Orientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Ana Elizabeth Silva / Banca: Ana Paula Girol / Banca: Leonardo Augusto Moraes / Banca: Marcia Pereira de Oliveira Duarte / Resumo: O câncer colorretal (CCR) é o terceiro mais comum no mundo e a quarta causa de morte por câncer no ocidente. A origem e desenvolvimento dessa patologia têm sido amplamente associados com alterações no estado inflamatório do intestino. A Anexina A1 (AnxA1) é uma proteína anti-inflamatória envolvida na manutenção da homeostase intestinal e na regulação do desenvolvimento tumoral. Os mastócitos (MCs), que também expressam AnxA1, são amplamente envolvidos nos danos associados no trato gastrointestinal promovido por agentes carcinógenos. No presente estudo foi avaliado o papel da AnxA1 na resposta funcional de MCs na carcinogênese colorretal induzida por N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG). Para esse objetivo, animais deficientes de AnxA1 (AnxA1-/-) receberam instilações de MNNG e o efeito agudo do composto foi avaliado após 8, 24 e 48h. Nossos resultados mostram que o MNNG induz, no epitélio do cólon, aumento da expressão da AnxA1, que limita a lesão tecidual e inflamação local, regulando a produção exacerbada de IL-1, IL-6, IL-12, TNF- α, INF- γ na condição controle e, principalmente, após 24h da exposição. A AnxA1 também reduz a migração e desgranulação de MCs, polarizando a diferenciação dessas células para maior expressão de quimase após o dano carcinogênico. Em seguida, a contribuição dos MCs à tumorigênese induzida pelo MNNG foi avaliada 24 semanas após a exposição crônica dos camundongos deficientes de mastócitos (Kit-/-) ao composto. Nessas condições foi observado... / Abstract: Colorectal cancer (CRC) is the third most common cancer in the world, the forth cancer-related death cause in the Western counties, and its origin and development has been wildly related to alterations in bowel inflammatory state. Annexin A1 (AnxA1) is a protein involved in the maintenance of intestinal homeostasis and the regulation of tumoral development through the inhibition of inflammatory pathways. Mast cells (MCs), which also expressed AnxA1, were extensively involved in carcinogens-associated damage in gastrointestinal tract. The present study was conducted to evaluate the role of AnxA1 in the functional response of MCs in colorectal carcinogenesis induced by N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG). Thus, we measured MCs recruitment, activation, proteases (tryptase and chymase) expression and the levels of cytokines (IFN-γ, IL-1, IL-4, IL-6, IL12 and TNF-α) in the colon of AnxA1-deficient mice (AnxA1-/-) during the acute response to MNNG. Mast cells-deficient mice (Kit-/-) were also exposed to MNNG carcinogenic activity in order to check, after 24 weeks, the contribution of MCs in tumor growth. Our results showed that MNNG damage increased the expression of AnxA1 which promoted tissue protection and regulated the migration and activation of MCs. The carcinogen induced local immune deregulation with increased levels of pro inflammatory cytokines found in AnxA1-/-. Chymase positive MCs were found at higher number in acute exposure to MNNG and also in the established ... / Doutor

Orientador: Maria Palmira Daflon Gremião / Coorientador: Beatriz Stringhetti Ferreira Cury / Banca: Leila Aparecida Chiavacci Favorin / Banca: Ruy Carlos Ruver Beck / Resumo: A nanotecnologia farmacêutica é uma relevante ferramenta tecnológica para o desenvolvimento de novos sistemas para a veiculação de fármacos, pois devido às suas dimensões reduzidas são capazes de circular por capilares que irrigam os tecidos, escapar da fagocitose por células do sistema imunológico e permear passivamente células e epitélios. Além disso, esses sistemas possibilitam a encapsulação de fármacos de baixa estabilidade, protegendo-os contra degradação prematura e/ou permitindo a modulação de suas propriedades físico-químicas, bem como a interação biológica na biointerface. O metotrexato (MTX) é um dos fármacos mais utilizados no tratamento de tumores sólidos e doenças inflamatórias intestinais, no entanto, por ser altamente citotóxico e não seletivo promove diversos efeitos colaterais. Sua eficácia terapêutica é comprometida devido à resistência adquirida pelas células tumorais e por sua baixa permeabilidade intestinal, principalmente por meio do mecanismo de efluxo da forma livre. Nesse trabalho, nanopartículas poliméricas (NPs) orais compostas por quitosana (QS), ácido hialurônico (AH) e ftalato de hidroxipropilmetilcelulose (HP), polímeros que possuem propriedades como solubilidade pH dependente, mucoadesividade e de funcionalização, foram desenvolvidas como plataforma tecnológica para a vetorização do MTX para o cólon, visando o tratamento local de patologias intestinais. As análises de peso molecular e coeficiente viral demostraram a adequação dos polímeros e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The pharmaceutical nanotechnology is a relevant technological tool for the development of new drug delivery systems, because of their small size they are able to circulate through capillaries that irrigate tissues, escape from phagocytosis by the immune system cells and passively permeate cells and epithelia. In addition, these systems enable the encapsulation of low stability drugs, protecting them against premature degradation and/or allowing the modulation of their physico-chemical properties, as well as the biological interaction in the biointerface. Methotrexate (MTX) is one of the most used drug in the treatment of solid tumors and inflammatory bowel diseases, however, because MTX highly cytotoxic and nonselectivity promotes several side effects. Its therapeutic efficacy is compromised due to the resistance acquired by tumor cells and it low intestinal permeability, mainly through the efflux mechanism of the free form. In this work, oral nanoparticles composed of chitosan (CS), hyaluronic acid (HA) and hydroxypropylmethylcellulose (HP) phthalate, polymers that have properties such as pH-dependent solubility, mucoadhesiveness and functionalization have been developed as a technological platform for the target of MTX to the colon, aiming the treatment of local pathologies. Molecular weight and second viral coefficient analyzes demonstrated the suitability of polymers and solvents to obtain nanostructures by the polyelectrolyte complexation method. The evaluation of the pH... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-03. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:36Z : No. of bitstreams: 1 000873411.pdf: 2339919 bytes, checksum: 7129156182cf0eb33c4a8fd25783f307 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O metotrexato (MTX) é um fármaco com solubilidade pH dependente, utilizado no tratamento de doenças do trato gastrointestinal, como a doença de Crohn, retocolite ulcerativa e carcinomas colorretal. O desenvolvimento de micro/nanossuspensões podem ser uma estratégia promissora para incorporação de fármacos que possuem solubilidade pH dependente, oferecendo vantagens como a redução do tamanho da partícula do fármaco que pode levar ao aumento da taxa de dissolução e da permeabilidade. Adicionalmente, polímeros estímulo-responsivos podem sofrer transição de fase sol-gel in situ, promovendo a mucoadesão e uma maior retenção do sistema no local de ação. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi desenvolver micro/nanossuspensões contendo polímeros mucoadesivos para liberação cólon-específica do MTX. As partículas foram obtidas pelo método Bottom-up, utilizando reações de ácido-base e estabilizadas com hidroxipropilmetilcelulose (HPMC) e poloxâmero 407 (P407), através de agitação em Ultra-turrax ou Sonicador. Foram incorporados polímeros derivados do ácido poliacrílico como, Carbopol® ETD 2020 e Ultrez 10NF, poloxâmero 407 e goma gelana, pois estes polímeros atuam por diferentes mecanismos na mucoadesão como pH, temperatura e concentração iônica. A caracterização fíquico-química das micro/nanossuspensões foi realizada por espalhamento de luz, medida do potencial zeta, microscopia eletrônica de varredura (MEV), análise de textura (TPA) e ensaios de mucoadesão ex vivo. No método Bottom-up foram otimizadas condições para alcançar a solubilização e principalmente a precipitação do fármaco. Essa variação nas condições de precipitação, demonstrou que o aumento da proporção de ácido, permite modular o tamanho da partícula para a escala micro/nanométrica, na ausência... / The methotrexate (MTX) is pH-dependent solubility drug used in the treatment of gastrintestinal diseases, such as Crohn's disease, ulcerative colitis and colorectal carcinomas. The micro/nanosuspensions development is a promising strategy to incorporate this type of drug, since it offers important advantages, such as particle size reducing of drug, which may lead to the increase of the dissolution and permeability rates of the drug. Additionaly, responsive-polymers can undergo in situ sol-gel phase transition, promoting mucoadhesion process followed by a greater retention of system in the action site. In this sense, the aim of this work was to develop micro and nanosuspensions associated to mucoadhesive polymers for colon specific release of MTX. The particles were obtained from Bottom-up method by acid-base reactions, employing the Ultra- Turrax or Sonicator and hydroxypropylmethylcellulose (HPMC) and poloxamer 407 (P407) as stabilizing. Polyacrylic acid (PAA), poloxamer 407 and gellan gum, which have different mucoadhesion mechanisms (pH, temperature and ionic concentration) were incorporated. The physic-chemical characterization of micro/nanosuspensions was realized by light scattering, measurement of zeta potential, scanning electron microscopy (SEM), texture profile analysis (TPA) and ex vivo mucoadhesion test. In the bottom-up method, the conditions were optimized to reach the solubilization and, mainly, the precipitation of drug. This variation in precipitation conditions showed that increasing the acid proportion is possible to modulate the particle size to the micro/nano-range, in the absence of stabilizer. The nanosuspensions exhibited pH above 5.0, while the microsuspensions below 4.0. For microsuspensions, analysis of the results showed that depending on the stirring process and type of stabilizer used it was possible ...

Orientador: Ramon Kaneno / Banca: Elaine Guadelupe Rodrigues / Banca: Daniela B. Kaneno / Resumo: O interferon alfa (IFN-α), um IFN do tipo I, se apresenta como uma citocina com grande potencial terapêutico, pois atua no combate direto às células tumorais, além de agir sobre a maturação de células dendríticas (DCs), que são células apresentadoras de antígenos profissionais e peças chave na elaboração da uma resposta antitumoral. Entretanto, a administração sistêmica de citocinas pode produzir toxicidade importante nos pacientes, de modo que a indução de sua produção in situ poderia representar uma forma de imunomodulação mais adequada. Assim, o objetivo deste estudo é verificar a ação de vetores lentivirais carregando o gene do IFN-α para transdução de células tumorais, permitindo assim a produção localizada de IFN-α, a fim de explorar, in vitro, seu potencial lítico e imunomodulatório sobre DCs. Vetores lentivirais carregando o gene do IFN-α humano (Lego-IFN) ou GFP (Lego-GFP) foram utilizados para a transdução in vitro de células de câncer colorretal. A transdução foi feita com diferentes multiplicidades de infecção (MOIs - 0.3, 1.0, 2.0, 4.0) para avaliarmos o efeito dose-dependente, seguido de co-cultura com DCs derivadas de monócitos de doadores saudáveis (DC-0.3, DC-1.0, DC-2.0, DC-4.0). Após 48h de co-cultura, as DCs foram avaliadas fenotípica e funcionalmente, através da análise dos marcadores de membrana por citometria de fluxo, capacidade de aloestimulação e de indução de linfócitos T citotóxicos (CTLs). Nós observamos que a transdução com Lego-GFP, mas não com Lego-IFN, aumentou a imunogenicidade das células tumorais, com aumento de expressão de CD54 e HLA-DR. A co-cultura de DCs com células tumorais transduzidas com Lego-IFN aumentou discretamente seu perfil de ativação, mas não seu potencial aloestimulatório in vitro. Observamos que linfócitos cultivados com DC-2.0 produziram níveis mais altos de IFN-γ, sugerindo a indução de um perfil Th1, enquanto que... / Abstract: Interferon alpha (IFN-α) is a type I IFN with great therapeutic potential, since it is able to directly fight tumor cells and enhance the maturation of dendritic cells (DCs), the main antigen-presenting cells, required for an effective antitumor response. However, the systemic administration of cytokines can induce severe collateral effects. Therefore, the induction of cytokine secretion in situ should represent a more adequate approach for cytokine-based immunotherapy. Thus, the goal of this study was to induce IFN-α secretion by colon cancer cells by transduction with a lentivirus vector carrying the human IFN-α gene, followed by analysis of its immunomodulatory potential over DCs. Transduction was made with different multiplicities of infection (MOIs - 0.3, 1.0, 2.0 and 4.0) to evaluate the dose-dependent effects. Such cells were co-cultured with monocyte-derived DCs from healthy donors (DC-0.3, DC-1.0, DC-2.0 and DC-4.0). Forty-eight hours later, DCs were evaluated for their phenotype (surface activation/maturation markers) by flow cytometry, their ability to induce allogeneic response in a mixed leukocyte reaction (MLR) and effectiveness to induce cytotoxic T cells. We observed that transduction with Lego-GFP, but not Lego-IFN, increased tumor cells' immunogenicity with up-regulation of the markers CD54 and HLA-DR. Co-culture of Lego-IFN-transduced tumor cells with DCs slightly enhanced their activation phenotype but not their potential to stimulate T cell proliferation in vitro. Furthermore, we observed that lymphocytes cultured with DC-2.0 produced higher levels of IFN-γ, suggesting an induction of Th1 profile on T cells, while DC-GFP induced more IL-10 and IL-4. Additionally, DC-4.0 was more efficient in generating cytotoxic T lymphocytes (CTLs) that the control DC, however DC-GFP induced even more CD8+T cell proliferation. The enhancement of tumor cell immunogenicity and the superior induction of CLTs ... / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Marchesan Rodrigues / Coorientador: Luís Fernando Barbisan / Banca: Carla Adriene da Silva Franchi / Banca: Fernando Silva Ramalho / Banca: Juliana Elaine Perobelli / Banca: Luis Antonio Justilin Junior / Resumo: Investigamos as repercussões do padrão alimentar ocidental, rico em gordura, (óleo de milho) (20%) e pobre em micronutrientes [ácido fólico (1 mg/g), colina (0,12%) e fibra (2%)], ocorrido durante a gestação, lactação e puberdade na susceptibilidade ao desenvolvimento de câncer do cólon induzido pela 1,2-dimetilhidrazina (DMH) no rato. Avaliamos se a reintrodução da dieta Ocidental durante a vida adulta em animais previamente expostos à dieta Ocidental durante a vida intrauterina, lactação e puberdade, pode modificar a susceptibilidade à oncogênese do cólon pela DMH. Ratas fêmeas SD prenhes receberam dieta semi-purificada controle (AIN-93) ou do tipo Ocidental (WD - Western Style Diet) a partir do dia gestacional 12 (DG 12). Após o desmame (dia 21), a prole de machos permaneceu com o mesmo tipo de dieta de suas mães até o dia pós-natal 50 (DPN 50). Nesse momento, receberam quatro injeções subcutâneas de DMH (40mg/kg) e foram divididos nos seguintes grupos/dietas: Grupo I (AIN-93/DMH/AIN-93) recebeu dieta controle durante todo o experimento (DG 12- DPN 370), o Grupo II (AIN-93/DMH/Ocidental) recebeu dieta Ocidental somente na vida adulta, a partir do DPN 260, Grupo III (Ocidental/DMH/AIN-93) recebeu dieta Ocidental desde a vida intrauterina até o início da puberdade (DG 12 - DPN 50), e o Grupo IV (Ocidental/DMH/Ocidental) recebeu dieta Ocidental desde a vida intrauterina até o início da puberdade (DG 12 - DPN 50), e foi reintroduzido à dieta Ocidental na vida adulta (DPN 260). Todos os animais foram eutanasiados ao final da 50ª semana de experimento (DPN 370). O cólon foi removido e submetido à análise estereoscópica e histológica para determinar o número, distribuição e multiplicidade dos focos de criptas aberrantes (FCAs). As características das lesões neoplásicas e os níveis séricos de insulina e leptina foram analisados à necropsia. A exposição à dieta Ocidental durante a gestação,... / Abstract: We examined the effects of a Western Style Diet (WD), high in fat (corn oil) (20%) and low in micronutrients [i.e.; folic acid (1 mg/g), choline (0.12%) and fiber (2%)] during pregnancy, lactation and in prepubertal stage to examine the susceptibility to colon carcinogenesis induced by dimethylhydrazine (DMH) in male Sprague-Dawley (SD) rats as later adults. We also evaluated whether WD reintroduction during adulthood can modify susceptibility to colon carcinogenesis. Pregnant SD rats received one of two diets AIN-93G or WD at gestational day 12 (GD 12). F1 male pups were weaned (21d) and fed the same AIN- 93G or WD diets from their dams until postnatal day 50 (PND 50). At this point, they were given four subcutaneous injections of carcinogen DMH (40 mg/body weight) and were shared the following diets/group: group I (AIN-93/DMH/AIN-93) a lifetime control diet-fed group (GD 12 until postnatal day - PND 370), group II (AIN-93/DMH/WD) received WD only in adulthood (at PND 260), group III (WD/DMH/AIN-93) received WD during pregnancy from dams until prepubertal stage (GD 12 - PND 50) and group IV (WD/DMH/WD), received WD since pregnancy from dams (GD 12) until prepubertal stage (PND 50) and was reintroduced to WD during adulthood (PND 260). All groups were euthanized at the end of 50th week (PND 370). The colon was removed and the aberrant crypt foci (ACF) were stereoscopically and histologically scored for number, distribution and multiplicity. Neoplastic lesions and serum insulin and leptin concentrations were analysed at necropsy. ACF multiplicity and dysplastic lesions were significantly higher in the group fed WD during pregnancy until prepubertal stage (group III) than control group (group I). In the group III, the number of adenocarcinomas were higher than control (group I). In the group fed WD only in adulthood (group II), ACF multiplicity was significantly higher than in the control (group I). The group ... / Doutor

Orientador: Kátia Sivieri / Banca: Luís Fernando Barbisan / Banca: Fernanda Lopes Kinoushi / Banca: Luis Vitor Silva do Sacramento / Banca: Ana Lúcia Martiniano Nasser / Resumo: Ocâncer de cólon e reto representa a terceira causa mais comum de câncer no mundo, sendo que pesquisas apontam ação benéfica dos probióticos, prebióticos e simbióticos no câncer de cólon. O objetivo desta pesquisa foi definir as etapas da carcinogênese de cólon que são mais afetadas pelo consumo de extrato aquoso de yacon, Lactobacillus acidophilus CRL 1014 e extrato aquoso de yacon + Lactobacillus acidophilus CRL 1014 em ratos induzidos quimicamente ao câncer de cólon com 1,2-dimetilhidrazina (DMH). Cem ratos Wistar machos foram divididos aleatoriamente em cinco tratamentos: G1: ratos não tratados; G2: DMH; G3 (probiótico): DMH + L. acidophilus CRL 1014; G4 (prebiótico): DMH + extrato aquoso de yacon; G5 (simbiótico): DMH + L. acidophilus CRL 1014 + extrato aquoso de yacon. Todos os tratamentos foram administrados via oral durante 8 meses, sendo que o L. acidophilus CRL 1014 foi administrado na quantidade de 3 mL/ kg de peso/ dia na concentração de 109 UFC/ mL e o extrato aquoso de yacon administrado foi calculado em relação ao seu conteúdo de frutooligossacarídeos (FOS). Os animais ingeriram 10% de FOS na dieta. A concentração de FOS no extrato aquoso de yacon foi previamente determinada utilizando kit enzimático (Megazyme®). Cinco animais pertencentes a cada grupo experimental foram sacrificados após a primeira administração de DMH, no terceiro, quinto e oitavo meses. Os tecidos foram submetidos à análise macroscópica, verificando-se o número e volume de massa tumorais, análise de focos de criptas aberrantes (FCA), análise histológica do tecido, ensaio cometa em amostras de sangue periférico, índice de apoptose, imunohistoquímica para p53 e Ki-67. Houve redução no dano no DNA nos tratamentos G3, G4 e G5. Os grupos G5 e G4 apresentaram aumento no índice de apoptose e diminuição da proliferação celular em relação ao G2 (p<0.05). Não houve diferença na marcação de p53 nos grupos G3, G4 e G5 ... / Abstract: Colorectal cancer is the third commonest type of cancer in both sexes in the world. Research suggests beneficial effects of consuming probiotics and prebiotics on colon cancer. The aim of this project was to define the phases of the development of colon cancer that are more affected by aqueous yacon extract, Lactobacillus acidophilus CRL 1014 and aqueous yacon extract + Lactobacillus acidophilus CRL 1014 ingested by rats chemically treated with 1,2 dimethylhydrazine (DMH) to induce colon cancer. Hundred male Wistar rats were randomly divided into five treatments: G1: untreated rats; G2: DMH; G3 (probiotic): DMH + L. acidophilus CRL 1014; G4 (prebiotic): DMH + aqueous yacon extract; G5 (synbiotic): DMH + L. acidophilus CRL 1014 + aqueous yacon extract. All treatments were administered orally for 8 months, L. acidophilus CRL 1014 was administered at 109 CFU/ mL in 3 mL/ kg body weight and amount of aqueous yacon extract administered was calculated in relation of its fructooligosaccharides (FOS) content using fructan assay kit (Megazyme®). Animals ingested 10% of FOS in diet. Five animals from each treatment group were sacrificed after the first DMH injection and in the third, fifth and eighth months. Tissues were subjected to macroscopic analysis, measuring polyp number, volume and thickness, aberrant crypt foci (ACF) analysis, histological tissue analysis, comet assay in peripheral blood, apoptosis index, and colon samples from the first sacrifice were assessed for K-67 and p53 by immunohistochemical procedures. G3, G4 and G5 showed DNA damage reduction. G5 and G3 groups showed higher apoptosis index and decrease of Ki-67, compared to G2 (p<0.05). p53 staining did not differ among G2, G3, G4, G5. G5 showed fewer ACF number per colon in third month and in the fifth month G3, G4 and G5 showed a reduction of ACF number per colon relative to G2 (p<0.05). In the last month, G3, G4 and G5 showed no effect on ACF number per colon relative to G2.. / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-30T14:14:14Z No. of bitstreams: 1 2014_MarthaSilvaEstrela.pdf: 2513527 bytes, checksum: c69499a20e04f540457a226399f7f1f9 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2014-10-30T15:07:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_MarthaSilvaEstrela.pdf: 2513527 bytes, checksum: c69499a20e04f540457a226399f7f1f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-30T15:07:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_MarthaSilvaEstrela.pdf: 2513527 bytes, checksum: c69499a20e04f540457a226399f7f1f9 (MD5) / O câncer colorretal (CCR) é o terceiro tipo de câncer mais comum entre os homens e o segundo entre as mulheres em todo o mundo. O rastreamento regular pode prevenir muitos casos de CCR e resultar na detecção e diagnóstico precoce, quando pode ser altamente curável. Vários fatores de risco tem sido identificados na gênese do CCR, porém nenhum de forma isolada explica completamente a carcinogênese do cólon e reto. O CCR se desenvolve ao longo de décadas e consiste em uma série de alterações genéticas e epigenéticas que conduzem à transformação maligna. Algumas das alterações genéticas já descritas relacionadas com a carcinogênese colorretal envolvem os genes KRAS, p53 e elementos da via de sinalização TGF-β, como TGFBR2 e SMAD4. Alterações epigenéticas tem se mostrado cada vez mais relevantes na gênese de vários tumores, e tem como característica básica não causar modificações na sequência do DNA, mas sim promover expressão seletiva dos genes dependente do nível do empacotamento do DNA. A metilação de histonas é um dos principais e mais estudados eventos epigenéticos. SETD e NSD são famílias de metiltransferases composta por 10 e 3 genes, respectivamente, que codificam proteínas com domínio SET. Este domínio está envolvido na metilação de resíduos de lisina em histonas e proteínas não-histonas. Até o momento, pouco se sabe sobre a relação de genes das famílias SETD e NSD com a carcinogênese colorretal. No presente estudo foi realizada a avaliação de expressão relativa de todos os genes das famílias SETD e NSD em amostras de tecidos tumorais e normais de pacientes portadores de CCR através de técnica de PCR em tempo real. O perfil de expressão comparativa dessas famílias de genes foi correlacionado com as informações clínico-patológicas de maior relevância prognóstica, disponíveis dos pacientes. Notamos que os genes SETD1A e SETD6 encontram-se significativamente superexpressos nas amostras tumorais de pacientes com até 60 anos quando comparadas às amostras tumorais de pacientes acima de 60 anos. Esses dois genes também apresentaram expressão correlacionada nesse grupo avaliado. Quando analisamos apenas as amostras tumorais de pacientes com invasão perineural não evidenciada, comparadas às amostras tumorais de pacientes com invasão perineural evidenciada, observamos superexpressão do gene NSD3. Em análise pareada de amostras de tecidos normal e tumoral verificamos a hipoexpressão dos genes SETD2 e SETD8 nas amostras tumorais. Esses dois genes também possuem expressão correlacionada nesses tecidos. Desta forma, nossos dados sugerem NSD3 como um possível marcador molecular de melhor prognóstico para pacientes diagnosticados com CCR, além de SETD2 e SETD8 como um possível alvo molecular para o diagnóstico do CCR. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Colorectal cancer (CRC) is the third most common type of cancer among men and the second among women worldwide. Regular screening can prevent many cases of CRC and result in early detection and diagnosis, as can be highly curable. Several risk factors have been identified in the genesis of CRC, but none alone explains the carcinogenesis in colon and rectum. CRC develops over decades and consists of a series of genetic and epigenetic alterations that lead to malignant transformation. Some of these genetic changes related to colorectal carcinogenesis involves KRAS, p53 and signaling pathway components of the TGF-β as TGFBR2 and SMAD4. Epigenetic changes have been shown to be increasingly important in the genesis of many tumor types, and its basic characteristic is not cause changes in the DNA sequence but also induce selective gene expression dependent on DNA packaging level. Histone methylation is one of the leading and most studied epigenetic events. SETD and NSD methyltransferase families are composed of 10 and 3 genes, respectively, encoding proteins with SET domain. This domain is involved in methylation of lysine residues on histones and non-histone proteins. So far, little is known about the relation of SETD and NSD genes with colorectal carcinogenesis. In this study we evaluated relative expression of all genes of SETD and NSD families in samples of normal tissue and tumor tissue of patients with CRC through real time PCR. The comparative expression profile of these gene families was correlated with clinical and pathological information of greater prognostic relevance available from patients. Here we show that SETD1A and SETD6 genes are significantly overexpressed in tumor samples from patients younger than 60 years when compared to tumor samples from patients over 60 years. These two genes also showed correlated expression in this evaluated group. When we analyzed only tumor samples from patients without perineural invasion, compared to tumor samples from patients with perineural invasion, we observed overexpression of NSD3 gene. In paired analysis of normal tissue samples and tumor tissues samples we verified low expression of SETD2 and SETD8 genes in tumor samples. These two genes also have correlated expression in these tissues. Thus, our data suggested NSD3 as a possible molecular marker of better prognostic for patients diagnosed with CRC, and SETD2 and SETD8 as a possible molecular target for the diagnostic of CRC.

Orientador: Ramon Kaneno / Resumo: O câncer colorretal (CCR) é o terceiro tipo mais prevalente de câncer no mundo, com frequentes complicações metastáticas muitas vezes associadas ao desenvolvimento de resistência adquirida aos fármacos. Uma das estratégias terapêuticas utilizadas no tratamento de pacientes que não respondem bem à quimioterapia convencional é a imunoterapia baseada na aplicação de anticorpos monoclonais cetuximab ou panitumumab, ambos dirigidos ao receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR). Em alguns casos observa-se associação da resistência aos anticorpos com a superexpressão de HER2, outro membro da família do EGFR. Assim, esta dissertação foi elaborada para testar a hipótese de que o uso conjunto de anticorpos anti-EGFR e anti-HER será capaz de reduzir o escape das células tumorais e que a associação com fármacos antitumorais tornará mais efetiva sua eliminação. Com esse propósito, nosso objetivo foi utilizar nanopartículas ouro (AuNP) para o transporte de 5-fluorouracil (5FU), endereçando esses nanocarreadores para as células de câncer colorretal recobrindo-os com anticorpos contra os receptores para fator de crescimento epidérmico EGFR (ErbB-1) e HER2 (ErbB-2). Os nanocarreadores foram testados in vitro quanto a sua interação por células de câncer colorretal HCT-116 e Caco-2 por citometria de fluxo, sua capacidade de induzir apoptose/necrose e seu efeito sobre a atividade proliferativa das células testadas. Nossos dados indicam que as AuNP produzidas e funcionalizadas com as molé... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Colorectal cancer (CRC) is the third most prevalent type of cancer in worldwide and is frequently associated with metastatic complications. Therapeutic strategies to treat those patients who do not respond to conventional chemotherapy is based on the application of monoclonal antibodies cetuximab or panitumumab, both directed targeting the epidermal growth factor receptor (EGFR). However, in some cases resistance is associated with an overexpression of HER2, another receptor belonging to the EGFR family. Therefore, this dissertation was designed to test the hypothesis that the combination of anti-EGFR and anti-HER antibodies will be able to reduce the escape of tumor cells, and that their association with antitumor drugs could improve the elimination of tumor cells. Then, our goal was to use gold nanoparticles (AuNP) for transporting 5-fluorouracil (5FU), addressing them to colorectal cancer cells by coating them with antibodies against the receptors of epidermal growth factor EGFR (ErbB-1) and HER2 (ErbB-2). Nanocarriers were tested in vitro by flow cytometry for their interaction and internalization by the colorectal cancer cell line HCT-116 and Caco-2, their ability to induce apoptosis/necrosis and stop cell proliferation. Our results show that AuNP produced and functionalized with the molecules of interest have spherical structure, however, some formulations showed agglomeration due to the incorporation of organic molecules. Biological assays showed that AuNP 5FU EGFR had... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Palmira Daflon Gremião / Coorientador: Flávia Chiva Carvalho / Banca: Beatriz Stringuetti Ferreira Cury / Banca: Marco Vinícius Chaud / Resumo: O metotrexato (MTX) é um fármaco com solubilidade pH dependente, utilizado no tratamento de doenças do trato gastrointestinal, como a doença de Crohn, retocolite ulcerativa e carcinomas colorretal. O desenvolvimento de micro/nanossuspensões podem ser uma estratégia promissora para incorporação de fármacos que possuem solubilidade pH dependente, oferecendo vantagens como a redução do tamanho da partícula do fármaco que pode levar ao aumento da taxa de dissolução e da permeabilidade. Adicionalmente, polímeros estímulo-responsivos podem sofrer transição de fase sol-gel in situ, promovendo a mucoadesão e uma maior retenção do sistema no local de ação. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi desenvolver micro/nanossuspensões contendo polímeros mucoadesivos para liberação cólon-específica do MTX. As partículas foram obtidas pelo método Bottom-up, utilizando reações de ácido-base e estabilizadas com hidroxipropilmetilcelulose (HPMC) e poloxâmero 407 (P407), através de agitação em Ultra-turrax ou Sonicador. Foram incorporados polímeros derivados do ácido poliacrílico como, Carbopol® ETD 2020 e Ultrez 10NF, poloxâmero 407 e goma gelana, pois estes polímeros atuam por diferentes mecanismos na mucoadesão como pH, temperatura e concentração iônica. A caracterização fíquico-química das micro/nanossuspensões foi realizada por espalhamento de luz, medida do potencial zeta, microscopia eletrônica de varredura (MEV), análise de textura (TPA) e ensaios de mucoadesão ex vivo. No método Bottom-up foram otimizadas condições para alcançar a solubilização e principalmente a precipitação do fármaco. Essa variação nas condições de precipitação, demonstrou que o aumento da proporção de ácido, permite modular o tamanho da partícula para a escala micro/nanométrica, na ausência... / Abstract: The methotrexate (MTX) is pH-dependent solubility drug used in the treatment of gastrintestinal diseases, such as Crohn's disease, ulcerative colitis and colorectal carcinomas. The micro/nanosuspensions development is a promising strategy to incorporate this type of drug, since it offers important advantages, such as particle size reducing of drug, which may lead to the increase of the dissolution and permeability rates of the drug. Additionaly, responsive-polymers can undergo in situ sol-gel phase transition, promoting mucoadhesion process followed by a greater retention of system in the action site. In this sense, the aim of this work was to develop micro and nanosuspensions associated to mucoadhesive polymers for colon specific release of MTX. The particles were obtained from Bottom-up method by acid-base reactions, employing the Ultra- Turrax or Sonicator and hydroxypropylmethylcellulose (HPMC) and poloxamer 407 (P407) as stabilizing. Polyacrylic acid (PAA), poloxamer 407 and gellan gum, which have different mucoadhesion mechanisms (pH, temperature and ionic concentration) were incorporated. The physic-chemical characterization of micro/nanosuspensions was realized by light scattering, measurement of zeta potential, scanning electron microscopy (SEM), texture profile analysis (TPA) and ex vivo mucoadhesion test. In the bottom-up method, the conditions were optimized to reach the solubilization and, mainly, the precipitation of drug. This variation in precipitation conditions showed that increasing the acid proportion is possible to modulate the particle size to the micro/nano-range, in the absence of stabilizer. The nanosuspensions exhibited pH above 5.0, while the microsuspensions below 4.0. For microsuspensions, analysis of the results showed that depending on the stirring process and type of stabilizer used it was possible ... / Mestre

Orientador: Man Chin Chung / Coorientador: Cleverton Roberto de Andrade / Banca: Luiz Fernando Takase / Banca: Cíntia Duarte de Freitas Milagre / Banca: Renato Farina Menegon / Banca: Jean Leandro dos Santos / Resumo: O câncer colorretal (CCR) é um dos 10 tipos de câncer mais incidentes no Brasil. A terapia consiste na remoção cirúrgica e em alguns casos, a quimioterapia adjuvante, composta de 5-fluorouracil e outros fármacos associados. O 5-FU, apesar de amplamente utilizado, provoca uma série de efeitos adversos, relacionados à toxicidade renal, cardíaca, hepática e mucosite. Nesse contexto, a ferramenta do planejamento de pró fármacos é uma alternativa para a redução das propriedades indesejadas dos fármacos. Assim, o objetivo deste trabalho foi comprovar a hipótese da diminuição da toxicidade do 5-FU pela taurina, aminoácido com propriedades anti-inflamatórias e antioxidante, para a obtenção de pró-fármacos derivados. Para isso, ratos Wistar foram submetidos ao modelo de carcinogênese de cólon induzida por1,2-dimetilhidrazina (DMH), e tratados com a associação (5-FU+TAU) por 8 dias, na 20° semana pós indução. Os resultados demonstraram que a taurina inibe a formação de criptas aberrantes e atua sinergicamente com 5-FU reduzindo a quantidade das mesmas. Além disso, o grupo tratado com 5-FU isolado apresentou aumento de 28% no número de tumores, enquanto a TAU isolada promoveu 64% menos neoplasias que o controle. Na associação a redução na incidência alcança 86%, sendo nenhuma das neoplasias classificados como adenocarcinomas (tumor invasivo), enquanto TAU isolada apresenta 50%, e 5-FU 70% de adenocarcinomas entre as neoplasias. Os resultados demonstram que a TAU e o 5-FU apresentam efei... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Colorectal cancer is one of the ten most incident types of cancer in Brazil. Its treatment consists of surgical intervention and, in some cases, adjuvant chemotherapy, using 5-fluorouracil (5-FU) associated with other drugs. Although extensively used, 5-FU presents several adverse effects, related to renal, cardiac and hepatic toxicity and mucositis. In this context, the search of new drugs is an alternative to reduce some undesired properties of the drug. Thus, the objective of this work was to prove the hypothesis of the reduction of toxicity of 5-FU by taurine, amino acid with anti-inflammatory and antioxidant properties, to obtain derivative prodrugs. For this, Wistar rats were submitted to the colon carcinogenesis model induced by 1,2-dimethylhydrazine (DMH) and treated with the combination (5-FU + TAU) for 8 days at the 19th week post induction. The results have demonstrated that taurine inhibits the formation of aberrant crypts foci and acts synergistically with 5-FU. In addition, the group treated with 5-FU alone showed a 28% increase in the number of tumors, whereas the isolated TAU promoted 64% fewer neoplasms than the control. In the association, the reduction in incidence reaches 86%, none of the neoplasms classified as adenocarcinomas (invasive tumor), while isolated TAU presents 50%, and 5-FU 70% of adenocarcinomas between neoplasms. Thus, the association results have demonstrated that the two substances presented a chemotherapic effect and can be used to obtent... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor