Made available in DSpace on 2016-11-30T14:53:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 109338_Romilton.pdf: 1062438 bytes, checksum: aa9a3cca6f461ba61052bb2e42dda089 (MD5) license.txt: 214 bytes, checksum: a5b8d016460874115603ed481bad9c47 (MD5) Previous issue date: 2013 / Entre as formas de tratar a osteoartrite (AO) está o uso de anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs), sempre com a recomendação para ser usado na menor dose efetiva e no menor tempo possível. Isso por que os efeitos adversos nos sistemas gastrointestinal, cardiocirculatório e renal são bem conhecidos. O uso de sistemas diferenciados de liberação de fármacos como os dispositivos implantáveis tem propiciado alternativas para reduzir a concentração plasmática circulante e direcionar o fármaco para o local de ação, podendo reduzir assim muitos dos efeitos colaterais dos fármacos. O objetivo deste estudo foi produzir, caracterizar e avaliar a atividade anti-inflamatória de dois sistemas poliméricos implantáveis contendo diclofenaco de sódio em modelo de inflamação aguda induzida por carragenina em joelho de ratos. Foram produzidos dois dispositivos implantáveis contendo diclofenaco de sódio, o primeiro incorporado em misturas de EUDRAGIT RS 100 e PEG400, chamado de EUDPEG; e outro contendo EUDRAGIT RS 100 e PCL-T, chamado de EUDPCL-T. Os materiais foram caracterizados por microscopia ótica, análises termomecânicas e foi determinada a velocidade de liberação em meio de tampão fosfato pH 7.4. Após caracterização os dispositivos EUDPCL-T (3,0 mg de diclofenaco de sódio) e EUDPEG (3,6 mg de diclofenaco de sódio) foram implantados justa articular na região posterior dos joelhos e após 4 dias foi induzido edema de joelho pela injeção intra-articular de carragenina. Nos tempos 6 horas e no 7º dia após a indução da artrite, os animais foram anestesiados e o edema medido através da variação da circunferência do joelho, seguido de sacrifício para análise de mediadores inflamatórios, mieloperoxidade (MPO) e óxido nítrico presentes na articulação. Também foram avaliadas as lesões gástricas. Os resultados foram comparados com administração oral de 30 mg/Kg de diclofenaco de sódio. As microscopias demonstraram que o filme EUDPEG é totalmente transparente devido à solubilidade do diclofenaco na matriz polimérica e apresenta um comportamento mecânico plástico com menor capacidade de deformação. Para o filme EUDPCL-T foi observado um filme totalmente opaco associado à cristalização do diclofenaco de sódio na matriz polimérica e variação de deformação em função da tensão característica de material elastomérico. Os estudos de liberação de diclofenaco de sódio in vitro a partir dos filmes utilizados mostraram duas fases distintas de liberação, uma fase de liberação acelerada, que durou em torno de 24 horas, onde EUDPEG apresentou maior velocidade de liberação, e uma fase lenta onde ocorreu a inversão das velocidades de liberação, com filme EUDPCL-T, apresentando um aumento da quantidade liberada por tempo quando comparado com o EUDPEG. O dispositivo EUDPCL-T promoveu redução estatisticamente significativa (p<0,05) do edema e da concentração de MPO quando comparado com o grupo controle 6 horas e 7 dias após a indução do edema, enquanto o grupo que recebeu tratamento por via oral mostrou diferença significativa somente 7 dias após a indução da artrite. O dispositivo EUDPEG reduziu o edema significativamente (p<0,05) somente 7 dias após a indução da artrite, mas não foi eficaz para reduzir a concentração de MPO. No doseamento de nitratos/nitritos 6 h após a indução da artrite, somente os grupos tratados com dispositivos implantáveis EUDPEG e EUDPCL-T mostraram diferença estatisticamente significativa quando comparados com o grupo controle. Sete dias após a indução da artrite nenhum grupo que recebeu tratamento mostrou diferença estatística nos níveis de nitratos/nitrito com o grupo controle. Os resultados demonstram que a colocação do dispositivo EUDPCL-T para entrega do diclofenaco de sódio justa articular, promoveu a mesma atividade na diminuição do edema e na diminuição dos marcadores inflamatórios quando comparado com a administração por via oral, porém com doses inferiores. / Among the options to treat osteoarthritis there is the use of non-steroidal anti-inflammatory, always with the recommendation of using the least effective dose in the shortest time possible. It is suggested because the adverse effects in the gastrointestinal, cardio circulatory and renal systems are well known. The use of different systems of drug releases like implantable devices has propitiated alternatives to reduce the circulatory plasma concentration, directing the drug to the action site than reducing many of the collateral effects. The objective of this study was to characterize and evaluate the anti-inflammatory activity of two polimeric implantable devices containing diclofenac sodium in a model of induced osteoarthritis by carragenina in the knees of Wistar rats. It was produced two implantable devices containing diclofenac sodium, the first one obtained by blending of EUDAGRIT RS 100 and PEG400, called EUDPEG, and the other one containing EUDRAGRIT RS 100 and PCL-T, called EUDPCL-T. The materials were characterized by optic microscope and thermodynamic analysis (DMA) and the release mechanism determined within a phosphate buffer pH 7.4. After characterizing, the devices was implanted EUDPCL-T (3,0 mg of Sodium diclofenaco) and EUDPEG (3,6 mg of sodium diclofenaco) in the articulation in the posterior knee region and after 4 days it was induced the knee edema by the injection of carragenina. In the 6th hour and 7 days after the inducing the animals received anesthesia and the edema was measured by the variation of the knee circumference, followed by sacrifice for the analysis of the inflammatory mediators, MPO and nitric oxide within the articulation, it was also evaluated the number of gastric lesions. The optic microscopy showed that the EUDPEG film is totally transparent due to the solubility of diclofenac in the polymeric matrix and shows a mechanical plastic behavior with less capacity of deformation. For the EUDPCL-T film it was observed a totally opaque film associated with diclofenac sodium crystallization in the polymeric matrix and shows deformation variation due to tension characteristic of elastomeric material. The in vitro studies of diclofenac sodium releases by the films showed two distinct phases of release for both polymeric films, one fast release phase, which lasted 24 hours, where EUDPEG showed faster release , and one slow phase where the inversion of release speed was observed. EUDPCL-T showed a tendency of increase in quantity released by time when compared to EUDPEG. The EUDPCL-T device promoted statistically significant reduction (p<0,05) of the edema and the MPO concentration when compared to the group that didn¿t received treatment, 6 hours 7 days after the edema induction while the group that received oral treatment, showed significant difference only seven days after the osteoarthritis induction. The EUDPEG device also reduced the edema only after seven days of osteoarthritis induction but wasn¿t able to reduce the MPO concentration. When the measures of the knee circumference were taken in the 7th day after osteoarthritis induction, all the treated groups showed edema reduction when compared to the group that only received carragenina. The MPO activity was lesser in the EUDPCL-T group with a statistically significant difference when compared to the CRGN group in the sixth hour seven days later of osteoarthritis induction, while the DICL group showed difference only after seven days of osteoarthritis induction. In the nitrates/nitrites research six hours after osteoarthritis induction only the EUDPEG and EUDPCLT groups showed significant statistical difference when compared to the CRGN group, seven days after osteoarthritis induction none group showed statistical difference with the CRGN group. The results showed that the device implantation delivers the diclofenac sodium at the joint, promoted the same activity in reducing edema and inflamatory markers when compared to the oral administration, but with much inferior doses.

Este trabalho teve como objetivo principal avaliar a capacidade adsorvente do bagaço da uva Isabel (Vitis labrusca x Vitis vinifera) na remoção do fármaco diclofenaco de sódio (DCF) presente em meio aquoso. O material foi inicialmente caracterizado por meio de diversas técnicas, incluindo a espectroscopia de ressonância magnética nuclear de carbono-13 no estado sólido (RMN 13C), a análise elementar (CHNS), a espectroscopia de infravermelho com Transformada de Fourier (IV), a análise termogravimétrica (TG), e a microscopia eletrônica de varredura (MEV). A área superficial específica, assim como o diâmetro médio das partículas e o pH no ponto de carga zero (pHPCZ), foram igualmente determinados. Posteriormente, a capacidade de adsorção do bagaço de uva foi investigada, sob agitação mecânica, utilizando-se a técnica de espectroscopia de absorção molecular na região do ultravioleta (UV). Os parâmetros como massa de adsorvente e velocidade de agitação foram previamente otimizados, a fim de se conseguir acompanhar esse processo. O efeito do pH, do tempo de contato, da concentração inicial de DCF, e da temperatura também foram avaliados. Verificou-se que o processo de adsorção, para concentrações de DCF maiores do que 10 mg L-1, ocorreu em duas etapas. O modelo cinético de pseudossegunda ordem foi o que melhor descreveu a velocidade do processo na primeira etapa. Além disso, o percentual de remoção (~20%) foi semelhante para todas as concentrações estudadas. Para a segunda etapa, o processo de difusão intrapartícula foi o que melhor se ajustou aos dados experimentais, sendo que o percentual de remoção aumentou com o aumento da concentração inicial do fármaco (de 57 a 74%). No que se refere ao equilíbrio do processo, a isoterma de Freundlich foi a que melhor se ajustou aos resultados experimentais a 22°C, sendo que a adsorção do DCF pelo bagaço de uva apresentou um valor de KF e de n iguais a 1,72 L g-1 e 1,18, respectivamente. Do ponto de vista termodinâmico, o processo foi exotérmico (ΔH°ads = – 36,86 kJ mol-1), não-espontâneo (ΔG°ads > 2,99 kJ mol-1), ocorrendo com uma diminuição na aleatoriedade do sistema (ΔS°ads = – 135,85 J mol-1 K-1). Isso aconteceu possivelmente pelo fato de ambas as espécies (bagaço de uva e DCF) estarem carregadas negativamente na condição de pH avaliada (pH em torno de 5,0). / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-23T11:57:04Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Marjore Antunes.pdf: 2101531 bytes, checksum: c2df0b11d77d0b1644ccf36cd64e1499 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-23T11:57:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Marjore Antunes.pdf: 2101531 bytes, checksum: c2df0b11d77d0b1644ccf36cd64e1499 (MD5) / The aim of the present work was to evaluate the adsorption capacity of the Isabel grape bagasse (Vitis labrusca x Vitis vinifera) in the removal of the pharmaceutical diclofenac sodium (DCF) present in aqueous media. The biomass was initially characterized by several techniques including solid-state 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy (13C NMR), elemental analysis (CHNS), Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR), thermogravimetric analysis (TGA), and scanning electron microscopy (SEM). The specific surface area as well as the average diameter of the particles and the pH at the point of zero charge (pHPZC) were also determined. Subsequently, the adsorption capacity of the grape bagasse was investigated, under mechanical stirring, by molecular absorption spectroscopy in the ultraviolet (UV) region. The parameters such as adsorbent mass and stirring speed were previously optimized in order to be able to follow this process. The effect of pH, contact time, initial concentration of DCF, and temperature were also evaluated. It was observed that the adsorption process for DCF concentrations greater than 10 mg L-1 occurred in two stages. The pseudo-second-order kinetic model was more significant in the rate-controlling step in the first stage. In addition, the removal percentage (~ 20%) was similar for all concentrations studied. For the second step, on the other hand, the intraparticle diffusion process showed the best fit to the experimental data and the removal percentage increased with increasing initial concentration of the drug (from 57 to 74%). Concerning to the equilibrium process, the Freundlich isotherm showed the best fit to the experimental results at 22°C, and the adsorption of DCF onto grape bagasse presented a value of KF and n equal to 1.72 g L-1 and 1.18, respectively. From the thermodynamic point of view, the process was exothermic (ΔH°ads = – 36.86 kJ mol-1), non-spontaneous (ΔG°ads > 2.99 kJ mol-1), occurring with a decrease in the randomness of the system (ΔS°ads = – 135.85 J mol-1 K-1). This occurred probably because both species (grape bagasse and DCF) were negatively charged at pH condition evaluated (pH around 5.0).

Made available in DSpace on 2014-10-18T02:02:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000462079-Texto+Completo-0.pdf: 3544507 bytes, checksum: 8aa2241950201e3ad9aaa5bc2c51d167 (MD5) Previous issue date: 2014 / Background: The high prevalence of anti-inflammatory and analgesic drug use by the elderly has been widely discussed in the literature because polymedication increases the risk of adverse effects and iatrogenic and drug interactions. Anti-inflammatory and analgesic drugs are primarily used to treat pain in the elderly, who are subject to high rates of arthrosis, arthritis and rheumatism. The prescription of anti-inflammatories and analgesics in the elderly should be individualized because the pharmacokinetics and pharmacodynamics of these drugs are altered in the elderly, which can cause numerous adverse effects. However, many studies have indicated a possible antioxidant action of anti-inflammatory drugs. Some studies have suggested that anti-inflammatory drugs induce the generation of reactive oxygen species, while other studies have demonstrated that they also have antioxidant activity. Aims: We report the findings of a transversal study of the use of anti-inflammatory and analgesic drugs among a random sample of elderly patients at the Family Health Strategy (FHS) in Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil. Methods: This study is part of the “The multidimensional study of the elderly in the Family Health Strategy in Porto Alegre, Brazil (EMI-SUS)” conducted over the period of March 2011 to December 2012. Data collection was performed by community health workers at the subjects’ homes using a general questionnaire and included sociodemographic data, life conditions and habits, chronic diseases and drug use. For this study, the focus was on drugs classified as anti-inflammatory or analgesic drugs according to the Anatomical Therapeutic Chemical classification system recommended by the World Health Organization. Blood was subsequently collected by the project team at the healthcare unit where the elderly patients were registered. The plasma levels of oxidative and inflammatory markers such as insulin, homeostatic model assessment-insulin resistance (HOMA-IR), malondialdehyde (MDA), ferric reducing ability of plasma (FRAP), advanced oxidation protein products (AOPP), interleukin-6 (IL-6) and ultra-sensitivity C-reactive protein (PCR_US) were determined. Anthropometric data were measured, but only body mass index (BMI) was used in this study. Results: Among the 758 elderly patients included in this study, between 60 and 111 years old, with the prevalence of anti-inflammatory and analgesic drug use was 28. 8%. Paracetamol (67. 9%) and ibuprofen (31. 7%) were the most commonly used drugs. Women used antiinflammatory and analgesic drugs (P = 0. 022) more frequently than men. Self-rated health was related to the use of anti-inflammatory and analgesic drugs, i. e., the worse the reported health, the greater the use of these drugs (P < 0. 001). Of the conditions described by the elderly, hepatic disease (P = 0. 004) and arthrosis/arthritis/rheumatism were associated with the use of anti-inflammatory and analgesic drugs. In addition, we observed that the higher the usage of medicines in general, the greater the use of anti-inflammatory and analgesic drugs (P < 0. 001). Gastric problems reported by this elderly cohort may be associated with chronic or occasional use of NSAIDs (P = 0. 042). There was no statistically significant association between the use of NSAIDs and oxidative or inflammatory markers. Conclusion: This study demonstrates the moderate use of anti-inflammatory and analgesic drugs by elderly patients at the FHS in Porto Alegre. Although these medications are important for the management of pain and inflammation, they may interfere with the improvement of the quality of life of the elderly. Thus, anti-inflammatory and analgesic drugs should be prescribed very carefully and individually in the elderly. With regard to inflammatory and oxidative markers, it is important to emphasize that the physiological effects of NSAIDs on markers of inflammation and oxidative metabolism are poorly characterized and controversial. This is the first study to demonstrate a lack of association between NSAID use and plasma levels of oxidative, antioxidant and inflammatory markers or the HOMA-IR value. / Introdução: A alta prevalência de uso de anti-inflamatórios e analgésicos por idosos é amplamente discutida na literatura devido aos riscos de efeitos adversos, iatrogenias e interações medicamentosas, uma vez que a maioria dos idosos é polimedicada. A dor é um dos principais motivos de uso desses medicamentos, principalmente devido ao alto índice de artrose, artrite e reumatismo nessa população. A prescrição de anti-inflamatórios e analgésicos em idosos deve ser individualizada, pois a farmacocinética e a farmacodinâmica desses fármacos sofrem alterações no organismo idoso, podendo causar inúmeros efeitos adversos. Apesar de todos esses indicativos, muitos estudos vêm apontando uma possível ação antioxidante dos anti-inflamatórios. A literatura tem sugerido que os anti-inflamatórios induzem à geração de espécies reativas de oxigênio, contudo outros estudos demonstram que também podem desempenhar uma atividade antioxidante. Objetivo: Estudar o uso de anti-inflamatórios e analgésicos pelos idosos que frequentam a Estratégia Saúde da Família (ESF) de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil.Métodos: Estudo transversal coletado em uma amostra aleatória de idosos da ESF do município de Porto Alegre. Este estudo faz parte do “Estudo epidemiológico e clínico dos idosos atendidos pela Estratégia Saúde da Família do município de Porto Alegre (EMI-SUS)”, realizado durante o período de março de 2011 a dezembro de 2012. A coleta de dados foi realizada pelos Agentes Comunitários de Saúde, em visita domiciliar, por meio de questionário geral contendo dados sociodemográficos, condições de saúde, doenças crônicas e hábitos de vida dos idosos e uso de medicamentos. Para este estudo, foram incluídos os antiinflamatórios e analgésicos conforme o sistema de classificação Anatomical Therapeutic Chemical. Foram coletados dados antropométricos dos idosos e para este estudo foi utilizado o índice de massa corporal (IMC). A coleta de sangue foi realizada posteriormente pela equipe do projeto na unidade de saúde onde os idosos estavam cadastrados. Foram determinados os níveis plasmáticos de marcadores oxidativos e inflamatórios, tais como insulina, HOMA-IR (homeostatic model assessment-insulin resistance), malondialdeído (MDA), habilidade de redução férrica plasmática ou “poder antioxidante” (FRAP), produto avançado da oxidação proteica (AOPP), interleucina-6 (IL-6) e proteína c reativa ultrassensível (PCR-US).Resultados: Foram incluídos 758 idosos, com idade de 50 à 111 anos e a prevalência de uso de anti-inflamatórios e analgésicos foi de 28,8%. O paracetamol (67,9%) e o ibuprofeno (31,7%) foram os medicamentos mais utilizados. O sexo feminino utilizava com maior frequência anti-inflamatórios e analgésicos (P=0,022). Diante das variáveis de saúde, a autopercepção de saúde mostrou estar relacionada com o uso de anti-inflamatórios e analgésicos, sendo que, quanto pior a saúde relatada, maior o uso da terapêutica (P<0,001). Entre as patologias descritas pelos idosos, a doença hepática (P=0,004) e a artrose/artrite/reumatismo (P<0,001) mostraram estar associadas ao uso de anti-inflamatórios e analgésicos. Foi observado que, quanto maior o uso de medicamentos em geral, maior o uso de anti-inflamatórios e analgésicos (P<0,001). Quanto ao uso crônico de anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs), verificou-se associação com as doenças gastrintestinais relatadas pelos idosos (P=0,042). Quanto à associação dos AINEs com os marcadores oxidativos e inflamatórios, nada estatisticamente significativo foi encontrado. Conclusão: Os resultados deste estudo mostram a utilização moderada de anti-inflamatórios e analgésicos pelos idosos da ESF de Porto Alegre. Sabe-se da importância desses medicamentos para o manejo da dor e da inflamação, podendo interferir na melhoria da qualidade de vida do idoso. Porém, a prescrição de anti-inflamatórios e analgésicos deve ser feita com muita cautela e de forma individualizada nos idosos. Quanto aos marcadores inflamatórios e oxidativos, é importante ressaltar que os efeitos fisiológicos dos AINEs nos marcadores do metabolismo oxidativo e inflamatório ainda são escassos e controversos. Entretanto, este é o primeiro estudo que demonstrou a ausência de associação do uso de AINEs com níveis plasmáticos de marcadores inflamatórios e oxidativos, poder antioxidante e HOMA-IR.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000425497-Texto+Completo-0.pdf: 1039069 bytes, checksum: f6309e74e675843d15c679f3c6d18090 (MD5) Previous issue date: 2010 / This study evaluated the antiproliferative and antifibrotic effects of the total juice red pepper “Dedo-de-Moça”, Capsicum baccatum (CB) and fractions of CB seed and fruit extracted with solvents of different polarity: water, methanol/water, butanol and dichloromethane. The study was realized in vitro, in cell culture GRX, a strain of murine hepatic stellate cells, which are at the stage of myofibroblasts, mimicking a model of human liver fibrosis. The pepper juice and its fractions inhibited the proliferation in cell culture line GRX. The effect of CB juice and fractions was compared with indomethacin, used as a positive control of phenotype reversion, known to exert antiproliferative and anti-inflammatory action. To justify if the CB juice and fractions caused inhibition of cell growth GRX through a cellular mechanism or cell death was measured release of Lactate Dehydrogenase enzyme after the treatment. The groups were compared with the control of cell death - Tween 5%, which has significantly higher values of LDH, showing that the antiproliferative effect of the CB juice and fractions was not by cell death. Furthermore, in an attempt to see if there was increased oxidative stress we measured the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). None of the treated groups differed from control. After treatment with CB juice and fractions for 5 days, cell cultures were stained with Oil Red O stain showing the presence of fat in the cell cytoplasm. Both cultures treated with juice, as the cultures treated with CB fractions showed the formation of fat droplets and phenotypic changes more evident that the control and positive control of phenotype reversion, indomethacin (increased 400x). Furthermore, the quantification of TGF-β, a profibrogenic mediator, in the supernatant of cultures treated with juice and fractions of CB was lower when compared to control. These results show the antifibrotic effects of red pepper Capsicum baccatum and demonstrate its important therapeutic potential as an antifibrotic agent. / Neste estudo foram avaliados os efeitos antifibróticos e antiproliferativos do suco total da pimenta vermelha Dedo-de-Moça, Capsicum baccatum (CB) e de frações da semente e do fruto de CB extraídas com os solventes de diferentes polaridades: água, metanol/água, butanol e diclorometano. O estudo foi realizado in vitro, em cultura de células GRX, uma linhagem murina de células hepáticas estreladas, que estão no estágio de miofibroblastos, mimetizando um modelo de fibrose hepática humana. O suco de pimenta e suas frações inibiram a proliferação celular da linhagem GRX. Este efeito foi comparado com a indometacina, utilizado como controle positivo da reversão fenotípica e conhecido por exercer efeito antiproliferativo e anti-inflamatório. Para justificar se o suco total e frações de CB provocaram inibição do crescimento das células GRX através de um mecanismo celular ou por morte celular, foi dosada a liberação da enzima Lactato Desidrogense (LDH) após o tratamento. Os grupos foram comparados com o controle de morte celular total – Tween 5%, que obteve valores significativamente maiores de LDH, demonstrando que o efeito antiproliferativo do suco e frações de CB não foi através de morte celular. Além disso, na tentativa de verificar se havia aumento do estresse oxidativo, foram dosadas as substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Nenhum dos grupos tratados diferiu significativamente do controle. Após tratamento com suco total e frações de CB durante 5 dias, as culturas celulares foram coradas com Oil Red O, corante que evidencia a presença de gordura no citoplasma celular. Tanto as culturas tratadas com o suco total, quanto às culturas tratadas com as frações de CB, apresentaram formação de gotículas de gordura e mudança fenotípica evidente maiores que o controle e que o controle positivo de reversão do fenótipo, a indometacina (aumento de 400x). Além disso, a quantificação do TGF-β, que é um mediador pró-fibrogênico, no sobrenadante das culturas tratadas com suco e frações de CB foi menor do quando comparada ao controle. Esses resultados demonstraram os efeitos antifibróticos da pimenta vermelha Capsicum baccatum e evidenciam seu importante potencial terapêutico como agente antifibrótico.

Os receptores nucleares são uma família de fatores de transcrição que regulam a transcrição gênica em resposta a ligantes e estão envolvidos em vários processos fisiológicos e metabólicos do organismo. O receptor ativado por proliferadores peroxissomais &gamma; (PPAR&gamma;) está envolvido em vários processos fisiológicos incluindo adipogênese, homeostase da glicose, metabolismo de lipídios e inflamação e foi identificado como alvo molecular para o tratamento do diabetes tipo II. A importância desse receptor ficou ainda mais evidente pela descoberta de mutações que prejudicam sua função, causando a Síndrome de Resistência ao Ligante, na qual os pacientes apresentam um fenótipo de lipodistrofia parcial, profundas desordens metabólicas como severa resistência à insulina e início precoce de diabetes mellitus tipo II. O PPAR&gamma; possui um amplo bolsão de ligação que permite que uma variedade de ligantes possa se ligar ao receptor. Essa variedade de ligantes pode induzir interações diferenciadas com correguladores, o que induzirá uma resposta biológica específica. Os agonistas totais, como as tiazolinedionas (TZDs) são eficientes sensibilizadores da insulina utilizados no tratamento do diabetes tipo II, porém seu uso tem sido limitado devido a efeitos adversos e novas abordagens terapêuticas são necessárias. Neste trabalho, o PPAR&gamma; foi caracterizado na presença de ligantes naturais (luteolina, ácidos graxos) e sintéticos (aintiinflamatórios não esteroidais AINEs) e também os mutantes envolvidos na Síndrome de Resistência aos Ligantes do PPAR&gamma; através de ensaios funcionais e cristalografia de proteínas. A luteolina apresentou um comportamento de agonista parcial, com atividades antiinflamatórias e com modo de ligação ao receptor diferente da rosiglitazona, resultando em uma diferenciação na expressão gênica em adipócitos. Os AINEs por sua vez, apresentaram diferentes perfis de ativação e modos de ligação ao receptor, além da capacidade de induzirem a diferenciação de adipócitos. Por fim, foi resolvida a estrutura cristalográfica do mutante V290M envolvido na Síndrome de Resistência ao Ligante, que mostrou que a mutação causa significativas alterações na estrutura do receptor, prejudicando sua função, o que representa um importante passo no entendimento das bases moleculares dessa síndrome. / Nuclear receptors are a family of ligand activated trancription factors that regulate gene transcription in response to ligands and are involved in several aspects of human physiology and metabolism. Peroxisome proliferator activated receptor &gamma; (PPAR&gamma;) is involved in a range of distinct physiological processes including the regulation of adipogenesis, glucose homeostasis, lipid metabolism and inflammatory responses and it has been identified as a molecular target in the treatment of several diseases as diabetes type II. The importance of this receptor became even more evident by the discovery of mutations that impair its function causing Ligand Resistance Syndrome, in which patients have a phenotype of partial lipodystrophy, profound metabolic disorders such as severe insulin resistance and early onset of diabetes mellitus type II. PPAR&gamma; has a large binding pocket that permits that a wide range of ligands can bind to this receptor. This variety of ligands can induce differential interactions with coregulatory factors that will be translated into a specific biological response. PPAR full agonists, like thiazolidinediones (TZDs), are effective insulin sensitizers and antiinflammatories but their use is limited by adverse side effects and new therapeutic approaches are needed. In this study, the PPAR&gamma;, as well as their respective mutants involved in Ligand Resistance Syndrome, were characterized in the presence of natural (luteolin) and synthetic ligands (nonsteroidal anti-inflamatory drugs - NSAIDs) by functional assays and protein crystallography. Luteolin showed a partial agonist behaviour, with anti-inflammatory activity and a different binding mode in comparion with rosiglitazone, resulting in a different pattern of gene expression in adipocytes. NSAIDs showed different profiles of activation and binding modes, and they can promote adipocyte differentiation. Finally, we solved the crystal structure of the mutant V290M involved in the Ligand Resistance Syndrome, which showed that the mutation causes significant changes in the structure of the receptor, impairing its function. This structure represents an important step in understanding the molecular basis of this syndrome.

Gliomas são os mais comuns e devastadores tumores primários do sistema nervoso central. Nucleotídeos extracelulares estão envolvidos em diversos processos patofisiológicos no sistema nervoso central. Os níveis dos nucleotídeos da adenina podem ser controlados por hidrólise através da ação de vários membros da família das ectonucleotidases. O AMP formado pelas NTPDases é hidrolizado até adenosina por ação da ecto-5’-nucleotidase (ecto-5’-NT). A enzima ciclooxigenase (COX) está surgindo como um novo alvo na prevenção e no tratamento do câncer, sendo que substanciais evidências epidemiológicas, experimentais e clínicas sugerem que os antiinflamatórios não-esteróides (AINEs) possuem propriedades anticâncer. Vários estudos têm demonstrado que certos AINEs causam efeitos antiproliferativos independentes da atividade da COX. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito dos AINEs em linhagens celulares de gliomas e os possíveis mecanismos envolvidos neste efeito e avaliar a influência da indometacina na cascata de enzimas que catalisam a interconversão dos nucleotídeos. Indometacina, acetaminofeno, sulfeto de sulindaco e NS-398 induziram uma inibição da proliferação celular de modo tempo e dose dependente. Indometacina causou uma redução significativa na viabilidade celular. Nenhum dos AINEs testados induziu ativação de caspase 3/7. O tratamento com indometacina diminuiu a percentagem de células na fase S, com um aumento relativo nas fases G0/G1 e/ou G2/M, indicando uma parada na progressão do ciclo celular. A exposição de células de glioma à indometacina causou um aumento nas hidrólises de AMP e ATP. Um aumento significativo nos níveis de mRNA da ecto-5’-NT/CD73 foi observado após tratamento com indometacina Estes resultados suportam a hipótese que o aumento na atividade da ecto-5’-NT está relacionado com a superexpressão do mRNA com possíveis alterações no catabolismo das purinas extracelulares. Os dados sugerem ainda que o receptor A3 e a enzima ecto-5’-NT estão envolvidos no efeito antiproliferativo da indometacina nas linhagens celulares de gliomas. Considerando que a via das ectonucleotidases pode representar um importante mecanismo associado com a transformação maligna dos gliomas, os AINEs podem ser clinicamente importantes na intervenção farmacológica deste tipo de tumor.

Resumo não disponível

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-08-14T17:47:29Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6107737 bytes, checksum: b1b81b8a89a0a3b97931c0d63a563137 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-14T17:47:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6107737 bytes, checksum: b1b81b8a89a0a3b97931c0d63a563137 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do armazenamento comercial sobre a composição nutricional e fitoquímica de feijões comuns da variedade carioca (Phaseolus vulgaris L.) (Artigo 1) e determinar o efeito do armazenamento sobre o potencial anti- inflamatório (Artigo 2) e anti-aterosclerótico (Artigo 3) de seus hidrolisados proteicos em macrófagos humanos THP-1. Foram utilizados dois genótipos de feijão comum da variedade carioca, contrastantes para endurecimento e escurecimento ao longo do armazenamento. Os feijões BRSMG Madrepérola (MP) (mais estável ao armazenamento) e BRS Pontal (PO) foram estocados em temperatura ambiente, (22 ± 3 0 C; < 65% de umidade relativa), acondicionados em embalagens lacradas de polipropileno, por até 180 dias, e coccionados nos tempos zero, e após três e seis meses de estocagem, quando foram realizadas as analises (Artigo 1 e 2: 0, 3 e 6 meses; Artigo 3: 0 e 6 meses). Os grãos foram analisados quanto à composição centesimal, fibra alimentar total e frações, conteúdo de minerais, fitato, compostos fenólicos (Artigo 1) e hidrolisados proteicos (Artigos 2 e 3). O potencial anti- inflamatório e anti-aterosclerótico dos hidrolisados proteicos foi avaliado in vitro, utilizando células de macrófagos THP-1, com inflamação induzida por lipopolissacarídeo (LPS) (Artigo 2) ou lipoproteína de baixa densidade oxidada (LDL-ox) (Artigo 3). |O armazenamento comercial por até 180 dias, em temperatura ambiente, não afetou a qualidade nutricional e fitoquimica dos grãos, visto que somente foi observada redução do conteúdo de lipídio total (p = 0.007). Os hidrolisados dos feijões carioca reduziram os níveis de marcadores inflamatórios mesmo quando utilizados em baixas concentrações, de forma independente do tempo de armazenamento, embora tenham sido observadas diferenças entre os cultivares (0.1 mg/mL: redução de TNF-alfa pelos hidrolisados PO 0, 3 e 6, e por MP 6; redução de IL-1 por MP 0 e PGE-2 por MP 0 e 6). Com relação ao potencial anti-aterosclerótico, observou- se que os hidrolisados dos feijões armazenados reduziram a expressão do receptor de LDL- ox (LOX-1), de metaloproteína-9 (MMP-9), de molécula de adesão intracelular-1 (ICAM-1), e a expressão de 10 citocinas relacionadas ao processo aterosclerótico. Conclui-se, portanto, que as condições de armazenamento utilizadas no presente estudo foram adequadas para preservação da qualidade nutricional e fitoquímica dos feijões. Além disso, a inibição de marcadores inflamatórios e ateroscleróticos indica que o armazenamento dos feijões por seis meses, independentemente de suas características de resistência ao armazenamento, não alterou as propriedades fisicoquímicas e biológicas de seus hidrolisados proteicos. / The aim of this study was to evaluate the effect comercial time of storage (six monhts) on nutritional and phytochemical composition of common bean, carioca cultivar (Phaseolus vulgaris L.) (Manuscript 1) and to determinate thestorage effect on anti-inflammatory (Manuscript 2) and anti-atherosclerotic effect (Manuscript 3) of their protein hydrolysates on human macrophages. Two common bean carioca genotypes were used. The common beans BRSMG Madreperola (MP) (more stable to storage) and BRS Pontal were stored under room temperature (22 ± 3 0 C; < 65% relative umidity), in propilen package, up to 180 days, and cooked at zero, three and six months of storage, when analysis of moisture contente, dietary fiber, minerals, phytate, phenolic compounds (Manuscript 1) and protein hydrolysates (Manuscripts 2 e 3) were performed. Anti-inflammatory and anti-atherosclerotic potential of protein hydrolysates was evaluated in vitro, using THP-1 human macrophages, wherein inflammation was induced by lipopolysacarides (Manuscript 2) or oxydized low density lipoprotein (ox-LDL) (Manuscript 3). According to results, we can affirm that comercial storage up to 180 days, at room temperature, did not affected nutritional and phytochemical quality of the carioca beans, since it was observed only slight reduction on total lipid contente (p = 0.007). Carioca protein hydrolysates reduced the levels of inflammatory markers even under lowest concentrations, independently of storage time, although few diferences were observed beteween cultivars (0.1 mg/mL: TNF-alfa reductions by hydrolysates from PO 0, 3 and 6, and by MP 6; IL-1 reductions by MP 0 and PGE-2 by MP 0 and 6). Regarding to anti-atherosclerotic potential it was observed that hydrolysates from stored beans decreased teh expressio of ox-LDL receptor 1 (LOX-1), metaloprotein-9 (MMP-9), intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), and reduced the expression of 10 citokines related to atherosclerotic process. In conclusion, the storage conditions used in the presente study was suitable to preserve nutritional and phytochemical quality of carioca beans. In adition, the inhibition of inflammatory and atherosclerotic markers indicate that the storage by six months did not change physicochemical and biological properties of carioca bean hydrolysates, , independently fo their characteristics to resit to storage. / Título do resumo difere da ficha catalográfica

Este trabalho teve como objetivo principal avaliar a capacidade adsorvente do bagaço da uva Isabel (Vitis labrusca x Vitis vinifera) na remoção do fármaco diclofenaco de sódio (DCF) presente em meio aquoso. O material foi inicialmente caracterizado por meio de diversas técnicas, incluindo a espectroscopia de ressonância magnética nuclear de carbono-13 no estado sólido (RMN 13C), a análise elementar (CHNS), a espectroscopia de infravermelho com Transformada de Fourier (IV), a análise termogravimétrica (TG), e a microscopia eletrônica de varredura (MEV). A área superficial específica, assim como o diâmetro médio das partículas e o pH no ponto de carga zero (pHPCZ), foram igualmente determinados. Posteriormente, a capacidade de adsorção do bagaço de uva foi investigada, sob agitação mecânica, utilizando-se a técnica de espectroscopia de absorção molecular na região do ultravioleta (UV). Os parâmetros como massa de adsorvente e velocidade de agitação foram previamente otimizados, a fim de se conseguir acompanhar esse processo. O efeito do pH, do tempo de contato, da concentração inicial de DCF, e da temperatura também foram avaliados. Verificou-se que o processo de adsorção, para concentrações de DCF maiores do que 10 mg L-1, ocorreu em duas etapas. O modelo cinético de pseudossegunda ordem foi o que melhor descreveu a velocidade do processo na primeira etapa. Além disso, o percentual de remoção (~20%) foi semelhante para todas as concentrações estudadas. Para a segunda etapa, o processo de difusão intrapartícula foi o que melhor se ajustou aos dados experimentais, sendo que o percentual de remoção aumentou com o aumento da concentração inicial do fármaco (de 57 a 74%). No que se refere ao equilíbrio do processo, a isoterma de Freundlich foi a que melhor se ajustou aos resultados experimentais a 22°C, sendo que a adsorção do DCF pelo bagaço de uva apresentou um valor de KF e de n iguais a 1,72 L g-1 e 1,18, respectivamente. Do ponto de vista termodinâmico, o processo foi exotérmico (ΔH°ads = – 36,86 kJ mol-1), não-espontâneo (ΔG°ads > 2,99 kJ mol-1), ocorrendo com uma diminuição na aleatoriedade do sistema (ΔS°ads = – 135,85 J mol-1 K-1). Isso aconteceu possivelmente pelo fato de ambas as espécies (bagaço de uva e DCF) estarem carregadas negativamente na condição de pH avaliada (pH em torno de 5,0). / The aim of the present work was to evaluate the adsorption capacity of the Isabel grape bagasse (Vitis labrusca x Vitis vinifera) in the removal of the pharmaceutical diclofenac sodium (DCF) present in aqueous media. The biomass was initially characterized by several techniques including solid-state 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy (13C NMR), elemental analysis (CHNS), Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR), thermogravimetric analysis (TGA), and scanning electron microscopy (SEM). The specific surface area as well as the average diameter of the particles and the pH at the point of zero charge (pHPZC) were also determined. Subsequently, the adsorption capacity of the grape bagasse was investigated, under mechanical stirring, by molecular absorption spectroscopy in the ultraviolet (UV) region. The parameters such as adsorbent mass and stirring speed were previously optimized in order to be able to follow this process. The effect of pH, contact time, initial concentration of DCF, and temperature were also evaluated. It was observed that the adsorption process for DCF concentrations greater than 10 mg L-1 occurred in two stages. The pseudo-second-order kinetic model was more significant in the rate-controlling step in the first stage. In addition, the removal percentage (~ 20%) was similar for all concentrations studied. For the second step, on the other hand, the intraparticle diffusion process showed the best fit to the experimental data and the removal percentage increased with increasing initial concentration of the drug (from 57 to 74%). Concerning to the equilibrium process, the Freundlich isotherm showed the best fit to the experimental results at 22°C, and the adsorption of DCF onto grape bagasse presented a value of KF and n equal to 1.72 g L-1 and 1.18, respectively. From the thermodynamic point of view, the process was exothermic (ΔH°ads = – 36.86 kJ mol-1), non-spontaneous (ΔG°ads > 2.99 kJ mol-1), occurring with a decrease in the randomness of the system (ΔS°ads = – 135.85 J mol-1 K-1). This occurred probably because both species (grape bagasse and DCF) were negatively charged at pH condition evaluated (pH around 5.0).

A antitrombina de B. jararaca foi isolada por meio de cromatografia de afinidade em coluna HiTrap Heparin HP (GE Healthcare). A análise da interação da antitrombina humana ou de B. jararaca com a heparina em sistema BIAcoreT200 demonstrou que a antitrombina de B. jararaca apresenta maior afinidade pela heparina que a antitrombina humana. Com relação à sua atividade anti-inflamatória, os resultados obtidos evidenciaram o efeito anti-inflamatório do pré e do pós-tratamento com a antitrombina de B. jararaca na resposta inflamatória aguda. A análise proteômica do exsudato inflamatório de camundongos identificou algumas proteínas possivelmente relacionadas ao mecanismo de inibição da antitrombina, como a enzima C3 do sistema complemento, a sorotransferrina, a a1-antitripsina, a apolipoproteína AI, o fibrinogênio, o cininogênio e a albumina. O processo de clonagem permitiu a obtenção da sequência completa da antitrombina de B. jararaca e apesar da longa distância evolutiva entre serpentes e humanos, diversas características da antitrombina encontram-se conservadas. / B. jararaca antithrombin was isolated by affinity chromatography using HiTrap Heparin HP column (GE Healthcare). The interaction analysis of human or B. jararaca antithrombin with heparin using a BIAcoreT200 system (GE Healthcare) demonstrated that the affinity of B. jararaca antithrombin for heparin is higher than human antithrombin. Regarding the anti-inflammatory activity of B. jararaca antithrombin, the results showed the anti-inflammatory effect of pre- and post-treatment with this molecule in acute inflammation. The proteomic analysis of inflammatory exudate of mice identified some proteins possibly related to the mechanism of inhibition of antithrombin, such as C3 complement, serum transferrin, a1-antitrypsin, apolipoprotein AI, fibrinogen, albumin and kininogen. The molecular cloning process allowed the determination of the complete sequence of B. jararaca antithrombin and despite the evolutionary distance between snakes and human, a number of characteristics are preserved in antithrombin molecule.