Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas / Conteúdo não liberado pelo autor.

This study was conducted to determine the prevalence of intestinal protozoa in elderly people coming from Institutions of Long Term Elderly (ILPI), nurses and/or technicians in nursing and/or caregivers and food handlers, identifying risk factors associated with infections. Fecal specimens from 293 elderly, 63 nurses and/or nursing technicians and/or caregivers and 19 food handlers were studied. Were collected from each individual, three faecal samples collected on alternate days to obtain more reliable results. The fecal samples were divided and used to develop techniques of flotation in zinc sulfate solution to 33%, to search for Giardia duodenalis and Entamoeba histolytica/dispar, concentration by formalin-ether and staining Zieh-Nelsen, for research of Cryptosporidium spp.. Questionnaires were applied on sociodemographic characteristics, hygienic, and related to behavioral health care. The prevalence of Giardia duodenalis, Cryptosporidium spp. and Entamoeba histolytica/dispar in the elderly was 4.0%, 1.0% and 0.3% respectively. The nurses and/or technicians in nursing and/or caregivers and food handlers were 4.8% and 5.2% positive only for Giardia duodenalis, respectively. Regarding the elderly, the origin of individuals and contact with pets were associated with Giardia duodenalis, although the latter variable was a risk factor for infection; the time of completion of the last stool examinations was related to Cryptosporidium spp.. None of the variables were related to Entamoeba histolytica/dispar. On the nurses and/or technicians in nursing and/or caregivers, who often wash their hands each day was significantly associated with Giardia duodenalis. The positive for Giardia duodenalis, Cryptosporidium spp. and Entamoeba histolytica/dispar show that the ILPI are environments conducive to infection due to contact among the elderly, nurses and/or technicians in nursing and/or caregivers and food handlers, who are often misled as to the measures of hygiene and handling food / Esse estudo foi realizado para determinar a prevalência de protozoários intestinais em gerontes procedentes das Instituições de Longa Permanência para Idosos (ILPI), de enfermeiros e/ou técnicos em enfermagem e/ou cuidadores e manipuladores de alimentos, identificando os fatores de risco associados às infecções. Amostras fecais de 293 idosos, 63 enfermeiros e/ou técnicos em enfermagem e/ou cuidadores e 19 manipuladores de alimentos foram estudadas. Foram coletadas, de cada indivíduo, três amostras fecais, obtidas em dias alternados para se obter maior confiabilidade dos resultados. As amostras fecais foram divididas e utilizadas para elaboração de técnicas de flutuação em solução de sulfato de zinco a 33%, para pesquisa de cistos de Giardia duodenalis e Entamoeba histolytica/dispar; concentração por formol-éter e coloração de Zieh-Nelsen, para pesquisa de oocistos de Cryptosporidium spp.. Foram aplicados questionários sobre as características sociodemográficas, higiênicas, comportamentais e relacionados aos cuidados com a saúde. A prevalência para Giardia duodenalis, Cryptosporidium spp. e Entamoeba histolytica/dispar nos idosos foi de 4,0%, 1,0% e 0,3% respectivamente. Os enfermeiros e/ou técnicos em enfermagem e/ou cuidadores e os manipuladores de alimentos apresentaram 4,8% e 5,2% de positividade somente para Giardia duodenalis, respectivamente. Em relação aos idosos, a procedência dos indivíduos e o contato com animal doméstico associaram-se com Giardia duodenalis, sendo que a última variável foi fator de risco para infecção; e o tempo de realização do último exame coproparasitológico relacionou-se com Cryptosporidium spp.. Nenhuma das variáveis apresentou relação com Entamoeba histolytica/dispar. Sobre os enfermeiros e/ou técnicos em enfermagem e/ou cuidadores, a freqüência que lavavam as mãos por dia foi significativamente associada à Giardia duodenalis. A positividade para Giardia duodenalis, Cryptosporidium spp. e Entamoeba histolytica/dispar comprovam que as ILPI são ambientes propícios a infecção devido ao contato entre idosos, enfermeiros e/ou técnicos em enfermagem e/ou cuidadores e manipuladores de alimentos, que são muitas vezes mal orientados quanto às medidas de higiene e manipulação de alimentos. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Universidade Federal de Uberlândia / Neonatal Intensive Care Unit is the unit in which hospital infectious problems (HI) are the most significant ones, due to high frequency of intrinsic e extrinsic risk factors. Two investigations were performed. The first of them was a retrospective study from January, 2001 to December, 2003, whose aim was to compare hospital infection rates before, during and after a unit reform; the second one was a prospective search that analyzed infection incidence and colonization respective prevalence for Staphylococcus aureus. The first study showed a significant 12.8 to 18.6 increase on hospital infection rate, after the removal to a temporary location as well a more expressive decline (p<0,001) in catheter-related bacteremia after the removal to new unit, in spite of an increased central vascular catheter utilization density (CVC) from 0.18 to 0.55 in both periods. This difference has simultaneously occurred with the substitution of vein dissection CVC insertion technique (phlebotomy) by the employment of a peripheral insertion catheter (PICC). In the second phase of the investigation, staphylococcus infections were detected by laboratorial and NNISS vigilance techniques. The detected incidence rates for hospital infection was 23/1000 patient/day. From 32 evaluated newborn, 17 were infected and 15 colonized. Sepsis was the most frequent infectious syndrome (61%) and the nose was the most colonized site (66%). Antibiotic use showed to be the only significant variable for S. aureus infection. Risk factors by univariate analysis were the following ones: antibiotics use, central vascular catheter (CVC) utilization, CVC use for more than seven days and phlebotomy insertion. This was the only significant variable by multivariate analysis. Molecular analysis of 37 samples showed a policlonality (12 genotypes), and B clone prevailed (34%) over the other ones. Clone identity was observed in all cases in which it was possible to determinate the relationship between colonizing and infecting samples. The pvl gene was detected in four colonizing samples. MSSA infection was associated to previous colonizing by pathogen, with evidence of horizontal transmission among newborn, in function of B clone prevailing as well micro-clusters occurrence in the unit. / A Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) é uma das unidades onde o problema das infecções hospitalares (IHs) é mais significativo, em função da alta freqüência de fatores de risco intrínsecos e extrínsecos. Foram realizados dois estudos, o primeiro retrospectivo (janeiro/2001 a dezembro/2003), com o objetivo de comparar as taxas de infecções hospitalares, antes, durante e após uma reforma na unidade; e o segundo prospectivo (janeiro/2004 a junho/2005), analisando a incidência de infecção e prevalência de colonização, respectivamente, por Staphylococcus aureus. O primeiro estudo evidenciou um aumento significativo de 12,8 para 18,6 na taxa de infecção hospitalar, após a mudança para a localização temporária; e um declínio ainda mais expressivo (p<0,001) na de bacteremia relacionada ao cateter após a mudança para a unidade nova, apesar do aumento na densidade de utilização de cateter vascular central (CVC) de 0,18 para 0,55 nos dois períodos. Essa diferença ocorreu simultaneamente à substituição da técnica de inserção do CVC pela dissecação de veia (flebotomia) pelo emprego do cateter de inserção periférica (PICC). Na segunda fase da investigação, os casos de infecções estafilocóccicas foram detectados pelas técnicas de vigilância NNISS e laboratorial. A taxa de incidência de infecção hospitalar detectada foi de 23/1000 pacientes/dia; dos 32 neonatos avaliados, dezessete estavam infectados e quinze colonizados. A síndrome infecciosa mais freqüente foi sepse (61%), sendo a narina o sítio mais colonizado (66 %). O uso de antibióticos foi a única variável significante para infecção por S. aureus. Os fatores de risco por análise univariada para infecção/colonização por este microrganismo foram: o uso de antibióticos, utilização de cateter vascular central (CVC), uso do CVC por mais que sete dias e sua inserção por flebotomia, sendo a última variável a única significativa pela análise multivariada. A análise molecular das 37 amostras demonstrou uma policlonalidade (doze genótipos), com o predomínio do clone B (34%), e identidade clonal foi observada em todos os casos em que foi possível determinar a relação entre amostras de colonização e de infecção; o gene pvl foi detectado em quatro amostras de colonização. A infecção por MSSA foi associada com colonização prévia pelo patógeno, com evidência de transmissão horizontal entre os neonatos em função da predominância do clone B, e da ocorrência de micro-clusters na unidade. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan that belongs to the Apicomplexa phylum and causes toxoplasmosis which is especially severe in immunocompromised individuals and who acquired the infection by congenital transmission. Dense granules are organelles involved in this parasite invasion and replication of the parasite inside the cell. Among the proteins secreted by dense granules, jointly called GRAs, the GRA 2 is particularly immunogenic. In the present work, we aim to study the role of this protein in inducing adaptive immune response by produced and characterized a monoclonal antibody against GRA2. The parasite treated with this antibody showed the lowest rate of replication in intracellular proliferation assay compared to treatment with irrelevant antibody. The epitopes of this protein that binds to the monoclonal antibody have been mapped by phage display. Through bioinformatics analysis, epitopes for B cells and T GRA2 were predicted and based on that and on the results of phage display amino acid sequences were chosen to synthesize two peptides that were tested as potential vaccine. Immunization tests were carried out in C57BL/6 mice with synthetic peptides and these animals were subsequently infected with T. gondii. There was a significant reduction in mortality in the group immunized with the mixture of both peptides. The negative control group, immunized only with BSA, showed the highest mortality and analysis of cytokine present in the sera of these animals there was a predominance of proinflammatory cytokines while antiinflammatory cytokines were shown to be almost nonexistent in the serum of these animals. Given these results, it was found that the group with higher survival showed better Th1/Th2 balance. This demonstrates that immunization with epitopes recognized by both B cells and T cells appear to be more effective. Thus, peptide mimetics GRA2 regions of the protein may be likely candidates for the development of vaccines against toxoplasmosis. / Toxoplasma gondii é um protozoário do filo Apicomplexa intracelular obrigatório causador da toxoplasmose, que é especialmente grave em indivíduos imunocomprometidos e em indivíduos que adquiriram a infecção por transmissão congênita. Grânulos densos são organelas deste parasito envolvidas no processo de invasão e replicação do parasito no interior da célula. Dentre as proteínas secretadas pelos grânulos densos, chamadas conjuntamente de GRAs, a GRA 2 é particularmente imunogênica. No presente trabalho, no sentido de estudar a participação dessa proteína na indução da resposta imune adaptativa, foi produzido e caracterizado um anticorpo monoclonal contra GRA2. O parasito tratado com esse anticorpo apresentou menor taxa de replicação em ensaio de proliferação intracelular comparado ao tratamento com anticorpo irrelevante. Os epítopos de ligação da proteína GRA2 ao anticorpo monoclonal foram mapeados por phage display. Por meio de análises de bioinformática, epítopos para células B e T da GRA2 foram preditos e com base nisso e nos resultados do phage display foram escolhidas seqüências de aminoácidos para sintetizar dois peptídeos que foram testados quanto ao potencial vacinal. Foram feitos ensaios de imunização em camundongos C57BL/6 com estes peptídeos sintéticos e os animais foram posteriormente infectados com T. gondii. Foi observada redução significativa na mortalidade no grupo imunizado com a mistura de ambos os peptídeos. O grupo controle negativo, imunizado somente com BSA, apresentou a maior mortalidade e nas análises de produção de citocinas presentes nos soros destes animais observou-se uma predominância de citocinas pró-inflamatórias enquanto as citocinas anti-inflamatórias mostraram-se quase inexistentes no soro destes animais. Tendo em vista esses resultados, percebeu-se que o grupo com maior sobrevivência apresentou melhor balanço Th1/Th2. Isso demonstra que a imunização com epítopos reconhecidos tanto por células B quanto por células T parece ser mais efetiva. Assim, peptídeos miméticos de regiões da proteína GRA2 podem ser prováveis candidatos no desenvolvimento de vacinas anti Toxoplasmose. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Nocomial bloodstream infections (BSI) are most frequent infection in neonatal intensive care units (NICU), increasing considerably the length of stay in the unit and hospital costs besides contributing to poor prognosis, manly in hospitals developing countries settings. The aims of the study were to assess the impact of a care bundle for managment of Central Venous Catheter (CVC) to reduce nosocomial bloodstream infection, and to describe the pathogenesis and molecular epidemiology of infections due to S. epidermidis in a NICU of a Brazilian university hospital. The study included newborns admitted to the unit of Clinical Hospital of Federal University of Uberlândia from October / 2010 to August / 2012. Epidemiological surveillance used to follow BSI was the \"National Healthcare Safety Network\" (NHSN), and an insertion protocol for insetion and maintenance of central venous catheter based on Center for Disease Control (CDC) guidelines was adopted in unit. For the study of the pathogenesis of these infections due to S. epidermidis, cultures of the skin in the insertion site and CVC hub, as well as the nasal and intestinal mucosa of neonates were performed from 48 hrs to 14 days using the invasive procedure, or positive hemoculture, and the tip of the CVC after its withdrawal. The study was approved by the ethics committee in research of the UFU (protocol 464/10). A total of 112 infants developed BSI (20.3%) totaling 178 episodes (32.3%), 139 (25.2%) defined as hospital acquired. Incidence rates of BSI during the sudy research were 16.1 /1000 patient-days and 23.0/1000 CVC-days, but with significant variations during the investigation period, with increasing rates (59.6 / 1000 patient-days) in January 2011 and 2012 when compared with the rates of other months (16.6/1000 patient-days; IRR 3.59; P <0.001) In addition, there was also a significant reduction in the rate of these infections during the relocation of the unit for a provisory site, with rate of 10.3/1000 patient-days vs 26.7 / 1000 patient-days in the previous monitoring period (IRR= 2.59; P=0.007). The adoption the bundle resulted in significant reduction of BSI incidence of 23.4/1000 patient-days during the pre-intervention period to 14.7 / 1000 patient-days (IRR = 1.59; P = 0.04). S. epidermidis was the most frequent etiologic agent, accounting for 38.3% of the episodes of sepsis, followed by Staphylococcus aureus (12.5%). When analyzed by molecular techniques 8 cases of BSI due S. epidermidis 50,0% were related to CVC. The contamination of hub (68.4%), and skin at the insertion site colonization (57.8%), and nasal and intestinal mucoca (73.6%) of neonates was high. All isolates of S. epidermidis of 19 newborns in the study of the pathogenesis were resistant to oxacillin and 63.1% with multidrug resistance profile. S distinct genotypic profiles of MRSE were found by a 80.0% similarity coefficient, with the presence of a dominant clone in the unit (clone A), including 77.8% of the samples, suggesting horizontal transmission through the hands of unit staff. Half of bloodstream infections by S. epidermidis analyzed by molecular techniques were indicative as acquired by intestinal translocation. It is necessary to continue these investigations using a larger population of neonates for a better definition of the origin of S. epidermidis, to enable adoption of effective measures to prevent these infection in newborns. / As infecções de corrente sanguínea de natureza hospitalar são as mais frequentes em unidades de terapia intensiva neonatal (UTIN), aumentando consideravelmente o tempo de permanência na unidade e os custos hospitalares, além de contribuírem para pior prognóstico do paciente, principalmente em hospitais de países em desenvolvimento. Os objetivos do estudo foram: avaliar o impacto de um pacote de medidas relativo aos cuidados e manutenção de Cateter Venoso Central (CVC) na redução das infecções de corrente sanguínea de origem hospitalar (ICSh), e definir a patogênese e epidemiologia molecular dessas infecções causadas por S. epidermidis em uma UTIN de um hospital universitário brasileiro. O estudo incluiu os neonatos admitidos na unidade do Hosiptal de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia, durante o período de outubro/2010 a agosto/2012. A vigilância epidemiológica utilizada para busca ativa de ICSh foi a do National Healthcare Safety Network (NHSN), e um protocolo de inserção e manutenção do cateter venoso baseado nas diretrizes do Center for Disease Control (CDC) foi adotado na unidade. No estudo da patogênese das ICSh por S. epidermidis, foram realizadas culturas da pele no sítio de inserção e do canhão do CVC, assim como das mucosas nasal e intestinal dos neonatos, a partir de 48 h até 14 dias da utilização do procedimento invasivo, ou sua positivação, e da ponta do CVC após sua retirada. O trabalho obteve a aprovação do comitê de ética em pesquisa da UFU (protocolo 464/10). No total, 112 recém-nascidos desenvolveram ICS (20,3%) totalizando 178 episódios (32,3%), com 139 (25,2%) definidos como de natureza hospitalar. As taxas de incidência durante a investigação de ICSh foram de 16,1/1000 pacientes-dia e 23,0/1000 CVC-dia, com variações significativas durante o período de investigação, sendo maiores (59,6/1000 pacientes-dia) nos meses de janeiro de 2011 e 2012 quando comparadas com as taxas dos outros meses (16,6/1000 pacientes-dia, IRR:3,59; P<0,001). Adicionalmente, também houve uma redução significativa nas taxas destas infecções no período de relocação da Unidade para uma unidade provisória, com taxa de 10,3/1000 pacientes-dia vs 26,7/1000 pacientes-dia, no período anterior de vigilância (IRR=2,59; P=0,007). A adoção do protocolo de prevenção e controle dessas infecções, resultou na redução significativa da incidência de ICSh de 23,4/1000 pacientes-dia durante a pré-intervenção para 14,7/1000 pacientes-dia (IRR=1,59; P=0,04). O S. epidermidis foi o agente etiológico mais frequente, respondendo por 38,3% dos episódios de sepse, seguido pelo Staphylococcus aureus (12,5%). Na avaliação por análise molecular das amostras de 8 casos de ICSh por S. epidermidis, 50,0% foram relacionadas ao CVC e a contaminação do canhão (68,4%), colonização da pele no sítio de inserção (57,8%), e mucosas nasal e intestinal (73,6%) dos neonatos foram elevadas. Todos os isolados de S. epidermidis dos 19 neonatos incluídos no estudo da patogênese foram resistentes a oxacilina, com 63,1% mostrando perfil de multirresistência. Foram encontrados 7 perfis genotípicos distintos de MRSE, diferenciados por um coeficiente de similaridade de 80,0%, com a presença de um clone dominante na unidade (clone A), incluindo 77,8% das amostras, sugestivo de transmissão horizontal através das mãos de profissionais da unidade. Na metade das infecções de corrente sanguínea por S. epidermidis analisadas por técnica molecular, os resultados foram sugestivos de sua disseminação através da translocação da mucosa intestinal. A continuidade nessas investigações utilizando população maior de neonatos é necessária para uma melhor definição da origem de S. epidermidis, de forma a possibilitar a adoção de medidas mais efetivas na prevenção destas infecções em neonatos. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

With more than 12 million people affected worldwide, 2 million new cases occurring per year, and the rapid emergence of drug resistance and treatment failure, leishmaniasis is an infectious disease for which research on drug and vaccine development, hostpathogen, and vector-parasite interactions are current international priorities. Polyamines are important regulators of growth and differentiation in a variety of cells, including parasitic protozoa. The inhibition of parasitic biosynthesis by polyamines has been an interesting chemotherapeutic approach in the design of novel antiparasitic drugs against mainly leishmaniasis. In this work we evaluate the in vitro effect of N-dodecyl- 1,2-ethanediamine (GUT) on morphology and replication of Leishmania. A concentration of 0.31 &#956;g/ml of this compound was highly effective against Leishmania amazonensis, Leishmania braziliensis and Leishmania chagasi and no toxicity against mammalian cell lines as well HFF, THP-1, J774.G8 or murine peritoneal cells was observed. So, there was inhibition of multiplication of the L. amazonensis, L. braziliensis and L. chagasi amastigotes into inflammatory peritoneal cells in presence of 1 &#956;g/ml and 0.5 &#956;g/ml of this compound. Promastigotes form of L. amazoneneis it was with intracellular disorganization by transmission electron microscope observation following 1 to 24 h of treatment with GUT. Thus, N-dodecyl-1,2-ethanediamine shown be a promising drug against Leishmania. / Leishmaniose é uma doença infecciosa que afeta mais de 12 milhões de pessoas em todo mundo. Com mais de 2 milhões de novos casos por ano e falhas no tratamento há o surgimento de resistência às drogas. Como prioridades são realizadas pesquisas relacionadas ao ciclo de vida do parasito, interação com o hospedeiro, desenvolvimento de vacinas e novas drogas. A inibição da biossíntese do parasito por poliaminas tem sido uma importante abordagem quimioterápica no desenvolvimento de novas drogas contra leishmaniose. As poliaminas são importantes reguladores do crescimento e diferenciação em vários tipos celulares incluindo protozoários. Nesse trabalho avaliamos in vitro o efeito do composto N-dodecil-1,2- etanodiamina (GUT) na susceptibilidade de diferentes espécies de Leishmania sp. A concentração de 0,31 &#956;g/ml foi altamente eficiente contra Leishmania amazonensis, Leishmania braziliensis e Leishmania chagasi, entretanto em diferentes células de mamíferos (THP-1, HFF, macrófagos murinos J774.G8 e macrófagos peritoneais de camundongos) a mesma citoxicidade não foi observada. A inibição nos índices de multiplicação e infecção de amastigotas de L. amazonensis, L. braziliensis e L. chagasi em macrófagos peritoneais foi observada na presença das concentrações de 1Ug/ml e 0,5Ug/ml de (GUT). Formas promastigotas de L. amazonensis mostraram diversas alterações ultraestruturais por microscopia eletrônica de transmissão causada pelo tratamento com o composto Ndodecil- 1,2- etanodiamina. O composto N-dodecil-1,2- etanodiamina mostrou ser um novo composto promissor contra a leishmaniose. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Specific polyclonal antibodies obtained from egg yolk of the immunized chicken are named immunoglobulin Y (IgY). Although functionally related to mammal immunoglobulin G (IgG), IgY presents advantages, as follows: (i) elevated purified amounts of antibodies from one egg; (ii) the reduced of immunized animal number (iii) no interference with rheumatoid factor or mammal Complement proteins; (iv) binds only to chicken specific Fc fragment receptor. Polyclonal IgY antibodies could be employed as a primary or secondary reagent to investigate pathogen and host relationship, proteomic studies or infectious microorganisms biology. Toxoplasma gondii is a worldwide intracellular parasite which infects warm-blood hosts, including human. Toxoplasmosis causes fetal disorders in human and domestic animals. Tachyzoites and bradyzoites of T. gondii are stages related to host cell parasitism and also toxoplasmosis pathogeny. The specific IgG antibodies of mice are used to investigate virulence factors associated to T. gondii and evaluate mechanisms correlated to host immune response modulation by parasite antigens. However reduced amounts of specific IgG antibodies are obtained from a bled animal. Chickens and mice could have distinct antigenic proteins recognition profile even though using identical immunization protocols, probably this a consequence of phylogenetic distance between these two species. Specific polyclonal IgY were obtained from T. gondii soluble total antigens (STAg) immunized chickens at average of 4 mg/mL of pure yolk by a low cost and easy method. High avidity anti-STAg polyclonal IgY recognized distinct weight molecular antigenic proteins at second booster, and these antibodies were applied in standardized immunoassays with T. gondii. First, tissue cysts, parasitophorus vacuoles and also extracellular tachyzoites were detected in sections of chronically infected mice brain by a IgY-immunohistochemistry assay, complementally tachyzoites also were identified in a monolayer of infected HeLa cells by a IgY-immunocytochemistry assay, both methods used a anti-IgY FITC-conjugate secondary antibody. Additionally, STAg proteins two-dimensionally resolved were proved against T. gondii purified specific IgY and mice antiserum by a Western blot assay, the results demonstrated that egg yolk chicken antibodies identified acid antigens better than mice antisera. Finally, incubation of T. gondii tachyzoites with polyclonal anti-STAg IgY reduced intracellular parasitism in HeLa cells culture. In conclusion, polyclonal anti-STAg IgY antibodies present efficacy for application in immunoassays which investigate antigenic proteins candidates to diagnostic or vaccines and T. gondii biology. / Anticorpos policlonais específicos podem ser obtidos em grandes quantidades a partir da gema do ovo de galinhas imunizadas, denominados anticorpos IgY. Embora semelhantes funcionalmente aos anticorpos IgG de mamíferos, os anticorpos IgY apresentam vantagens: (i) extração sem estresse para o animal; (ii) menor número de animais utilizados na produção; (iii) grandes concentrações de anticorpos por gema; (iii) não sofre interferência do fator reumatóide e de proteínas do sistema complemento de mamíferos; (iv) interage apenas com receptores para Fc de galinha. Os anticorpos IgY são utilizados em estudos da relação patógeno versus hospedeiro, proteômica e biologia de agentes infecciosos. Toxoplasma gondii é um parasito amplamente distribuído e com grande número de hospedeiros, incluindo o homem, e pode ocasionar lesões em fetos humanos e de animais domésticos. A relação T. gondii versus hospedeiros, o papel dos antígenos do parasito nos processos de infecção e manutenção do parasitismo intracelular, podem ser investigados pela incubação do parasito com anticorpos específicos obtidos de mamíferos. Os anticorpos de mamíferos são obtidos em concentrações limitadas e por meio de procedimentos dolorosos. Neste estudo, galinhas foram imunizadas com antígenos solúveis de T. gondii da cepa RH. Foram extraídos, em média, 4 mg de IgY/ mL de gema de ovo. Detectaram-se anticorpos IgY anti-STAg de alta avidez após o segundo booster, também reconheceram alvos antigênicos de distintos pesos moleculares. Os anticorpos IgY anti-STAg detectaram o parasito intracelular em cultivos de células HeLa e também em cortes histológicos de tecido fixado. Diferente dos anticorpos IgG de camundongos, nos ensaios Western blot 1D e 2D, os anticorpos IgY reconheceram proteínas antigênicas de pesos moleculares e pontos isoelétricos distintos, respectivamente. Em ensaio de proliferação do parasito, observou-se que a incubação dos taquizoítos de T. gondii com os anticorpos IgY específicos reduziu parcialmente o parasitismo intracelular. Concluiu-se que anticorpos IgY policlonais são ferramentas eficazes para estudos da biologia de T. gondii e podem auxiliar na pesquisa de alvos antigênicos para utilização em diagnóstico e produção de vacinas. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Aedes aegypti (L.), the vector of urban yellow fever and dengue, is controlled in Brazil mainly by the use of the organophosphate Temephos. Resistance to Temephos has been described in Brazil and in other countries as well. Insect Growth Regulators (IGRs), Diflubenzuron (chitin synthesis inhibitor) and Methoprene (juvenile hormone analog), are insecticides that affect the development of insects by affecting adult emergence. A. aegypti susceptibility to Diflubenzuron and Methoprene was investigated in Uberlândia, by studying the 50% and 95% lethal concentrations of both IGRs for the A. aegypti population (LC50 and LC95) and their action on the immature stages. In addition, other aspects, such as IGRs residual activity and the effect of sublethal dosages upon adult symmetry, size, weight, fecundity, fertility and longevity were investigated. The experiments were done in laboratory conditions using individuals from a colony originated from eggs collected in the urban area of Uberlândia. The number of replicates was six in all assays. The confidence level adopted in all the statistical analysis was 95%. The LC50 and LC95 of Diflubenzuron and Methoprene were 5.19 and 12.24 ppb; 19.95 and 72.08 ppb, respectively. Diflubenzuron was effective in all larvae instars and Methoprene caused greater mortality when the mosquito was exposed from the early fourth instar larvae on. Concentrations of commercial IGRs presented greater residual activity than did the technical formulations. Increased levels of fluctuating asymmetry were observed in the mosquitoes exposed to Diflubenzuron. Females treated with Methoprene showed smaller weight than did the untreated females. On the other hand, the longevity of the mosquito was reduced in the groups treated with both IGRs. The LC50 and LC95 of Diflubenzuron obtained here are compatible with the values observed for this IGR in other studies, while the LCs of Methoprene were higher than those generally reported in the literature. However, the results obtained here indicate that Diflubenzuron and Methoprene are potential tools to control this mosquito in the region of Uberlândia. / Aedes aegypti (L.), vetor da febre amarela urbana e da dengue, é controlado no Brasil utilizando-se principalmente o organofosforado Temephos. Tem-se registrado a ocorrência de resistência deste mosquito ao Temephos aqui e em outros países. Os Reguladores de Crescimento de Insetos (IGRs) Diflubenzuron (inibidor de síntese de quitina ) e Methoprene (análogo ao hormônio juvenil) são um grupo de inseticidas que afetam o desenvolvimento do inseto. A susceptibilidade de A. aegypti a estes IGRs foi investigada em Uberlândia a partir da obtenção das concentrações letais para 50% e 95% da população de mosquitos (CL50 e CL95) e sua atuação nas formas imaturas deste mosquito. Também foram investigados outros aspectos da susceptibilidade tais como, atividade residual destes IGRs e efeitos de dosagens subletais sobre a simetria, tamanho, peso, fecundidade, fertilidade e longevidade de adultos. Os experimentos foram realizados em laboratório com indivíduos de uma colônia originária de ovos colhidos na região urbana de Uberlândia. O número de réplicas dos grupos tratados e controles se manteve em seis em todos os experimentos. Foi adotado o nível de confiança de 95% em todas as análises estatísticas. As CL50 e CL95 obtidas para Diflubenzuron e Methoprene foram: 5,19 e 12,24 ppb; 19,95 e 72,08 ppb, respectivamente. Diflubenzuron mostrou-se efetivo em todos os estádios larvais, enquanto Methoprene causou maior mortalidade quando o mosquito foi exposto a partir do início do quarto estádio larval. As formulações comerciais dos IGRs apresentaram maior atividade residual que suas respectivas formulações técnicas. Níveis aumentados de assimetria flutuante foram observados nos mosquitos expostos ao Diflubenzuron. Fêmeas tratadas com Methoprene apresentaram menor peso que as não tratadas. Por outro lado, a longevidade do mosquito foi reduzida nos grupos tratados com ambos os produtos. Os valores das CL50 e CL95 registrados para Diflubenzuron estão dentro do intervalo de variação observados na literatura para este IGR. Já os valores registrados para Methoprene estão acima dos observados em outros locais, indicando uma relativa tolerância natural da população de A. aegypti de Uberlândia a este IGR. No entanto, os resultados aqui obtidos indicam Diflubenzuron e Methoprene como alternativas para o controle do vetor da dengue na região de Uberlândia. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-11-26T13:02:51Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Douglas Oliveira Andrade - 2015.pdf: 6446684 bytes, checksum: a1e954faf14aff161dbc0af5f7db0cbb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-11-26T13:38:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Douglas Oliveira Andrade - 2015.pdf: 6446684 bytes, checksum: a1e954faf14aff161dbc0af5f7db0cbb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-26T13:38:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Douglas Oliveira Andrade - 2015.pdf: 6446684 bytes, checksum: a1e954faf14aff161dbc0af5f7db0cbb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-09-18 / Leishmaniasis are a group of endemic diseases in 98 countries, with an estimated incidence up to 1.6 million cases per year (0.7-1.2 million of cutaneous leishmaniasis and 0.2 to 0.4 million visceral leishmaniasis). The criteria for the cure of american tegumentary leishmaniasis adopted nowadays is the complete healing of the lesion. IgG3 subclass anti-leishmania antibodies decrease faster than the total IgG antibodies in cured patients. This study was aimed to identify differences in the recognition pattern of L. (V.) braziliensis protein by total IgG or IgG3 antibodies obtained from cutaneous leishmaniasis infected patients’ serum before and after treatment. Sera of 15 patients infected with L. braziliensis attended at the Tropical Diseases Hospital Anuar Auadi were tested by ELISA against crude extracts of L. braziliensis. When all patients were analyzed, it was observed that anti-leishmania IgG3 absorbance levels measured by ELISA were similar to the controls levels at 6 month. The absorbance levels of total antibodies in control and infected patients reached similarity only at 12/18 months. After split patients into group A: healing of the lesion before one month and B: healing of the lesion after one month, it was observed that absorbance levels in ELISA for IgG3 in group A was similar to the controls levels at the time of diagnosis. It was also observed, by Western Blotting, that the IgG3 reactivity of IgG3 to 49 kDa protein waspresent mainly for group B patients. The 28 kDa protein showed IgG3 reactivity mainly in group B the healing os lesions and the 14 kDa protein showed IgG3 reactivity in some controls our data suggest that the use of 49 kDa protein in ELISA may be useful for diagnosis and following up of patients and the 14kDa protein may be important in false-positive results. / As leishmanioses constituem um grupo de doenças endêmicas em 98 países, com uma incidência estimada de até 1,6 milhões de casos por ano (0,7-1,2 milhão de leishmaniose tegumentar e 0,2 a0,4 milhão de leishmaniose visceral). O critério de cura da leishmaniose tegumentar americana adotado hoje é a cura completa da lesão. Anticorpos anti-Leishmania da subclasse IgG3 decaem mais rapidamente que os anticorpos IgG totais em pacientes curados. O presente trabalho tem objetivo de identificar diferenças no reconhecimento de proteínas de L. (V.) braziliensis por anticorpos IgG totais ou IgG3 obtidos de soro de pacientes com leishmaniose tegumentar americana antes e após o tratamento. Soros de 15 pacientes infectados com L. braziliensis atendidos no Hospital de Doenças Tropicais Anuar Auad foram testados por ELISA contra extratos brutos de L. braziliensis. Quando analisados todos os pacientes, foi possível observar que as absorbâncias no ELISA para a subclasse IgG3 anti-Leishmania ficou semelhante aos controles com 6 meses, o que só aconteceu para anticorpos totais com 12/18 meses. Com a separação dos pacientes em A: pacientes com cura clínica antes de um mês e grupo B: pacientes com cura clínica após um mês, observou-se que as absorbâncias no ELISA para IgG3 no grupo A era semelhante à dos controles no momento do diagnóstico. Identificamos, pelo Western Blotting, que a reatividade à proteína de 49 kDa pela IgG3 de pacientes era presente principalmente no grupo B. A proteína de 28 kDa reagiu com IgG3 de pacientes do grupo B antes da cura clínica e a proteína de 14 kDa reagiu com IgG3 de três soros controles. Nossos dados sugerem que a proteína de 49 kDa pode ser usada em ELISA para o diagnóstico e acompanhamento dos pacientes portadores de LTA e que a proteína de 14kDa pode ser responsável por reações falso positivas.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_mariana_loner_coutinho.pdf: 1659670 bytes, checksum: 1464350190153976b2198567c3e59b0c (MD5) Previous issue date: 2011-12-20 / Leptospira interrogans is the usual causative agent of leptospirosis, a zoonosis that is endemic in tropical countries like Brazil and India. The available vaccines are bacterin-based from the more prevalent serovars to the vaccinated specie, but these vaccines do not develop long-lasting immunity or cross-protection. Subunit vaccines with recombinant proteins have the potential to generate an efficient leptospirosis vaccine. LigA is a protein that has adhesin function to the host and has been reported as protective against lethal challenge of Leptospira interrogans. The first part of this document defines a three-segment protective region of LigA constituted as domains 11 and 12, added of domains 10 or 13. The vaccine effect was evaluated based on pathology, humoral immune response and kidney leptospiral burden. The second part of this work aims to point out the importance of the correct understanding of the Leptospira interrogans infection kinectics to elucidate how the organism reacts in the first phase of the leptospiral infection. This evaluation is accessed by leptospiral load quantification in key-organs such as kidneys, liver, lungs and spleen, and by the evolution of the disease by hemmogram and biochemical analysis. / A Leptospira interrogans é o agente causador da leptospirose mais comum, uma zoonose que é endêmica em países tropicais como Brasil e Índia. As vacinas hoje existentes se baseiam em bacterinas de sorovares mais comumente encontrados na espécie a ser vacinada, mas essas vacinas não desenvolvem uma imunidade duradoura ou de proteção cruzada. As vacinas de subunidade com proteínas recombinantes possuem potencial para produção de uma vacina eficiente contra a leptospirose uma vez que podem oferecer proteção cruzada. LigA é uma proteína que possui função de adesão ao tecido do hospedeiro e já foi relatada como protetora contra o desafio letal por Leptospira interrogans. A primeira parte deste documento versa sobre a definição de uma região protetora de três segmentos constituída pelos domínios 11 e 12, acrescidos do domínio 10 ou 13. O efeito da vacina foi avaliado com base na patologia, resposta imune humoral e quantificação da carga microbiana nos rins. A segunda parte deste trabalho descreve a cinética da infecção por Leptospira interrogans em hamster, de forma a apontar como o organismo reage durante a primeira fase da infecção leptospírica. Essa avaliação foi realizada por meio de quantificação da carga microbiana em órgãos como rins, fígado, pulmões e baço, além de acompanhamento da evolução da doença por intermédio de hemograma e análises bioquímicas. Os dados analisados mostram que a maior carga bacteriana é observada após 6 dias de infecção em ambas as rotas.