em aumento significativo nos níveis de CD83. A análise da expressão gênica também demonstrou estimulação parcial das DCs pelo M. leprae. A pré-incubação de monócitos com o antígeno sonicado do bacilo comprometeu o processo de diferenciação em DCs e a maturação destas. Em conjunto, nossos resultados sugerem que o antígeno sonicado do M. leprae prejudicou a diferenciação de monócitos em DCs e desencadeou uma ativação incompleta das DCs tanto em pacientes quanto em controles saudáveis o que pode contribuir para os mecanismos de escape do bacilo / Abstract: Leprosy is caused by Mycobacterium leprae and characterized by distinct clinical manifestations that reflect the immune response of the host. Dendritic cells (DCs) play a crucial role in immunity inducing the development of adaptive immune response, however the interaction of DCs with M. leprae is poorly understood. This study aims to contribute to the understanding of the generation of specific immune response in leprosy patients focusing on the role of DCs against the M. leprae. DCs were differentiated in vitro from monocytes of lepromatous and tuberculoid patients, stimulated with sonicated antigen of M. leprae and analyzed for the expression of differentiation and maturation markers. The expression of mRNA to cytokines and receptors was assessed by qPCR. In parallel, monocytes from healthy controls were preincubated with the sonicated antigen of M. leprae, differentiated into DCs and evaluated in respect to the expression of surface markers. Differentiation of monocytes into DCs was similar between patients and healthy controls. After stimulation with sonicated antigen of M. leprae DCs from leprosy patients and healthy controls showed increased expression of CD40, CD80, CD86 and HLA-DR but this stimulation seems to be insufficient for complete activation of DCs since it was not observed an increase in the level of CD83. The analysis of gene expression also showed partial stimulation of DCs by M. leprae. The pre-incubation of monocytes with sonicated antigen of M. leprae resulted in impairment in the differentiation into DCs and maturation. Altogether our results suggest that the sonicated antigen of M. leprae impaired differentiation of monocytes into DCs and triggered an incomplete activation of DCs both in patients and healthy controls that may contribute among the mechanisms of escape used by M. leprae / Mestre

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Maria Angélica Dias / Banca: Marcia Ferreira da Rosa Sobreira / Resumo: Tendo em vista a alta incidência das neoplasias mamárias e metástases em cadelas e objetivando contribuir com a oncologia veterinária na padronização de um teste simples, eficaz e acessível no diagnóstico precoce destas metástases, esse estudo teve como meta avaliar o marcador tumoral CA 15.3 no soro de cadelas saudáveis e investigar a viabilidade da quimioluminescência e do kit de reagentes desenvolvido para a espécie humana como ferramenta neste processo. Numa primeira etapa avaliou-se o soro de 100 cadelas saudáveis, de raças e idades variadas. Numa segunda etapa o soro de 10 cadelas saudáveis foi submetido ao processo de concentração de proteínas e posteriormente avaliado. Nas amostras não concentradas os níveis do marcador ficaram abaixo do limiar de detecção do kit. Nas amostras concentradas, o valor médio e respectivo desvio padrão observados foram 0,4140 ± 0,25 U/mL nas amostras com o dobro da concentração inicial e 0,5170 ± 0,25 U/mL nas amostras quatro vezes mais concentradas. Com base nos resultados obtidos neste estudo concluiu-se que o método empregado, ensaio imunoluminométrico por quimioluminescência e o kit de reagentes desenvolvido para a detecção do CA 15.3 na espécie humana mostram-se viáveis para utilização na espécie canina, necessitando entretanto de adequação da técnica / Abstract: Given the high incidence of mammary tumors and metastases in female dogs and trying to contribute with the veterinary oncology in standardization of a simple, effective and affordable technique in the early diagnosis of these metastases, this study was aimed to evaluate the tumor marker CA 15.3 in serum of healthy dogs and to investigate the feasibility and the chemiluminescence reagent kit designed for the human species as a tool in this process. In a first step we evaluated the serum of 100 healthy female dogs of different breeds and ages. In a second step, the serum of 10 healthy female dogs was subjected to the process of proteins concentration and subsequently evaluated. In samples not concentrated, the levels were below the detection of the kit. In concentrated samples, the average value and its standard deviation observed were 0.4140 ± 0.25 U/mL in the samples with at double the initial concentration, and 0.5170 ± 0.25 U/mL in samples four times more concentrated. Based on the results of this study it is concluded that the method employed, chemiluminescent immunoluminometric assay, and the reagents kit designed for detection of the CA 15.3 in humans appear to be viable for use in dogs, however requiring adjustment of the technique / Mestre

Os antígenos plaquetários humanos são estruturas imunogênicas resultantes de alterações pontuais (SNP) que levam a substituição de um aminoácido a nível proteico. O objetivo deste estudo foi determinar a frequência alélica e genotípica do sistema HPA-1 a -5 e -15 em doadores de plaquetas do Estado do RS e comparar as frequências alélicas encontradas com as observadas em outras populações. A genotipagem HPA foi realizada através do método de PCR-SSP. Um total de 201 doadores de plaquetas foram incluídos no estudo sendo 167 caucasoides e 34 não caucasoides. O alelo “a” foi o mais frequente nos sistemas HPA-1 a -5 em ambos grupos. O genótipo HPA-15AB foi predominante sobre os genótipos homozigotos para este sistema. O teste exato de Fisher revelou diferença estatisticamente significativa para o sistema HPA-5. Houve maior prevalência do alelo HPA-5B no grupo não caucasoide. Para o grupo caucasoide, o método de neighbor-joining e a PCA revelaram proximidade genética entre este grupo e as populações europeias. De um modo geral, concluímos que as frequências alélicas para os sistemas HPA-1 a -5 e -15 encontradas em nosso grupo caucasoide são similares às descritas em populações europeias. Estes dados corroboram a formação étnica da população do RS. A maior frequência do alelo HPA-5b encontrada no grupo não caucasoide de nosso estudo indica a possibilidade de alosensibilização para pacientes que recebem transfusões de plaquetas não compatibilizadas geneticamente. / Human platelet antigens are immunogenic structures that result from single nucleotide polymorphisms (SNPs) leading to single amino acid substitutions. The present study sought to determine the allele and genotype frequencies of HPA-1 through 5 and HPA-15 in platelet donors from the state of Rio Grande do Sul, Brazil, and compare their allele frequencies to those observed in other populations. HPA genotyping was performed via the single specific primer-polymerase chain reaction (PCR-SSP) method. The study sample comprised 201 platelet donors (167 Caucasians and 34 non-Caucasians). Allele “a” was that most commonly found for HPA-1 through 5 in both groups. The HPA-15AB genotype predominated over homozygous genotypes of this system. Fisher’s exact test revealed statistically significant differences for the HPA-5 system, with a greater prevalence of the HPA- 5B allele in non-Caucasians. The neighbor-joining method and principal components analysis (PCA) revealed genetic proximity between the Caucasian group and European populations. We conclude that the allele frequencies of HPA-1 through 5 and HPA-15 found in our Caucasian sample are similar to those reported for European populations. These findings corroborate the ethnic makeup of the population of Rio Grande do Sul. The higher frequency of the HPA-5b allele found in the non-Caucasian group of our sample suggests the possibility of allosensitization in patients who receive platelet transfusions from genetically incompatible donors.

Os antígenos plaquetários humanos são estruturas imunogênicas resultantes de alterações pontuais (SNP) que levam a substituição de um aminoácido a nível proteico. O objetivo deste estudo foi determinar a frequência alélica e genotípica do sistema HPA-1 a -5 e -15 em doadores de plaquetas do Estado do RS e comparar as frequências alélicas encontradas com as observadas em outras populações. A genotipagem HPA foi realizada através do método de PCR-SSP. Um total de 201 doadores de plaquetas foram incluídos no estudo sendo 167 caucasoides e 34 não caucasoides. O alelo “a” foi o mais frequente nos sistemas HPA-1 a -5 em ambos grupos. O genótipo HPA-15AB foi predominante sobre os genótipos homozigotos para este sistema. O teste exato de Fisher revelou diferença estatisticamente significativa para o sistema HPA-5. Houve maior prevalência do alelo HPA-5B no grupo não caucasoide. Para o grupo caucasoide, o método de neighbor-joining e a PCA revelaram proximidade genética entre este grupo e as populações europeias. De um modo geral, concluímos que as frequências alélicas para os sistemas HPA-1 a -5 e -15 encontradas em nosso grupo caucasoide são similares às descritas em populações europeias. Estes dados corroboram a formação étnica da população do RS. A maior frequência do alelo HPA-5b encontrada no grupo não caucasoide de nosso estudo indica a possibilidade de alosensibilização para pacientes que recebem transfusões de plaquetas não compatibilizadas geneticamente. / Human platelet antigens are immunogenic structures that result from single nucleotide polymorphisms (SNPs) leading to single amino acid substitutions. The present study sought to determine the allele and genotype frequencies of HPA-1 through 5 and HPA-15 in platelet donors from the state of Rio Grande do Sul, Brazil, and compare their allele frequencies to those observed in other populations. HPA genotyping was performed via the single specific primer-polymerase chain reaction (PCR-SSP) method. The study sample comprised 201 platelet donors (167 Caucasians and 34 non-Caucasians). Allele “a” was that most commonly found for HPA-1 through 5 in both groups. The HPA-15AB genotype predominated over homozygous genotypes of this system. Fisher’s exact test revealed statistically significant differences for the HPA-5 system, with a greater prevalence of the HPA- 5B allele in non-Caucasians. The neighbor-joining method and principal components analysis (PCA) revealed genetic proximity between the Caucasian group and European populations. We conclude that the allele frequencies of HPA-1 through 5 and HPA-15 found in our Caucasian sample are similar to those reported for European populations. These findings corroborate the ethnic makeup of the population of Rio Grande do Sul. The higher frequency of the HPA-5b allele found in the non-Caucasian group of our sample suggests the possibility of allosensitization in patients who receive platelet transfusions from genetically incompatible donors.

Orientador: Manoel Barros Bértolo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T11:59:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nishimura_WesterEidi_M.pdf: 1381412 bytes, checksum: a01c05ab2c7b9409c11bde6b5d507e4f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a freqüência e a associação clínica do HLA classe I e II em pacientes brasileiros com vasculite reumatóide (VR). Nós avaliamos 57 pacientes com artrite reumatóide (AR) estabelecida pelos critérios do Colégio Americano de Reumatologia (ACR) - 1987. Dezessete apresentavam VR de acordo com os critérios de Scott e Bacon - 1984. Foram avaliados nestes pacientes dados demográficos, fator reumatóide (FR), anticorpo anti-peptídio citrulinado cíclico (anti-CCP), tempo de diagnóstico da AR e a atividade da doença pelo escore de atividade da doença (DAS 28). Os alelos HLA foram tipados usando a reação em cadeia da polimerase hibridizado com seqüências específicas de "primers" de baixa resolução. Quanto à atividade da doença nos pacientes sem VR observou-se freqüência aumentada do HLA-B*15 (p=0.033) e HLA-DRB1*01 (p=0.014) com média de DAS 28 >3.2 _ 5.1 e o HLA-Cw*16 (p=0.027) e HLA-B*07 (p=0.027) com média de DAS 28>5.1. Não houve significância estatística de qualquer classe do HLA com o DAS 28 nos pacientes com VR. A comparação entre os 2 grupos mostrou diferença estatística (p=0.001) para o DAS 28 com rank médio = 39.94 para os pacientes com VR. O HLADQB1* 05 (p=0.035) esteve presente em 5 pacientes com VR com média de tempo de diagnóstico de AR de 17 anos e ausente em 12 pacientes com VR com média de tempo de diagnóstico AR de 11.45 anos. Os pacientes com VR tiveram freqüência aumentada do HLA-B*14 (p=0.006) e HLA-Cw*08 (p=0.006). Uma freqüência aumentada do HLA-DRB5*01 (p=0.048) foi encontrada em pacientes sem VR. Nossos resultados mostram na amostra estudada que a VR está associada ao sexo feminino, raça branca, FR e anti-CCP positivos. O HLA-B*15 e HLA-DRB1*01 podem estar envolvidos na atividade moderada da AR sem VR e o HLA-Cw*16 e HLA-B*07 podem estar envolvidos na atividade intensa da AR sem VR. Não houve diferença estatística das classes do HLA com o DAS 28 para VR, porém a doença foi mais ativa em pacientes com VR quando comparados com pacientes sem VR. O HLA-DQB1*05 pode estar envolvido nos casos tardios de AR para a manifestação da VR. O HLA-B*14 e HLACw* 08 podem estar envolvidos na suscetibilidade para VR. O HLA-DRB5*01 pode conferir proteção contra esta manifestação extra-articular da AR / Abstract: Our purpose was to evaluate the frequency and clinical association of HLA class I and class II in Brazilian patients with rheumatoid vasculitis (RV). We evaluated 57 patients with rheumatoid arthritis (RA) (American College of Rheumatology -ACR, 1987 criteria). Seventeen had RV according to Scott and Bacon's criteria - 1984. Demographic data, time of RA diagnosis, disease activity by the Disease Activity Score (DAS 28), rheumatoid factor (RF) and cyclic citrullinated peptide (anti-CCP) were analyzed. HLA alleles were typed using polymerase chain reaction-amplified DNA hybridized with low-resolution sequence-specific primers. HLA-B*15 (p=0.033) and HLA-DRB1*01 (p=0.014) were associated with moderate activity of RA without RV, and HLA-B*07 (p=0.027) and HLA-Cw*16 (p=0.027) with intense activity of RA without RV; no statistical significance of HLA class and DAS 28 was observed in RV. HLA-DQB1*05 (p=0.035) was related to RV in patients with late RA. The comparison between the groups showed an increased frequency of HLA-B*14 (p = 0.006) and HLA-Cw*08 (p = 0.006) in patients with RV, and an increased frequency of HLADRB5* 01 (p = 0.048) in patients without RV. In conclusion, the HLA-B*14 and HLACw* 08 may be involved in susceptibility to RV and HLA-DRB5*01 may confer protection against this extra articular manifestation of RA / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica