Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-05-11T20:41:59Z No. of bitstreams: 2 Tese - Adeliane Castro da Costa - 2016.pdf: 6997901 bytes, checksum: a6d453a5d3acafaed991fe945aa59330 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-12T10:41:03Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Adeliane Castro da Costa - 2016.pdf: 6997901 bytes, checksum: a6d453a5d3acafaed991fe945aa59330 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-12T10:41:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Adeliane Castro da Costa - 2016.pdf: 6997901 bytes, checksum: a6d453a5d3acafaed991fe945aa59330 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / In the first chapter of this thesis we demonstrate, in a review article, some of the successful strategies employed in the construction of Bacillus Calmette-Guérin (BCG) vaccines, among others being: overexpression of promising Mycobacterium tuberculosis (Mtb) immunodominant antigens already expressed by BCG introduction of Mtb immunodominant antigens not expressed by BCG, such as antigens in the regions of difference (RD) 1 thru 16; combination of overexpression and introduction of novel antigens to BCG; BCG modification to skew immune response toward TCD8+, as for example recombinant BCG (rBCG) expressing cytokines. In the second chapter, we demonstrate that the recombinant fusion protein CMX is capable of aggregating important immunogenic properties to vaccine vectors, by inducing an effective response for the control of Mtb infection in the mouse tuberculosis infection model. It is hypothesized that the introduction of the rCMX protein in the BCG vaccine could add immunological properties that are absent in BCG, thus leading to the induction of important cell populations for the control of Mtb infection. Our results demonstrate that the introduction of the rCMX in the BCG vaccine, resulting the recombinant BCG vaccine (rBCG-CMX) was an important factor for the observed Th1 and Th17 responses, as well as polyfunctional cells, that could be responsible for the reduced inflammatory lesions seen in the lungs of Mtb infected BALB/c mice, significantly reducing the bacillary load in comparison to in comparison to mice immunized with BCG Moreau vaccine. Lastly, in the third chapter of this thesis we propose that rCMX protein could be responsible for modulating the BCG vaccine to activate a more adequate and protective innate immunity. Our results show that the rBCG-CMX vaccine induces the activation of alveolar macrophages by means of expression of activation-associated molecules CD86 and CD206. The increase in the expression of those molecules are accompanied by the production of TGF-β e IL-1α which in turn could be responsible for the decreased necrosis and higher apoptosis induction promoted by rBCG-CMX vaccination. This phenomenon could be providing a higher cellular survival rate of the recombinant vaccine, leading to a better processing and presentation by MHC-II. As rCMX was shown to induce the production of IL-1α, IL-6 e TGF-β by a pathway that seems to involve the participation of TLR-4, we hypothesize that this recombinant protein could be modulating the BCG vaccine to induce a more appropriate and protectiveresponse for Mtb infection. / A Tuberculose (Tb) é uma doença infecto contagiosa, causada pelo Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Apesar de ser uma doença antiga, a Tb continua sendo um dos principais problemas de saúde pública. A Organização Mundial de Saúde acredita que cerca de um terço da população mundial está infectado com Mtb, gerando milhões de mortes por ano. Uma das medidas que podem melhorar a prevenção e bloquear a transmissão do Mtb é o desenvolvimento de novas vacinas que previnam o estabelecimento e a progressão da TB em humanos. Embora exista a vacina BCG que é eficiente contra formas graves de TB na infância, existe a necessidade do desenvolvimento de novas vacinas para controlar a disseminação da TB, que sejam mais eficientes e seguras que a BCG. Com este intuito, o objetivo deste trabalho é avaliar a proteção e a modulação da resposta imune induzida por BCG recombinante expressando espítopos imunodominantes Ag85C, MPT-51 e HspX do Mycobacterium tuberculosis induzida em modelo murino. Nossos resultados demonstram que a inserção da proteína CMX na vacina BCG recombinante (rBCG-CMX) foi um fator determinante para indução de resposta Th1 e Th17, além de células polifuncionais que possivelmente foram responsáveis pela redução das lesões inflamatórias no pulmão de camundongos BALB/c, reduzindo significantemente a carga bacilar em comparação com imunização com BCG Moreau. Além disso mostramos neste trabalho que a proteína rCMX é capaz de modular a vacina BCG e ativar a imunidade inata para a indução de uma melhor resposta protetora. Nossos resultados demonstram que a vacina rBCG-CMX induz ativação de macrófagos pulmonares por meio da expressão de moléculas de ativação CD86 e CD206. O aumento da expressão dessas moléculas é acompanhada por produção de TGF-β e IL-1α, sendo prováveis responsáveis pela menor indução de necrose e maior indução de apoptose pela vacina rBCG-CMX. Este fenômeno pode estar proporcionando a esta vacina maior capacidade de sobrevivência celular, colaborando para um melhor processamento e apresentação por MHC-II. Devido a proteína rCMX ser capaz de induzir produção de IL-1α, IL-6 e TGF-β por uma via que parece haver a participação de TLR-4. In vivo demonstramos que a vacina rBCG-CMX depende de TLR-2 e TLR-4 para induzir respostas Th1 e Th17, após imunização de camundongos com esta vacina. Neste trabalho hipotetizamos que a proteína CMX pode modular a resposta imune inata e adaptativa, por uma via em que há a participação do TLR-4. Esta pode ser a via pela qual a CMX, quando expressa por BCG favorece uma boa resposta protetora em animais desafiados com Mtb.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-17T20:24:56Z No. of bitstreams: 2 Tese - Hélio Galdino Júnior - 2013.pdf: 3450540 bytes, checksum: 01adc52cca765449b5eed357351fb5ee (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-18T12:50:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Hélio Galdino Júnior - 2013.pdf: 3450540 bytes, checksum: 01adc52cca765449b5eed357351fb5ee (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-18T12:50:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Hélio Galdino Júnior - 2013.pdf: 3450540 bytes, checksum: 01adc52cca765449b5eed357351fb5ee (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-07-26 / American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is a disease caused by protozoa Leishmania. In Brazil, the most prevalent species is L. (Viannia) braziliensis. Several cytokines and receptors are involved in immunopathogenesis of ATL, however, the role of interleukin 32 (IL-32) was not investigated in this disease. Besides, toll-like receptors (TLR) were poorly evaluated in Leishmania infection, especially when it is caused by L. (V.) braziliensis. The aim of the present study was to evaluate IL-32, TNF and IL-10 expression in ATL lesions; the induction of IL-32 by L. (V.) braziliensis amastigotes in human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) cultures as well as the involvement of TLR4 in monocyte/macrophage response to L. (V.) brazilienis amastigotes. Biopsies fragments from cutaneous and mucosal lesion and healthy tissues were used to investigate the subgenus of the parasites by PCR-RFLP assay; expression of IL-32, TNF and IL-10 was assayed by immunohistochemistry and expression of IL-32 isoforms     , TNF and IL-10 was analysed by qRT-PCR. The PBMC were cultured with L. (V.) braziliensis amastigotes in the absence or presence of IFN and IL-32 induction was assayed by qRT-PCR; and TNF and IL-10, by ELISA. TLR4 was neutralized by monoclonal antibodies and lipopolysaccharide (LPS) was used as TLR4 agonist. The expression of TLR4 in monocyte/macrophages was evaluated by flow cytometry. Thirty five patients were evaluated, 23 with cutaneous leishmaniasis (CL) and 12 with mucosal leihsmaniasis (ML). All parasite positive samples contained L. (Viannia) sp. The expression of IL-32 (protein and mRNA) was similar in CL and ML lesions but was higher than in health tissues. Only IL-32 was detected. The proteins TNF and IL-10 were detected in similar levels in CL and ML lesions, but TNF mRNA was present in higher levels in ML (4.069x) than in CL lesions (141 x, p < 0.05). L. (V.) braziliensis amastigotes induced IL-32, TNF and IL-10 in IFN pre-treated PBMC. The production of TNF and IL-10 was TLR4 dependent and treatment of PBMC with LPS further increased the production of TNF induced by amastigotes (p < 0.05). However, LPS did not altere the IL-10 production. Treatment with IFN enhanced the percentage of TLR4+ monocyte/macrophage (p < 0.05), which was decreased following incubation with amastigotes (p = 0.06). The results showed that IL-32 is produced during L. (Viannia) infection and TLR4 mediates L. (V.) braziliensis amastigote-induced TNF and IL-10 production in human PBMC. Moreover, the data suggest that amastigotes can lead to TLR4 internalization what can allow parasite to evade of innate immune response. This study indicates that IL-32 and TLR4 are important players in human infection caused by L. (Viannia), especially L. (V.) braziliensis. Whether TLR4 is also important to IL-32 production by human monocytes/macrophages deserves further investigation. / A leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecto-parasitária, causada, no Brasil, principalmente pela espécie Leishmania (Viannia) braziliensis. Na imunopatogenia da LTA participam várias citocinas e receptores. A interleucina 32 (IL-32) é uma citocina pro-inflamatória, cuja participação na LTA ainda não foi investigada. O papel dos receptores similares a Toll (TLR) na LTA tem sido pouco investigado, especialmente considerando infecção por L. (V.) braziliensis. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão da IL-32, do TNF e da IL-10 nas lesões de pacientes com LTA, a indução de IL-32 por formas amastigotas de L. (V.) braziliensis em células mononucleares (CMN) humanas, bem como avaliar a participação do TLR4 na infecção de monócitos/macrófagos humanos com formas amastigotas de L. (V.) brazilienis. Fragmentos de lesões cutâneas ou mucosas de pacientes com LTA e tecidos sadios foram obtidos, sendo usados para a determinação do subgênero de Leishmania, usando a PCR-RFLP; para análise de IL-32, TNF e IL-10 por imunoistoquímica; e para análise da expressão das isoformas     da IL-32, do TNF e da IL-10, por qRT-PCR. As CMN foram cultivadas com amastigotas de L. (V.) braziliensis, na ausência ou presença de IFN e a indução de IL-32 foi avaliada por qRT-PCR e TNF e IL-10, por ELISA. Para neutralização de TLR4 foram usados anticorpos monoclonais e lipopolissacarídeo (LPS), como agonista de TLR4. A expressão de TLR4 nos monócitos/macrófagos presentes nas CMN foi avaliada por citometria de fluxo. Foram analisados 35 pacientes sendo 23 leishmaniose cutânea (LC) e 12 com leishmaniose mucosa (LM). Todas as amostras PCR positivas continham parasitos pertencentes ao subgênero Viannia. Nas lesões de pacientes com LC e LM foi detectada uma maior expressão tanto da proteína quanto do mRNA da IL-32 do que nos tecidos controles, porém níveis similares foram encontrados nas duas formas clínicas. Somente a isoforma IL-32 foi detectada. As proteínas TNF e a IL-10 foram detectadas nas lesões, em níveis similares na LC e na LM, porém, o mRNA do TNF estava em níveis mais elevados nas lesões de LM (4.069 vezes) do que nas lesões de LC (141 vezes, p < 0,05). As formas amastigotas de L. (V.) braziliensis indiziram a produção de IL-32 TNF e de IL-10 nas CMN pré-tratadas com IFN. A produção de TNF e IL-10 foi dependente de TLR4 e o tratamento das CMN com LPS aumentou a produção do TNF induzido pelas amastigotas (p < 0,05), mas não alterou a produção da IL-10. A incubação com IFN aumentou significantemente a porcentagem de monócitos/macrófagos TLR4+ (p < 0,05), a qual foi diminuída pelas formas amastigotas (p = 0,06). Os resultados mostram que a IL-32 é produzida durante a infecção humana causada por L. (Viannia) e evidenciam a participação de TLR4 na indução de TNF e IL-10 em CMN humanas por formas amastigotas de L. (V.) braziliensis. Ainda, os dados sugerem que as formas amastigotas causam a internalização dos TLR4, o que pode ser um mecanismo de evasão da resposta imune. Portanto, a IL-32 e o TLR4 parecem importantes componentes na infecção humana causada por L. (Viannia), especialmente L. (V.) braziliensis, podendo contribuir para a imunopatogenia ou para o controle da infecção.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2016-12-14T16:06:41Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Grazzielle Guimarães de Matos - 2016.pdf: 6175984 bytes, checksum: 49ee98e2341033b338755369c46b165a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-12-15T17:30:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Grazzielle Guimarães de Matos - 2016.pdf: 6175984 bytes, checksum: 49ee98e2341033b338755369c46b165a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-15T17:30:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Grazzielle Guimarães de Matos - 2016.pdf: 6175984 bytes, checksum: 49ee98e2341033b338755369c46b165a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In Brazil, L. (V.) braziliensis is specie responsible for many cases of American Tegumentary Leishmaniasis (ETL). To effective vaccine development, formulations contained immunogenic antigens associated with adjuvants that induce a T helpe 1 (Th1) immune response are been investigated, among of antigen have the “Thiol Specific Antioxidant” (rTSA), “Stress Inducible protein 1” (rSTI) and “Leishmania elongation initiation fator” (rLeIF) of L. major, which have been immunogenic and promising. The genes that corresponding to these antigens in L. (V.) braziliensis were sequenced and recombinants proteins were obtained and used in this study. Works that used BCG and β-glucan showed that these could provide protection against not related pathogens. The present study had as aim to evaluate the immunogenicity and the effectiveness of the vaccine using the rTSA, rSTI and rLeIF proteins (Triple), associated or not with β-glucan, with or without BCG stimulus. BALB/c mice were divided in 2 groups, one of the groups was stimulated with BCG and the other not. Posteriorly, the animals were divided in subgroups and vaccinated with triple, associated or not with β-glucan. Mice’s serum were collected to search of cytokines and antibodies by immunoenzymatic technique. Lymph node and spleen’s cells were cultivated and cytokines searched in supernatants. BCG stimulation induced a greater IFN-γ production. The vaccinated mice with triple produced IgG total, IgG1 and IgG2a specifics to L. (V.) braziliensis. BCG stimulation induced a high IgG total and IgG2a production in animals that received the triple without β-glucan. To evaluate the protection provided by vaccine, the immunized animals were infected with L. (V.) braziliensis and paw them measured along of 8 weeks. The subgroup don’t stimulated with BCG and vaccinated with triple, associated with β-glucan, has developed bigger lesions that the others subgroups. The subgroups that received only BCG stimulation or BCG stimulation and vaccine with triple plus β-glucan presented bigger lesions that animal don’t stimulated or vaccinated. After infection by L. (V.) braziliensis, (i) the animals stimulated with BCG and vaccinated with triple presents more IgG specific to L. (V.) braziliensis; (ii) the immunizations with triple maintained IFN-γ levels elevated; (iii) all animals presented lower IL-17 levels in serum; (iv) the subgroups produced similar IFN-γ levels, but with a high IL-17 production in subgroup vaccinated with triple plus β-glucan, don’t BCG stimulated, in spleen; (v) the animals that received only BCG produced more IFN-γ and IL-17 in lymph node. In conclusion: the immunizations with triple were immunogenic; the immunization scheme containing triple plus β- glucan, without BCG stimulation, provided partial protection against L. (V.) braziliensis infection; BCG stimulations induced biggest lesions in subgroup that received only saline or triple plus β-glucan; the vaccination scheme containing triple maintained high IFN-γ production after L. (V.) braziliensis infection; in infection site, the BCG stimulation induced a Th1/Th17 heterologous response. / No Brasil, L. (V.) braziliensis é a espécie responsável pela maioria dos casos de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). Para o desenvolvimento de uma vacina eficaz, formulações contendo antígenos imunogênicos, associados com adjuvantes, indutores de uma resposta imune do perfil T auxiliar 1 (Th1), estão sendo investigados, entre eles têm-se o “Thiol Specific Antioxidant” (rTSA), a “Stress Inducible protein 1” (rSTI) e o “Leishmania elongation initiation fator” (rLeIF) de L. major, que se mostraram imunogênicos e promissores. Os genes destas proteínas, de L. (V.) braziliensis, foram sequenciados e as proteínas recombinantes obtidas e utilizadas neste estudo. Trabalhos utilizando BCG e β-glucana mostraram a capacidade destes em fornecer proteção inespecífica. O presente estudo teve como objetivo avaliar a imunogenicidade e a eficácia da vacina com as proteínas rTSA, rSTI e Leif (Tríplice) de L. (V.) braziliensis associadas com o adjuvante β-glucana, com ou sem estímulo prévio com BCG. Camundongos BALB/c foram divididos em 2 grupos, um deles inoculado com BCG e o outro não. Posteriormente, os animais foram divididos em subgrupos e vacinados com tríplice, associadas ou não com β-glucana. Foram coletados os soros dos animais para dosagem de citocinas e anticorpos pela técnica imunoenzimática. Células do baço e linfonodo drenante foram cultivadas para dosagem de citocinas no sobrenadante. O estimulo com BCG induziu uma maior produção de IFN-γ. Os camundongos vacinados com a tríplice produziram anticorpos IgG total, IgG1 e IgG2a específicos para L. (V.) braziliensis. O estimulo com BCG induziu uma maior produção de anticorpos IgG total e IgG2a, nos animais vacinados com a tríplice sem β-glucana. Para avaliar a proteção fornecida pela vacina, os animais imunizados foram infectados com L. (V.) braziliensis e as patas mensuradas durante 8 semanas. O subgrupo, não estimulado com BCG e vacinado com a tríplice, associada com β-glucana, desenvolveu lesões menores que os demais subgrupos (p<0,05). Os subgrupos que receberam apenas BCG ou foram vacinados com a tríplice mais β-glucana apresentaram lesões maiores que os animais não estimulados e imunizados (p<0,05). Após a infecção por L. (V.) braziliensis, (i) os animais estimulados e vacinados com a tríplice apresentaram níveis elevados de IgG específicos para L. (V.) braziliensis; (ii) as imunizações com a tríplice mantiveram os níveis de IFN-γ aumentados (p<0,05); (iii) todos os animais apresentaram menores concentrações de IL-17, no soro; (iv) houve detecção similar de IFN-γ entre os subgrupos, mas com uma maior produção de IL-17 no subgrupo vacinado com a tríplice mais β-glucana, não estimulados com BCG, no baço (p<0,05); (v) os animais que receberam apenas BCG produziram mais IFN-γ e IL-17, no linfonodo drenante. Conclui-se que: as imunizações com tríplice foram imunogênicas; o esquema de imunização com a tríplice mais β-glucana, sem estimulo com BCG, forneceu proteção parcial contra a infecção por L. (V.) braziliensis; o estimulo com BCG induziu lesões maiores nos subgrupos que receberam salina ou a tríplice mais β- glucana; o esquema de vacinação com a tríplice manteve a produção de IFN-γ elevada após a infecção por L. (V.) braziliensis; no sitio de infecção, o estimulo com a BCG levou a uma resposta heteróloga Th1/Th17.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-19T13:21:42Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Abadio de Oliveira da Costa Júnior - 2014.pdf: 3197815 bytes, checksum: d02da71e811f6bb81bc8437632974703 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-19T13:22:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Abadio de Oliveira da Costa Júnior - 2014.pdf: 3197815 bytes, checksum: d02da71e811f6bb81bc8437632974703 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-19T13:22:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Abadio de Oliveira da Costa Júnior - 2014.pdf: 3197815 bytes, checksum: d02da71e811f6bb81bc8437632974703 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-12-05 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Tuberculosis is a global public health problem and despite the recent reduction in the incidence of new cases and deaths worldwide, there are still developing countries where these indices are not so optimistic. The only vaccine recommended to TB by WHO is BCG that, although effective against severe forms of childhood TB, has a questionable efficacy against pulmonary tuberculosis in adults. In the pursue for a molecular improvement for BCG and thus enable the development of a widely used method of prophylaxis, a recombinant BCG was produced by electroporation of BCG Moreau, using three different recombinant plasmid constructions (pLA71, pLA73 and pMIP12), all of them containing the fusion protein CMX coding sequence. However, only the pLA71 transformant expressed the CMX fusion protein in the western blot. In order to evaluate the profile of memory B cells, the specific antibodies against CMX and the efficacy of the vaccine, BALB/c mice were immunized with a single dose of BCG or rBCG-CMX or PBS (control). Serum samples were collected from all animals 30, 60 and 90 days after the immunization and the induction of memory B cells was assessed by flow citometry of the splenocytes cell suspensions. Ninety days after the last immunization, animals were challenged with Mtb H37Rv by the intravenous route and forty five days later, lungs were harvested to analyze the bacterial load and the level of inflammation induced by the infection in immunized mice. Even though no specific antibodies against rCMX, rHspX and rMPT-51 proteins were detected, animals immunized with rBCG-CMX showed specific IgG1 (p<0,0001) and IgG2a (p=0,0007) levels against the BCG culture sediment, higher than those induced in the animals vaccinated with BCG. Besides, the rBCG-CMX vaccine was able to induced delayed long lived memory B cells (p=0,0069), reduced the bacterial load in the lungs (p=0,0041) in a similar way as BCG and generated less tissue damage when compared to BCG Moreau. The recombinant BCG vaccine expressing the CMX fusion protein induced specific antibodies for BCG extract and B cell response to stronger memory than BCG, but, the protection induced by both vaccines (BCG and rBCG) were similar. / A tuberculose (TB) constitui um problema de saúde pública mundial e apesar da recente redução da incidência de novos casos e de mortes em todo mundo ainda há países em desenvolvimento onde estes índices ainda não são tão otimistas. A única vacina indicada pela Organização Mundial de Saúde (OMS) contra a TB é a BCG que embora esta seja eficiente contra as formas graves de TB na infância, apresenta uma eficácia questionável contra a tuberculose pulmonar (TBP) em adultos. Com o objetivo de contribuir para o melhoramento molecular da BCG e possibilitar assim o aprimoramento de um método de profilaxia amplamente utilizado, foram produzidos, por eletroporação da BCG (subcepa Moreau), três recombinantes utilizando diferentes construções plasmidiais (pLA71, pLA73 e pMIP12), ambas, contendo sequência codificadora para a proteína de fusão CMX de Mycobacterium tuberculosis. No entanto, apenas o transformante utilizando o pLA71 apresentou expressão da proteína CMX no imunoblot. Com o objetivo de avaliar o perfil de células B de memória, anticorpos específicos para CMX e a eficácia da vacina, camundongos BALB/c foram imunizados com dose única de BCG ou rBCG-CMX ou PBS (controle). A avaliação do perfil de células B de memória induzido pela imunização foi realizada 30 e 90 dias após a imunização, pela marcação de esplenócitos para citometria de fluxo. Noventa dias após a imunização, os animais foram desafiados, via endovenosa, com Mtb H37Rv e 45 dias após, foram obtidos pulmão dos camundongos para determinação da carga bacilar e do nível de inflamação induzido pela infecção nos camundongos imunizados. Não foram detectados níveis séricos de anticorpos específicos para proteínas rCMX, rHspX e rMPT-51, no entanto, animais vacinados com a rBCG-CMX apresentaram níveis de anticorpos séricos, das classes IgG1 (p<0,0001) e IgG2a (p=0,0007), específicos para extrato de BCG superiores ao induzido em animais vacinados com a BCG. Além disso, a vacina rBCG-CMX mostrou-se capaz de induzir tardiamente células B de memória de vida longa (p=0,0069); reduzir a carga bacilar no pulmão de camundongos infectados com Mtb (p=0,0041), semelhante ao BCG; e promover menor dano tecidual no pulmão de animais vacinados e infectados com Mtb. A vacina BCG recombinante expressando a proteína de fusão CMX mostrou-se capaz de induzir anticorpos específicos para extrato de BCG e resposta de células B de memória mais robustas do que a BCG, entretanto, a proteção induzida por ambas as vacinas (BCG e rBCG) foram semelhantes.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-04-19T19:12:43Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - João Pedro Tôrres Guimarães - 2017.pdf: 4247262 bytes, checksum: 8d423b0ec9df0ffdc2bb269e4572c28a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-20T14:41:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - João Pedro Tôrres Guimarães - 2017.pdf: 4247262 bytes, checksum: 8d423b0ec9df0ffdc2bb269e4572c28a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-20T14:41:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - João Pedro Tôrres Guimarães - 2017.pdf: 4247262 bytes, checksum: 8d423b0ec9df0ffdc2bb269e4572c28a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-04-12 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Human Hantavirosis is a serious lung disease caused by Hantavírus, pathogen that is related mainly with wild rodents, insectivorous animals and small mammals (shrews, moles and bats). In humans, the disease is called Hantavírus Cardiopulmonary Syndrome (HCPS), which has high mortality rates (~ 50%). In Brazil, 1,871 cases of HCPS have been confirmed, with 789 deaths between the years 1993 to 2016. The symptoms in humans are not very characteristic in the initial stage, and very similar to diseases such as Dengue and Yellow Fever, making it difficult to diagnose, with a need of fast and accurate diagnostic methods for Hantaviruses. To assist in the diagnosis of Hantavírus, we aim to develop a quick and simple test based on immunochromatography. This paper presents results obtained with 3 prototypes of tests compoused by a nitrocellulose membrane (NC) impregnated in the form of a line with the recombinant nucleocapsid protein (rN) Hantavírus-specific, as the capture agent and another parallel line impregnated with protein A, as reaction control. In the NC edges we have a sample zone composed of cellulose fiber and a glass microfiber tape containing the anti-IgM antibodies and / or anti-human IgG conjugated to colloidal gold and at the other end an absorption zone composed of cellulose fiber. We evaluated 163 samples, among them, positive serum for Hantavírus, Dengue, Mayaro, Oropouche, Yellow fever, Malaria (P. falciparum) Malaria (P. vivax), Parvovirus B19, Rubella, HIV, Chikungunya and samples from health donors. After several evaluations, the prototype for the detection of IgM and IgG simultaneously, using the C concentration of protein rN, cutoff point 1 and reading time of the results of 10 minutes was chosen, presenting 100% sensitivity, 99, 3% specificity, 90.9% VPP and 100% VPN. It is expected that the product of this study helps in the diagnosis of severe cases of Hantavírus improving the prognosis of patients and reducing the high rates of HCPS fatality, moreover, helping to promote health by conducting epidemiological studies thereby promoting the construction of strategies to prevent Hantavírus infection. / A Hantavirose humana é uma doença pulmonar grave causada pelo Hantavírus, patógeno que está relacionado, principalmente, com roedores selvagens, animais insetívoros e pequenos mamíferos (musaranhos, toupeiras e morcegos). Em humanos, a doença é denominada Síndrome Cardiopulmonar pelo Hantavírus (HCPS), a qual possui altos índices de mortalidade (~50%). No Brasil, foram confirmados 1.871 casos de HCPS, com 789 óbitos entre os anos de 1993 a 2016. Os sintomas em humanos são pouco característicos na fase inicial, semelhantes aos de doenças como a Dengue e Febre Amarela, o que dificulta o diagnóstico. Portanto, existe a necessidade de métodos de diagnóstico rápidos e precisos para Hantavirose. Para auxiliar no diagnóstico da Hantavirose, objetivamos desenvolver um teste rápido e simples, baseado em imunocromatografia. Neste trabalho são apresentados resultados obtidos com 3 protótipos de testes compostos por uma membrana de nitrocelulose (NC) com a proteína do nucleocapsídeo recombinante (rN) específica de Hantavírus impregnada na forma de uma linha, atuando como agente de captura dos anticorpos na amostra, e outra linha paralela posterior à do antígeno com proteína A como controle da reação. Numa das extremidades da NC temos a zona receptora de amostra composta por fibra de celulose e uma fita de microfibra de vidro contendo os anticorpos anti-IgM e/ou anti-IgG humanas conjugados com ouro coloidal e, na outra extremidade por uma zona de absorção composta por fibra de celulose. Foram avaliadas 163 amostras, dentre elas, soros positivos para Hantavírus, Dengue, Mayaro, Oropouche, Febre Amarela, Malária (P. falciparum), Malária (P. vivax), Parvovírus B19, Rubéola, HIV, Chikungunya e soros de doadores de sangue sadios. Após diversas avaliações, o protótipo para detecção de IgM e IgG simultaneamente, com concentração C de proteína rN na linha teste, ponto de corte 1 e tempo de leitura dos resultados de 10 minutos foi escolhido, apresentando 100% de sensibilidade, 99,3% de especificidade, 90,9% de VPP e 100% de VPN. Espera-se que o produto deste estudo auxilie no diagnóstico dos casos graves de Hantavirose melhorando o prognóstico dos pacientes e diminuindo os altos índices de fatalidade de HCPS, além disso, auxiliando na promoção à saúde, através da realização de estudos epidemiológicos promovendo assim a construção de estratégias de prevenção da infecção pelo Hantavírus.

Made available in DSpace on 2016-08-16T18:18:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Marcia Cristina Goncalves Maciel.pdf: 3314463 bytes, checksum: 457599889a456c516489e551b7df870b (MD5) Previous issue date: 2014-02-14 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The scorpions of the genus Tityus are really important to public health in Brazil due to accidents and venom s potentiality to cause serious clinical cases, and sometimes fatal, especially in children. The poison of these arachnids induces an inflammatory response, has antimicrobial activity and furthermore maintains the survival of animals with induced by cecal ligation and puncture (CLP) sepsis. The purpose of this study were: evaluate the kinetics of activation and cell migration by making a comparison between venoms (T.serrulatus and T.bahiensis) in naive animals (Article 01); investigate the recruitment of cells to the lymphoid organs, the activation of these cells and cytokine production after stimulation with the venom of T. serrulatus in naive animals (Article 02); and investigate the effect of T. serrulatus scorpion venom on the immune system of animals which was induced polymicrobial infection cecal ligation and puncture - CLP (Article 03). The animals received the poisons of T. serrulatus or T. bahiensis, intraperitoneally and after 30, 120 and 360 minutes were sacrificed for quantification of cellularity in lymphoid organs (Article 01). In Article 02, the mice received only the venom of T. serrulatus and after 30, 120 and 360 minutes were sacrificed for quantification of cellularity in lymphoid, investigation of cell activation and cytokine production organs. In Article 03, the mice received venom of T. serrulatus 6h before induction of lethal sepsis by CLP. After 12 hours of induction of CLP, a part of animals was separated for monitoring survival and another part were sacrificed, blood was collected for platelet count and obtain serum for determination of serum nitrite and quantification of cytokines. Quantification of cellularity of lymphoid organs and bronchoalveolar lavage was performed by microscopy. The lung was removed to perform the histological sections to analyze the edema and the influx of cells into the lung cavity. The activation was also assessed by the release of hydrogen peroxide by peritoneal cells. The treatment was always done in non-lethal dose of 200 μg/kg, intraperitoneal or subcutaneous injection. The results showed that the poisons interfere with recruitment of cells to the lymphoid organs. The venom of T. serrulatus led to an increased number of blood neutrophils and increased IL -6, TNF- α, IL-10 reduced the number of cells in the spleen and peritoneum associated with an increase in the number of cells in the lymph node. In the experiment in which CLP was induced in the animals, poison prevented death of mice with polymicrobial infection, reduced pulmonary edema, did not reduce inflammatory cytokines. There was an increase in IL-6 and MCP-1 in BAL. Increased IL-10 has been identified in the serum of treated animals in which the poison was induced by CLP. The poison is an important biotechnological tool in maintaining the survival of infectious conditions capable of inducing death, because it stimulates the immune system, inducing cell activation with release of cytokines and microbicidal products such as, for example, hydrogen peroxide. The scorpion venom is considered an important source of substances that constitute raw materials or templates for the synthesis of new drugs or prophylactic bioproducts low cost for the control of infections, acting as antimicrobial and at the same time maintaining the immune response avoiding lethality / Os escorpiões do gênero Tityus são de grande importância para a saúde pública do Brasil devido aos acidentes e a potencialidade de seu veneno em causar casos clínicos graves e às vezes fatais principalmente em crianças. O veneno destes aracnídeos induz uma resposta inflamatória, apresenta atividade antimicrobiana e, além disso, mantém a sobrevida de animais com sepse induzida por ligadura e perfuração cecal (CLP). Os objetivos deste estudo foram: avaliar a cinética de ativação e migração celular, fazendo uma comparação entre os venenos de T.serrulatus e T.bahiensis em animais naive (artigo 01); investigar o recrutamento de células para os órgãos linfóides, a ativação destas células e a produção de citocinas após estimulação com o veneno de T. serrulatus em animais naive (artigo 02); e averiguar o efeito do veneno de escorpião Tityus serrulatus sobre o sistema imunológico de animais nos quais foi induzida a infecção polimicrobiana por ligadura e perfuração cecal - CLP (artigo 03). Os animais receberam os venenos de T. serrulatus ou T. bahiensis, via intraperitoneal e após 30, 120 e 360 minutos foram sacrificados para quantificação da celularidade nos órgãos linfoides (artigo 01). No artigo 02, os camundongos receberam apenas o veneno de T. serrulatus e após 30, 120 e 360 minutos, foram sacrificados para quantificação da celularidade nos órgãos linfoides, investigação da ativação celular e produção de citocinas. No artigo 03, os camundongos receberam veneno de T. serrulatus 6h antes da indução da sepse letal por CLP. Após 12h da indução de CLP, uma parte dos animais foi separada para o acompanhamento da sobrevida e outra parte foi sacrificada, o sangue foi coletado para a contagem de plaquetas e obtenção de soro para determinação das concentrações de nitrito sérico e quantificação de citocinas. Foi feita a quantificação da celularidade dos órgãos linfóides e do lavado broncoalveolar por microscopia. O pulmão foi retirado para realização dos cortes histológicos para analisar o edema e o influxo de células para a cavidade pulmonar. A ativação celular também foi avaliada através da liberação de peróxido de hidrogênio pelas células peritoneais. O tratamento foi feito sempre na dose não letal de 200 μg/kg, via intraperitoneal ou subcutânea. Os resultados demonstraram que os venenos (T. serrulatus e T. bahiensis) interferem no recrutamento de células para os órgãos linfoides. O veneno de T. serrulatus induziu um aumento do número de neutrófilos sanguíneos e aumento de IL-6, TNF-α, IL-10, reduziu o número de células no peritônio e baço e promoveu um aumento do número de células no linfonodo. No experimento em que foi induzida CLP nos animais, o veneno impediu a morte dos camundongos com infecção polimicrobiana, reduziu o edema pulmonar, não reduziu citocinas inflamatórias. Houve um aumento de IL-6 e MCP-1no lavado broncoalveolar. O aumento de IL-10 foi identificado no soro dos animais tratados com veneno nos quais a CLP foi induzida. O veneno é uma ferramenta biotecnológica importante na manutenção da sobrevida de quadros infecciosos capazes de induzir óbito, pois estimula o sistema imunológico, induzindo a ativação celular com liberação de citocinas e de produtos microbicidas como, por exemplo, peróxido de hidrogênio. O veneno de escorpião é considerado uma importante fonte de substâncias que se constituem em matérias-primas ou protótipos para síntese de novos fármacos ou bioprodutos profilático de baixo custo para o controle de infecções, atuando como antimicrobiano e ao mesmo tempo fazendo a manutenção da resposta imunológica evitando a letalidade.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-03-03T12:08:21Z No. of bitstreams: 1 victorsoarescavalcanticosta.pdf: 3451719 bytes, checksum: 9019e3c3a2f3b904f3e1f38804fb82f8 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-04-24T01:42:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 victorsoarescavalcanticosta.pdf: 3451719 bytes, checksum: 9019e3c3a2f3b904f3e1f38804fb82f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-24T01:42:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 victorsoarescavalcanticosta.pdf: 3451719 bytes, checksum: 9019e3c3a2f3b904f3e1f38804fb82f8 (MD5) Previous issue date: 2013-09-18 / A talidomida é conhecida por sua atividade antiinflamatória e imunomoduladora, controlando os sinais clínicos das doenças mais variadas, dentre elas o eritema nodoso leproso, doença de Crohn, artrite reumatóide, câncer, entre outros distúrbios vasculares e inflamatórios. Estudo anterior realizado em nosso laboratório mostrou que análogos da talidomida contendo diaminas e estrutura ftalimídica aberta são capazes de inibir in vitro a produção de citocinas pró-inflamatórias como TNF-a, IL-12, IL-6, IFN-g, CXCL9, CXCL10 e CD80, além de elevar os níveis de IL-10. Neste estudo, a atividade antiinflamatória de dois análogos de talidomida (GI-16 e SC-15) foi avaliada in vivo, utilizando o modelo de inflamação na pata induzido por injeção subplantar de carragenina em camundongos BALB/c, e o modelo de inflamação pulmonar induzida por inoculação intratraqueal com LPS em camundongos C57Bl/6. Além disso, a toxicidade aguda e sub-crónica destes compostos foi avaliada em ratos Wistar. Os resultados mostram que o tratamento com GI-16 (10mg/kg e 50mg/kg) e SC-15 (50mg/kg) reduziu significativamente (53-77%) o edema de pata induzido pela injeção subplantar de carragenina 2% por até 24 horas. No modelo de inflamação pulmonar com LPS (200μg/ml), os compostos GI-16 (20mg/kg e 50mg/kg) e SC-15 (50mg/kg) inibiram significativamente a produção de TNF- a (34%) e IL-6 (66% a 89%) no homogenato pulmonar dos animais testados. O composto SC-15 (50mg/kg) e a talidomida (50mg/kg) causaram aumento dos níveis de IL-10 (p<0,05). Conforme esperado, a talidomida e o fármaco de referência dexametasona provocaram inibição significativa do edema de pata induzido por carragenina, assim como redução dos níveis de TNF-a e IL-6 induzidos pela administração de LPS. Análises histopatológicas revelaram que o tratamento com GI-16 causou redução da inflamação induzida por LPS, havendo discreta congestão capilar. Por outro lado, animais tratados com SC- 15 mostraram um quadro inflamatório de moderado a intenso, A análise histopatológica dos pulmões dos camundongos apenas estimulados com LPS demonstrou quadro inflamatório de moderado a intenso, sendo detectado espessamento da parede alveolar e congestão vascular, na dose de 20mg/kg, com redução do quadro inflamatório quando aplicada a dose de 50mg/kg. 8 Ratos Wistar fêmeas e machos administrados com GI-16 e SC-15 (20mg/kg) não desenvolveram sinais clínicos de toxicidade aguda (dose única) ou de toxicidade sub-crónica (doses em dias alternados por 28 dias), imediatamente ou durante o período pós-tratamento. Não houve mortalidade durante os períodos de tratamento avaliados. O ganho de peso corporal ao longo do tempo foi semelhante entre os grupos sem alteração significativa nos parâmetros bioquímicos ou hematológicos. Os cortes histológicos de tecido cardíaco, hepático e renal dos ratos estudados não mostraram alterações sob a microscopia ótica comum de campo claro. Em conjunto, os resultados indicam uma forte atividade antiinflamatória dos compostos GI-16 e SC-15, não havendo sinais de toxicidade aguda ou sub-crônica, o que os torna drogas promissoras para o tratamento de doenças inflamatórias. / Thalidomide exhibits anti-inflammatory and immunomodulatory effects, improving clinical symptoms in a variety of diseases, including erythema nodosum leprosum, Crohn disease, rheumatoid arthritis, cancer and other vascular and inflammatory diseases. In previous study from our laboratory it has been shown that thalidomide analogues containing diamines and open phthalimide structure, showed high inhibitory in vitro activity on key molecules such as TNF-a, IL-12, IFN-g, IL-6, CXCL9, CXCL10 and CD80. In contrast, some compounds induced an increase in IL-10 production. In this study, the anti-inflammatory activity of two thalidomide analogues (GI-16 and SC-15) were evaluated in vivo using the carrageenan-induced paw inflammation on BALB/c mouse and the LPS-induced lung inflammation in C57Bl/6 mice. In addition, the acute and sub-chronic toxicity of the compounds on Wistar rats were evaluated. The treatment with both GI-16 (10mg/kg and 50mg/kg) and SC-15 (50mg/kg) reduced significantly (53-77%) the paw oedema over 24h evoked by subplantar injection of 2% carrageenan. GI-16 (20mg/kg and 50mg/kg) and SC-15 (50mg/kg) greatly inhibited LPS-induced TNF-a (around 34%) and IL-6 (66- 89%) in lung homogenate. In contrast, thalidomide (50mg/kg) and SC-15 (50mg/kg) enhanced IL-10 (p<0,05). As expected, thalidomide and the reference drug, dexamethasone, caused significant inhibition of both carrageenan-induced oedema and of TNF-a and IL-6 production 24 h after intratracheal administration of LPS (200ug/ml). Histopathological analysis has shown that GI-16 treatment induced reduction in LPS–induced inflammation characterized by discrete capillary congestion. In contrast, animals treated with SC-15, showed moderate to intense inflammatory infiltrate, thickening of alveolar wall and vascular congestion at 20mg/kg, and reduced inflammation at 50mg/kg. Female and male Wistar rats administered with GI-16 and SC-15 (20mg/kg) did not develop any clinical signs of acute toxicity (single dose) or sub-chronic toxicity (every other day for 28 days) either immediately or during the posttreatment period. No mortality occurred in both, control and treated animals either immediately or during the treatment period. Body weight gain over time 10 was similar in all groups. There was not significant alteration in biochemical or hematological parameters. Sections of heart, liver and kidneys tissues of the studied rats showed no pathological alterations under light microscopy. These results strongly reinforce the anti-inflammatory effects of GI-16 and SC-15, which make them very attractive drug candidates to treat a broad range of inflammatory diseases.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-09-22T14:40:30Z No. of bitstreams: 1 isabellyfaverosouzalima.pdf: 1179067 bytes, checksum: dbb0904f6dd93dcd64a8658c4de22481 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2016-09-26T20:29:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 isabellyfaverosouzalima.pdf: 1179067 bytes, checksum: dbb0904f6dd93dcd64a8658c4de22481 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-26T20:29:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 isabellyfaverosouzalima.pdf: 1179067 bytes, checksum: dbb0904f6dd93dcd64a8658c4de22481 (MD5) Previous issue date: 2010-06-17 / O implante autógeno de baço é uma opção para a preservação das funções esplênicas após esplenectomia total. Indivíduos esplenectomizados são mais susceptíveis a infecções por diversas bactérias, havendo poucos relatos sobre a importância do baço na resistência a infecção por parasitos do gênero Leishmania. As leishmanioses são doenças infecciosas causadas por protozoários unicelulares flagelados, que sobrevivem em macrófagos após a fagocitose. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da esplenectomia e de implantes esplênicos autógenos na carga parasitária e produção de citocinas como IFN-, IL-12, TNF-, IL-10 e IL-17 no fígado e baço de camundongos BALB/c infectados intraperitonialmente com 106 promastigotas de Leishmania chagasi. A presença de infiltrados inflamatórios no fígado dos animais infectados foi também avaliada em cortes de tecidos incluídos em parafina corados com hematoxilina-eosina. Camundongos BALB/c foram divididos nos seguintes grupos: esplenectomizado (SP), esplenectomizado e autotransplantado em grande omento (AT), e controle operado (CT). Trinta dias após a realização da cirurgia os animais foram infectados com 106 promastigotas de L. chagasi. Após trinta dias da infecção os animais foram eutanasiados, tendo o baço e fígado coletados, macerados e usados para avaliar a carga parasitária pelo método da diluição limitante e os sobrenadantes dos macerados utilizados para a produção de citocinas pelo método de ELISA. Os resultados obtidos mostram que os animais esplenectomizados apresentam carga parasitária maior no fígado quando comparados aos grupos CT e AT, coincidindo também com a maior produção de IL-10. Por outro lado, animais esplenetomizados tiveram menor produção de IFN-, IL-12 e TNF-quando comparados aos animais controle e autotransplantado em grande omento. Já a IL-17 foi produzida em maior quantidade no fígado dos animais esplenectomizados. Nos animais SP e AT foram observados poucos infiltrados de células mononucleares no fígado, em comparação aos animais CT, que mostraram um acúmulo moderado de infiltrados no fígado. Os resultados obtidos sugerem a importância do baço para o desenvolvimento de uma resposta imune mais efetiva à infecção com L. chagasi. Isto correlaciona com a produção elevada de citocinas pro-inflamatórias com perfil Th1, e maior recrutamento de células mononucleares para o sítio de infecção. Portanto a esplenectomia pode interferir no padrão de resposta imunológica dos animais infectados com L. chagasi, levando a maior suscetibilidade a infecção. / The autogenous implant of spleen is an option for the preservation of splenic function after total splenectomy. Although it has been demonstrated that splenectomized individuals are more sensitive to infections by various bacteria, few reports existing on the importance of the spleen in resistance to infection by Leishmania sp. Leishmaniasis is an infectious disease caused by an unicellular flagellate protozoa, which survive in macrophages after phagocytosis. The objective of this work was to evaluate the influence of splenectomy and autogenous implant of spleen on the parasitic load and in the production of IFN-, IL-12, TNF-,IL-10 and IL-17 in the liver and spleen of BALB/c mice infected intraperitoneally (i.p.) with 106 promastigotes of L. chagasi. Presence of inflammatory infiltrate in the liver of the infected animals was also evaluated, through hematoxylin-eosin staining of tissue cuts embedded in paraffin. BALB/c mice were divided into the following groups: splenectomized (SP), splenectomized and autotransplanted in the greater omentum (AT), and control group with sham operation (CT). Thirty days after the surgery the animals were infected i.p. with 106 promastigotas of L. chagasi. After thirty days of infection the animals were euthanized, the spleen and the liver collected, macerated, and used for evaluation of the parasitic load through the technique of limiting dilution, and for production of cytokines through the method of ELISA. The results obtained show that the splenectomized animals presented a larger parasitic load when compared to the CT and AT groups, having also a greater production of IL-10 in the liver. On the other hand, the CT and AT groups showed greater production of IFN-, IL-12 and TNF- than the splenectomized group. The production of IL-17 was greater in the liver of the splenectomized animals. In the splenectomized animals few infiltrates of mononuclear cells were observed, in comparison to the animals with intact spleen, which showed a moderate accumulation of mononuclear cells in the liver. The results obtained suggest that the presence of the spleen favors the development of a more effective immune response to infection with L. chagasi, this being correlated with an elevated production of pro-inflammatory cytokines with Th1 profile, and greater recruitment of mononuclear cells to the infection site. However, splenectomy can interfere in the pattern of immunologic reponse of animals infected with Leishmania chagasi, leading to a greater sensitivity to the infection.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-06-19T16:07:50Z No. of bitstreams: 1 saramalagutiandradesoares.pdf: 1936313 bytes, checksum: bac06dfaa717be34b6dd2753dd6bf232 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-06-29T12:30:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 saramalagutiandradesoares.pdf: 1936313 bytes, checksum: bac06dfaa717be34b6dd2753dd6bf232 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T12:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 saramalagutiandradesoares.pdf: 1936313 bytes, checksum: bac06dfaa717be34b6dd2753dd6bf232 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A obesidade é motivo de preocupação para a saúde pública em todo o mundo. Apesar de existirem muitos estudos sobre seu impacto no sistema imunológico, a influência nas doenças infecciosas é pouco relatado. A incidência da obesidade vem aumentando em países em desenvolvimento, assim é de grande importãncia o estudo do papel da obesidade na resposta imunológica a patógenos, principalmente em doenças infecciosas de grande relevãncia como a malaria. A obesidade é caracterizada por uma inflamação sistêmica de baixo grau crõnica, e acredita-se que as manifestações complicadas da malária, como a malaria cerebral, injuria respiratória, denominada malária grave, podem ser resultado da resposta inflamatória exagerada causada pelo sequestro de hemácias infectadas nos vasos endoteliais de orgãos vitais como cérebro e pulmão. Portanto a inflamação na obesidade pode alterar o curso da infecção do Plasmodium berguei ANKA, parasitas causadores da malária cerebral em modelo murino. Neste trabalho, investigamos a influência da obesidade na resposta imune frente à infecção por Plasmodium berguei ANKA. Para isso foram utilizados camundongos C57BL/6 machos, com idade de 4 a 6 semanas, alimentados durante 12 semanas por uma dieta hiperlipídica com 60% das quilocalorias advindas de lipídeos. Após esse período os animais foram infectados com a cepa ANKA de Plasmodium berguei. Nos animais alimentados com a dieta hiperlipídica, observou-se aumento do peso corporal, assim como da gordura perigonadal dos animais alimentados pela dieta hiperlipídica, sem aumento do consumo de ração. A resistência ao desenvolvimento da malária grave foi observada nos animais obesos; além de conseguir controlar a parasitemia, . Somente esses animais sobreviveram à infecção, por 25 dias após o desafio, sem apresentar sintomas clínicos da doença, ao contrário, os não obesos infectados, vieram a óbito após oito dias de infecção. Foram observadas diferenças no perfil celular dos animais obesos infectados quando comparados aos controles infectados, sugerindo que a inflamação prévia dos animais obesos pode ter influenciado o curso da infecção. Assim, os resultados indicam que alterações na resposta imunológica do camundongo obeso conseguem protege-lo contra o desenvolvimento da malaria grave. / Obesity is a public heaith concern currentiy affecting worldwide, aithough there are many studies on the impact of obesity on the immune system, the various aspects of the association between obesity and infection is seidom reported. The incidence of obesity is increasing in the developing countries, and it is very important to study the role of obesity in the immune response to pathogens, especially infectious diseases such as maiaria. Obesity is characterized by a iow-grade, systemic, chronic infiammation and it is believed that the complicated manifestations of maiaria, as severe maiaria, can be the result of an exaggerated inflammatory response caused by sequestration of infected erythrocytes to endothelial vesseis of vital organs such as brain and lung. So infiammation in obesity may alter the course of infection of Plasmodium berguei ANKA, parasites that cause cerebral maiaria in mice. In this work, we investigated the influence of obesity on the immune response to infection by Plasmodium berguei ANKA. For this, mate C57BL/6 mice aged 4 to 6 weeks were used, fed by a high fat diet with 60% of kilocalories from lipid, for 12 weeks. After this period the animais were infected with the strain ANKA of Plasmodium berguei. There was an increase in body weight as well as the perigonadal fat in animais fed with the high fat diet, without increasing the food intake, from the second week of dieting. The resistance to the deveiopment of severe maiaria was observed in the obese animais, beside of control the parasitemia, oniy those animais survived the infection for 25 days post challenge, without any clinicai symptoms of the disease, unlike infected non obese, who died after eight days of infection. Differences were observed in the cell profile of infected obese animais compared to infected controls, suggesting that prior infiammation in obese animais may have infiuenced the course of infection. Thus, the resuits indicate that changes in the immune response of obese mice can protect against the deveiopment of severe maiaria.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-03-27T10:38:01Z No. of bitstreams: 0 / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-03-27T14:00:10Z (GMT) No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2018-03-27T14:00:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2018-03-01 / A microbiota vaginal é um ecossistema formado por bactérias aeróbias e anaeróbias, que vivem em equilíbrio dinâmico. Fatores como imunidade e variações hormonais podem provocar a perda do equilíbrio, ocasionando a proliferação de patógenos oportunistas. A vaginose bacteriana (VB) é uma doença de etiologia polimicrobiana, podendo ocorrer em associação com outros microrganismos, tais como o Papilomavirus humano (HPV). O HPV é mais prevalente na população feminina sexualmente ativa, sendo fator de risco para o desenvolvimento do câncer cervical. O objetivo do trabalho foi avaliar a diversidade microbiana do ecossistema vaginal de mulheres com e sem atipias celulares cervicais e relacionar com HPV. Fluido vaginal e raspado da cérvice uterina foram coletados (n= 33 sem lesão e n=41 com lesão) e DNA viral e bacteriano foi extraído. Lâminas foram coradas pelo método de Gram, a fim de estabelecer o escore de Nugent para avaliação da VB. Reação de PCR para genotipagem do HPV foi realizado. PCR-DGGE foi realizado para avaliação da estrutura da comunidade bacteriana. A média de idade das mulheres foi de 36 anos; compreendendo 87% (sem lesão) e 92% (com lesão). A análise do escore de Nugent revelou que 51% das mulheres com lesão não apresentavam VB e 29% eram portadoras de VB. O exame de Papanicolaou mostrou que 31% das mulheres apresentavam lesão com células escamosas atípicas de significado indeterminado (ASC-US), seguida de lesão epitelial escamosa de baixo grau (LSIL) e lesão epitelial escamosa de alto grau (HSIL), ambas com 26%, e 14% das mulheres apresentaram lesão com células escamosas atípicas que não permitem excluir lesão de alto grau (ASC-H). HPV foi detectado em 91% das pacientes, sendo identificados 5 tipos do grupo de alto risco oncogênico (16, 18, 31, 52 e 58). O HPV 16 foi o mais frequente (85%), seguido do HPV 18 (68%). No grupo sem lesão a prevalência da concomitância de HPV 16 e 18 foi de 58% e no grupo com lesão foi de 60%. Na faixa etária de 18 a 30 anos, 43% das mulheres apresentaram HPV 16, e 35% apresentaram coinfecção por HPV 16 e 18. A associação entre a genotipagem e o exame de Papanicolaou mostrou que 40% das pacientes ASC-US e 20% ASC-H apresentaram monoinfecção por HPV 16. Das mulheres com HPV 16 e coinfecção por HPV 16 e 18, VB foi encontrada em 25% das mulheres. Na análise do agrupamento obtido por PCR-DGGE observa-se, com algumas exceções, que os perfis de mulheres com as mesmas condições de saúde (normal, intermediário e com vaginose bacteriana) tenderam a se agrupar, embora em grupos separados. Na análise do agrupamento em relação às atipias, não foi observada a formação de um padrão. Dada a complexidade do ecossistema vaginal, sugere-se a necessidade de técnicas com maior poder de resolução para o entendimento da relação entre o HPV, microbiota vaginal e lesões celulares cervicais. / The vaginal microbiota is a complex ecosystem formed by aerobic and anaerobic bacteria, which live in dynamic equilibrium. Factors such as immunity and hormonal variations can cause loss of balance, leading to the proliferation of opportunistic pathogens and resulting in diseases. Bacterial vaginosis (BV) is a polymicrobial disease, and may occur in association with other microorganisms, such as Human Papillomavirus (HPV). HPV is the most prevalent in the female sexually active population, being a risk factor for the development of cervical intraepithelial lesions, which may progress to cervical cancer. The aim of this study was to evaluate the microbial diversity of the vaginal ecosystem of women with cervical cellular atypias and carrying HPV. Vaginal fluid and scraped uterine cervix were collected (n = 33 without lesion and n = 41 with lesion) and viral and bacterial DNA was extracted. Glass slides were stained by the Gram method in order to establish the Nugent score for BV evaluation. PCR reaction for HPV genotyping was performed. DGGE-PCR was performed to assess the structure of the bacterial community. The mean age of the women was 36 years; comprising 87% (without lesion) and 92% (with lesion). Analysis of the Nugent score revealed that 51% of the women with lesion did not present BV and 29% had BV. Pap smear test showed that 31% of the women had atypical squamous cells of undetermined significance (ASC-US), 26% had low grade squamous epithelial lesion (LSIL), 26% had high grade squamous epithelial lesion (HSIL) and 14% had with atypical squamous cells that do not allow the exclusion of high-grade lesion (ASC-H). HPV was detected in 91% of the patients, being identified 5 types of the high risk group (16, 18, 31, 52 and 58). HPV 16 was the most frequent (85%), followed by HPV 18 (68%). In the non-lesion group, the prevalence of HPV 16 and 18 concomitance was 58% and in the lesion group it was 60%. In the 18-30 age group, 43% of the women had HPV 16, and 35% had coinfection by HPV 16 and 18. The association between genotyping and the Pap smear showed that 40% of ASC- US patients and 20% ASC-H showed monoinfection by HPV 16. Besides, out of women with HPV 16 and coinfection by HPV 16 and 18, BV was found in 25%. In the analysis of the grouping obtained by PCR-DGGE it is observed with some exceptions, that the profiles of women with the same health conditions (healthy, intermediate and with bacterial vaginosis) tended to group, although in separate groups. Analysis of the cluster in relation to the atypia did not observe the formation of a pattern. Given the complexity of the vaginal ecosystem, it is suggested the need for higher resolution power techniques for understanding the relationship between HPV, vaginal microbiota and cervical cellular lesions.