O câncer colorretal (CCR) é o terceiro tipo de câncer mais comum no mundo. Apesar dos avanços nos tratamentos convencionais, aproximadamente dois terços dos pacientes com CCR são submetidos à cirurgia potencialmente curativa. Entretanto, grande parte desses pacientes evolui mal, apresentando recidivas e/ou metástases. A busca de novos alvos moleculares para a terapia do CCR revelou a proteína celular Prion (PrPC) como um possível candidato. Trabalhos recentes sugerem participação direta ou indireta de PrPC no crescimento de tumores, na formação de metástases, na composição de complexos multiproteicos e na indução de vias de sinalização envolvidas em diversos processos biológicos, como proliferação. Além disso, PrPC foi descrito como um importante modulador do crescimento de tumor colorretal. Resultados prévios mostraram que a interação da proteína PrPC com a proteína HSP70/HSP90 Organizing Protein (HOP) induz proliferação em glioblastomas. HOP é uma proteína predominantemente citoplasmática, podendo também ser secretada associada às vesículas extracelulares. Assim, o presente estudo objetivou avaliar o papel do complexo PrPC-HOP e das vesículas extracelulares no desenvolvimento e progressão dos tumores colorretais. Os nossos resultados mostram que HOP induziu migração e invasão em linhagens de CCR de maneira dependente de PrPC, uma vez que o uso do peptídeo sem atividade que compete pelo sítio ligação de HOP a PrPC inibiu estes processos. Além disso, nossos dados apontaram que o aumento de migração e invasão das células de CCR induzida pela interação PrPC-HOP é mediada pela ativação da via ERK1/2. Os achados in vitro estimularam a avaliação do perfil de expressão de PrPC e HOP por imuno-histoquímica em tecidos de pacientes com diferentes tipos de tumores colorretais. Nossos resultados sugeriram que essas proteínas são importantes no início do desenvolvimento tumoral e na transição de adenomas para adenocarcinomas, não havendo correlação entre a presença de HOP e/ou PrPC com metástase, linfonodos acometidos, estadiamento, sobrevida ou região tumoral versus tecido normal. Em relação ao papel das vesículas extracelulares na progressão dos tumores colorretais, nossos resultados mostraram que linhagens celulares que apresentam padrões parecidos de agressividade tumoral podem ter perfis de secreção de proteínas e vesículas extracelulares bastante diferentes, induzindo, portanto, processos biológicos com intensidades distintas. O meio condicionado e as vesículas extracelulares da linhagem WiDr apresentaram maior potencial de indução de migração quando comparado com a linhagem HCT8. Além disso, a modulação negativa da proteína VPS4, uma das responsáveis pela formação dos corpos multivesiculares, mostrou-se uma abordagem interessante no estudo da secreção de vesículas por células de CCR, uma vez que o dominante negativo de VPS4 promoveu diminuição do cargo proteico e da secreção de vesículas extracelulares, redução da proliferação celular e do efeito indutor do processo de migração na linhagem WiDr. Assim, em conjunto, o presente trabalho indicou que o complexo PrPC-HOP pode ser um bom alvo terapêutico nos processos de migração e invasão em CCR. Ainda, essas proteínas se mostraram importantes nos estágios iniciais da formação dos tumores. A modulação da secreção de vesículas extracelulares pode contribuir para retardar a progressão dos tumores colorretais. / Colorectal cancer (CRC) is the third most common type of cancer in the world. Despite improvements in conventional treatments, approximately two-thirds of CRC patients undergo potentially curative surgery. However, most of these patients evolve poorly, showing recurrence and/or metastasis. Search of new molecular targets for CRC therapy revealed the cellular protein Prion (PrPC) as a putative candidate. Recent studies have shown that PrPC exhibit direct or indirect participation in tumor growth, formation of metastasis, composition of multiprotein complexes and induction of signaling pathways involved in many biological processes such as proliferation. Moreover, PrPC has been described as an important modulator of colorectal tumor growth. Previous findings showed that the interaction between PrPC and its ligand HSP70/90 heat shock organizing protein (HOP) induces gliobastoma proliferation. It is well known that HOP localizes mainly in the cytoplasm but HOP is also secreted associated with extracellular vesicles. In this way, the present study sought to evaluate the role of PrPC-HOP complex and extracellular vesicles in the development and progression of CRC. We demonstrate that HOP induces the migration and invasion of CRC cell lines in a PrPC-dependent manner because the use of HOP peptide, which is able to bind to PrPC, blocking PrPC-HOP complex formation, inhibited the migration and invasion processes. In addition, our data showed that the enhancement of migration and invasion induced by PrPC-HOP interaction is mediated by ERK1/2 pathway activation. These in vitro results lead us to evaluate the PrPC and HOP expression by immunohistochemistry in tissues from patients with different tumor types. Our data showed that these proteins could be important for the initial steps of tumor development, represented by the transition from adenoma to adenocarcinoma. No correlation was found among HOP and/or PrPC expression and metastasis, lymph node involvement, staging, survival or tumor area versus normal tissue. Regarding the role of extracellular vesicles in the progression of colorectal tumors, our results showed that cell lines exhibiting similar aggressive tumor behavior can have a different protein secretion pattern and a distinct profile of extracellular vesicles release, which could induce biological process with different intensities. The conditioned medium and the extracellular vesicles derived from WiDr cell line showed a higher potential to induce migration than HCT8 cell line. Moreover, the negative modulation of VPS4, one of the proteins responsible for multivesicular body formation, showed to be an interesting approach in the study of extracellular vesicles secretion secreted by CRC cells; the negative dominant of VPS4 promoted in the WiDr cell line a reduction in the protein cargo and secretion of the extracellular vesicles, a decrease of cell proliferation and induction of migration process. Therefore, taken together, our data highlights that PrPC-HOP complex can be considered a new therapeutic target in migration and invasion processes of CRC. Moreover, these proteins appeared to be important at onset of tumor formation. The modulation of extracellular vesicles secretion may contribute for delaying the progression of colorectal tumors.

The human microbiome - defined as the microbial communities that live in and on our bodies - is emerging as a key factor in human diseases. The expanding research field that investigates the role of the microbiome on human cancer development, termed oncobiome, has led to important discoveries such as the role of Fusobacterium nucleatum in colorectal cancer carcinogenesis and tumor progression. Motivated by these discoveries, this thesis studied the oncobiome from different perspectives, investigating whether alterations to microbial profiles were associated with disease status or an adverse response to treatment. We used both biopsy tissue samples and 16S rRNA amplicon sequencing (N = 36), as well as privately and publicly available fecal whole metagenomes (N = 764) to investigate microbiome-colorectal cancer (CRC) associations. We observed significant increases in species richness in CRC, regardless of sample type or methodology, which was partially due to expansions of species typically from the oral cavity, as well as an overabundance of specific taxa such as Bacteroides fragilis, Fusobacterium, Desulfovibrio and Bilophila in CRC. Functional potential analysis of CRC metagenomes revealed that the choline trimethylamine-lyase (cutC) gene was over-abundant in CRC, with the strength of association dependent on four identified sequence variants, pointing at a novel potential mechanism of CRC carcinogenesis. Predictive microbiome signatures trained on the combination of multiple datasets showed very high and consistent performances on distinct cohorts (average AUC 0.83, minimum 0.81). To investigate the microbiomes role in response to treatment, we profiled microbial communities of gastric wash samples in gastric cancer patients (N = 36) before and after neoadjuvant chemotherapy through 16S rRNA amplicon sequencing. Gastric wash microbial communities presented remarkably high inter-individual variation, with significant decreases in richness and phylogenetic diversity after treatment and associations with pH, pathological response and sample collection. The most abundant genera found in patients before or after chemotherapy treatment included Streptococcus, Prevotella, Rothia and Veillonella. Despite limitations inherent to differing experimental choices, this thesis provides microbiome signatures that can be the basis for clinical prognostic tests and hypothesis-driven mechanistic studies, as well as supporting the role of the human oral microbiome in whole-body diseases. / O microbioma humano - definido como as comunidades microbianas que vivem sobre e dentro do corpo humano - está se tornando um fator cada vez mais importante em doenças humanas. O campo de estudo que investiga o papel do microbioma no desenvolvimento do câncer humano, denominado oncobioma, está crescendo e já levou a importantes descobertas como o papel da espécie Fusobacterium nucleatum na carcinogênese e progressão tumoral de tumores colorretais. Motivado por estas descobertas, esta tese de doutorado analisou o oncobioma por diferentes perspectivas, investigando se alterações nos perfis microbianos estavam associados à presença da doença ou a uma resposta adversa ao tratamento. Usamos tanto amostras de tecidos de biópsias e o sequenciamento do gene 16S rRNA (N = 36), quanto metagenomas fecais públicos e privados (N = 764), para investigar associações entre o microbioma e o câncer colorretal (CCR). Observamos um aumento significativo da riqueza microbiana no CCR, independentemente do tipo da amostra ou metodologia, que era em parte, devido ao aumento de espécies tipicamente presentes na cavidade oral. Observamos também um aumento da abundância de táxons específicos no CCR, que incluíam Bacteroides fragilis, Fusobacterium, Desulfovibrio e Bilophila. Analisando o potencial funcional dos metagenomas, encontramos um aumento significativo da enzima liase colina trimetilamina (cutC) no CCR, cuja associação era dependente de 4 variantes de sequência, demonstrando ser um possível novo mecanismo de carcinogênese no CCR. Assinaturas preditivas do microbioma treinadas na combinação dos estudos demonstraram ser altamente preditivas e consistentes nos diferentes estudos (média de AUC 0.83, mínimo de 0.81). Para investigar o possível papel do microbioma na resposta ao tratamento, analisamos os perfis microbianos do suco gástrico de pacientes com câncer gástrico (N = 36) antes e depois do tratamento quimioterápico neoadjuvante. As comunidades microbianas apresentaram uma variabilidade inter-individual notavelmente grande, com diminuições significativas na riqueza e diversidade filogenética pós tratamento, além de estarem associadas principalmente ao pH, mas também à resposta patológica e ao tempo da coleta. Os gêneros mais abundantes encontrados nos pacientes antes ou depois da quimioterapia incluíam Streptococcus, Prevotella, Rothia e Veillonella. Apesar das limitações inerentes às escolhas experimentais, esta tese proporciona assinaturas do microbioma que podem servir de base para testes clínicos prognósticos e estudos mecanísticos, além de dar mais suporte ao papel do microbioma oral em doenças humanas.

The human microbiome - defined as the microbial communities that live in and on our bodies - is emerging as a key factor in human diseases. The expanding research field that investigates the role of the microbiome on human cancer development, termed oncobiome, has led to important discoveries such as the role of Fusobacterium nucleatum in colorectal cancer carcinogenesis and tumor progression. Motivated by these discoveries, this thesis studied the oncobiome from different perspectives, investigating whether alterations to microbial profiles were associated with disease status or an adverse response to treatment. We used both biopsy tissue samples and 16S rRNA amplicon sequencing (N = 36), as well as privately and publicly available fecal whole metagenomes (N = 764) to investigate microbiome-colorectal cancer (CRC) associations. We observed significant increases in species richness in CRC, regardless of sample type or methodology, which was partially due to expansions of species typically from the oral cavity, as well as an overabundance of specific taxa such as Bacteroides fragilis, Fusobacterium, Desulfovibrio and Bilophila in CRC. Functional potential analysis of CRC metagenomes revealed that the choline trimethylamine-lyase (cutC) gene was over-abundant in CRC, with the strength of association dependent on four identified sequence variants, pointing at a novel potential mechanism of CRC carcinogenesis. Predictive microbiome signatures trained on the combination of multiple datasets showed very high and consistent performances on distinct cohorts (average AUC 0.83, minimum 0.81). To investigate the microbiomes role in response to treatment, we profiled microbial communities of gastric wash samples in gastric cancer patients (N = 36) before and after neoadjuvant chemotherapy through 16S rRNA amplicon sequencing. Gastric wash microbial communities presented remarkably high inter-individual variation, with significant decreases in richness and phylogenetic diversity after treatment and associations with pH, pathological response and sample collection. The most abundant genera found in patients before or after chemotherapy treatment included Streptococcus, Prevotella, Rothia and Veillonella. Despite limitations inherent to differing experimental choices, this thesis provides microbiome signatures that can be the basis for clinical prognostic tests and hypothesis-driven mechanistic studies, as well as supporting the role of the human oral microbiome in whole-body diseases. / O microbioma humano - definido como as comunidades microbianas que vivem sobre e dentro do corpo humano - está se tornando um fator cada vez mais importante em doenças humanas. O campo de estudo que investiga o papel do microbioma no desenvolvimento do câncer humano, denominado oncobioma, está crescendo e já levou a importantes descobertas como o papel da espécie Fusobacterium nucleatum na carcinogênese e progressão tumoral de tumores colorretais. Motivado por estas descobertas, esta tese de doutorado analisou o oncobioma por diferentes perspectivas, investigando se alterações nos perfis microbianos estavam associados à presença da doença ou a uma resposta adversa ao tratamento. Usamos tanto amostras de tecidos de biópsias e o sequenciamento do gene 16S rRNA (N = 36), quanto metagenomas fecais públicos e privados (N = 764), para investigar associações entre o microbioma e o câncer colorretal (CCR). Observamos um aumento significativo da riqueza microbiana no CCR, independentemente do tipo da amostra ou metodologia, que era em parte, devido ao aumento de espécies tipicamente presentes na cavidade oral. Observamos também um aumento da abundância de táxons específicos no CCR, que incluíam Bacteroides fragilis, Fusobacterium, Desulfovibrio e Bilophila. Analisando o potencial funcional dos metagenomas, encontramos um aumento significativo da enzima liase colina trimetilamina (cutC) no CCR, cuja associação era dependente de 4 variantes de sequência, demonstrando ser um possível novo mecanismo de carcinogênese no CCR. Assinaturas preditivas do microbioma treinadas na combinação dos estudos demonstraram ser altamente preditivas e consistentes nos diferentes estudos (média de AUC 0.83, mínimo de 0.81). Para investigar o possível papel do microbioma na resposta ao tratamento, analisamos os perfis microbianos do suco gástrico de pacientes com câncer gástrico (N = 36) antes e depois do tratamento quimioterápico neoadjuvante. As comunidades microbianas apresentaram uma variabilidade inter-individual notavelmente grande, com diminuições significativas na riqueza e diversidade filogenética pós tratamento, além de estarem associadas principalmente ao pH, mas também à resposta patológica e ao tempo da coleta. Os gêneros mais abundantes encontrados nos pacientes antes ou depois da quimioterapia incluíam Streptococcus, Prevotella, Rothia e Veillonella. Apesar das limitações inerentes às escolhas experimentais, esta tese proporciona assinaturas do microbioma que podem servir de base para testes clínicos prognósticos e estudos mecanísticos, além de dar mais suporte ao papel do microbioma oral em doenças humanas.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 adrianapelegrinidossantospereira_tese.pdf: 3201580 bytes, checksum: 59b4939e04d87a7177a28e824c133afe (MD5) Previous issue date: 2012-10-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introdução: Pacientes estomizados intestinais proveniente de um câncer colorretal apresentam uma série de problemas físicos, psicológicos e sociais, que podem afetar a sua qualidade de vida (QV) e de seus familiares. Objetivos: Avaliar e comparar a QV dos pacientes com estoma intestinal definitivo secundário ao câncer colorretal e de seus familiares utilizando o instrumento WHOQOL-bref; identificar o perfil sociodemográfico dos pacientes e de seus familiares, as características clínicas e as percepções da clientela com estoma intestinal definitivo secundário ao câncer colorretal. Material e método: Pesquisa descritiva de abordagem quali-quantitativa, que participaram 60 pacientes com estoma intestinal definitivo secundário ao câncer colorretal cadastrados no Núcleo Gestacional de Assistência de São José do Rio Preto e região, interior do Estado de São Paulo, Brasil e seus 60 cuidadores familiares, que residiam com os pacientes por no mínimo um ano. A coleta dos dados foi realizada por meio de entrevista e do questionário de QV WHOQOL-bref nos domicílios, durante o período de julho a dezembro de 2010. Foi utilizada a estatística descritiva, com cálculo de média, mediana, desvio padrão, coeficiente de variação e aplicado os testes de Mann-Whitney, Kruskal-Wallis e teste de consistência interna alfa de Cronbach. Foi considerado nível de significância de 5%. Os dados qualitativos foram coletados por meio da entrevista individual gravada, composta por questões norteadoras. Participaram 13 pacientes estomizados intestinais definitivos, de acordo com o critério de saturação das informações obtidas sobre suas percepções que foram submetidas a análise de prosa de André. Resultados: A maioria dos pacientes era do sexo masculino, idoso, casado, sem parceiro(a) sexual, com ensino fundamental completo, recebia até dois salários mínimos, tempo médio de estoma de três meses, orientado que teria um estoma, mas não foi demarcado o estoma para a cirurgia. A maioria dos familiares era do sexo feminino, com média de idade de 54 ± 6,36 anos, casada, com ensino fundamental completo e tendo como renda familiar até dois salários mínimos. A média da QV geral dos familiares e dos estomizados foi de 75,00, considerada satisfatória. Os domínios do WHOQOL-bref mais afetados nos familiares foram psicológico e ambiental e nos estomizados o físico e social. Somente o físico apresentou diferença estatisticamente significativa entre os estomizados e seus familiares (p= 0,033). As percepções dos pacientes estomizados intestinal definitivo foram categorizadas em quatro temas: sentimentos vivenciados, dificuldades vivenciadas após estoma, vida sexual hoje e perspectivas futuras. Emergiram das falas dos entrevistados onze tópicos: revolta, conformismo, fé, dificuldades no autocuidado, reinserção social, mudança no vestuário, sexo ausente e com prejuízos, apoio dos familiares, cura e melhor qualidade de vida. Conclusões: Os resultados deste estudo possibilitaram concluir que embora os pacientes estomizados apresentem em suas percepções limitações, com a ajuda de seus familiares é possível tanto à pessoa com estoma como o seu cuidador familiar ter uma QV satisfatória.

O câncer colorretal (CCR) é o quarto tipo mais incidente mundialmente e a taxa de mortalidade ocupa a terceira posição. Apresenta desenvolvimento lento e bom prognóstico quando diagnosticado em estadio inicial. Apesar de ser um câncer que pode ter rastreamento populacional, as políticas públicas não têm conseguido estabelecer estratégicas efetivas de prevenção e diagnóstico precoce. Este estudo teve como objetivo geral caracterizar o perfil epidemiológico da coorte dos pacientes diagnosticados com CCR, atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo (HCFMRP-USP), no período de janeiro de 2000 a dezembro de 2010. Estudo de coorte retrospectivo, longitudinal, baseado em dados secundários do Registro Hospitalar de Câncer (RHC) do HCFMRP-USP. As análises foram realizadas com o auxílio do Programa Excel 2010 da Microsoft e o Software R 3.0.1. Para análise da sobrevida, foi utilizado o método não paramétrico de Kaplan-Meier e para as associações foi aplicado o teste de Fisher e Qui-quadrado. Estudo aprovado pelo Comitê de Ética da Escola de Enfermagem de Ribeirão Preto- USP, nº 224.448/2012, Resolução CNS 466/2012. A população foi composta por 926 pacientes e os resultados evidenciaram prevalência do sexo masculino, com idade de 70 anos ou mais, 38,9% analfabetos/baixa escolaridade, 54,2% foram diagnosticados com o estadio III e IV e a localização predominante do tumor foi cólon e reto. O tempo médio entre a primeira consulta e o diagnóstico foi de 19,8 dias e entre o diagnóstico e o tratamento, foi de 27,8 dias. Observou-se igual sobrevida para homens e mulheres, sendo que o tempo médio entre o início do tratamento e a ocorrência do óbito foi de 626,3 dias. Conclui-se que há necessidade de investir na prevenção primária do CCR, com ações que minimizem os fatores de riscos conhecidos e na prevenção secundária com testes efetivos, como a pesquisa de sangue oculto nas fezes. Destaca-se ainda a urgente necessidade de políticas públicas mais direcionadas e investimento na educação permanente dos profissionais de saúde, principalmente o enfermeiro, que tem papel primordial na geração de conhecimento para esta população / Colorectal cancer (CCR) is the fourth most incident cancer worldwide and is the third leading cause of cancer-related deaths. It develops slowly and has a good prognosis when identified in early stages. Even though it can be screened in the population, public policies have not established effective preventive measures or early diagnosis strategies. This study\'s general objective was to characterize the epidemiological profile of a cohort of patients diagnosed with CCR cared for by the Hospital das Clinicas at University of São Paulo at Ribeirão Preto, Medical School (HCFMRP-USP) from January 2000 to December 2010. This longitudinal, retrospective cohort was based on secondary data from the Cancer Hospital Record from HCFMRP-USP. Analyses were performed using Excel 2010, Microsoft and R software 3.0.1. For the analysis of survival, Kaplan-Meier non-parametric method was used and the Fisher\'s test and Chi-square were used for associations. The study was approved by the Institutional Review Board at the College of Nursing at Ribeirão Preto, USP according to CNS Resolution 466/2012 (No. 224,448/2012). The population was composed of 926 patients and the results show a prevalence of 70 years old or older males, 38.9% were illiterate or had low level of education, 54.2% were diagnosed at stages III and IV, while the predominant sites were colon and rectum. The average time between the first consultation and diagnosis was 19.8 days and 27.8 days between diagnosis and treatment. Equal survival rates were observed for both men and women while the average time between the beginning of treatment and death was 626.3 days. There is a need to invest in CCR primary prevention with actions that minimize known risks and secondary prevention with effective tests such as fecal occult blood test. We also highlight the urgent need of public policies focused on this condition and investment on the permanent education of healthcare professionals, especially nurses who play an essential role in transmitting knowledge to this population

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundo de Auxílio aos Docentes e Alunos (FADA) / Durante a metastase, as celulas perdem seu contato tecidual original, movem-se pela matriz extracelular (MEC), invadem o sistema linfatico e/ou sanguineo, extravasam e formam novos tumores. Devido a isso, essas celulas tumorais precisam modificar sua adesao celula-MEC. Receptores de adesao exercem papeis cruciais na transformacao neoplasica de celulas normais atraves da inducao de comportamentos celulares e morfologicos especificos do cancer. Isto implica que celulas tumorais provavelmente expressam e utilizam um conjunto distinto de receptores de adesao celular durante e carcinogenese. Sindecam-2 e um proteoglicano transmembranico de heparam sulfato (HS) que participa da formacao de dominios especializados na membrana plasmatica e funciona diretamente como um vinculo entre o ambiente extracelular e a organizacao do citoplasma cortical. Em diversas linhagens celulares de cancer colorretal, a expressao de sindecam-2 encontra-se aumentada, quando comparada com linhagens normais, e este aumento parece ser critico para o comportamento das celulas cancerosas, uma vez que regula sua adesao e proliferacao, e, portanto, sua atividade tumorigenica. Os resultados obtidos neste trabalho demonstraram que em celulas de carcinoma colorretal altamente metastaticas, pertencentes a linhagem HCT-116, a expressao e a sintese de sindecam-2 sao intensificadas na presenca de MEC produzida por fibroblastos. Os demais sindecans sofrem diminuicao, assim como o HS presente na MEC produzida pelas celulas tumorais. Entre os componentes da MEC estromal, a fibronectina mostrou-se como principal responsavel pelo aumento de sindecam-2. Houve co-localizacao entre sindecam-2, integrina ƒÑ5ƒÒ1 e fibronectina, o que sugere a participacao destas moleculas no mecanismo de adesao em celulas HCT-116. Alem disso, o bloqueio de sindecam-2 resultou na nao formacao de fibras de estresse durante a adesao celular, indicando seu importante papel na regulacao de filamentos de actina. Fica claro, portanto, o papel fundamental da MEC estromal na regulacao da expressao de proteinas de superficie celular e provavelmente na sinalizacao para o interior de celulas cancerosas, modificando sua proliferacao, adesao e seu formato. / During metastasis cells lose their original tissue contacts, move through the extracellular matrix (ECM), enter the lymphatic and/or blood system, extravasate and subsequently form new tumors. Therefore, these tumor cells must experience changes in cell-ECM adhesion. Adhesion receptors play crucial roles in the neoplastic transformation of normal cells through the induction of cancer-specific cellular behavior and morphology. This implies that cancer cells likely express and utilize a distinct set of adhesion receptors during carcinogenesis. Syndecan-2 is a transmembrane heparan sulfate (HS) proteoglycan which has been implicated in the formation of specialized membrane domains and functions as a direct link between the extracellular environment and the organization of the cortical cytoplasm. In several colon-rectal cancer cell lines, syndecan-2 is highly expressed compared to normal cell lines. This increase appears to be critical for cancerous cell behavior since it regulates adhesion and proliferation and therefore the tumorigenic activity. The results of this study showed that in a highly metastatic colon-rectal cancer cell line, HCT-116, both expression and synthesis of syndecan-2 are enhanced when grown on ECM produced by fibroblasts. The expression of the others syndecans decreased, as did HS in the ECM produced by the cancer cells. Among the stromal components of ECM, the fibronectin was shown to be important for the increase of syndecan-2. Co-localization between syndecan-2, integrin ƒÑ5ƒÒ1 and fibronectin, suggests the involvement of these molecules in the adhesion mechanism of HCT-116 cells. Furthermore, blocking syndecan-2 with an antibody resulted in the absence of stress fibers during cell adhesion, indicating its important role in the regulation of actin filaments. Thus, the stromal ECM has a fundamental role in regulating the expression of cell surface proteins and probably signaling to the interior of cancer cells by altering their proliferation and adhesion, and its format. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

O câncer colorretal (CCR) é o quarto tipo mais incidente mundialmente e a taxa de mortalidade ocupa a terceira posição. Apresenta desenvolvimento lento e bom prognóstico quando diagnosticado em estadio inicial. Apesar de ser um câncer que pode ter rastreamento populacional, as políticas públicas não têm conseguido estabelecer estratégicas efetivas de prevenção e diagnóstico precoce. Este estudo teve como objetivo geral caracterizar o perfil epidemiológico da coorte dos pacientes diagnosticados com CCR, atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo (HCFMRP-USP), no período de janeiro de 2000 a dezembro de 2010. Estudo de coorte retrospectivo, longitudinal, baseado em dados secundários do Registro Hospitalar de Câncer (RHC) do HCFMRP-USP. As análises foram realizadas com o auxílio do Programa Excel 2010 da Microsoft e o Software R 3.0.1. Para análise da sobrevida, foi utilizado o método não paramétrico de Kaplan-Meier e para as associações foi aplicado o teste de Fisher e Qui-quadrado. Estudo aprovado pelo Comitê de Ética da Escola de Enfermagem de Ribeirão Preto- USP, nº 224.448/2012, Resolução CNS 466/2012. A população foi composta por 926 pacientes e os resultados evidenciaram prevalência do sexo masculino, com idade de 70 anos ou mais, 38,9% analfabetos/baixa escolaridade, 54,2% foram diagnosticados com o estadio III e IV e a localização predominante do tumor foi cólon e reto. O tempo médio entre a primeira consulta e o diagnóstico foi de 19,8 dias e entre o diagnóstico e o tratamento, foi de 27,8 dias. Observou-se igual sobrevida para homens e mulheres, sendo que o tempo médio entre o início do tratamento e a ocorrência do óbito foi de 626,3 dias. Conclui-se que há necessidade de investir na prevenção primária do CCR, com ações que minimizem os fatores de riscos conhecidos e na prevenção secundária com testes efetivos, como a pesquisa de sangue oculto nas fezes. Destaca-se ainda a urgente necessidade de políticas públicas mais direcionadas e investimento na educação permanente dos profissionais de saúde, principalmente o enfermeiro, que tem papel primordial na geração de conhecimento para esta população / Colorectal cancer (CCR) is the fourth most incident cancer worldwide and is the third leading cause of cancer-related deaths. It develops slowly and has a good prognosis when identified in early stages. Even though it can be screened in the population, public policies have not established effective preventive measures or early diagnosis strategies. This study\'s general objective was to characterize the epidemiological profile of a cohort of patients diagnosed with CCR cared for by the Hospital das Clinicas at University of São Paulo at Ribeirão Preto, Medical School (HCFMRP-USP) from January 2000 to December 2010. This longitudinal, retrospective cohort was based on secondary data from the Cancer Hospital Record from HCFMRP-USP. Analyses were performed using Excel 2010, Microsoft and R software 3.0.1. For the analysis of survival, Kaplan-Meier non-parametric method was used and the Fisher\'s test and Chi-square were used for associations. The study was approved by the Institutional Review Board at the College of Nursing at Ribeirão Preto, USP according to CNS Resolution 466/2012 (No. 224,448/2012). The population was composed of 926 patients and the results show a prevalence of 70 years old or older males, 38.9% were illiterate or had low level of education, 54.2% were diagnosed at stages III and IV, while the predominant sites were colon and rectum. The average time between the first consultation and diagnosis was 19.8 days and 27.8 days between diagnosis and treatment. Equal survival rates were observed for both men and women while the average time between the beginning of treatment and death was 626.3 days. There is a need to invest in CCR primary prevention with actions that minimize known risks and secondary prevention with effective tests such as fecal occult blood test. We also highlight the urgent need of public policies focused on this condition and investment on the permanent education of healthcare professionals, especially nurses who play an essential role in transmitting knowledge to this population

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: manganese dependent superoxide dismutase (SOD2), is an important antioxidant enzyme, superoxide dismutase to anion produced in mitochondria in hydrogen peroxide, which in turn is catalyzed by glutathione peroxidase (GPX) into water and oxygen. Although be crucial for healthy cell, the role of SOD2 in cancer is highly controversial because in some kinds of cancers this enzyme exhibits a marked antitumor activity, while in others have a pro-tumor role. Previous investigations involving a polymorphism in codon 16 of SOD2 gene in which there is an exchange of a valine with an alanine (Val16Ala-SOD2) have associated increased efficiency of enzyme SOD2 at high risk of some cancers. However, in certain types of tumors, such as colorectal cancer are conflicting results. Studies suggest that high levels in tumor cells SOD2 colorectal cancers are associated with tumor progression. Perhaps this difficulty in defining the role of SOD2 in colorectal cancer biology is linked to great influence of environmental factors on the gastrointestinal system, especially the diet. For this reason, the development of an unbalance pharmacological model to investigate the role of superoxide-anion imbalance hydrogen peroxide (Superoxide Anion Hydrogen Peroxide imbalance, AS-HP) in colorectal cancer may be relevant. Objective: This study investigated the in vitro effect of drug-AS-HP imbalance caused by exposure to paraquat and the porphyrin in the viability and proliferative rate of commercial line of colorectal cancer cells (HT-29) and the response of these cells to chemotherapy oxaliplatin. The study also assessed the effect of AS-HP unbalance in the modulation of the expression of apoptotic genes, cell cycle and oxidative in HT-29 cells. Methods. HT- 29 obtained from American Type Cell Culture Collection (ATCC) were grown in DMEM, 10% fetal bovine serum, 1% antibiotic and antifungal in an oven with 5% CO2 and 37 ° C temperature. After 24 h the transfer of cells to 96-well plates at a concentration of 10 5 cells per well were exposed to these concentrations of 0.1 uM paraquat which is a superoxide-generating molecule or porphyrin which is a molecule with a similar effect SOD2 enzyme. Part of the cells was treated with oxaliplatin at a concentration of 20um and the other not. The effect on the viability, cell proliferation, cell cycle, apoptosis and modulation of genes of the cell cycle, apoptosis and oxidative metabolism (SOD1, SOD2, CAT, GPX, Caspase 3, Caspase 8, BAX, BCL-2 and P53colocar the name gene) was also evaluated. Assays were done in triplicate and compared by analysis of variance followed via test post hoc Tukey. Results: pharmacological imbalance AS-HP obtained via exposure of colorectal cancer cells to paraquat and porphyrin changed the standard of viability, cell cycle and in the modulation of gene expression. Both paraquat as nna porphyrin concentration 0.1 uM reduced the viability and proliferation rate of HT-29 cells. However, this effect was more pronounced in cells exposed to paraquat. The action of oxaliplatin was enhanced by the presence of paraquat when analyzed, the mortality rate, apoptosis, cell proliferation rate. Paraquat tamém induced cell cycle interruption phases S and G2 / M Any paraquat as porphyrin were able to modulate differentially markers of oxidative metabolism and expression of genes investigated. However, the results were quite heterogeneous. This heterogeneity may be associated with chromosomal instability in cancer cells that have high levels, and varied mutational. Conclusion: The results confirm the hypothesis that the AS-HP unbalance acts on the biology of colorectal cancer, and in particular increased levels of superoxide, not only increase the mortality rate but also inhibit cell proliferation enhancing so antitumor action of oxaliplatin. These results may be clinically relevant in the construction of pharmaceutical and / or nutritional strategies as the use of vitamins and other dietary supplements which operate in AS-HP sheet and to assist in the successful chemotherapeutic treatment of disease. / Introdução: a superóxido dismutase dependente de manganês (SOD2), é uma importante enzima antioxidante, que dismuta o ânion superóxido produzido na mitocôndria em peróxido de hidrogênio, que por sua vez é catalisado pela glutationa peroxidase (GPX) em água e oxigênio. Apesar de ser crucial para a célula saudável, o papel da SOD2 no câncer é bastante controverso, pois em alguns tipos de neoplasias apresenta uma clara ação antitumoral, enquanto que em outras tem um papel pró tumoral. Investigações prévias envolvendo um polimorfismo no códon 16 do gene da SOD2 no qual ocorre uma troca de uma valina por uma alanina (Val16Ala-SOD2), têm associado maior eficiência da enzima SOD2 com risco elevado de alguns tipos de câncer. Entretanto, em certos tipos de tumores, como o câncer colorretal os resultados são conflitantes. Estudos sugerem que os níveis elevados de SOD2 em células de tumores colorretais estão associados com a progressão do tumor. Possivelmente esta dificuldade em definir o papel da SOD2 na biologia do câncer colorretal esteja vinculado a grande influência de fatores ambientais sobre o sistema gastrointestinal, com destaque a dieta. Por este motivo, o desenvolvimento de um modelo farmacológico de desbalanço para investigar o papel do desbalanço ânion superóxido-peroxido de hidrogênio (Superoxide Anion Hydrogen Peroxide imbalance, AS-HP) no câncer colorretal pode ser considerado relevante. Objetivo: investigar o efeito in vitro do desbalanço farmacológico do AS-HP causado pela exposição ao paraquat e a porfirina na viabilidade e taxa proliferativa da linhagem comercial de células de câncer colorretal (HT-29) e na resposta destas células ao quimioterápico oxaliplatina. O estudo também avaliou o efeito do desbalanço AS-HP na modulação da expressão de genes apoptóticos, do ciclo celular e oxidativos nas células HT-29. Métodos. Células HT-29 obtidas da American Type Culture Collection (ATCC) foram cultivadas em meio DMEM, 10% de soro bovino fetal, 1% de antibióticos e antifúngicos em estufa com CO2 a 5% e temperatura de 37oC. Após 24 h da transferência das células para placas de 96 poços na concentração de 10 5 células por poço, estas foram expostas a concentração de 0,1 uM de paraquat, que é uma molécula geradora de superóxido, ou de porfirina, que é uma molécula com efeito similar a enzima SOD2. Parte das células foi tratada com oxaliplatina na concentração de 20uM e outra não. O efeito na viabilidade, proliferação celular, ciclo celular, apoptose, e na modulação dos genes do ciclo celular, apoptose e metabolismo oxidativo (β-actina, SOD1, SOD2, CAT, GPX, Caspase 3, Caspase 8, BAX, BCL-2 e P53) também foram avaliados. Os ensaios foram realizados em triplicatas e comparados por análise de variância de uma via seguido de teste post hoc de Tukey. Resultados: o desbalanço farmacológico AS-HP obtido via exposição das células de câncer colorretal ao paraquat e porfirina alterou o padrão de viabilidade, ciclo celular e na modulação da expressão gênica. Tanto o paraquat quanto a porfirina na concentração 0,1 uM diminuíram a viabilidade e a taxa de proliferação das células HT-29. No entanto, este efeito foi mais pronunciado em células expostas ao paraquat. A ação da oxaliplatina foi potencializada pela presença do paraquat quando foram analisadas a taxa de mortalidade, apoptose, taxa de proliferação celular. O paraquat também induziu interrupção do ciclo celular nas fases S e G2 / M. Tanto o paraquat quanto a porfirina foram capazes de modular diferencialmente marcadores do metabolismo oxidativo e a expressão dos genes investigados. Entretanto, os resultados foram bastante heterogêneos. Esta heterogeneidade pode estar relacionada com a instabilidade cromossômica de células tumorais que apresentam níveis mutacionais altos e variados. Conclusão: os resultados obtidos corroboram a hipótese de que o desbalanço AS-HP age sobre a biologia do câncer colorretal, e que em especial o aumento nos níveis de superóxido, não só aumentam a taxa de mortalidade mas também inibem a proliferação celular, potencializando assim, a ação antitumoral da oxaliplatina. Estes resultados podem ser clinicamente relevantes na construção de estratégias farmacológicas e/ou nutricionais, como um adjuvante ao tratamento o uso de vitaminas ou outros suplementos dietéticos, que atuem no balanço AS-HP e que auxiliem no sucesso do tratamento quimioterápico da doença.

O Câncer Colorretal (CCR) consiste no terceiro tipo de câncer mais comum em homens e o segundo em mulheres. O tratamento, na maioria dos casos, implica na cirurgia geradora de estoma, que constitui um procedimento invasivo, com grande impacto em todas as áreas na vida da pessoa. O presente estudo teve por objetivos investigar prospectivamente variáveis relacionadas à imagem corporal, sintomas ansiosos e depressivos, domínios da Qualidade de Vida Relacionada a Saúde (QVRS) e as cognições, emoções e comportamentos diante do processo de adaptação ao estoma. Trata-se de um estudo exploratório, longitudinal e de abordagem quanti qualitativa. A amostra foi composta por pacientes adultos (n=122), de ambos os sexos, atendidos no Ambulatório de Estomaterapia do Hospital de Câncer de Barretos (SP). A avaliação quantitativa foi realizada em todos os pacientes e a qualitativa em 26 dos pacientes, sorteados aleatoriamente. Os participantes foram avaliados em quatro momentos (pré-operatório, três, seis e quinze meses após a cirurgia) e foram subdivididos de acordo com o tipo de procedimento cirúrgico realizado (Anastomose Primária, Estomia Intestinal Temporária e Estomia Intestinal Definitiva). Para a coleta de dados, foram utilizados os instrumentos: questionário de dados sociodemográficos; Critério de Classificação Econômica Brasil; ficha de condições clínicas; Escala de Figura de Silhuetas (EFS); Escala de Ansiedade e Depressão para Hospital Geral (HADS); Questionários para avaliação da QVRS (EORTC QLQ-C30/ QLQ-CR38); Medida subjetiva de pensamentos e emoções e Roteiro de entrevista semiestruturada. Os resultados demonstraram que a amostra foi constituída por pacientes mais velhos, de baixa renda e escolaridade. Os valores médios encontrados na avaliação da imagem corporal indicaram uma superestimação desta. Apesar dos participantes não terem apresentado sintomatologias graves para ansiedade e depressão, de acordo com a escala HADS, as comparações estatísticas infere-se que, quanto pior a sintomatologia para ansiedade e depressão, pior a saúde global. Segundo o EORTC QLQ-C30 e QLQ-CR38 a maioria dos domínios de QVRS apresentaram níveis moderados, sendo que os piores sintomas foram os sexuais. A depressão influenciou de forma direta e negativa na saúde global, assim como na acurácia da imagem corporal. Foram encontradas diferenças significantes entre os grupos na comparação das variáveis nos diversos momentos de avaliação, sugerindo que o nível dos sintomas variou de acordo com o tempo. Não foram encontradas altas frequências para as distorções cognitivas nesses pacientes, entretanto, observou-se pela entrevista semiestruturada que na primeira avaliação existia grande preocupação quanto às limitações ocasionadas pela estomia intestinal em detrimento da percepção de normalidade, frequentemente reportada na última avaliação. Conclui-se que a entrevista qualitativa complementou os resultados encontrados na abordagem quantitativa, sendo que a análise de conteúdo reforçou que os pacientes, em geral, apresentaram boa adaptação à estomia. O suporte social foi apontado como uma das principais estratégias utilizadas no processo de adaptação. Neste sentido, orientações psicoeducativas aos pacientes e familiares devem ser realizadas desde o diagnóstico, a fim de contribuir para adaptação ao estoma. / The Colorectal Cancer (CRC) is the third most common type in men and the second in women. The treatment in most cases implies a surgery with a stoma, which is an invasive procedure, with a great impact in all areas in a person\'s life. This study aimed to prospectively investigate variables related to body image, depression and anxiety symptoms, areas of Health Related Quality of Life (HRQoL) and cognitions, emotions and behaviors related to the adaptation process to the stoma. It is an exploratory study, longitudinal, with quantitative and qualitative approach. The sample consisted of adult patients (n = 122), of both sexes, attended in Stomatherapy Clinic of Barretos Cancer Hospital. The quantitative evaluation was performed in all patients and the qualitative evaluation was performed in 26 patients randomly selected. Participants were assessed at four time points (preoperative, three, six and fifteen months after surgery) and were subdivided according to the type of surgical procedure performed (Primary Anastomosis, Temporary Intestinal Ostomy and Definitive Intestinal Ostomy). For data collection, the follow instruments were used: socio-demographic questionnaire; Brazilian Economic Classification Criteria; clinical conditions record; Figures of Silhouettes Scale (FSS); Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS); Questionnaires to assess the HRQoL (EORTC QoL-C30 / QoL-CR38); Subjective measure of thoughts and emotions and Semi-structured interviews. The results showed that the sample was composed of older patients, with low income and low education level. The mean values found in the evaluation of body image showed an overestimation of it. Although the participants did not show servere symptomatology for anxiety and depression, according to the HADS, statistical comparisons inferred that, the worse the symptoms for anxiety and depression, worse overall health. According to the EORTC QoL-C30 and QoL-CR38 most HRQoL domains showed moderate levels in which the worst symptoms were sexual. Depression had a direct and negative impact on global health, as well as the accuracy of body image. Significant differences were found between groups when comparing the variables in the different time points, suggesting that the level of symptoms varied according to the time. There were no high frequencies for cognitive distortions in these patients; however, the semi-structured interview shows that in the first assessment there was great concern about the limitations caused by intestinal ostomy at the expense of perceived \"normal\" often reported in the last assessment. We conclude that the qualitative interview complemented the findings in quantitative approach, and the content analysis emphasized that patients generally showed good adaptation to the stoma. Social support was considered one of the main strategies used in the adjustment process. In this sense, psychoeducational guidance to patients and their families must be carried out from diagnosis, in order to contribute to the adaptation to the stoma.

INTRODUÇÃO: Aproximadamente 50% dos pacientes com tumor colorretal apresentam metástase hepática e a hepatectomia é o procedimento terapêutico de escolha. Discutem-se diversos fatores prognósticos, entre eles a margem cirúrgica é um fator sempre recorrente, pois não existe consenso da distância mínima necessária entre o nódulo metastático e a linha de secção hepática. Alguns autores identificaram que a margem cirúrgica maior que 1cm é um fator de melhor prognóstico com maior sobrevida e menor recidiva. Contudo, outros estudos demonstram resultados semelhantes entre pacientes com margens cirúrgicas maiores que 1cm, exíguas e até mesmo microscopicamente acometidas. Essas controvérsias conduzem à idéia de que outros fatores biológicos possam estar envolvidos na fisiopatologia de recorrência. Assim sendo, é de grande importância a avaliação da relação das margens cirúrgicas de ressecções hepáticas de metástases de câncer colorretal com a sobrevida e recidiva da doença. OBJETIVOS: Avaliar as margens cirúrgicas e o tipo de borda tumoral nas ressecções de metástases hepáticas de câncer colorretal e sua correlação com recidiva local e sobrevida. MÉTODOS: Estudo retrospectivo, baseado na revisão dos prontuários de 91 pacientes submetidos à ressecção de metástases hepáticas de neoplasia colorretal, durante o período compreendido entre janeiro de 2000 e dezembro de 2009. Revisão histopatológica prospectiva de todos os casos com aferição da menor margem cirúrgica e classificação das bordas tumorais como expansiva ou infiltrativa. RESULTADOS: Não houve diferença estatística nas taxas de recidiva e no tempo de sobrevivência global entre as margens livres e acometidas, assim como não houve diferença entre as margens subcentimétricas e maiores de 1cm. A sobrevida livre de doença dos pacientes com margens microscopicamente acometidas foi significativamente menor do que os pacientes com margens livres (p=0,002). A análise multivariada identificou o tipo de borda infiltrativa como fator de risco para recidiva (0,05). A sobrevida livre de doença foi significativamente menor nos pacientes com borda infiltrativa em comparação com os tumores com bordas expansivas (p=0,05). CONCLUSÕES: As ressecções de metástase hepática com margens livres de doença, independentemente da distância da margem, não influencia na recidiva tumoral (hepática ou extra-hepática) ou sobrevida do paciente. A borda tumoral do tipo infiltrativa foi fator de risco para recidiva / INTRODUCTION: Approximately 50% of patients with colorectal cancer have liver metastases and hepatectomy is the therapeutic procedure of choice. Surgical margin is an ever-recurring discussed prognostic factor, because there is no consensus of the minimum required distance between the metastatic nodule and the liver section line. Some authors reported surgical margin larger than 1 cm as a better prognosis factor ensuring longer survival rates and lower recurrence. However, other studies showed similar outcomes among patients with surgical margins larger than 1 cm, narrow margins and even microscopically affected ones. These controversies led the idea that other biological factors may be involved in the pathophysiology of recurrence. Therefore, it is valuable to assess the relationship between surgical margins of liver resection for colorectal cancer metastases with survival and recurrence. OBJECTIVES: To evaluate the surgical margins size and tumors growth pattern of colorectal liver metastases and its correlation with local recurrence and survival. METHODS: A retrospective study based on review of medical records of 91 patients undergoing resection of colorectal liver metastases during the period between January 2000 and December 2009. In addition, we undertook a detailed pathologic analysis of each pathological specimen with record of the closest surgical margins and tumors growth pattern classification as pushing or infiltrative. RESULTS: There was no statistical difference in recurrence rates and overall survival time between positive or negative margins, as well as no difference between the margins of 1cm width or more with subcentimeter margins. The disease-free survival of patients with microscopically positive margins was significantly lower than patients with negative margins (p = 0.002). Multivariate analysis identified infiltrative tumor growth pattern as a risk factor for recurrence (p=0.05). Disease-free survival was significantly lower in patients with infiltrative growth pattern compared to tumors with expansive margins (p = 0.05). CONCLUSIONS: Colorectal liver metastases resection with negative margins, regardless of width, has no influence on recurrence (hepatic or extrahepatic), neither on patient survival. The infiltrative tumor growth pattern type was a risk factor for recurrence