A produção de células-tronco induzidas (iPSC) a partir de fibroblasto fetal canino abre caminhos para a obtenção de células pluripotentes e o estudo de sua aplicabilidade para terapias alternativas na medicina veterinária. Neste contexto, este trabalho investigou metodologias adequadas avaliando a eficiência destas, para a produção de células-tronco pluripotentes no modelo canino in vitro (CTE-like), uma vez que a produção de células-tronco embrionárias verdadeiras, cultivadas a partir da MCI de blastocistos, ainda não foi completamente caracterizada em animais domésticos. Os experimentos visaram o aumento do conhecimento de fatores envolvidos no processo de reprogramação em cães, bem como a produção de tais linhagens e sua completa caracterização. No primeiro experimento, foi comparada a infecção retroviral, já padronizada por diversos grupos, com a reprogramação epissomal, inédita para a espécie, na tentativa de induzir células à pluripotência sem a integração viral, e ainda, estratégias para o aumento da eficiência de reprogramação, onde o plasmídeo epissomal foi somado a fatores de transcrição. A reprogramação epissomal gerou colônias quando acrescida do fator c-MYC, que provavelmente, aumentou a proliferação destas células produzindo colônias iPS com morfologia típica e positivas para o teste da fosfatase alcalina. Tais resultados, ainda preliminares pra conclusões, são essenciais para o processo de obtenção de linhagens sem a integração viral, aumentando a aplicabilidade na terapia celular. No segundo experimento objetivou-se avaliar os fatores OCT4 e SOX2 associados a proteínas repórteres. Os fibroblastos que receberam estes fatores, foram analisados por citometria de fluxo, permitindo a avaliação da influência de cada fator no processo de reprogramação, além de permitir a separação (sorting) das células que integraram o gene, aumentando a eficiência de reprogramação e o conhecimento biológico dos mecanismos de integração rastreados por uma proteína repórter. A análise por microscopia de fluorescência revelou que a distribuição de proteínas repórteres foi semelhante entre as duas diferentes construções proteicas e que não se restringe a uma região da célula em particular. OCT4 e SOX2 mostraram uma elevada expressão exógena de cada gene alvo, bem como células dupla positivas. No entanto, nenhuma interação foi observada pelo menos 6 dias após a transdução. O último capítulo experimental descreveu o mecanismo de reprogramação por integração lentiviral para indução da pluripotência em fibroblastos fetais de cão. As linhagens obtidas e completamente caracterizadas neste estudo foram independentes de LIF ou qualquer outra suplementação com inibidores, resistentes ao repique enzimático (Tryple Express), sendo apenas bFGF dependentes. Foram obtidas 66 linhagens clonais, das quais 10 (7 h+mOSKM e 3hOSKM) se mantiveram por 15 ou mais passagens e foram utilizadas para todos os testes de caracterização in vitro, com eficiência máxima de reprogramação de 0,001%. Todas as colônias foram positivas para o teste da fosfatase alcalina, bem como formaram corpos embrióides e se diferenciaram de forma espontânea, além de expressarem altos níveis dos fatores endógenos OCT4 e SOX2. In vivo, as colônias foram capazes de desenvolver tumor 120 dias após a inoculação (confirmado por análise histopatológica) comprovando sua origem predominantemente mesodérmica. A integridade cromossomal das linhagens foi avaliada por hidridização FISH, que não evidenciou qualquer tipo de anomalia. A completa caracterização de tais linhagens, bem como os experimentos não integrativos e com fatores associados a proteínas repórteres, aumentam o conhecimento da tecnologia de reprogramação, estabelecendo novas estratégias para indução da pluripotência de forma mais eficaz e segura para seu uso em testes clínicos e terapia celular / The production of induced pluripotent stem cells (iPSC) from canine fetal fibroblast opens new ways for obtaining pluripotent cells and study its applicability for alternative therapies in veterinary medicine. In this context, this study investigated appropriate methods for producing pluripotent stem cells using a in vitro canine model (ESC-like), so far the production of true embryonic stem cells from ICM cultured blastocysts has not been fully characterized in domestic animals. The experiments aimed at increasing knowledge of the factors involved in reprogramming process in dogs, as well as the production of such strains and complete characterization. In the first experiment, a retroviral infection was compared to episomal reprogramming (never done for this specie) in an attempt to induce cells to pluripotency state without viral integration, also to observe the development of cells receiving separately the episomal plasmid plus transcription factors. The generation of colonies was possible only in the episomal plus c-MYC factor group, leading to increased cell proliferation producing iPS colonies with typical morphology and positive for the alkaline phosphatase detection. These results, so far as preliminary conclusions, are essential to obtaining strains without viral integration, increasing its applicability for clinical cell therapy. In the second experiment, we aimed to evaluate the OCT4 and SOX2 factors associated with fluorescent reporter proteins. These were analyzed by flow cytometry allowing the performance evaluation of each factor on the reprogramming process the fluorescence activated separation of cells containing the integrated gene, increasing the enriching the efficiency of reprogramming. Fluorescence microscopy analysis showed that the distribution of reporter protein was similar between the two different protein structures and not restricted to a particular cell region. OCT4 and SOX2 showed a high exogenous expression of each target gene, and double positive cells. However, no colony formation was observed at least 6 days after transduction. The last experimental chapter aimed to described the reprogramming mechanism of lentiviral integration to induce pluripotency in dog fetal fibroblasts. The lines obtained were fully characterized in this study, showing independency of LIF or any other supplemental inhibitors, resistance to enzymatic process (Tryple Express) and bFGF dependency only. A total of 66 clonal strains were obtained (hOSKM and h+mOSKM) while 10 (7 h+m and 3h) were maintained for 15 or more passages and used for in vitro characterization tests, with maximum efficiency of reprogramming 0.001% . All colonies were positive for the alkaline phosphatase detection, embryoid bodies formation, spontaneously differentiated and expressed high levels of endogenous OCT4 and SOX2. In vivo, the colonies were able to developed tumors 120 days after inoculation (confirmed via histopathology analysis), with predominantly mesodermal tissues. Chromosomal evaluations were made by FISH hybridization showing no chromosomal abnormality in iPSCs canine lines. The fully characterization of such lines as well as non-integrated experiments and factors associated via reporter proteins increases the knowledge of the iPSCs technology, establishing new strategies for more efficient and safe induction of pluripotency for potential use in cell therapy and clinical trials

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:13:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6711_1.pdf: 6478547 bytes, checksum: 84b780bdf71e36a16d090b4b3bad079b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / O propósito deste estudo foi avaliar o efeito do campo eletromagnético de rádio frequência modulada em 60 Hz no processo de diferenciação in vitro de células estromais mesenquimais multipotentes em osteoblastos, através da análise do reparo do tecido ósseo. Materiais e Métodos: Duas cavidades de 5 mm de diâmetro foram realizadas em ambos ossos parietais de seis ratos machos adultos da linhagem Wistar, os quais foram divididos em dois grupos: grupo CEMM (Células Estromais Mesenquimais Multipotentes) e grupo CEMM-RF (implantação de célulastronco expostas à onda de rádio freqüência modulada em 60 Hz e densidade de potência de onda de 100 mW/cm2). Em cada animal foi apontada aleatoriamente uma cavidade teste (T) e uma controle (C). A cavidade C foi preenchida apenas pelo coágulo sanguíneo enquanto que no grupo CEMM a cavidade T foi preenchida com enxerto de células estromais mesenquimais multipotentes diferenciadas, in vitro, em osteoblastos, numa quantidade de aproximadamente 106/ 10μl de NaCl, utilizandose o cimento de hidroxiapatita como veículo para fixação e no Grupo CEMM-RF as células diferenciadas in vitro foram expostas a um campo eletromagnético rádio freqüência de 60 Hz e densidade de potência de onda de 100 mW/cm2. Após sessenta dias, os animais foram eutanasiados e a calota craniana retirada para o processo de análise. As amostras foram submetidas a avaliação histológica mediante três avaliadores de forma cega. Os dados foram submetidos à análise estatística exploratória. Resultados: As cavidades C dos dois grupos apresentaram processo cicatricial intermediário. Não foi observado presença de tecido ósseo neoformado nas cavidades T do grupo CEMM-RF, enquanto que no grupo CEMM houve regeneração tecidual com presença de osso maturo. Conclusão: O campo de rádio frequência modulada de 60 Hz e densidade de potência de onda de 100 mW/cm2, emitido pelo aparelho de ondas curtas foi capaz de inibir a diferenciação das células estromais mesenquimais multipotentes em osteoblastos

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:13:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2930_1.pdf: 1846403 bytes, checksum: 095e1b07e1cb248d69246b8f17215f32 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As células-tronco mesenquimais (CTMs) constituem uma rara população de células com capacidade de diferenciação multipotencial e podem constituir uma ferramenta atrativa no contexto da engenharia tecidual. O desenvolvimento de novos materiais pode ser citado como um setor de vanguarda para a engenharia de tecidos. O principal objetivo deste estudo foi avaliar a utilização do gel e membranas do biopolímero de cana-de-açúcar, produzidos a partir da fermentação do melaço pelo microorganismo Zoogloea sp., como novos suportes para cultivo de CTMs. Cordões umbilicais foram obtidos de parturientes do Setor de Obstetrícia do Hospital das Clínicas/UFPE (n=40, com 30 a 40 semanas de idade gestacional), conforme protocolo aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisas envolvendo Seres Humanos-CCS/UFPE. A veia do cordão umbilical foi preenchida com colagenase tipo IV e mantida a 37º C por 5 min. As células coletadas foram centrifugadas por 10 min (2.000 rpm), ressuspensas em meio DMEM suplementado com 20% de soro fetal bovino, 100 U/mL de penicilina, 100μg/mL de estreptomicina e plaqueadas em garrafas e placas de cultura (105 células/mL). A análise dos aspectos morfológicos das CTMs sobre o gel de biopolímero foi realizada através de microscópio de contraste de fase com sistema de captura de imagem. Com 72h de cultivo, utilizando-se como controle a gelatina porcina, um suporte comercial, as CTMs apresentaram-se com aspecto fibroblastóide, e a formação da monocamada ocorreu em 5 dias. As células cultivadas em placas contendo o gel de biopolímero de canade- açúcar também exibiram morfologia semelhante a fibroblastos (72h), porém apresentaram-se mais alongadas e dispostas radialmente; já a formação da monocamada foi visualizada após 5 dias. Quando as CTMs foram cultivadas sobre membranas do biopolímero, observamos células com formato variando de arredondadas a fibroblastóides. Em torno de 28 dias, independente do suporte avaliado, as células começaram a emitir prolongamentos citoplasmáticos, e consequente aumento do contato celular. Portanto, concluímos que o gel e membrana do biopolímero de cana-de-açúcar favoreceram o crescimento de células fibroblastóides, e a remodelação citoplasmática verificada com o evoluir da cultura pode estar associada a padrões de adesão celular que caracterizam ótimas condições de cultivo in vitro das CTMs

Orientador: Sigmar de Mello Rode / Coorientador: Lucio Murilo dos Santos / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Fernando Callera / Resumo: Micro-organismos como fungos do gênero Candida, são habitantes comensais da cavidade bucal; em condições normais, co-existem com a microbiota normal sem provocar doenças. Entretanto, alterações locais ou sistêmicas como imunossupressão, desequilíbrio da microbiota oral, hipossalivação e mucosite, secundárias ao tratamento quimioterápico, predispõem pacientes com câncer a um alto risco de infecções fúngicas orais e sistêmicas. O objetivo desse trabalho foi avaliar a presença de leveduras do gênero Candida na cavidade bucal de pacientes onco-hematológicos submetidos a transplante autólogo de células-tronco hematopoiéticas (TACTH). Foram avaliados 27 pacientes, nos períodos pré, e pós-transplante. As amostras da cavidade bucal foram obtidas pela técnica de enxágüe bucal e semeadas em Chromagar Candida para triagem das cepas isoladas. Após o crescimento, foi extraído o DNA e submetido a identificação molecular (PCR) utilizando iniciadores para os genes ribossomais dessa levedura. Após a amplificação do fragmento esperado, as cepas foram sequenciadas utilizando sequenciador automático.Para análise descritiva e estatística dos resultados obtidos, os dados foram submetidos ao teste de Shapiro-Wilk para avaliação da normalidade. Em seguida, o teste de variância Wilcoxon foi utilizado. A significância adotada foi de 5%. Candida spp foi encontrada em 40,74% (11 pacientes), sendo que 2 (18,18%) possuíam mais de uma espécie, dos 9 pacientes colonizados por apenas uma espécie, 7 eram port... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Microorganisms such as fungi of the genus Candida, are commensal inhabitants of the oral cavity; under normal conditions co-exist with normal microflora without causing disease. However, local or systemic changes such as immunosuppression, imbalance in the oral microbiota, hyposalivation and mucositis, secondary to chemotherapy, predispose cancer patients at high risk of oral and systemic fungal infections. The aim of this project is to evaluate the presence of Candida species in the oral cavity of hematological malignances patients undergoing autologous transplantation of hematopoietic stem cells (HSCT). We evaluated 27 patients in preand post-transplant. Samples of the oral cavity were obtained by oral rinse technique and plated on Chromagar Candida for screening of the strains. After growth, the DNA was extracted and subjected to molecular identification (PCR) using primers for the ribosomal genes in this yeast. After amplification of the expected fragment, the strains were sequenced using the sequencer automático. For descriptive and statistical analysis of the results, the data will be submitted to the Shapiro-Wilk test for evaluation of normality. Then the variance Wilcoxon test was used. The significance of 5% was adopted. Candida spp was found in 40.74% (11pacientes), and 2 (18.18%) had more than one species, of the 9 patients colonized by only one species, 7 patients had Candida albicans (77.77%) and 1 Candida dubliniensis (11.11%) and 1 C. krusei (11.11%). Mixed settlements, in the other two patients were composed of C. albicans + C. glabrata; C. albicans + C. dubliniensis. In the second collection (C2), 9 (81.81%) of Candida carriers remained colonized, including by non albicans species. The homology identification of species standardized strains was 85 99%. Within the conditions of this study it was possible to determine with ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: Nereu Carlos Prestes / Resumo: Estudos das células-tronco mesenquimais (CTMs) comprovaram a influência do sexo do doador nas suas capacidades proliferativa e imunomoduladora. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho é investigar se há disparidades entre as células da placenta derivada de fetos de sexos diferentes, fato que ainda não foi descrito na medicina veterinária. Foram coletadas 11 pares de membrana alantoamniótica de cães (ALAM), isoladas por digestão enzimática e cultivadas. Utilizamos amostras de tecido para avaliação histológica e imunohistoquímica. Avaliamos os cultivos celulares para padrões morfológico, proliferativo e de capacidade de diferenciação. A justaposição íntima das membranas alantoideana e amniótica observada nos cortes histológicos justifica estudá-las juntas. Observamos que as células obtidas da ALAM de ambos os sexos apresentaram características semelhantes. As alterações morfológicas foram consistentes entre as amostras, e a viabilidade e a curva de crescimento apresentaram p>0,05. As células demonstraram capacidade de diferenciação nas linhagens adipogênica e osteogênica. Na imunocitquímica, as amostras expressaram a vimentina e os marcadores de pluripotência (Oct-4 e Nanog). Na citometria de fluxo, elas expressaram valores significativos de CD44 e CD90, além da baixa expressão de CD34 e MHCII. Esses resultados indicam não haver diferença entre as células quando comparamos as células da ALAM derivadas de fetos de sexos diferentes, mas sugerem seu uso futuramente na medicina re... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mesenchymal stem cells (MSCs) studies have proven the influence of the donor's gender in its proliferative and immunomodulatory abilities. Therefore this study aims to investigate the presence of discrepancies among the MSCs of the placenta derived from different sex fetus, which haven't been described in the veterinary medicine. Eleven pairs of canine allantoamniotic membranes (ALAM) were collected,isolated through enzymatic digestion and cultivated. Tissue samples were used for histological and immunohistochemistry assessment. The cell cultures were evaluated for morphological, proliferative, and differentiation potential standards. The intimate juxtaposition of the allantoic and amniotic membranes detected in the histological slides justifies studying them together. Similar characteristics were observed for the cells derived from ALAM in both genders. The morphological alterations were consistent among samples, and viability and growth curve exhibited p>0.05. The cells displayed capability to: differentia... / Mestre

Há um grande interesse no estudo de células-tronco em função de sua capacidade de auto-renovação e plasticidade. Estas características capacitam as células-tronco a produzirem células de diferentes linhagens que participam ativamente do processo de homeostase, da resposta à injúria e da regeneração e reparação tecidual. A polpa dental é o tecido mais estudado na Odontologia em relação a células-tronco, mas diversos estudos já mostraram a presença dessas células também na região periodontal. É importante salientar, que dependendo de sua origem, as células-tronco apresentam comportamentos diversos, especialmente no que tange ao transplante in vivo. Além disso, os microambientes onde as células-tronco residem (nichos), têm um papel fundamental no comportamento das mesmas, pois controlam aspectos essenciais como o estado de indiferenciação e a auto-renovação. Esse projeto de pesquisa teve como objetivos duas análises distintas. Na primeira, verificar se existem células-tronco mesenquimais derivadas da curetagem do alvéolo dental humano após extrações dentais. Na segunda, analisar o nicho de células-tronco nas polpas dentais de camundongos. Em comum, as duas análises se basearam no uso de marcadores previamente utilizados na literatura para o estudo de células-tronco. Como não existem marcadores únicos e específicos para a identificação dessas células, diferentes combinações desses marcadores entre si e de técnicas laboratoriais foram empregadas. No primeiro estudo, após o isolamento das células, deu-se especial atenção à sua caracterização, que foi realizada através de ensaios que avaliaram propriedades e comportamentos que sabidamente ocorrem em células-tronco. Já na segunda parte desse estudo, utilizamos a polpa dental de camundongos para a análise in vivo de nichos. Em camundongos, a localização do nicho responsável pelo crescimento continuo dos incisivos é conhecida. De uma maneira geral, nossos resultados demonstram que: 1) É possível isolar células-tronco/progenitoras a partir de tecidos curetados de alvéolo dental após extrações dentárias. Esse fato é inédito e abre novas perspectivas em termos de oportunidade de coleta e futura aplicação clínica. 2) É possível observar a diversidade populacional nas células que formam o nicho de células-tronco em polpa dental de camundongos, e através de uma organização hierárquica, propusemos um modelo para este nicho. Esse modelo servirá de base para estudos subsequentes que visem avaliar o comportamento das células que formam o nicho, quando isoladas das demais, e abrirá possibilidade para análises em outros tecidos dentais e não dentais. / There is great interest in the study of stem cells due to their ability to produce mature cells of different lineages that participate actively in the process of homeostasis, injury response, regeneration and tissue repair. The dental pulp is the most studied tissue in dentistry, but several studies have shown the presence of these cells in the periodontal tissue region. It is important to note that depending on their origin, these cells exhibit different behaviours, especially in regard to in vivo transplantation. Furthermore, the microenvironment in which these cells are found (niches) have an essential role in their behaviour as they control important aspects such as differentiation and self-renewal. This research project aimed for two distinct analyses. The first was to verify if there are mesenchymal stem cells derived from human dental socket curettage after dental extractions. The second, to analyse the stem cell niche in mouse dental pulp. In common, the two analyses were based on the use of markers previously used in the literature for the study of stem cells. As there are no specific and unique markers to identify these cells, an extensive combination of these markers among themselves, and laboratory techniques were performed. In the first study, after the isolation of the cells, special attention was given to their characterization by combining assays to evaluate stem cells properties and behaviours. In the second part of this study, we used the mouse dental pulp model for in vivo analysis of stem cell niches. In mice, the location of the niche responsible for the incisors continuous growth is known. In general our results showed that: 1) It is possible to isolate progenitor/stem cells from tissue curettage of the alveolus after tooth extractions. This fact is unprecedented and opens new perspectives for the obtention of stem cells for future clinical applications. 2) It is possible to observe the cells population diversity of the mouse dental pulp niche and through a hierarchical organization, we proposed a model for this niche. This model will provide basis for further studies aimed at evaluating the behavior of cells that form the niche, when isolated from the others, and opens the possibility for the analysis of the niche structure in other dental and non-dental tissues.

O tecido ósseo tem sido amplamente estudado devido às suas inúmeras funções e capacidade de auto-regeneração. Entretanto, muitas vezes a reparação óssea completa pode ser prejudicada quando as fraturas ósseas são graves. Muitas pesquisas visando a regeneração do tecido ósseo estão sendo realizadas tanto nas abordagens que envolvem a utilização de enxertos, quanto na aplicação de terapia celular. O objetivo deste trabalho foi obter e caracterizar uma linhagem celular proveniente do tecido ósseo de fetos caninos. Para isso, foi realizado método de dissociação enzimática do osso fetal canino para obtenção da cultura celular, estabelecendo assim o cultivo das células OSTBN6. Além disso, foram realizados técnicas do teste de viabilidade e proliferação celular por MTT, de imunofenotipagem das células, expressão gênica, diferenciação celular em linhagens adipogênica, osteogênica e condrogênica, e análise do potencial tumorigênico das células derivadas de tecido ósseo fetal canino. Sendo assim, a população isolada de células derivadas de tecido ósseo fetal canino isolada apresentou duas morfologias distintas: formato fibroblastóide e formato triangular. Essas células são viáveis e possuem ótima taxa de proliferação, como indicou o ensaio de MTT. As células foram positivas para pluripotência e para células de origem mesenquimal, e foram negativas para marcadores de células de origem hematopoiéticas. As OSTBN6 foram capazes de se diferenciar em linhagem adipogênica, osteogênica e condrogênica, característica de células mesenquimais. Por fim, foi realizado o teste do potencial tumorigênico em camundongos nude, não havendo formação de tumores. Desse modo, concluimos que a célula proveniente do tecido ósseo fetal canino constitui uma fonte segura para utilização na medicina regenerativa e terapia celular / Bone tissue has been widely studied due to its numerous functions and capacity for self-regeneration. However, often the complete bone repair may be impaired when bone fractures are severe. Many research aiming to regenerate the bone tissue are being conducted in both approaches involving the use of grafts, as the application of stem cell therapy. The objective of this study was to obtain and characterize a cell line derived from the canine fetuses bone. To do so, it was carried out an enzymatic dissociation method for obtaining canine fetal bone cell culture, thus establishing OSTBN6 cells culture. In addition, there were carried out technical viability and cell proliferation by MTT test, immunophenotyping of cells, gene expression, cellular differentiation in adipogenic, osteogenic and chondrogenic lineages, and analysis of tumorigenic potential of cells derived from canine fetal bone. Thus, the population of cells derived from isolated canine fetal bone tissue showed two distinct morphologies: fibroblastoid shape and triangular shape. These cells are viable and have optimal rate of proliferation, as indicated by the MTT assay. Cells were positive for pluripotency and as mesenchymal cells and were negative for hematopoietic origin cell markers. The OSTBN6 were able to differentiate into adipogenic, osteogenic and chondrogenic lineage, characteristic of mesenchymal cells. Finally, it was performed the tumorigenic potential test in nude mice, with no tumor formation. Thus, it was concluded that the cell derived from canine fetal bone is a reliable source for use in regenerative medicine and cell therapy

Há um grande interesse no estudo de células-tronco em função de sua capacidade de auto-renovação e plasticidade. Estas características capacitam as células-tronco a produzirem células de diferentes linhagens que participam ativamente do processo de homeostase, da resposta à injúria e da regeneração e reparação tecidual. A polpa dental é o tecido mais estudado na Odontologia em relação a células-tronco, mas diversos estudos já mostraram a presença dessas células também na região periodontal. É importante salientar, que dependendo de sua origem, as células-tronco apresentam comportamentos diversos, especialmente no que tange ao transplante in vivo. Além disso, os microambientes onde as células-tronco residem (nichos), têm um papel fundamental no comportamento das mesmas, pois controlam aspectos essenciais como o estado de indiferenciação e a auto-renovação. Esse projeto de pesquisa teve como objetivos duas análises distintas. Na primeira, verificar se existem células-tronco mesenquimais derivadas da curetagem do alvéolo dental humano após extrações dentais. Na segunda, analisar o nicho de células-tronco nas polpas dentais de camundongos. Em comum, as duas análises se basearam no uso de marcadores previamente utilizados na literatura para o estudo de células-tronco. Como não existem marcadores únicos e específicos para a identificação dessas células, diferentes combinações desses marcadores entre si e de técnicas laboratoriais foram empregadas. No primeiro estudo, após o isolamento das células, deu-se especial atenção à sua caracterização, que foi realizada através de ensaios que avaliaram propriedades e comportamentos que sabidamente ocorrem em células-tronco. Já na segunda parte desse estudo, utilizamos a polpa dental de camundongos para a análise in vivo de nichos. Em camundongos, a localização do nicho responsável pelo crescimento continuo dos incisivos é conhecida. De uma maneira geral, nossos resultados demonstram que: 1) É possível isolar células-tronco/progenitoras a partir de tecidos curetados de alvéolo dental após extrações dentárias. Esse fato é inédito e abre novas perspectivas em termos de oportunidade de coleta e futura aplicação clínica. 2) É possível observar a diversidade populacional nas células que formam o nicho de células-tronco em polpa dental de camundongos, e através de uma organização hierárquica, propusemos um modelo para este nicho. Esse modelo servirá de base para estudos subsequentes que visem avaliar o comportamento das células que formam o nicho, quando isoladas das demais, e abrirá possibilidade para análises em outros tecidos dentais e não dentais. / There is great interest in the study of stem cells due to their ability to produce mature cells of different lineages that participate actively in the process of homeostasis, injury response, regeneration and tissue repair. The dental pulp is the most studied tissue in dentistry, but several studies have shown the presence of these cells in the periodontal tissue region. It is important to note that depending on their origin, these cells exhibit different behaviours, especially in regard to in vivo transplantation. Furthermore, the microenvironment in which these cells are found (niches) have an essential role in their behaviour as they control important aspects such as differentiation and self-renewal. This research project aimed for two distinct analyses. The first was to verify if there are mesenchymal stem cells derived from human dental socket curettage after dental extractions. The second, to analyse the stem cell niche in mouse dental pulp. In common, the two analyses were based on the use of markers previously used in the literature for the study of stem cells. As there are no specific and unique markers to identify these cells, an extensive combination of these markers among themselves, and laboratory techniques were performed. In the first study, after the isolation of the cells, special attention was given to their characterization by combining assays to evaluate stem cells properties and behaviours. In the second part of this study, we used the mouse dental pulp model for in vivo analysis of stem cell niches. In mice, the location of the niche responsible for the incisors continuous growth is known. In general our results showed that: 1) It is possible to isolate progenitor/stem cells from tissue curettage of the alveolus after tooth extractions. This fact is unprecedented and opens new perspectives for the obtention of stem cells for future clinical applications. 2) It is possible to observe the cells population diversity of the mouse dental pulp niche and through a hierarchical organization, we proposed a model for this niche. This model will provide basis for further studies aimed at evaluating the behavior of cells that form the niche, when isolated from the others, and opens the possibility for the analysis of the niche structure in other dental and non-dental tissues.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-20Bitstream added on 2014-06-13T19:50:29Z : No. of bitstreams: 1 spexoto_mcb_me_arafcf.pdf: 1475153 bytes, checksum: f4a5ecc68fc309d1272c1983a4065ae5 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A elevada prevalência de fatores de risco para a Síndrome Metabólica (SM) entre pacientes submetidos ao Transplante de Células-Tronco Hematopoéticas (TCTH) já foi comprovada, mas pouco se sabe a respeito das alterações ocorridas na composição corporal e sobre a interferência do consumo de alimentos na manifestação desses fatores. Pouco se sabe também sobre o quão precoce é o surgimento dessas alterações. Frente a isso, foi proposto com este estudo avaliar o consumo de alimentos, o estado nutricional e a incidência de alteração precoce de fatores determinantes da síndrome metabólica em pacientes submetidos ao TCTH. Tratou-se de um estudo longitudinal, com dados obtidos no Departamento de Hematologia e Transplante de Medula Óssea (TMO) do Hospital de Câncer de Barretos. Participaram 27 indivíduos que realizaram TCTH no período de junho de 2009 a março de 2010, com idade média de 44±14, entre 20 e 60 anos, 13 mulheres e 14 homens, com maior proporção de TCTH autólogo (n=20) sobre o alogênico (n=7), sendo o Mieloma Múltiplo (60%) prevalente entre os autólogos e a Leucemia Mielóide Aguda (43%) entre os alogênicos. O Índice de Massa Corporal (IMC) médio no Pré-TMO dos casos estudados foi de 27±5 Kg/m2. Nos momentos Pós-TMO, D+30, D+60 e D+100 (D+n = dias decorridos do TMO) foram monitorados indicadores antropométricos do estado nutricional, indicadores bioquímicos do metabolismo lipídico e da glicose e o consumo de alimentos a partir de um recordatório do consumo de 24 horas. A SM foi avaliada conforme os critérios diagnósticos da IV Diretriz Brasileira sobre Dislipidemias e Prevenção de Aterosclerose (2007). Os resultados apontaram na direção de confirmação da hipótese do trabalho, uma vez que após 100 dias do transplante foi constatado que os 27 indivíduos analisados mantiveram estáveis o consumo alimentar e o estado nutricional avaliado... / The high prevalence of risk factors for metabolic syndrome (MS) among patients undergoing transplantation Hematopoietic Stem Cells (HSCT) has been proven, but very few is known about the changes in body composition and on the interference of consumption foods in the manifestation of these factors. Very few is known about how early is the emergence of such changes. Because of that, it was proposed in this study to assess food intake, nutritional status and incidence of early alteration of factors of metabolic syndrome in patients with HSCT. This was a longitudinal study with data obtained from the Department of Hematology and Bone Marrow Transplantation (BMT) of Barretos Cancer Hospital. The sample included 27 subjects who underwent HSCT between June 2009 and March 2010, mean age 44 ± 14, between 20 and 60 years, 13 women and 14 men, with large numbers of autologous HSCT (n = 20) on the allogeneic (n = 7) and the Multiple Myeloma (60%) prevalent among the autologous and acute myeloid leukemia (43%) among allogeneic. The average Body Mass Index (BMI) in the Pre-BMT cases studied was 27 ± 5 kg/m2. In times post- BMT, D +30, D +60 and D +100 (D + n = days after BMT) were monitored anthropometric indicators of nutritional status, biochemical indicators of lipid metabolism and glucose and food consumption from a recall of consumption of 24 hours. MS was evaluated according to the diagnostic criteria of the IV Brazilian Guidelines on Dyslipidemia and Atherosclerosis Prevention (2007). The results pointed toward confirming the hypothesis of the work, because after 100 days of transplantation was found that the 27 subjects studied were stable food consumption and nutritional status assessed from anthropometric indicators. There was no difference in the incidence of risk factors for the diagnosis of MS in all comparisons. There was no difference in blood glucose and fasting insulin. However, the... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000432976-Texto+Completo-0.pdf: 13950952 bytes, checksum: 85bef78387928925cf69df3245a8d8b9 (MD5) Previous issue date: 2011 / Bone defect may be considered critical or not. In many cases, the bone loss will be repaired by the organism normally, without leaving any bony sequels. But even then the time it takes to repair, will bring some temporary sequel to the patient. This study aimed to evaluate and compare the influence of mesenchymal stem cells cultured on collagen membranes in the femur bone repair in rats. 14 Kyoto rats were used. Two animals were marrow donors and twelve formed the sample. The animals were subjected to four tissue damage in the right femur: Group 1 - with mesenchymal stem cells diluted with normal saline and covered with collagen membrane; Group 2, with mesenchymal stem cells diluted into gel of hydroxypropilmethylcellulose (HPMC); Group 3, with mesenchymal cells undifferentiated diluted into gel of HPMC and harvested by a collagen membrane; and Group 4, control group, spontaneous repair. Four animals were euthanized at 7, 18 and 30 days postoperatively and evaluated by hematoxilin and eosin histology and by scanning electron microscopy. The present study suggests that the use of mesenchymal stem cells do not contribute to accelerate the process of bone repair in not critical defects. All groups had fulfilled the bone cavity in 30 days, although only the control group had a cortical bone formation in its outer portion. The use of biomaterials may also delay the process of bone repair, since the body will have to absorb this biomaterial, instead of forming new bone. / Os defeitos ósseos podem ser considerados críticos ou não, de acordo com sua capacidade de reparo normal pelo organismo evitando sequelas ósseas. O tempo decorrido para ocorrer esse reparo acabará trazendo alguma sequela temporária para o paciente. Esse estudo teve como objetivo avaliar e comparar a influência de células mesenquimais indiferenciadas, cultivadas sob membranas de colágeno, no reparo de defeitos ósseos em fêmur de ratos. Dos 14 animais utilizados na pesquisa, dois foram doadores de medula óssea e doze compuseram a amostra. Os animais foram submetidos a quatro danos teciduais no fêmur direito: Grupo 1, com células mesenquimais indiferenciadas diluídas em soro fisiológico e recobertas por membrana de colágeno; Grupo 2, com células mesenquimais indiferenciadas diluídas em gel de hidroxipropilmetilcelulose (HPMC); Grupo 3, com células mesenquimais indiferenciadas diluídas em gel de HPMC e recobertas com membrana de colágeno; e Grupo 4, controle: reparo espontâneo. Quatro animais foram eutanasiados nos períodos de 7, 18 e 30 dias pós-operatórios e avaliados por meio de histologia com hematoxilina e eosina em micorscopia de luz e demicroscopia eletrônica de varredura. Todos os grupos estudados tiveram reparoda cavidade óssea formada, muito embora somente o grupo controle tenha apresentado formação de cortical óssea na sua porção externa em 30 dias. O presente estudo sugere que o uso de células mesenquimais indiferenciadas não contribui para acelerar o processo de reparo ósseo em defeitos não críticos. O uso desses biomateriais pode inclusive atrasar o processo de reparo ósseo, uma vez que o organismo terá que reabsorver esse biomaterial, ao mesmo tempo que deverá estar formando novo osso.