Orientador: Marcelo de Carvalho Ramos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:04:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Calusni_AnaLuciaRoscani_D.pdf: 14978312 bytes, checksum: fabcaa4f8e5f09a9656a39cfb1bb7020 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A tuberculose é um importante problema de saúde pública no Brasil e no mundo e a síndrome da imunodeficiência adquirida (aids) tem um papel importante no agravamento deste quadro. Estima-se que existam de 35 a 45 milhões de pessoas infectadas pelo Mycobacterium tuberculosis no Brasil; este grande número de casos vem despertando o interesse em se investigar melhor a epidemiologia da doença. Esta investigação tem como ferramenta importante as técnicas de biologia molecular, que estão sendo cada vez mais utilizadas. A técnica melhor padronizada e mais utilizada é o RFLP com a 1S6110, por meio da qual podemos demonstrar o número e as posições das seqüências de inserção 1S6110 no cromossomo do Mycobacterium tuberculosis. As amostras foram isoladas de pacientes portadores de tuberculose pulmonar, atendidos no Hospital das Clínicas da Unicamp, no período de janeiro de 1996 a março de 1999. Foram estudados 76 pacientes, a maioria do sexo masculino, com faixa etária entre 20 e 40 anos. O DNA cromossômico das cepas foi obtido através da técnica de extração internacionalmente padronizada. Após análise dos padrões de bandas obtidos e comparação dos dados com um banco internacional, cinqüenta e nove isolados revelaram perfil genotípico único, enquanto que outros dezessete foram agrupados em conglomerados distintos. Dez pacientes foram agrupados em conglomerados arbitrariamente designados como se segue: padrão "BE" com 2 pacientes, padrão "BF" com 6 pacientes, padrão "BH" com 2 pacientes e um padrão "AK", descrito em uma contaminação laboratoriaL em um paciente. Nos seis pacientes restantes, foram encontrados padrões anteriormente descritos por um grupo de Houston (EUA), que são: padrão"137" encontrado em Houston com 3 pacientes; padrão "Z" encontrado em EI Paso e Juarez com 1 paciente e padrão "AZ" encontrado em Nova York com 2 isolados. O fato de utilizar uma técnica padronizada por vários centros de pesquisa possibilita a comparação dos padrões obtidos e assim confirmar a transmissão global da tuberculose / Abstract: Tuberculosis is a major concem in developing countries. The contribution of genotyping techniques to trace epidemiological chains is remarkable, IS 6110RFLP being the preferred typing method. AIDS epidemics has had a major impact on the incidence of tuberculosis. Not so many genotyping studies have been made in Brazil in order to check for the number of IS6110 present in local strains of M tuberculosis, as well as the distribution and clustering ofM tuberculosis strains. We performed DNA finger printing using Restriction-Fragment-Length-Polymorphism (RFLP) analysis of at least one isolate from every patient with positive AFB smear, confirmed pulmonary tuberculosis at a major hospital in Campinas, São Paulo, Brazil from January 1996 through July 1999. All fmgerprints were analyzed using proper software, and compared to an international database from the Institute for the Study of Human Bacterial Pathogenesis, Department of Pathology, Baylor College of Medicine. Medical records were reviewed for relevant clinical data. During the study period, 98 patients were included, yelding 76 fingerprints. All M tuberculosis strains had an adequate number of IS6110 (5-21) for the analysis. HIV infection was confirmed in nearly half the patients when it was available. 58 strains exhibited unique patterns whereas 17 others could be grouped in 7 clusters (2 to 6 strains in each cluster). When compared to the mentioned database, 6 strains matched the same genotype from strains originated from El Passo, Juarez, Houston, and New York. Some clustered strains could be recovered during almost all the study period. M tuberculosis strains recovered from patients in Brazil can be genotyped using IS6110 RFLP, since they harbor an adequate number of such sequences. Recently acquired infections could be documented in 19% of cases since the strains could be clustered. The transmission of infection is intense, since some of clustered strains could be recovered during all the study period. The global dissemination of M tuberculosis strains could be evidenced by demonstration of identical fingerprints occurring in a distant country / Doutorado / Ciencias Basicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Laura Maria Mariscal Ottoboni, Mirian Perez Maluf / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:42:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_FernandaLattario_M.pdf: 1008298 bytes, checksum: f4425561e8e16a8ff6da119e1c8145c1 (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado

Orientadores: Vanderlei Rodrigues, Marlene Tiduko Ueta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:22:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula_FabianaMartinsde_D.pdf: 4232239 bytes, checksum: 7f4299766a3d13a21cf8ba1f768d36e3 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As proteases, sobretudo os complexos enzimáticos como o proteassoma 26S, têm sido relacionadas com diferentes processos biológicos em parasitas. O presente trabalho, teve como objetivo realizar um estudo inicial do proteassoma 26S no nematódeo Strongyloides venezuelensis, por meio de ensaios bioquímicos e da caracterização de alguns componentes deste complexo multienzimático. Este nematódeo é utilizado como modelo experimental para o estudo da estrongiloidíase humana, uma helmintíase com alta prevalência em regiões tropicais e subtropicais. Para tanto, foram obtidos dois estágios de desenvolvimento de S. venezuelensis a partir de infecções experimentais em Rattus norvegicus, o estágio infectante de vida-livre (larva filarioíde, L3) e o parasitário (fêmea partenogenética, F). Para os ensaios bioquímicos foram obtidos os extratos brutos de ambos estágios, os quais foram submetidos aos ensaios de atividades (quimiotripsina e tripsina-símile), utilizando substratos sintéticos fluorogênicos, na presença e na ausência de inibidores específicos do proteassoma 26S (MG132 e PSI). Além disso, o extrato foi submetido ao SDS-PAGE, seguido pela técnica de ¿Western-blot¿ utilizando anticorpos específicos para o proteassoma 20S e para ubiquitina. Para os experimentos moleculares foram obtidos RNA de ambos os estágios, os quais foram submetidos a amplificações utilizando oligonucleotídeos iniciadores específicos para as subunidades alfa 6 e beta 6 do proteassoma 20S (¿core¿ proteolítico) e as subunidades ATPase 3 e S5a do complexo regulatório 19S do proteassoma 26S. O DNA genômico foi amplificado para todas as subunidades com exceção da S5a. Os produtos de amplificação obtidos foram submetidos à busca de homologia no banco de dados, após sequenciamento dos mesmos. Os resultados confirmaram a presença do proteassoma 26S no nematódeo S. venezuelensis, através da atividade específica de quimiotripsina e tripsina-símile e a presença de bandas protéicas características reveladas pelos anticorpos específicos, bem como pela análise molecular das subunidades. No entanto, novos estudos serão necessários para inferir a importância deste complexo multienzimático neste parasita / Abstract: Protease is an important biological process in different parasites, especially in enzymatic complex like 26S proteasome. The objective of the present work was to initiate the study of the 26S proteasome in the nematode Strongyloides venezuelensis using biochemical experiments and identifying some components of this multienzymatic complex. This nematode has been used as a model and tool for the studies on strongyloidiasis, a helminthiasis of high prevalence in tropical and subtropical regions. In this study, two development stages of S. venezuelensis, namely infective larvae (third-stage larvae) and parasitic stages, were used for experimental infections in Rattus norvegicus. In biochemical experiments the crude extracts of the both stages were submitted at proteolytic activities (chymotrypsin-like and trypsin-like) using fluorogenic peptides in presence and absence of proteasome inhibitors (MG132 and PSI). Moreover, the crude extracts were submitted at SDS-PAGE and western-blot methods using specifics antibodies. In molecular experiments, RNA of both stages were amplifed with specific oligonucleotides to alfa 6 and beta 6 subunits of the 20S proteasome (proteolytic core) and ATPase 3 and S5a of the regulatory particle (19S). The genomic DNA was amplifed to all subunits, excepting of S5a subunit. Results show the presence of the 26S proteasome in proteolytic activities from S. venezulensis of the chymotrypsin-like and trypsin-like and the presence of the labeled bands by the antibodies, as well as molecular analysis of the subunits. However, new studies will be necessary to define the importance of these multienzymatic complex on the parasite biology / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5587_1.pdf: 1696084 bytes, checksum: cd6a790cc623fff1e18807d3c5d4b618 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / A Tuberculose (TB) é uma patologia cujo diagnóstico precoce e tratamento adequado são essenciais para a eficácia dos programas públicos de controle da doença, os quais buscam curar os doentes e evitar a transmissão da doença. O diagnóstico laboratorial envolve a baciloscopia realizada com auxílio da coloração de Ziehl- Neelsen, uma metodologia rápida, barata e acessível, com uma sensibilidade de 104 bacilos/ml e a cultura que é mais sensível mas cujo resultado pode demorar entre 9 a 45 dias. Para o diagnóstico de tuberculose espera-se que as técnicas de amplificação genéticas melhorem a velocidade, sensibilidade e especificidade para a detecção de micobactérias. Neste sentido foram objetos deste estudo o desenvolvimento de uma técnica molecular para diagnóstico de tuberculose paucibacilar e a caracterização genotípica de isolados de Mycobacterium tuberculosis (M.tb). Uma reação de heminested PCR voltada para o diagnóstico de tuberculose e utilizando como alvo, o marcador genético IS6110, foi elaborada a partir de criteriosa escolha de primers e condicões ideais de concentração dos primers e cloreto de magnésio e de temperaturas de anelamento. A sensibilidade da técnica foi de 30 fg e pode ser concluída em até 3 dias após a coleta de amostras biológicas para análise. Comparada com a PCR convencional, a heminested PCR aumenta a sensibilidade e especificidade, o que é importante, especialmente nas amostras biológicas paucibacilares. Os resultados da caracterização genotípica de 61 isolamentos de M.tb obtidos durante os anos de 2000 a 2002, possibilitaram através da técnica do Double Repetitive Elements-PCR (DREPCR) identificar cinco grupos de pacientes, designados I, II, III, IV e V com 4, 3, 6, 2 e 2 pacientes respectivamente, portadores de cepas com 100% de similaridade e apresentando respectivamente 5, 5, 1, 2 e 5 bandas na eletroforese em gel de agarose. As cepas com mesmo perfil de resistência a drogas apresentaram perfis genéticos distintos, exceto três do grupo I. A melhor correlação epidemiológica dos grupos foi a apresentada pelo grupo I. Três membros são da mesma familía, todos portadores de cepas resistentes a isoniazida e rifampicina. São três mulheres com diagnóstico de diabetes mellitus . O primeiro caso diagnosticado de TB nessas pacientes foi em 1999 e o segundo em 2000. O terceiro caso foi diagnosticado na filha desta última em 2002. O impacto da genotipagem nestes casos, foi a análise da dinâmica de transmissão e a imediata utilização de esquema terapêutico adequado para a filha, já que era conhecida a Artur Henrique Bach Diagnóstico e Genotipagem de M.tuberculosis resistência aos antimicrobianos de primeira escolha utilizados para o tratamento das outras duas pacientes

Orientador: Carmen Sílvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-24T23:18:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_TerezaCristinaLima_M.pdf: 2638948 bytes, checksum: 04c2e300a07fa9fae3ca1892ccb76175 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A doença de Huntington (HD) é uma afecção neurodegenerativa com padrão de herança autossômica dominante caracterizada por demência e movimentos involuntários. O início dos sintomas ocorre em tomo dos 40 e 50 anos de idade, progredindo até a morte em um período de cerca de tO'anos após o início da doença. A HD está associada a expansão trinucleotídica CAG presente na poção 5' do gene IT15. Nós investigamos a repetição CAG no gene IT15 em 44 indivíduos .brasileiros pertencentes a 34 famílias não relacionadas. Quarenta e dois desses pacientes apresentavam demência e ou movimentos invoIuntários, dois pacientes eram assintomáticos e pertenciam a uma família com um indivíduo afetado também genotipado. A média da idade de início dos sintomas foi de 39 anos. Um alelo CAG expandido foi encontrado em 32 indivíduos (76%) pertencentes a 25 famílias não relacionadas. Os alelos expandidos variaram de 43 a 73 unidades de repetição CAG e os alelos normais apresentaram uma variação de 18 a 26 unidades de repetição CAG nesses pacientes. Uma significativa correlação negativa foi encontrada entre a idade de início dos sintomas e o tamanho da expansão trinucleotídica CAG (r=O,6; p=O,OOOI); no entanto, o tamanho da repetição CAG expandida foi capaz de explicar somente 400-fo da variação encontrada na idade de início da doença (r=O.4). Além disso, nós genotipamos um total de 25 indivíduos pertencentes a uma grupo controle da população brasileira ( 50 alelos), sendo que o alelo normal apresentou uma variação de 16 a 33 unidades de repetição CAG. A porcentagem de heterozigozidade do alelo nomiaI na população brasileira controle foi de 88%. É importante notar que existe a possibilidade de superposição entre o tamanho do alelo nolmal e expandido, os chamados alelos intermediários. Na BD um dos fatores que contribuem para o aparecimento dos alelos intermediários é a presença do polimorfismo (CCG)n. Existem algumas evidências de que a freqüência desses alelos polimórficos é dependente da origem étnica dos indivíduos 9,25,26. Sendo assim para a caracterização da variação do alelo CCG polimórfico na população brasileira foram também analisados 25 indivíduos pertencentes ao controle normal (total de 50 alelos), cujo alelos variaram de 158pb a 185pb (média=167.7), demonstrando uma alta variabilidade polimórfica. Em conclusão nossos resultados mostraram que nem todos os pacientes com fenótipo "00" possuíam a expansão CAG no gene IT15. Como não foi encontrado, em nossa amostra, nenhum alelo de tamanho intermediário, não tivemos dificuldades para realizar o diagnóstico molecular. Com isso, verificamos que a confirmação molecular do diagnóstico na HD deve ser realizada em todos os casos suspeitos a fim de proporcionar subsídios para um aconselhamento genético adequado / Abstract: Not informed. / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Anete Pereira de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T01:37:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dias_SandraMarthaGomes_M.pdf: 7578353 bytes, checksum: 742e89735a431a4c7c34d2d5348b7bb4 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Com o objetivo de identificar e clonar um gene novo do DNA mitocondrial (DNAmt) de Coix lacryma-jobi L. (coix), utilizou-se a estratégia da hibridização heteróloga. Para tanto amplificou-se por PCR um fragmento correspondente a um quadro de leitura aberto ("open reading frame"-oif), denominado orf167, presente no DNAmt da briófita Marchantia polymorpha, e tido como um possível gene. Marcou-se radioativamente e utilizou-se esta sequência como sonda em hibridizações com o DNAmt de coix digerido com várias enzimas. Identificou-se um fragmento homólogo Bgl II/ Bgl II de 1,4 kb, o qual foi clonado em pBluescript. Elaborou-se o mapa de restrição deste fragmento e localizou-se nele a exata região de homologia com a orf167. A região de homologia estava presente em um fragmento interno de 0,5 kb Spe I / Pvu II. Este fragmento de 0,5 kb, homólogo à orf167, foi utilizado em hibridizações com o DNArmt de várias espécies de plantas superiores (alfafa, batata, coix, couve-flor, ervilha, milho e soja), verificando-se que o mesmo correspondia a uma seqüência altamente conservada. Este mesmo fragmento foi também hibridizado em membranas contendo o RNAmt tota de oix e de outras espécies de plantas superiores (milho e couve flor). Os resultados revelaram que ele é transcrito na mitocôndria das espécies analisadas. O fragmento original de 1,4 kb Bgl II / Bgl II foi divido em 5 subfragmentos, os quais foram clonados e sequenciados. Após a análise da homologia desta sequência com outras presentes nos bancos de dados, verificou-se que o fragmento de 1,4 kb Bgl II./ Bgl II, isolado do DNAmt de coix, contém um "cluster" gênico onde estão presentes o gene que codifica o tRNA serina (tRNAScr), um pseudo-gene provavelmente originado do tRNA fenilananina (tRNAPhe), os genes nad3 e rps12. Tais genes presentes em coix são muito similares àqueles presentes em trigo e milho, os quais se organizam também em um "c1uster" gênico muito similar ao existente em coix. Estudos de expressão realizados através de "Northern Blotting" e RT ¿PCR mostraram que os genes tRNA ser, nad3 e rps12 são transcritos, sendo os dois últimos cotranscritos. Vinte e três elones de cDNA dos transcritos dos genes nad3 e rps12 foram seqüenciados, e tiveram suas sequências comparadas com a seqüência genômica. Encontrou-se 21 sítios de edição nos transcritos do gene nad3 e 8 sítios nos transcritos do gene rps12. Após comparações entre a sequência de aminoácidos predita a partir do clone genômico e do cDNA, observou-se que todas as edições modificam o aminoácido especificado pelo codon onde O evento de edição foi detectado, tornando a sequência de aminoácidos editada diferente da prevista pela sequência genômica. Vinte sítios de edição no gene nad3, e 6 no gene rps12, alteram a identidade do codon, de modo a especificar um aminoácido mais conservado durante a evolução entre diferentes espécies vegetais. Os outros três sítios, sendo I no gene nad3 e 2 no gene rps12, acarretam mudanças raras, espécie-específicas e não conservativas. Todos os 23 elones de cDNA investigados estavam diferentemente editados, predominando os cDNAs com sítios parcialmente editados. Não foi encontrada nenhuma orientação preferencial (5' para 3', ou 3' para 5') para o processamento da edição. Discute-se os motivos do reconhecimento do gene nad3 de coix pela orf167 de M. polymorpha / Abstract: We have cloned and sequenced the nad3 and rps12 mithocondrial genes from Coix lacryma-jobi L., whose sequence were found to be similar to the corresponding genes in wheat and maize. In addition, we have indentified a tRNA Ser and a pseudo-tRNA genes on the 5¿ upstream of nad3, generating a locus organization which is identical to what has been observed in wheat and maize. The locus identification was performed with a heterologous hibridization using the mitochondrial probe orf167 from Marchantia polymorpha. The gene expression was analysed using NoI1hern hybridization and RT -PCR, indicating that nad3 and rps12 gene were cotranscribed in a 1.3 kb RNA molecule. Concernig the RNA editing, we have found 21 and 8 sites in the nad3 and rps12 genes respectively. In general terms, the observed coix mRNA editing has changed the codon identities in such a way that the NAD3- and RPS12- protein aminoacid sequence was kept closer to the corresponding ones in other organisms. However, we have detected three specie-specific editing sites which were not conservative. As for the editing processing, we have analysed 23 cDNA clones which showed different editing pattems. A predominance of partial editing was observed where the edited sites were randomly distributed. / Mestrado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Maria Sumiko Arita Matsuura / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:12:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barros_RosaMariaFernandesde_M.pdf: 3739995 bytes, checksum: e50e1ea90b4310df3e451677d4a70368 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Hemocianina do Gastropodo anfíbio Ampullaria canaliculata, da região do Pantanal Mato Grossense, mostrou grande similaridade com as hemocianinas de moluscos terrestres e marinhos, especialmente, com relação ao peso molecular e aos tipos de produtos de dissociação. A determinação do peso molecular da hemocianina de A. canaliculata determinado por cromatografia de exclusão molecular em coluna de Sephacryl S-400 mostrou somente um pico de eluição, tanto na hemolinfa total quanto na hemocianina em presença de Ca¿POT.2+¿ 20 mH e Mg¿POT.2+¿ 20 mH, estimado em torno de 7.5 x 10 'POT.6¿ Da. Hemocianina desionisada de A. canaliculata submetida a filtração em gel resultou na formação de três picos, que através do volume de eluição mostraram ser proteínas de unidade de peso molecular 7.5 x 10¿POT.6¿ Da, 1.0 x 10 Da e 3.2 x 10 5 Da, sugerindo ser espécies moleculares correspondentes a 1/1, 1/10 e 1/20 da proteína nativa. Com a hemolinfa total, recém coletada, foram realizadas experiências de equilíbrio com O2 diretamente, variando apenas os valores de pH, e obteve-se um valor de P50 = 3.5 mm Hg e nH = 2.3 em pH 8.2. O efeito de cátions divalentes sobre o estado de agregação de hemocianina de A. canaliculata, assim como os diferentes picos eluidos da coluna de Sephacryl S-400 são ilustradas por analises imunoeletroforeticas / Abstract: The functional properties of A. Canaliculata hemocyanins, in their ability to transpor oxygen, are very similar to several hemocyanins studie. In this snail the oxygen binding strength increases with increasing pH, exhibiting a normal Bohr shift. The oxygen binding to hemocyanins is also aífected by presence oí divalent cations. In this context, the two cations Ca¿POT.2+¿ and Mg¿POT.2+¿ act similarly with no changes in the the P and Bohr effect values. The oxygen curve using hemocyanin 50 free of divalent cations showed inconsistent data for P50 association and and nH values, suggesting the production of different dissociation behavior with pH variation. However, the hemolymph showed higher values of log P50 than the hemocyanin in presence of divalent cations. This phenomenum should be explained by the existence of dialyzable factors, not strongly associated withhemocyaninJ which does not affect cooperativity of the oxygen binding and Bohr affect. The A. canaliculata hemocyanin does not exhibit cooperative oxygen binding in the presence of EDTA since on treatment with EDTA to remove divalent cationsJ it dissociates. into several subunits as expected and shown by the immunoelectrophoretic analysis. The molecular weight of A. canaliculata hemocyanin was determined by gel filtration. The native hemolymph, as well as with hemacyanin in the presence of cations Ca¿POT.2+¿ and Mg¿POT.2+¿ showed Mw = 7.5 x 10 'POT.6¿ Da, 1.0 x 10 'POT.6¿ Da and 3.2 x 10 5 Da. However, for the preparation to the same hemocyanin dialyzed of Mw = 7.5 x 10 'POT.6¿ Da were obtained. The fractions eluted from Sephacryl S-400 column as well as effect of Ca¿POT.2+¿ and Mg¿POT.2+¿ on both the stability of hemocyanin and reversibility of products of dissociation caused by EDTA were illustrated by immunologic analysis / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Benedicto de Campos Vidal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T14:23:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_HernandesFaustinode_M.pdf: 3337541 bytes, checksum: 73a8433c9c7ec020963b7fe72a469863 (MD5) Previous issue date: 1989 / Resumo: o sistema quitinoso da concha resquicial de Loligo brasiliensis foi estudado através de eletroforese em poliacrilamida, de testes topoquímicos e da microscopia de polarização. O material mostra-se intensamente reativo aos xylidine ponceau, sirius rede picrosírius, bem como apresenta incrementos na birrefringincia e intenso dicroísmo linear quando examinados sob luz polarizada, o que demonstra a existência de ordenação molecular do componente protéico associado à quitina. O material responde positivamente aos Congo red e PAS e reage fracamente com o azul de alcian e o azul de toluidina. A eletroforese em poliacrilamida demonstrou a existencia de pelo menos 10 componentes glicoprotéicos associados de forma não covalente à quitina. Alguns destes componentes formam complexos estabilizados por pontes dissulfeto. Curvas de birrefringência de forma construídas para cortes histológicos demostraram a existincia de maiores cristalinidade e agregação lateral das fíbrilas de quitina após hidrolise alcalina, o que faz supor que as proteínas atuem mantendo certo afastamento entre os componentes fibrilares, atribuindo plasticidade ao sistema, além de reduzir sua susceptibilidade a hidratação e à degradação enzimatica / Abstract: The chitin system of Loligo brasiliensis pen was studied through electrophoresis, topochemical tests i}nd polarization microscop Pen sectionspresent intense reactivity to xylidine ponceau, sirius red and picrosirius stains, as well as exhibit increases in birefringence and conspicuous extrinsic linear dichroism under polarized light, what suggests on the existence of molecular ordering in the association of the protein moiet to chitin. 0positive responses to Congo red and PAS beside weak reaction to alcian blue and toluidine blue were a150 demonstrated. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis highlighted the presence of at least 10 gl_coprotein5 associated non-covalentl to chitin, some of them making up disulfide-bonded complexes. Form birefringence curves constructed with retardatlon measurements showed that hydrolised pen has higher crystallinity and lateral aggregation of chitin fibrils. This fact support lhe assumption that proteins act maintaining apart the fibrillar components and ascy"ibe plasticity and resistence to hidration and enzymatic degradation to this system / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Tese (livre-docencia) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Acompanha memorial / Made available in DSpace on 2018-07-16T02:15:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silveira_SineliRita_LD.pdf: 9008475 bytes, checksum: 8a7f1e099d81b5e958bf311bc07988b9 (MD5) Previous issue date: 1982 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed / Tese (livre-docencia) - Univer / Histologia / Livre-Docente em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Q. S. Tahin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T14:57:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pimentel_EdsonRosa_M.pdf: 2822903 bytes, checksum: 6a6c7fc98ef4735656cfee3755fa3d0a (MD5) Previous issue date: 1979 / Resumo: A preparação da particula 'F IND. 1¿ dos anfíbios estudados, foi possível a partir de preparação das mitocôndrias hepáticas solubilização da partícula 'F IND. 1¿ e purificação através de uma coluna de afinidade obtivemos uma purificação de 14-15 vezes e uma recuperação de 70-80%. O rompimento das mitocôndrias e consequente solubilização das partículas 'F IND. 1¿ foram acompanhadas através de microscopia eletrônica. Estudos sobre efeito do pH sobre a atividade enzimática, mostraram que a atividade da enzima se mantém mais ou menos constante em valores de pH entre 7,6 e 9,0. A ação inibitória de baixas temperaturas foi verificada, chegando a enzima a perder 70 a 80% de sua atividade quando deixada à temperatura a '4GRAUS¿C durante 1 hora. A importância do 'Mg POT. 2+¿ ficou tembém evidenciada para a partícula 'F IND. 1¿ de mitocôndrias hepáticas dos anfíbios estudados, sendo que a concentração de 'Mg POT. 2+¿ que melhor favoreceu a atividade enzimática foi 6mM, enquanto concentração de ATP mais favorável dói 8mM. Experimentos em que se analisou a variação da atividade específica da 'F IND. 1¿ em função de variadas proporções ATP/Mg, mostraram que a proporção ATP/Mg que proporciona maior atividade específica entre 1 e 2, enquanto ATP ou 'Mg IND. 2+¿ livre no meio de incubação causava inibição das atividades enzimática ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: A preparation of the 'F IND. 1¿ particle of various amphibians, was possible beginning with hepatic mitochondria, solubilizing and purifying the 'F IND. 1¿ particle by passing it through on affinity column (AH- sepharose ¿4B). Considering the affinity column step, we obtained a purification of 14-15 times and a possible recuperation of 70-80% for a single purification process. The rupture of the mitochondria and solubilization of the 'F IND. 1¿ particles were observed with the electron microscope. Comparing the enzymatic and the pH, the enzymatic activity was found to maintain constant for the interval of pH 7,6 to 9,0. the inhibiting effect of low temperature was investigated, attaining a loss of enzymatic activity of 70 to 80% when kept at a temperature of '4 GRAUS¿C for 1 hour. The presence of 'Mg POT. 2+¿ was also shown to be important for the activity of the 'F IND. 1¿ particle of amphibian hepatic mitochondria. The most favorable concentration of 'Mg POT. 2+¿ was established to be 6mM, while the most favorable concentration of ATP was 8mM. Experiments analising the specific activity of 'F IND. 1¿ in relation to various proportions of ATP/ Mg demonstrated greater specific activity between 1 and 2, while ATP or free 'Mg POT. 2+¿ in the incubation medium inhibited enzymatic activity ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Biologia Celular e Molecular / Mestre em Ciências Biológicas