Orientador: Humberto Tonhati / Resumo: A mastite é a enfermidade que mais causa prejuízos de ordem quantitativa e qualitativa nos sistemas de produção de leite no mundo. A prevenção e controle da doença precisam envolver atividades práticas e eficientes que auxiliem a tomada de decisões rápidas na fazenda. Os métodos de triagem para o diagnóstico da mastite aplicados às búfalas leiteiras são aqueles desenvolvidos especificamente para as vacas. Assim, o objetivo geral da tese foi estudar a mastite subclínica em búfalas e avaliar os métodos de triagem que auxiliam o diagnóstico da doença na fazenda. O trabalho se divide em quatro capítulos que tratam de: revisar a literatura sobre as temáticas (I); caracterizar o leite de quartos mamários com e sem infecção intramamária, e avaliar a associação entre a presença de infecção intramamária e as características microbiológicas do leite de quartos mamários de búfalas, posição dos tetos e os resultados dos métodos de triagem (II); e avaliar os testes rápidos California Mastitis Test , Somaticell e condutividade elétrica como métodos de triagem para auxiliar o diagnóstico da mastite subclínica em búfalas diretamente na fazenda (III). O estudo foi realizado em um rebanho de búfalas no estado do Rio Grande do Norte. Foram colhidas 533 amostras de leite de quartos mamários que foram submetidas à contagem eletrônica de células somáticas (CCS), aos testes de triagem (California Mastitis Test – CMT, teste Somaticell - SO e condutividade elétrica – CEL) e ao exame microbiológico pa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mastitis is the disease that causes the most quantitative and qualitative losses in milk production systems in the world. Disease prevention and control need to involve practical and efficient actions that may help on decision-making on farm. Screening methods applied for mastitis diagnosis in dairy buffaloes are those developed specifically for cows. Thus, the objective of the thesis was to study subclinical mastitis in buffaloes and to evaluate the screening methods that help the disease diagnosis in farm. The work is divided into four chapters that deal with: reviewing the literature on the themes (I); to characterize breast milk with and without intramammary infection and to evaluate the association between the presence of intramammary infection and microbiological characteristics of buffalo milk, teat position, and the results of screening methods (II); and evaluate the California Mastitis Test (CMT), Somaticell (SO) and electrical conductivity (EC) rapid tests as a screening method to assist the diagnosis of subclinical mastitis in buffaloes on farm (III). The work was developed in a buffaloes commercial herd in the Rio Grande do Norte state. A total of 533 randomly selected milk samples were obtained and submitted to electronic somatic cell count (SCC), screening tests (CMT, SO and EC) and microbiological examination for diagnosis of subclinical mastitis (IMM: positive/negative), infection classification (negative, contagious, environmental, mixed and opportunistic) an... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

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Resumo: O búfalo de rio (Bubalus bubalis) é uma espécie de interesse econômico pertencente à família Bovidae, utilizado para a produção de carne e leite, além de força de trabalho no campo. Recentemente, a construção de um painel de linhagens celulares contendo fragmentos do genoma do búfalo de rio, incorporado ao genoma de hamster (BBURH5000), está permitindo o mapeamento de todos os cromossomos bubalinos, representando a única ferramenta genômica desta categoria para o estudo da espécie. A utilização deste painel de células associado a análises estatísticas está gerando mapas genômicos de alta resolução contendo diferentes tipos de marcadores moleculares. O presente trabalho teve por objetivo utilizar este painel de células para a construção de um mapa genômico preliminar do braço curto do cromossomo 4 bubalino. Para tal, foram testados com o DNA bubalino, seqüências de oligonucleotídeos para PCR de 39 marcadores moleculares previamente mapeados no cromossomo 28 bovino, o qual foi descrito na literatura como o homólogo ao braço curto do cromossomo 4 de búfalo. Do total de marcadores testados, 14 (8 genes e 6 microssatélites) geraram produtos de PCR adequados ao mapeamento utilizando o painel BBURH5000. A freqüência de retenção de cada marcador no painel variou de 34,4%, para os marcadores, ANXA8, PPYR1 e ZNF33A a 43,3% para o marcador BMC6020. Utilizando os 14 marcadores, acrescidos de outros 10 marcadores (1 EST, 5 STS e 4 microssatélites) genotipados por pesquisadores da Texas A&M University, um mapa genômico RH preliminar foi construído para o braço curto do cromossomo 4 bubalino. A comparação desse mapa com mapas do cromossomo 28 bovino (BTA28) evidenciou extensa conservação na ordem dos marcadores no mapa obtido. / Abstract: The river buffalo (Bubalus bubalis), a member of the Bovidae family, is an economically important livestock specie useful to produce milk, meat, as well as source of labor. Recently, a whole-genome 5000-rad radiation hybrid panel was constructed for the river buffalo genome (BBURH5000 panel), which has been used to generated RH maps of several chromosomes from the specie. The goal of this study was to construct a preliminary RH map of the river buffalo chromosome 4 (BBU4p), using the BBURH5000 panel. Previous studies identified bovine chromosome 28 (BTA28) as homologous to BBU4p. Cattle derived PCR primers from 39 markers previously mapped in cattle, were tested with buffalo DNA. A total of 14 (8 genes and 6 microsatellites) of the 39 markers amplified PCR products suitable for the RH mapping. Retention frequencies of individual markers ranged from 34.4% for ANXA8, PPYR1 and ZNF33A to 43.3% for BMC6020. The preliminary RH map for BBU4p was constructed with a total of 24 markers, 14 from this study combined with 10 markers (1 EST, 5 STS and 4 microsatellites) genotyped by researchers at Texas A&M University. Comparisons of the BBU4p RH map with BTA28 revealed extensive conservation in the order of the mapped markers. Keywords: Bubalus bubalis; genome; river buffalo; RH mapping / Orientador: Maria Elisabete Jorge Amaral / Coorientador: Claudia Regina Bonini-Domingos / Banca: Artur Luiz da Costa da Silva / Banca: Mary Massumi Itoyama / Mestre

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-05T15:27:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PolimorfismosRegiaoPromotora.pdf: 1207589 bytes, checksum: 89710385da588ac529aef5a628bb1770 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-10T13:29:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PolimorfismosRegiaoPromotora.pdf: 1207589 bytes, checksum: 89710385da588ac529aef5a628bb1770 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-10T13:29:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PolimorfismosRegiaoPromotora.pdf: 1207589 bytes, checksum: 89710385da588ac529aef5a628bb1770 (MD5) Previous issue date: 2015-06-18 / A produção de bubalinos no Estado do Pará é uma atividade de alta representatividade para a economia regional e produção de carne, leite e derivados. Portanto, é necessário desenvolver novas tecnologias que aumente o desfrute da produção e reprodução de bubalinos na região Amazônica. Sendo assim, os objetivos desta tese de pesquisa foram caracterizar a região promotora do gene do receptor da melatonina 1 A (MTRN1A) e identificar polimorfismos nos éxons I e II do referido gene e associá-los a características reprodutivas de relevância econômica em búfalas na região Amazônica. Foram coletados amostras de pelos de 400 búfalas e foram usados 60 animais para caracterização da região promotora, 140 para detectar o polimorfismo (SNPs) no éxon II e 77 para detectar o polimorfismo no éxon I. Foi realizada a extração de DNA pelo método fenólico. Em seguida selecionaram-se os diferentes iniciadores para realizar as reações em cadeia da polimerase (PCR). A região promotora do MTRN1A foi sequenciada em um total de 1621 pares de base pelo método de Sanger, o polimorfismo no éxon II foi detectado através da técnica de PCR-RFLP (Polimorfismo de restrição de comprimento de fragmentos) com a enzima HpaI e o polimorfismo no éxon I foi detectado através do sequenciamento de DNA pelo método Sanger. Foram avaliadas as frequências alélicas e genotípicas de todos os SNPs, os coeficientes de endocruzamento (Fis) e as probabilidades de Hardy-Weinberg. Os SNPs da região promotora e do éxon I foram associados com características reprodutivas das búfalas pelo ANOVA, ou teste t de Student e/ou teste qui-quadrado. O nível de significância foi de 0,05. Foram detectados 26 SNPs na região promotora nas posições -1511 (C→T), -1465 (G→T), -1422 (A→G), -1411 (G→A), - 1395 (G→T), -1298 (A→G), -1295(G→A), -1242 (A→C), -1150 (C→T), -1147 (G→C), - 1136(A→G), -911 (G→A), -909 (A→G), -724 (C→G), -656 (A→C), -649 (T→C), -644 (G→A), -511 (A→C), -481 (G→A), -425 (C→T), -395 (G→A), -383 (G→T), -254 (C→T), - 206 (T→C), -133 (T→G) e -94 (C→T) e um bloco de deleção (ACAA) na posição -1483. Do total de SNPs detectados, 75% dos alelos selvagens tiveral frequências maiores que 0,5. Para a característica Intervalo entre Parto (IEP), somente cinco SNPs (-1298, -1136, -911, -724 e - 656) foram significativamente associados (P<0,05) e outros três SNPs (-1395, -724 e -94) foram associados significativamente (P<0,05) com a característica Idade ao Primeiro Parto (IPP) e nenhum para a característica concentração de partos (P>0,05). Um total de 11 SNPs foi fortemente associado a fatores de ligação para a regulação gênica. O SNP no éxon II por PCR-RFLP (HpaI) na posição 306 de (T→C), sendo o alelo T mais frequente nos animais de Terra Firme (0,529) e o C em animais de Várzea, as duas populações apresentaram coeficientes de endocruzamento Fis (0,040 e 0,091, respectivamente) e fortes desvios de Hardy-Weinberg (P>0,05). A mutação ocorre no 106° codon e é do tipo sinonímio sem alteração da estrutura de alças do RNA mensageiro. O SNP no éxon I foi detectado na posição 62 (T→C) e do tipo não sinonímio, trocando de Leucina para Prolina. O alelo mutante C foi o mais frequente (0,623), coeficiente de endocruzamento Fis=0,397 e desvios de Hardy- Weinberg (P<0,05). Nenhum dos genótipos foram associados ao interval entre partos e a idade do primeiro parto (P>0,05). Portanto, os SNPs são fortes candidatos para seleção, mas seria interessante avaliá-los em outros rebanhos na região Amazônica e/ou em outras regiões do Brasil e/ou em outros países para efetivá-los como excelentes marcadores moleculares para características reprodutivas de bubalinas. / The buffaloes production in the Pará state have is a high representative activity to the regional economy and production of meat, milk and dairy products. Therefore, it is necessary to develop new technologies that increase the enjoyment of the production and reproduction of buffaloes in the Amazon region. Thus, the objectives of this research thesis was to characterize the promoter region of the melatonin receptor gene 1 (MTRN1A) and identify polymorphisms in exons I and II of that gene and link them to reproductive traits that have economic importance in buffaloes in the region Amazon. Were collected 400 buffaloes samples and 60 animals were used to characterize the promoter region, 140 to detect the polymorphism (SNPs) in exon II and 77 to detect the polymorphism in exon I. DNA extraction was peformed by phenol method. Then were selected different primers to make Polymerase Chain Reaction (PCR). The promoter region was sequenced MTRN1A a total of 1621 base pairs by the Sanger method, polymorphism in exon II was detected by PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) with HpaI enzyme and the polymorphism exon I was found by sequencing DNA by Sanger method. Allele and genotype frequencies of all SNPs were evaluated, the inbreeding coefficient (Fis) and the likelihood of Hardy-Weinberg equilibrium. SNPs in the promoter region and exon I have been associated with reproductive traits of buffaloes by ANOVA or Student's t test and / or chisquare test. The significance level was 0,05. 26 SNPs were detected in the promoter region at positions -1511 (C → T), -1465 (G → T), -1422 (A → G), -1411 (G → A), -1395 (G → T), - 1298 (A → G) -1295 (G → A) -1242 (C → A) -1150 (C → T), -1 147 (G → C) -1136 (A → G) -911 ( G → A), -909 (A → G) -724 (C → G) -656 (A → C) -649 (C → T), -644 (G → A), -511 (A → C) -481 (G → A), -425 (C → T) -395 (G → A), -383 (G → T), -254 (C → T) -206 (T → C) , -133 (T → G) and -94 (C → T) and a deletion unit (ACAA) at position -1483. Of the total detected SNPs, 75% of the wild alleles tiveral frequencies greater than 0,5. For the characteristic interval between calving (IEP), only five SNPs (-1298, -1136, -911, -724 and - 656) were significantly associated (P <0.05) and three SNPs (-1395, -724 and -94) were significantly associated (P <0.05) with the characteristic age at first calving (IPP) and none for the characteristic concentration of deliveries (P> 0.05). A total of 11 SNPs was strongly associated with binding factors in gene regulation. The SNP in exon II by PCR-RFLP (HpaI) at position 306 (T → C), the most frequent allele T in Upland animals (0,529) and C in lowland animals, the two populations showed coefficients Fis inbreeding (0,040 and 0,091, respectively) and strong deviations from Hardy-Weinberg equilibrium (P> 0.05). The mutation occurs at codon 106 and is the sinonímio type without changing the messenger RNA handles structure. The SNP in exon I was detected at position 62 (T → C) and of the non sinonímio, exchanging of Leucine to Proline. The mutant allele was the most frequent C (0,623) inbreeding coefficient Fis = 0.397 and Hardy-Weinberg deviations (P <0.05). None of the genotypes were associated with calving interval and age at first birth (P> 0.05). Therefore, SNPs are strong candidates for selection, but it would be interesting to evaluate them in other herds in the Amazon region and / or in other regions of Brazil and / or other countries to effect them as excellent molecular markers for reproductive traits of buffalo.

Orientador: Maria Elisabete Jorge Amaral / Banca: Humberto Tonhati / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Beatriz da Costa Aguiar Alves Reis / Banca: Luciane Madureira de Almeida / Resumo: O crescimento da população bubalina em território brasileiro está relacionado ao interesse dos produtores nesse animal, como uma alternativa para a produção de carne, leite e seus derivados. Diante deste panorama, torna-se necessário o aprimoramento de programas de melhoramento genético, visando a seleção de animais geneticamente superiores para a reprodução. Por essa razão, o conhecimento do genoma da espécie é de extrema valia para o setor, uma vez que gera informações necessárias à identificação e avaliação de genes associados com características de interesse econômico. Desse modo, o presente trabalho envolveu a construção de uma nova ferramenta genômica para búfalo, denominada biblioteca BAC, a qual permitirá um novo direcionamento nos estudos moleculares do genoma bubalino, destacando-se a definição da estrutura e organização de genes de interesse econômico, fornecendo informações em nível de seqüência de DNA para o entendimento dos mecanismos e regulação dos mesmos. Com a disponibilidade dessa ferramenta, as primeiras regiões a serem caracterizadas serão aquelas que contêm genes de interesse econômico, as quais se destacam as regiões com genes relacionados com produção e qualidade do leite, regiões com genes relacionados com resposta imune e adaptativa, e regiões com genes da família das lipocalinas, os quais estão envolvidos com características de produção e reprodução. Porém, para que esses genes possam ser caracterizados por meio da biblioteca BAC de búfalo, há a necessidade de gerar marcadores para identificar e isolar clones específicos para esses genes. Marcadores derivados do genoma bovino têm sido utilizados com sucesso em estudos de mapeamento do genoma bubalino, os quais podem ser uma fonte importante de marcadores. Porém, para famílias gênicas, há a necessidade da geração de marcadores específicos para búfalo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The increase of the buffalo population in Brazil is the result of the great interest of the producers as an alternative source for the production of meat, milk and dairy products. Thus, it becomes necessary genetic improvement programs more effective, in order to select genetically superior animals for breeding. The knowledge of the buffalo genome is valuable in this regard, since it generates information to identify and evaluate genes associated with economically traits. In this project we constructed a new genomic tool for buffalo - a genomic BAC library - which can be used in molecular studies of buffalo genome especially those related with the definition of the molecular structure and organization of economically important genes. Once this genomic tool is available, the first target regions of the buffalo genome to be characterized are those containing genes related to milk production, adaptive and innate immune response, and regions lipocalin genes involved in reproduction and production traits. However, to characterize these regions using the BAC library is necessary to have molecular markers to be able to identify and isolate the specific clones. Markers derived from the bovine genome have been successfully used in buffalo genome mapping studies, showing to be an important source of markers. On the another hand, for those genes found in the genome as gene families, there is a need for buffalo specific markers. The evaluation of new markers will contribute to the characterization of those target regions of the buffalo genome, providing information about the genomic architecture of this specie when compared with other bovid / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-06Bitstream added on 2014-06-13T20:33:41Z : No. of bitstreams: 1 fornitano_lc_me_sjrp.pdf: 1355762 bytes, checksum: 8d684160e1b0f3eb1f0e1d5b46e64744 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Nsf - Nacional Science Foundation / No presente trabalho, apresentamos o primeiro mapa RH do cromossomo 16 bubalino (BBU16), construído com a utilização do painel celular BBURH5000. Seqüências de primers para PCR de 30 genes derivados do cromossomo 15 bovino (BTA15) foram testados com DNA de búfalo para a construção do mapa RH BBU16. Dos marcadores testados, 11 geraram produtos de PCR específicos com o DNA de búfalo, mostrando-se adequados para o mapeamento utilizando o painel BBURH5000. A partir de análises estatísticas, 9 genes foram incluídos no primeiro mapa RH do cromossomo BBU16 contendo apenas um grupo de ligação. As freqüências de retenção (FR) dos marcadores variaram entre 16,6% (SDHD) e 32,2% (PORIMIN). Comparando-se o mapa RH obtido com a sequência do BTA15, pode-se verificar que não houve discrepâncias quanto a ordem dos 9 genes em ambas espécies, evidenciando a conservação da ordem linear desses marcadores nas mesmas / This paper describes a radiation hybrid (RH) map of river buffalo (Bubalus bubalis) chromosome 16, generated from a previously described river buffalo whole genome RH panel (BBURH5000). PCR Primer sequences were selected for 30 cattle derived genes mapped on bovine chromosome 15. From the total number of selected markers, 11 generated specific PCR products with buffalo DNA and were suitable for mapping using the BBURH5000 panel. The statistical analysis included 9 genes on the BBU16 RH map, which were distributed in one linkage group. Retention frequencies (RF) ranged from 16,6% for SDHD and 32,2 % for PORIMIN. The marker order on the linkage group is entirely consistent with the current BTA15 sequence assembly (Btau_4.0), indicating a conservation in the order of the genes on both species

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-28Bitstream added on 2014-06-13T18:29:24Z : No. of bitstreams: 1 pelai_va_me_sjrp.pdf: 1678959 bytes, checksum: 207276333fc39f233dabe43abc0a259f (MD5) / Nsf - Nacional Science Foundation / Secretaria de Educação / O búfalo de rio (Bubalus bubalis) é uma espécie de interesse econômico pertencente à família Bovidae, utilizado para a produção de carne e leite, além de força de trabalho no campo. Recentemente, a construção de um painel de linhagens celulares contendo fragmentos do genoma do búfalo de rio, incorporado ao genoma de hamster (BBURH5000), está permitindo o mapeamento de todos os cromossomos bubalinos, representando a única ferramenta genômica desta categoria para o estudo da espécie. A utilização deste painel de células associado a análises estatísticas está gerando mapas genômicos de alta resolução contendo diferentes tipos de marcadores moleculares. O presente trabalho teve por objetivo utilizar este painel de células para a construção de um mapa genômico preliminar do braço curto do cromossomo 4 bubalino. Para tal, foram testados com o DNA bubalino, seqüências de oligonucleotídeos para PCR de 39 marcadores moleculares previamente mapeados no cromossomo 28 bovino, o qual foi descrito na literatura como o homólogo ao braço curto do cromossomo 4 de búfalo. Do total de marcadores testados, 14 (8 genes e 6 microssatélites) geraram produtos de PCR adequados ao mapeamento utilizando o painel BBURH5000. A freqüência de retenção de cada marcador no painel variou de 34,4%, para os marcadores, ANXA8, PPYR1 e ZNF33A a 43,3% para o marcador BMC6020. Utilizando os 14 marcadores, acrescidos de outros 10 marcadores (1 EST, 5 STS e 4 microssatélites) genotipados por pesquisadores da Texas A&M University, um mapa genômico RH preliminar foi construído para o braço curto do cromossomo 4 bubalino. A comparação desse mapa com mapas do cromossomo 28 bovino (BTA28) evidenciou extensa conservação na ordem dos marcadores no mapa obtido. / The river buffalo (Bubalus bubalis), a member of the Bovidae family, is an economically important livestock specie useful to produce milk, meat, as well as source of labor. Recently, a whole-genome 5000-rad radiation hybrid panel was constructed for the river buffalo genome (BBURH5000 panel), which has been used to generated RH maps of several chromosomes from the specie. The goal of this study was to construct a preliminary RH map of the river buffalo chromosome 4 (BBU4p), using the BBURH5000 panel. Previous studies identified bovine chromosome 28 (BTA28) as homologous to BBU4p. Cattle derived PCR primers from 39 markers previously mapped in cattle, were tested with buffalo DNA. A total of 14 (8 genes and 6 microsatellites) of the 39 markers amplified PCR products suitable for the RH mapping. Retention frequencies of individual markers ranged from 34.4% for ANXA8, PPYR1 and ZNF33A to 43.3% for BMC6020. The preliminary RH map for BBU4p was constructed with a total of 24 markers, 14 from this study combined with 10 markers (1 EST, 5 STS and 4 microsatellites) genotyped by researchers at Texas A&M University. Comparisons of the BBU4p RH map with BTA28 revealed extensive conservation in the order of the mapped markers. Keywords: Bubalus bubalis; genome; river buffalo; RH mapping

Orientador: Wilma Aparecida Starke Buzetti / Banca: Caris Maroni Nunes / Banca: Maria Conceição Zocoller Seno / Resumo: Toxocara vitulorum é um parasita nematódeo de alta freqüência no trato intestinal de búfalos, particularmente em bezerros búfalos de um a três meses de idade. Devido à sua alta morbidade e mortalidade, causa consideráveis prejuízos a bubalinocultura. A pesquisa objetivou a obtenção de antígenos de extrato larval solúvel bruto (Ex), do material excretor-secretor (ES) de larvas infectantes e do líquido perientérico (Pe) de adultos de T. vitulorum, bem como a separação das frações protéicas na mistura pelo SDS-PAGE, seguida da análise imunológica por "Western blot" (WB), utilizando-se soros imunes e colostros de búfalos naturalmente infectados com T. vitulorum além de camundongos imunes. O acompanhamento do quadro parasitário dos bezerros búfalos também foi realizado. Pôde-se verificar que os três antígenos, Pe, Ex e ES, apresentaram mobilidades eletroforéticas pelo SDS-PAGE revelando nove (11,5, 14,2, 31, 38, 58, 76, 88, 112 e 165 KDa), onze (11,2, 13,3, 16,5, 22, 25, 32, 43, 53, 68, 82 e 96 KDa) e oito (19, 48, 56, 64, 90, 110, 150 e 190 KDa) bandas protéicas, respectivamente. A maioria dessas frações separadas pela eletroforese, foi reconhecida por todos as amostras de soros e pelo colostro, quando analisada pelo WB. No entanto, somente as bandas de alto peso molecular (68 - 190 KDa) persistiram nos grupos de bezerros búfalos que se encontravam no pico, declínio ou expulsão e na ausência ou autocura, à exceção do antígeno ES, que desapareceu durante o processo de autocura. Já os soros de bezerros búfalos com um de vida, que mamaram o colostro e os daqueles que se encontravam em fase de aparecimento ou ascensão, revelaram com as mesmas frações detectadas no soro e no colostro das búfalas. Os três antígenos reagiram de forma cruzada entre si, quando foram testados com soros homólogos e heterólogos de camundongos imunizados experimentalmente com estes antígenos de T. vitulorum / Abstract: Toxocara vitulorum is a nematode parasite of small intestine of cattle and water buffaloes particularly buffalo calves with one to three months of age, causing high morbidity and mortality. The purpose of this research was the antigen obtaintion and characterization of crude soluble larval extract (Ex), excretory-secretory (ES) of infective larvae, and perienteric fluid (Pe) from adults of T. vitulorum, as well as the separation of protein fractions from the antigenic mixture by SDS-PAGE and analysis of each band by Western blot (WB), using immune sera and colostrum of buffaloes naturally infected by T. vitulorum, and mice experimentally immunized. The parasitological status of the buffalo calves was also evaluated using sequentially coprological examinations. The results showed that three antigens, Pe, Ex and ES, revealed nine (11,5, 14,2, 31, 38, 58, 76, 88, 112, and 165 KDa), eleven (11,2, 13,3, 16,5, 22, 25, 32, 43, 53, 68, 82, and 96 KDa) and eight (19, 48, 56, 64, 90, 110, 150, and 190 KDa) protein bands by SDS-PAGE, respectively. The majority of these isolated bands were recognized by sera and colostrum of all groups of infected animals (buffalo cows one day post parturition and buffalo calves in five different periods of T. vitulorum infection) analyzed by WB. However, only the fractions of high molecular weight (68 - 190 KDa) persisted in the groups of buffalo calves at maximum peak of infection, expulsion and post-expulsion of the parasite or self-cure process, excepting ES antigen, that was not detected during the self-cure process. Sera of buffalo calves at one day of age, after suckling the colostrum and at the beginning of infection reacted with the same bands detected by serum and colostrum of the buffalo cows. The three antigens showed crossed reaction among themselves, when they were tested with homologous and heterologous sera of mice experimentally immunized with them / Mestre

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-05T11:21:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_DiagnosticoDeficienciasMacro.pdf: 574870 bytes, checksum: b9e97a91e59dc06785e3c6759f6842bd (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-09T18:00:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_DiagnosticoDeficienciasMacro.pdf: 574870 bytes, checksum: b9e97a91e59dc06785e3c6759f6842bd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-09T18:00:37Z (GMT). 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Os valores médios de cobre foram de 7,75ppm±1,73, os de cobalto 0,40ppm±0,17, os de zinco 88,01ppm±35,03, os de selênio 0,22ppm±0,12 e os ferro 1.395,72ppm±764,74. Esses resultados demonstram deficiência de cobre, de zinco e de selênio, valores adequados de cobalto e excesso de ferro no fígado. Após a suplementação por um período de sete meses os valores de fósforo foram de 6,61mg/dl±0,87 no soro e de 16,90%±0,56 no osso. O percentual de cinzas foi de 60,30%±0,95 e a densidade óssea específica de 1,71g/cm3±0,21. Esses valores caracterizam um aumento significativo nas concentrações de P no soro sanguíneo, no percentual de P nas cinzas e na densidade óssea específica (P<0,05), porém não houve um aumento significativo no percentual de cinzas no osso. O aumento médio nos valores de P no osso e nas cinzas não alcançou patamares de normalidade, entretanto 28,6% dos animais tinham valores normais de P no soro, 50% tinham valores normais de P nas cinzas e 64,3% dos animais tinham densidade óssea específica normal. Não houve resposta à suplementação em relação ao percentual de cinzas. Em relação aos micro minerais após a suplementação os valores foram de 205,41ppm±80,54 para o cobre, 0,40ppm±0,22 para o cobalto, 75,71ppm±11,74 para o zinco, 1,30ppm±1,34 para o selênio e 826,48ppm±394,76 para o ferro, o que evidencia um aumento significativo (P<0,05) nas concentrações de cobre e selênio e uma diminuição significativa nos valores de ferro (P<0,05). Não houve uma recuperação nos valores de zinco e as concentrações de cobalto permaneceram dentro dos valores de normalidade. O não aumento das concentrações de zinco no fígado após a suplementação pode ter ocorrido em virtude das concentrações elevadas de cálcio na Brachiaria brizantha cv Marandu utilizada na alimentação dos animais. / This study aimed to evaluate in buffaloes of the Marajó Island serum concentrations and phosphorus in bones, the percentage of ashes and the specific density of the bones, the levels of copper, cobalt, selenium, zinc and iron before and after selective mineral supplementation. For this study, 14 crossbred buffaloes of Murrah and Mediterranean aged between 18 and 36 months were used. The average values of phosphorus, before supplementation, were 5, 68 mg/dl ± 1.18 in serum and 16.53% ± 0.53 in the bones. The percentage of ashes in bones was 59.95% ± 1.96 and the specific bone density was 1,52 g/cm3 ± 0.32, which demonstrates a phosphorus deficiency in animals raised on the island of Marajó. The average copper values were 7.75 ± 1.73 ppm, the cobalt ± 0.17 0.40 ppm, the zinc of 88.01 ± 35.03 ppm, the 0.22 ppm selenium and iron ± 0.12 1395.72 ± 764.74 ppm. These results indicate a deficiency of copper, zinc and selenium, cobalt and appropriate values of excess iron in the liver. After supplementation for a period of seven months the phosphorus values were 6.61 mg / dl in serum ± 0.87 and 16.90 ± 0.56% in the bones. The percentage of ash was 60.30% ± 0.95 and the specific bone density was 1.71 g/cm3 ± 0.21. These values characterize a significant increase in the concentrations of P in blood serum, in the percentage of P in the ashes and on specific bone density (P < 0.05), however there wasn't a significant increase in the percentage of ash. The average increase in the values of P in the bones and the ashes did not reach heights of normality, however 28.6% of the animals had normal serum P values, 50% had normal values of P in the ashes and 64.3% of the animals had specific normal bone density. There was no response to supplementation in relation to the percentage of ash. Regarding micro minerals, after supplementation values were 205.41 ± 80.54 ppm for copper, 0.40 ± 0.22 ppm for cobalt, 75.71 ± 11.74 ppm for zinc, 1.30 ppm ± 1.34 for selenium and 826.48 ± 394.76 ppm for iron, which shows a significant increase (P <0.05) concentrations of copper and selenium and a significant decrease in the amounts of iron (P <0, 05). There was no response to supplementation in relation to the percentage of ashes. Regarding micro minerals, after supplementation values were 205.41 ± 80.54 ppm for copper, 0.40 ± 0.22 ppm for cobalt, 75.71 ± 11.74 ppm for zinc, 1.30 ppm ± 1.34 for selenium and 826.48 ± 394.76 ppm for iron, which shows a significant increase (P <0.05) concentrations of copper and selenium and a significant decrease in the amounts of iron (P <0, 05). There was no recovery of zinc and cobalt concentrations which remained within the normal range. Failure to increased concentrations of zinc in the liver after supplementation may have occurred because of the high concentrations of calcium in Brachiaria brizantha cv Marandu used in animal nutrition.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-05T11:54:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_DeteccaoMolecularVirus.pdf: 1447556 bytes, checksum: 5088b76ee0620f0fb8e6f412cc505896 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-10T11:38:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_DeteccaoMolecularVirus.pdf: 1447556 bytes, checksum: 5088b76ee0620f0fb8e6f412cc505896 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-10T11:38:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_DeteccaoMolecularVirus.pdf: 1447556 bytes, checksum: 5088b76ee0620f0fb8e6f412cc505896 (MD5) Previous issue date: 2014-12-12 / A imunodeficiência viral bovina é uma doença crônica e progressiva causada por um lentivírus que acomete bovinos e bubalinos. Embora a infecção seja relatada em bovinos em vários países do mundo, inclusive no Brasil, em bubalinos só existem dois relatos da infecção, um no Paquistão e outro no Camboja. Diante disso o objetivo desse trabalho foi verificar a ocorrência do vírus da imunodeficiência bovina (BIV) em búfalos provenientes do estado do Pará, região Norte do Brasil. Para verificar a ocorrência do BIV no rebanho foi feita a detecção do DNA proviral em 607 amostras de sangue de búfalos obtidas de 10 propriedades do estado do Pará, por meio da reação em cadeia da polimerase - semi-nested (PCR-SN) utilizando-se primers específicos para a região pol do genoma do vírus. Das 607 amostras testadas na PCR-SN para o BIV, 27 (4,4%) foram positivas. As sequências amplificadas foram confirmadas por clonagem e sequenciamento de nucleotídeos. A similaridade da sequência de nucleotídeos das amostras isoladas com a estirpe de referência (R-29) foi de 99%. Epidemiologicamente, este estudo fornece dados iniciais importantes, que revelam a primeira detecção no Brasil da presença do BIV em bubalinos e alertando sobre a possibilidade do vírus funcionar como um fator de risco para a saúde das populações de bubalinos e um potencial agente causador de doença crônica. / Bovine viral immunodeficiency is a chronic and progressive disease caused by a lentivirus that affects cattle and buffalo. Although infection is reported in cattle in several countries, including Brazil, in buffalo there are only two reports of infection, one in Pakistan and one in Cambodia. The aim of this research was to verify the occurrence of bovine immunodeficiency virus (BIV) in buffaloes from the state of Pará, northern Brazil. To verify the occurrence of BIV in herds, the detection of proviral DNA in blood samples from 607 buffaloes obtained from 10 properties in the State of Pará, by semi-nested polymerase chain reaction (snPCR) were made using primers specific for the pol region in the genome of the virus. The 607 samples tested by snPCR for the BIV, 27 (4.4%) were positive. The amplified sequences were confirmed by cloning and nucleotide sequencing. The similarity of nucleotide sequence of the isolates with the reference strain (R-29) was 99%. Epidemiologically, this study provides important initial data, reporting the first detection of BIV in buffaloes in the Brazil and warning of the possibility of the virus function as a risk factor for the health of populations of buffaloes and a potential causative agent of chronic disease.