About 20 to 25 % of psychiatric patients treated with typical antipsychotics may develop an important movement disorder named tardive dyskinesia, with complex etiology and no effective treatment. Cognitive loss is also associated with antipsychotic treatment being harmful and often difficult to identify. Some studies have shown beneficial effects of Omega 3 polyunsaturated fatty acids on tardive dyskinesia and on cognition. Considering the available evidences, we conducted a randomized, double-blind, placebo-controlled, clinical trial, which evaluated the effect of fish oil supplementation rich in n-3 polyunsaturated fatty acids (3 g/dia) or placebo (3 capsules / day), for 12 weeks, on motor and cognitive disturbances of patients on use of neuroleptics. Two evaluations were performed, one before supplementation (baseline) and another at the end of it. For this, were used the following evaluation tools: Abnormal Involuntary Movement Scale for tardive dyskinesia and Mini-Mental State Examination for cognition. Peripheral blood samples were collected before supplementation (baseline) and 4, 8 and 12 weeks after, in order to monitor the supplementation effects on biochemical parameters- triglycerides (TG), fasting glucose, total cholesterol, high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C), low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C) and on parameters of blood clotting- prothrombin time and partial thromboplastin time. The biological material collected was also used to run the Comet Assay in leukocytes with the aim of investigate the treatment effect on the DNA damage index. After 3 months of supplementation, we observed that fish oil caused an improvement of 18.5 % in tardive dyskinesia, while cognitive performance did not change when compared with the baseline assessment. Furthermore, lipid profile of the patients was not modified, fasting glucose was reduced in all assessments and prothrombin time increased in the last evaluation. In addition, fish oil did not show genotoxic effect (DNA damage index did not change). Therefore, we have demonstrated the therapeutic potential of fish oil rich in Omega 3 on tardive dyskinesia of patients treated with neuroleptics and its low risk of side effects. The increase of prothrombin time suggests a possible anticoagulant effect, requiring its monitoring during chronic treatment. / Cerca de 20 a 25 % dos pacientes psiquiátricos tratados com antipsicóticos típicos podem desenvolver uma importante síndrome motora denominada discinesia tardia (DT), de etiologia complexa e ainda sem tratamento efetivo. Perdas cognitivas também estão associadas ao uso desses medicamentos, sendo muitas vezes de difícil identificação e igualmente prejudiciais. Alguns estudos têm demonstrado efeitos benéficos dos ácidos graxos poliinsaturados Omega 3 (AGPI n-3) sobre a DT e sobre a cognição. Considerando as evidências disponíveis, realizamos este trabalho que consistiu de um ensaio clínico randomizado, duplo-cego, controlado por placebo. Avaliamos os efeitos da suplementação com de óleo de peixe rico em AGPI n-3 (3 g/dia) ou placebo (3 cápsulas/dia) sobre distúrbios motores e cognitivos de pacientes sob uso de neurolépticos, por um período de 12 semanas. Foram efetuadas duas avaliações, uma antes da suplementação (basal) e outra ao final da mesma. Para isso utilizamos as seguintes ferramentas de avaliação: Escala de Movimentos Involuntários Anormais (EMIA), para a DT e Mini-Exame do Estado Mental (MEEM), para a cognição. Amostras de sangue periférico foram colhidas antes da suplementação (basal) e 4, 8 e 12 semanas após, com o propósito de acompanhar seus os efeitos sobre parâmetros bioquímicos- triglicerídeos (TG), glicemia de jejum, colesterol total, colesterol ligado à lipoproteína de alta densidade (HDL-C) e colesterol ligado à lipoproteína de baixa densidade (LDL-C), bem como sobre parâmetros de coagulação sanguínea- tempo de protrombina (TP) e tempo de tromboplastina parcial (TTP). Com o material biológico colhido, também executamos o Ensaio Cometa em leucócitos, para investigar a influência do tratamento sobre o índice de dano no DNA. Após 3 meses de suplementação, observamos que o óleo de peixe produziu uma melhora de 18,5 % na DT, enquanto o desempenho cognitivo não sofreu alteração em relação à avaliação basal. Por sua vez, o perfil lipídico dos pacientes não foi modificado, a glicemia de jejum foi reduzida em todas as avaliações e o TP aumentou na última avaliação. Ainda, o índice de dano no DNA não foi alterado, mostrando que o óleo de peixe não apresentou efeito genotóxico. Com isso, demonstramos o potencial terapêutico do óleo de peixe rico em Omega 3 sobre a DT de pacientes tratados com neurolépticos e seu baixo risco de efeitos colaterais. O aumento do TP sugere um possível efeito anticoagulante, necessitando de acompanhamento durante tratamentos crônicos.

In recent years has increased the search for alternative methods to combat gastrointestinal parasites, and in this context, biological control achieved by the fungus Duddingtonia flagrans draws attention. In this study, we analyze the possibility of the temperature have influence on the nematophagic activity of D. flagrans against the parasites Haemonchus contortus of sheep. We used four sheep, two parasitized with H. contortus and two dewormed. One dewormed sheep received, for three consecutive days before collection of feces, 1 x 106 chlamydospores of D. flagrans, lyophilized, in gelatin capsules. After feces collection, with the aid of collectors bags, they were mixed, resulting in samples with (fungus) and without fungus (control). Each sample was incubated at seven different temperatures (5, 10, 15, 20, 25, 30 and 35 º C) for 21 days. After the incubation period recovery and counting of larvae was performed. The best temperature for fungus action was 30 º C. No larvae were recovered at 5 ºC. From 10 ºC, the fungus action was detected, but there was no significant difference in the percentage of larval reduction between the temperatures, demonstrating that the presence of larvae seems to be the main factor affecting its nematophagic action. It can be concluded that the temperature does not seem to be a limiting factor in the action of Duddingtonia flagrans used for biological control of Haemonchus contortus. Even at lower temperatures, the lyophilized D. flagrans reduced the number of H. contortus larvae, showing, once again, the potentiality of this species in biological control, even in non-ideal conditions for their development and the larvae development, so that it can be used in colder climates, as in Rio Grande do Sul state. / Nos últimos anos vem crescendo a busca por métodos alternativos para o combate a parasitas gastrintestinais e, nesse contexto, o controle biológico realizado pelo fungo Duddingtonia flagrans destaca-se. Neste trabalho, analisamos a possibilidade de a temperatura influenciar a atividade nematofágica de D. flagrans contra o parasita de ovinos Haemonchus contortus. Utilizou-se 04 ovelhas, sendo duas parasitadas com H. contortus e duas isentas de parasitas. Uma das ovelhas desparasitadas recebeu, durante 03 dias consecutivos, antes da coleta, 1 x 106 clamidósporos de D. flagrans, liofilizados, em cápsulas gelatinosas. Após coleta das fezes com auxílio de sacos coletores, as fezes foram misturadas, resultando amostras com fungo e sem fungo (controle). Cada amostra foi incubada em sete diferentes temperaturas (5, 10, 15, 20, 25, 30 e 35 ºC), durante 21 dias. Após foi realizada a recuperação e contagem larval. A melhor temperatura para ação do fungo foi a de 30ºC. Não foram recuperadas larvas na temperatura de 5 ºC. A partir da temperatura de 10 ºC, a ação do fungo foi detectada, porém não houve diferença significativa na percentagem de redução larval entre as temperaturas, significando que a presença de larvas parece ser o principal fator a influenciar sua ação nematofágica. Pode-se concluir que a temperatura não parece ser um fator limitante no controle biológico de Haemonchus contortus de ovinos realizado pelo fungo Duddingtonia flagrans. Mesmo em temperaturas mais baixas, o liofilizado de D. flagrans reduziu o número de larvas H. contortus demonstrando, mais uma vez, a potencialidade dessa espécie no controle biológico, mesmo em condições não ideais para o seu desenvolvimento e das larvas, podendo ser utilizado em climas mais amenos, como no Estado do Rio Grande do Sul. Palavras-chave: Duddingtonia flagrans, Haemonchus contortus, temperatura, controle biológico

Viruses are etiologic agents of a great number of diseases of human beings and animals. However, there are only a little amount antiviral medicines available that is almost exclusively used in human health. Several studies have demonstrated that propolis has biological activities against virus, bacteria and fungi. Its chemical composition is diverse varying according to season, plants available and collection. The antiviral activity of ethanolic extracts of propolis have already been described for some human viruses. The aim of this study was to evaluate the antiviral activity of propolis ethanolic extracts against two viruses causing respiratory disease in small animals, the feline calicivirus (FCV) and canine adenovirus 2 (CAV-2), and also the bovine diarrheal disease virus (BVDV).Two samples of ethanolic extracts of propolis were used; one obtained in the lab and another obtained commercially. In order to perform the experiments the MTT test ((3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) was used to determine the 50% cytotoxic concentration (CC50), the 50% inhibitory concentration (IC50) and, the terapeuthic index (TI=IC50/CC50). The propolis extracts were added to the cell cultures in different moments of the viral infection. They were included before virus inoculation, after virus inoculation, and before and after virus inoculation. The two propolis samples showed similarities in the qualitative analysis but they had small differences in the quantitative analysis. The CC50 of the extracts varied among 251 and 343μg/ml and the commercial extract showed less toxicity. Both extracts demonstrated better antiviral activity when added before virus inoculation and the ITs varied from 6 to 13. The best results were obtained with the propolis extracted in the lab. The BVD was the virus showing the greater sensitivity to the ethanolic extracts in the conditions applied. Taken all the data together, it can be concluded that the ethanolic extract of propolis has a potential for future use as a medicine in the therapy of respiratory disease caused by CAV-2, and, also, that the action mechanisms on BVDV should be better evaluated in detail regarding the hepatitis C virus (HCV). / Os vírus são os agentes etiológicos de um grande número de enfermidades em seres humanos e animais, no entanto, há um pequeno número de fármacos antivirais disponíveis para o uso que é feito quase exclusivamente na medicina humana. Estudos demonstram que a própolis apresenta variada atividade biológica frente a vírus, bactérias e fungos. Sua composição química é bastante diversa, podendo variar conforme a época, vegetação e área de coleta. A atividade antiviral de extratos aquosos e etanólicos de própolis já foi descrita para alguns vírus humanos. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a atividade antiviral do extrato de própolis frente a dois vírus causadores de doença respiratória em pequenos animais, o calicivírus felino (FCV) e o adenovírus canino tipo 2 (CAV-2), e também ao vírus da diarréia viral bovina (BVDV). Foram testadas neste experimento duas amostras de extrato etanólico de própolis, uma delas obtida comercialmente e a outra extraída no laboratório. Para realizar este estudo utilizou-se o método colorimétrico do MTT (3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), através do qual determinou-se a concentração citotóxica a 50% (CC50), concentração inibitória a 50% (IC50) e o índice terapêutico (IT=IC50/CC50). Os extratos de própolis foram adicionados ao cultivo celular em diferentes momentos da infecção viral. Estes foram incluídos antes da inoculação viral, depois da inoculação viral, e antes e depois da inoculação viral. As duas amostras de própolis apresentaram similaridades na análise qualitativa e pequenas diferenças na análise quantitativa. A CC50 destes extratos variou de 251 a 343μg/ml sendo que o extrato comercial apresentou-se ligeiramente menos tóxico. Ambos os extratos demonstraram melhor atividade antiviral quando adicionados anteriormente à inoculação viral apresentando ITs que variaram de 6 a 13. Os melhores resultados foram obtidos com o própolis extraído no laboratório. O BVDV foi o vírus que demonstrou maior sensibilidade ao extrato etanólico de própolis nas condições experimentais aplicadas. Levando-se em consideração os resultados obtidos, pode-se concluir que o extrato etanólico de própolis apresenta potencial para futura utilização como fármaco no tratamento de doenças respiratórias causadas pelo CAV2 e que o mecanismo de ação sobre o BVDV deve ser avaliado com maiores detalhes com vistas ao vírus da hepatite C (HCV).

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Epilepsy is a disease that affects about 1-2% of the general population. Considering the high number of patients with epilepsy who are refractory to currently available drugs, it is important to search for new anticonvulsant drugs. For this it is important that reproduces model epilepsy, such as the pilocarpine model, a muscarinic agonist causing limbic seizures and status epilepticus, which after a latency period is characterized by a temporal lobe epilepsy. A potential drug target in the treatment of epilepsy is the Na+,K+-ATPase, which is characterized by being a plasma membrane protein having important role in the maintenance of cellular ionic homeostasis, changes in the Na+,K+-ATPase activity directly affect cell signaling via neurotransmitters and neuronal activity. In this context, a impair the functioning of the Na+,K+-ATPase leads to an increased or decreased neuronal excitability, depending on the degree of inhibition induced neuronal and type affected. Therefore, the present study searched for the role of Na+,K+-ATPase and the specific antibody that enhances the activity of Na+,K+-ATPase (DRRSAb) in the pilocarpine model in C57BL/6 mice challenged with pentylenetetrazol (PTZ). It was seen that the activity of Na+,K+-ATPase was decreased in hippocampus of epileptic mice, 60 days after status epilepticus (SE). Furthermore, the Michelis-Menten constant for different ATP concentrations increased in the SE. Reduced activity of Na+,K+-ATPase appears to involve the nitration of α subunit, but no changes in the expression or its phosphorylation state at Ser943 was found. Interestingly, activation of Na+,K+-ATPase intrahippocampal injection with a specific antibody (DRRSAb) produced against a regulatory site of the α subunit, decreases susceptibility to myoclonic seizures induced by PTZ in epileptic animals. On the other hand, the administration of DRRSAb in the hippocampus of naive animals facilitated the onset of seizures induced by PTZ. Quantitative analysis of hippocampal EEG recordings revealed that DRRSAb increased the percentage of total power contributed by delta frequency band (0-3 Hz) to large irregular amplitude pattern of hippocampal EEG. On the other hand, no DRRSAb-induced changes were found regarding the theta functional state. Therefore, activation of Na+,K+-ATPase activity as a novel approach in seizure disorders, may become a potential target for epilepsy. / A epilepsia é uma doença que atinge cerca de 1 % da população em geral. Embora vários tratamentos farmacológicos sejam utilizados, um elevado número de pacientes com epilepsia são refratários às drogas disponíveis atualmente o que torna importante à busca por novas drogas anticonvulsivantes. Para isso, é necessário um modelo que reproduza a epilepsia, como é o caso do modelo da pilocarpina, um agonista muscarínico que causa convulsões límbicas e status epilepticus (SE), que após crises recorrentes se caracteriza por uma epilepsia do lobo temporal. Um possível alvo farmacológico na terapia da epilepsia é a enzima Na+, K+-ATPase, que se caracteriza por ser uma proteína de membrana plasmática que tem um papel importante na manutenção da homeostase iônica celular cuja mudança na atividade da Na+, K+-ATPase afeta diretamente a sinalização celular via neurotransmissores e a atividade neuronal. Neste contexto, um prejuízo ao funcionamento da Na+, K+-ATPase ocasiona aumento ou diminuição da excitabilidade neuronal, dependendo do grau de inibição induzido e do tipo neuronal afetado. Portanto, o presente estudo, procurou o papel da Na+, K+-ATPase e de um anticorpo específico que aumenta a atividade da Na+, K+-ATPase (DRRSAb), no modelo da pilocarpina em camundongos C57BL/6 e sobre a susceptibilidade ao pentilenotetrazol (PTZ). Foi constatado que a atividade da Na+, K+-ATPase está diminuída no hipocampo de camundongos 60 dias após o SE. Além disso, a constante de Michelis-Menten para as diferentes concentrações de ATP aumentou no grupo pós-SE. A redução da atividade da Na+,K+-ATPase parece envolver a nitração da subunidade α, mas nenhuma alteração na expressão ou no estado de fosforilação na Ser943 foi encontrada. Interessantemente, a ativação da Na+, K+-ATPase, com uma injeção intrahipocampal do anticorpo DRRSAb produzido contra um local regulador da subunidade α, diminui a susceptibilidade para crises mioclônicas induzida por PTZ nos animais epilépticos. Por outro lado, a administração de DRRSAb no hipocampo de animais normais facilitou o aparecimento de convulsões induzidas por PTZ. A análise quantitativa do registro eletroencefalográfico (EEG) no hipocampo, revelou que o DRRSAb aumentou a porcentagem de poder total na frequência da banda delta (0-3 Hz), quando analisado padrão de atividade irregular de grande amplitude (LIA). Por outro lado, não houve alterações induzidas pelo DRRSAb sobre o estado funcional do ritmo teta. Portanto, a ativação Na+, K+-ATPase, como uma nova abordagem em distúrbios convulsivos, pode tornar-se um alvo farmacológico em potencial na epilepsia.

The strong advertising appeal, the search for a good physique, and the improvement in physical performance, has risen the popularity of food supplements and other therapies with slimming supplements based on plant extracts. Since the law exempts food supplements from registration, they are easy targets for importation, commercialization e consumption by the population, which worsens malpractice cases of adulterations. Thus, the objectives of the present work were: research the presence of stimulants in food supplements for both slimming and weight gain; study the addition of synthetic caffeine in natural products based on plants used for weight loss; develop chromatographic methods using HPLC with photodiode detection to detect caffeine, salicin, ephedrine, hordenine, tyramine, octopamine and synephrine (including the L and D enantiomers). The stimulants were separated by reverse phase chromatography using octadecylsilane columns (C18). For L and D synephrine, chromatography with chiral phase of β-cyclodextrin was used. Detection limits varied from 0.02 mg L-1 to 0.35 mg L-1, while quantification limits ranged from 0.07 mg L-1 to 1.16 mg L-1 for the separation of stimulants in food supplements. For analyses of caffeine in herbal products, the LOD and LOQ were 0.048 mg L-1 and 0.16 mg L-1, respectively. For the anlysis of the enantiomers of p-synephrine, the L enantiomer presented a detection limit of 0.11 mg L-1 and quantification limit of 0.36 mg L-1, while the D enantiomer exhibited a detection limit of 0.41 mg L-1 and a quantification limit of 1.36 mg L-1. Each method developed was then applied to the sample, which were, dietary supplement samples (n = 47), herbal products (n = 100), and fruits of Citrus aurantium. Caffeine was the most frequent of the studied stimulants, often exceeding the labeled content and the maximum dose per day recommended (420 mg). The food supplements presented caffeine, synephrine and ephedrine as main stimulants in 53% of the studied samples. / O forte apelo do mercado publicitário, aliado à busca por um corpo padrão e à melhora no desempenho físico faz com que a popularidade dos suplementos alimentares e a associação destes com outras terapias envolvendo compostos emagrecedores a base de plantas seja cada vez maior. A lei que isenta de registro os suplementos alimentares, os torna alvo de fácil importação, comercialização e consumo pela população em geral, agravando ainda a prática de adulteração sobre os mesmos. Logo, este trabalho teve como objetivos: pesquisar a presença de estimulantes em suplementos alimentares para fins de emagrecimento, estudar a incidência de cafeína sintética adicionada em produtos naturais à base de plantas utilizadas para perda de peso; desenvolver métodos cromatográficos emplregando HPLC com detecção com arranjo de fotodiodos (DAD) para a determinação de cafeína, salicina, efedrina, hordenina, tiramina, octopamina e sinefrina (incluindo seus enantiômeros L e D). Os estimulantes foram separados por cromatografia de fase reversa em colunas de octadecilsilano (C18) e os enantiômeros por cromatografia de par iônico com fase quiral de β ciclodextrina. Os limites de detecção (LD) variaram de 0,02 mg L-1 a 0,35 mg L-1, já os limites de quantificação (LQ) ficaram na faixa de 0,07 mg L-1 e 1,16 mg L-1 na separação dos estimulantes em suplementos alimentares. Para as análises de cafeína em produtos naturais a base de plantas, os LD e LQ foram 0,048 mg L-1 e 0,16 mg L-1 respectivamente. Para os enantiômeros da p-sinefrina, o enantiômero L apresentou LD de 0,11 mg L-1 e LQ de 0,36 mg L-1, já o enantiômero D exibiu um LD de 0,41 mg L-1 e LQ de 1,36 mg L-1. Cada método desenvolvido foi posteriormente aplicado em amostras de suplementos alimentares (n=47), produtos naturais à base de plantas (n=100) e fruto de Citrus aurantium. Dos compostos estudados, a cafeína foi a que se apresentou mais frequente, muitas vezes excedendo os teores rotulados nos produtos, ou então a dose máxima recomendada por dia (420 mg). Já os suplementos alimentares apresentaram cafeína, sinefrina e efedrina como principais estimulantes em 53% das amostras estudadas.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Paints occupational exposure is an important health problem due to the wide variety of chemicals and xenobiotics present in their constitution. Organic solvents and heavy metals are among the main chemical constituents of paints. In the view of the variety of substances found in paints, can be noted that painters are simultaneously exposed to various xenobiotics, suggesting a case of co-exposure or exposure mixed. Biological monitoring is an essential tool for assessing the risk to health and occupational health practices. Moreover, it is known that there is a close relationship between the xenobiotics constituents of paints and oxidative stress, such as toxicological mechanism. In this study was evaluated oxidative damage by quantification of blood biomarkers of oxidative stress such as malondialdehyde (MDA), reduced glutathione (GSH), δ-aminolevulinate dehydratase enzyme (ALA-D), superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT ), in individuals occupationally exposed to paints (n = 48) and non-exposed subjects (n = 30). Biological monitoring of toluene was performed by quantification of different biomarkers of exposure, urinary hippuric acid and ortho-cresol, and blood toluene. For xylene, styrene, ethylbenzene and lead were quantified urinary levels of methylhippuric acid, mandelic acid, phenylglyoxylic acid and blood lead, respectively. Despite all IBEs were below the biological limit exposure (BEL), significant changes in oxidative stress biomarkers were found in exposed group. Plasma levels of MDA and blood antioxidant enzymes (SOD and CAT) had shown increased in the group of painters when compared with non-exposed group; this increase was accompanied by GSH levels depletion and enzyme ALA-D inhibition. It was also observed several correlations between the oxidative stress biomarkers and biomarkers of exposure to xenobiotics present in paints. By statistical tests were evaluated which of the paints constituents played the greatest influence on changes in oxidative stress biomarkers, in this case of co-exposure. Among the exposure biomarkers tested, blood toluene was suggested as the main responsible for increased lipid peroxidation; in addition, it was appointed as a new and important inhibitor of the enzyme ALA-D. Thus, it is suggested that a joint evaluation of biomarkers of exposure and oxidative stress biomarkers might be useful to ensure, in longterm, the worker s health. / A exposição ocupacional a tintas representa um importante problema de saúde devido à ampla variedade de substâncias químicas e xenobióticos presentes na sua constituição. Solventes orgânicos e metais pesados encontram-se entre os principais compostos químicos constituintes das tintas. Tendo em vista a variedade de substâncias presentes na composição das tintas, pode-se constatar que pintores encontram-se simultaneamente expostos a diferentes xenobióticos, caracterizando um processo de coexposição ou exposição mista. A monitorização biológica é uma ferramenta essencial para a avaliação do risco à saúde e práticas de saúde ocupacional. Por outro lado, sabe-se que existe uma estreita relação entre os xenobióticos constituintes de tintas e o estresse oxidativo, como mecanismo toxicológico. Neste estudo foi avaliado o dano oxidativo, através da quantificação de biomarcadores sanguíneos do estresse oxidativo, como alondialdeído (MDA), glutationa reduzida (GSH), enzima δ-aminolevulinato desidratase (ALA-D), superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT); em indivíduos expostos (n=48) e não expostos (n=30) ocupacionalmente a tintas. A monitorização biológica do tolueno foi realizada através da quantificação dos diferentes biomarcadores de exposição, ácido hipúrico e orto-cresol urinários, e tolueno sanguíneo. Para xileno, estireno, etilbenzeno e chumbo foram quantificados os níveis urinários dos ácidos metil-hipúrico, mandélico, fenilglioxílico, e chumbo sanguíneo, respectivamente. Apesar de todos os IBEs se encontrarem abaixo dos índices biológicos máximos permitidos (IBMP), alterações significativas nos biomarcadores do estresse oxidativo foram encontradas no grupo de expostos. Os níveis plasmáticos de MDA e das enzimas sangüíneas antioxidantes (SOD e CAT) se mostraram aumentados no grupo de pintores quando comparados com o grupo não exposto; esse aumento foi acompanhado pela depleção nos níveis de GSH e inibição da enzima ALA-D. Foram observadas ainda várias correlações entre os biomarcadores do estresse oxidativo e biomarcadores de exposição aos xenobióticos presentes nas tintas. Através de testes estatísticos foram avaliados quais dos constituintes das tintas desempenhavam maior influência sobre as alterações nos biomarcadores de estresse oxidativo, nesse caso de co-exposição. Dentre os biomarcadores de exposição analisados, o tolueno sanguíneo foi sugerido como o principal responsável pelo aumento da peroxidação lipídica; além de ser apontado como um novo e importante inibidor da enzima ALA-D. Dessa forma, sugere-se que a avaliação conjunta de biomarcadores de exposição e biomarcadores do estresse oxidativo possa ser útil para assegurar, em longo, prazo a saúde do trabalhador.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The genus Fusarium is characterized by hyaline filamentous fungi that cause a wide spectrum of infections predominantly in immunocompromised patients. These fungal infections show high rates of morbidity and mortality and are difficult to diagnosis, to prevent and to treat. The remarkable primary resistance to antifungal agents of this genus requires the search for new therapeutic possibilities. An attempt is a combination of drugs with different mechanisms of action. This study aimed to evaluate the in vitro susceptibility of Fusarium to conventional antifungal agents (amphotericin B, itraconazole, and voriconazole) and their combinations with no antifungal drugs (azithromycin, ciprofloxacin, fluvastatin, ibuprofen, metronidazole, and rifampicin) against 27 isolates of Fusarium spp. including the species: F. chlamydosporum (3), F. nygamai (1), F. oxysporum (6), F. proliferatum (2), F. solani (11), F. sporotrichoides (1), and F. verticillioides (3). Based on the protocol M38-A2 (CLSI, 2008) the technique of checkerboard was used for the assessment of associations. Alone, the MICs for amphotericin B ranged from 0.125 - 4 μg/ml; for voriconazole they ranged from 1 - >16 μg/ml, and for itraconazole all isolates showed MICs > 16 μg/ml. All combinations with amphotericin B showed synergistic interactions, and the most effective were amphotericin B plus ibuprofen (44.4%), amphotericin B plus metronidazole (40.7%), and amphotericin B plus ciprofloxacin (37%). No antagonistic interactions were observed for associations with amphotericin B. Similarly, all associations with voriconazole showed synergism, and the most significant associations were voriconazole plus ciprofloxacin (33.3%) and voriconazole plus metronidazole (33.3%). The antagonism was observed in all associations with voriconazole against F. verticillioides. The associations with itraconazole showed indifferent interactions for 100% of the isolates tested. These results demonstrate that the in vitro antifungal activity of the drug combination showed better results than the isolated one, except for associations with itraconazole. The most significant associations with amphotericin B and voriconazole deserve in vivo evaluations in order to verify their potential in the treatment of fusariosis. / O gênero Fusarium é caracterizado por fungos filamentosos hialinos que causam um amplo espectro de infecções predominantemente em pacientes imunocomprometidos. Estas micoses evidenciam elevados índices de morbidade e mortalidade e são de difícil diagnóstico, prevenção e tratamento. A marcante resistência primária deste gênero aos antifúngicos impõe a busca por novas possibilidades terapêuticas. Uma tentativa é a combinação entre fármacos com diferentes mecanismos de ação. Este estudo objetivou avaliar a suscetibilidade in vitro do gênero Fusarium a antifúngicos convencionais (anfotericina B, itraconazol e voriconazol) e associações destes com fármacos não antifúngicos (azitromicina, ciprofloxacina, fluvastatina, ibuprofeno, metronidazol e rifampicina) frente a 27 isolados de Fusarium spp., incluindo as espécies: F. chlamydosporum (3), F. nygamai (1), F. oxysporum (6), F. proliferatum (2), F. solani (11), F. sporotrichoides (1) e F. verticillioides (3). Com base no protocolo M38-A2 (CLSI, 2008) empregou-se a técnica de checkerboard para a avaliação das associações. Isoladamente, as CIMs para a anfotericina B variaram de 0,125 - 4 μg/ml; para o voriconazol variaram de 1 - >16 μg/ml e, para o itraconazol todos os isolados evidenciaram CIMs > 16 μg/ml. Todas as combinações com anfotericina B demonstraram interações sinérgicas, sendo que as mais eficazes foram: anfotericina B + ibuprofeno (44,4%), anfotericina B + metronidazol (40,7%) e anfotericina B + ciprofloxacina (37%). Não foram observadas interações antagônicas para as associações com anfotericina B. Similarmente, todas as associações com voriconazol demonstraram sinergismos; sendo que as associações mais significativas foram: voriconazol + ciprofloxacina (33,3%) e voriconazol + metronidazol (33,3%). O antagonismo foi observado em todas as associações com voriconazol frente a F. verticillioides. As associações com itraconazol evidenciaram interações indiferentes para 100% dos isolados testados. Estes resultados demonstram que a atividade antifúngica in vitro de fármacos combinados evidenciaram melhores resultados do que isolados, exceto para as associações com itraconazol. As associações mais relevantes com anfotericina B e voriconazol merecem avaliação in vivo, a fim de verificar o potencial das mesmas no tratamento da fusariose.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Type 2 diabetes mellitus (DM2) is a multifactorial disease mainly characterized by metabolic disorders related to insulin. Hyperglycemia is one of the causes of excessive generation of reactive oxygen species (ROS) leading to oxidative stress. In addition, DM2 is associated with increased inflammatory response. There is an intensive search for novel therapeutic drugs because the synthetic drugs currently used have side-effects and have their effectiveness reduced along the time of use. The jaboticaba (Myrciaria jaboticaba Vell Berg) peel powder (JAB) exhibit high antioxidant capacity and anti-inflammatory action due to the presence of polyphenols. The aim of this study was to evaluate the potential of JAB to prevent biochemical changes, oxidative stress, inflammatory response and pancreatic damage in a DM2 model induced by high-fat diet and a singular injection of streptozotocin (STZ; 35 mg/kg) in Wistar rats. After DM2 induction, instead of drinking water, the animals received vehicle (water containing 0.5% carboxymethyl cellulose) or JAB at 2.7 (JAB-I), 5.4 (JAB-II) or 10.8 (JAB-III) g/L of drinking water (equivalent to 0.07, 0.14 and 0.28 g anthocyanins/L, respectively). After 8 weeks of treatment animals were killed to evaluate the glycemia, insulinemia, oxidative stress and inflammatory markers were evaluated in the serum, besides antioxidant enzymes activities were evaluated in the blood and the histological changes in pancreatic tissue. Increased glycemia and fructosamine levels, insulin resistance and epididymal fat were observerd in the DM2 rats beyond decreased number and area of pancreatic islets. All JAB doses prevented the increase in glycemia over time, whereas JAB-III also reduced the end glycemia, fructosamine levels and the insulin resistance. JAB-I and JAB-II prevented body weight gain over the experiment, whereas JAB-I also decreased the amount of epididymal fat. Furthermore, JAB-I and JAB-III increased the area of pancreatic islets of diabetic rats. In addition, JAB-II and JAB-III treatment reduced the levels of oxidized LDL, whereas JAB-II treatment also reduced protein oxidation in diabetic rats. JAB treatment also prevented the decrease in the activities of glutathione peroxidase, catalase and thioredoxin reductase in the diabetic rats but did not change the decrease in the activity of superoxide dismutase. Only JAB-III treatment prevented the diabetes-induced increase in the inflammatory markers (IL-6, IL-1 and TNF-α). These findings suggest that JAB could have a beneficial effect against diabetes, reducing the hyperglycemia, the insulin resistance, oxidative stress and inflammatory response, besides decreasing pancreatic damage. / O diabetes mellitus tipo 2 (DM2) é uma doença multifatorial caracterizada principalmente por desordens metabólicas relacionadas à insulina. A hiperglicemia é uma das causas da geração excessiva de espécies reativas de oxigênio (EROs) que leva ao estresse oxidativo. Além disso, o DM2 está associado a aumento da resposta inflamatória. Há uma intensa busca por novos medicamentos terapêuticos, pois os medicamentos sintéticos utilizados atualmente apresentam efeitos adversos e tem sua eficácia reduzida ao longo do tempo de uso. O pó de casca de jabuticaba (JAB) (Myrciaria jaboticaba (Vell.) Berg.) apresenta alta capacidade antioxidante e ação anti-inflamatória devido à presença de polifenóis. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial do JAB em prevenir alterações bioquímicas, estresse oxidativo resposta inflamatória e dano pancreático em modelo de DM2 induzido por dieta hipercalórica e administração única de estreptozotocina (STZ, 35 mg/kg) em ratos Wistar. Após indução do DM2, em vez de água potável, os animais receberam veículo (água acrescida de 0,5% de carboximetilcelulose) ou JAB em 2,7 (JAB-I), 5,4 (JAB-II) e 10,8 (JAB-III) g/L (equivalente a 0,07, 0,14 and 0,28 g antocianinas/L, respectivamente). Após 8 semanas de tratamento os animais foram mortos para avaliar a glicemia, insulinemia, estresse oxidativo e marcadores inflamatórios avaliados no soro, além da atividade das enzimas antioxidantes avaliadas no sangue total e as alterações histológicas no tecido pancreático. O aumento da glicemia e dos níveis de frutosamina, resistência à insulina e gordura epididimal foram observados em ratos com DM2, além da redução do número e área das ilhotas pancreáticas. Todas as doses do JAB preveniram o aumento da glicemia ao longo do tempo, enquanto que JAB-III também reduziu os níveis de glicemia final, frutosamina e a resistência a insulina. JAB-I e JAB-II preveniram o ganho de peso corporal ao longo do experimento, enquanto que JAB-I também reduziu a quantidade de gordura epididimal. Além disso, JAB-I e JAB-III aumentaram a área das ilhotas pancreáticas dos ratos diabéticos. Adicionalmente, os tratamentos JAB-II e JAB-III reduziram os níveis de LDL oxidada, enquanto que o tratamento JAB-II também reduziu a oxidação proteica em ratos diabéticos. O tratamento com JAB também preveniu a redução nas atividades das enzimas glutationa peroxidase, catalase e tiorredoxina redutase nos ratos diabéticos, mas não alterou a redução na atividade da superóxido dismutase. Apenas o tratamento JAB-III preveniu o aumento dos marcadores inflamatórios (IL-6, IL-1 e TNF-α) induzidos no diabetes. Estes resultados sugerem que JAB poderia ter um efeito benéfico contra o diabetes, reduzindo a hiperglicemia, a resistência à insulina, estresse oxidativo e resposta inflamatória, além de diminuir o dano pancreático.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / hans, and is secreted into the bloodstream. It plays and important role in regulating the metabolic activities of the body, particularly the homeostasis of the blood glucose. Insulin glargine is a recombinant human insulin analogue produced by DNA technology using a strain of Escherichia coli and the insulin glargine differ only by three amino acids from human insulin. Reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) and size exclusion liquid chromatography (SE-LC) methods were developed and validated for the assessment of insulin glargine in biopharmaceutical formulations. A RP-LC method was carried out on a Jupiter C4 column (250 mm x 4.6 mm i.d.), maintained at 30 ºC. The mobile phase A consisted of 0.05 M sodium sulphate buffer, pH 2.5, and the mobile phase B was acetonitrile. The SE-LC method was carried out on a BioSep-SEC-S 2000 column (300 mm x 7.8 mm i.d.), maintained at 25 ºC. The mobile phase consisted of 0.03 M MES acid buffer, pH 2.5, run isocratically at a flow rate of 0.6 mL/min. Chromatographic separation was obtained with retention times of 7.5 min, and 9.9 min, and was linear over the concentration range of 0.05 - 200 μg/mL (R2 = 0.9998) and 0.02 - 180 μg/mL (R2 = 0.9999), respectively, for RP-LC and SE-LC, with photodiode array (PDA) detection at 214 nm and 200 nm for RP-LC and SE-LC methods, respectively. The limits of detection and quantitation were 0.018 and 0.054 μg/mL, respectively, for the RP-LC and 0.009 and 0.027 μg/mL, for the SE-LC. Specificity was established in degradation studies, which also showed that there was no interference of the excipients. Equally, the accuracy was 100.13% and 99.38%, with bias lower than 0.85% and than 0.86%. The validated methods were applied for the determination of insulin glargine and related proteins and high molecular mass, in biotechnology-derived products, giving lower mean differences of the estimated content/potencies of 0.21% and 0.16% for the RP-LC and SE-LC related, compared to the in vitro cell culture assay. It is concluded that represents a contribution to establish alternatives to monitor stability, quality control and thereby assure therapeutic efficacy of the biotechnology-derived medicine. / A insulina humana é um hormônio secretado pelas células β, das ilhotas de Langerhans, e regula os níveis sanguíneos de glicose. A insulina glargina é produzida pela tecnologia do DNA recombinante, expressa em Escherichia coli, e difere da insulina humana pela modificação da aspargina na posição 21 da cadeia A por uma glicina, além da adição de dois resíduos de arginina C-terminais na cadeia B. No presente trabalho foram desenvolvidos e validados métodos por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR) e por exclusão molecular (CL-EM) para a avaliação de insulina glargina em formulações biofarmacêuticas. No método por CL-FR, foi utilizada coluna Júpiter C4 (250 mm x 4,6 mm d.i.), mantida a 30 ºC. A fase móvel A foi constituída por tampão sulfato de sódio 0,05 M, pH 2,5, e a fase móvel B por acetonitrila, eluídas com fluxo constante de 0,5 mL/min. No método por CL-EM foi utilizada coluna BioSep-SEC-S 2000 (300 mm x 7.8 mm d.i.), mantida a 25 ºC. A fase móvel foi constituída de tampão MES 0,03 M, pH 2,5, eluída em vazão isocrática de 0,6 mL/min. Para ambos os métodos utilizou-se detector de arranjo de diodos (DAD) com detecções em 214 nm e 200 nm para CL-FR e CL-EM, respectivamente. A separação cromatográfica foi obtida nos tempos de 7,5 e 9,9 min, sendo linear na faixa de concentração de 0,05 - 200 μg/mL (R2 = 0,9998) e 0,02 - 180 μg/mL (R2 = 0,9999), respectivamente, para os métodos por CL-FR e CL-EM. Os limites de detecção e quantificação foram 0,018 e 0,054 μg/mL, respectivamente, para o método por CL-FR e 0,009 e 0,027 μg/mL por CL-EM. A especificidade foi avaliada em estudos de degradação, que também demonstraram que não houve interferência dos excipientes. A exatidão foi 100,13 e 99,38%, com bias inferior a 0,85 e 0,86%, respectivamente, para os métodos por CL-FR e CL-EM. Os métodos propostos foram aplicados para avaliação da potência de insulina glargina, de proteínas relacionadas agregados de alta massa molecular em formulações biofarmacêuticas, e os resultados foram comparados com o bioensaio por cultura de células in vitro, observando-se diferenças das médias de teor/potência 0,21% e 0,16% inferiores para os métodos por CL-FR e CL-EM. Concluí-se que representa contribuição para estabelecer procedimentos para monitorar a estabilidade, o controle da qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica do produto biotecnológico.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to obtain semisolids formulations and lipid core nanocapsules containing borage oil associated or not with betamethasone dipropionate, for their application in the treatment of atopic dermatitis. A gel-cream containing borage oil was prepared and presented satisfactory results for performed tests (pH, spreadability and viscosity suitable for topical application). The in vivo assay showed topical anti-inflammatory action of the oil in rats. Additionally, nanocapsule suspensions containing borage oil and betamethasone dipropionate were prepared by interfacial deposition of preformed polymer method and were characterized. The colloidal suspensions, showed a slightly acid pH (6.0-6.2), nanosized particles (180-210 nm), with a low polydispersity index (<0.1), negative zeta potential (-9 to -16 mV), betamethasone content was close to theoretical and encapsulation efficiency of approximately 100%. After 15 days of storage at room temperature, only zeta potential. Photodegradation study of of betamethasone dipropionate using UVC light was performed. It was observed a protection against photodegradation conferred by the nanostructured drug delivery systems. The in vitro release study of betamethasone dipropionate from nanocapsule suspensions demonstrated the ability of nanostructures to decrease the drug release. These nanostructures were incorporated into hydrogels (Carbopol® Ultrez and Cellosize®). The hydrogels were evaluated and showed acidic pH, nanosized particle, betamethasone content near to theoretical (0.5 mg / g) and pseudoplastic behavior (Herschel-Bulkley model). In vitro release study of betamethasone dipropionate from the hydrogels demonstrated a reduced release of the drug in the different analysis times, as compared with hydrogels containing the non-associated drug. The in vivo anti-inflammatory assay showed the anti-inflammatory activity of the hydrogels containing the nanostructures, which can demonstrate the drug and the oil activity when combined with polymeric nanocapsules. / Esse trabalho buscou obter formulações semissólidas e nanocápsulas de núcleo lipídico contendo o óleo de borragem associado ou não ao dipropionato de betametasona, visando sua aplicação no tratamento da dermatite atópica. Uma formulação semissólida do tipo creme-gel contendo o óleo de borragem foi preparada e apresentou resultados satisfatórios para os testes empregados (pH, espalhabilidade e viscosidade adequadas para aplicação tópica). O ensaio in vivo realizado em ratos Wistar evidenciou a ação anti-inflamatória tópica do óleo. Adicionalmente, suspensões de nanocápsulas foram preparadas pelo método de deposição interfacial de polímero pré-formado, contendo o óleo de borragem e dipropionato de betametasona, as quais foram caracterizadas em relação ao tamanho médio de partículas, índice de polidispersão (PdI), potencial zeta, microscopia de transmissão eletrônica, pH, teor de fármaco e eficiência de encapsulamento. As formulações apresentaram pH levemente ácido (6,0-6,2), partículas de tamanho nanométrico (180-210 nm), baixo índice de polidispersão (< 0,1), potencial zeta negativo (-9 a -16 mV), teor de betametasona próximo ao teórico e eficiência de encapsulamento de, aproximadamente, 100%. No período de 15 dias de armazenamento, a temperatura ambiente, apenas o potencial zeta. O estudo de fotodegradação do dipropionato de betametasona frente à luz UVC foi realizado e evidenciou a relevância dos sistemas nanoestruturados na proteção do fármaco. O estudo de liberação in vitro a partir das suspensões demonstrou a capacidade das nanocápsulas em reduzir a liberação do fármaco. As nanoestruturas foram incorporadas em hidrogéis (Carbopol® Ultrez e Cellosize®), os quais foram avaliados quanto ao pH, tamanho de partículas, espalhabilidade, propriedades reológicas e teor de fármaco. Os hidrogéis apresentaram pH ácido, tamanho de partícula nanométrico, teor de betametasona próximo ao teórico (0,5 mg/g) e comportamento pseudoplástico (modelo Herschel-Bulkley). No estudo de liberação in vitro do dipropionato de betametasona a partir dos hidrogéis verificou-se uma liberação menor do fármaco nos diferentes tempos de análise em comparação com os hidrogéis contendo o fármaco não associado. O ensaio in vivo para avaliar a atividade anti-inflamatória dos hidrogéis contendo as nanoestruturas foi também realizado, sendo possível comprovar a atividade do fármaco e do óleo quando associados à nanocápsulas poliméricas.