O aumento na prevalência da tuberculose (TB), a emergência de cepas resistentes a múltiplas drogas de Mycobacterium tuberculosis, o agente etiológico da TB, e o efeito devastador da coinfecção pelo HIV têm enfatizado a urgente necessidade no desenvolvimento de novos agentes antimicobacterianos. A análise completa da seqüência genômica do M. tuberculosis H37Rv mostrou a existência de genes envolvidos na via de biossíntese de aminoácidos aromáticos, a via do chiquimato, e evidências experimentais indicam que esta via é essencial para o M. tuberculosis e apresenta-se ausente no homem. Os produtos dos genes que são essenciais para o crescimento dos microrganismos fazem deles alvos atrativos para a ação de drogas, pois a inibição de sua função pode matar o bacilo. Previamente, nosso grupo relatou a clonagem do gene aroE de M. tuberculosis e a expressão do seu produto na forma solúvel, a enzima chiquimato desidrogenase (MtbSD), que catalisa o quarto passo na via do chiquimato. Neste trabalho apresentamos, no primeiro artigo, intitulado “Functional shikimate dehydrogenase from Mycobacterium tuberculosis H37Rv: purification and characterization”, a purificação da MtbSD solúvel e ativa por cromatografia líquida, o seqüenciamento do Nterminal, a espectrometria de massas, a determinação do estado oligomérico por cromatografia em gel filtração, a estabilidade térmica, a determinação de parâmetros cinéticos aparentes em estado estacionário para as reações direta e reversa, a constante de equilíbrio aparente e energia de ativação para a reação química catalisada pela MtbSD. No segundo artigo, intitulado “Shikimate Dehydrogenase from Mycobacterium tuberculosis H37Rv: Kinetic and Chemical Mechanisms”, descrevemos os parâmetros de velocidade inicial na reação direta, os estudos de inibição pelos produtos, os efeitos isotópicos cinéticos primários do deutério, os efeitos isotópicos cinéticos do solvente, os efeitos isotópicos cinéticos múltiplos, proton inventory, o efeito de pH na química ácido/base para a ligação e catálise dos substratos, e a estrutura 3D da MtbSD obtida in silicon pela modelagem por homologia. Esses resultados servem como base para os estudos cinéticos e estruturais que podem auxiliar no desenho racional de inibidores a serem testados como agentes antimicobacterianos. / The increasing prevalence of tuberculosis (TB), the emergence of multidrug-resistant strains of Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of TB, and the devastating effect of coinfection with HIV have highlighted the urgent need for the development of new antimycobacterial agents. Analysis of the complete genome sequence of M. tuberculosis H37Rv shows the presence of genes involved in the aromatic amino acid biosynthetic pathway, the shikimate pathway, and experimental evidence showed that this pathway is essential for M. tuberculosis and it is absent in humans. The gene products that are essential for the growth of the microorganisms make them attractive drug targets since inhibiting their function may kill the bacilli. Our group has previously reported the cloning of M. tuberculosis aroE gene and the expression of the product in the soluble form, the shikimate dehydrogenase (MtbSD) enzyme, that catalysis the fourth reaction in the shikimate pathway. Currently, in the first manuscript “Functional shikimate dehydrogenase from Mycobacterium tuberculosis H37Rv: purification and characterization”, we present the purification of soluble and active MtbSD, N-terminal sequencing, mass spectrometry, assessment of the oligomeric state by gel filtration chromatography, thermal stability, determination of apparent steady-state kinetic parameters for both forward and reverse directions, apparent equilibrium constant, and energy of activation for the enzyme-catalyzed chemical reaction. In the second manuscript “Shikimate Dehydrogenase from Mycobacterium tuberculosis H37Rv: Kinetic and Chemical Mechanisms”, we describe the kinetic mechanism, initial velocity patterns in the forward direction, product inhibition studies, primary deuterium kinetic isotope effects, solvent kinetic isotope effects, multiple isotope effects, proton inventory, pH rate profile and the MtbSD 3D structure obtained in silicon by homology modeling. These results should be useful as a solid base for structural and kinetic studies, which can aid in the rational design of inhibitors to be tested as antimycobacterial agents.

Resumo não disponível.

O gênero Drosophila abrange pelo menos 1.149 espécies, subdivididas em oito subgêneros, muitas das quais vêm desempenhando um papel fundamental no desenvolvimento do conhecimento biológico, principalmente nos âmbitos genético e evolutivo. Toda esta diversidade, entretanto, ao mesmo tempo em que gera inúmeras oportunidades de pesquisa, impõe uma série de desafios taxonômicos e filogenéticos. Desta forma, apesar de Drosophila compor um dos organismos experimentais mais bem estudados, muitas questões acerca de sua evolução permanecem irresolvidos ao longo do tempo. A presente tese foi, portanto, desenvolvida com o objetivo de auxiliar na resolução de aspectos particulares relacionados à história evolutiva deste complexo grupo de espécies. Neste sentido, os Capítulos II e III foram designados com o intuito de elucidar as relações filogenéticas entre espécies e grupos tradicionalmente situados no subgênero Drosophila, com ênfase naqueles de distribuição primariamente Neotropical. A inclusão de outros gêneros pertencentes à família Drosophilidae levou, porém, a definições parafiléticas para o gênero e para o subgênero Drosophila. Mesmo assim, níveis adicionais de resolução foram acrescentados à filogenia do subgênero Drosophila, que se apresentou subdividido em duas (Capítulo II) ou três (Capítulo III) grandes radiações. Os Capítulos IV e V, por outro lado, buscaram a inferência de cenários evolutivos mais restritos. No Capítulo IV o foco foi um pequeno grupo de espécies pertencente ao subgênero Drosophila, o grupo mesophragmatica, para o qual se obteve descrições evolutivas confiáveis. No Capítulo V, por outro lado, o grupo willistoni, pertencente ao subgênero Sophophora teve sua complexidade evolutiva mais uma vez reiterada. Em cada um destes casos, entretanto, novos estudos são incentivados para que um dia realmente nos aproximemos da história evolutiva verdadeira do gênero Drosophila. / The genus Drosophila encompasses at least 1.149 species subdivided into eight subgenera, many of which presented a central role in the development of the biological knowledge, mainly in the genetical and evolutionary areas. However, at the same time that this diversity provides numberless opportunities of research, it imposes a set of taxonomic and phylogenetic challenges. Thus, although Drosophila composes one of the best studied experimental organisms, many questions concerning its evolution remain unsolved through time. This thesis was developed with the aim of helping to solve particular questions related to the evolutionary history of this complex group of species. In this sense, Chapters II and III were designed with the aim of elucidating the phylogenetic relationships within and between species groups traditionally placed in the Drosophila subgenus, with an emphasis in those mainly Neotropical in distribution. The inclusion of other Drosophilidae genera, nevertheless, led the Drosophila genus and subgenus entirely paraphyletic. Even so, improved levels of resolution were provided to the subgenus Drosophila phylogeny, which was subdivided into two (Chapter II) or three (Chapter III) major radiations. Chapters IV and V, on the other hand, addressed more restricted evolutionary scenarios. In Chapter IV the focus was a small group of species included in the Drosophila subgenus, the mesophragmatica group, for which a confident evolutionary description was attained. In Chapter V, otherwise, the willistoni group, included in the Sophophora subgenus, had its evolutionary complexity once again reiterated. In each of these cases, nevertheless, new studies are encouraged in order to approach the genus Drosophila real evolutionary history.

Ureases (EC 3.5.1.5) são metaloenzimas que hidrolisam uréia para produzir amônia e dióxido de carbono. Estas enzimas, que são amplamente encontradas em fungos, bactérias e plantas, compartilham de estruturas similares. A presença de urease em várias bactérias patogênicas (Helicobacter pylori e Proteus mirabilis, p.e) está fortemente correlacionada com a patogênese em doenças humanas. Muitos fungos de importância médica possuem atividade ureásica, entre eles citamos Cryptococcus neoformans, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum, Sporothrix schenckii, e espécies de Trichosporon e Aspergillus. C. neoformans é uma levedura que produz vários fatores de virulência conhecidos, como presença de cápsula polisacarídica, produção de melanina e capacidade de desenvolvimento a 37ºC. A maioria de isolados clínicos produz grandes quantidades de urease e muitos autores sugerem que a urease de Cryptococcus exerça uma função importante na patogênese, porém com mecanismos ainda não esclarecidos. Cryptococcus gattii – sorotipo B, tipo molecular VGII, linhagem R265, com capacidade de infectar pacientes imunocompetentes, causou uma epidemia na Ilha de Vancouver (Canadá) entre 1999 e 2003. Neste trabalho desenvolvemos um procedimento de purificação e apresentamos a caracterização físico-química e cinética da urease de C. gattii, cepa R265, após ter sido purificada na razão de 539 vezes. A massa molecular estimada foi de 120 kDa, Km 2,0 mM para uréia, pH ótimo 8,0. O ácido acetohidroxâmico demonstrou ser um bom inibidor em concentrações micromolares, enquanto ρ-hidroximercuriobenzoato causou inibição em concentrações mais altas, comparado a outras ureases. Espera-se que estudos adicionais com essa urease purificada permitam investigar propriedades biológicas independentes da atividade ureolítica e estabelecer sua contribuição para a patogênese da criptococose. / Ureases (EC 3.5.1.5) are metalloenzymes that hydrolyze urea to produce ammonia and carbon dioxide. These enzymes, which are found in fungi, bacteria, and plants show very similar structures. The presence of urease in many pathogenic bacteria (Helicobacter pylori and Proteus mirabilis) is strongly correlative with pathogenesis in human diseases. Many medically important fungi have urease activity, among which are Cryptococcus neoformans, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum, Sporothrix schenckii, and species of Trichosporon and Aspergillus. C. neoformans is a heterothallic yeast with several known virulence factors, including a polysaccharide capsule, melanin production, and the ability to grow at 37°C.The majority of clinical isolates produce large amounts of urease and several authors suggest that Cryptococcal urease play an important role in pathogenesis but with unclear mechanisms but probably by different routes dependent and independent of ureolytic activity, althought many questions are unclear. We wanted to further investigate the role of urease in biological properties by using Cryptococcus gattii as a pathogen model. C. gatti – serotype B, molecular type VGII, R265 strain, which has capacity to infect immunocompetent individuals, caused an outbreak on Vancouver Island in Canada from 1999 to 2003. This work presents the physicochemical characterization of a urease from C. gatti strain R265 after a 539 fold purification. The estimated native molecular mass was 120 kDa, Km 2.0 mM urea, pH optimum 8.0. Aceto hydroxamic acid was a strong inhibitor at low concentration while ρ-hidroxy mercuribenzoate needed higher concentrations for inhibition compared to other ureases.

O arroz é umas das mais importantes plantas cultivadas no mundo, sendo constituinte da dieta básica de mais da metade da população humana, inclusive no Brasil. Entretanto, o arroz é um cereal nutricionalmente pobre, apresentando baixas concentrações de metais essenciais, como o ferro e o zinco. Programas de melhoramento e de engenharia genética têm sido empregados na tentativa de melhorar o teor nutritivo dos grãos de arroz. Entretanto, para se alcançar este objetivo é essencial conhecer os mecanismos que envolvem a aquisição de metais, transporte interno e armazenamento nas plantas. A literatura recente tem revelado a existência de diversas famílias de genes candidatos a desempenharem função na homeostase de metais em arroz (genes Yellow Stripe Like, IRT, FRO, MTP, etc). Entre estes, a família Yellow Stripe Like é forte candidata a possuir genes envolvidos na alocação de ferro para o grão, visto que é uma família numerosa (18 genes) de transportadores de ferro, com diferentes isoformas capazes de transportar ferro ligado a fitossideróforos ou a nicotiamina (o principal quelante de ferro intracelular), e com expressão comprovada de pelo menos uma isoforma em células de floema. No entanto, a alocação de minerais para o grão é um processo altamente regulado, que provavelmente requer a atividade de outros genes, com funções ainda desconhecidas. Neste estudo visamos avaliar a contribuição de genes YSL em plantas de arroz e identificar novos genes potencialmente envolvidos com o transporte de metais aos grãos de arroz utilizando diferentes ferramentas: análise de plantas mutantes no gene OsYSL15 por inserção do retroelemento TOS17; avaliação da expressão de genes YSL em folhas bandeira e panículas de arroz em dois estádios de desenvolvimento; construção de uma biblioteca de hibridização subtrativa (SSH) de panículas em dois estádios de desenvolvimento, visando identificar genes com expressão induzida no enchimento dos grãos. Estas diferentes abordagens nos permitiram concluir que: o gene OsYSL15 é fortemente induzido em raízes sob deficiência de ferro, mas não necessário para o desenvolvimento das plantas nas condições estudadas; a função do gene OsYSL15 provavelmente possui sobreposição com as de outros transportadores de ferro, que podem compensar a sua falta; o gene OsYSL18 é um forte candidato a participar dos processos de alocação de minerais para os grãos de arroz. Além disso, foi possível identificar um novo gene, com função ainda desconhecida, com alta expressão em panículas de arroz durante o enchimento do grão. / Rice is one of the most important crops worldwide. Although being a poor source of nutrients, such as iron and zinc, rice is the dietary basis of over half the world's population, including Brazil. Breeding and genetic engineering programs have been employed with the intent to improve the nutritive characteristics in rice grains, including the increase of mineral nutrients, such as iron and zinc. To reach this objective, it is necessary to understand how metal homeostasis occurs in plants, including rhizosphere uptake, internal transport and storage. The recent literature has revealed several families of genes which are candidates to be involved in metal homeostasis in rice (Yellow Stripe Like, IRT, FRO, MTP, etc). Among them, the Yellow Stripe Like family is a strong candidate to contain genes involved with iron allocation to the grain. This is a large family (18 genes) of iron transporters, with different isoforms being able to transport iron chelated to siderophores or to nicotianamine (the main intracellular iron ligand in plants), and with at least one isoform being expressed in phloem cells. However, mineral allocation to the grain is a highly regulated process, which probably requires the activity of other genes, with functions that are still unknown. This study aimed at the evaluation of the contribution of YSL genes and at the identification of new genes potentially involved with metal transport to the rice grain, making use of three different tools: analysis of OsYSL15 mutant plants, containing TOS17 retroelement insertion; gene expression evaluation of YSL genes in rice flag leaves and panicles during two reproductive stages; construction of a panicle subtractive library (SSH) comparing two reproductive stages, in order to identify genes up-regulated during grain filling. These diverse approaches allowed us to reach the following conclusions: the OsYSL15 gene is strongly induced in roots under iron deficiency, but is not necessary for plant development under control conditions; probably there is function overlap between the OsYSL15 gene and other iron transporters, which can compensate for its absence; the OsYSL18 gene is a strong candidate to participate in mineral allocation to the rice grain. Moreover, it was possible to identify a new gene, with still unknown function, which is highly up-regulated in panicles after anthesis.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-12T18:21:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Felipe Souza.pdf: 1608692 bytes, checksum: 44bd98a260434ee708f97ad01e7b025c (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-12T18:21:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Felipe Souza.pdf: 1608692 bytes, checksum: 44bd98a260434ee708f97ad01e7b025c (MD5) / A região do semiárido é caracterizada pelo seu clima seco, altas temperaturas e baixos índices pluviométricos, apresentando um ambiente de estresse para a vegetação. No entanto, as espécies presentes nesta região apresentam características adaptativas que lhes permitem sobreviver a estas condições, como mamona. Indicada pelo PNPB, a mamona possui um elevado teor de óleo em suas sementes, o qual possui diversas aplicações, dentre elas a produção de Biodiesel. Apesar do grande interesse nesta espécie, ainda há poucos estudos publicados quanto à biologia molecular em sementes relacionadas a estresses abióticos. No presente estudo foi realizado um screening hídrico utilizando PEG 8000 nos potenciais -0,2; -0,4; -0,6; -0,8; -1,0; -1,2 e -1,4 MPa para verificar a tolerância de suas sementes à seca, em seguida foram conduzidos testes moleculares com RT-qPCR para análise da expressão dos genes DREB, MAPK, Aquaporina, Ciclofilina, CDPK e HDA. Os dados obtidos demonstraram que as sementes da mamona não são tolerantes ao estresse hídrico, durante a sua germinação, sendo afetadas fortemente nos potenciais mais baixos como -0,2 MPa. Os genes MAPK, Ciclofilina, DREB1A e CDPK se mostraram responsivos ao estresse hídrico, o HDA apresentou uma expressão significativa durante a embebição em água por 36 horas, entretanto uma supressão quando primariamente tratado com PEG e reidratado em água. / Salvador

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química / Made available in DSpace on 2013-07-16T03:04:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 241649.pdf: 3341855 bytes, checksum: 05e7e08ad9fe7613d4d2cc85daf872db (MD5) / Vias metabólicas são descritas por um conjunto de reações bioquímicas acopladas por um metabólito intermediário em comum. Cada uma das reações deste conjunto é facilitada pela presença de uma enzima. O estudo destes sistemas geralmente assume que a concentração de enzimas é constante e seu efeito é abstraído pela velocidade de reação identificada por seu parâmetro cinético correspondente. Enzimas por sua vez, são o resultado de uma complexa rede de interações biomoleculares governadas por um conjunto de sinais que podem levar a ativação ou a repressão da produção destas enzimas. Com o avanço da biologia molecular e conseqüentemente das inovações tecnológicas relacionadas, a quantidade de informações disponível possibilita considerar também as redes de regulação genômica que dão origem às enzimas e incluí-la na análise de vias metabólicas. Redes de regulação genômicas demonstram um forte caráter combinatório, enquanto que reações bioquímicas demonstram um caráter fluido e contínuo. Desta forma, a modelagem e análise de vias metabólicas reguladas naturalmente enquadram-se sob o domínio de sistemas híbridos. No entanto, como uma primeira abordagem de validação ou refutação de hipóteses sobre observações biológicas, vias metabólicas reguladas podem ser modeladas e analisadas por métodos formais da matemática discreta. Neste trabalho, redes de regulação genômicas serão modeladas e analisadas pelo formalismo de grafos regulatórios e reações bioquímicas por redes de Petri. Em seguida, o grafo de regulação será transcrito para um modelo equivalente em termos de redes de Petri. Finalmente, o modelo integrado da via metabólica com a rede de regulação, ambas sob o formalismo de rede de Petri, será analisado. Os mecanismos de regulação da produção do aminoácido aromático triptofano pela Escherichia coli serão utilizados para compor o modelo biológico. Metabolic pathways can be described by a set of biochemical reactions coupled by a common intermediate metabolite. Each one of these reactions is facilitated by the presence of an enzyme. Biochemical reactions modeling always assume a constant enzyme concentration, and its effect on the system is abstracted by its corresponding kinetic parameter. Enzymes are the result of a complex biomolecular interactive network, ruled by a set of signals, which can activate or deactivate the process of enzyme production. Molecular biology recent discoveries and its accompanying technological innovations produce an enormous set of molecular level information, which permits to consider the inclusion of genetic regulatory networks to the analyses of biochemical networks. Genetic regulatory networks have a strongly combinatorial behavior, while biochemical networks exhibits a fluid and continuous character. Therefore, regulated biochemical networks are naturally under hybrid system domain of modeling and analysis. However, discrete mathematical methods can be used to model regulated metabolic pathways as a first method to validate or refuse biological hypothesis. In this work, genetic regulatory networks will be modeled and analyzed under the regulatory graph formalism, and biochemical networks as Petri nets. In the sequel, the logic regulatory graph will be translated to an equivalent Petri net model. Finally, the model resulted from the integration of biochemical networks with the genetic regulatory network, both in terms of Petri nets, will be analyzed. The regulatory mechanisms of tryptophan production by Escherichia coli will be used as a biological model.

SOUZA NETO, Garcia. Prevalência de infecção genital por HPV em gestantes. 2007. 50 f. Dissertação (Mestrado em Tocoginecologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-10-22T15:48:44Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_gsousaneto.pdf: 148738 bytes, checksum: 46925ffb9f2a0ef8e4cf1d4e054b91a5 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2012-10-26T15:10:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_gsousaneto.pdf: 148738 bytes, checksum: 46925ffb9f2a0ef8e4cf1d4e054b91a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-26T15:10:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_gsousaneto.pdf: 148738 bytes, checksum: 46925ffb9f2a0ef8e4cf1d4e054b91a5 (MD5) Previous issue date: 2007 / To estimate the prevalence of HPV in pregnant women and to compare the positive group and the negative one in respect of epidemiologic data, sexual behavior and clinical presentation. Methodology: It is a cross-sectional study, among 549 pregnant women followed at Hospital Geral César Cals from the Health Secretary of the State of Ceará, from August, 2003 to May, 2004. A structured questionnaire was applied, no matter the age of pregnancy, whether they were or not symptomatic, excluding those who had used antibiotics or any other substance into the vagina, during the previous fifteen days or who had kept sexual relationship until two days before the consultation, with a endocervical swab being performed, in order to have a hybrid capture test for the presence of HPV, as indicated by the manufacturer. Data were analyzed by STATA 13.0, performed by means of the qui-square and logistic regression tests with descriptive and analytic presentation. Results: Age of patients varied from 12 to 47 years old (medium of 25.89). The medium age of pregnancy was 20.34 weeks, parity varying from 0 to 7 births. The sample consisted in the majority of women of medium brown color (59.38%), with steady union (79.6%), with 1º. complete degree (42.08%) and with lesser familiar income than 2 minimum wages per month (54.1%). 245 women had presented positive hybrid capture for HPV (44,62%. 15 (2.73%) had presented positive test for HPV of low risk, 40 (7.29%) for HPV of high risk and 190 (34.61%) for HPV of low and high risk. The groups with presence and absence of HPV were statistically different in terms of the race, use of condoms with eventual partner, presence of cervical ectopia in gynecological examination and history of genital vesicles. After the logistic regression, the odds-ratio for the presence of HPV was done. Conclusions: The prevalence of genital infection for HPV between pregnant women was 44,62%. The risk factors associated with infection by genital HPV were pelvic pain, eversion and hyperemia of the colo, condom use with partner fixed and low family income. / Determinar a prevalência de infecção genital por HPV em gestantes e comparar dados epidemiológicos e de comportamento sexual e apresentação clínica entre as gestantes HPV positivas e HPV negativas. Metodologia: trata-se de estudo de corte transversal (prevalência) da presença de infecção genital por HPV em 549 gestantes atendidas no Hospital Geral César Cals da Secretaria de Saúde do Estado do Ceará. Utilizou–se um questionário aplicado diretamente às gestantes, independente da idade gestacional e de estarem sintomáticas ou não, além da coleta de esfregaço cérvico-vaginal para realização de teste de captura híbrida II, com material colhido em tubo com solução conservadora utilizando o sistema de micro placa, conforme procedimento descrito pela DIGENE®. A leitura dos exames foi realizada pelo laboratório Central do Ceará (LACEN). Foram excluídas as pacientes que haviam feito uso de antibióticos vaginais nos últimos 15 dias ou relações sexuais nos 2 dias anteriores à coleta cervical. Os dados foram analisados utilizando o software STATA 13.0, procedendo-se análise descritiva e analítica através do teste de qui-quadrado e regressão logística, subtraindo-se variáveis. Resultados: A idade das pacientes variou de 12 a 47 anos (média de 25,89). A idade gestacional média foi de 20,34 semanas (variando de 6 a 39 semanas) com paridade variando de 0 a 7 partos. A amostra constituiu-se na maioria de mulheres de cor parda (59,38%), com união estável (79,6%), com 1º. grau completo (42,08%) e com renda familiar menor que 2 salários mínimo por mês (54,1%). 245 mulheres apresentaram captura híbrida positiva para HPV (44,62%). 15 (2,73%) apresentaram positividade para HPV de baixo risco, 40 (7,29%) para HPV de alto risco e 190 (34,61%) para HPV de baixo e alto risco. Os grupos com presença e ausência de HPV mostraram-se estatisticamente diferentes quanto à raça, uso de preservativos com parceiro eventual, presença de eversão do colo uterino ao exame ginecológico e história de vesículas genitais. Após a regressão logística encontrou-se uma razão de chances (OR) para a presença de HPV . Conclusões: A prevalência de infecção genital por HPV entre gestantes em nosso meio foi de 44,62%. Os fatores de risco associados à infecção genital por HPV foram dor pélvica, eversão e hiperemia do colo, uso do preservativo com parceiro fixo e baixa renda familiar.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-24T11:15:46Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 389658 bytes, checksum: d01e4f8e75c1bc6e7531f77722009e37 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T11:15:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 389658 bytes, checksum: d01e4f8e75c1bc6e7531f77722009e37 (MD5) Previous issue date: 2003-05-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Tomato rugose mosaic virus (ToRMV) é um begomovírus descrito como parte de um complexo viral causando mosaico dourado e deformação (rugosidade) foliar em tomateiro na região do Triângulo Mineiro, Minas Gerais. Os dois componentes genômicos encontram-se completamente sequenciados, e a análise das seqüências de nucleotídeos do DNA-A indicou a presença de uma ORF adicional denominada AC5, presente apenas em algumas espécies de begomovírus. Esta ORF está quase totalmente inserida na sequência do gene cp, porém em orientação inversa e em outra fase de leitura. A ORF AC5 do ToRMV tem o potencial de codificar uma proteína com aproximadamente 27 kDa. A função do produto potencial da ORF AC5 foi estudada apenas para o Watermelon chlorotic stunt virus (WmCSV), não sendo encontrado nenhum indício da expressão da ORF. Entretanto, a seqüência de aminoácidos da proteína potencialmente codificada pela ORF AC5 do ToRMV possui apenas 41% de identidade com a AC5 do WmCSV. É possível que a ORF AC5 do ToRMV seja expressa, e que a proteína desempenhe alguma função no ciclo de infecção viral. Este trabalho teve por objetivo a clonagem e a expressão in vitro da ORF AC5 do ToRMV e a producão de anti-soro específico. Oligonucleotídeos específicos foram utilizados para a amplificação da região codificadora da ORF AC5 via PCR. O fragmento amplificado foi clonado no vetor de expressão pRSET-C. Plasmídeos recombinantes foram utilizados para a expressão da proteína AC5 em E. coli BL21::DE3. A proteína foi purificada a partir das células de E. coli e utilizada para a produção de anti-soro policlonal em coelhos. A especificidade do anti-soro policlonal obtido foi confirmada por Western blot. Esse anti-soro poderá ser utilizado em ensaios de imunolocalização da proteína AC5 em tecidos infectados pelo ToRMV. / Tomato rugose mosaic virus (ToRMV) is a typical bipartite begomovirus described as part of a viral complex inducing golden mosaic and leaf distortion (rugosity) in tomatoes at Triângulo Mineiro, Minas Gerais. Both genomic components have been completely sequenced, and the DNA-A sequence analysis indicated the presence of an additional open ready frame (ORF), named AC5, present in only a number of begomovirus species. This ORF is almost fully inserted into the cp gene, but in opposite orientation and in a different reading frame. The AC5 ORF of ToRMV has the potential to encode for a 27 kDa protein. The function of a putative AC5 protein has only been studied for Watermelon chlorotic stunt virus (WmCSV), but no evidence of its expression was found. However, the amino acid sequence of the putative AC5 protein from ToRMV is only 41% identical to the WmCSV AC5. It is thus conceivable that the ToRMV AC5 is expressed and plays a role in the viral infection cycle. The objective of this work was to clone and express the ToRMV AC5 ORF in vitro, and to raise an AC5-specific antiserum. Specific primers were used to direct the PCR-based amplification of the ToRMV AC5 ORF. The amplified fragment was cloned into the expression vector pRSET-C. Recombinant plasmids were used for protein expression in E. coli BL21::DE3. The AC5 protein was purified from E. coli cells by affinity chromatography and used for the immunization of rabbits. The specificity of the polyclonal antiserum obtained was assayed by Western blot. This antiserum can now be used in immunolocalization studies attempting to detect the AC5 protein in ToRMV-infected tissues. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-09-01T15:36:52Z No. of bitstreams: 1 texto compelto.pdf: 1217833 bytes, checksum: dd513c056c18e5f4c6c240e4782f8f2b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-01T15:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto compelto.pdf: 1217833 bytes, checksum: dd513c056c18e5f4c6c240e4782f8f2b (MD5) Previous issue date: 2017-03-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Com o desenvolvimento da biologia molecular, foi possível o desenvolvimento de metodologias que reduziriam o tempo, para obtenção de genótipos superiores. A seleção não se basearia em apenas dados fenotípicos, com o desenvolvimento da genotipagem, seria possível o estudo completo do genoma da espécie em trabalho, desta forma, ter uma maior utilização destas informações genéticas, geradas no melhoramento de plantas. Essa nova metodologia desenvolvida em 2001 foi denominada de Seleção Genômica Ampla (GWS), que foi criada para predizer o fenótipo futuro de uma população baseando em informações de marcadores moleculares, cujos os efeitos genéticos aditivos, que estes explicam, já foram previamente estimados. A seleção genômica ampla tornou-se uma metodologia importante no melhoramento genético de plantas e animais o que pode permitir melhores acurácias e seleção precoce. Com isto, o objetivo deste trabalho em primeiro momento foi realizar um estudo sobre os principais fatores responsáveis por modificarem a estrutura genética de uma população tendo em vista o acasalamento ao acaso e sucessivas gerações de autofecundação e também avaliar a eficácia do processo de simulação em gerar as populações avaliadas. Foram simulados dados de indivíduos e de informações moleculares das populações F 2 , derivadas de genitores homozigotos contrastantes. As populações geradas foram de tamanho de 1000 indivíduos e considerou-se seis grupos de ligação com níveis de saturação de 201 marcas moleculares, totalizando 1206 marcadores codominantes. As populações foram submetidas a cinco gerações de autofecundação e acasalamento ao acaso. Para as populações avaliadas, a estrutura genética foi preservada durante o processo de simulação, tornando assim, a simulação um método eficaz. Fatores como o desequilíbrio de ligação, dominância, endogamia, afetaram de forma diferencial, quanto ao tipo de sistema de acasalamento. Na segunda etapa do trabalho foram simuladas populações com estrutura populacional apresentando dados fenotípicos e genotípicos de cada indivíduo dentro da população, imitando alguns dos cenários em que a Seleção Genômica Ampla é aplicada. Com isso, o trabalho teve como objetivo avaliar a acurácia da seleção genômica em diferentes cenários de distribuição de efeitos genéticos e populações de validação. Uma vez geradas as populações na primeira etapa com um número de 1000 indivíduos, para os dados genotípicos considerou-se 1206 locos marcadores, sendo 30 locos que controlava o caráter com herdabilidade de 30 e 60 % e grau médio de dominância de 0.5 e 1.0. Distintos efeitos de QTL foram simulados, um de acordo com uma distribuição uniforme, outro com distribuição binomial e outro com uma distribuição exponencial com o objetivo de retratar diferentes arquiteturas genéticas. A metodologia RR-BLUP foi utilizada a fim de se computar a acurácia da seleção genômica nos diferentes cenários estabelecidos. A simulação foi eficiente em preservar a estrutura genética das populações, os resultados mostram que o efeito de dominância age como um agente perturbador e que a ação do ambiente também afeta o processo seletivo, para fins de recomendação de uso da GWS. / The selection would not be based on phenotypic data only, with the development of genotyping, it would be possible to study the genome of the species in the work, thus, to have a greater use of this genetic information generated in the breeding of plants. This new methodology, developed in 2001, was called Genomic Wide Selection (GWS), which was created to predict the phenotype of a population based on information from molecular markers, whose additive genetic effects, which they explain, have already been previously estimated. Broad genomic selection has become an important methodology in the genetic improvement of plants and animals, which may allow better accuracy and early selection. The main objective of this work was to study the main factors responsible for modifying the genetic structure of a population in order to randomly mating and successive generations of self- fertilization, as well as to evaluate the effectiveness of the simulation process in generating The populations evaluated. Data from individuals and molecular information of the F 2 populations derived from contrasting homozygous parents were simulated. The populations generated were of 1000 individuals and six binding groups were considered with saturation levels of 201 molecular tags, totaling 1206 codominant markers. The populations were submitted to five generations of self-fertilization and random mating. For the populations evaluated, the genetic structure was preserved during the simulation process, thus making simulation an effective method. Factors such as linkage disequilibrium, dominance, inbreeding, affected differentially, as to the type of mating system. In the second stage of the work, populations with population structure were simulated presenting phenotypic and genotypic data of each individual within the population, imitating some of the scenarios in which the broad genomic selection is applied. Thus, the objective of this work was to evaluate the accuracy of genomic selection in different scenarios of distribution of genetic effects and validation populations. Once the populations in the first stage with a number of 1000 individuals were generated, 1206 loco markers were considered for the genotypic data, 30 of which were loco that controlled the heritability of 30 and 60% and a mean degree of dominance of 0.5 and 1.0. Different effects of QTL were simulated, one according to a uniform distribution, another with binomial distribution and another with an exponential distribution aiming to portray different genetic architectures. The RR-BLUP methodology was used in order to compute the accuracy of the genomic selection in the different established scenarios. The simulation was efficient in preserving the genetic structure of the populations, the results show that the dominance effect acts as a disturbing agent and that the action of the environment also affects the selection process, for purposes of GWS use recommendation.