Resumo: A cisticercose é uma das principais causas de perdas econômicas na pecuária de corte brasileira devido às condenações da carne para o controle do complexo teníase-cisticercose. O tratamento quimioterápico pode ser utilizado para o controle da infecção nos animais, mas sua eficácia deve ser monitorada por testes de diagnóstico que detectem parasitas vivos ou seus produtos. Na presente pesquisa, anticorpos monoclonais contra antígenos totais (TAEB) e de fluido vesicular (TAEF) de metacestóides de Taenia saginata foram produzidos através de fusão celular, utilizando-se células de baço de camundongos BALB/c imunizados. Cinco fusões TAEB e quatro TAEF foram realizadas e os sobrenadantes de cultura foram triados por teste ELISA indireto. Dez e nove híbridos pertencentes aos protocolos TAEB e TAEF, respectivamente, foram selecionados e clonados. As linhagens celulares clonadas foram mantidas em meio de cultura para a obtenção dos anticorpos monoclonais, resultando em 18 clones IgG1 e 32 IgM reativos para TAEB e 9 IgG1 e 9 IgM para TAEF. Dentre esses clones, 5 do protocolo TAEB e 5 TAEF foram selecionados para produção de líquido ascítico, através da injeção dos clones em camundongos BALB/c. A avaliação da identificação antigênica dos anticorpos produzidos aos antígenos homólogos foi realizada por meio de western blotting, resultando em reatividade com frações protéicas de baixo peso molecular (< 18kDa), 43, 55, 66 e 100kDa. A imunofluorescência indireta demonstrou que os anticorpos monoclonais avaliados reconhecem antígenos presentes tanto do escólex quanto da membrana vesicular de metacestóides de bovinos naturalmente infectados. Os anticorpos monoclonais produzidos poderão ser utilizados para detecção de antígenos circulantes na avaliação da eficácia do tratamento de bovinos infectados, evitando assim perdas econômicas e danos à saúde pública. / Abstract: Cysticercosis is a major cause of economic losses in the Brazilian bovine chain production due to meat condemnation for the taeniasis-cysticercosis complex control. Chemotherapy can be used to control infection in cattle but treatment efficacy should be monitored by diagnostic tests that can detect live parasites or their products. Monoclonal antibodies against Taenia saginata metacestode crude (TAEB) and cyst fluid (TAEF) antigens were produced by cell fusion procedures using spleen cells from immunized BALB / c mice. Five TAEB and four TAEF fusions were performed and the culture supernatants from these cell cultures were screened by indirect ELISA assay. Ten TAEB and nine TAEF hybrids were selected and cloned. Cloned cell lines were grown in culture medium to collect the monoclonal antibodies, resulting in 18 IgG1 and 32 IgM clones reactive to TAEB and 9 IgG1 and 9 IgM clones reactive to TAEF. Five TAEB and five TAEB clones were selected for ascitic fluid production by injection in BALB/c mice and further harvesting. Western blotting was performed to test the antigenic identification by the antibodies produced resulting in reactivity to protein fractions of low molecular weight (<18kDa) and to 43, 55, 66 and 100kDa. The indirect immunofluorescence test showed that monoclonal antibodies recognize antigens from both the scolex and the bladder wall of metadestodes from naturally infected bovine. The monoclonal antibodies obtained can be useful for detection of circulant antigens in treatment efficacy evaluation preventing economic losses and public health injury. / Orientador: Cáris Maroni Nunes / Coorientador: Elenice Deffune / Banca: Valéria Marçal Félix de Lima / Banca: Rosana Rossi Ferreira / Mestre

Orientador: Germano Francisco Biondi / Banca: Roberto de Oliveira Roça / Banca: Oswaldo Durival Rossi Júnior / Resumo: O presente estudo analisou a incidência de cisticercose bovina em 10 abatedouros sob o Serviço de Inspeção Federal no estado do Paraná no ano de 2005 a2009.Os dados foram obtidos através dos mapas nosográficos mensais, os quais estavam no sistema do SIGSIF; neste contém registros do número de animais abatidos, quantidade de animais positivos para cisticercose e o município de origem destes animais positivos. A incidência média no decorrer do estudo foi de 3,85 % (110.514/2.863.427) de cisticercose bovina. A partir dos resultados obtidos, conclui-se que os índices de incidência de cisticercose bovina para o estado do Paraná foram altos, o que significa que trabalhos educativos e instrutivos quanto ao problema devem ser aprimorados eintensificados / Abstract: This study examined the incidence of bovine cysticercosis in 10 slaughterhouses under Federal Inspection Service in the State of Parana in 2005 2009. The data were obtained from the monthly maps nosographic, which were in the system SIGSIF, this contains records of the number of slaughtered animals, number of animals positive for cysticercosis and city of origin of these positive animals.The average incidence during the study was 3,85% (110.514/2.863.427) of bovine cysticercosis. From the results obtained, it is conclude that the rates of incidence of bovine cysticercosis in the state of Paraná were high, which means that instructive and educational work on the problem should be enhanced and intensified / Mestre

Orientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Antonio Carlos Paes / Banca: Geraldo Nardi Júnior / Resumo: O presente estudo comparou a eficácia "in vitro" e "in vivo" da cefoperazona sódica, gentamicina e ciprofloxacino no tratamento intramamário de casos de mastite clínica bovina. Foram utilizadas 30 vacas com mastite clínica, não sistêmica, divididas em três grupos de dez animais. Em cada grupo foi utilizado um dos antimicrobianos citados, para o tratamento convencional da mastite (três aplicações a cada 12 horas) e o tratamento estendido (seis aplicações a cada 12 horas). Os principais micro-organismos isolados dos quartos mamários com mastite foram Staphylococcus aureus, Staphylococus spp., Streptocccus spp. e enterobactérias. A eficácia da cura clínica do tratamento convencional foi de 50% para o grupo tratado com cefoperazona sódica, 70% para o grupo tratado com gentamicina e 50% para o grupo tratado com ciprofloxacino. Para os mesmos grupos, a eficácia da cura clínica do tratamento estendido foi 90%, 100% e 80%, respectivamente. A eficácia da cura bacteriológica foi de 100% para o grupo tratado com cefoperazona sódica e de 90% para os grupos utilizando a gentamicina e ciprofloxacino no tratamento convencional. Para os mesmos grupos, foi observado 100% de cura bacteriológica para a gentamicina e 90% para os grupos com cefoperazona sódica e ciprofloxacino no tratamento estendido. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significantes (P>0,01) para a cura clínica e cura bacteriológica dentro de cada grupo e entre os grupos de antimicrobianos, tampouco entre os tratamentos convencional e estendido dentro do mesmo grupo ou entre os grupos. Os resultados do presente estudo reforçam a importância da lactocultura e do teste de sensibilidade microbiana "in vitro" como respaldo para os tratamentos intramamários de vacas com mastite clínica. Inferiu-se também a boa eficácia na cura clínica e bacteriológica da cefoperazona sódica, gentamicina e ciprofloxacino no tratamento ... / Abstract: This study compared the in vitro and in vivo efficacy of sodium cefoperazone, gentamicin and ciprofloxacin for the intramammary treatment of clinical mastitis in cows. Thirty cows suffering from non-systemic, clinical mastitis were divided into three groups of ten animals each. One of the above mentioned antibiotics was used in each group for conventional (i.e., three administrations of the drug, each 12 hours) and extended (i.e., six administrations of the drug, each 12 hours) treatments of mastitis. The most common microorganisms isolated from cows were Staphylococcus aureus, Staphylococus spp., Streptocccus spp. and enterobactéria. The efficacy of clinical cure of the conventional treatment was 50%, 70% and 50% for the groups treated with sodium cefoperazone, gentamicin and ciprofloxacin, respectively. Regarding the extended treatment, efficacy was 90%, 100% and 80%, for sodium cefoperazone, gentamicin and ciprofloxacin, respectively. Efficacy of bacteriological cure was 100% for sodium cefoperazone, and 90% for both gentamicin and ciprofloxacin using the conventional treatment. By using the extended treatment, efficacy of bacteriological cure was 100% for gentamicin and 90% for both cefoperazone and ciprofloxacin. Statistical differences (p>0.01) were not found in clinical or in bacteriological cure into the same group or among groups. Similarly, statistical differences between the conventional and extended treatments were not found. The results from this study reinforce the importance of performing microbiological culture of milk and in vitro antimicrobial sensitivity tests for supporting the intramammary treatment of clinical mastitis in cows. The clinical and bacteriological efficacy of sodium cefoperazone, gentamicin and ciprofloxacin in lactating cows was also observed in both conventional and extended treatments provided the use of sensitivity tests in vitro. Extended treatments should be used in selected cases of bovine mastitis / Mestre

Orientador: Karina Paes Bürger / Coorientador: Lara Borges Keid / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Raphaella Barbosa Meirelles Bartoli / Resumo: A tuberculose é uma doença infectocontagiosa de caráter zoonótico de grande importância em saúde pública, sendo seu diagnóstico e o conhecimento de sua epidemiologia, peças fundamentais na sua prevenção e controle. Este trabalho objetivou a comparação entre métodos diagnósticos para tuberculose bovina. Foram realizados diagnósticos pelo cultivo microbiológico, caracterização histopatológica e identificação de bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR) e identificação molecular da infecção por Mycobacterium bovis em bovinos adultos abatidos em matadourosfrigoríficos sob Serviço de Inspeção Federal (SIF) no Estado de São Paulo e posteriormente, os municípios de origem destes animais foram geoprocessados. Durante o abate, foram identificadas e coletadas amostras de linfonodos com lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose. O diagnóstico pelo cultivo microbiológico foi realizado em meio de cultura sólido, a caracterização histopatológica pela coloração com hematoxilina eosina (HE), a identificação de BAAR pela coloração de Ziehl-Neelsen (ZN) e o diagnóstico pela identificação molecular foi realizado a partir de DNA extraído das lesões sugestivas de tuberculose pela reação em cadeia pela polimerase (PCR, nested PCR e multiplex PCR) e a partir de DNA extraído das colônias isoladas para identificação do M. bovis utilizando-se a PCR e a multiplex PCR. Dentre as lesões sugestivas de tuberculose observadas, 50% (25/50) foram identificadas em linfonodos retrofaríngeos e todas foram caracterizadas como caseosas. Houve crescimento de colônias características de M. bovis em 56% (28/50) das amostras, 64% (32/50) das amostras foram consideradas positivas pela coloração com HE e 52% (26/50) pela coloração confirmatória de ZN (identificação de BAAR). A PCR a partir de DNA extraído das lesões teciduais apresentou 38% (19/50) das amostras positivas e a PCR a partir de DNA extraído das... / Abstract: Tuberculosis is a contagious infectious zoonotic disease of high importance in public health, which diagnosis and the epidemiology knowledge are essentials in this disease prevention and control. This study aimed to compare the different diagnostic tests for bovine tuberculosis. Microbiological culture, histopathological and molecular M. bovis diagnosis were made in adults bovines slaughtered in slaughterhouses under Inspection Federal Service - SIF in São Paulo State and after, the animals origin municipalities were geoprocessing. Samples of lymph nodes with macroscopic lesions suggestive of tuberculosis were identified and collected during the animals' slaughter. The microbiological diagnosis was made by culture in solid medium, histopathological characterization by staining with hematoxylin eosin (HE), identification of AFB by Ziehl-Neelsen (ZN) and the diagnosis by molecular identification was carried out from DNA extracted from the lesions suggestive of tuberculosis by polymerase chain reaction (PCR, nested PCR and multiplex PCR) and the DNA extracted from the colonies was isolated for M. bovis identification using PCR and multiplex PCR. Most injuries (50% - 25/50) was identified in retropharingeal and all of them were characterized as caseous. M. bovis colonies growth was characteristics in 56% (28/50) of the samples and64% (32/50) of the samples were positive by HE staining and 52% (26/50) for confirmatory ZN staining. The PCR directly from tissue showed 38% (19/50) of positive samples and the PCR from the colonies showed 56% (28/50) of positive samples. The kappa test (95%) between the diagnoses showed higher agreement between the molecular diagnostics of the colonies, followed by histopathological and molecular analysis of tuberculosis suggestive lesions toward the microbiological diagnosis. The highest sensitivity and specificity values were observed in the colonies molecular testing, followed by histopathological and ... / Mestre

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-03-28T13:47:39Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 372793 bytes, checksum: 08b4907726687f26fbcfd05789cb2798 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-28T13:47:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 372793 bytes, checksum: 08b4907726687f26fbcfd05789cb2798 (MD5) Previous issue date: 2005-04-14 / Bovinos da raça holandesa entre 3-4 meses de idade receberam quatro imunizações subcutâneas do peptídeo sintético 23290 anti-Babesia bovis mais saponina, e foram desafiados com amostra virulenta de B. bovis, sendo avaliados alguns parâmetros clínicos como hematócrito, hemoglobina, parasitemia e temperatura, além do acompanhamento do desenvolvimento da resposta imune humoral, mediante quantificação de IgG total e identificação de isótipos IgG1 e IgG2 antígeno- específicos. Os parâmetros hematológicos e a temperatura foram analisados semanalmente no período de imunização, e diariamente a partir do 7o dia pós-desafio com o parasito; Os exames sorológicos foram realizados semanalmente durante todo o experimento. As análises sangüíneas demonstraram que SBbo 23290 minimizou o impacto da infecção pela B. bovis, além de inibir a carga parasitária. Os estudos sorológicos constataram que o SBbo 23290 estimulou a produção de imunoglobulinas G antígeno-específico, com predominância estatisticamente maior de isótipos IgG1 sobre IgG2 bem como elevação da produção de IgG total. Com relação aos parâmetros clínicos, que foram observados 18 dias pós-desafio, houve um declínio nos valores observados em todos os grupos. Quanto à temperatura, o observado foi que houve elevação significativa da mesma após o desafio com B. bovis, sendo diretamente proporcional à carga parasitária. Sendo assim, pode-se concluir que o peptídeo sintético induz de maneira eficaz uma resposta imunológica antígeno-específica, na qual encontram-se envolvidos mecanismos celulares e humorais. / Tree-four month old bovines of the Holstein Freesan breed received four under–skin immunization of the synthetic peptideo 23290 anti-Babesia bovis plus saponina. They were challenged with an virulent sample of B. bovis and they were evaluated considering clinic parameters such as packet cell volume, hemoglobin, parasitemy (presence of parasite), and temperature, besides, the observation of the development of the humoral immune answer through identification of specific-antigens isotypes IgG1 and IgG2, besides the total IgG . The hematological parameters and the temperature were checked every week during the immunization period, and every day after the seventh day after challenge. The serology were conducted every week during the whole experiment. The blood analyses demonstrated that SBbo 23290 minimized the impact of the infection B. bovis, besides by inhibiting the parasitical charge. The serologic studies evidenced that SBbo 23290 stimulated the production of antigen-specific immunoglobulin G. Showing a predominance of isotypes IgG1 statistically higher than IgG2 a well as an increase of the production of total IgG. Considering the clinical parameters, observed 18 days after challenge, a decrease of values was observed in all groups. On the other hand, the temperature became meaningfully higher after the challenge with B. bovis, at the same rate of the parasitical charge. We can conclude that the syntetic peptideo induct an effective immunological specific-antigen answer, in with cellular and humoral mechanisms were involved. / Dissertação antiga, importada do Alexandria.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-03-28T14:59:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1474259 bytes, checksum: 056642d909ee7e78e9dc9b22ef3349f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-28T14:59:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1474259 bytes, checksum: 056642d909ee7e78e9dc9b22ef3349f8 (MD5) Previous issue date: 2015-11-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae são patógenos contagiosos associados à forma subclínica e persistente da mastite bovina, principal doença da pecuária leiteira. Neste trabalho avaliou-se a presença de dois patógenos em amostras de leite CMT positivas coletadas durante seis meses de animais pertencentes a um rebanho da Zona da Mata de Minas Gerais. Foi encontrada uma alta prevalência dos patógenos contagiosos o que indica possível falta de higiene nos procedimentos de rotina de ordenha ou falha no tratamento da doença. A análise de multilocus de repetições em tandem de número variável (MLVA) revelou apenas um genótipo de S. aureus e seis genótipos de S. agalactiae, alguns dos quais foram associados a infecções persistentes e ao número de parições do animal. A maioria das bactérias isoladas foi considerada forte produtora de biofilme e no caso de S. aureus, os isolados apresentaram uma variada atividade hemolítica. É possível que esses fenótipos contribuam com a persistência da infecção. No capítulo 2, estirpes de S. aureus isoladas de animal com manifestação de mastite persistente ou não persistente foram contrastadas quanto a características importantes para a patogênese bacteriana e virulência in vivo. Genotipagem por eletroforese em campo pulsado (PFGE) revelou que as bactérias possuíam uma similaridade de 90%. As duas estirpes contrastadas apresentaram os mesmos genes de virulência. Porém, elas diferiram significativamente na produção de hemolisina e biofilme, na capacidade de invasão e persistência em células do epitélio mamário bovino (MAC-T). Nos ensaios in vivo realizados com o modelo Galleria mellonella, a estirpe SAU 302 revelou-se mais virulenta do que a SAU 322. Uma forte reação do sistema imune do inseto foi observada mediante infecção com as bactérias. Os resultados mostraram variações fenotípicas entre as estirpes geneticamente relacionadas que podem contribuir positivamente para o desenvolvimento da doença e devem ser cuidadosamente exploradas. Conclui-se que bactérias geneticamente relacionadas podem apresentar uma variação fenotípica não revelada por técnicas de fingerprint do DNA e que esta variação pode ter uma implicação na progressão da mastite bovina. Sugere-se a definição de um conjunto de ensaios fenotípicos relevantes para a doença a fim de caracterizar bactérias isoladas de animais com manifestação conhecida. / Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae are contagious pathogens associated with subclinical and persistent bovine mastitis, the main disease of dairy cattle. In this work we investigated the presence of these pathogens in samples of milk CMT-positive collected during six months from animals belonging to a herd from the Zona da Mata of Minas Gerais. A high prevalence of the contagious pathogens was found indicating a possible lack of hygiene in the milking routine procedures or failure in the treatment of the disease. The multilocus variable-number tandem repeat analysis of (MLVA) revealed one genotype of S. aureus and six genotypes of S. agalactiae, some of them associated with persistent infections and calving number. Most bacterial isolates was considered strong biofilm producer and for S. aureus the isolates showed a variation in hemolytic activity. These phenotypes may contribute to the persistence of the infection. In Chapter 2, we analyzed the in vivo virulence and phenotypic traits believed to be important for the pathogenicity of bovine S. aureus. In this study the strains SAU 302 and SAU 322 isolated from animals with persistent or non-persistent mastitis, respectively, were contrasted. Genotyping by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) revealed a genetic relatedness of 90% between bacteria. The two strains showed the same set of virulence genes investigated. However, significant differences were seen in the production of hemolysin and biofilm, in invasiveness and persistence in the bovine mammary epithelial cells (MAC-T). In vivo tests carried out with the Galleria mellonella model showed that SAU 302 was more virulent than the SAU 322. A strong reaction of the insect immune system was observed upon infection with both bacteria. Despite their genetic proximity, the strains showed a phenotypic variation undetected by DNA-based methods that can contribute to the development of the disease and should be explored further. Our present study suggests that a set of phenotypic assays relevant to bovine mastitis should be defined and used to analyze a collection of bacteria for which information on the nature of the clinical manifestation is available.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-04-18T16:46:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 804756 bytes, checksum: 03a46513826b20470e24b68ca050d076 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T16:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 804756 bytes, checksum: 03a46513826b20470e24b68ca050d076 (MD5) Previous issue date: 2015-08-26 / Devido à sua capacidade em transmitir diversos agentes infecciosos, os carrapatos são importantes para a saúde pública e para produção animal. Dentre estes, se destaca o carrapato Rhipicephalus microplus, responsável por perdas econômicas nos países das regiões tropicais e subtropicais. Entre as medidas de controle deste ectoparasita, o controle imunológico tornou-se uma alternativa promissora, pois não gera populações de carrapatos resistentes e não há risco de resíduos em produtos de origem animal e contaminação ambiental e melhor bem estar animal. Objetivou-se neste estudo, testar a campo o efeito do peptídeo recombinante rSBm 7462 anti Rhipicephalus microplus. Avaliaram-se as condições climáticas no período de 2010 a 2014, e a dinâmica populacional do carrapato neste período, dividindo as em duas etapas, antes e após a imunização. O peptídeo recombinante foi aplicado em três doses, com intervalos de 30 dias no ano de 2012, e repetido nos anos seguintes de 2013 e 2014. O efeito do controle de carrapatos com uso do imunógeno sobre a dinâmica populacional, os parâmetros produtivos e reprodutivos dos rebanhos, assim como custo de produção, baseando-se no controle de carrapatos, apresentaram resultados satisfatórios. / Due to its ability to transmit various infectious agents, ticks are important to public health and animal production. Among these, it stands out the tick Rhipicephalus microplus, responsible for economic losses in the countries of tropical and subtropical regions. Among the control measures of this ectoparasite, the immune control has become a promising alternative because it does not generate resistant tick populations and there is no risk of residues in animal products and environmental contamination and better animal welfare. The aim of this study, test the field the effect of recombinant peptide RSBM 7462 anti Rhipicephalus microplus. Evaluated the climate conditions in the period 2010-2014, and population dynamics of the tick will be shown, dividing in two stages, before and after immunization. The recombinant peptide was administered in three doses, 30 days in the year ranges from 2012, and repeated in the following years 2013 and 2014. The effect of tick control with use of the immunogen on population dynamics, productive and reproductive parameters of herds, as well as cost of production, based on the control of ticks, showed satisfactory results.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-07T15:27:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1815676 bytes, checksum: 0d62c2dc57ee0ade1ba91497365e0867 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T15:27:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1815676 bytes, checksum: 0d62c2dc57ee0ade1ba91497365e0867 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A mastite bovina é considerada por muitos autores a principal doença do rebanho leiteiro. Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae são patógenos contagiosos comumente associados à forma subclínica e persistente da doença. A caracterização de estirpes em circulação nos rebanhos é de extrema importância na definição de estratégias de manejo para o controle da doença e de marcadores de prognóstico da mastite. No capítulo 1, 175 amostras positivas para o teste California Mastitis (CMT) foram coletadas de vacas holandesas e análises microbiológicas revelaram a presença de S. agalactiae em 34,2% das amostras. Em 36% das amostras foi observado o crescimento de bactérias pertencentes a outros grupos, em especial com S. aureus. A tipagem de S. agalactiae pela metodologia multilocus de repetições em tandem de número variável (MLVA) revelou seis genótipos (SagT1-T6), sendo SagT1 o mais prevalente no rebanho e também o mais frequentemente isolado de infecções mistas com S. aureus. Os isolados de S. agalactiae foram fortes produtores de biofilme in vitro e produziram hemólise do tipo beta. A análise de virulência dos isolados em larvas de Galleria mellonella definiu os tipos SagT3 e SagT1 como os mais e menos virulentos, respectivamente. Porém, dois isolados pertencentes a esses tipos não invadiram nem apresentaram efeito citotóxico em células epiteliais bovinas MAC-T. No capítulo 2, genomas de quatro estirpes de S. aureus causadoras de mastite subclínica, sendo SAU302 e SAU1364 isoladas de infecções persistentes e SAU170 e SAU1269 de infecções não persistentes, foram sequenciados. Uma grande conservação foi encontrada entre os genomas, como tamanho médio de 2,6 Mb, 32,8% de conteúdo GC e 2589 CDS. A tipagem por MLST classificou SAU170, SAU302, e SAU1364 como ST126, um tipo frequentemente encontrado em rebanhos brasileiros, e SAU1269, como ST1, associado a infecções humanas e bovinas. A comparação entre os genomas sequenciados e uma referência construída com genomas de dois isolados de mastite bovina, revelou uma identidade maior que 90% para a maioria dos genes anotados. A análise filogenética dos isolados sequenciados agrupou em ramos separados isolados de diferentes manifestações, sugerindo que algumas das particularidades compartilhadas entre isolados podem estar relacionados à persistência das infecções causadas por eles. A análise de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) mostrou SNPs em genes relacionados à adesão das células bacterianas ao hospedeiro e na sequência de agrC, proteína receptora do sinal de quorum-sensing em S. aureus, alguns deles importantes para estrutura da proteína. / Bovine mastitis is considered the main disease of the dairy herd. Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae are contagious pathogens commonly associated with subclinical and persistent form of the disease. The characterization of circulating strains in herds is of utmost importance to define management strategies to the control of the disease and to identify mastitis prognostic markers. In the first chapter, 175 milk samples positive for the California Mastitis Test (CMT) were collected from Holstein cows and microbiological analyzes revealed the presence of S. agalactiae in 34.2% of samples. The growth of bacteria belonging to other groups, in particular S. aureus, was seen in 36% of the milk samples. Multilocus variable-number tandem repeat analysis (MLVA) revealed the presence of six genotypes (SagT1-T6) of S. agalactiae in the herd with SagT1 being the most prevalent and also the most frequently isolated from mixed infections with S. aureus. S. agalactiae isolates were beta-hemolytic and strong in vitro biofilm producers. Virulence analysis in Galleria mellonella larvae defined the SagT3 and SagT1 types as the most and the less virulent, respectively. However, invasion and cytotoxicity in MAC-T cells did not reveal any difference between them. In Chapter 2, the genomes of four strains of Staphylococcus aureus causing subclinical mastitis, SAU302 and SAU1364 isolated from persistent infections and SAU170 and SAU1269 from non-persistent infections, were sequenced. A major conservation was found among them like the average size (2.6 Mb), the GC content (32.8%), and the CDS (2589). Multilocus Sequencing typing classified SAU170, SAU302 and SAU1364 as ST126, a type often found in Brazilian herds, while SAU1269 was classified as ST1, commonly associated with human and bovine infections. Comparative analyses with the genome of S. aureus RF122, a strain that causes severe mastitis, showed more than 90% of identity with annotated genes. Phylogenetic analysis grouped the sequenced genomes into separate branches suggesting that some of the characteristics shared between the isolates can be related to the persistence of infections. Single nucleotide polymorphisms (SNP) were found in genes related to bacterial adhesion and in agrC that codes for a receptor protein involved in quorum-sensing signaling in S. aureus, some of them important for protein structure.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-11-29T18:34:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1306405 bytes, checksum: 1458047941be6c1d95930520f19df28c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-29T18:34:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1306405 bytes, checksum: 1458047941be6c1d95930520f19df28c (MD5) Previous issue date: 2016-09-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A cisticercose bovina é uma doença de caráter zoonótico que acarreta prejuízos tanto de ordem sanitária quanto de ordem econômica. Tradicionalmente seu diagnóstico é realizado durante a inspeção post mortem em matadouros-frigoríficos sob fiscalização sanitária, e consiste basicamente na visualização macroscópica através de cortes realizados em grupos musculares preditos como preferenciais para a implantação dos cisticercos. Ressalta-se que este método apresenta deficiências de desempenho, deixando passar despercebidas formas discretas da doença. Essa pesquisa foi desenvolvida com a meta de aprimorar o diagnóstico da cisticercose bovina, e sobretudo, dos testes sorológicos atualmente desenvolvidos, aumentando a confiabilidade do diagnóstico. A pesquisa caracterizou-se pela seleção de oito peptídeos sintéticos e desenvolvimento de uma proteína quimera recombinante com alto potencial no diagnóstico da cisticercose bovina. Foram selecionadas três diferentes proteínas de Taenia saginata (GenBank) (18 kDa oncosphere antigen [Taenia saginata]; Antigen TSA16 [Taenia saginata]; Antigen TSA36 [Taenia saginata] Heat shock protein 20 homolog [Taenia saginata]), e realizada a predição de oito peptídeos (EP1-EP8) selecionados por diferentes programas de bioinformática. Após sintetização e análise do desempenho dos peptídeos pelo ELISA, foram selecionados os três peptídeos que alcançaram melhores resultados (EP1, EP4 e EP6) para compor uma proteína recombinante quimérica, que posteriormente foi denominada de rqTSA-25. A proteína rqTSA-25 obteve as seguintes taxas de desempenho no ELISA: sensibilidade de 88% (IC=76-94%), especificidade de 96% (IC=84-99%), valor preditivo positivo 96% (IC=86-99%), valor preditivo negativo 87% (IC=74-94%) e acurácia de 92%, sendo que, ao submeter diferentes amostras de soro grupo controle ao teste imunoblot, não foi verificada nenhuma reação falso positiva ou falso negativa. Dessa forma, destaca-se a inovação na produção da proteína rqTSA-25 e seu alto desempenho relatado, sendo um importante aliado na melhoria do teste diagnóstico sorológico para o diagnóstico da cisticercose bovina. / Bovine cysticercosis is a zoonotic disease that causes losses both for health and economic order. Traditionally the diagnosis is performed during the post-mortem inspection in slaughterhouses under sanitary inspection, and consistent basically in macroscopic visualization by means of cuts carried out in predicted muscle groups such as preferred for the implementation of cysticercosis. It is emphasized that this method has performance deficiencies, leaving pass unnoticed discrete forms of the disease. This research was developed with the goal of improving the performance of the diagnosis of bovine cysticercosis and serologic tests currently developed, allowing the presence of cysticercosis in live animals and increasing the reliability of the diagnosis. The research was characterized by the selection of synthetic peptides and development of a recombinant chimera protein with high potential for diagnosis of bovine cysticercosis. First, three different proteins were selected from Taenia saginata (GenBank) (18 kDa oncosphere antigen [Taenia saginata]; Antigen TSA16 [Taenia saginata]; Antigen TSA36 [Taenia saginata] Heat shock protein 20 homolog [Taenia saginata]), being carried out the prediction of eight peptides (EP1-EP8) with antigenic power by different bioinformatic programs. After synthesis and performance analysis of peptides by ELISA test, we selected three peptides that have reached the best performance rates (EP1, EP4 and EP6) to compose a chimeric recombinant protein, subsequently named rqTSA-25, which was inserted into pET 29a (+) for subsequent expression in bacterial system. The rqTSA-25 protein allowed the following performance ratios by ELISA: sensitivity 88% (CI = 76- 94%), specificity 96% (CI = 84-99%), positive predictive value 96% (CI = 86- 99%), negative predictive value 87% (CI = 74-94%) and 92% accuracy, and subjecting different samples of serum control group to immunoblotting, it was not found any false positive reaction or false negative. Thus, first it stands out of innovation in the production of rqTSA-25 protein and its reported performance, combined with important improvement in in the serologic test for the diagnosis of bovine cysticercosis.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_3357_Leonardo Trivilin.pdf: 4373003 bytes, checksum: ba83755888aa4df53774474f30563d8c (MD5) Previous issue date: 2010-02-10 / A fasciolose é uma doença causada pelo parasito trematodeo Fasciola hepatica que acomete o fígado e vias biliares de muitas espécies de animais. Objetivou-se com esta proposta realizar uma avaliação microscópica de fígados bovinos com fasciolose crônica por meio de alterações histopatológicas causadas pela presença do parasito e realização da imunofenotipagem da resposta imune na espécie bovina, avaliando o grau de resposta e sua influência no desenvolvimento da lesão. Além disso, propôs-se uma classificação do grau da lesão crônica no parênquima hepático conforme a evolução da infecção. Utilizou-se 100 fígados condenados por fasciolose no matadouro frigorífico de Atílio Vivácqua, ES. Coletou-se um fragmento de cada lobo hepático (direito e esquerdo) de cada fígado, que sofreu processamento histotécnico e coloração com hematoxilina-eosina e Tricômico de Masson, além da aplicação da imunoistoquímica com os anticorpos anti-CD3, anti-CD79α e anti-IgG. Avaliou-se diferentes graus e intensidade das lesões inflamatórias e fibróticas, sendo classificadas as amostras em Grau I, II e III. As lesões fibróticas se mostraram mais intensas em relação as inflamatórias e a proposta de categorização histopatológica das lesões hepáticas por fasciolose crônica em bovinos mostrou-se um método valioso de avaliação microscópica, uma vez que permite estabelecer o quadro evolutivo dessa enfermidade. Em relação à lesão fibrótica, no lobo direito e esquerdo as lesões foram mais importantes no espaço porta, sendo mais intensa no lobo esquerdo. Lesão fibrótica vascular foi marcante nas artérias que nas veias e sinusóides, principalmente no lobo esquerdo. Em relação à imunoistoquímica, houve marcação pelos anticorpos CD3+, CD79α+ e IgG+ tanto no lobo direito quanto no lobo esquerdo. A técnica de imunoistoquímica mostrou-se eficaz na caracterização do tipo celular presente na inflamação causada pela infecção por Fasciola hepatica, tornando-se importante no estudo da dinâmica da resposta inflamatória pelos bovinos. Palavras-chave: histopatologia, categorização, imunofenotipagem, fasciolose, ruminantes