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Análise de celulases e xilanases por fungo isolado a partir do bioma cerrado / Analysis of fungal cellulases and xylanases isolated from cerrado biome

Pereira, Douglas Endrigo Perez 06 May 2013 (has links)
Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-11-10T18:07:11Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Douglas Endrigo Perez Pereia - 2014.pdf: 1726049 bytes, checksum: 6458dcad45ca242b032db7ff26c4f792 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-11-10T20:00:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Douglas Endrigo Perez Pereia - 2014.pdf: 1726049 bytes, checksum: 6458dcad45ca242b032db7ff26c4f792 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-10T20:00:00Z (GMT). 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Initially, the fungi were analyzed for cellulase production capacity among the fungal cellulase-producing fungus capable of producing the highest levels of cellulase was selected for the experiments of xylanase and cellulase production by submerged fermentation and biochemical analysis of the enzyme secreted. Among the isolated fungi, fungus called IFBMD01 was that higher activity of cellulase in the supernatant when cultivated with wheat bran as carbon source. This was identified as Aspergillus cf niger. The enzymes studied with their respective results were: FPase with better production time of 7 days, showing activity of 0.10 U / mL, optimum pH 5.5, optimum temperature of 60 ° C; CMCase with better time production 6 days, showing activity of 8.19 U / mL, pH optimum of 5, optimum temperature of 70 º C; Avicelase with better production time of 9 days, showing activity of 0.01 U / mL, pH optimum of 5.5 and optimum temperature of 60 ° C; xylanase, with better production time 3 days, showing activity of 35.5 U / mL, and the optimum pH of 5 and the optimum temperature of 50 ° C, the β-Glycosidase, with higher production on the sixth day showing activity of 0.98 U / mL, with the optimum pH 5 and optimum temperature of 60 ° C. The activity of β-glucosidase showing in the culture supernatant was influenced by the ions Mn2 +, NH4, K +, Mg2 +, Ca2 +, Ba2 +, Al3 +, Na +, and Co2+, as well as EDTA, glucose, xylose and cellobiose. In the culture supernatant of the fungus A. niger IFBMD01 grown on FT for 3 and 6 days protein bands were visualized with activity against xylan and CMC molecular weight be 30 to be 66 kDa. / A biomassa lignocelulósica é constituída pela celulose, hemicelulose e lignina, presentes na parede das células vegetais. A xilana é o principal componente da fração de hemicelulose da lignocelulose. A conversão da lignocelulose à açúcares fermentáveis é realizada por um complexo de celulases e xilanases: enzimas que hidrolisam as frações de celulose e xilana. O objetivo deste trabalho foi analisar a produção de celulases e xilanases por fungos isolados a partir de solo e material em decomposição do Bioma Cerrado. Inicialmente, os fungos foram analisados quanto à capacidade de produção de celulases por atividade em placa, neste experimento, os fungos produtores de maiores níveis de celulases foram selecionados para os experimentos de produção de celulases e xilanases por fermentação submersa utilizando meio suplementado com resíduos lignocelulósicos como fonte de carbono. Dentre os fungos analisados, o isolado IFBMD01 apresentou maior atividade de celulases e xilanases no sobrenadante de cultura do fungo cultivado em meio com farelo de trigo, sendo que o pico de produção FPAses, CMCases, Avicelases e xilanases foram obtidos após 7, 6, 9 e 3 dias de cultivo respectivamente. A caracterização bioquímica das celulases e xilanases produzidas pelo isolado IFBMD01 demonstrou que: as enzimas com atividade de FPase apresentaram atividade de 0,10 U/mL, pH e temperatura ótimos de 5,5e 60ºC; as CMCases apresentaram atividade de 8,19 U/mL, pH ótimo de 5 e temperatura ótima de 70ºC; as Avicelases apresentaram atividade de 0,01 U/mL, pH ótimo de 5,5 e temperatura ótima de 60ºC; as xilanase apresentaram atividade de 35,5 U/mL, sendo o pH ótimo de 5 e a temperatura ótima de 50ºC e as β-glicosidases apresentaram atividade de 0,98 U/mL, com o pH ótimo de 5 e temperatura ótima de 60ºC. A atividade de β-glicosidase presente no sobrenadante de cultura foi influenciada pelos íons Mn2+, NH4, K+, Mg2+, Ca2+, Ba2+, Al3+, Na+ e Co2+, assim como por EDTA, glicose, xilose e celobiose. No sobrenadante de cultura do isolado IFBMD01 cultivado em FT por 3 e 6 dias foram visualizadas bandas de proteínas com atividade contra xilana e CMC, com massa molecular aproximada de 30 a 66 kDa. A identificação morfológica e molecular do isolado IFBMD01 demonstrou que é um isolado de Aspergillus cf niger.

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