Este estudo clínico-laboratorial identificou as espécies de Candida do palato e prótese de indivíduos desdentados totais com estomatite relacionada à prótese (ERP) e avaliou o efeito de soluções desinfetantes para higiene de próteses totais sobre Candida spp.. Sessenta participantes foram distribuídos aleatoriamente em 04 grupos paralelos (n=15); orientados a escovar as próteses e o palato 3 vezes ao dia e imergi-las nas soluções salina (C controle), Hipoclorito de sódio a 0,25% (HS0,25%), Ricinus communis a 10% (RC10%) ou Cloramina T a 0,5% (CT0,5%) por 20 minutos. Amostras de biofilme foram coletadas da prótese e palato no Baseline, após 7 e 37 dias do uso das soluções e semeadas em meio CHROMagar Candida. Após período de incubação foi realizada a identificação presuntiva, verificação da incidência e quantificação de crescimento das espécies de Candida (contagem de UFC). Cepas ATCC das espécies mais incidentes clinicamente foram avaliadas no estudo laboratorial. Biofilmes de C. albicans, C. tropicalis e C. glabrata foram formados sobre espécimes em resina acrílica termopolimerizável e imersos nas soluções por 20 minutos. Água destilada foi utilizada como controle. As variáveis de resposta foram crescimento de colônias (contagem de UFC), metabolismo celular (método de XTT), produção de enzimas hidrolíticas (kits específicos), formação de hifas (contagem de células em câmara de Newbauer) e quantificação de células vivas (microscopia de epifluorescência). A capacidade de remoção de biofilme pelas soluções também foi avaliada por meio de microscopia de epifluorescência. Para o estudo clínico, análises descritivas foram utilizadas para interpretação dos dados quanto às características sociodemográficas da amostra, identificação e incidência das Candida spp. Os resultados de crescimento celular (UFC) foram analisados pelos Testes Kruskal-Wallis e Friedman. Para o estudo laboratorial, os resultados foram analisados por teste Anova (One-way) e Tukey (capacidade de crescimento e metabolismo celular de C. albicans e C. tropicalis), teste de Kruskal-Wallis (metabolismo celular de C. glabrata; produção de enzimas hidrolíticas; formação de hifas; capacidade de remoção de biofilme) e teste de Wilcoxon (comparação entre quantidade de biofilme vivo e biofilme total). Empregou-se um nível de confiança de 95% (α= 0,05). As espécies mais incidentes foram C. albicans, seguida de C. tropicalis, C. glabrata e C. krusei. O HS 0,25% reduziu a incidência das três espécies na prótese e palato nos períodos de 7 e 37 dias; o CT 0,5% promoveu redução de Candida spp. somente nas próteses totais. O R. communis diminuiu a incidência de C. tropicalis em ambos os sítios de coleta. Para contagem de UFC, o HS 0,25% e CT 0,5% causaram redução significativa para cepas clínicas e ATCC. O R. communis, in vitro, reduziu a quantidade de UFC de C. glabrata. O HS 0,25% obteve os melhores valores contra atividade metabólica, formação de hifas, manutenção de células vivas e remoção do biofilme das espécies de Candida. As soluções de RC 10% e CT 0,5% causaram diminuição da atividade metabólica. Não houve diferença significante na produção de proteinase por C. albicans e C. tropicalis após exposição às diferentes soluções desinfetantes, com exceção da C. glabrata, em que todas as soluções causaram aumento significativo da produção desta enzima. As soluções não influenciaram a produção de fosfolipase. A CT 0,5% e RC 10% apresentaram resultados intermediários para manutenção de células vivas. A Cloramina T foi mais eficiente que o R. communis para remoção do biofilme de C. albicans e C. tropicalis e menos eficiente para remoção de biofilme de C. glabrata. As soluções de Hipoclorito de sódio a 0,25% e Cloramina T a 0,5% apresentaram os melhores resultados como solução de imersão frente às variáveis estudadas, podendo ser indicadas para uso clínico como desinfetantes para próteses totais. / This clinical-laboratory study identified the Candida species from the palate and complete dentures of edentulous individuals with prosthesis-related stomatitis (PRS) and evaluated the effect of disinfectant solutions for denture hygiene on Candida spp. Sixty participants were randomly assigned in 04 parallel groups (n = 15); They were oriented to brush their prostheses and the palate 3 times a day and immerse them in saline solution (C-control), 0.25% Sodium hypochlorite (HS0.25%), 10% Ricinus communis (RC10%) or 0.5% Chloramine T (CT 0.5%) for 20 minutes. Biofilm samples were collected from the prosthesis and palate in the baseline, after 7 and 37 days of use of the solutions and seeded in CHROMagar Candida medium. After incubation period, the presumptive identification, incidence verification and quantification of Candida species growth (CFU count) were performed. ATCC strains of the most clinically incident species were evaluated in the laboratory study. C. albicans, C. tropicalis and C. glabrata biofilms were formed on heatpolymerised acrylic resin specimens and immersed in the solutions for 20 minutes. Distilled water was used as control. The response variables were colony growth (UFC count), cell metabolism (XTT method), production of hidrolytic enzymes (specific kits), formation of hyphae (counting cells in Newbauer\'s chamber) and quantification of live cells (epifluorescence microscopy). The ability of biofilm removal by the solutions was also evaluated by means of epifluorescence microscopy. For the clinical study, descriptive analyzes were used to interpret the data regarding the sociodemographic characteristics of the sample, identification and incidence of Candida spp. The cell growth results (CFU) were analyzed by the Kruskal-Wallis and Friedman tests. For the laboratorial study, the results were analyzed by the Anova (One-way) and Tukey test (growth capacity and cellular metabolism of C. albicans and C. tropicalis), Kruskal-Wallis test (cellular metabolism of C. glabrata; hidrolytic enzymes production; formation of hyphae; ability to remove biofilm) and Wilcoxon\'s test (comparison of the amount of live biofilm and total biofilm). A confidence level of 95% (α = 0.05) was used. The most incident species were C. albicans, followed by C. tropicalis, C. glabrata and C. krusei. HS 0.25% reduced the incidence of the three species on the prosthesis and palate in the periods of 7 and 37 days; CT 0.5% promoted reduction of Candida spp. only in dentures. R. communis decreased the incidence of C. tropicalis in both collection sites. For CFU counts, HS 0.25% and CT 0.5% caused significant reduction for clinical strains and ATCC. R. communis, in vitro, reduced the amount of CFU of C. glabrata. The HS 0.25% obtained the best values compared to the metabolic activity, hyphae formation, maintenance of living cells and removal of the biofilm of Candida species. The solutions of RC 10% and CT 0.5% caused the decrease in the metabolic activity. There was no significant difference in proteinase production by C. albicans and C. tropicalis after exposure to different disinfectant solutions, except C. glabrata, in which all solutions caused a significant increase in the production of this enzyme. The solutions did not influence phospholipase production. A CT 0.5% and RC 10% presented intermediate results for the maintenance of living cells. Chloramine T was more efficient than R. communis for biofilm removal from C. albicans and C. tropicalis; and less efficient for biofilm removal from C. glabrata. The solutions of 0.25% Sodium Hypochlorite and 0.5% Chloramine T presented the best results as immersion solution compared to the studied variables and can be prescribed for clinical use as disinfectants for total dentures.

A candidíase é a mais freqüente infecção fúngica oportunista, causada por leveduras do gênero Candida, de ocorrência comum na cavidade bucal. O aumento da incidência está relacionado, em grande parte, ao surgimento das terapias e patologias imunossupressoras, embora ela possa ocorrer em indivíduos considerados saudáveis. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a microbiota leveduriforme de pacientes com lesão bucal suspeita de candidíase e compará-la com a de indivíduos saudáveis através da quantificação, produção de enzimas fosfolipase, proteinase e determinação da CIM dos antifúngicos: anfotericina B, itraconazol e fluconazol pelo método de microdiluição em caldo. As leveduras foram isoladas a partir de amostras de saliva não estimulada no meio CHROMagar® Candida, que permitiu a observação de colonização mista e uma identificação presuntiva. Posteriormente os isolados foram identificados pela metodologia clássica, através das provas: formação de tubo germinativo em soro humano, estudo da micromorfologia, crescimento a 37°C e 42°C, provas de assimilação e fermentação de carboidratos. Das 100 amostras de saliva dos pacientes com lesão, 70 apresentaram crescimento de leveduras e foram identificadas 63 C. albicans e 16 C. tropicalis. Entre as 50 amostras de salivas do grupo controle, 16 apresentaram crescimento e foram identificadas 14 C. albicans e 3 C. tropicalis. Quanto à capacidade de síntese das exoenzimas observou-se que 100% das C. albicans de ambos os grupos avaliados produziram as enzimas fosfolipase e proteinase em diferentes níveis de atividade. Os isolados de C. tropicalis não apresentaram produção da fosfolipase, com relação à proteinase 43,8% dos isolados de pacientes com lesão bucal foram positivos. Em relação aos testes de sensibilidade, a faixa da CIM para anfotericina B foi de 0,125 ? 4µg/mL para os isolados de C. albicans e de 2 ? 4 µg/mL para os de C. tropicalis, com o itraconazol o intervalo da CIM foi de 0,03 ? 16µg/mL para as duas espécies e para o fluconazol a faixa da CIM foi de 0,125 - ?64µg/mL para os isolados de C. albicans e de 0,25 - ?64µg/mL para os de C. tropicalis. Com base nos resultados obtidos conclui-se que: a análise de saliva é sensível para detecção de leveduras tanto em pacientes com sinais clínicos de candidíase quanto em indivíduos saudáveis portadores da levedura; C. albicans foi à espécie mais isolada em ambos os grupos; todas os isolados de C. albicans foram produtores das enzimas fosfolipase e proteinase; nenhum isolado de C. tropicalis apresentou atividade da enzima fosfolipase. A maioria dos isolados de C. albicans e C. tropicalis foram sensíveis in vitro aos antifúngicos testados / Candidiasis is the most frequent oportunistic fungal infection. It is caused by Candida yeasts, commonly seen in the oral cavity. Newer therapies and immunosupressive pathologies are related to the increase of oral candidiasis incidence, although it may occur in healthy subjects. Therefore, the aim of this work was to evaluate yeasts frequency in the oral cavity from patients with clinical signs of oral candidiasis and compare it with frequency observed in healthy subjects through quantification, phospholipase and proteinase activity tests and antifungal susceptibility (amphotericin B, itraconazole, fluconazole) by broth microdilution test. The yeasts were isolated from unstimulated whole saliva samples in CHROMagar® Candida medium, which allowed association between two or more species observation and presumptive identification. Latter, strains identification were confirmed by classical methodology. Of 100 candidiasis patients samples, yeast growth was observed in 70 samples and 63 C. albicans and 16 C. tropicalis strains were identified. Of 50 healthy subjects samples, yeast growth was observed in 16 samples and 14 C. albicans e 3 C. tropicalis strains were identified. Differential activity of phospholipase and proteinase enzymes was detected in 100% C. albicans strains in both groups. Phospholipase activity was not detected in C. tropicalis strains, and proteinase activity was detected in 43,8% strains from oral candidiasis group. Susceptibility tests showed amphotericin B MIC range from 0,125 ? 4 µg/mL for C. albicans strains and 2 ? 4 µg/mL for C. tropicalis strains; itraconazole MIC range from 0,03 ? 16 µg/mL for both species; fluconazole MIC range from 0,125 - ? 64 µg/mL for C. albicans strains and 0,25 - ? 64 µg/mL for C. tropicalis strains. In conclusion, our study demonstrates that saliva analysis is sensitive to detect yeasts from patients with clinical signs of oral candidiasis and from yeasts carriers; C. albicans was prevalent in both groups; all C. albicans strains showed phospholipase and proteinase activity; None C. tropicalis strains showed phospholipase activity. The majority of C. albicans and C. tropicalis strains were inhibited in vitro by antifungals evaluated

Introdução: A Candida spp é considerada uma das principais causas de infecção fúngica invasiva em unidades de terapia intensivas neonatais (UTIN), sendo a terceira levedura mais comum isolada de culturas de sangue, podendo levar a septicemia e óbito. Objetivos: O objetivo deste estudo foi analisar a incidência da C. parapsilosis em candidemias em UTI-N nos últimos sete anos e investigar as possíveis causas do surto durante este período. Método: Foram revisados os prontuários dos neonatos com candidemia incluídos no estudo entre os anos de 2002 a 2008 e isoladas amostras das mãos dos 71 funcionários que tinham contato direto com os recém-nascidos e do sangue dos recém-nascidos acometidos por candidemia em um surto ocorrido no período de maio de 2004 a julho de 2005. As técnicas utilizadas para a análise das amostras biológicas foram: (i) identificação dos isolados pela micologia clássica e bioquímica (Auxanograma, Zimograma e API ID32), (ii) a análise do DNA genômico por meio do Pulsed Field Gel Eletrophoresis (PFGE) e Ramdomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) e (iii) seqüenciamento da região conservada ITS1/ 4. Resultados: Os resultados obtidos, no período de 2003 a 2005 demonstraram que houve um aumento significativo de aproximadamente 75% nos casos de C. parapsilosis confirmando a ocorrência de um surto de candidemia. Nos isolados destes recém nascidos, 80% das leveduras recuperadas foram identificadas como C. parapsilosis, e nos funcionários este agente foi recuperado em 11% das amostras. A análise do polimorfismo genômico destas amostras, pelos métodos PFGE e RAPD apresentou baixo poder discriminatório entre os isolados dos recém-nascidos e funcionários, não os correlacionado. Conclusões: Os resultados obtidos confirmam a ocorrência de um surto da C. parapsilosis no período de 2003 a 2005 na UTI-N, apesar de não ter sido possível identificar a fonte de origem deste agente. O aumento da incidência da C. parapsilosis na UTI-N no período de 2002 a 2008 e a caracterização de um surto entre os anos de 2003 a 2005 pode ser utilizado como indicador da necessidade de iniciativas de melhoria nas práticas de controle de infecção hospitalar e profilaxia de infecções na unidade de cuidados intensivos neonatais. / Introduction: Candida spp is considered one of the main causes of fungal invasive infection in the neonatal intensive care unit (NICU), and the third most common yeast isolated in blood cultures that could lead to septicemia and death. Objectives: This studys goal is to analyze the incidence of C. parapsilosis in NICU candidemias in the past seven years and investigate possible causes for an outbreak during this time period. Method: Clinical files of neonates with candidemia included in the study between 2002 and 2008 were revised, and hand samples of 71 employees that came into direct contact with newborns, and neonate candidemia infected blood samples were isolated, which occurred during an outbreak between May 2004 and July 2005. Techniques used to analyze the biological samples, were: (i) isolates identification by classic mycology and biochemistry (Auxanogram, Zymogram and API ID32), (ii) genomic DNA analysis by means of Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) and Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) and (iii) ITS1/ 4 preserved area sequence. Results: Results obtained between 2003 and 2005 showed a significant increase of approximately 75% in C. parapsilosis cases, confirming the occurrence of a candidemia outbreak. In these neonate isolates, 80% of the retrieved yeast was identified as C. parapsilosis, and on employees this agent was retrieved in 11% of the samples. The genomic polyphormism analysis of theses samples, using PFGE and RAPD methods, presented a non-correlating, low discriminatory strength between neonate and employee isolates. Conclusions: Obtained results confirmed the C. parapsilosis outbreak from 2003 to 2005 in the NICU, although it was not possible to identify the origin source of this agent. The increase of C. parapsilosis incidence in the NICU between 2002 and 2008, and the characteristics of an outbreak from 2003 to 2005, can be used as an indication for the need of improved initiatives in the control of hospital infection and infection prophylaxis in the Neonatal Intensive Care Unit.

A gomesina é um peptídeo antimicrobiano catiônico, purificado dos hemócitos da aranha caranguejeira Acanthoscurria gomesiana. Possui amplo espectro de atividade contra bactérias, fungos, protozoários e células tumorais. Candida albicans é uma levedura comensal que faz parte da microbiota humana. O tratamento desta micose geralmente é feito com fluconazol, contudo casos de resistência vêm sendo reportados, com isso vários peptídeos antimicrobianos vêm sendo estudados a fim de se tornarem tratamentos alternativos. Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia do tratamento com a gomesina em um modelo de candidíase disseminada e vaginal. O tratamento de gomesina foi eficaz no controle do fungo. Verificou-se um efeito imunomodulatório, pois seu tratamento aumentou as concentrações de IL-6, TNF-<font face=\"symbol\">a e INF-<font face=\"symbol\">g dos rins dos animais com candidíase disseminada. A gomesina não apresentou nenhum efeito tóxico para os animais. Os dados apresentados neste estudo reforçam o potencial da gomesina para ser um agente. / The gomesin is a cationic antimicrobial peptide, purified from hemocytes of the spider Acanthoscurria gomesiana. It has a broad spectrum of activity against bacteria, fungi, protozoa and tumor cells. Candida albicans is commensal yeast that is part of the human microbiota. The treatment of this mycosis is usually done with fluconazole although cases of resistance have been reported. With the emergence of microorganisms resistance, several antimicrobial peptides have been studied in order to become alternative treatments. This study aimed to evaluate the effectiveness of treatment with gomesin in a model of disseminated and vaginal candidiasis. The treatment with gomesin showed to be effective in controlling the fungus. There was also found an immunomodulatory effect as its treatment increased concentrations of IL-6, TNF-<font face=\"symbol\">a and INF-<font face=\"symbol\">g in the kidneys of animals with disseminated candidiasis. The gomesin did not show any toxic effect to animals. The data presented in this study reinforce the potential of gomesin to be an antifungal agent.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tabataatique_dissert.pdf: 1163104 bytes, checksum: dc802a56a23b3d220113ae62b8610987 (MD5) Previous issue date: 2006-06-23 / Oropharyngeal candidiasis is the commonest infection among HIV-infected individuals and the most frequently isolated agent is Candida albicans. However, other species have had significant increase, some of these presenting distinguishing susceptibility or total unresponsive to the antifungical drugs, in special to fluconazole. Objective: To determine the prevalence of Candida sp. in the oropharyngeal cavity of a HIV-infected/AIDS population and of its control group, with emphasis in C. dubliniensis study. Furthermore, our objective was to assess the antifungical susceptibility profiles of the isolated strains. Methods: The sample collection was realized through a sterile swab and posterior isolation on agar Sabouraud Dextrose® and BBL Mycosel Agar®. Colonies which resembled Candida were replaced in CHROMagar Candida® media. Afterwards, accordingly to their colours and/or tonalities the distinct colonies were submitted to the following identification tests: chlamydospore production on corn meal agar with Tween 80; germinative tube formation and biochemical profile analysis. The green colonies were also submitted to specific tests for phenotypic selection of C. dubliniensis: tolerance to 42 and 45 degrees temperature to C and 6,5% hypertonic agar, chlamydospore formation on Sunflower Seed agar and Niger agar, by the formation of an opacity halo in agar with Tween 80 and D-xylose and alpha D-glucopiranoside assimilation. Finally, the antifungical susceptibility profiles were evaluated by disk diffusion and microdilution. Results: In patients, the prevalence of colonization/infection was of 87%, being a total of 107 strains there isolation. From these, seventy-six were identified as C. albicans, whereas non-albicans: 18 as C. tropicalis, 10 as C. glabrata and three of them as C. dubliniensis. In addition, from the obtained material though the oropharyngeal cavity of 20 patients, was possible the isolation of more than one species of Candida sp., characterizing mixed colonization and/or infection. On the other hand, from the individuals of the control group, this prevalence was much smaller (9%) and the totality of the isolated strains was typed as C. albicans. The isolated strains from the patients were significantly more resistant to fluconazole (p= 0,0039) than those isolated from the oropharyngeal cavity of the controls. Conclusions: The prevalence of Candida sp., considering C. albicans and non-albicans in the HIV serumpositive/AIDS patients is high. C. dubliniensis prevalence is similar to that one those reported in other regions of Brazil. C. albicans was the only isolated species of the oropharyngeal cavity of the control group individuals. The isolated strains from patients oral cavity s are more resistant to antifungical drugs than those isolated in the same anatomical site in the control group. Finally, non-albicans species are more resistant to the azoles and amphotericin B than C. albicans. / A candidíase orofaríngea é a infecção mais comum entre os indivíduos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) e o agente etiológico mais freqüentemente isolado é Candida albicans. Entretanto, outras espécies têm tido significativo aumento, algumas dessas apresentando suscetibilidade diferencial ou total insensibilidade aos antifúngicos, em especial ao fluconazol. Objetivo: Determinar a prevalência de Candida sp. na mucosa orofaríngea de uma população soropositiva para o HIV/portadora da síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) e de um grupo controle com ênfase na pesquisa de C. dubliniensis, além da pesquisa dos perfis de sensibilidade antifúngica das cepas isoladas. Métodos: A coleta de material da cavidade oral foi realizada com swab estéril com posterior semeadura em meio Agar Sabouraud Dextrose® e BBL Mycosel Agar®. As colônias com aspecto compatível ao de Candida foram ressemeadas em meio cromatogênico CHROMagar Candida®. Em seguida, as colônias de cores e/ou tonalidades distintas foram submetidas aos seguintes testes de identificação: microcultivo, prova do tubo germinativo e análise do perfil bioquímico. As colônias verdes foram submetidas a testes específicos para triagem fenotípica de C. dubliniensis: tolerância à temperatura de 42º a 45ºC e ao agar Sabouraud hipertônico, formação de franjas de hifas em agar Niger e Girassol, opacificação em agar com Tween 80 e assimilação de D-xylose e &#945;-D-glucopiranoside. Por fim, o perfil de sensibilidade antifúngica foi avaliado por difusão em disco e por microdiluição. Resultados: Nos pacientes a prevalência de colonização/infecção foi de 87%, sendo isoladas 107 cepas. Dessas 76 cepas foram identificadas como C. albicans, enquanto que 31 como não-albicans sendo: 18 como C. tropicalis, 10 como C. glabrata e três como C. dubliniensis. A partir do material obtido da mucosa orofaríngea de 20 pacientes, foi possível o isolamento de mais de uma espécie de Candida sp, caracterizando a presença de colonização/infecção mista. Já a partir dos indivíduos do grupo controle, a prevalência foi significativamente menor (9%) e a totalidade das cepas isoladas foi identificada como Candida albicans. As cepas isoladas a partir dos pacientes foram significantemente mais resistentes ao fluconazol (p= 0,0039) que aquelas isoladas a partir da cavidade orofaríngea dos controles. Conclusões: A prevalência de Candida sp., tanto de C. albicans quanto de não-albicans nos pacientes soropositivos para o HIV/doentes com AIDS é elevada sendo que a de C. dubliniensis é similar àquela encontrada em outras regiões do Brasil. C. albicans é a única espécie isolada da mucosa orofaríngea de indivíduos saudáveis. Cepas isoladas da mucosa oral dos pacientes são mais resistentes aos antifúngicos que aquelas isoladas no mesmo sítio anatômico no grupo controle. Finalmente, espécies não albicans são mais resistentes aos azóis e à anfotericina B que os isolados de C. albicans.

Submitted by Márcio Ropke (ropke13marcio@gmail.com) on 2017-06-14T12:00:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Estudo retrospectivo de candidíase oral, isolamento e identificação de.pdf: 1215710 bytes, checksum: 7e54f71e4c51044bc370609179c14571 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-14T12:00:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Estudo retrospectivo de candidíase oral, isolamento e identificação de.pdf: 1215710 bytes, checksum: 7e54f71e4c51044bc370609179c14571 (MD5) Previous issue date: 2015-07-10 / Sem bolsa / O tratamento de escolha para a candidíase atrófica crônica (estomatite por dentadura) é o uso de antifúngicos, geralmente na forma tópica, mas também a terapia sistêmica pode ser necessário em alguns casos. Seja de forma sistêmica ou tópica, o uso prolongado e recorrente dos antifúngicos contribui para o desenvolvimento de espécies resistentes. Este estudo teve como objetivo realizar o levantamento do perfil demográfico e clínico dos pacientes diagnosticados com candidíase e tratados no Centro de Diagnóstico de Doenças da Boca (CDDB), da Faculdade de Odontologia de Pelotas (FO/UFPel), no período de 1997 a 2014, e isolar, identificar e avaliar a suscetibilidade antifúngica de leveduras orais isoladas de pacientes diagnosticados com candidíase atrófica crônica (estomatite por dentadura) que apresentem resistência ao tratamento com o uso dos antifúngicos convencionais. Foram avaliados os prontuários dos pacientes atendidos no Serviço (CDDB) durante 18 anos. Variáveis como: raça, gênero, idade, doenças sistêmicas, tipo e localização da candidíase, sintomas e hábitos nocivos foram coletados. Além disso, foi realizada a coleta e o isolamento de Candida de pacientes com diagnóstico clínico de Candidíase atrófica crônica. Posteriormente, foi realizada a identificação das espécies e a avaliação de sua resistência antifúngica através do método automatizado Vitek 2 (Biomeriéux). A análise estatística foi realizada através dos testes qui-quadrado e Regressão de Poison. O nível de significância utilizado nos testes foi de 5% (p 0,05). O software utilizado foi o STATA 13.1 / The treatment of choice for chronic atrophic candidiasis (denture stomatitis) is the use of antifungals, usually in topical form but also systemic therapy may be required in some cases. Be systemic or topical form, prolonged and repeated use of antifungal contributes to the development of resistant strains. This study aimed to survey the demographic and clinical profile of patients diagnosed with candidiasis and treated in the Mouth Disease Diagnostic Center (CDDB), Faculty of Dentistry of Pelotas (FO / UFPel) in 1997 to 2014 and isolate, identify and evaluate the antifungal susceptibility isolated yeast oral candidiasis patients diagnosed with chronic atrophic (denture stomatitis) showing resistance to treatment with the use of conventional antifungal agents. We evaluated the records of patients seen in the Service (CDDB) for 18 years. Variables as race, gender, age, systemic diseases, type and location of candidiasis symptoms and harmful habits were collected. Furthermore, the collection and isolation of Candida from patients with a clinical diagnosis of chronic atrophic candidiasis was performed. Later, species identification and evaluation of their antifungal resistance through automated method Vitek 2 (bioMérieux) was performed. Statistical analysis was performed using the chi-square test and Poison Regression. The significance level used in the tests was 5% (p 0.05). The software being used was the STATA 13.1.

Introdução: A Candida spp é considerada uma das principais causas de infecção fúngica invasiva em unidades de terapia intensivas neonatais (UTIN), sendo a terceira levedura mais comum isolada de culturas de sangue, podendo levar a septicemia e óbito. Objetivos: O objetivo deste estudo foi analisar a incidência da C. parapsilosis em candidemias em UTI-N nos últimos sete anos e investigar as possíveis causas do surto durante este período. Método: Foram revisados os prontuários dos neonatos com candidemia incluídos no estudo entre os anos de 2002 a 2008 e isoladas amostras das mãos dos 71 funcionários que tinham contato direto com os recém-nascidos e do sangue dos recém-nascidos acometidos por candidemia em um surto ocorrido no período de maio de 2004 a julho de 2005. As técnicas utilizadas para a análise das amostras biológicas foram: (i) identificação dos isolados pela micologia clássica e bioquímica (Auxanograma, Zimograma e API ID32), (ii) a análise do DNA genômico por meio do Pulsed Field Gel Eletrophoresis (PFGE) e Ramdomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) e (iii) seqüenciamento da região conservada ITS1/ 4. Resultados: Os resultados obtidos, no período de 2003 a 2005 demonstraram que houve um aumento significativo de aproximadamente 75% nos casos de C. parapsilosis confirmando a ocorrência de um surto de candidemia. Nos isolados destes recém nascidos, 80% das leveduras recuperadas foram identificadas como C. parapsilosis, e nos funcionários este agente foi recuperado em 11% das amostras. A análise do polimorfismo genômico destas amostras, pelos métodos PFGE e RAPD apresentou baixo poder discriminatório entre os isolados dos recém-nascidos e funcionários, não os correlacionado. Conclusões: Os resultados obtidos confirmam a ocorrência de um surto da C. parapsilosis no período de 2003 a 2005 na UTI-N, apesar de não ter sido possível identificar a fonte de origem deste agente. O aumento da incidência da C. parapsilosis na UTI-N no período de 2002 a 2008 e a caracterização de um surto entre os anos de 2003 a 2005 pode ser utilizado como indicador da necessidade de iniciativas de melhoria nas práticas de controle de infecção hospitalar e profilaxia de infecções na unidade de cuidados intensivos neonatais. / Introduction: Candida spp is considered one of the main causes of fungal invasive infection in the neonatal intensive care unit (NICU), and the third most common yeast isolated in blood cultures that could lead to septicemia and death. Objectives: This studys goal is to analyze the incidence of C. parapsilosis in NICU candidemias in the past seven years and investigate possible causes for an outbreak during this time period. Method: Clinical files of neonates with candidemia included in the study between 2002 and 2008 were revised, and hand samples of 71 employees that came into direct contact with newborns, and neonate candidemia infected blood samples were isolated, which occurred during an outbreak between May 2004 and July 2005. Techniques used to analyze the biological samples, were: (i) isolates identification by classic mycology and biochemistry (Auxanogram, Zymogram and API ID32), (ii) genomic DNA analysis by means of Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) and Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) and (iii) ITS1/ 4 preserved area sequence. Results: Results obtained between 2003 and 2005 showed a significant increase of approximately 75% in C. parapsilosis cases, confirming the occurrence of a candidemia outbreak. In these neonate isolates, 80% of the retrieved yeast was identified as C. parapsilosis, and on employees this agent was retrieved in 11% of the samples. The genomic polyphormism analysis of theses samples, using PFGE and RAPD methods, presented a non-correlating, low discriminatory strength between neonate and employee isolates. Conclusions: Obtained results confirmed the C. parapsilosis outbreak from 2003 to 2005 in the NICU, although it was not possible to identify the origin source of this agent. The increase of C. parapsilosis incidence in the NICU between 2002 and 2008, and the characteristics of an outbreak from 2003 to 2005, can be used as an indication for the need of improved initiatives in the control of hospital infection and infection prophylaxis in the Neonatal Intensive Care Unit.

Orientador: Ana Claudia Pavarina / Banca: Eunice Teresinha Giampaolo / Banca: Cristina Kurachi / Resumo: Este trabalho teve por objetivo avaliar a efetividade da terapia fotodinâmica (PDT) mediada pelo fotossensibilizador (FS) Photodithazine® (PDZ), associado à luz do tipo LED (660nm). Para tanto, foram utilizados 55 camundongos com aproximadamente 6 semanas de vida, os quais foram submetidos a indução de candidose no dorso da língua. Inicialmente os animais foram imunossuprimidos e no dia seguinte se realizou a inoculação de C. albicans na língua dos mesmos por meio de swabs embebidos na suspensão (107 Ufc/mL). Para a realização da terapia fotodinâmica o FS foi avaliado nas concentrações de 75, 100, 125 e 150mg/L. Tais grupos experimentais foram denominados de (P+L+ 75mg/L, P+L+ 100mg/L, P+L+ 125mg/L, P+L+ 150mg/L) associados a uma dose de luz de 37,5 J/cm2. Para a verificação apenas do efeito da PDZ, a mesma foi aplicada na língua dos animais, sem iluminação (grupos denominados de P+L- 75mg/L, P+L- 100mg/L, P+L- 125mg/L, P+L- 150mg/L). O efeito da luz foi avaliado por meio da iluminação das línguas com dose de luz de 37,5J/cm2, (grupo denominado de P-L+ 37,5J/cm2). Um grupo recebeu apenas inoculação por Candida (grupo P-L-, controle positivo), outro grupo não recebeu nenhum tratamento e nem inoculação fúngica (grupo CN - controle negativo). Após os experimentos realizou-se a recuperação de C. albicans das línguas dos animais por meio de swabs que foram esfregados sobre as mesmas durante 1 minuto. Esses swabs foram embebidos em tubos de ensaio com 1mL de solução salina, e diluições seriadas foram realizadas e colocadas em placas de petri com SDA. Após 48 horas de incubação a 37º C as células fúngicas foram quantificadas e o número de Ufc/mL foi determinado e analisado pelo teste ANOVA (P<.05). Os camundongos foram sacrificados e tiveram as línguas removidas cirurgicamente para realização da análise histológica. Os resultados demonstraram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this investigation was to evaluate the effectiveness of photodynamic therapy (PDT) mediated by photossensitizer Photodithazine® (PDZ) associated with LED light (660nm) for the photoinactivation of C. albicans in a murine model of oral candidosis. Fifty-five 6-week-old female Swiss mice were immunossuppressed and in the next day small cotton pads were soaked in a C. albicans cell suspension (107CFU/mL) and swabbed in the oral cavity of mice. PDT was performed and the PS was applicated topically on the dorsum of the tongue of mice at concentrations 75, 100, 125 and 150mg/L (P+L+75, P+L+100, P+L+125 and P+L+150mg/L) associated with LED at a fluence of 37,5J/cm2. The effect of PS only was tested by application of PDZ for the same period of pre-irradiation time and irradiation at the same concentration as that for the P+L+ group, without the LED illumination (P+L-75, P+L-100, P+L-125 and P+L-150mg/L). To verify the effect of the light only, the group was exposed to the same LED dose mentioned previously (P-L+ 37,5J/cm2), 1 group). The positive control did not receive any PS or light (P-L-). The negative control group (CN) of animals was evaluated and mice did not receive any treatment. After treatment the dorsum of the tongue was swabbed for 1 minute with a cotton pad to recover C. albicans cells and the microbiological evaluation was performed. The yeast colony counts were quantified and the number of CFU/mL was determined and analyzed by ANOVA test (P<.05). Animals were killed 24 hours after treatment and the tongue of all mice were surgically removed for histological analysis. The results of this investigation demonstrated that PDT was effective in reducing C. albicans recovered from the tongue of mice at concentrations 100, 125 and 150mg/L of PS when compared with the animals from the positive control group (P-L-) (P<0.05). There was no difference between these concentrations... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Saulo Santesso Garrido / Coorientador: Marlus Chorilli / Banca: Fernando Rogério Pavan / Banca: Eduardo Festozo Vicente / Resumo: Atualmente aproximadamente 75-88% das infecções fúngicas são causadas por espécies de Candida, que geram um custo de 1,7 bilhões de dólares para a saúde pública, somente nos EUA. Candida albicans é o principal microrganismo causador da candidíase bucal, uma infecção da mucosa oral do organismo humano. A patogenicidade dessa espécie está relacionada com a formação de biofilmes, que agem como um revestimento impermeável e protetor, e tornam o microrganismo resistente a medicamentos convencionais. Neste caso, os antifúngicos mais comumente utilizados, não apresentam ação eficaz. Por esse motivo, a busca por novas opções de tratamento e por novos medicamentos está em constante desenvolvimento, principalmente na área da biotecnologia. Um exemplo disso são os peptídeos antifúngicos da família das Histatinas, entre eles a Histatina-5. Trata-se de um peptídeo naturalmente encontrado na saliva humana, mas que sofre rápida degradação quando presente na cavidade bucal, que é seu local de ação. Diante disto, o objetivo deste trabalho é o desenvolvimento de lipossomas de diferentes composições lipídicas, na intenção de proteger o peptídeo e melhorar sua ação, preservando seu potencial antifúngico. Para isso foi sintetizado o peptídeo 0WHistatina-5, um análogo do peptídeo Histatina-5, que contém o aminoácido triptofano em sua sequência. Foi utilizado o método de síntese em fase sólida, seguido de clivagem e purificação, com confirmação da massa molecular utilizando HPLC e ESI-MS. Os liposs... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Currently, approximately 75-88% of fungal infections are caused by Candida species, which generate a cost of $ 1.7 billion for public health in the US. Candida albicans is the main microorganism that causes oral candidiasis, an infection of the oral mucosa of the human organism. The pathogenicity of this species is related to the formation of biofilms, which act as an impermeable and protective coating, and make the microorganism resistant to conventional drugs. In this case, the most commonly used antifungals, have no effective action. For this reason, the search for new treatment options and new drugs is in constant development, especially in the biotechnology area. The antifungal peptides of the Histatin family, including Histatin-5, are an example. The Histatin-5 is a peptide naturally found in human saliva, but it undergoes rapid degradation when present in the oral cavity, which is its place of action. For this reason, this work aimed at developing liposomes of different lipid compositions, in order to protect the peptide, improve its action, and preserve its antifungal potential. For this, the peptide 0WHistatin-5, an analog of the peptide Histatin-5, was synthesized, which contains the amino acid tryptophan in its sequence. Therefore, the peptide was synthesized manually by the solid phase synthesis method, followed by cleavage and purification. The molecular weight was confirmed by using HPLC and ESI-MS. The liposomes were produced by the lipid film hydration method,... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é a principal responsável pelo desenvolvimento de lesões intraepiteliais e, potencialmente, do câncer cervical (CC). A presença de fatores como inflamação e outros agentes infecciosos contribuem para a instalação e persistência do vírus. A inclusão da pesquisa do HPV e de outros agentes infecciosos relacionados junto a programas de rastreamento do CC ainda é controversa. Além disso, sabe-se que o processo inflamatório e as lesões celulares decorrentes da presença de HPV e seus cofatores provocam alterações na expressão de diversas proteínas, entre elas a S100A4, que poderia funcionar como biomarcador de exposição. Desta forma, foram analisadas amostras de esfregaços cervicais para investigação da relação do diagnóstico citológico com a presença de agentes infecciosos, além do padrão de expressão da proteína S100A4. Nossos resultados demonstraram que o aparecimento de lesões ou atipias citológicas apresentou associação com a presença de HPV, tanto na infecção simples como na infecção por múltiplos genótipos de alto risco oncogênico, sugerindo a pesquisa molecular do HPV complementar à citologia. A presença de infecção latente pelo HPV também foi observada, a qual deve ser acompanhada com exames citológicos periódicos. A infecção por Chlamydia trachomatis desempenha importante papel como cofator para o desenvolvimento do CC e foi prevalente na população estudada, demonstrando associação com a presença de diferentes genótipos de HPV. Tanto nas pacientes sintomáticas como nas assintomáticas houve a detecção de leveduras do gênero Candida, sendo que a mais prevalente foi a C. albicans apresentando-se sensível à Anidulafungina e Anfotericina B, na maioria dos casos, e resistente ao Fluconazol. Com relação à expressão da proteína S100A4, houve associação com as alterações citológicas características do HPV, nas quais houve redução de sua expressão à medida que aumentou o grau da lesão. No entanto, também observamos que há expressão fisiológica da proteína S100A4 no epitélio escamoso estratificado da ectocérvice que varia de acordo com o grau de maturação celular e a presença de alterações citológicas inflamatórias, onde foi demonstrado aumento da sua expressão. Portanto, a avaliação da expressão da proteína S100A4 pode auxiliar no diagnóstico precoce do câncer de colo do útero nas lesões intraepiteliais cervicais positivas para HPV. Analisando-se globalmente, estes resultados sugerem a inclusão da pesquisa molecular de HPV e C. trachomatis, bem como a identificação de leveduras do gênero Candida complementares à citologia esfoliativa junto a programas de rastreamento. Além disso, a proteína S100A4, mostrou-se promissora como biomarcador dos efeitos celulares dos fatores associados. Observa-se que a associação de diferentes metodologias permite a detecção precoce de lesões e, consequentemente, contribuem para a redução da incidência do CC. / Human papillomavirus (HPV) infection is the main responsible for the development of intraepithelial lesions and potentially cervical cancer (CC). The presence of factors such as inflammation and other infectious agents contribute to the onset and persistence of the virus. The inclusion of HPV research and other infectious agents associated in the CC screening programs is still controversial. In addition, it is known that inflammation and cell injury caused by the presence of HPV and their cofactors cause changes in gene expression and function of several proteins, including the S100A4 which could function as a biomarker of exposure. Thereby, samples of cervical specimens were analyzed to investigate the relationship of cytological diagnosis in the presence of infectious agents, other than the standard expression of S100A4 protein. Our results demonstrated that the development of lesions or cytological atypia was associated with the presence of HPV in either simple infection or infection by multiple genotypes of high oncogenic risk, indicating the importance of molecular HPV analysis complementary to cytology. The presence of latent infection was also observed and must be monitored with periodic cytological examinations. The Chlamydia trachomatis infection plays an important role as a cofactor for the development of CC and was prevalent in the population studied, demonstrating association with the presence of different HPV genotypes. For both symptomatic and asymptomatic patients there was a yeast detection of Candida, and the most prevalent was the Candida albicans presenting sensitive to Anidulafungin and Amphotericin B, in most cases, and resistant Fluconazole. Regarding the S100A4 protein expression, there was association with abnormal cytological HPV characteristics where a reduction of expression could be observed and the degree of injury increased. However, we also observed that there are physiological expression of S100A4 protein in the stratified squamous epithelium of the ectocervix and this varies according to the degree of cell maturation and the presence of inflammatory cell alterations, increased expression where demonstrated. Therefore, the evaluation of the expression of S100A4 protein may assist in the early diagnosis of cervical cancer in cervical intraepithelial lesions positive for HPV. Overall, these results suggest the inclusion of molecular research of HPV and C. trachomatis, and the identification of yeasts Candida complementary to exfoliative cytology in screening programs. In addition, the S100A4 protein has shown to be promising as a biomarker for cellular effects of associated factors. It was observed that the association of different methodologies allows early detection of lesions and therefore contribute to reducing the incidence of CC.