Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Sônia Maria Oliani / Banca: Angelo Gustavo Zucca Matthes / Resumo: O câncer de mama representa a neoplasia mais comum entre as mulheres, sendo classificado como o segundo mais frequente no mundo. O crescimento do tumor requer a formação de novos vasos que são estimulados por fatores angiogênicos e seus receptores. As células neoplásicas são capazes de modificar seu fenótipo para promover alterações funcionais e estimular a produção de proteínas envolvidas na angiogênese. A curcumina, componente do extrato de Curcuma longa L, é utilizada como alimento e na medicina tradicional, no entanto algumas evidências indicam que esse extrato possui ação oncostática em diferentes tipos de câncer. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do tratamento com curcumina na progressão tumoral e angiogênese em modelo experimental de câncer de mama. Células da linhagem de câncer de mama receptor triplo negativo (MDA-MB-231) foram cultivadas e a taxa de viabilidade celular verificada pelo ensaio MTT após tratamento com diferentes doses de curcumina. Para o estudo in vivo, as células foram implantadas em camundongos nude atímicos, os quais foram aleatoriamente divididos em animais tratados (n = 5) e controles (n = 8). Os animais receberam diariamente 300 mg/kg de curcumina ou veículo administrados intraperitonealmente durante 21 dias, cinco vezes por semana. O tamanho do tumor foi avaliado semanalmente com paquímetro digital. Ao final do tratamento, a angiogênese foi verificada in vivo pela técnica de tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), com o radiotraçador Tc-99m acoplado a proteína recombinante VEGF-c, que possui afinidade pelos receptores VEGFR2/3. Além disso, a expressão de VEGF-A, VEGF-C, VEGFR2/3, marcador de proliferação celular (Ki-67) e o fator de Von Willebrand (vWF) foram verificados pelo procedimento imuno-histoquímico. No estudo in vitro, houve diminuição da taxa de viabilidade das células tratadas com curcumina, quando comparadas ... / Abstract: Breast cancer is the most common cancer in women being rated as the second most common in the world. Tumor growth requires the formation of new vessels that are stimulated by angiogenic factors and their receptors. The neoplastic cells are able to modify their phenotype to promote functional changes and stimulate the production of proteins involved in angiogenesis. Curcumin, a component of the extract of Curcuma longa L, is used both as food and in traditional medicine, however some evidence indicates that this extract has oncostatic effects in different types of cancer. The aim of this study was to evaluate the effects of treatment with curcumin in tumor progression and angiogenesis in an experimental model of breast cancer. The cell line of human breast cancer (MDA-MB-231) was cultured and the rate of cell viability was measured by MTT assay after treatment with different doses of curcumin. For in vivo study, the cells were implanted in female athymic nude mice, which were randomly divided into treated (n = 5) and control animals (n = 8). The animals received daily 300 mg/kg of curcumin or vehicle daily, starting in the same day as tumor implantation and continued for 21 days five times per week. Tumor size was measured weekly with a digital caliper. The end of treatment, angiogenesis was assessed in vivo by the technique of computed tomography single photon emission tomography (SPECT) with the radiotracer Tc-99m-HYNIC-VEGF-c protein coupled recombining, which has affinity for VEGFR2/3. Furthermore, the expression of VEGF-A, VEGF-C e VEGFR2/3 marker of cell proliferation (Ki-67) and von Willebrand factor (vWF) receptors were verified by immunohistochemical. Curcumin treatment in vitro was able to significantly decrease cell viability (p < 0.05) Animals treated with curcumin showed less tumor volume (232.5 ± 53.2 mm 3) compared to control animals (282.0 ± 88.5 mm3), however, no significant difference (p > 0,05). The radioactivity of ... / Mestre

Resumo: O carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço é uma neoplasia cujo principal fator de risco é o consumo de tabaco e/ou álcool. As infecções pelo HPV têm sido observadas nesse grupo de tumores. Os HPVs de alto risco podem induzir alterações calulares pela interação de suas proteínas E6 e E7 com as proteínas p53 e a pRb, respectivamente. As oncoproteínas são insuficientes para o desenvolvimento do fenótipo maligno, sugerindo a presença de outros cofatores, como a susceptibilidade genética. O gene TP53 possui um polimorfismo que resulta na presença de uma prolina ou de uma arginina na posição correspondente ao códon 72, no exon 4. O objetivo do presente estudo foi avaliar o papel da infecção pelo HPV e do polimorfismo de TP53 na carcinogênese de cabeça e pescoço. Foram analisadas 142 amostras de indivíduos controle e 50 amostras de pacientes. Os resultados mostraram a presença do HPV em 10,6% dos controles e em 16% dos tumores. A análise da freqüência de distribuição dos genótipos relativos revelou 50% Arg/Arg, 43% Arg/Pro e 7% Pro/Pro no grupo controle e 52% Arg/Arg, 32% Arg/Pro e 16% Pro/Pro no grupo dos tumores. A análise estatística desses dados não mostrou diferença significativa na distribuição dos genótipos e dos alelos entre os dois grupos, independentemente da presença do HPV, à exceção dos indivíduos Pro/Pro, que estão associados à ausência do HPV. O alelo arginina e o genótipo Arg/Pro têm efeito protetor ao desenvolvimento dos tumores. O HPV não representa risco aos carcinomas espinocelulares de cabeça e pescoço. / Abstract: Head and neck squamous cell carcinoma is a disease associated with tobacco and/or alcohol abuse. There are evidences that oncogenic HPV may also be a risk for upper aerodigestive tract cancers. High-risk HPVs encode two early proteins, E6 and E7, that can bind to p53 and pRb, respectively, and induce its degradation or inactivation. The TP53 gene has a single polymorphism at codon 72 of exon 4 that encodes either arginine (Arg) or proline (Pro). The purpose of this study was to evaluate the role of HPV infection and p53 polymorphism in head and neck cancer. We analyzed 50 tumors as well swabs of oral mucosa from 142 control individuals by PCR technique. The prevalence of HPV in controls was 10.6% and in cancer specimens was 16%. The frequency of distribution of genotypes in controls was 50% Arg/Arg, 43% Arg/Pro and 7% Pro/Pro and in tumors was e 52% Arg/Arg, 32% Arg/Pro e 16% Pro/Pro. Contrarely to the results of some studies on cervical cancer, no association between any TP53 genotype or allele and the development of head and neck cancer was observed, regardless of HPV status, except for Pro/Pro genotype which is associated with the absence of HPV. Arginine allele and Arg/Pro genotype appear to protect against head and neck cancers. Also, the data showed that HPV infection results in no increasing risk of developing head and neck tumors.. / Orientador: Paula Rahal / Coorientador: Eloiza Helena Tajara da Silva / Banca: João Manuel Grisi Candeias / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Mestre

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Banca: Samuel Cos Corral / Banca: Bruno Cogliati / Resumo: O câncer de mama apresenta altas taxas de incidência e mortalidade, sendo a neoplasia mais comum entre as mulheres. O rápido crescimento do tumor resulta em hipóxia no microambiente tumoral, levando a uma cascata de eventos que induzem a angiogênese e conseqüente progressão do câncer. Assim, a identificação de agentes terapêuticos que possam inibir a angiogênese é essencial para o controle da progressão tumoral. Nesse sentido, tem sido demonstrado que a administração exógena da melatonina, um hormônio naturalmente secretado pela glândula pineal, apresenta diversos efeitos oncostáticos em diferentes tipos de câncer. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar a efetividade do tratamento com melatonina sobre a angiogênese do câncer de mama, em estudos in vitro e in vivo. No estudo in vitro, as linhagens de câncer de mama MCF-7 e MDA-MB-231 foram tratadas com melatonina sob condições de hipóxia mimetizadas pelo Cloreto de Cobalto (CoCl2). A viabilidade celular foi verificada pelo ensaio MTT, a expressão do fator de transcrição induzido por hipóxia (HIF-1α) e do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF-A) foi avaliada por PCR em tempo real e imunocitoquímica. Além disso, demais proteínas envolvidas na angiogênese foram avaliadas por Protein Array. No estudo in vivo, as células MDA-MB-231 foram implantadas em camundongos nude atímicos, os quais foram tratados com melatonina (40 mg/kg) por 21 dias. O tumor foi medido semanalmente e a avaliação da angiogênese foi realizada pela técnica de tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), com o radiotraçador Tc- 99m-HYNIC-VEGF-c, agente específico para os receptores de VEGF (VEGFR2/VEGF3). Além disso, as proteínas VEGFR2, VEGFR3, fator de fator de von Willebrand (vWF) e marcador de proliferação celular (Ki-67) foram avaliados no tecido tumoral por imuno-histoquímica, e demais proteínas angiogênicas por Protein Array. O estudo in ... / Abstract: Breast cancer has high rates of incidence and mortality, and it is the most common cancer among women. The rapid tumor growth results in hypoxia on tumor microenvironment, leading to a cascade of events that induce angiogenesis and subsequent cancer progression. Thus, the identification of therapeutic agents that can inhibit angiogenesis is essential for the control of tumor progression. Exogenous administration of melatonin, a hormone secreted by the pineal gland, has been shown several oncostatics effects on different types of cancers. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of melatonin treatment on angiogenesis in breast cancer, in the in vitro and in vivo studies. In the in vitro study, breast cancer cell lines (MCF-7 and MDA-MB-231) were treated with melatonin under cobalt chloride (CoCl2)-induced hypoxic conditions. Cell viability was measured by MTT assay, the expression of hypoxia-inducible factor 1-alpha (HIF-1α) and vascular endothelial growth factor (VEGF-A) was assessed by real-time PCR and immunocytochemistry. Additionally, other proteins involved in angiogenesis were evaluated by the Protein Array. In the in vivo study, the MDA-MB-231 cells were implanted in athymic nude mice, which were treated with melatonin (40 mg/kg) for 21 days. The tumor was measured weekly and evaluation of angiogenesis was performed by single-photon emission computed tomography (SPECT) with Tc-99m-HYNIC-VEGF-c, which is specific for VEGF receptors (VEGFR2/VEGF3). Moreover, VEGFR2, VEGFR3, von Willebrand factor (vWF) and cell proliferation marker (Ki-67) were evaluated in tumor tissue by immunohistochemistry, and other angiogenic proteins by Protein Array. Results from the in vitro study showed that 1 mM of melatonin under hypoxic conditions (200 μM CoCl2) led to decreased cell viability, protein levels of HIF- 1α and gene and protein expression of VEGF-A in both cell lines (p < 0.05). Among other proteins evaluated, melatonin ... / Doutor

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Patricia Simone Leite Vilamaior / Banca: Ana Paula Girol / Banca: Patricia Matos Biselli Chicote / Banca: Wilson Araújo da Silva Junior / Resumo: As neoplasias mamárias são os tumores de maior ocorrência em mulheres no mundo. A alta incidência deste tipo tumoral deve-se a um conjunto de fatores, entre eles o uso de hormônios, como o estrógeno e a exposição a produtos químicos, entre eles o Bisfenol A (BPA). Apesar da introdução de tratamentos mais efetivos para o câncer de mama, muitas vezes ocorre recorrência e/ou crescimento do tumor, invasão e metástase. As "células-tronco tumorais" (CTTs) vem sendo estudadas em tumores humanos nos últimos anos, consideradas as responsáveis pela recorrência do tumor e resistência a terapias. Devido ao determinante papel das CTTs, é importante a identificação de fatores que controlam sua proliferação. Estudos identificaram o fator de transcrição OCT4 (octamer-binding transcription factor 4), como um dos responsáveis pela auto-renovação e manutenção da pluripotência das células-tronco. Dessa forma, o estudo de potenciais fármacos que atuem sobre esta população específica no câncer de mama tem especial interesse. A melatonina, parece apresentar efeitos oncostáticos no entanto, pouco se sabe sob sua ação terapêutica sobre as células-tronco tumorais mamárias. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da melatonina sobre a regulação do marcador de células-tronco OCT4 pelo receptor de estrógeno em células-tronco tumorais mamárias, após o tratamento com estrógeno e bisfenol A. Para o estudo, as células de câncer de mama humano MCF-7 e MDA-MB-231 foram submetidas ao cultivo... / Abstract: Breast neoplasms are the most frequent tumors in women worldwide. The high incidence of this tumor type is due to a number of factors, including the use of hormones such as estrogen and exposure to chemicals, including bisphenol A (BPA). Despite the introduction of more effective treatments for breast cancer often occurs recurrence and/or tumor growth, invasion and metastasis. Recently, it was discovered the existence of "cancer stem cells" (CSCs) in human tumors, being responsible for tumor recurrence and resistance to therapy. Due to the important role of CSCs, the identification of factors that control its proliferation is important. Studies have identified the transcription factor OCT4 (octamer-binding transcription factor 4), as the one responsible for self-renewal and maintenance of pluripotency of stem cells. Thus, it has become interesting the study of potential drugs that target this specific population in breast cancer. Melatonin, seems to have oncostatic effects, however, little is known about its therapeutic action on breast cancer stem cells. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of melatonin on the regulation of the stem cell marker, OCT4, by the estrogen receptor in breast cancer stem cells, after treatment with estrogen and bisphenol A. For the study, human breast cancer cells MCF-7 and MDA-MB-231 cells were submitted to three dimensional growth of mammospheres, representing the stem cells. The CSCs were grown in cell suspension or anchorage ... / Doutor

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Bruno Cogliati / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Resumo: Câncer de mama representa a mais comum das neoplasias no sexo feminino, respondendo por 22% dos novos casos de câncer a cada ano. As neoplasias mamárias são ainda mais freqüentes na espécie canina, representando aproximadamente 52% de todas as neoplasias nas cadelas. A identificação de agentes terapêuticos que possam ser utilizados no tratamento alternativo para este tipo tumoral têm se revelado extremamente útil. A melatonina, um hormônio natural, parece exercer efeito oncostático em diferentes tipos de neoplasias. Considera-se como provável mecanismo de ação, sua interação com receptores estrogênicos e com os receptores MT1 e MT2 das células epiteliais, inibindo a proliferação das células neoplásicas. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o potencial valor terapêutico da melatonina em linhagens de câncer de mama e em tumores mamários caninos estrógeno-positivo e estrógeno-negativo, além de relacionar sua ação com a expressão dos receptores MT1 e MT2. A identificação de tumores mamários estrógeno-positivo e negativo foi realizada por meio de imuno-histoquímica e a expressão dos genes MT1 e MT2 nas amostras foi analisada por PCR em tempo real. As células cultivadas, provenientes dos tumores e das linhagens MCF-7 e MDA-MB-231 foram tratadas com melatonina e a viabilidade celular foi analisada pelo ensaio MTT. Observou-se 40% de redução na viabilidade celular nos tumores RE+ e RE- quando tratados, respectivamente, com 1mM e 10mM de melatonina (p<0,05). Além disso, os tumores RE+ apresentaram alta expressão dos receptores de melatonina MT1 e MT2 quando comparados aos tumores RE-. Com relação às linhagens, a linhagem MCF-7 (RE+) reduziu em 63% a viabilidade celular quando tratada com 10mM de melatonina (p<0,05) e para a linhagem MDA-MB-23 (RE-), esta mesma... (Resumo completo, clicar acesso eletrONico abaixo) / Abstract: Breast cancer is the most common cancer in women, accounting for 22% of new cancer cases each year. The mammary neoplasias are also common in canine species, representing about 52% of all cancers in female dogs. The identification of therapeutic agents that can be used as an alternative treatment for this tumor type has proven to be extremely useful. Melatonin, a natural hormone, can exercise oncostatic effects in several types of neoplasias. It is considered as a probable mechanism of action, their interaction with estrogenic receptors and with MT1 and MT2 receptors of the epithelial cells by inhibiting the proliferation of neoplastic cells. In this context, the objective of this study was to evaluate the potential therapeutic value of melatonin in breast cancer cell lines and canine mammary tumors estrogen-positive and estrogen-negative, also establishing relationship of its action to the MT1 and MT2 receptor. Identification of canine mammary tumors ER+ and negative was performed by immunohistochemistry and gene expression MT1 and MT2 in the samples was analyzed by real-time PCR. Cells cultured from the tumors and cell lines MCF-7 and MDA-MB-231 were treated with melatonin and cell viability was analyzed by MTT assay. We observed 40% reduction in cell viability in ER+ tumors and ER- when treated, respectively, with 1mM and 10mM melatonin (p <0.05). Furthermore, the ER+ tumors showed high expression of melatonin receptors MT1 and MT2 when compared to ER- tumors. Regarding cell lines, the cell line MCF-7 (ER+) showed 63% reduction in cell viability when treated with 10mM of melatonin (p <0.05) for the cell line MDA-MB-23 (ER-), this same concentration reduced 50% cell viability (p <0.05). The results suggest that melatonin decreases the viability of neoplastic cells, being more effective for RE-positive tumors... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Agnes Cristina Fett Conte / Banca: Cleide Largman Borovik / Banca: Cláudia Regina Bonini Domingos / Resumo: Síndromes Mielodisplásicas (SMD) compreendem um conjunto heterogêneo de doenças hematopoéticas caracterizadas por hematopoese ineficaz, que geralmente apresentam citopenias no sangue periférico, medula óssea hipercelular, diferenciação celular displásica e propensão ao desenvolvimento de leucemia mielóide aguda. São classificadas em oito tipos e a incidência anual é estimada entre dois e 12 casos por 100.000 pessoas da população em geral e em até 50 casos por 100.000 indivíduos com idades superiores a 60 anos. A análise cromossômica das células da medula óssea dos doentes ao diagnóstico detecta alterações diretamente relacionadas com o prognóstico em aproximadamente 50% dos casos. Alguns genes também foram relacionados à etiologia e prognóstico das mielodisplasias. O gene FOXO3, um supressor de tumor, embora não estudado anteriormente em SMD, é um dos genes que mais se expressam no tecido hematopoético normal. Alterações neste gene poderiam resultar em hematopoese anormal, pois já foram relacionadas a outros tipos de câncer, com mutações descritas no éxon 1. O objetivo deste trabalho foi estudar células da medula óssea de doentes com SMD de qualquer tipo, ao diagnóstico, para investigar a presença de alterações cromossômicas e de mutações no éxon 1 do FOXO3. A análise citogenética foi realizada em metáfases submetidas ao bandamento GTG, obtidas de culturas de curta duração de células da medula, sem estimulação mitogênica. Para a análise molecular foi extraído o DNA, realizada a amplificação gênica pela Reação em Cadeia da Polimerase e realizado o sequenciamento direto do éxon 1. Entre os 25 casos analisados, três (12%) apresentaram alterações cromossômicas clonais isoladas: deleção intersticial do braço longo do cromossomo 5; monossomia do cromossomo 21 e monossomia do cromossomo 22. Todas puderam ser relacionadas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Myelodysplastic syndrome (MDS) constitute a heterogeneous group of hematopoietic diseases characterized by ineffective hematopoiesis usually with peripheral blood cytopenia, hypercellular bone marrow, dysplastic differentiation and a tendency to evolve to acute myeloid leukemia. They are classified in eight categories by the World Health Organization. The annual incidence is estimated at between two and 12 cases per 100,000 individuals in the general population and up to 50 cases per 100,000 of over 60-year olds. A chromosomal analysis of bone marrow cells at diagnosis identifies changes directly related to prognosis in approximately 50% of cases. Additionally, some genes are also associated to the etiology and prognosis of myelodysplasia. Although not previously studied in respect to MDS, a tumor suppressor, FOXO3, is one of the most commonly expressed genes in normal hematopoietic tissue. Changes in this gene could therefore result in abnormal hematopoiesis, as mutations described in exon 1 have already been associated with other types of cancer. The aim of this study was to investigate chromosomal alterations and mutations in exon 1 of FOXO3 in bone marrow cells from patients diagnosed with any type of MDS. Cytogenetic analysis was performed on metaphases submitted to GTG banding, obtained from short-term cultures of bone marrow cells without mitogenic stimulation. To evaluate mutations in the FOXO3 gene, DNA was extracted from the bone marrow, gene amplification was achieved by polymerase chain reaction and direct sequencing was performed. Of the 25 cases analyzed, three (12%) showed clonal chromosomal abnormalities in isolation characterized as the interstitial deletion of the long arm of chromosome 5, monosomy 21 and monosomy 22. All were correlated to the diagnosis and/or prognosis of patients. No mutations were detected in exon 1, but the 159C>T polymorphism was detected... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:54:03Z : No. of bitstreams: 1 lopes_jr_me_sjrp.pdf: 325435 bytes, checksum: 90136719a8eb0c15c4ae524dada45238 (MD5) / Câncer de mama representa a mais comum das neoplasias no sexo feminino, respondendo por 22% dos novos casos de câncer a cada ano. As neoplasias mamárias são ainda mais freqüentes na espécie canina, representando aproximadamente 52% de todas as neoplasias nas cadelas. A identificação de agentes terapêuticos que possam ser utilizados no tratamento alternativo para este tipo tumoral têm se revelado extremamente útil. A melatonina, um hormônio natural, parece exercer efeito oncostático em diferentes tipos de neoplasias. Considera-se como provável mecanismo de ação, sua interação com receptores estrogênicos e com os receptores MT1 e MT2 das células epiteliais, inibindo a proliferação das células neoplásicas. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o potencial valor terapêutico da melatonina em linhagens de câncer de mama e em tumores mamários caninos estrógeno-positivo e estrógeno-negativo, além de relacionar sua ação com a expressão dos receptores MT1 e MT2. A identificação de tumores mamários estrógeno-positivo e negativo foi realizada por meio de imuno-histoquímica e a expressão dos genes MT1 e MT2 nas amostras foi analisada por PCR em tempo real. As células cultivadas, provenientes dos tumores e das linhagens MCF-7 e MDA-MB-231 foram tratadas com melatonina e a viabilidade celular foi analisada pelo ensaio MTT. Observou-se 40% de redução na viabilidade celular nos tumores RE+ e RE- quando tratados, respectivamente, com 1mM e 10mM de melatonina (p<0,05). Além disso, os tumores RE+ apresentaram alta expressão dos receptores de melatonina MT1 e MT2 quando comparados aos tumores RE-. Com relação às linhagens, a linhagem MCF-7 (RE+) reduziu em 63% a viabilidade celular quando tratada com 10mM de melatonina (p<0,05) e para a linhagem MDA-MB-23 (RE-), esta mesma... / Breast cancer is the most common cancer in women, accounting for 22% of new cancer cases each year. The mammary neoplasias are also common in canine species, representing about 52% of all cancers in female dogs. The identification of therapeutic agents that can be used as an alternative treatment for this tumor type has proven to be extremely useful. Melatonin, a natural hormone, can exercise oncostatic effects in several types of neoplasias. It is considered as a probable mechanism of action, their interaction with estrogenic receptors and with MT1 and MT2 receptors of the epithelial cells by inhibiting the proliferation of neoplastic cells. In this context, the objective of this study was to evaluate the potential therapeutic value of melatonin in breast cancer cell lines and canine mammary tumors estrogen-positive and estrogen-negative, also establishing relationship of its action to the MT1 and MT2 receptor. Identification of canine mammary tumors ER+ and negative was performed by immunohistochemistry and gene expression MT1 and MT2 in the samples was analyzed by real-time PCR. Cells cultured from the tumors and cell lines MCF-7 and MDA-MB-231 were treated with melatonin and cell viability was analyzed by MTT assay. We observed 40% reduction in cell viability in ER+ tumors and ER- when treated, respectively, with 1mM and 10mM melatonin (p <0.05). Furthermore, the ER+ tumors showed high expression of melatonin receptors MT1 and MT2 when compared to ER- tumors. Regarding cell lines, the cell line MCF-7 (ER+) showed 63% reduction in cell viability when treated with 10mM of melatonin (p <0.05) for the cell line MDA-MB-23 (ER-), this same concentration reduced 50% cell viability (p <0.05). The results suggest that melatonin decreases the viability of neoplastic cells, being more effective for RE-positive tumors... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-18Bitstream added on 2014-06-13T19:21:43Z : No. of bitstreams: 1 calmon_mf_dr_sjrp.pdf: 7036402 bytes, checksum: b702ff2267d57efa64885bfa0453276c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC) é uma doença heterogênea que afeta o epitélio da cavidade oral, laringe e faringe. A maioria dos pacientes é diagnosticada em estágios avançados da doença e ainda não existe nenhum marcador sensível e específico para o comportamento agressivo deste tumor. Portanto, uma detecção precoce e biomarcadores de prognóstico são altamente necessárias para uma administração mais racional da doença. A hipermetilação de ilhas CpGs é um dos mecanismos epigenéticos mais importantes que levam a um silenciamento gênico em tumores e tem sido extensivamente utilizados para a identificação de biomarcadores. Neste estudo foram combinados as análises de Rapid Substractive Hybridization (RaSH) e microarray de uma maneira hierárquica para selecionar genes que, supostamente, são reativados pelo agente desmetilante 5`'Aza'2`'deoxicitidina (5Aza'dC) em linhagens celulares derivados de carcinoma de cabeça e pescoço (FaDu, UM' SCC'14A, UM'SCC'17A e UM'SCC'38). Esta análise combinada identificou 78 genes dos quais 35 foram reativados em, pelo menos, 2 linhagens celulares e apresentavam ilha CpG nas suas regiões 5`. A reativação de três destes 35 genes (CRABP2, MX1 e SLC15A3) foi confirmada por PCR em tempo real (Fold change ≥ 3). O seqüenciamento de bissulfito de sódio das suas ilhas CpGs revelou que eles estão, de fato, diferencialmente metilados em linhagens celulares derivadas de carcinoma de cabeça e pescoço. Foram detectadas uma maior freqüência de hipermetilação dos genes CRABP2 (58.1% para a região 1) e MX1 (46.3%) em amostras primárias de câncer de cabeça e pescoço quando comparados a linfócitos de indivíduos saudáveis utilizando o PCR de metilação específica (MSP). Finalmente a ausência da proteína CRABP2 foi associada com... / Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a heterogeneous disease affecting the epithelium of the oral cavity, pharynx and larynx. Most patients are diagnosed at late stages of the disease and no sensitive and specific predictors of aggressive behavior have been identified yet. Therefore, early detection and prognostic biomarkers are highly desirable for a more rational management of the disease. Hypermethylation of CpG islands is one of the most important epigenetic mechanisms that leads to gene silencing in tumors and has been extensively used for the identification of biomarkers. In this study, we combined Rapid Subtractive Hybridization (RaSH) and microarray analysis in a hierarchical manner to select genes that are putatively reactivated by the demethylating agent 5'aza'2’'deoxycytidine (5Aza'dC) in HNSCC cell lines (FaDu, UM'SCC'14A, UMSCC'17A, UM'SCC'38A). This combined analysis identified 78 genes of which 35 were reactivated in at least 2 cell lines and harbored a CpG island at their 5’ region. Reactivation of three out of these 35 genes (CRABP2, MX1 and SLC15A3) was confirmed by qRT'PCR (fold change ≥ 3). Bisulfite sequencing of their CpG islands revealed that they are indeed differentially methylated in the HNSCC cell lines. Using Methylation Specific PCR (MSP), we detected a higher frequency of CRABP2 (58.1% for region 1) and MX1 (46.3%) hypermethylation in primary HNSCC, when compared to lymphocytes from healthy individuals. Finally, absence of the CRABP2 protein was associated with decreased disease'free survival rates, supporting a potential use of CRABP2 expression as a prognostic biomarker for HNSCC patients

Resumo: O tumor renal é a mais letal das doenças urológicas. É uma doença histologicamente heterogênea, sendo o carcinoma renal de células claras o subtipo histológico mais comum. Embora a nefrectomia e imunoterapia sejam tratamentos bem estabelecidos, aproximadamente 30% dos pacientes tratados são acometidos por metástases. Alterações na expressão gênica e na inativação transcricional, devido ao mecanismo de metilação, são evidentes em células cancerosas. A metilação do DNA é um evento epigenético intimamente relacionado com o silenciamento da expressão gênica, e está envolvida em vários processos, dentre eles, a carcinogênese. Dessa forma, este trabalho teve como objetivos investigar se os genes selecionados, GPC3, CRABP2, KTN1 e ADAM23 apresentam expressão alterada nas amostras tumorais, verificar se a expressão gênica está associada com a progressão tumoral, e analisar o padrão de metilação de ilhas CpGs. Os quatro genes selecionados foram validados pela técnica de PCR em Tempo Real. Para validação desses genes foram utilizadas 35 amostras de carcinoma renal de células claras e 35 amostras de córtex renal normal. Os genes GPC3, CRABP2, KTN1 e ADAM23 apresentaram redução de expressão significativa em amostras de carcinoma renal de células claras quando comparadas ao pool de amostras de córtex renal normal. Observou-se que a redução da expressão do gene ADAM23 está diretamente relacionada com o avanço do estadiamento tumoral. Foi observada uma freqüência elevada de hipermetilação do gene ADAM23, entretanto, não houve associação do padrão de metilação com os dados clínicos. A análise da expressão gênica e dos mecanismos responsáveis pela inativação transcricional dos genes CRABP2, KTN1 e ADAM23, estudados pela primeira vez em carcinoma renal, e GPC3, podem fornecer informações relevantes para o conhecimento e desenvolvimento do carcinoma renal de células claras. / Abstract: The renal tumor, which is the most lethal of urological diseases, is a histologically heterogeneous disease, and the clear cell renal cell carcinoma the most common histological subtype. Although the treatment of nephrectomy and immunotherapy are established, approximately 30% of patients are affected by metastases. Changes in gene expression and transcriptional inactivation, due to the methylation mechanism are evident in cancer cells. The DNA methylation is an epigenetic event closely related to the silencing of gene expression, and is involved in several cases, including the carcinogenesis. The aim of this study was to investigate the gene expression of GPC3, CRABP2, KTN1 and ADAM23, check if gene expression was associated with tumor progression and analyze methylation pattern of CpG island. The four selected genes were validated by the quantitative RT-PCR. Thirty five samples of clear cell renal cell carcinoma and 35 samples of normal renal cortex were used for validation. The genes GPC3, CRABP2, KTN1 and ADAM23 showed significant reduction of expression in samples of clear cell renal cell carcinoma when compared to a pool of samples of normal renal cortex. It was observed that the lower expression of ADAM23 is directly related to the advancement of the tumor staging. Despite the high frequency of hypermethylation of ADAM23, there was no association with the methylation pattern of the clinical data. The analysis of gene expression and the mechanisms responsible for the transcriptional inactivation of genes CRABP2, KTN1 and ADAM23, first studied in clear cell renal cell carcinoma, and GPC3, may provide relevant information for the clear cell renal cell carcinoma understanding and development. / Orientador: Paula Rahal / Coorientador: Paulo Peitl Júnior / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Andréia Machado Leopoldino / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-17Bitstream added on 2014-06-13T20:14:35Z : No. of bitstreams: 1 jorge_yc_me_sjrp.pdf: 4700733 bytes, checksum: 1fa001424eaf0ffba4a8cdeb55c5fce5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / No presente estudo foram investigados os níveis de expressão gênica e protéica da anexina-1 (ANXA1/AnxA1) e galectina-1 (LGALS1/Gal-1) na carcinogênese do estômago e associações com infecção pela Helicobacter pylori e o genótipo de virulência bacteriano cagA+. A análise foi realizada em 40 biópsias de mucosa gástrica com gastrite crônica (CG), 20 de câncer gástrico (GA) e 10 de mucosa normal (C), pelas técnicas de qPCR para quantificar os níveis de RNAm; imuno-histoquímica para caracterizar a expressão protéica na mucosa gástrica, e PCR para diagnóstico molecular da H. pylori e cepa cagA+. O estudo mostrou resultados inéditos quanto à expressão desses genes em gastrite crônica, ainda sem descrições na literatura. Foi demonstrada expressão relativa elevada do mRNA de ANXA1 em 80% dos casos de GA (média de 4,38 + 4,77) e em 90% dos casos de CG (média de 4,26 + 2,03), sem diferença significante entre os grupos (p = 0,33). O gene LGALS1 apresentou expressão elevada em 60% dos casos GA (média de 2,44 + 3,26) e, expressão constitutiva na CG (média de 0,43 + 3,13), mostrando, portanto, diferença significante entre os grupos (p < 0,01). A imuno-histoquímica revelou que as proteínas AnxA1 e Gal-1 não são expressas na mucosa normal. Ao contrário, durante o processo inflamatório de CG, imunomarcação citoplasmática positiva para a AnxA1 foi observada na porção basal do epitélio e estroma e, para Gal-1 a expressão foi constatada na porção apical e borda estriada do epitélio além do estroma. No adenocarcinoma tipo intestinal foi observada expressão citoplasmática em toda extensão epitelial e estroma tanto para a AnxA1 quanto para a Gal-1. Por outro lado, no tipo difuso imunomarcação positiva também foi observada no núcleo e membrana plasmática... / In this study we investigated the levels of gene and protein expression of annexin-1 (ANXA1/Anxa1) and galectin-1 (LGALS1/Gal-1) in gastric carcinogenesis and associations with Helicobacter pylori infection and bacterial virulence genotype cagA+. The analysis was performed in 40 biopsies of gastric mucosa with chronic gastritis (CG), 20 with gastric cancer (GA) and 10 of normal mucosa (C), by the techniques of qPCR to quantify mRNA levels, immunohistochemistry to characterize the protein expression in gastric mucosa, and PCR for molecular diagnosis of H. pylori cagA+ strains. This is the first study regarding the expression of these genes in chronic gastritis. High ANXA1expression levels were demonstrated in 80% of GA cases (mean 4.38 + 4.77) and in 90% of GC cases (mean 4.26 + 2.03), with no significant difference between groups (p = 0.33). High LGALS1 gene expression was found in 60% of GA cases (average 2.44 + 3.26), and constitutive expression was found in CG (mean 0.43 + 3.13), showing therefore a significant difference between groups (p <0.01). Immunohistochemistry revealed that the proteins AnxA1 and Gal-1 are not expressed in normal mucosa. In contrast, during the inflammatory process of CG, positive cytoplasmic immunostaining for AnxA1 was observed in the basal epithelium and stroma, and Gal-1 expression was detected in the apical portion and striated border of the epithelium and stroma. In intestinal-type adenocarcinoma was observed cytoplasmic expression in all epithelial and stromal extension for both AnxA1 and Gal-1. On the other hand, in diffuse-type adenocarcinoma positive immunostaining was also observed in the nucleus and plasma membrane of both proteins. Infection by H. pylori showed no association with the expression of both genes, but the genotype cagA+ is associated with about 2.5 times... (Complete abstract click electronic access below)