Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / We investigated the action of butane-2,3-dione thiosemicarbazone oxime against the testicular damage caused by cadmium chloride (CdCl2) in mice swiss adult male. The animals received a single injection of CdCl2 at the dose of 5 mg/kg, intraperitoneally, and after thirty minutes, the oxime was administered subcutaneously at the dose of 10 mg/kg. Twenty four hours after administration of the oxime, the animals were euthanized the blood were collected and after killed the testes were removed for analysis. The parameters determined were δ-aminolevulinate dehydratase (δ-ALA-D), myeloperoxidase (MPO), glutathione-S-transferase (GST) and glutathione peroxidase (GPx) activities, in testicular tissue. The levels of thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS), nonprotein thiols (NPSH), ascorbic acid and the quantity of cadmium in testes were also evaluated. In addition, levels of testosterone in serum and cytokines (proinflammatory, IL-1, IL-6, TNF-α, IFN-γ and anti-inflammatory IL-10) were determined. Histological analysis of testicular tissue was also performed. Our results demonstrated that the oxime was effective in restoring partially the inhibition in δ-ALA-D activity induced by CdCl2. The activation of MPO and increase in IL-1, IL-6, TNF-α and IFN-γ levels induced by CdCl2 were also reduced by oxime. IL-10, which was reduced by cadmium, was partially restored by oxime administration. In addition, the oxime was effective in restoring the increase in TBARS levels and partially the reduction on NPSH levels induced by CdCl2. However, the oxime did not have action on the decreased levels of ascorbic acid induced by CdCl2 or on the decrease in enzymatic activity of GST and the increased enzymatic activity of GPx caused by CdCl2. Our results demonstrated that oxime was effective in restoring the histological alterations induced by CdCl2, preventing the loss of elongated spermatids. In addition, oxime was able to increase the testosterone levels reduced by cadmium exposure. In conclusion, the oxime tested was effective in reducing the testicular damage induced by CdCl2 in mice. The beneficial effects of this oxime are related to its antioxidant and anti-inflammatory action. / Investigamos a ação da oxima butano-2,3-dionatiossemicarbazona contra o dano testicular causado por cloreto de cádmio (CdCl2) em camundongos swiss adultos machos. Os animais receberam uma única injeção de CdCl2 na dose de 5mg/kg, intraperitonialmente e, após trinta minutos, foi administrada a oxima subcutâneamente na dose de 10 mg/kg. Vinte quarto horas após a administração da oxima, os animais foram anestesiados o sangue foi coletado, após a eutanásia tiveram os testículos removidos para as análises. Os parâmetros determinados foram as atividades das enzimas δ-aminolevulinato desidratase (δ-ALA-D), mieloperoxidase (MPO), glutationa-S-transferase (GST) e glutationa peroxidase (GPx), no tecido testicular. Os níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), tióis não protéicos (NPSH), ácido ascórbico e quantidade presente de cádmio nos testículos também foram avaliados. Além dos níveis de testosterona no soro, onde também se quantificou as citocinas (pró-inflamatórias IL-1, IL-6, TNF-α, IFN-γ e anti-inflamatória, IL-10). Também foi realizada a análise histológica de tecido testicular. Nossos resultados demonstraram que a oxima foi efetiva em restaurar parcialmente a inibição da atividade da enzima δ-ALA-D induzida por CdCl2. A ativação da MPO e o aumento dos níveis de IL-1, IL-6, TNF-α e IFN-γ induzidos por CdCl2 também foram reduzidos pela oxima. A IL-10, que foi reduzida pelo cádmio, teve seus níveis restaurados parcialmente pela oxima. Além disso, a oxima foi efetiva em restaurar o aumento nos níveis de TBARS e parcialmente a redução nos níveis de NPSH induzidos pelo CdCl2. Porém, não teve ação sobre a queda dos níveis de ácido ascórbico provocado pelo CdCl2, nem sobre a diminuição da atividade enzimática da GST e sobre o aumento da atividade enzimática da GPx causados pelo CdCl2. Nossos resultados demonstraram que a oxima foi efetiva em conter as alterações histológicas causadas pelo CdCl2, prevenindo a perda de espermátides alongadas. A oxima também foi capaz de aumentar os níveis de testosterona reduzidos pela exposição ao cádmio. Em conclusão, a oxima testada foi efetiva em reduzir os danos testiculares induzidos pelo CdCl2. Os efeitos benéficos desta oxima estão relacionados às suas propriedades antioxidantes e sua ação anti-inflamatória.

The effects of water pH, hardness and temperature on anesthesia induction and recovery in silver catfish exposed to different concentrations of eugenol (20, 30 and 40 mg/L) were investigated. Moreover, the effects of anesthesia and temperature on blood gases tensions (PvO2 and PvCO2) and pH were also analyzed in juveniles I (3.5 ± 0.7 g; 7.7 ± 0.8 cm) and juveniles II (152.2 ± 3.4 g; 26.6 ± 3.3 cm) of silver catfish. Water quality and fish size affect efficacy of eugenol in silver catfish, mainly in the lower concentrations tested. Sedation of this species can be induced even with 20 mg/L, but for anesthesia a concentration of at least 40 mg/L eugenol must be used to reduce the influence of the studied fish size and water quality. Blood gases tensions and pH were affected by eugenol anesthesia only in fish acclimated to 30 oC. / Investigou-se os efeitos do pH, dureza e temperatura da água sobre a indução à anestesia e recuperação em jundiás expostos a diferentes concentrações de eugenol (20, 30 e 40 mg/L). Além disso, os efeitos da anestesia e temperatura sobre as pressões parciais dos gases sanguíneos (PvO2 e PvCO2) e pH foram também analisados em juvenis I (3,5 ± 0,7 g; 7,7 ± 0,8 cm) e juvenis II (152,2 ± 3,4 g; 26,6 ± 3,3 cm) de jundiá. A qualidade da água e o tamanho do peixe afetam a eficácia do eugenol em jundiá, principalmente nas menores concentrações testadas. A sedação desta espécie pode ser induzida com 20 mg/L, mas para a anestesia uma concentração de cerca de 40 mg/L de eugenol deve ser utilizada para reduzir a influência do tamanho do peixe e da qualidade da água. As pressões parciais dos gases sanguíneos e o pH foram afetados pelo eugenol durante a anestesia em peixes aclimatados a 30oC.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fatty acids (FA) from the diet play a key role in the architecture of brain membrane phospholipids, and can modify plasticity and fluidity, acting decisively in the development of cognitive and neuropsychiatric disorders. Healthy lifestyle habits include balanced diet and physical activity, which has regularly been described as a form of rehabilitation or prevention of diseases affecting the CNS. This study was initially designed to evaluate the influence of regular exercise in preventing oxidative damage commonly induced by haloperidol. Exercise prevented the development of orofacial dyskinesia (OD) and antipsychotic-induced locomotor impairments. The catalase activity was recovered in the subcortical region, preventing cortical and subcortical lipoperoxidation. Also in the subcortical region, there was a positive correlation between lipid peroxidation and the OD, concurrent with a negative correlation between catalase activity and OD. While these data reinforce the involvement of oxidative stress (OS) in the development of movement disorders, physical exercise was able to increase the activity of the dopamine transporter, thereby helping to reduce levels of the neurotransmitter in the striatum, often elevated by the antipsychotic action. In the following studies, weaned rats were supplemented with different FA (soybean oil-SO, rich in polyunsaturated FA; lard-L, rich in saturated FA; and hydrogenated vegetable fat-HVF, rich in trans fatty acids) and daily exercised in the last three months. After 15 months, the animals were assigned to experiment 1 or 2. In the first one, was evaluated anxiety behavior (elevated plus-maze), memory (Barnes-maze), and the activity of Na+K+-ATPase in the cortex and hippocampus. The HVF supplementation caused an incorporation of about 0.30% of trans FA in the rat s brain, whereas L of 0.20%, with no observed trans incorporation in SO group. This incorporation did not influence the symptoms of anxiety in HVF and L groups, but the exercise benefited the SO group, increasing their exploratory and risk behavior. A memory deficit was observed in the HVF, but reversed by physical exercise, equaling the memory acquisition of the three experimental groups. The activity of Na+K+-ATPase was lower in the cortex and hippocampus of animals treated with HVF and was not modified by exercise. In the 2nd experiment, rats supplemented with the different FA showed similar brain incorporation as described above. These animals were submitted to behavioral assessments of OD, locomotion and activity of Na+K+-ATPase and catalase in the striatum. The HVF supplementation was associated with increased OD, which was intensified by the exercise in the HVF and L groups. The locomotion was reduced in these two groups and was not modified by exercise. The catalase activity was lower in L and HVF groups, but elevated by exercise in the latter one. The different FA did not alter the Na+K+-ATPase activity, which was elevated by exercise in animals supplemented with L and SO. The brain incorporation of trans FA may be related to the motor impairments mainly observed in the HVF group, while the absent incorporation in the SO group, with the best motor performance and enzymatic activities. Taken together, the presented data suggest that healthy lifestyle habits, which include reduced intake of saturated and trans FA and the regular practice of physical activity, may be able to prevent and/or reduce the development or the consequences of neurological and neuropsychiatric disorders. / Ácidos graxos (AG) provenientes da alimentação são fundamentais na arquitetura das membranas fosfolipídicas cerebrais, e podem modificar plasticidade e fluidez, atuando de forma decisiva no desenvolvimento de patologias cognitivas e neuropsiquiátricas. Hábitos de vida saudável incluem alimentação balanceada e atividade física, cuja regularidade tem sido descrita como uma forma de prevenção ou reabilitação de doenças que afetam o SNC. Este estudo foi inicialmente designado para avaliar a influência do exercício regular na prevenção de danos oxidativos comumente induzidos por haloperidol. O exercício preveniu o desenvolvimento de discinesia orofacial (DO) e os prejuízos locomotores induzidos pelo antipsicótico. A atividade da catalase foi recuperada na região subcortical, prevenindo a lipoperoxidação cortical e subcortical. Ainda na região subcortical, houve uma correlação positiva entre a lipoperoxidação e a DO, concomitante à uma correlação negativa entre a atividade da catalase e a DO. Enquanto estes dados reforçam o envolvimento do estresse oxidativo (EO) no desenvolvimento dos distúrbios do movimento, o exercício físico foi capaz de aumentar a atividade do transportador de dopamina, contribuindo para a redução dos níveis do neurotransmissor no estriado, freqüentemente elevado por ação do antipsicótico. Na seqüencia dos estudos, ratos recém desmamados foram suplementados com diferentes AG (óleo de soja-OS, rico em AG poliinsaturados; banha de porco-BP, rico em AG saturados; e gordura vegetal hidrogenada-GVH, rico em AG trans) e exercitados diariamente nos 3 meses finais. Após 15 meses, os animais foram designados para o experimento 1 ou 2. No primeiro, avaliou-se comportamentos de ansiedade (labirinto em cruz elevado), memória (labirinto de Barnes), bem como a atividade da Na+K+-ATPase no córtex e hipocampo. A suplementação GVH causou uma incorporação de cerca de 0,30% de AG trans no cérebro dos animais, enquanto a BP de 0,20%, não sendo observada incorporação trans no grupo OS. Esta incorporação não influenciou os sintomas de ansiedade nos grupos BP e GVH, mas o exercício beneficiou o grupo OS, aumentando seu comportamento exploratório e de risco. Um déficit de memória foi observado no grupo GVH, mas revertido pelo exercício físico, igualando a aquisição de memória dos três grupos experimentais. A atividade da Na+K+-ATPase foi menor no córtex e hipocampo dos animais tratados com GVH, não sendo modificada pelo exercício. No 2º experimento, ratos suplementados com os diferentes AG apresentaram incorporação cerebral similar aos acima descritos. Estes animais foram submetidos a avaliações comportamentais de DO, locomoção e atividade das enzimas Na+K+-ATPase e catalase no estriado. A suplementação GVH foi associada ao aumento da DO, a qual foi intensificada pelo exercício nos grupos GVH e BP. A locomoção foi reduzida nestes dois grupos e não foi modificada pelo exercício. A atividade da catalase foi menor nos grupos BP e GVH, mas elevada pelo exercício neste último. Os diferentes AG não modificaram a atividade da Na+K+-ATPase, a qual foi elevada pelo exercício nos animais suplementados com OS e BP. A incorporação de AG trans nas membranas cerebrais pode estar relacionada aos prejuízos motores observados, principalmente, no grupo GVH, enquanto a ausência desta incorporação no grupo OS, ao melhor desempenho motor e atividades enzimáticas. Tomados em conjunto, os dados apresentados sugerem que hábitos de vida saudáveis, os quais incluem ingestão reduzida de AG trans e saturados e a prática regular de atividade física, podem ser capazes de prevenir e/ou reduzir o desenvolvimento ou conseqüências de desordens neurológicas e neuropsiquiátricas.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The association of haloperidol (HP) with polymeric nanocapsules causes a significant improve in therapeutic efficacy prolongs the drug time of action and reduces motor side effects in rats. However, in view of the HP toxicity on organs such as liver and kidney and besides due the lack of knowledge about the toxicity of polymeric nanocapsules, the objective of this study was to evaluate the effects of formulation containing haloperidol-loaded lipid-core nanocapsules on biochemical parameters and oxidative stress (OS) markers in the same tissues, besides DNA damage in blood. For this study, 28 rats were divided in four groups (n = 7) and treated with aqueous solution containing 5% polysorbate 80 (v/v) (C group), free haloperidol suspension (FH group), blank nanocapsules suspension (B-Nc group) and haloperidol-loaded lipid-core nanocapsules suspension (H-Nc group). All suspensions were administered in the animals (0,5 mg/kg-ip) once a day, for 28 days. The results showed that a subchronic treatment with FH increased oxidative damage evidenced by the elevation in lipid peroxidation levels and diminution in antioxidant defenses like vitamin C and superoxide dismutase enzyme, decreased cell integrity and increased plasma levels of AST and ALT enzymes. FH also caused damage to kidney, but to a lesser extent, and caused damage to blood DNA. On the other hand, rats treated with H-Nc did not present these alterations. Through this comparative study was possible evidence that H-Nc did not show subchronic toxicity in liver and kidney of animals, preserving these tissues from oxidative damage and loss of cell integrity, which were observed in animals treated with free drug. / A associação de haloperidol (HP) a nanocápsulas poliméricas proporciona uma significante melhora na eficácia terapêutica, prolonga o tempo de ação e reduz efeitos adversos motores em ratos. No entanto, tendo em vista a toxicidade do HP sobre órgãos como fígado e rim e o pouco conhecimento sobre a toxicidade das nanocápsulas poliméricas, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da formulação contendo haloperidol nanoencapsulado sobre parâmetros bioquímicos e marcadores de estresse oxidativo (EO) nestes mesmos tecidos, além do dano no DNA no sangue. Para este estudo, 28 ratos foram separados em quatro grupos experimentais (n=7) e tratados com solução aquosa contendo 5% polissorbato 80 (v/v) (grupo C), suspensão de haloperidol livre (grupo FH), suspensão de nanocápsulas branca (grupo B-Nc) e suspensão de haloperidol nanoencapsulado (grupo H-Nc). Todas as suspensões foram administradas aos animais (0,5 mg/kg-ip) uma vez por dia, durante 28 dias. Os resultados mostraram que o tratamento subcrônico com FH causou danos no fígado, evidenciado pelo aumento nos níveis de peroxidação lipídica e diminuição das defesas antioxidantes como vitamina C e superóxido dismutase, diminuição na integridade celular e aumento nos níveis plasmáticos das enzimas AST e ALT. O FH também causou danos no rim, mas em menor extensão, e causou danos ao DNA sanguíneo. Por outro lado, ratos tratados com H-Nc não apresentaram estas alterações. A partir deste estudo comparativo foi possível evidenciar que o haloperidol nanoencapsulado (H-Nc) não causou toxicidade subcrônica hepática e renal aos animais, preservando estes tecidos dos danos oxidativos e da perda da integridade celular, os quais foram observados nos animais tratados com o fármaco livre.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The advanced oxidation protein products (AOPPs) are a new class of compounds identified as markers of oxidative damage to proteins. The physiology role of these products is not limited to assess the oxidative stress, and these products may actively participate in the inflammatory process, promoting different cell disorders, including induction of apoptosis and alterations in the processes of cell proliferation and differentiation. Myeloperoxidase (MPO)-derived hypochlorous acid (HOCl) produced by activated neutrophils contribute significantly to AOPP formation, and human serum albumin (HSA) is considered the main protein responsible for the generation of AOPPs However, the molecular composition of AOPPs is unclear. Additional pathways and protein targets for AOPP formation are largely unknown. The aim of this study was to induce the formation of AOPPs in vitro through Fenton reaction and to investigate whether this generation could be counteracted by N-acetylcysteine (NAC) and fructose-1,6-bisphosphate (FBP). In addition, this study aimed to examine whether AOPPs produced by Fenton reaction may induce the activation of the gene transcription of inflammatory molecules, including the nuclear factor-κB (NF-κB), cyclooxygenase-2 (COX-2) and interleukin-6 (IL-6) in human embryonic kidney cells (HEK 293). Additionally, it was investigated the collagen as a potential source of AOPPs via its exposure to HOCl. The HOCl-modified collagen stimulated the production of oxidants, such as HOCl and superoxide anion radical (O2 -), and pro-inflammatory agents, such as nitric oxide (NO) and AOPPs in human neutrophil. Furthermore, HOCl-modified collagen induced a decrease in cell viability and an increase of apoptosis in these cells. Finally, alpha-tocopherol inhibited the release of oxidants, decreased cell viability and apoptosis, suggesting a therapeutic potential means to prevent deleterious effects caused by AOPPs. Furthermore, these findings indicate that alternative pathways can form AOPPs, and these new products may contribute to the pathogenesis of several clinical conditions related to the accumulation of AOPPs. / Os produtos proteicos de oxidação avançada (AOPPs) são uma nova classe de compostos formados em consequência do estresse oxidativo e considerados biomarcadores úteis na detecção de dano oxidativo proteico. No entanto, o papel desses produtos não se limita apenas a refletir o grau oxidativo de proteínas, mas também podem participar de forma ativa no processo inflamatório, promovendo diferentes perturbações celulares, incluindo a indução de apoptose e alterações nos processos de proliferação e diferenciação celular. O principal mecanismo de formação dos AOPPs é através do ácido hipocloroso (HOCl) produzido pela enzima mieloperoxidase (MPO), sendo a albumina, a principal fonte proteica para a formação desses produtos. No entanto, a via MPO/HOCl parece não ser a única responsável pela formação de AOPPs, e uma série de estudos indicam que há vias alternativas que podem contribuir para formação de AOPPs. Outro fator importante, que também não está totalmente esclarecido, é se a albumina é a única proteína suscetível a formação dos AOPPs, uma vez que a composição molecular desses produtos ainda não está totalmente definida. Além dessas questões, é de interesse avaliar se os AOPPs formados por outra via mantém as características pró-infamatórias e pró-apoptóticas dos AOPPs originados pela via MPO/HOCl. Assim, o presente estudo teve como objetivo investigar se a reação de Fenton, importante geradora de radicais hidroxilas (OH ), é uma potencial via de formação de AOPPs, bem como se o colágeno, principal proteína da matriz extracelular, é uma proteína suscetível a formação desses produtos. Em um primeiro momento, foi demonstrado que a reação de Fenton induziu a formação de AOPPs e esse processo foi inibido por agentes antioxidantes, como N-acetilcisteína (NAC) e frutose-1,6-bisfosfato (FBP). Além disso, os AOPPs gerados através da reação de Fenton induziram um aumento da transcrição gênica de agentes envolvidos no processo inflamatório, incluindo o fator de transcrição κB (NF-κB), a cicloxigenase-2 (COX-2) e a interleucina-6 (IL-6), em células renais embrionárias (HEK 293) através de ensaio de transfecção celular e atividade da Luciferase. Outro importante achado deste estudo foi demonstrar que o colágeno exposto ao HOCl também é uma fonte proteica para a formação de AOPPs. Os AOPPs formados a partir do colágeno estimularam a produção de oxidantes, como o HOCl e radical ânion superóxido (O2 -), e de agentes inflamatórios, como óxido nítrico (NO) e AOPPs, em neutrófilos humanos isolados. Além disso, os AOPPs derivados do colágeno induziram uma diminuição da viabilidade celular e um aumento do processo apoptótico nessas células. Por fim, o alfa-tocoferol inibiu a liberação de oxidantes, preveniu a diminuição da viabilidade celular e o aumento do processo apoptótico, sugerindo que esse composto pode ser uma potencial ferramenta terapêutica para prevenir os efeitos deletérios promovidos pelos AOPPs. Do mesmo modo, esses achados indicam que os AOPPs podem ser formados por vias alternativas, e esses novos produtos podem contribuir na fisiopatogênese de diversas condições clínicas relacionadas com o acúmulo de AOPPs.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Abnormal movements are clinical symptoms present in neurodegenerative diseases, such Parkinsonism , as well as Tardive dyskinesia. It is thought that unbalance in monoamine levels with their consequent metabolism could be involved in the etiology of these abnormal movements. However, until this moment there is not efficacious treatment with low side effects for these conditions. In this context, Hypericum perforatum (H. perforatum), popularly known as St. John s Wort, is a plant largely used as antidepressant and presenting high amount of polyphenol constituents. Its antidepressant mechanism seems to involve the increase of monoamines and monoaminoxidase inhibition. Here, we evaluated the effect of H. perforatum on different models of abnormal movements in rats, either using fluphenazine or reserpine. It were quantified the number of vacuous chewing movements (VCMs) and locomotor activity (number or rearings and crossings) in both models. In experiment 1, rats received a single administration of fluphenazine enantate (25 mg/Kg, i.m.) and/or H. perforatum (300 mg/Kg, in place of drinking water) during 7 days. Fluphenazine treatment increased VCMs and decreased the locomotor activity after 7 days of treatment. However, H. perforatum did not alter either the number of VCMs or the locomotor activity (represented by number of crossing and rearing in the open field test) in rats. In experiment 2, rats received reserpine administration once a day during 3 days (0.5 mg/Kg, s.c.) and/or H. perforatum (300 mg/Kg, in place of drinking water) during 16 days. Reserpine treatment increased VCMs and decreased the locomotor activity. H. perforatum did not alter the number of VCMs or the number of rearing. However, H. perforatum co-treatment could avoid the effect of reserpine on number of crossings. In conclusion, H. perforatum did not seem to be efficacious to protect against orofacial movements induced by fluphenazine or reserpine in rats. / As desordens motoras são sintomas de doenças neurodegenerativas bem como podem estar associadas ao tratamento com antipsicóticos. Cita-se como exemplo destas desordens, sintomas da Doença de Parkinson (DP) e a Discinesia Tardia (DT), respectivamente. O desequilíbrio cerebral nos níveis de monoaminas e, consequentemente, seu metabolismo tem sido relacionados ao desenvolvimento dos movimentos anormais que aparecem nas desordens motoras, tendo em vista que os circuitos dopaminérgicos estão envolvidos na gênese da DP e da DT. No entanto, ainda não existem tratamentos eficazes e com poucos efeitos colaterais para tais condições. A Hypericum perforatum (H. perforatum), popularmente conhecido como Erva de São João, consiste numa planta amplamente utilizada como antidepressiva e que possui uma grande quantidade de compostos fenólicos, cujo mecanismo para esta atividade está relacionado à inibição da monoamina oxidade (MAO) e da recaptação de monoaminas cerebrais. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar o efeito do H. perforatum em modelos de desordem motora induzida por flufenazina ou reserpina em ratos. Foram quantificados os movimentos de mascar no vazio (MMV) e atividade locomotora (cruzamentos e levantadas observados no teste de campo aberto) em ambos os modelos. No experimento 1, os ratos receberam uma única administração de enantato de flufenazina (25 mg/Kg, i.m.) e ou H. perforatum (300 mg/Kg, no lugar da água de beber) durante 7 dias. O tratamento com flufenazina aumentou o número de MMVs e diminuiu a atividade locomotora em ratos após 7 dias de tratamento. No entanto, o tratamento com H. perforatum não protegeu das alterações comportamentais causadas pelo tratamento com flufenazina. No experimento 2, os ratos receberam água ou H. perforatum (300 mg/Kg, no lugar da água de beber) durante 16 dias. A partir do dia 9 de tratamento os animais receberam uma administração diária de reserpina (0,5 mg/Kg, s.c.) ou veículo durante 3 dias com intervalo de 48 horas. A reserpina aumentou o número MMVs e diminuiu a atividade locomotora em campo aberto. O prétratamento com H. perforatum não alterou o efeito da reserpina sobre o número de MMVs e levantadas. Porém, o pré-tratamento com H. perforatum preveniu o efeito da reserpina sobre número de cruzamentos. Desta forma, podemos concluir que o H. perforatum não apresentou efeito benéfico sobre os movimentos orofaciais induzidos por flufenazina ou reserpina em ratos.

Background: Diabetic nephropathy (DN) is defined as a rise in urinary albumin excretion rate, often associated with an increase in blood pressure. It is the leading cause of end-stage renal disease and carries an increased risk for cardiovascular mortality. Microalbuminuria is the first sign of diabetic renal impairment or incipient nephropathy and is generally considered the best noninvasive predictor for the development of DN. Urinary markers of tubular damage are mainly composed of enzymes or plasma proteins of low molecular weight that are normally freely filtered by the glomerulus, and these biomarkers can be useful for diagnosis of DN. Thus, the aim of this study was to test the diagnostic accuracy of the urinary excretion of gama-glutamyltransferase (GGT) and alkaline phosphatase (ALP) for diagnosis of diabetic nephropathy (DN). Methods: Fasting glucose, fructosamine, serum creatinine, glomerular filtration rate (GFR), serum uric acid, serum albumin, and urinary albumin, creatinine, GGT and ALP were assessed in 74 type 2 diabetic patients without nephropathy and 38 type 2 diabetic patients with nephropathy. Results: Urinary GGT and ALP were threefold higher in type 2 diabetic patients with nephropathy. Significant correlations were observed between urinary albumin and GGT (r=0.439, P<0.001) and urinary albumin and ALP (r=0.305, P<0.01). Areas under the curve for GGT and ALP were 0.7696 (P<0.001) and 0.7233 (P<0.001), respectively. At a cut-off value of 72 U/g creatinine, GGT demonstrated a sensitivity of 96.0% and a specificity of 52.6%. At a cut-off value of 20 U/g creatinine, ALP demonstrated a sensitivity and specificity of 83.8% and 36.8%, respectively. Conclusions: Urinary GGT and ALP have potential value in the diagnosis of nephropathy in type 2 diabetic patients, but GGT has a slightly higher ability to discriminate nephropathy than ALP. / Introdução: A nefropatia diabética (ND) é definida como um aumento na taxa de excreção urinária de albumina, sendo esta frequentemente associada ao aumento da pressão sanguínea. A ND é a principal causa de doença renal em estágio final, estando também associada ao aumento do risco de mortalidade cardiovascular. A microalbuminúria é o primeiro sinal de dano renal ou nefropatia incipiente, sendo geralmente considerado o melhor preditor não-invasivo para o desenvolvimento de ND. Os marcadores urinários de dano tubular são principalmente compostos por enzimas ou proteínas plasmáticas de baixo peso molecular que são normalmente filtradas pelo glomérulo, sendo que estes biomarcadores podem ser úteis para o diagnóstico da ND. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar as características diagnósticas dos níveis urinários de gama-glutamiltransferase (GGT) e fosfatase alcalina (FAL) para o diagnóstico da ND. Métodos: Glicemia de jejum, frutosamina, creatinina sérica, taxa de filtração glomerular (TFG), ácido úrico, albumina, além dos níveis urinários de albumina, GGT e FAL foram mensurados em 74 pacientes diabéticos tipo 2 sem nefropatia e 38 pacientes diabéticos tipo 2 com nefropatia. Resultados: As enzimas GGT e FAL, mensuradas em amostras de urina, foram três vezes mais elevadas nos pacientes diabéticos tipo 2 com nefropatia. Foram observadas correlações significativas entre a albumina urinária e GGT (r=0,439, P<0,001) e albumina urinária e FAL (r=0,305, P<0,01). As áreas sob a curva para GGT e FAL foram 0,7696 (P<0,001) e 0,7233 (P<0,001), respectivamente. Ao considerar o ponto de corte de 72 U/g de creatinina, a GGT demonstrou uma sensibilidade de 96,0% e especificidade de 52,6%. Considerando o ponto de corte de 20 U/g de creatinina, a FAL demonstrou uma sensibilidade e especificidade de 83,8% e 36,8%, respectivamente. Conclusões: As enzimas GGT e FAL mensuradas em amostras de urina apresentaram potencial valor para o diagnóstico de nefropatia em pacientes com diabetes tipo 2, mas a GGT apresentou uma habilidade discretamente superior à FAL nesta diferenciação.

Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic, multisystem inflammatory disease characterized by symmetric and erosive synovitis. The purinergic signaling system plays an important role in the modulation of inflammatory and immune responses through extracellular biomolecules as nucleotides adenine and its adenosine nucleoside derivative, whose extracellular concentrations are controlled by ectoenzymes action as ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (E-NTPDase) and ecto-adenosine deaminase (E-ADA) present on the surface of various cells. The deficiency of vitamin D, a hormone known to play an important role in calcium homeostasis, has been related the several autoimmune diseases, including RA. This fact is due to its immunomodulatory role, where it inhibits the proliferation of T lymphocytes, especially Th1 lymphocytes as well as in the production and action of cytokines. Due to high doses of vitamin D can lead to hypercalcemia and intoxication it was tested the use of a nanoencapsulation system able to release in a controlled and sustainable manner, a reduced dose on site of action. Based on these principles, the effect of vitamin D3 free and nanoencapsulated was evaluated in the score for arthritis, thermal hyperalgesia and paw edema as well as histological analyzes and in the activity of the E-NTPDase and E-ADA enzyme lymphocytes from animals with arthritis induced by complete Freud‟s adjuvant (CFA). Hematological and biochemical parameters, including serum concentrations of vitamin D, were determined. Adult Wistar rats were divided into ten groups: I: control (CN); II: adjuvant-induced arthritis (AR); III: control vehicle (CV); IV: AR+V; V: vitamin D3 free at a dose of 120 IU/day (VD3); VI: AR+VD3 (120 IU/day); VII: control of white formulation (CF); VIII: AR+F; IX: vitamin D3 lipid-core nanocapsules formulation at a dose of 15.84 IU/day (LNC-D3) and X: AR+LNC-D3 (15.84 IU/day). The initiation of treatment was 15 days after the induction of arthritis in a period of 15 days. The results of this study demonstrated that VD3 was able to reduce arthritis score, thermal hyperalgesia and paw edema in rats with AR. At the same time, treatment with LNC-D3 only reduced thermal hyperalgesia and paw edema. The histological analyzes showed that both formulations were able to reduce inflammatory changes induced by CFA. The levels AST showed an increased in the CN group compared to the others. In the group treated with VD3 it was observed an increase in the levels of 25 (OH)D. The activity of the E-NTPDase in lymphocytes from rats that developed AR was higher in comparison with the control group, whereas the activity of E-ADA was lower. This effect was reversed after 15 days of treatment with VD3 and LNC-D3. In addition, both vitamin D3 formulations did not alter the activity of E-NTPDase and E-ADA enzymes in healthy animals. Data from this study indicate that vitamin D3, either in free or nanoencapsulated forms, seems to contribute mitigating the inflammatory process induced by CFA, possibly by modulating the activities of ectonucleotidases, can be used, after further studies, as a complementary therapeutic agent for the treatment of rheumatoid arthritis. / A artrite reumatoide (AR) é uma doença inflamatória crônica, multissistêmica, caracterizada por sinovite simétrica e erosiva. O sistema de sinalização purinérgica desempenha um papel importante na modulação das respostas inflamatórias e imunes, através de biomoléculas extracelulares, como os nucleotídeos de adenina e seu derivado nucleosídeo adenosina, cujas concentrações extracelulares são controladas por ação de ectoenzimas, como ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolase (E-NTPDase) e ecto-adenosina desaminase (E-ADA) presentes na superfície de diversas células. A deficiência da vitamina D, um hormônio conhecido por desempenhar importante papel na homeostase do cálcio, vem sendo relacionada a diversas doenças autoimunes, entre elas a AR. Este fato deve-se a seu papel imunomodulador, onde atua na inibição da proliferação de linfócitos T, especialmente linfócitos Th1, bem como na produção e na ação de citocinas. Como altas doses podem levar à hipercalcemia e à intoxicação, foi testada a utilização de um sistema de nanoencapsulação capaz de liberar, de forma controlada e sustentada, uma dose reduzida no local de ação. Com base nestes princípios, foi avaliado o efeito da vitamina D3 livre e nanoencapsulada no escore de artrite, na hiperalgesia termal e no edema de pata, bem como em análises histológicas e na atividade das enzimas E-NTPDases e E-ADA de linfócitos de animais com artrite induzida por adjuvante Completo de Freund (CFA). Parâmetros hematológicos e bioquímicos, entre eles a concentração sérica de vitamina D, foram determinados. Ratas adultas Wistar foram divididas em dez grupos: I: controle (CN); II: artrite (AR); III: controle veículo (CV); IV: AR+V; V: vitamina D3 livre na dose de 120 UI/dia (VD3); VI: AR+VD3 (120 UI/dia); VII: controle da formulação branca (CF); VIII: AR+F; IX: vitamina D3 nanoencapsulada na dose de 15,84 UI/dia (LNC-D3) e X: AR+LNC-D3 (15,84 UI/dia). O início do tratamento foi após 15 dias da indução da artrite, em um período de 15 dias. Os resultados do presente estudo demonstraram que VD3 foi capaz de reduzir escore de artrite, hiperalgesia térmica e edema da pata em ratos com AR. Ao mesmo tempo, o tratamento com LNC-D3 reduziu apenas a hiperalgesia térmica e o edema da pata. As análises histológicas mostraram que ambas as formulações foram capazes de reduzir as alterações inflamatórias induzidas por CFA. Os níveis de AST apresentaram um aumento no grupo AR em comparação com os demais. No grupo tratado com a VD3 observou-se um aumento nos níveis de 25(OH)D. A atividade da E-NTPDase em linfócitos de ratos que desenvolveram AR foi maior em comparação ao grupo controle, ao passo que a atividade da E-ADA foi menor. Este efeito foi revertido após 15 dias de tratamento com VD3 e LNC-D3. Além disso, ambas as formulações de vitamina D3 não alteraram a atividade das enzimas E-NTPDase e E-ADA em animais saudáveis. Os dados do presente estudo apontam que a vitamina D3, tanto na forma livre quanto nanoencapsulada, parece contribuir amenizando o processo inflamatório induzido pelo CFA, possivelmente por modular as atividades das ectonucleotidases, podendo após estudos adicionais ser utilizada como um agente terapêutico complementar para o tratamento da artrite reumatoide.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Pythium insidiosum is an aquatic oomycete that is the causative agent of pythiosis, an important disease in humans and animals that is prevalent in tropical and subtropical areas. In Brazil it was first reported in 1974, then several cases this disease has been reported throughout the country. The failure in the antifungal therapy combined with cases unresponsive to immunotherapy existing, lead to molecular studies in order to investigate possible genetic variations among Brazilian isolates, and this may be able to contribute on the research for the improvement of immunotherapy available. Thus, this study aimed to evaluate the genetic diversity of thirty P. insidiosum isolates from different regions of Brazil, and compare all of them with isolates from Thailand, one isolate from Central America and another isolate from North America, by sequencing and the analysis of genomic DNA regions corresponding to cytochrome c oxidase (COX II) and ITS1, 5.8S rRNA and ITS2 rDNA (ITS). The analyses of nucleotide sequences of both regions were carried out, individually and in combination, using the following methods: Maximum parsimony (MP); Neighbor-joining (NJ); Maximum likelihood (ML); and Bayesian analysis (BA). Our data demonstrated all of P. insidiosum isolates as monophyletic in relation to the other Pythium species. Analises of COX II gene sequences subdivided P. insidiosum isolates into three groups, whose arrangement provides the Thai isolates as paraphyletic in relation to the Brazilian isolates. The molecular analyses performed in this study suggest an evolutionary proximity among all of American isolates, including the Brazilian, from Costa Rica and from the United States, that were grouped in a single group. COX II gene network analysis showed signs of a recent expansion of P. insidosum isolates, probably originated from the Asiatic to America continent. By analysis of COX II gene demonstrated the highest levels of genetic variability among P. insidiosum isolates studied in here, additionally, the highest levels of phylogenetic information were shown, when it was compared to the ITS region analysis. Nevertheless, both genetic markers selected for this study proved to be entirely congruent in the phylogenetic relations among Brazilian isolates of P. insidiosum, since clustered all of them into a single monophyletic group which did not shown to have genetic variability. The results indicate that the strain used in the production of the immunotherapic - Pitium-Vac ® - is representative of the Brazilian isolates of P. insidiosum. / O Pythium insidiosum é um oomiceto aquático causador da pitiose, uma importante enfermidade em humanos e animais, sendo prevalente em áreas tropicais e subtropicais. No Brasil foi relatada pela primeira vez em 1974. Desde então vários casos desta enfermidade tem sido descritos por todo o país. Os insucessos de terapias antifúngicas aliados aos casos não responsivos à imunoterapia existente impulsionam estudos moleculares a fim de investigar possíveis variações genéticas entre os isolados brasileiros de forma a contribuir nas pesquisas para a melhoria do imunoterápico disponível. Assim, o presente estudo teve por objetivo avaliar a diversidade genética de 30 isolados de P. insidiosum provenientes de diferentes regiões do Brasil, bem como compará-los com isolados tailandeses, um isolado da América Central e outro isolado da América do Norte através do sequenciamento e das análises das regiões do DNA genômico correspondentes à citocromo c oxidase (COX II) e ITS1, 5.8S rRNA e ITS2 do rDNA (ITS). As análises das sequências de nucleotídeos de ambas as regiões foram realizadas, individualmente e em combinação, utilizando as seguintes metodologias: máxima parcimônia (Maximum parsimony, MP); Neighbor-joining (NJ); máxima verossimilhança (Maximum likelihood, ML); e análise Bayesiana (Bayesian analysis, BA). Os dados demonstraram que todos os isolados de P. insidiosum são monofiléticos em relação às outras espécies de Pythium. A análise das sequências do gene COX II subdividiu os isolados de P. insidiosum em três grupos, cuja disposição demonstra os isolados tailandeses como parafilético em relação aos isolados brasileiros. As análises moleculares realizadas neste estudo sugerem uma proximidade evolutiva entre todos os isolados americanos, incluindo os brasileiros, da Costa Rica e dos Estados Unidos, os quais foram agrupados juntos em um único grupo. Na análise de network do gene COX II os resultados apresentaram sinais de uma recente expansão dos isolados de P. insidosum para a América, provavelmente oriundos do continente asiático. Pela análise do gene COX II foi possível evidenciar os maiores níveis de variabilidade genética entre os isolados de P. insidiosum avaliados, além disso, foram demonstrados os maiores níveis de informação filogenética, quando comparada à análise da região ITS. Contudo, os dois marcadores genéticos selecionados para este estudo revelaram-se inteiramente congruentes nas relações filogenéticas entre os isolados brasileiros de P. insidiosum, reunindo-os em um único grupo monofilético o qual não demonstrou haver variabilidade genética. Os resultados obtidos indicam que a cepa utilizada na produção do imunoterápico Pitium-Vac ® é representativa dos isolados brasileiros de P. insidiosum.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Candida species are the most common etiologic agent of opportunistic fungal infections. Candida albicans is the most frequent species in candidiasis, however species of non-albicans species have emerged increasingly in hospitals in which the use of azoles as a prophylactic or therapeutic is common. C. glabrata is the species most relevant in this scenario, causing infections with high morbidity and mortality due to high rates of resistance to antifungal azoles, especially fluconazole, and reduced sensitivity to amphotericin B and echinocandins. The remarkable resistance of these species to antifungal agents requires the search for new therapeutic options. An alternative is the combination of drugs with different mechanisms of action. This study aimed to evaluate the in vitro susceptibility of Candida glabrata to conventional antifungal agents (amphotericin B, ketoconazole, itraconazole, fluconazole and voriconazole), and these associations with non-antifungal drugs (chlorpromazine, linezolid, minocycline, sulfamethoxazole, tacrolimus and diphenyl diselenide). Two groups of clinical isolates of C. glabrata were evaluated. The first group consists of fluconazole-sensitive clinical isolates (FS) (n = 30) and the second, derivative of the first, fluconazole-resistant clinical isolates (FR) (n = 30). Based on protocol M27-A3 (CLSI, 2008), the checkerboard method. In isolation, MICs (Minimum Inhibitory Concentration) for fluconazole ranged from 0.25 to ≥ 64.00 μg/mL (FS) and 64.00 to 256.00 μg/mL (FR); for amphotericin B ranged from 0.06 to 0.50 μg/mL (FS) and 0.03 to 0.50 μg/ mL (FR); for itraconazole 0.50 to 8.00 μg/ mL (FS) and 1.00 to 16.00 μg/mL (FR); for ketoconazole 0.13 to 2.00 μg/mL (FS) and 0.50 to 16.00 μg/mL (FR); for voriconazole 0.13 to 4.00 μg/mL (FS) and 1.00 to 16.00 μg/mL (FR). The combinations of tacrolimus with azoles showed significant synergism rates; for the group FS tacrolimus + ketoconazole (43%), tacrolimus + itraconazole (43%), tacrolimus + voriconazole (37%); for the group FR ketoconazole + tacrolimus (77% ) tacrolimus + itraconazole (73%), tacrolimus + voriconazole (63%). Linezolid combined with ketoconazole and voriconazole showed high rates of synergism against the FR group, 76.67% and 70%, respectively. Minocycline + amphotericin B obtained 46.67% (FS) and 36.67% (FR) of synergism; chlorpromazine + amphotericin B was synergistic for 40% of the FR. Chlorpromazine combined to azoles showed high rates of antagonism for resistant group, 76.67%, 70% and 80% for ketoconazole, itraconazole and voriconazole, respectively, for the sensitive group combinations had higher rates of indifference. Sulfamethoxazole evidenced a higher percentage of indifferent interactions associated with all tested antifungals, 70% (FS), 73.34% (FR) associated to ketoconazole, 60% (FS), 43.34% (FR) associated to itraconazole, 56.67% (FS), 66.67% (FR) ins association with voriconazole, 86.66% (FS), 80% (FR) associated to amphotericin B. Synergistic (76.66%) and indifferent (23.34%) interactions were observed for diphenyl diselenide + amphotericin B combination for the sensitive group. Diphenyl diselenide + fluconazole combination demonstrated indifferent (50%) and antagonistic (40%) interactions for sensitive group, whereas synergistic interactions were observed in 10% of the isolates. The most significant associations deserve in vivo evaluation in order to verify their potential in the treatment of infections caused by C. glabrata. / Candida spp é o mais frequente agente etiológico de infecções fúngicas oportunistas. Candida albicans é a espécie mais isolada nas candidíases, no entanto espécies de Candida não-albicans têm emergido de forma crescente nas unidades hospitalares em que o uso de azólicos de forma profilática ou terapêutica é frequente. C. glabrata é uma das espécies mais relevantes neste cenário, causando infecções com alta morbidade e mortalidade, devido às altas taxas de resistência frente aos antifúngicos azólicos, em especial ao fluconazol, e a reduzida sensibilidade a anfotericina B e equinocandinas. A marcante resistência desta espécie aos antifúngicos impõe a busca por novas possibilidades terapêuticas. Uma alternativa é a combinação entre fármacos com distintos mecanismos de ação. Este estudo objetivou avaliar a suscetibilidade in vitro de C. glabrata a antifúngicos convencionais (anfotericina B, fluconazol, cetoconazol, itraconazol e voriconazol) e associações destes, com fármacos e compostos não-antifúngicos (clorpromazina, linezolida, minociclina, sulfametoxazol, tacrolimus e disseleneto de difenila). Foram avaliados dois grupos de isolados clínicos de C. glabrata. O primeiro grupo composto de isolados sensíveis ao fluconazol (FS) (n=30) e o segundo, derivado do primeiro, isolados clínicos resistentes ao fluconazol (FR) (n=30). Com base no protocolo M27-A3 (CLSI, 2008), pelo método de checkerboard. Isoladamente, as CIMs (Concentrações Inibitórias Mínimas) para o fluconazol variaram de 0,25 - ≥64,00 μg/mL (FS) e 64,00 - 256,00 μg/mL (FR); para anfotericina B variaram de 0,06 - 0,50 μg/mL (FS) e 0,03 - 0,50 μg/mL (FR); para o itraconazol 0,50 - 8,00 μg/mL (FS) e 1,00 - 16,00 μg/mL (FR); para cetoconazol 0,13 - 2,00 μg/mL (FS) e 0,50 - 16,00 μg/mL (FR); para voriconazol 0,13 - 4,00 μg/mL (FS) e 1.00 - 16.00 μg/mL (FR). As combinações de tacrolimus com azólicos apresentaram consideráveis taxas de sinergismo; para o grupo FS tacrolimus + cetoconazol (43%), tacrolimus + itraconazol (43%), tacrolimus + voriconazol (37%). Para o grupo FR tacrolimus + cetoconazol (77%), tacrolimus + itraconazol (73%), tacrolimus + voriconazol (63%). Linezolida associada ao cetoconazol e ao voriconazol apresentou altas taxas de sinergismo frente ao grupo FR, 76,67% e 70%, respectivamente. Minociclina + anfotericina B obteve 46,67% (FS) e 36,67% (FR) de sinergismo; clorpromazina + anfotericina B foi sinérgica para 40% do grupo FR. Clorpromazina combinada aos azólicos apresentou altas taxas de antagonismo para o grupo resistente, 76,67%, 70% e 80% para cetoconazol, itraconazol e voriconazol, respectivamente; para o grupo sensível as combinações com clorpromazina tiveram maiores taxas de indiferença. Interações sinérgicas (76,66%) e indiferentes (23,34%) foram observadas na combinação de anfotericina B e disseleneto de difenila para o grupo sensível. A combinação de disseleneto de difenila com fluconazol apresentou indiferença (50%) e antagonismo (40%) para o grupo sensível, 10% dos isolados apresentaram sinergismo. Sulfametoxazol apresentou um maior porcentual de interações indiferentes, associado a todos os antifúngicos testados frente aos dois grupos, 70% (FS), 73,34% (FR) associado ao cetoconazol, 60% (FS), 43,34% (FR) associado ao itraconazol, 56,67% (FS), 66,67% (FR) na associação com voriconazol, 86,66% (FS), 80% (FR) associado à anfotericina B. As associações de maior relevância merecem avaliação in vivo, a fim de verificar o potencial das mesmas no tratamento de infecções por Candida glabrata.