Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-24Bitstream added on 2014-06-13T18:41:59Z : No. of bitstreams: 1 silva_hf_dr_fmvz.pdf: 909995 bytes, checksum: 5454378909693619c7d4f23b8ab3dacb (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Avaliou-se o efeito de níveis nutricionais adequados ou insuficientes em cobre (Cu) ou zinco (Zn) sobre a resposta imune humoral e hemograma de bezerros Nelore, submetidos à vacinação contra C/ostridium chauvoei. O grupo Controle (n=10) foi composto por bezerros cujas mães receberam nutrição mineral adequada. O grupo -Zn (n=10), e o -Cu (n=10) foram formados por bezerros nascidos de vacas mantidas em dieta insuficiente em Zn e Cu respectivamente. Estes bezerros foram acompanhados até os seis meses de idade, recebendo a mesma suplementação mineral de suas mães. Nestes primeiros seis meses de vida foram medidos os títulos de anticorpos anti-Clostridium chauvoei recebidos via colostro e os niveis de superóxido dismutase eritrocitária. Aos 150 dias de vida estes bezerros tiveram fragmentos de tecido hepático colhidos para análise de Cu e Zn. Aos 180 dias de vida os bezerros receberam vacina contra Clostridium chauvoei, e 36 dias após, receberam reforço vacinal. Foram então medidos os níveis séricos de Cu e Zn (três momentos), títulos de anticorpos em resposta à vacinação (cinco momentos) e hemograma (14 momentos). Apesar de não terem sido obtidos níveis hepáticos de Cu indicativos de deficiência, foram observadas diferenças significativas destes níveis de Cu entre os três grupos (-Zn>Controle>-Cu). Tais diferenças se refletiram em diferenças significativas entre os títulos de anticorpos (Controle>- Zn>-Cu aos 21 dias após a vacinação e 15 dias após o reforço ) e algumas variáveis do hemograma dos diferentes grupos, durante os momentos relacionados ao reforço vacinal (volume globular, leucócitos, neutrófilos, monócitos e eosinófilos). / This research aims to assess the effects of copper and zinc insufficient nutritional levels on the humoral immune response of Nelore calves, submitted to Clostridium chauvoei vaccination. The Control Group (n=10) was composed of calves whose mothers received adequate mineral nutrition. The calves of Group -Zn (n=10) and Group -Cu (n=10) were born, respectivelly, from cows under insufficient Zn or Cu nutrition. These calves were accompanied until six months of life, having access to the same mineral supplementation of their mothers. In these calves' first six months of life the titers of anti-Clostridium chauvoei antibodies, received via colostrums, were measured by ELISA assay. At 150 days old, these calves had fragments of their hepatic tissue collected for Cu and Zn levels analysis. At 180 days old, the calves received the first dose of C'ostridium chauvoei vaccine. A second dose of this vaccine was given 36 days later. Then, the antibodies titers in response to both vaccination (five sampling times), the serum Cu and Zn levels (three sampling times) and hemogram were also measured (14 sampling times). Although Cu hepatic levels compatible with deficiency were not obtained, significant differences among these Cu levels of the three groups of calves were observed (-Zn>Control>-Cu), as well as significant differences among the antibodies titers (Control>-Zn and -Cu at 21 days after the first vaccine dose and Control>-Zn>-Cu at 15 days after the booster vaccination) and hemogram of the different groups at the sampling times related to the booster vaccination (corpuscular volume, leucocytes, neutrophils, monocytes and eosynophils).

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-30Bitstream added on 2015-04-09T12:47:40Z : No. of bitstreams: 1 000816038.pdf: 29679 bytes, checksum: 125c0e781f09a27e015da5f54d34b980 (MD5) / Os objetivos foram determinar a ocorrência, avaliar a distribuição espacial e caracterizar molecularmente a infecção por Cryptosporidium spp. em bezerros e humanos procedentes de dois assentamentos rurais na região Noroeste do Estado de São Paulo, assim como associar a positividade para o parasito com as variáveis estudadas. Neste estudo, foram examinados 231 bovinos com até seis meses de idade e 54 pessoas dos dois assentamentos que mantém uma relação estreita com os animais. Positividade diagnóstica da infecção por Cryptosporidium spp. foi observada em 17 bezerros, por meio da coloração negativa por verde malaquita e pela reação em cadeia da polimerase (nested-PCR) e somente por esta última técnica, em uma pessoa. Por meio da análise estatística de correspondência múltipla houve associação entre a ocorrência do referido protozoário por meio da nested-PCR com a consistência de fezes aquosas. Os sequenciamentos do DNA das amostras de fezes de bezerros revelaram em 15 amostras semelhança com Cryptosporidium andersoni, em uma Cryptosporidium bovis e em outra 100% de identidade com Cryptosporidium parvum, sendo essa espécie detectada no humano considerado infectado. A partir dos resultados obtidos nesse estudo, pode-se inferir que quanto à distribuição espacial, em um dos assentamentos, havia maior ocorrência da infecção por Cryptosporidium nos bezerros examinados e nesse local foi detectado um humano positivo para esse parasito. Adicionalmente, em animais até dois meses de idade foi isolado C. parvum e nos acima dessa faixa etária, C. bovis e C. andersoni. Complementarmente, a consistência aquosa das fezes foi associada com a positividade para esse gênero parasitário / The objectives were to determine the occurrence, evaluate the spatial distribution and molecularly characterize infection by Cryptosporidium spp. in calves and humans living in two rural settlements in the northwestern state of São Paulo, as well as associate positiveness for the parasite to the studied variables. In this study, 231 cattle aged up to six months and 54 people from the two settlements who maintains a close relationship with the animals were examined. Diagnostic positivity of infection by Cryptosporidium spp. was observed in 17 calves by malachite green negative stain and polymerase chain reaction (nested PCR), and by only the latter technique, infection in one person. Statistical analysis of multiple correspondence showed an association between the presence of Cryptosporidium spp. by nested PCR, and watery stools. Analysis of the sequences revealed in 15 samples a similarity to Cryptosporidium andersoni, in one sample a resemblance with Cryptosporidium bovis, and in one sample 100% of identity with Cryptosporidium parvum, being this species detected in the person considered infected. From the results obtained in this study, it can be inferred that, as spatial distribution, in one of the settlements, there was a higher occurrence of Cryptosporidium infection in calves, and in this location a positive human for this parasite was detected. Additionally, in animals up to two months was isolated C. parvum and above this age range, C. bovis and C. andersoni. Complementarily, the aqueous consistency of stools was associated with seropositivity to this parasitic gender

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-05Bitstream added on 2015-05-14T16:59:06Z : No. of bitstreams: 1 000826915_20151206.pdf: 375653 bytes, checksum: adf2f78838ae81a4890f0a8019e9a279 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-12-07T09:44:40Z: 000826915_20151206.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-07T09:45:18Z : No. of bitstreams: 1 000826915.pdf: 1970838 bytes, checksum: 21816dd741b5f8f0d7c95dc3e252725a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Rede Nanobiotec / A cisticercose bovina é uma zoonose cosmopolita e presente nos rebanhos bovinos de corte no Brasil, que ocorre em países em desenvolvimento, onde a infraestrutura sanitária inadequada e as más práticas na criação de gado permitem a contaminação de pastagem e água com fezes humanas contendo ovos do parasita. Os prejuízos financeiros decorrem da condenação ou tratamento (salga ou da congelação) das carcaças infectadas, dependendo da intensidade da infecção. O diagnóstico da cisticercose bovina é realizado durante o abate, pela inspeção das carcaças e realização de cortes em locais de predileção do parasita como a língua, masseter, coração e diafragma. Assim, a fim de promover o diagnóstico ante-mortem e permitir o tratamento adequado de animais infectados, muitos estudos foram realizados utilizando-se técnicas de detecção de anticorpos ou antígenos em amostras de soro bovino. O teste ELISA baseado em anticorpos monoclonais (MAbs) para a detecção de antígeno circulante (Ag-ELISA) tem sido estudado, mas apresenta baixa sensibilidade em animais com infecção leve, e permite a sua realização apenas em laboratórios bem equipados. O uso de biossensores em medicina tem crescido nos últimos anos, permitindo a detecção e quantificação de metabólitos, bem como o uso de diversos biopolímeros como matriz de imobilização como quitosana e fibroína da seda. Imunossensores são biossensores cuja resposta bioquímica relaciona-se à interação antígeno-anticorpo, que podem ser utilizados para detectar anticorpos ou antígenos, tendo sido utilizados no diagnóstico de enfermidades. Nesta pesquisa, desenvolveu-se o primeiro imunossensor para o diagnóstico da cisticercose bovina, com filmes produzidos camada por camada (LbL) contendo um MAb dirigido contra antígeno bruto de metacestódeos de T. saginata (TAEB) e fibroína de seda (SF), imobilizados, que mostrou-se promissor ... / Bovine cysticercosis is a cosmopolitan zoonosis and very widespread in the Brazilian beef cattle. Cysticercosis usually occurs in developing countries, where poor sanitation and bad raising cattle practices allows the contamination of the pasture and water with human feces containing eggs. The financial losses are due to condemnation or treatment (salting or freezing) of infected carcasses, depending on the intensity of infection. Diagnosis of bovine cysticercosis is routinely done during slaughter by meat inspection of carcasses and incisions in predicted sites of muscles such as tongue, masseter, heart and diaphragm. Thus, in order to promote the ante-mortem diagnosis and allow appropriate treatment of infected animals, many studies have been performed using techniques to detect antibodies or antigens in bovine serum. ELISA using monoclonal antibodies (MAbs) for the detection of circulating antigen (Ag-ELISA) has been studied, but presents low sensitivity in animals with low parasite burden, and allows its realization only in well-equipped laboratories. The use of biosensors in medicine has grown in recent years, allowing detection and quantification of numerous metabolites, such as immobilization matrix having the most diverse biopolymers such as chitosan and silk fibroin. Immunosensors are biosensors which biochemical response is related to antigen-antibody interaction and can be used to detect antibodies or antigens, and has been tested for diseases diagnosis. In this research, we developed the first immunosensor for bovine cysticercosis diagnosis, produced with layer-by-layer (LbL) films containing a monoclonal antibody against crude Taenia saginata metacestode antigens (TAEB) and silk fibroin (SF) immobilized. Immunosensor showed to be a promising tool for further application in the ante-mortem bovine cysticercosis diagnosis

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2014-12-02T11:21:19Z : No. of bitstreams: 1 000783735.pdf: 592510 bytes, checksum: 4c75607716aba43fa9491069b97e3bb6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Micoplasmas são micro-organismos altamente contagiosos em bovinos, podendo causar mastite, além de pneumonias, artrite, otite e menos frequentemente abortamentos e meningites. São resistentes a maioria dos antimicrobianos utilizados e a mastite causada por este agente pode se tornar crônica e com alta contagem de células somáticas (CCS). Na maioria dos estudos sobre mastite, relata-se a alta prevalência de Streptococcus agalactiae e Staphylococcus aureus, já que estes patógenos podem ser isolados e identificados utilizando métodos microbiológicos convencionais. Em contraste, Mycoplasma bovis necessita de meios de cultura e condições especiais para isolamento. Dessa forma, acredita-se que a real prevalência de Mycoplasma bovis é, provavelmente, subestimada. Assim, o presente estudo teve por objetivo avaliar a prevalência de Mycoplasma bovis em rebanhos leiteiros do estado de São Paulo. Para tanto, o estudo foi dividido em fase de triagem, com coleta de leite de tanques e fase de coleta individual de leite dos animais. Utilizou-se cultivo em meio seletivo (SP4) e PCR para detecção do agente. O cultivo foi negativo para todas as amostras e a PCR revelou uma prevalência de 1,4% de M.bovis em tanques. Pode-se concluir com o presente estudo pela baixa prevalência de M.bovis nos rebanhos do estado de São Paulo, mostrando assim uma discreta importância deste agente como causa de mastites / FAPESP: 11/16055-3 / FAPESP: 11/21009-0

Orintador: Pedro Ribas Werner / Tese (mestrado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Agrárias / Bibliografia: fl.96-102 / Resumo: Poucos relatos existem na literatura científica sobre a importância da Pteredium aquilinum como planta tóxica e sobre a sua toxicidade no Estado do Paraná. Através de um estudo epidemiológico e anátomo-patológico verificou-se a ocorrência da planta e de intoxicações em bovinos em praticamente todo território do Estado do Paraná.Não se observaram casos de intoxicação nas demais espécies animais domésticas susceptíveis. Tendo em vista a freqüente ocorrência de papilomas e de carcinomas espinocelulares no trato digestivo superior de bovinos que manifestam a Hematúria Enzoótica ou que tem acesso à planta, utilizou-se sem sucesso a técnica de Peroxidase- Antiperoxidase, com um antisoro comercial contra antígenos estruturais específicos (comuns) do gênero Papilomavírus como anticorpo primário, numa tentativa de demonstrar a possível participação desse agente, juntamente com a P.aquilinum, na gênese dessas lesões em bovinos. / Abstract: The toxicity of the bracken fern has been comproved, inclusive experimentaly, in many parts of the world. However, there are few reports in the scientific literature about its importance as toxic plant and its toxicity in the State of Paraná, Brazil. It was observed by a epidemiologic and pathologic study the occurrence of bracken fern and cases of bovine intoxication in pratically all the State of Paraná. It was not observed cases of intoxication in other susceptible domestic animal species. Due to the frequent occurrence of papillomas and squamous cell carcinomas in the upper alimentary tract of bovines showing signs of Enzootic Hematuria or having access to the plant, it was used without success the Peroxidase- Antiperoxidase technique with a commercial antiserum to bovine papillomavirus type 1, reactive with papillomavirus genus-specific (commom) structural antigens regardless of host species, in an attempt to demonstrate a possible association of that virus with P. aqu-iZ-Lnum in the production of those lesions in bovine.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-18Bitstream added on 2014-06-13T18:19:58Z : No. of bitstreams: 1 sampaio_ph_me_jabo.pdf: 692117 bytes, checksum: 3c437fb5bb356c636b004d7e3732942b (MD5) / Em bovinos o protozoário Trypanosoma vivax causa enfermidade que pode levar à redução dos índices produtivos ou a morte do animal. O diagnóstico deste protozoário pode ser realizado por testes parasitológicos, sorológicos e moleculares. Entretanto estes testes não são capazes de fornecer prognóstico, indicar a fase da infecção e a responsividade ao tratamento instituído. Por outro lado, o proteinograma sérico pode fornecer tais informações. O objetivo do estudo foi determinar o perfil eletroforético de proteínas de fase aguda de bovinos Girolando naturalmente infectados com T. vivax (NIF), utilizando-se como matriz gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Foram estudados dois grupos de animais, NIF (n=507) e grupo de bovinos não infectados (NI; n=50). Amostras de soros de ambos os grupos foram submetidas à reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e Ensaio de Imunoadsorção Enzimática (ELISA) para detecção de anticorpos anti-T. vivax e realização do fracionamento eletroforético. A porcentagem de soros positivos pela RIFI foi de 89,74% e pelo ELISA 93,09%, sendo que este método mostrou-se capaz de detectar mais amostras positivas do que a RIFI para detecção de anticorpos anti-T. vivax em fases iniciais da infecção. No fracionamento proteico foram consideradas 12 proteínas; sendo elas IgA, ceruloplasmina, proteínas de 95 KDa, 88 KDa, transferrina, albumina, antitripsina, IgG, haptoglobina, glicoproteína ácida e proteínas de 23 KDa e 20,5 KDa. No grupo NIF observou-se aumento de proteína total, IgA, proteína de 88 KDa, albumina, antitripsina, IgG, haptoglobina, 20,5 KDa e diminuição de ceruloplasmina, proteína de 95 KDa e 23 KDa e transferrina. Glicoproteina ácida não apresentou diferença significativa entre os grupos NIF e NI. A antitripsina pode ser utilizada como indicador da... / The protozoan T. vivax can cause an important disease in cattle, which is responsible for death or low index productive. The diagnosis is based on parasitologic, molecular and sorological tests. However, these tests are not able to provide prognostic, infection phase and response of treatment. On the other hand, serum proteinograms can accomplish these features. The present work aimed to assess the acute phase proteins eletrophoretic profile in Girolando cattle naturally infected by T. vivax (NIF) by SDS-Page. For this purpose, two groups of animals were utilized: one naturally infected by T. vivax (NIF; n=507) and another one by noninfected cattle (NI; n=50). Serum samples were submitted to IFA and ELISA for detecting IgG antibody to T. vivax. SDS-Page was only performed in samples which showed positive results in serological testes. The percentage of positive samples by IFA and ELISA were 89,74% and 93,09%, respectively. ELISA showed a higher number of seropositive samples when compared to IFA. In eletrophoretic fractioning 12 proteins were evaluated, including IgA, ceruloplasmin, 95 KDa and 88 KDa proteins, transferrin, albumin, antitrypsin, IgG, haptoglobin, acidic glycoprotein, and 23 KDa and 20,5 KDa proteins. NIF animals showed an increase of serum concentration of IgA, 88 KDa, albumin, antitrypsin, IgG, haptoglobin, 20,5 KDa when compared to NI animals; on the other hand, serum concentration of ceruloplasmin, 95 KDa and 23 KDa proteins, and transferrin were lower in NIF animals when compared to NI animals. Acidic glycoprotein serum concentration did not shown differences when both groups of sampled animais were compared. Since Antitrypsin was only detected in NIF animals, this protein may be used as a marker of T. vivaxinfection in cattle. More studies should be performed aiming to clarify the identity of 95, 88, 23, 20,5 KDa... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-15Bitstream added on 2014-06-13T20:30:46Z : No. of bitstreams: 1 sacco_sr_me_botfmvz.pdf: 521815 bytes, checksum: ea56d7609efe9156d8c8d322f678151f (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Diversos fatores podem contribuir para a formação de cálculos urinários, dentre estes, o desequilíbrio nutricional e a dureza da água consumida pelos ruminantes. O objetivo deste estudo foi identificar as características de propriedades que predispõem à urolitíase, através da avaliação da água, da dieta e determinações séricas e urinárias de cálcio, fósforo, magnésio, cloretos, sódio, potássio, cálculo da excreção fracionada (EF) dos eletrólitos, e da uréia, creatinina, proteína total, albumina e globulinas séricas. Foram colhidas amostras de sangue e urina de bovinos, Guzerá, criados semi intensivamente, distribuídos por dois grupos. O primeiro denominado grupo urolitíase (Gu), composto de animais com histórico, sinais clínicos e confirmação ultrassonográfica que apresentavam urolitíase; o segundo: grupo controle (Gc), sem histórico, nem sintomas da doença. Os bovinos do grupo urolitíase consumiam água com dureza total na concentração de 166,0 mg CaCO3/L. A dieta dos animais do Gu apresentava maior concentração de fósforo e relação Ca:P inadequada. Os teores de fósforo sérico e urinário dos animais do Gu foram maiores do que os do Gc, assim como a concentração sérica de magnésio (p<0,05). Não houve aumento nas concentrações de uréia e creatinina no grupo urolitíase, mas ocorreu hipoproteinemia por hipoglobulinemia (p<0,05). As EFs de cálcio, fósforo e sódio não diferiram entre os grupos (p>0,05), mas houve diminuição significativa nas EFs de magnésio, cloretos e de potássio do grupo urolitíase (p<0,05). A união destes fatores contribuiu para a ocorrência da urolitíase, sendo dureza total da água e a alta concentração de fósforo na dieta os principais fatores na gênese dos cálculos em bovinos. / Many factors can contribute for the formation of urinary calculi, amongst these, the nutritional imbalances and the hardness of the water consumed for ruminants. The objective of this study was to identify the characteristics of properties that predispose to urolithiasis, through the evaluation of the water, of the diet, and serum and urinary determinations of calcium, phosphorus, magnesium, chlorides, sodium, potassium, calculation of the fractional electrolyte excretion (FE), and urea, creatinine, total protein serum levels, albumin and globulins. Samples of blood and urine of bovines, Guzerá, reared semi intensively, distributed for two groups, the first one, called urolithiasis group (Gu), composed by animals with history, clinical signals and ultrasonography confirmation of urolithiasis; the second one: controlled group (Gc), without history, nor symptoms of the illness. The bovines of the urolithiasis group consumed water with total hardness in the concentration of 166,0 mg CaCO3/L. The diet of the animals of the Gu presented greater phosphorus concentration and inadequate Ca:P relation. The levels of serum and urinary phosphorus of the animals of the Gu were higher of the Gc, as well as the serum magnesium concentration (p<0,05). The urea and creatinine concentrations didn’t have an increase in the urolithiasis group, but occurred hypoproteinemia for hypoglobulinemia in the Gu (p<0,05). The FEs of calcium, phosphorus and sodium had not differed between the groups (p>0,05), but had significant reduction in the FEs of magnesium, chlorides and potassium of the urolithiasis group (p<0,05). The union of these factors contributed for urolithiasis occurrence, being the total hardness of the water and the high phosphorus diet concentration the major factors in genesis of the calculations in bovines.

Made available in DSpace on 2016-11-30T14:53:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 109298_Tairone.pdf: 462217 bytes, checksum: 018f10edf4e61c6113e1b96c10be31af (MD5) license.txt: 214 bytes, checksum: a5b8d016460874115603ed481bad9c47 (MD5) Previous issue date: 2012 / A tuberculose bovina é uma doença de caráter granulomatoso e crônica, sendo que no Brasil apresenta alto índice de morbidade nos rebanhos. O objetivo deste estudo foi avaliar o rendimento da reação em cadeia da polimerase (PCR) no isolamento de micobactérias em amostras teciduais congeladas de bovinos. As amostras teciduais foram descongeladas e semeadas em meios de cultura Ogawa-Kudoh contendo piruvato de sódio, e outro contendo glicerol por 42 dias a 37ºC. Foram submetidas à PCR as amostras de tecido e os isolados das culturas, com primers específicos para M. tuberculosis e M. bovis. Foram analisadas 69 amostras teciduais de bovinos, das quais 81,2% constituíram-se de linfonodos. Tomando-se o resultado combinado das culturas como padrão áureo, identificou-se a presença de micobactérias em 17 amostras teciduais (24,6%), 12 delas (70,6%) pertencentes ao Complexo Mycobacterium tuberculosis (Complexo MTB), e 5 (29,4%) identificadas como Micobactérias Não Tuberculosas (MNT). O melhor rendimento diagnóstico foi alcançado pela cultura específica Ogawa-Kudoh com Piruvato e com descontaminação. O rendimento da PCR realizada nas amostras teciduais com o gene alvo hsp65 em comparação com o padrão áureo, foi de 17,6% de sensibilidade (IC95%:-0,005-0,36), especificidade de 98,1% (IC95%:0,94-1,02), valor preditivo positivo de 75% (IC95%:0,33-1,17), valor preditivo negativo de 78,5% (IC95%:0,68-1,19), e acurácia de 78,3%. A razão de verossimilhança positiva foi de 9,18 e a negativa foi de 0,8. A PCR hsp65 realizada diretamente do tecido acometido apresentou alta especificidade e valor preditivo positivo, porém baixa sensibilidade, sendo desejável a otimização desta técnica para que possa ser utilizada na rotina laboratorial. / Brazilian cattle herds have high morbidity rates due to bovine tuberculosis, which is a chronic granulomatous disease. The aim of this study was to evaluate the performance of the polymerase chain reaction (PCR) in the recovery of mycobacteria from frozen tissue samples of cattle. The tissue samples were frozen-thawed and seeded into Ogawa-Kudoh culture media, one containing sodium pyruvate and another containing glycerol for 42 days at 37° C. Tissue samples and culture isolates with primers specific for M. tuberculosis and M. bovis were subjected to PCR. In total, 69 tissue samples of cattle were analyzed, 81.2% of which consisted of lymph nodes. Taking the combined results of cultures as the gold standard, the presence of mycobacteria was identified in 17 (24.6%) tissue samples, of which 12 (70.6%) belonged to the Mycobacterium tuberculosis complex (MTB complex), and 5 (29.4%) were identified as nontuberculous mycobacteria (NTM). The best diagnostic yield was achieved by Ogawa-Kudoh specific culture with Pyruvate and decontamination. The yield of PCR performed on tissue samples with the hsp65 gene as the target compared with the gold standard showed a sensitivity of 17.6% (95% CI: -0.005-0.36), specificity of 98.1% (95% CI: 0.94-1.02), positive predictive value of 75% (95% CI: 0.33-1.17), negative predictive value of 78.5% (95% CI: 0.68-1.19), and accuracy of 78.3%. The positive likelihood ratio was 9.18, and the negative likelihood ratio was 0.8. The hsp65 PCR performed directly on the affected tissue showed high specificity and positive predictive value, but low sensitivity. Optimization of this technique is highly desirable, so it can be used for laboratory routine monitoring.

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-11. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:14:12Z : No. of bitstreams: 1 000866878.pdf: 819016 bytes, checksum: f4b074f87450614f386b1be1ec42f77b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A carne bovina pode ser um importante veículo de vários patógenos para os humanos, com destaque à Escherichia coli produtora de Shiga-toxina (STEC), associada com diarreia em animais e humanos. Neste estudo, investigou-se em bovinos abatidos no estado de São Paulo, a prevalência dos diferentes patótipos de E. coli diarreiogênica e o perfil de virulência dos isolados de STEC. De um total de 431 animais, STEC foi identificada em 116 (26,9%) amostras de fezes, das quais 111 (25,8%) STEC eae- e 5 (1,2%) STEC eae+. O patótipo EPEC foi detectado em 20 (4,6%) amostras de fezes dos animais testados. Os demais patótipos de E. coli diarreiogênica não foram identificados. Dos 95 isolados de STEC analisados quanto ao perfil de virulência, todos albergavam stx2, enquanto que 28 (29,5%) continham stx1. Os genes iha e saa, que codificam adesinas, foram encontrados em 93,7% (89/95) e 66,3% (63/95), respectivamente. O gene espP, que codifica uma protease que auxilia na colonização intestinal, foi detectado em 61,1% (58/95) e a hemolisina ehxA em 54,7% (52/95). Também foram identificados em menores frequências os genes subAB, nleE e nleB. STEC está amplamente disseminada nos rebanhos bovinos de São Paulo, carreando genes comumente isolados de patógenos humanos, o que reforça a importância da inspeção e fiscalização nos abatedouros / Beef can be an important vehicle for various pathogens to humans, especially Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC), associated to human and animal diarrhea. In this study, the prevalence of different pathotypes of diarrheagenic E. coli, and virulence profiles of STEC were investigated among feces of cattle slaughtered in São Paulo state, southeast of Brazil. From a total of 431 animals, STEC was identified from 116 (26,9%) samples, being 111 (25,8%) STEC eae- and 5 (1,1%) STEC eae+. EPEC pathotype was detected among 20 (4,6%) of animals. The other pathotypes of diarrheagenic E. coli were not identified. Of the 95 STEC isolates assessed for virulence profile, all harbored stx2, while 28 (29,5%) contained stx1. Iha and saa, genes encoding adhesins, were found at 93,7% (89/95) and 66,3% (63/95), respectively. EspP, gene which encoding a protease related with intestinal colonization, was detected in 61,1% (58/95) and ehxA hemolysin was present in 54,7% (52/95). SubAB, nleE and nleB genes were also detected in lower rates. STEC is widespread in cattle herds of São Paulo, containing commonly isolated genes from human pathogens, which reinforces the importance of inspection and surveillance in the slaughterhouses

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-02Bitstream added on 2014-06-13T18:39:10Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_jcv_me_botfmvz.pdf: 876846 bytes, checksum: 0964099d5611eb445b184c0c142d8ec3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A cisticercose é uma das principais causas de perdas econômicas na pecuária de corte brasileira devido às condenações da carne para o controle do complexo teníase-cisticercose. O tratamento quimioterápico pode ser utilizado para o controle da infecção nos animais, mas sua eficácia deve ser monitorada por testes de diagnóstico que detectem parasitas vivos ou seus produtos. Na presente pesquisa, anticorpos monoclonais contra antígenos totais (TAEB) e de fluido vesicular (TAEF) de metacestóides de Taenia saginata foram produzidos através de fusão celular, utilizando-se células de baço de camundongos BALB/c imunizados. Cinco fusões TAEB e quatro TAEF foram realizadas e os sobrenadantes de cultura foram triados por teste ELISA indireto. Dez e nove híbridos pertencentes aos protocolos TAEB e TAEF, respectivamente, foram selecionados e clonados. As linhagens celulares clonadas foram mantidas em meio de cultura para a obtenção dos anticorpos monoclonais, resultando em 18 clones IgG1 e 32 IgM reativos para TAEB e 9 IgG1 e 9 IgM para TAEF. Dentre esses clones, 5 do protocolo TAEB e 5 TAEF foram selecionados para produção de líquido ascítico, através da injeção dos clones em camundongos BALB/c. A avaliação da identificação antigênica dos anticorpos produzidos aos antígenos homólogos foi realizada por meio de western blotting, resultando em reatividade com frações protéicas de baixo peso molecular (< 18kDa), 43, 55, 66 e 100kDa. A imunofluorescência indireta demonstrou que os anticorpos monoclonais avaliados reconhecem antígenos presentes tanto do escólex quanto da membrana vesicular de metacestóides de bovinos naturalmente infectados. Os anticorpos monoclonais produzidos poderão ser utilizados para detecção de antígenos circulantes na avaliação da eficácia do tratamento de bovinos infectados, evitando assim perdas econômicas e danos à saúde pública. / Cysticercosis is a major cause of economic losses in the Brazilian bovine chain production due to meat condemnation for the taeniasis-cysticercosis complex control. Chemotherapy can be used to control infection in cattle but treatment efficacy should be monitored by diagnostic tests that can detect live parasites or their products. Monoclonal antibodies against Taenia saginata metacestode crude (TAEB) and cyst fluid (TAEF) antigens were produced by cell fusion procedures using spleen cells from immunized BALB / c mice. Five TAEB and four TAEF fusions were performed and the culture supernatants from these cell cultures were screened by indirect ELISA assay. Ten TAEB and nine TAEF hybrids were selected and cloned. Cloned cell lines were grown in culture medium to collect the monoclonal antibodies, resulting in 18 IgG1 and 32 IgM clones reactive to TAEB and 9 IgG1 and 9 IgM clones reactive to TAEF. Five TAEB and five TAEB clones were selected for ascitic fluid production by injection in BALB/c mice and further harvesting. Western blotting was performed to test the antigenic identification by the antibodies produced resulting in reactivity to protein fractions of low molecular weight (<18kDa) and to 43, 55, 66 and 100kDa. The indirect immunofluorescence test showed that monoclonal antibodies recognize antigens from both the scolex and the bladder wall of metadestodes from naturally infected bovine. The monoclonal antibodies obtained can be useful for detection of circulant antigens in treatment efficacy evaluation preventing economic losses and public health injury.