Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Decline cognitive related to neurodegenerative diseases are very commom in patients, probably in function of aging. Since there are few effectives therapeutics approaches to loss memory treatment, but studies about new therapeutics approaches are necessary regarding neuroprotective drugs. Thus, recent works have been showing the efficacy of some neuroprotective compounds like creatine (Cr) in treatment of patients and experimental models with memory defcit. Creatine is a guanidine compound synthesized from glycine, arginine and S-adenosylmethionine in the kidneys, liver and brain that have been presented neuroprotective and neuromodulatory effect in the central nervous systems. Some works suggest that guanidine compounds like Cr could enhance learning by modulation polyamines binding sites at the N-methyl-D-Aspartate (NMDA) receptor and act as energetic buffer intracellular. In these context, the propose of this work was investigate the involvement of Cr transporter (CreaT), cAMP-dependent protein kinase A (PKA) and Ca2+/ calmodulin-dependent protein kinase II (CaMKII) signaling pathway in the spatial learning after intrahippocampal injection of Cr. After training on Barnes Maze, Cr and/or 3-GPA (inhibitor CreaT), Cr and/or H-89 (PKA inhibitor), Cr and/or STO-609, (inhibitor of CaMKII) bilateral intrahipocappus administration was performed. The results showed that intrahippocampal administration of 3-GPA, H-89 and STO-609 attenuated the facilitatory effect of Cr on spatial learnig performed on barnes Maze. Therefore, we decide investigate the involvement of the PKA (pPKA), CaMKII (pCaMKII) and CREB (pCREB) activation after intrahippocampus creatine administration in rats trained on Barnes Maze. The results showed that Cr enhanced pCREB levels and pCaMKII levels. Thirty minutes after creatine administration was observed pCREB an pCaMKII levels enhancement, on the other hand, pPKA levels enhancement was not observed. These data suggest that spatial learning enhancement elicited by Cr may be mediated by trans-cellular creatine transports, as well, CaMKII/CREB intracellular pathway in rat hippocampus / O declínio cognitivo associado a doenças neurodegenerativas é um sintoma cada vez mais comum encontrado em pacientes, provavelmente devido ao aumento da expectativa de vida da população. Dada a escassez de medidas terapêuticas efetivas para o déficit de memória apresentado por pacientes, evidencia-se a importância da busca de novos compostos e do estudo de seus mecanismos de ação. Nesse contexto, recentes estudos mostraram a eficácia de algumas substâncias com ação neuroprotetora, como a creatina (Cr), na terapia de pacientes com déficit de memória e em modelos experimentais. A Cr é um composto guanidínico sintetizado endogenamente nos rins, fígado, pâncreas e cérebro, que apresenta ação neuroprotetora e neuromoduladora no sistema nervoso central. Estudos mostram que a administração de compostos guanidínicos, como a Cr, podem estar relacionados com a melhora da memória devido à interação com o sítio das poliaminas no receptor N-metil-D-Aspartato (NMDA) e por atuar como tampão energético intracelular. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi investigar o envolvimento do transportador de Cr (CreaT), das proteínas quinases dependente de AMPc (PKA) e dependente de Ca2+/calmodulina II (CaMKII) na melhora do aprendizado espacial induzido por Cr no hipocampo de ratos. Após o treino no labirinto de Barnes, os ratos foram injetados no hipocampo, bilateralmente, com Cr e/ou 3-ácido guanidinico propiônico (3-GPA, um inibidor do transportador de creatina); Cr e/ou [N-[2-(p-Bromocinnamylamino)ethyl]-5-isoquinoline sulfonamide, Di-HCl Salt] (H-89, um inibidor da PKA); Cr e/ou 1,8-Naphthoylene benzimidazole-3- carboxylic acid (STO-609, um inibidor da CaMKII). A administração de 3-GPA, H-89 e STO-609 diminuiu o efeito facilitatório da Cr na memória espacial de ratos, observado no teste do labirinto de Barnes. De acordo com esses resultados, decidimos investigar o envolvimento da ativação do elemento de ligação responsivo ao AMPc (pCREB), PKA (pPKA) e CaMKII (pCaMKII) após a administração de Cr no hipocampo de animais treinados no labirinto de Barnes. Trinta minutos após a injeção de Cr, foi observado um aumento nos níveis de pCREB e pCaMKII, mas não nos níveis de pPKA no hipocampo de ratos. Estes achados sugerem que a facilitação do aprendizado espacial induzido pela Cr depende do seu transporte para o meio intracelular, assim como, envolve a via de sinalização celular da CaMKII/CREB no hipocampo de ratos.

There is evidence that while polyamines facilitate seizures by positively modulating N-methyl-D-aspartate receptors (NMDAr), selective antagonists of the NR2B-subunit decrease seizures. However, it remains undetermined whether traxoprodil (CP-101,606), an ifenprodil analog that acts as a selective antagonist of the NR2B subunit of the NMDAr, decreases seizure activity. In the current study we investigated whether traxoprodil alters PTZ-induced seizures in adult male Wistar rats by behavioral and electroencephalographical methods. Spermidine (SPD) (2 nmol/site; i.c.v.) facilitated behavioral and electroencephalographical seizures induced by a normally subeffective dose of PTZ (35 mg/kg; i.p.), but did not alter seizure activity induced by convulsant dose of PTZ (70 mg/kg; i.p). Traxoprodil (20 nmol i.c.v.) increased the latency to generalized tonic clonic seizures induced by PTZ (70 mg/kg; i.p). The oral administration of traxoprodil (60 mg/kg) increased the latency to clonic and tonic-clonic seizures, and decreased total time spent in seizures. These data constitute pharmacological evidence supporting a role for NR2B subunit in PTZ-induced seizures. While more studies are necessary to determine whether traxoprodil is a useful anticonvulsant in clinical settings, NR2B subunits may represent new targets of drug development for convulsive disorders. / Há evidências de que as poliaminas facilitam convulsões por modular positivamente os receptores N-metil-D-aspartato (NMDAr), e que os antagonistas seletivos a subunidade NR2B do NMDAr têm atividade anticonvulsivante. Entretanto, permanece indeterminado se o traxoprodil (CP-101,606), um análogo do ifenprodil que age como antagonista seletivo na subunidade NR2B do NMDAr, tem efeito anticonvulsivante. Neste estudo investigamos se o traxoprodil altera as convulsões induzidas por pentilenotetrazol (PTZ) em ratos Wistar machos por meio de métodos comportamentais e eletroencéfalográficos (EEG). Espermidina (SPD) (2 nmol/sítio; i.c.v.) facilita as convulsões comportamentais e eletroencéfalográficas induzidas por doses subconvulsivantes de PTZ (35 mg/kg; i.p.), mas não altera a atividade convulsiva induzida por dose plenamente convulsivante de PTZ (70 mg/kg; i.p.). Traxoprodil (20 nmol i.c.v.) aumenta a latência para convulsão tônico-clônica generalizada induzida por PTZ (70 mg/kg; i.p.). A administração oral de traxoprodil (60 mg/kg) aumenta as latências para convulsão clônica e tônico-clônica generalizada e diminui a duração total das convulsões induzidas por PTZ (70 mg/kg; i.p.). Esses dados mostram que o traxoprodil diminui as convulsões induzidas por PTZ, um modelo animal com bom poder de predição de atividade convulsivante em humanos, e sugerem um papel para a subunidade NR2B nas convulsões induzidas por PTZ. Enquanto mais estudos são necessários para determinar se o traxoprodil tem, de fato, atividade anticonvulsivante na clínica, as subunidades NR2B podem representar um novo alvo para o desenvolvimento de drogas anticonvulsivantes.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Arcaine is a competitive antagonist of the polyamine binding site at the NMDA receptor which induces state-dependent recall. However, no study has addressed the involvement of other neurotransmitter/neuromodulators in arcaine-induced state dependency. The current study investigates whether the opioid system is involved in arcaine-induced state-dependent memory retrieval of the inhibitory avoidance task (IA) in rats. The systemic administration of arcaine (30 mg/kg, i.p.) or morphine (5 mg/kg, i.p.) zero, 3, 6 or 9 hours posttraining, reduced step-down latencies at testing. Arcaine (30 mg/kg, i.p.) or morphine (5 mg/kg, i.p.) injection 30 min before testing reversed the performance deficit induced by administration of arcaine or morphine zero, 3 or 6, but not 9 hours post-training. The reversal of arcaine-induced impairment of IA performance was completely transferred to morphine, and vice-versa. The association of low and ineffective doses of morphine and arcaine (10 and 1.5 mg/kg, respectively) were additive and caused state-dependency. Naloxone (2 mg/kg, 3 min post-training, or 1 mg/kg, 1 hour pre-test, i.p.), reversed the amnesia and the state dependency induced by morphine and arcaine. These results suggest that state dependency induced by arcaine involves the opioid system. / A arcaína é um antagonista do sítio de ligação das poliaminas no receptor NMDA, a qual induz dependência de estado. No entanto, nenhum estudo abordou o envolvimento de outros neurotransmissores/neuromoduladores na dependência de estado induzida pela arcaína. No presente estudo, investigamos se o sistema opióide está envolvido na dependência de estado induzida pela arcaína na tarefa de esquiva inibitória (IA) em ratos. A administração sistêmica de arcaína (30 mg/kg, i.p) ou morfina (5 mg/kg, i.p) zero, 3, 6 ou 9 horas pós-treino, reduziu a latência de descida da plataforma no dia do teste. A injeção de arcaína (30 mg/kg, i.p) ou morfina (5 mg/kg, i.p) 30 minutos antes do teste, reverteu o déficit de desempenho induzido pela administração de arcaína ou morfina zero, 3 ou 6, mas não 9 horas pós-treino. A reversão da piora da memória induzida pela arcaína foi totalmente transferida para a morfina, e vice-versa. A associação de baixas doses de arcaína e morfina (10 e 1,5 mg/kg, respectivamente), que individualmente não pioraram a memória, induziram dependência de estado. A naloxona (2 mg/kg, 3 min pós-treino, ou 1 mg/kg uma hora pré-teste, i.p), reverteu a amnésia e a dependência de estado induzida pela arcaína e morfina. Esses resultados sugerem que a dependência de estado induzida pela arcaína envolve o sistema opióide.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The gout is an extremely painful type of arthritis. Despite the large number of drugs available for its treatment, they usually cause many adverse effects that limit their use. Then, further investigations are necessary for a better understanding the different mechanisms involved in gout. It was found previously that TRPV1 receptor, an ion channel modulated by various inflammatory mediators mediated edema and the nociceptive responses induced by subcutaneous injection of MSU in rats. In this plantar model, activation of TRPV1 depended largely on the activation of mast cells. Since the environments articular broadly differ as their cellular constituents, questioned the involvement of this receptor in a more reliable model with this clinical arthropathy. The aim of this study was to investigate the role of TRPV1 in a model of acute gout induced by intra-articular administration (i.a.) of crystals of monosodium urate (MSU) tíbio-tarsal articulation rats. It was observed that the antagonism of the TRPV1 receptor (by the selective antagonist SB366791), systemic knockdown (caused by treatment with resiniferatoxin subcutaneous injection a TRPV1 agonist) or axonal silencing (perineural injection a combination of capsaicin and QX-314) sensory fibers TRPV1-positive significantly prevented the pain-related behaviors (spontaneous nociception, heat hyperalgesia, and mechanical allodynia) and inflammation (edema, plasma extravasation, leukocyte infiltration and IL - 1β ) was caused by the administration of MSU. Additionally, we observed a significant increase in immunoreactivity of TRPV1 in articular tissue 4 hours after administration of MSU. Subsequently, we investigated the possibility role of NO, an endogenous activator of TRPV1 in this model. The administration of MSU induced an increase in the production of stable metabolites (NOx) emissions of nitric oxide (NO) exudates in the joint, which was inhibited by a selective inhibitor of nitric oxide synthase (NOS). In addition, the non-selective NOS inhibitor prevented the spontaneous nociception, edema and plasma extravasation, and leukocyte infiltration after MSU injection. Moreover it was found that the administration of a NO donor induced heat hyperalgesia and spontaneous nociception, but not mechanical allodynia and edema. The TRPV1 receptor antagonism prevented only the edema caused by that donor. Thus, these results suggest that TRPV1 plays a role in the development and maintenance of nociceptive and inflammatory responses triggered in the model of acute articular gout, but only edematogenic response appears to be mediated by TRPV1 activation by NO. / A gota é um tipo de artrite extremamente dolorosa. Apesar do grande número de fármacos disponíveis para seu tratamento. Muitos causam efeitos adversos que limitam seu uso. Maiores investigações são necessárias para um melhor entendimento dos diferentes mecanismos envolvidos na gota. Verificou-se previamente que o receptor TRPV1, um canal iônico modulado por vários mediadores inflamatórios, mediou as respostas nociceptiva e edematogênica induzidas pela injeção subcutânea de MSU em ratos. Neste modelo plantar, a ativação do TRPV1 dependeu amplamente da ativação de mastócitos. Sendo o ambiente articular amplamente diferenciado quanto a sua constituição celular, questionou-se o envolvimento deste receptor em um modelo mais fidedigno com a clínica dessa artropatia. O objetivo deste estudo foi investigar o papel do TRPV1 em um modelo de gota aguda, induzida pela administração intra-articular (i.a.) de cristais de urato monossódico (MSU) na articulação tíbio-tarsal de ratos. Observou-se que o antagonismo do receptor TRPV1 (pelo antagonista seletivo do receptor TRPV1 SB366791), a desfuncionalização sistêmica (causada pelo tratamento subcutâneo com resiniferatoxina) ou o silenciamento axonal (com a combinação periciática de capsaicina e QX 314) das fibras sensoriais TRPV1-positivas preveniram significativamente os comportamentos relacionados à dor (nocicepção expontânea, hiperalgesia ao calor e alodínea mecânica) e à inflamação (edema, extravasamento plasmático, infiltração de leucócitos e produção de IL-1β) causadas pela administração i.a. de MSU. Adicionalmente, observou-se um aumento expressivo da imunoreatividade do TRPV1 no tecido articular 4 horas após a administração do MSU. Posteriormente investigou-se a possibilidade do NO ser um ativador endógeno do TRPV1 neste modelo. Demonstrou-se que a administração i.a. de MSU induziu um aumento na produção de metabólitos estáveis (NOx) do óxido nítrico (NO) nos exsudatos articulares, o qual foi inibido pela administração i.a. de um inibidor não seletivo da óxido nítrico sintase (NOS). Além disso, o inibidor não seletivo da NOS preveniu a nocicepção espontânea, o edema e também o extravasamento plasmático, a infiltração de leucócitos. Por outro lado constatou-se que a administração i.a. de um doador de NO induziu nocicepção espontânea e hiperalgesia ao calor, mas não alodínea mecânica ou edema. O antagonismo do receptor TRPV1 preveniu somente o edema causado por esse doador. Assim, estes resultados sugerem que o TRPV1 exerce um papel relevante no desenvolvimento e manutenção das respostas nociceptiva e inflamatória desencadeadas no modelo articular de crise aguda de gota, porém, apenas a resposta edematogênica parece ser mediada pela ativação TRPV1 através do NO.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Methylmalonic acidemias are inherited metabolic disorders characterized by methylmalonate (MMA) accumulation and neurological dysfunction, including seizures. Dietary fatty acids are known as an important energy source and reduce seizure activity in selected acute animal models. This study investigates whether the chronic treatment with fish oil or with oleic acid attenuates MMA-induced seizures. Adult male Wistar rats were treated with fish oil (85 mg/kg), oleic acid (85 mg/kg) or vehicle (0.42 % aqueous Cremophor EL , 4 mL/kg/body weight/day), p.o., for 75 days. In the 73th day were implanted a cannula in the right lateral ventricle with electrodes over the parietal cortex for EEG recording. In the 76th day half the animals from each group were injected with NaCl (2.5 μmol/2.5 μL, i.c.v.), and the other half with MMA (2.5 μmol/2.5 μL, i.c.v.), and seizure activity was measured by EEG recording with concomitant behavior monitoring. The effect of prostaglandin E2 (PGE2) on Na+,K+-ATPase activity of slices of cerebral cortex from NaCl-injected (control) animals was determined. Fish oil administration increased the latency for MMA-induced tonic-clonic seizures and reduced the mean amplitude of ictal EEG recordings. Oleic acid decreased mean amplitude of ictal EEG recordings. Treatment with fish oil prevented PGE2-induced decrease of Na+,K+-ATPase activity in cortical slices in vitro. The results support a major anticonvulsant role for fish oil against MMA-induced seizures. The decreased sensitivity of Na+,K+-ATPase from fish oil-treated animals to the inhibitory effect of PGE2 may be related to its currently reported anticonvulsant activity. / A acidemia metilmalônica é um erro inato do metabolismo caracterizado pelo acúmulo tecidual de ácido metilmalônico (MMA) e disfunção neurológica, incluindo convulsões. Os ácidos graxos dietéticos são conhecidos como fonte de energia e reduzem a atividade convulsivante em determinados modelos experimentais agudos de convulsão. Este estudo investiga se o tratamento crônico com óleo de peixe ou com ácido oléico atenua as convulsões induzidas por MMA. Ratos Wistar machos adultos foram tratados com óleo de peixe (85 mg / kg), ácido oléico (85 mg / kg) ou veículo (solução aquosa de Cremophor EL® 0,42%, 4 mL / kg de peso corporal / dia), via oral, por 75 dias. No 73º dia foi implantada uma cânula no ventrículo lateral direito e dois eletrodos sobre o córtex parietal para o registro eletroencefalográfico. No 76º dia metade dos animais de cada grupo foi injetada com NaCl (2,5 Smol / 2,5 SL, i.c.v.), e outra metade com MMA (2,5 Smol / 2,5 SL, i.c.v.), e a atividade convulsiva foi medida por EEG e monitoramento comportamental concomitantemente. O efeito da prostaglandina E2 (PGE2) na atividade Na+, K+-ATPase foi determinada em fatias de córtex cerebral dos animais injetados com NaCl (controle). A administração de óleo de peixe aumentou a latência para as convulsões tônico-clônicas induzidas por MMA e reduziu a amplitude média dos registros ictais de EEG. O ácido oléico diminuiu a amplitude média dos registros ictais de EEG. O tratamento com óleo de peixe preveniu a diminuição da atividade da Na+, K+-ATPase induzida por PGE2 em fatias corticais in vitro. Os resultados suportam um papel importante anticonvulsivante do óleo de peixe sobre as convulsões induzidas por MMA. A prevenção da redução da Na+, K+-ATPase induzida por PGE2 nos animais tratados com óleo de peixe pode estar relacionada à sua atividade anticonvulsivante atualmente relatada.

Fundação de Amparo a Pesquisa no Estado do Rio Grande do Sul / Despite the large number of antimicrobials and anti-tumor drugs, therapeutic arsenal is limited due to the emergence of bacterial resistance mechanisms and refractoriness, besides the toxicity of certain drugs. This has contributed to advances in scientific research, especially those aimed at obtaining new active agents against infectious diseases and cancer, with innovative and less toxicity mechanisms. From this perspective, due to the great versatility and diverse pharmacological properties demonstrated by triazenes (TZCs) This study aimed to evaluate in vitro biological activity of two compounds unpublished TZCs complexed with platinum (II): {trans [1- (2-bromophenyl ) -3- (2-nitrophenyl) triazenido) bis (pyridine) (chloro) platinum (II)} (C1) and cis- {[1- (2-nitrophenyl) -3- (2-bromofenil) triazenido)] (ditrifenilfosfina ) (chloro) platinum (II)} (C2). The antibacterial activity was performed by the conventional method of broth microdilution, by evaluating the minimum inhibitory concentration (MIC) against the bacterial strains benchmark American Type Culture Collection (ATCC) and clinical isolates with multiple resistance to drugs (RMD). Cytotoxicity was assessed by colorimetric assay based on reduction of 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) compared to the bone marrow cells from patients diagnosed with leukemia treated at the University Hospital of Santa Maria. The chemical nuclease activity was verified by electrophoresis in agarose gel. According to the results showed that both compounds have antibacterial activity TZCs. The C1 complex showed activity against E. faecalis 51299, 15305 S. saprophyticus, E. faecalis 29212, S. aureus ATCC 25923 and S. aureus ATCC 29213. The C2 complex was able to inhibit growth of a bacterium RMD S. epidermidis 27. The studied complexes showed narrow spectrum of activity being active only against Gram positive bacteria. In addition, C1 promoted high percentage of cell death in the face of patient cells with Chronic Myeloid Leukemia (LMC) of 50.23% 75.59% will. With respect to nuclease activity, in investigated conditions, the compounds were not able to cleave the plasmid DNA. This study reflects the broad antimicrobial and cytotoxic activity of TZCs compounds. / Apesar do grande número de medicamentos antimicrobianos e antitumorais existentes, o arsenal terapêutico encontra-se limitado em virtude do surgimento de mecanismos de resistência bacteriana e refratariedade, além da toxicidade de alguns fármacos. Tal fato tem contribuído para os avanços nas investigações científicas, especialmente, aquelas que visam a obtenção de novos agentes ativos contra doenças infecciosas e o câncer, com mecanismos inovadores e menor toxicidade. Nessa perspectiva, devido a grande versatilidade e diversas propriedades farmacológicas demonstradas pelos triazenos (TZCs) este estudo teve como objetivo a avaliação in vitro da atividade biológica de dois compostos TZCs inéditos complexados com Platina (II): {trans[1-(2-bromofenil)-3-(2-nitrofenil)triazenido)-bis-(piridina)(cloro)platina(II)} (C1) e {cis[1-(2-nitrofenil)-3-(2-bromofenil)triazenido)](ditrifenilfosfina)(cloro)platina(II)} (C2). A atividade antibacteriana foi realizada pelo método convencional da microdiluição em caldo, através da avaliação da concentração inibitória mínima (CIM), frente às cepas bacterianas padrão de referência American Type Culture Collection (ATCC) e isolados clínicos com resistência múltipla às drogas (RMD). A citotoxicidade foi investigada através do ensaio colorimétrico baseado na redução do brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5 difeniltetrazólio (MTT) frente às células de medula óssea provenientes de pacientes diagnosticados com leucemia, atendidos no Hospital Universitário de Santa Maria. A atividade de nuclease química foi verificada por meio da técnica de eletroforese em gel de agarose. De acordo com os resultados, observou-se que ambos os compostos TZCs possuem atividade antibacteriana. O complexo C1 demonstrou atividade frente a E. faecalis 51299, S. saprophyticus 15305, E. faecalis 29212, S. aureus ATCC 25923 e S. aureus ATCC 29213. O complexo C2 foi capaz de inibir o crescimento de uma bactéria RMD, S. epidermidis 27. Os complexos estudados demonstraram atividade de estreito espectro sendo ativos somente frente a bactérias Gram positivas. Além disso, C1 promoveu elevada porcentagem de morte celular frente às células de paciente com Leucemia Mieloide Crônica (LMC) de 50,23% à 75,59%. No que se refere à atividade de nuclease, nas condições investigadas, os compostos não foram aptos a clivar o DNA plasmidial. Esse estudo reflete a ampla atividade antimicrobiana e citotóxica dos compostos TZCs.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The presence of pharmaceuticals in the aquatic environment has long been reported for some years in various studies. However, the impact of drugs on organisms present in aquatic ecosystems is still poorly known. Thus, we investigated the effects of acute exposure to diazepam or fluoxetine on the response to acute stress in zebrafish (Danio rerio). Fish were exposed to drugs for 15 minutes and, after this period, the group designated time 0 was collected; the other groups were subjected to a stimulus of stress, which consisted in persecution of fish with a net for two minutes, and after that, were collected at the times of 15, 60 and 240 minutes. Three concentrations of diazepam 0.88 μg/L (environmental concentration) were used; 16 μg/L; and 160 μg/L, concentrations that cause behavioral effects in zebrafish. Regarding fluoxetine at concentrations of 1 μg/L, 25 μg/L and 50 μg/L (25 to 50 times the concentration of the environment, respectively) were used. Our results show that diazepam and fluoxetine inhibit the axis of stress in the zebrafish. The intermediate concentration of diazepam is able to suppress the stress response, as measured by levels of cortisol whereas the fluoxetine is able to inhibit the stress response at concentrations similar to those found in the environment. Fish with an impaired stress response loses the ability to maintain homeostasis against stress factors, since it reduces the ability to promote ionic, metabolic and behavioral adjustments necessary for such response. Thus, these data suggest that the presence of psychoactive drugs in aquatic ecosystems may cause neuroendocrine dysfunction in fish. / A presença de produtos farmacêuticos no ambiente aquático tem sido relatada há alguns anos em vários estudos. No entanto, o impacto de medicamentos sobre os organismos presentes nesses ecossistemas ainda é pouco conhecido. Assim, investigamos os efeitos da exposição aguda ao diazepam e à fluoxetina sobre a resposta ao estresse agudo em zebrafish (Danio rerio). Os peixes foram expostos aos fármacos por 15 minutos e, após esse período, o grupo denominado tempo 0 foi coletado; os demais grupos foram submetidos a um estímulo de estresse, com perseguição dos peixes com uma rede durante dois minutos, e, após, foram coletados nos tempos de 15, 60 e 240 minutos. Foram utilizadas três concentrações de diazepam a 0,88 μg/L (concentração ambiental); 16 μg/L; e 160 μg/L, concentração com efeitos comportamentais relatados em zebrafish. Em relação à fluoxetina, foram utilizadas as concentrações de 1 μg/L, 25 μg/L e 50 μg/L (25 a 50 vezes a concentração do ambiente, respectivamente). Nossos resultados demonstram que o diazepam e a fluoxetina inibem o eixo de estresse no zebrafish. A concentração intermediária de diazepam é capaz de suprimir a resposta de estresse, conforme se mediu pelos níveis de cortisol, ao passo que a fluoxetina é capaz de inibir a resposta ao estresse em concentrações semelhantes às encontradas no ambiente. Peixes com resposta de estresse prejudicada perdem a capacidade de manter a homeostase contra fatores de estresse, uma vez que reduz a capacidade de promover ajustes iônicos, metabólicos e comportamentais necessários para tal resposta. Assim, esses dados sugerem que a presença de fármacos psicoativos em ecossistemas aquáticos pode causar disfunção neuroendócrina em peixes.

The use of hemocomponents from blood group "O" in transfusions among different blood groups may lead to transfusion reactions if the anti-A and anti-B agglutinins, present in the donor s serum / plasma, show high titers scores equal to or higher than 100. The transfusion reactions most reported with antibodies of high titers are caused by platelet concentrate, due to the presence of plasma in this hemocomponent. Considering the small number of studies on the anti-A and anti-B hemolysins and the importance of these antibodies in transfusion practice, the goal of this work was to verify the frequency of these hemolysins and their association to genre and Rh factor in 500 serum samples of type "O" registered donors at the Blood Center of Cruz Alta, RS. The results showed that the frequency of donor blood group "O" considered dangerous was 11.6% (58), and non-dangerous 88.4% (442). There was a predominance between the dangerous 50% (29) to reactive anti-A hemolysin , 37.9% (22) anti-B and 12.1% (7) for agglutinins anti-A and anti-B. Sampling of donors was not homogeneous regarding sex and not the type of blood factor, prevailing men 65% (325), Rh positive. There was no correlation between antibody screening Irregulars (PAI) with regular search antibody anti-A and anti-B. Also there was no assocation betwiin the prevalence in the variables gender, blood Rh factor anti anti-A and anti-B. It was noticed that the anti-A shows reaction under great in comparison with the anti-B thus both react in 100% of cases to1/16 however, the anti-Adecreas its percentage from1/128 whereas anti-B 1/32. The age prevalence of dangerous donors for anti-A was between 33 to 46 years, anti-B from 16 to 25 years and for both antibodies between 25 and 33 years. The results of this research can be used to measure the prevalence of these hemolysins and prevent risks of incompatible transfusion events, since in transfusion practice there is greater availability of group "O" donors and these are not classified as risk-donor "O" yet. Thus, in the search for excellence in transfusion practice and, above all, effectivenessly, it is essential to standardize the Regular Antibodies Research. / O uso de hemocomponentes do grupo sanguíneo O em transfusões nãoisogrupo pode acarretar reações transfusionais, caso as aglutininas anti-A e anti-B presentes no soro/plasma do doador, apresentem títulos elevados com escore igual ou superior a 100. As reações transfusionais mais relatadas com anticorpos de altos títulos são ocasionadas por concentrado de plaquetas, devido à presença de plasma neste hemocomponente. Considerando a pequena quantidade de estudos sobre as hemolisinas anti-A e anti-B e a importância desses anticorpos na prática transfusional, o objetivo deste trabalho foi verificar a freqüência dessas hemolisinas e a associação a gênero e fator Rh em 500 amostras de soros dos doadores tipo O cadastrados no Hemocentro de Cruz Alta,RS. Os resultados mostraram que a freqüência dos doadores de sangue do grupo O considerados perigosos foi de 11,6% (58), e de não-perigosos 88,4% (442). Constatou-se uma predominância entre os perigosos, de 50% (29) reativos para hemolisina anti-A, 37,9% (22) anti-B e 12,1% (7) para aglutininas anti-A e anti-B. A amostragem dos doadores não foi homogênea quanto ao sexo e nem quanto ao tipo de fator sanguíneo, prevalecendo homens 65% (325), Rh positivo 80,4% (402). Não houve correlação entre a Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI) com a Pesquisa dos Anticorpos Regulares anti-A e anti-B. Também não existiu prevalência na associação entre as variáveis gênero, fator sanguíneo Rh e anticorpo anti-A e anti-B. Percebeu-se que o anticorpo anti-A apresenta título maior de reação em comparação com o anti-B pois, ambos reagem em 100% dos casos até 1/16 porém, anti-A diminui seu percentual de reação a partir de 1/128 enquanto que anti-B em 1/32. A faixa etária de prevalência de doadores perigosos para anti-A foi entre 33 a 46 anos, anti-B entre 16 a 25 anos e para ambos anticorpos entre 25 e 33 anos. Os resultados desta pesquisa podem servir para mensurar a prevalência destas hemolisinas e prevenir riscos de episódios transfusionais incompatíveis, visto que na prática transfusional ocorre maior disponibilidade de doadores do grupo O e estes ainda não são classificados como doadores O perigosos. Assim, na busca pela prática transfusional com excelência e, sobretudo, com eficácia, torna-se imprescindível a padronização da Pesquisa de Anticorpos Regulares.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work aimed the preparation of clotrimazole-loaded nanocapsule suspensions for vulvovaginal fungal infections treatment. For the first time, virgin coconut oil and medium chain triglycerides were used as an oil core of polymeric nanocapsules containing clotrimazole. The analytical method for quantification of this drug into nanoparticles was developed and validated. The method proved to be selective, linear, precise, accurate and robust. Using the method of interfacial deposition of preformed polymer, the nanoparticles were successfully prepared at three different concentrations of clotrimazole (1, 2 and 3 mg/mL). The physicochemical parameters measured were pH, particle diameter, polydispersity index, drug content, encapsulation efficiency, zeta potential and stability in storage during 60 days. The encapsulation efficiency was near to 100%, zeta potential was positive due to the cationic polymer employed, the pH was around 5.6 and drug contents were close to the theoretical values. The size distribution was nanometer (140-200 nm) with polydispersity index lower than 0.2. The formulations had adequate physicochemical characteristics and were stable during storage. Photodegradation studies have shown that the nanoencapsulation improved the stability of clotrimazole against UVC radiation compared to free drug solution after 14 hours of experiment. The in vitro drug release using the dialysis bag technique was characterized by a prolonged release. No burst effect was observed. Profilesare based on an anomalous transport and first order kinetics, regardless of the oil used. The in vitro microbiological test of nanocapsules suspensions was performed against Candida albicans and Candida glabrata susceptible and resistant to fluconazole by microdilution method. In combination with clotrimazole into nanoparticles, medium chain triglycerides was reported to have similar MICs of methanolic solution containing the oil and the drug. In addition to the antifungal activity in solution, coconut oil did not lose its activity after incorporation into the nanostructures and, in combination with drug, showed greater inhibition of microbial growth than the nanocapsules of medium chain triglycerides with clotrimazole. Finally nanoparticle suspensions were incorporated into hydrogels containing polymers with mucoadhesive properties, Pemulen® and Pullulan, which presented appropriate drug content, pH and spreadability. The formulations developed in this study represent promising alternatives for treatment of vulvovaginal candidiasis. / Este trabalho objetivou a preparação de suspensões de nanocápsulas contendo clotrimazol para o tratamento de infecções fúngicas vulvovaginais. Pela primeira vez, o óleo de coco virgem e os triglicerídeos de cadeia média foram empregados como núcleo oleoso de nanocápsulas poliméricas contendo clotrimazol. A metodologia analítica para a quantificação do fármaco nas nanopartículas foi desenvolvida e validada. O método mostrou-se seletivo, linear, preciso, exato e robusto. A partir do método de deposição interfacial do polímero pré-formado, as nanopartículas foram preparadas com sucesso em três concentrações diferentes de clotrimazol (1, 2 e 3 mg/mL). Os parâmetros físico-químicos avaliados foram pH, diâmetro de partícula, índice de polidispersão, teor, eficiência de encapsulamento, potencial zeta e estabilidade frente ao armazenamento por 60 dias. A eficiência de encapsulamento foi próxima a 100%, o valor do potencial zeta foi positivo devido ao polímero catiônico empregado, valor de pH em torno de 5,6 e teores de fármaco próximos aos teóricos. A distribuição de tamanho foi nanométrica (140-200 nm), com índice de polidispersão menor que 0,2. As formulações apresentaram características físico-químicas adequadas e foram estáveis durante o armazenamento. Estudos de fotodegradação mostraram que o nanoencapsulamento melhorou a estabilidade do clotrimazol sob radiação UVC, em comparação com a solução do fármaco livre, após 14 horas de experimento. A liberação do fármaco in vitro, a partir da técnica de sacos de diálise, foi caracterizada como uma liberação prolongada sem efeito burst, que foi mediada por transporte anômalo e seguiu cinética de primeira ordem, independente do óleo utilizado. As suspensões foram capazes de diminuir a velocidade de liberação do clotrimazol nas 24 horas de experimento. A partir do método de microdiluição, procedeu-se a avaliação microbiológica in vitro das suspensões de nanocápsulas contra Candida albicans e Candida glabrata sensíveis e resistentes ao fluconazol. Em combinação com o clotrimazol nas nanopartículas, os triglicerídeos de cadeia média apresentaram valores de CIMs semelhantes à solução metanólica contendo o óleo e o fármaco. Além de apresentar atividade antifúngica em solução, o óleo de coco não perdeu sua atividade após a incorporação na nanoestrutura e, em associação com o fármaco, apresentou maior inibição do crescimento microbiano do que as nanocápsulas de triglicerídeos de cadeia média com clotrimazol. Por fim, as suspensões nanoparticuladas foram incorporadas em hidrogéis contendo polímeros com propriedades mucoadesivas, Pemulen® e Pullulan, que apresentaram teor, pH e espalhabilidade adequados. As formulações desenvolvidas neste estudo representam alternativas promissoras para o tratamento da candidíase vulvovaginal.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Cystic echinococcosis (CE) is a zoonotic disease caused by Echinococcus genus. The larval stage (hydatid cyst) of the parasite causes serious public health problems, and affects various species of animals, causing economic losses to the meat industry. This study aimed to identify samples of fertile hydatid cysts in cattle and characterize them molecularly, analyzing in vitro and ex vivo Melaleuca alternifolia oil activity (tea tree oil - TTO) and its formulation in nanoemulsion (NE-TTO) and saris an (terpinen 4-ol) front to protoscolices of Echinococcus spp. Two thousand three hundred and ninety-six samples with cysts derived from an abattoir in the central region of the RS were analyzed, where 295 samples were classified as hydatid cysts by the presence of protoscolices. In PCR reactions for the 12S gene, 251 positive samples were identified for the group of genotypes G5/G6/G7 (E. ortleppi/ E. canadensis) and 40 samples for the G1 genotype (E. granulosus sensu stricto). In PCR subsequently, 250 samples were positive for G5 (E. ortleppi) and one sample for G7 (E. canadensis). A sample (n=12) of PCR products using the region of cox I gene, which was sequenced and compared with samples deposited in Genbank. Phylogenetic analysis identified three distinct groups E1, E2 and E3, which were grouped in sequences with greater similarity. The organ most affected by echinococcosis in cattle was the lung. After confirming the fertility of the cyst, protoscolices were removed and evaluated for viability using eosin 0.1%. For in vitro testing, concentrations of 2.5, 5 and 10 mg/mL of TTO, 10mg/mL of NE-TTO and 1, 1.5 and 2 mg/mL of terpinen-4-ol were analyzed front to protoscolices of E. ortleppi previously identified, in times of 5, 10, 15 and 30 minutes. For ex vivo test, TTO 10mg/mL and 20mg/mL was injected directly into hydatid cysts of E. ortleppi (n = 20) at times of 5, 15 and 30 minutes, and for each time one aliquot of protoscolices was removed for feasibility detection and implementation of PCR to confirm the species involved in the parasitism. Results of this in vitro study showed the protoscolicidal effect of M. alternifolia in all tested formulations and concentrations. Terpinen-4-ol (2mg/mL) had a better action when compared with the highest concentration of pure oil (TTO 10mg/mL). Nanoemulsion formulations (10mg/mL) showed a good activity front to the protoscolices. In ex vivo analysis, TTO (20mg/mL) showed 100% protoscolicidal action in hydatid cyst in 15 minutes. This study is pioneer in Brazil in identifying the potent effect of protoscolicidal M. alternifolia front protoscolices of E. ortleppi, being this kind of Echinococcus genus responsible for most fertile hydatid cysts analyzed in cattle in RS. / A equinococose cística (EC) é uma infecção zoonótica causada por parasito do gênero Echinococcus. O estágio larvário (cisto hidático) do parasito causa sérios problemas de saúde pública, além de acometer várias espécies de animais, ocasionando prejuízos econômicos à indústria de carnes. Neste contexto, o objetivo desse estudo foi identificar amostras de cistos hidáticos férteis em bovinos e caracterizá-las molecularmente, além de analisar in vitro e ex vivo a atividade anti-helmíntica do óleo de Melaleuca alternifolia (TTO), bem como sua formulação em nanoemulsão (NE-TTO) e seu componente majoritário (terpinen 4-ol) frente aos protoescóleces de Echinococcus spp. Foram analisadas 2396 amostras de cistos oriundos de bovinos abatidos em frigorífico da região central do RS, onde 295 amostras foram classificadas como cistos hidáticos pela presença de protoescóleces. Nas reações de PCR para o gene 12S, pode-se identificar 251 amostras positivas para o grupamento de genótipos G5/G6/G7 (E. ortleppi/ E. canadensis) e 40 amostras para o genótipo G1 (E. granulosus sensu stricto). Em subsequente PCR foram identificadas 250 amostras positivas para G5 (E. ortleppi) e uma amostra positiva para G7 (E. canadensis). Uma amostragem (n=12) dos produtos de PCR utilizando o gene da região cox I, foi sequenciada e comparada com amostras depositadas no Genbank. A análise filogenética identificou três grupos distintos E1, E2 e E3, onde agruparam-se sequências com maior similaridade. O órgão mais acometido pela parasitose em bovinos foi o pulmão. Após a confirmação da fertilidade do cisto, os protoescóleces foram retirados e avaliados quanto à viabilidade utilizando eosina 0.1%. Para o teste in vitro, concentrações de 2.5, 5 e 10mg/ml de TTO, 10mg/ml de NE-TTO e 1, 1.5 e 2mg/ml de Terpinen 4-ol foram analisadas frente aos protoescóleces de E. ortleppi previamente identificados, nos tempos de 5, 10, 15 e 30 minutos. Para o teste ex vivo, TTO 10mg/ml e 20mg/ml foi injetado diretamente em cistos hidáticos de E. ortleppi (n=20) nos tempos de 5, 15 e 30 minutos, para cada tempo foi retirada uma alíquota de protoescóleces para detecção da viabilidade e realização do PCR para confirmação da espécie envolvida na parasitose. Os resultados deste estudo in vitro indicaram efeito protoescolicida de M. alternifolia em todas as formulações e concentrações testadas. O Terpinen 4-ol (2mg/ml) obteve uma melhor ação quando comparado com a maior concentração testada do óleo puro (TTO 10mg/ml). As formulações em nanoemulsão (10mg/ml) demonstraram atividade frente aos protoescóleces. Na análise ex vivo, TTO (20mg/ml) apresentou 100% de ação protoescolicida no cisto hidático em 15 minutos. O presente estudo torna-se pioneiro no Brasil a identificar o potente efeito protoescolicida de M. alternifolia frente aos protoescóleces de E. ortleppi, sendo essa espécie do gênero Echinococcus a responsável pela maior parte dos cistos hidáticos férteis analisados em bovinos no RS.