Author: Lucie Jánská Název: Alkaloids of family Amaryllidaceae: genus Zephyranthes Diploma thesis Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové, Department of Pharmacognosy 2018, 75 p. The aim of this diploma thesis was to summarize all knowledge about alkaloids izolated from Zephyranthes plants of Amaryllidaceae family. It contains a detail overview of botanical charactericts of phytochemically studied plants of the genus Zephyranthes. Also the overview of alkaloids with bilogical activity was described. Within the genus Zephyranthes 10 species were studied phytochemically and 89 alkaloids were isolated from this plants. This alkaloids are divided in several structural groups. The lycorine-, haemanthamine-, galanthamine- and pancratistatine-type alkaloids occure the most frequently. Acetylcholinesterase-inhibitory, anticancer and antimalarial activity of the alkaloids was described like the most important. The most significant acetylcholinesterase- inhibitory activity was observed in alkaloids from galanthamine sctructural type. Anticancer activity was found the most in lycorine-, pancratistatine- and haemanthamine- type alkaloids. The most notable antimalarial activity was observed in lycorine- and heamanthamine- type alkaloids. Keywords Zephyranthes, Amaryllidaceae,...

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Botany Candidate: Kamila Lipovská Supervisor: doc. Ing. Lucie Cahlíková, Ph.D. Title of Diploma thesis: Preparation of lycorine derivatives and their biological activity The plants of the Amaryllidaceae family are one of the most important sources of biologically active alkaloids. Lycorine, a phenanthridine alkaloid, isolated from various species of the Amaryllidaceae plant family, has attracted considerable attention due to its promising biological activities. Specifically, its anticancer properties have been evaluated in vitro and in vivo in various preclinical models of human cancers. Further biological effects manifested by lycorine are: antiviral, antibacterial, antifungal, antiplasmodial, anti-oxidant, anti-inflammatory and insect antifeedant effects, as well as ascorbic acid biosynthesis and RNA inhibitory activity. So far, lycorine was used for preparation of many derivatives by modification of different functional groups in its molecule, and screened for a various biological activities such as anticancer activity, inhibition of cholinesterases, antiplasmodial, antitrypanosomal, antiviral and anti-Trichomonas vaginalis activity. The present work deals with the preparation of lycorine derivatives and their...

Author: Adéla Hodulová Title: Alkaloids of Amaryllidaceae family, genus Nerine Diploma thesis Charles University, Faculty of pharmacy in Hradec Králové, Department of Pharmaceutical botany 2018, 51 p. The aim of this diploma thesis was to summarize up the findings about alkaloids which where isolated from genus Nerine plants of Amaryllidaceae family. There was introduced a botanical characteristic of the phytochemical studied species of the genus Nerine. The most studied species was Nerine bowdenii. All the knowledges about mentioned alkaloids were sum up. Ten species have been phytochemical studied out of the genus Nerine until now. In total, 40 alkaloids were isolated from these plants. Alkaloids which where isolated from the Nerine are divided into several structural types. Anticancer, acetylcholinesterase-inhibitory of the alkaloids were described. The biological activity is connected with their stucture. The most significant anticancer activity was observed in alkaloids from crinine- and lycorine type . Acetylcholinesterase-inhibitory activity was pronounced the most in crinine-type alkaloids. Keywords: Nerine, Nerine bowdenii, Amaryllidaceae, alkaloids

A pesquisa de substâncias biologicamente ativas, advinda principalmente de plantas, tem levado a descoberta de moléculas clinicamente benéficas. A família Amaryllidaceae é conhecida por sintetizar alcalóides biologicamente ativos, principalmente do grupo tetraisoquinolínico. Estudos têm demonstrado que a atividade biológica destes vegetais está relacionada com a presença deste grupo de metabólitos secundários. No Rio Grande do Sul, é encontrado o gênero Hippeastrum, pertencente a família Amaryllidaceae. Neste trabalho, realizou-se a investigação preliminar de alcalóides dos extratos de Hippeastrum papilio, coletada na região serrana do estado. Foram isoladas 12 substâncias, nas quais 9 apresentam carcaterísticas químicas de alcalóides de Amaryllidaceae. Estudos preliminares de CLAE-EM e CG-EM apontam para a existência de alcalóides de núcleos licorina e haemantamina, além de núcleo galantamina, em menor quantidade. Estas análises também mostram a possibilidade de estruturas inéditas. Os extratos enriquecidos em alcalóides de Hippeastrum papilio demonstraram uma grande capacidade de inibição da enzima acetilcolinesterase, pelo método da bioutografia em cromatoplaca. Além disso, foi realizada a análise comportamental do alcalóide montanina, previamente isolada de Hippeastrum vittatum Este alcalóide foi avaliado na tarefa de reconhecimento de objeto, com administração intrahipocampal, testado 24 horas pós-treino (memória de longa duração). Obteve-se curva dose-resposta para o alcalóide, com dose pró-cognitiva estatisticamente significante de 1μg/μl. Esta mesma dose foi avaliada na mesma tarefa para obtenção de curva temporal. Montanina demonstrou atividade pró-cognitiva na mesma tarefa e testada 24 horas pós-treino, em administração imediatamente pós-treino, 180 minutos pós-treino, mas não em 360 min pós-treino. O alcalóide montanina também foi avaliado quanto ao perfil de inibição da enzima acetilcolinesterase, utilizando método de ultravioleta. Obteve-se inibição da enzima em concentrações de 10 μM, 100 μM e 1 mM. Os resultados obtidos neste trabalho apontam para a necessidade de continuação da investigação química de Hippeastrum papilio, motivada pelo grande potencial de inibição da enzima acetilcolinesterase e por possibilidade de isolamento de estruturas inéditas. Além disso, foi confirmado um grande potencial pró-cognitivo do alcalóide montanina, demonstrado comportamentalmente, além de inibir a enzima acetilcolinesterase, atividade esta necessária e importante para que uma substância seja candidata à terapia da Doença de Alzheimer. / A search for biologically active substances in plants has led to the discovery of clinically beneficial molecules. The family Amaryllidaceae is known to synthesize biologically active alkaloids, principally of the tetraisoquinolinic group. Studies have shown that the biological activity of these plants is due to the presence of these secondary metabolites. The Hippeastrum genus, belonging to the Amaryllidaceae family, is found in Rio Grande do Sul. A preliminary investigation of alkaloids from extracts of Hippeastrum papilio, collected in the mountain region of the Rio Grande do Sul was done in this work. Twelve substances were isolated, in which nine have chemical profile of Amaryllidaceae alkaloids. Preliminary studies with HPLC-MS and GC-MS showed the existence of lycorine and haemantamine type alkaloids, as well as galantamine type alkaloids in a lower quantity. These analysis also showed a possibile presence of unknown structures. The extracts, enriched in alkaloids of Hippeastrum papilio, demonstrated a great ability to inhibit the acetylcholinesterase enzyme by a rapid thin layer chromatography bioautographic method. Furthermore, it was done a behavior analysis of montanine, previously isolated from Hippeastrum vittatum This alkaloid was evaluated in recognition object task with intrahippocampal administration and tested for 24 hours postrainig (long term memory). There was found a doseeffect curve of montanine with cognitive-enhanced dose at 1μg/μl. This dose was evaluated in the same task for temporal-curve. Montanine showed procognitive activity in immediately postraining administration and 180 minutes postraining but not with 360 min postraining in the same task. The acetylcholinesterase inhibition profile of montanine alkaloid was also evaluated by a ultraviolet method. The enzyme was inhibited in concentrations of 10 μM, 100 μM and 1 mM of montanine. The results obtained in the present study show a need for further chemical investigation on Hippeastrum papilio due to its large potential for inhibition of the acetylcholinesterase and isolation of potentially new structures. Moreover, these results confirm the great pro-cognitive potential of montanine, behaviorally demonstrated, as well as its ability to inhibit the acetylcholinesterase enzime, which makes the alkaloid a candidate substance for the treatment of Alzheimer's Disease.

Submitted by NATHÁLIA ARIANE THOMAZELLA null (nathitwo@yahoo.com.br) on 2016-03-21T17:37:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertação (Nathália).pdf: 4045530 bytes, checksum: e9fac0b681109a5136d286ff4f22de4e (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-03-22T18:46:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 thomazella_na_me_araiq_par.pdf: 1398038 bytes, checksum: 79992833b82177cdd139f83ffde957e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T18:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thomazella_na_me_araiq_par.pdf: 1398038 bytes, checksum: 79992833b82177cdd139f83ffde957e4 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A descoberta das propriedades antitumorais do composto cis-[PtCl2(NH3)2], conhecido como cisplatina, colocou o uso de compostos de coordenação em evidência nas aplicações medicinais. Desde então, a comunidade cientifica se empenha para encontrar compostos de coordenação que possuam um espectro de atividade mais amplo e que apresentem menos efeitos adversos do que a cisplatina. A escolha do paládio como centro metálico se baseia no fato de possuírem similaridade com a química de coordenação da platina. O trabalho apresenta quatro novos complexos de Pd(II), sintetizados partindo-se do precursor [PdCl2(MeCN)2] com o ligante N-Metil-2-[4-(4-hidróxifenil)butan-2-ilideno]hidrazina-1-carbotioamida (FMTSC), trifenilfosfina e os íons Cl-, I-, SCN- e N3-, formando assim os complexos [PdCl(FMTSC)(PPh3)]Cl (1), [PdI(FMTSC)(PPh3)]Cl (2), [Pd(SCN)(FMTSC)(PPh3)]Cl (3) e [Pd(N3)(FMTSC)(PPh3)] (4). Todos os complexos foram isolados, purificados e caracterizados por análise elementar, espectroscopia vibracional na região do infravermelho, ressonância magnética nuclear de 1D e 2 D, análise termogravimétrica e espectrometria de massa. Os dados experimentais sugerem que, em todos os casos, a coordenação do ligante FMTSC ocorreu através do átomo de enxofre do grupo tiocarbonila e pelo nitrogênio azometínico. Os dados de ressonância magnética nuclear para os complexos 1-3 apresentam o sinal do hidrogênio hidrazínico, mostrando coordenação com o ligante neutro. Já no complexo 4, a ausência deste sinal mostra a desprotonação do ligante. Em todos os compostos foi confirmada a presença de dois conjuntos de sinais para os núcleos de 1H e 13C, indicando a presença de duas espécies em solução (a/b). Os complexos tiveram sua citotoxicidade investigada, in vitro, pelo método do MTT frente linhagem de células tumorais MCF-7 – adenocarcinoma mamário humano, com resultados promissores para os complexos que mostraram valores de IC50 na faixa 0,73-1,28 µM contra 19,60 µM da cisplatina. / The discovery of the antitumor properties of the compound cis- [PtCl2(NH3)2], known as cisplatin, put in evidence the use of coordination compounds in evidence in medicinal applications. Since then, intense efforts have been undertaken to find coordination compounds that have a broader spectrum of activity with less adverse effects than cisplatin. The choice of palladium as the metal center is based on the fact that it has similarity with the platinum coordination chemistry. This work presents four new complexes of Pd (II), synthesized starting from the precursor [PdCl2(MeCN)2] with ligand N-Methyl-2-[4-(4-hydroxy-phenyl)butan-2-ylidene]hydrazine-1-Carbothioamide (FMTSC), triphenylphosphine and the ions (Cl-, I-, SCN- and N3-), thus forming the complex [PdCl(FMTSC)(PPh3)]Cl (1), [PDI(FMTSC)(PPh3)]Cl (2), [Pd(SCN)(FMTSC)(PPh3)]Cl (3) and [Pd(N3)(FMTSC)(PPh3)] (4). All complexes were isolated, purified and characterized by elemental analysis, infrared vibrational spectroscopy, 1D and 2D nuclear magnetic resonance, thermogravimetric analysis and mass espectrimetry. The experimental data suggest that, in all cases, the FMTSC coordinates through the sulfur atom of the thiocarbonyl group and the azomethynic nitrogen. Nuclear magnetic resonance spectra for complexes 1-3 show the presence of the hydrazinic hydrogen signal, indicating that the ligand behaves as neutral ligand coordination with the neutral ligand. For complex 4, the absence of this signal suggests the deprotonation of the ligand. In all the compounds it was verified the presence of two sets of signals for 1H and 13C nuclei, indicating the existence of two species in solution (a/b). The in vitro cytotoxicity of the complexes was investigated, by MTT method against line of MCF-7 tumor cells - human mammary adenocarcinoma, with promising IC50 values in the range 0,73-1,28 uM against 19,60 uM of cisplatin.

A pesquisa de substâncias biologicamente ativas, advinda principalmente de plantas, tem levado a descoberta de moléculas clinicamente benéficas. A família Amaryllidaceae é conhecida por sintetizar alcalóides biologicamente ativos, principalmente do grupo tetraisoquinolínico. Estudos têm demonstrado que a atividade biológica destes vegetais está relacionada com a presença deste grupo de metabólitos secundários. No Rio Grande do Sul, é encontrado o gênero Hippeastrum, pertencente a família Amaryllidaceae. Neste trabalho, realizou-se a investigação preliminar de alcalóides dos extratos de Hippeastrum papilio, coletada na região serrana do estado. Foram isoladas 12 substâncias, nas quais 9 apresentam carcaterísticas químicas de alcalóides de Amaryllidaceae. Estudos preliminares de CLAE-EM e CG-EM apontam para a existência de alcalóides de núcleos licorina e haemantamina, além de núcleo galantamina, em menor quantidade. Estas análises também mostram a possibilidade de estruturas inéditas. Os extratos enriquecidos em alcalóides de Hippeastrum papilio demonstraram uma grande capacidade de inibição da enzima acetilcolinesterase, pelo método da bioutografia em cromatoplaca. Além disso, foi realizada a análise comportamental do alcalóide montanina, previamente isolada de Hippeastrum vittatum Este alcalóide foi avaliado na tarefa de reconhecimento de objeto, com administração intrahipocampal, testado 24 horas pós-treino (memória de longa duração). Obteve-se curva dose-resposta para o alcalóide, com dose pró-cognitiva estatisticamente significante de 1μg/μl. Esta mesma dose foi avaliada na mesma tarefa para obtenção de curva temporal. Montanina demonstrou atividade pró-cognitiva na mesma tarefa e testada 24 horas pós-treino, em administração imediatamente pós-treino, 180 minutos pós-treino, mas não em 360 min pós-treino. O alcalóide montanina também foi avaliado quanto ao perfil de inibição da enzima acetilcolinesterase, utilizando método de ultravioleta. Obteve-se inibição da enzima em concentrações de 10 μM, 100 μM e 1 mM. Os resultados obtidos neste trabalho apontam para a necessidade de continuação da investigação química de Hippeastrum papilio, motivada pelo grande potencial de inibição da enzima acetilcolinesterase e por possibilidade de isolamento de estruturas inéditas. Além disso, foi confirmado um grande potencial pró-cognitivo do alcalóide montanina, demonstrado comportamentalmente, além de inibir a enzima acetilcolinesterase, atividade esta necessária e importante para que uma substância seja candidata à terapia da Doença de Alzheimer. / A search for biologically active substances in plants has led to the discovery of clinically beneficial molecules. The family Amaryllidaceae is known to synthesize biologically active alkaloids, principally of the tetraisoquinolinic group. Studies have shown that the biological activity of these plants is due to the presence of these secondary metabolites. The Hippeastrum genus, belonging to the Amaryllidaceae family, is found in Rio Grande do Sul. A preliminary investigation of alkaloids from extracts of Hippeastrum papilio, collected in the mountain region of the Rio Grande do Sul was done in this work. Twelve substances were isolated, in which nine have chemical profile of Amaryllidaceae alkaloids. Preliminary studies with HPLC-MS and GC-MS showed the existence of lycorine and haemantamine type alkaloids, as well as galantamine type alkaloids in a lower quantity. These analysis also showed a possibile presence of unknown structures. The extracts, enriched in alkaloids of Hippeastrum papilio, demonstrated a great ability to inhibit the acetylcholinesterase enzyme by a rapid thin layer chromatography bioautographic method. Furthermore, it was done a behavior analysis of montanine, previously isolated from Hippeastrum vittatum This alkaloid was evaluated in recognition object task with intrahippocampal administration and tested for 24 hours postrainig (long term memory). There was found a doseeffect curve of montanine with cognitive-enhanced dose at 1μg/μl. This dose was evaluated in the same task for temporal-curve. Montanine showed procognitive activity in immediately postraining administration and 180 minutes postraining but not with 360 min postraining in the same task. The acetylcholinesterase inhibition profile of montanine alkaloid was also evaluated by a ultraviolet method. The enzyme was inhibited in concentrations of 10 μM, 100 μM and 1 mM of montanine. The results obtained in the present study show a need for further chemical investigation on Hippeastrum papilio due to its large potential for inhibition of the acetylcholinesterase and isolation of potentially new structures. Moreover, these results confirm the great pro-cognitive potential of montanine, behaviorally demonstrated, as well as its ability to inhibit the acetylcholinesterase enzime, which makes the alkaloid a candidate substance for the treatment of Alzheimer's Disease.

Orientador: Aderbal Farias Magalhães / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-04T22:06:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AndreCamargode_D.pdf: 15179884 bytes, checksum: 4bc1c5ef8b25f0f2ba61174030e69576 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O estudo fitoquímico dos extratos das raízes de Harleyodendron unifoliolatum e de Holocalyx balansae, ambas pertencentes à família Leguminosae, resultou no isolamento de 9 isoflavonóides (4 pterocarpanos, 2 isoflavanas e 3 isoflavanonas) e um fitoesteróide sendo que 7 isoflavonóides são descritos pela primeira vez. As estruturas moleculares foram elucidadas através de análises espectrais (UV, IV, RMN e EMAR) na qual a espectroscopia RMN foi explorada através de RMN H, RMN C (incluindo DEPT 90° e 135°), RMN-2D (gCOSY, HSQC, gHMBC) e experimentos NOESY-1D. A atividade antimicrobiana dos isoflavonóides (1-9) foi examinada através de bioautografia contra oito espécies de fungos (Alternaria alternata, Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger, Candida albicans, Cladosporium cladosporioides, Fusarium oxysporum, Penicillium funiculosum e Rhizopus oryzae) e seis espécies de bactérias (Bacillus subtilis, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Salmonella tiphymurium, Staphilococcus aureus e Streptococcus mutans), em que encontrou-se que 1 foi ativo contra os fungos Alternaria alternata e Penicillium funiculosum; 2 foi ativo contra a bactéria Escherichia coli e contra o fungo Aspergillus niger; 3 e 6 foram ativos contra a bactéria Bacillus subtilis e os fungos Aspergillus fumigatus e Rizophus orizae; 5 e 7 foram ativos contra as bactérias Bacillus subtilis e Staphilococcus aureus e o fungo Penicillium funiculosum. O perfil flavonoídico fornecido pelas espécies analisadas neste trabalho corrobora com sua alocação na tribo Swartzieae, como foi recentemente proposto por A.M.G.A. Tozzi baseado em morfologia. / Abstract: The phytochemical study of roots extracts from Harleyodendron unifoliolatum and Holocalyx balansae, both belonging to the family Leguminosae, resulted in the isolation of nine isoflavonoids (four pterocarpans, two isoflavans and three isoflavanones) and one phytosteroid being that seven isoflavonoids are now described for the first time. The molecular structures were elucidated through spectra analysis (UV, IV, NMR and HREIMS) when NMR spectroscopy was explored trough H NMR, C NMR (including DEPT 90° and 135°), 2D-NMR (gCOSY, HSQC, gHMBC) and NOESY-1D experiments. The antimicrobial activity of the isoflavonoids (1-9) was screened through bioautography against eight species of fungi (Alternaria alternata, Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger, Candida albicans, Cladosporium cladosporioides, Fusarium oxysporum, Penicillium funiculosum and Rhizopus orizae) and six species of bacteria (Bacillus subtilis, Escherichia coli, Micrococcus Iuteus, SalmoneIla tiphymurium, Staphilococcus aureus and Streptococcus mutans), when it was found that 1 was active against fungi Alternaria alternata and Penicillium funiculosum; 2 was active against bacteria Escherichia coli and fungus Aspergillus niger; 3 and 6 were active against bacteria Bacillus subtilis and fungi Aspergillus fumigatus and Rizophus orizae, 5 and 7 was active against bacteria Bacillus subtilis and Staphilococcus aureus and fungus Penicillium funiculosum. The flavonoid profile furnished by the plant species analysed in this work corroborate with their allocation in the tribe Swartizieae as it has been recently propose by A.M.G.A. Tozzi based on morphology. / Doutorado / Quimica Organica / Doutor em Quimica

O presente trabalho enfocou o isolamento, a análise da atividade biológica e a caracterização dos componentes majoritários do Photogem® através de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), espectroscopia eletrônica na região do ultravioleta-visível (UV-Vis) e espectrometria de massa. O Photogem® é um derivado de hematoporfirina usado como fotossensibilizador em Terapia Fotodinâmica (TFD). O derivado de hematoporfirina é composto por uma mistura de monômeros, dímeros e oligômeros mas as estruturas químicas destes componentes ainda não estão bem caracterizadas. Empregou-se extração em fase sólida para limpeza e fracionamento dos componentes do Photogem®. As três frações principais foram separadas de acordo com suas respectivas polaridades. Em seguida, testes preliminares de atividade biológica foram desenvolvidos com as respectivas frações do Photogem® em células tumorais (HEp-2) e normais (VERO). A fração 2 apresentou citotoxicidade cinco vezes maior do que o Photogem® tanto nas células tumorais quanto nas células normais. Os componentes majoritários do Photogem® foram isolados por meio de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e analisados por espectroscopia eletrônica na região do ultravioleta-visível (UV-Vis) e por espectrometria de massa. O componente que corresponde à fração 1 pode ser atribuído à hematoporfirina IX em função do seu espectro de absorção eletrônica (banda de Soret em 396nm e bandas Q em 497, 531, 568 e 619nm), seu coeficiente de absortividade molar ((1,30±0,07)x105 cm-1 mol-1 L) e seu espectro de massa (íon pseudomolecular em m/Z 599Da). É importante mencionar que este trabalho proporcionou a elaboração de um procedimento acessível à maioria dos laboratórios brasileiros no que se refere a purificação, separação, isolamento e caracterização das frações constituintes do Photogem®, sendo uma contribuição relevante para o avanço da TFD no Brasil. As etapas da metodologia completa são comentadas e discutidas em detalhes. / The present work focused the isolation, the biological activity analysis and the characterization of the major components of Photogem® through High Performance Liquid Chromatography (HPLC), UV-Vis electronic absorption spectroscopy (UV-Vis) and mass spectrometry. Photogem® is a hematoporphyrin derivative used as photosensitizer in Photodynamic Therapy (PDT). The hematoporphyrin derivative is composed by a mixture of monomers, dimers and oligomers but the chemical structures of these components are not well-characterized yet. It was employed solid phase extraction to clean-up and fractionation of the Photogem® components. Three principal fractions was separated as function of their respective polarities. Subsequently, initial biological tests were developed with the respective Photogem® fractions in tumoral (Hep-2) and normal (VERO) cells. Fraction 2 presented citotoxicity approximately 5-fold higher than Photogem® as in tumoral as in normal cells. The major components of Photogem® were isolated by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and analyzed by UV-Vis electronic absorption spectroscopy (UV-Vis) and mass spectrometry. The component that corresponds to fraction 1 can be assigned to hematoporphyrin IX as function of its electronic absorption spectrum (Soret band in 396nm and Q bands in 497, 531, 568 and 619nm), its molar absortivity coefficient ((1,30?0,07)x105 cm-1 mol- 1 L) and its mass spectrum (pseudomolecular ion in m/z 599Da). It is important to mention that this work provided the elaboration of an accessible procedure to the most of the brazilian laboratories regarding purification, separation, isolation and characterization of the constituent fractions of Photogem®, being a relevant contribution to the advancement of PDT in Brazil. The steps of the complete methodology are commented and discussed in details.

Mesmo antes do advento da escrita, o homem já buscava na natureza a cura para suas doenças. Dentre as diferentes classes de produtos naturais usados para esse fim, destaca-se a dos alcalóides, por exibir relevante diversidade estrutural e farmacológica, e que tem como fonte importante o gênero Aspidosperma, do qual foram isolados alcalóides que têm sido usados nas terapias atuais. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo investigar os alcalóides obtidos a partir de diferentes partes de duas espécies ainda pouco exploradas: Aspidosperma ramiflorum e Aspidosperma tomentosum quanto à sua composição e atividades antifúngica, antimicrobiana e antitumoral. Foram identificados através de Cromatografia à Gás acoplada à Espectrometria de Massas (CG-EM) e Ressonância Magnetica Nuclear os alcalóides beta-ioimbina, nos pericarpos e arilos de A. ramiflorum, uleína, nas folhas, ramos e sementes de A. tomentosum, além de quebrachamina e razinilama, nos arilos e sementes dessa espécie. Adicionalmente, com base na literatura e nos resultados das análises por CG-EM verificou-se em A. tomentosum a presença de desmetileno-oxa-uleína, nas folhas, de eburnamonin-19-ona nos ramos e de di-hidro-razinilama, de aspidospermidina e também de di-hidro-razinilama e de 1-acetil-17-metóxi-aspidospermidina nas sementes e arilos dessa mesma espécie. Nenhum dos extratos de alcalóides totais ou alcalóides isolados apresentou atividade antibacteriana relevante. Verificou-se atividade antitumoral em extratos de alcalóides dos pericarpos de A. ramiflorum e dos ramos, folhas e arilos de A. tomentosum. Observou-se ainda atividade antifúngica em todos os extratos de alcalóides ensaiados, além de atividade específica contra isolados de Criptococcus neoformans resistentes ao fluconazol para os alcalóides quebrachamina e beta-ioimbina. O extrato de alcalóides totais das folhas de A. tomentosum, além da atividade frente a essas leveduras, também se mostrou ativo frente a duas espécies de Candida (C. krusei e C. parapsilosis). Concluiu-se a partir dos resultados obtidos que as duas espécies estudadas podem ser consideradas fontes promissoras de alcalóides que poderão ser utilizados como modelos para novos fármacos antifúngicos e antitumorais. / Even before the advent of writing, man already searched the nature for the cure of his illnesses. Among the different classes of natural products used for this purpose, monoterpenoid indole alkaloids exhibit large structural and pharmacological diversities and these compounds are commonly found in the Aspidosperma genus. In this context, the present work had as main goals to investigate the alkaloids from different parts of two poorly studied species, Aspidosperma ramiflorum and Aspidosperma tomentosum, regarding their composition and antibacterial, antifungal, and antitumoral activities. Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry (GC-MS) and Nuclear Magnetic Ressonance analysis allowed the identification of the following alkaloids: beta-yohimbine, in the pericarp and arils of A. ramiflorum; uleine, in leaves, branches and seeds of A. tomentosum; quebrachamine and rhazinilam, in the arils and seeds of the same species. Moreover, based on literature data and the results of the GC-MS analysis was characterized in A. tomentosum the presence of oxo-uleine, in the leaves and stems, eburnamonine, in the stems, and rhazinilam, aspidospermidine, dihydrorhazinilam and 1-acetyl-17-methoxy-aspidospermidine like alkaloids in the seeds and arils. Neither crude alkaloid extracts nor isolated alkaloids presented a relevant antibacterial activity. An antitumoral activity could be detected in crude alkaloids extracts from pericarps of A. ramiflorum and from stems, leaves and arils of A. tomentosum. On the other hand, antifungal activity was observed in all crude alkaloid extracts assayed, besides a specific activity of the alkaloids quebrachamine and beta-yohimbine against fluconazol resistant Criptococcus neoformans. Additionally, it was observed that crude alkaloid extract from leaves of A. tomentosum was also active against two Candida species (C. krusei e C. parapsilosis), as well as to the C. neoformans isolate. From these results we can conclude that the two studied species has to be considerated as promising sources for antifungal and antitumor alkaloids to be used as models to design new drugs.

Orientador: Léa Rodrigues Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T16:19:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Collaco_RitadeCassiadeOliveira_M.pdf: 3001453 bytes, checksum: ea83fa3506989e7f90775d8ab6cf742a (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Venenos de serpentes botrópicas são caracterizados pela indução de extenso dano local associado a feitos sistêmicos. Bothrops fonsecai é uma serpente de distribuição geográfica restrita das regiões montanhosas de Mata Atlântica cujo veneno é pobremente estudado. Recente estudo proteômico identificou que esse veneno possui principalmente metaloproteases, fosfolipases A2, Lectinas tipo C e serinoproteases. Ensaios experimentais utilizando antiveneno botrópico comercial para neutralizar as atividades biológicas de venenos botrópicos possibilitam não somente respostas de cunho clínico (tratamento de acidentes), mas também se constitui em uma valiosa ferramenta farmacológica para avaliar a existência de diferenças na composição dos diversos venenos através da reatividade cruzada entre veneno e antiveneno. Levando em consideração esses fatos, este trabalho teve como objetivo estudar a toxicidade do veneno de B. fonsecai através da atividade bloqueadora sobre a junção neuromuscular, atividade miotóxica, hemorrágica, edematogênica e coagulante assim como a sua caracterização bioquímica. A neutralização dessas atividades por antiveneno botrópico comercial e a comparação das ligações antígeno:anticorpo (veneno:antiveneno) entre B. fonsecai e os antivenenos botrópico comercial e específico usando SE-HPLC e immunoblotting também foram avaliadas. O veneno de B. fonsecai apresentou atividade fosfolipásica, sendo essa provavelmente a maior responsável pelo bloqueio neuromuscular e miotoxicidade, além de ser uma das mediadoras da atividade edematogênica; a inibição parcial dessa atividade pelo antiveneno comercial corrobora com a neutralização parcial dos efeitos na junção neuromuscular e redução da atividade edematogênica, já a neutralização total da atividade miotóxica demonstra que as PLA2 catalíticas podem não ser as principais responsáveis pela miotoxicidade. Embora o veneno apresente metaloproteinases P-I e P-III, a atividade proteolítica não demonstrou-se marcante in vitro, diferente do ensaio de atividade hemorrágica (induzida principalmente por essas enzimas e que foi completamente inibida pelo antiveneno comercial) o que leva a crer que o ensaio enzimático esteja subestimando essa atividade. O veneno exibiu atividades esterásica e coagulante que são normalmente causadas por serinoproteases e ambas foram inibidas pelo antiveneno botrópico comercial, em menor grau na proporção 5:1 (recomendada pelo fabricante) que a obtida em 5:2. O antiveneno botrópico comercial apresentou reatividade-cruzada em todas as atividades testadas, porém sua afinidade com o veneno de B. fonsecai demonstrou-se baixa ressaltando que o veneno de B. fonsecai possui composição diferente do veneno das serpentes utilizadas na produção do antiveneno comercial, em especial as fosfolipases catalíticas, metaloproteinases P-I e serinoproteases / Abstract: Bothropic snake venoms are characterized for a marked local damage associated to systemic effects. Bothrops fonsecai is a Brazilian pit viper of restrict distribution (Atlantic Forest at high altitude regions) and its venom has been poorly studied but is known it has phospholipases A2, metalloproteases (P-I and P-III) and serine proteases. Experimental assays using commercial bothropic antivenom to neutralize the bothropic venom activities allows clinical responses (snakebites treatment) and also is a pharmacological tool to evaluate different venoms composition through venom:antivenom cross-reactivity. Thinking in all this, the aim of this work were the B. fonsecai venom toxicity analysis through the in vitro neuromuscular junction action, the myotoxic, hemorrhagic, edema-forming and coagulant activities, as well its biochemical characterization. The neutralization of those activities by the commercial bothropic antivenom and the comparison of venom:antivenom bindings (Bothrops fonsecai venom : Commercial and specific antivenoms) by SE-HPLC and immunoblotting were also evaluated. B. fonsecai venom had a high phospholipasic activity and this probably is the major responsible for neuromuscular blockade and miotoxicity caused by this venom. This activity is also one of edema-forming activity mediator (with metalloproteases P-I). The partial inhibition of this activity with both proportions (5:1 and 5:2) corroborates the partial neuromuscular blockade and edema neutralization; in contrast total the inhibition of miotoxicity allows us to suppose that the catalytic PLA2 are not the major responsible for the miotoxicity. The venom also showed a low metalloprotease activity (caused principally by P-I once is more abundant on this venom) and was not significantly inhibited by commercial bothropic antivenom at both proportions; these enzymes (especially P-III) also induced hemorrhage totally inhibited by commercial bothropic antivenom. The esterase and coagulant activities of this venom are caused mainly by serine-proteases; the commercial antivenom neutralization was more potent at 5:2 than 5:1 proportion. The commercial antivenom presented cross-reactivity in all tested activities but its low affinity with B. fonsecai venom indicates that the venom composition is a quite different than the composition of snake venoms used to produce the commercial antivenom, specially catalytic phospholipases, metalloproteases P-I and serine proteases / Mestrado / Farmacologia / Mestra em Farmacologia