Submitted by GUILHERME RODRIGUES TEODORO null (guilhermerte@uol.com.br) on 2016-03-18T16:38:35Z No. of bitstreams: 1 Tese versao final guilherme em pdf.pdf: 1687373 bytes, checksum: 7ecfd9e5312d17f5c4885c915efc1671 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-21T20:00:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 teodoro_gr_dr_sjc.pdf: 1687373 bytes, checksum: 7ecfd9e5312d17f5c4885c915efc1671 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-21T20:00:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 teodoro_gr_dr_sjc.pdf: 1687373 bytes, checksum: 7ecfd9e5312d17f5c4885c915efc1671 (MD5) Previous issue date: 2016-02-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade frente a Candida albicans da fração enriquecida em fenólicos (FE) das folhas de Buchenavia tomentosa além das substâncias ácido gálico (AG), corilagina, kaempferol e vitexina, substâncias fenólicas que foram previamente detectadas no extrato aquoso de B. tomentosa livres ou encapsuladas em ciclodextrinas. Para tal, foi realizado teste de microdiluição com cepas padrão e isolados clínicos e análise química da FE por espectrometria de massa (ESI-MS). Detectou-se que o extrato acetônico foi a FE e AG foi a substância fenólica mais eficiente contra C. albicans. O efeito de FE e AG contra os fatores de virulência de C. albicans foram analisados. FE e AG foram encapsulados em 2-hidroxipropil-beta-ciclodextrina e tiveram sua análise química realizada. As CIMs e CFMs dos encapsulados foram determinadas, porém apenas o AG encapsulado teve sua ação anti-biofilme e in vivo verificadas. A citotoxicidade de AG e FE livres e encapsulados foi determinada. As CIMs variaram de 5,0 e 0,625 mg/ml para o ácido gálico e 2,5 e 0,019 mg/ml para FE. AG e as outras moléculas foram encontradas na FE. Não foram encontrados CFMs. Os fenólicos estudados também foram encontrados em FE por ESI/MS. Tanto FE quanto AG tiveram efeito direto nos fatores de virulência de C. albicans, exceto sobre a secreção de exoenzimas. Não houve diferença na CIM entre as substâncias livres e encapsuladas. AG encapsulado teve melhor ação anti-biofilme do sua forma livre. Foi verificada melhora clínica de lesões eritematosas no palato de ratos, porém não foi possível. A citotoxicidade das substâncias livres ou encapsuladas variou de moderava a leve para FE e foi moderada para AG. Após as análises, observou-se o efeito anti-C. albicans de FE e AG. AG encapsulado apresentou promissor efeito anti-biofilme e aparente melhora clínica nas lesões sugestivas de candidose eritematosa na mucosa palatar dos ratos. / The aim of this study was to evaluate the effectiveness against Candida albicans of fraction enriched in phenolic (FE) of Buchenavia leaves tomentosa beyond substances gallic acid (GA), corilagin, kaempferol and vitexin, phenolic substances previously detected in the aqueous extract of B. tomentosa, free or encapsulated in cyclodextrins. Microdilution test with standard strains and clinical isolates besides the chemical analysis of FE by mass spectrometry (ESI-MS) were carried out. The acetone extract was the FE and AG was the most efficient phenolic substance against C. albicans. The effect of FE and AG against the virulence factors of C. albicans was also analyzed. FE and AG were encapsulated into 2-hydroxypropyl-beta-cyclodextrin (HP-β-CD) and had their chemical analyses made. MICs and MFCs of encapsulated have been determined. Solely the GA encapsulated had its anti-biofilm and in vivo action verified. Cytotoxicity of free and encapsulated GA and FE were determined. The MIC ranged from 5,0 to 0,625 mg/ml for GA and 2,5 and 0,019 mg/ml for FE. MFCs values were not found. All phenolics molecules were found in FE by ESI/MS. AG and FE had a direct effect on virulence factors of C. albicans, except on the secretion of exoenzymes. There was no difference in the CIM between free and encapsulated substances. The anti-biofilm effect was better in GA encapsuladed than its free form. A clinical improvement of sugestives erythematous lesions on the palate of rats was observed, although the hyphaes were not found in the palatar mucosa. The cytotoxicity for all substances was moderated. After the analysis, we observed the anti-C. albicans effect of GA and FE. AG encapsulated showed promising anti-biofilm effect and apparent clinical improvement in lesions suggestive of erythematous candidiasis in palatar mucosa of rats. / FAPESP: 2012/16805-5 / FAPESP: 2013/00037-1 / CAPES - PDSE: 99999.000217/2014-00

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T19:11:57Z : No. of bitstreams: 1 baldan_rcf_me_araca.pdf: 521281 bytes, checksum: 0f50e815f21fa4a3959c51153cef58af (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Tem sido descrito que cerca de 30% do total leucoplasias possui tendência à malignização, a uma taxa de 2,9% ao ano. O envolvimento concomitante de leucoplasias com Candida albicans tem sido relacionado a possíveis processos de malignidade, tornando este questionamento uma fonte de debate. O presente trabalho avaliou a expressão qualitativa de p 53, Ki-67, PCNA e AgNOR em leucoplasias associadas à Candidose. Não foram observadas diferenças significativamente estatísticas (Tukey test, p<0,05) no grupo corado por AgNOR. Esses resultados discutem a taxa de proliferação celular epitelial e, talvez, indícios de alterações genéticas malignas presentes nas leucoplasias associadas à Candidose. / It has been described that 30% of leukoplakia with tendences to malignization, in a rate of 2,9% per year. The envolvement of leukoplakia associated to Candida albicans has been related to possible process of malignity, witch makes this question a source of debate. The aim of this study was to evaluate the qualitative expression of p53, Ki-67, PCNA and AgNOR in leukoplakia related to Candidosis. It wasþt observated statistical diferences in the AgNOR group (F test, p<0,05-ANOVA one-way). This results discuss a rate of celular epitelial proliferation and possibly genetic alterations present in leukoplakia related to Candidosis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-16Bitstream added on 2014-06-13T20:13:48Z : No. of bitstreams: 1 000736255.pdf: 1707898 bytes, checksum: 25854e8e08085aad1a5cd7032f46ee82 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Cordia verbenacea DC. pertence à família Boraginaceae que contém aproximadamente 100 gêneros, com mais de 2000 espécies distribuídas em todo o planeta. Ocorre ao longo de todo litoral brasileiro, sendo considerada, também, uma planta comum na Floresta Tropical Atlântica, possuindo vários nomes populares como maria-preta, maria-milagrosa e catinga-de-barão, sendo o mais comum erva-baleeira, ou simplesmente baleeira. É amplamente utilizada para tratar processos inflamatórios sendo geralmente aplicada topicamente nas áreas atingidas. Foi utilizada pelo laboratório Aché para o desenvolvimento do Acheflan®, primeiro medicamento fitoterápico 100% nacional com registro na Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), utilizado para o tratamento de tendinites crônicas e dores miofaciais. Este trabalho objetivou: traçar um perfil físico-químico da droga vegetal oriunda das partes aéreas de Cordia verbenacea; realizar um estudo anatômico e histoquímico do limbo; realizar um estudo fitoquímico preliminar traçando um perfil do extrato bruto e de suas frações, bem como verificar seus respectivos potenciais anti-Candida. Tricomas tectores e glandulares, estômatos anomocíticos e idioblastos contendo areia cristalina destacam-se como marcadores anatômicos. O estudo histoquímico revelou a ocorrência de lipídios totais, óleos essenciais, terpenoides com grupo carbonila, compostos fenólicos, flavonoides e pectinas. A droga vegetal estudada apresentou resultados favoráveis ao estabelecimento de parâmetros físico-químicos , tais como, perda por dessecação (8,40%), cinzas totais (17,40%) e cinzas insolúveis em ácido (1,02%), com perfil fitoquímico preliminar apontando ocorrência de saponinas, flavonoides, alcaloides, terpenos e taninos. O estudo em CCD foi confirmativo para flavonoides, terpenos e taninos. O extrato bruto e suas frações (aquosa, hexano, n-butanol e acetato de etila) apresentaram resultados... / Cordia verbenacea DC. belongs to the Borraginaceae family, which contains approximately 100 genera and over 2000 species distributed across the planet. This species occurs all along the Brazilian coast, and it´s also considered a common plant in the Atlantic Rainforest, having many popular names like maria-preta, maria-milagrosa e catinga-de-barão, the most common erva-baleeira, or simply baleeira. It is widely used to treat inflammatory processes and it´s usually applied topically on the affected areas. It was used by the Aché laboratories for the development of Acheflan®, it was the first national herbal medicine registrated in the Brazilian Regulatory Agency for Sanitary Surveillance (ANVISA), indicated for the treatment of chronic tendinitis and myoface pain. The aim of this work is to obtain a physical-chemical profile of the plant drug derived from branches of Cordia verbenacea; develop a morphological and histochemical study of limbo; develop a preliminary phytochemical study outlining a profile of the crude extract and its fractions, as well as checking their anti-Candida potential. Tector trichomes, glandular trichomes, anomocytic stomats and idioblasts with crystal sands stand out as anatomical markers. The histochemical study revealed the occurrence of lipids, essential oils, terpenoids with the carbonyl group, phenolic compounds, flavonoids and pectins. The drug studied showed favorable results to the establishment of physico-chemical parameters, such as loss on drying (8.40%), total ash (17.40%) and acid insoluble ash (1.02%), and a preliminary phytochemical profile that points occurrence of saponins, flavonoids, alkaloids, terpenes and tannins. The CCD study was confirmatory for flavonoids, terpenes and tannins. The crude extract and its fractions (aqueous, hexane, n-butanol and ethyl acetate) showed interesting results when compared with the results of the essential oil of Cordia verbenaceae literature. The minimum ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-17Bitstream added on 2014-06-13T19:44:50Z : No. of bitstreams: 1 000735111.pdf: 2795453 bytes, checksum: 93467ad7c66a8aafc937546db6e2ddfc (MD5) / Este estudo avaliou dois vernizes experimentais (M e P) em três diferentes concentrações (25, 30 e 35%) na prevenção da adesão e formação de biofilme multiespécies (Candida albicans, Candida glabrata e Streptococcus mutans) e sua associação com a escovação na remoção do biofilme e sua recolonização. Corpos-de-prova lisos e rugosos de uma resina acrílica foram confeccionados e divididos em grupos experimentais, de acordo com o verniz e concentração, além de grupos controle (sem verniz). Metade das amostras foi exposta em saliva (30 minutos). Posteriormente, realizou-se a adesão (90 minutos) ou a formação do biofilme multiespécies (48 horas). Para a avaliação da capacidade de remoção do biofilme aderido, corpos-de-prova contaminados foram escovados (30 segundos) e para a recolonização, além da escovação, as amostras foram incubadas por período adicional de 48 horas. Os micro-organismos remanescentes foram mensurados pelos ensaios de XTT e UFC. Para os testes de adesão e formação do biofilme, os grupos experimentais apresentaram, em geral, menor absorbância comparados com o controle, porém esta diferença não foi significante para a contagem de colônias, exceto para o S. mutans na formação do biofilme. A rugosidade, em geral, não promoveu alteração em qualquer dos testes realizados. A saliva não promoveu alterações na adesão dos micro-organismos, mas alterou a quantidade de biofilme formado. Houve remoção efetiva do biofilme com a escovação e com a recolonização. Conclui-se que os vernizes fotopolimerizáveis experimentais reduziram discretamente a adesão e formação do biofilme. Além disso, a escovação foi efetiva na remoção e recolonização do biofilme multiespécies. / This study evaluated the ability of two experimental coatings (M and P) at 25, 30 and 35% concentrations to modify the surface characteristics of a denture base resin and prevent the adhesion and biofilm formation of multi-species, as well as the effectiveness of brushing on biofilm removal and their recolonization. Specimens with smooth and rough surfaces were prepared and divided into experimental groups, according to the coating and concentration, and controls group (without coating). A half of specimens were exposed to saliva (30 minutes). The microorganisms adhesion (Candida albicans, Candida glabrata and Streptococcus mutans) was performed for 90 minutes and the biofilm formation was performed for 48 hours. For effectiveness of toothbrushing in biofilm elimination test, contaminated specimens with biofilm were exposed to toothbrushing in a brushing machine (30 seconds) and for recolonization, after brushing, the specimens were incubated again for 48 hours. Microorganisms quantification was measured by XTT and UFC tests. The adhesion and biofilm development showed that the experimental groups were, in general, lower absorbance compared with the control, but this difference was not significant for colony counting, except for S. mutans in biofilm formation. The roughness, in general, did not cause any change in all tests performed. Saliva did not change the adhesion of microorganisms, but reduce the biofilm formation. There was effective biofilm removal with brushing and recolonization tests. It was concluded that the experimental photopolymerised coatings slightly reduced adhesion and biofilm formation. Furthermore, toothbrushing was effective in multi-species biofilm removal and their recolonization.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-30Bitstream added on 2014-06-13T19:45:07Z : No. of bitstreams: 1 zamperini_ca_dr_arafo.pdf: 1388179 bytes, checksum: 6b6bce25f31321d415cd6c36937b0ae0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A adesão de Candida às superfícies protéticas é o passo inicial para ocorrência da estomatite protética. Entre os diversos fatores envolvidos na adesão de Candida spp. às superfícies poliméricas estão as interações hidrofóbicas e eletrostáticas, a rugosidade superficial e a película salivar. Assim, os objetivos deste estudo foram: investigar o potencial de diferentes tratamentos a plasma (Ar/50W; ArO2/70W; AAt/130W; ArSF6/70W) de modificar uma resina acrílica para base de prótese (VIPIWAVE) para reduzir a aderência de Candida albicans (ATCC 90028), avaliada pelo ensaio de XTT e cristal violeta. O efeito da rugosidade de superfície e do pré-condicionamento com saliva também foram avaliados; investigar se modificações de superfícies por meio de dois tratamentos a plasma (Ar/50W; AAt/130W) reduziriam a aderência de Candida glabrata (ATCC 2001), avaliada pela coloração cristal violeta, sobre superfícies lisas de resina acrílica. Além disso, o efeito do pré-condicionamento com saliva também foi avaliado; e ainda, avaliar se variações nos períodos de pré-condicionamento com saliva (0 min; 30 min; 60 min; 180 min; 720 min), nos parâmetros de centrifugação (velocidade e tempo) e número de doadores de saliva influenciariam os resultados de adesão de Candida albicans a uma resina acrílica para base de prótese, avaliada por meio do ensaio de XTT e coloração cristal violeta. Além disso, a correlação entre os dois métodos utilizados para avaliação da adesão de Candida albicans também foi avaliada. Os resultados obtidos demonstraram que os tratamentos a plasma são efetivos para modificação da hidrofobicidade de superfície ou incorporação de átomos de flúor na superfície da resina acrílica. Entretanto, após os tratamentos... / The adhesion of Candida to denture surfaces is the initial step for occurrence of denture stomatitis. Among the various factors involved on Candida adhesion to polymeric surfaces are the hydrophobic and eletrostatic interactions, surface roughness and pellicle salivary. Hence, the aims of this study were: to investigate the potential of different plasma treatments (Ar/50W; ArO2/70W; AAt/130W; ArSF6/70W) to modify a denture base acrylic resin (VIPIWAVE) to reduce the Candida albicans adhesion (ATCC 90028), evaluated by XTT reduction assay and crystal violet staining. The effect of surface roughness and saliva coating was also evaluated; to investigate the potential of two plasma treatments (Ar/50W; AAt/130W) to modify a denture base acrylic resin to reduce the Candida glabrata adhesion (ATCC 2001), evaluated by crystal violet staining. Moreover, the effect of saliva coating was also evaluated; and to assess the effect of different periods of preconditioning with saliva (0 min; 30 min; 60 min; 180 min; 720 min), variations in the centrifugation parameters (speed and time) and number of donors of saliva on Candida albicans adhesion to a denture base resin using crystal violet staining and XTT reduction assay. Additionally, the correlation between the two methods used for assessing Candida albicans adhesion was also evaluated. The results obtained demonstrated that the plasma treatments were effective in modifying hydrophobicity or incorporation of fluorine into acrylic resin. However, there were significant alterations in the contact angle measured after immersion in water. Groups ArO2/70W and ArSF6/70W showed significantly lower absorbance readings to Candida albicans adhesion than the other groups. No statistically significant difference in the adherence of Candida albicans, evaluated by... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-18. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:47:06Z : No. of bitstreams: 1 000843693.pdf: 366683 bytes, checksum: f4504cb95cbb08f21d4a54b0e5602077 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo teve como objetivo padronizar a identificação das amostras de espécies de Candida albicans e não-albicans por meio da técnica molecular da reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex Os isolados foram obtidos de um estudo prévio, no qual foram realizados os procedimentos de coleta, isolamento e identificação das espécies de Candida de indivíduos HIV positivos e controle. Foram realizadas provas fenotípicas como a produção de clamidoconídeos e formação de tubo germinativo e pelo sistema de identificação API 20 C AUX. Para a identificação molecular de cada espécie foram utilizadas cepas ATCC e controle positivo. Os isolados foram semeados em caldo Sabouraud dextrose e incubados à 37 ºC por 24 h. Foi realizada a extração, quantificação e purificação do DNA. A amplificação do DNA foi realizada por iniciadores específicos para a identificação de C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei e C. guilliermondii. A presença e o comprimento dos fragmentos amplificados foram analisados em gel de agarose com brometo de etídio e visualizadas em luz ultra-violeta. Um total de 104 amostras previamente identificadas pelo API foram identificadas pela PCR multiplex e os resultados mostraram que apenas 14,4% estavam em discordância com o método fenotípico, dentre elas, dez amostras de C. albicans, duas de C. glabrata, uma de C. parapsilosis e duas de C. tropicalis. As amostras em discordância foram semeadas em meio cromogênico para Candida para confirmação da PCR multiplex. Os procedimentos de identificação fenotípicas geraram um custo aproximado de R$82,00 por amostra. PCR multiplex teve um gasto de aproximadamente R$8,00 por amostra e o tempo gasto na técnica molecular levou aproximadamente 8 h, já a identificação por métodos clássicos e bioquímicos podem exigir até 72 h. Concluimos que a PCR multiplex é um método preciso, fácil, econômico e rápido... / Este estudo teve como objetivo padronizar a identificação das amostras de espécies de Candida albicans e não-albicans por meio da técnica molecular da reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex Os isolados foram obtidos de um estudo prévio, no qual foram realizados os procedimentos de coleta, isolamento e identificação das espécies de Candida de indivíduos HIV positivos e controle. Foram realizadas provas fenotípicas como a produção de clamidoconídeos e formação de tubo germinativo e pelo sistema de identificação API 20 C AUX. Para a identificação molecular de cada espécie foram utilizadas cepas ATCC e controle positivo. Os isolados foram semeados em caldo Sabouraud dextrose e incubados à 37 ºC por 24 h. Foi realizada a extração, quantificação e purificação do DNA. A amplificação do DNA foi realizada por iniciadores específicos para a identificação de C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei e C. guilliermondii. A presença e o comprimento dos fragmentos amplificados foram analisados em gel de agarose com brometo de etídio e visualizadas em luz ultra-violeta. Um total de 104 amostras previamente identificadas pelo API foram identificadas pela PCR multiplex e os resultados mostraram que apenas 14,4% estavam em discordância com o método fenotípico, dentre elas, dez amostras de C. albicans, duas de C. glabrata, uma de C. parapsilosis e duas de C. tropicalis. As amostras em discordância foram semeadas em meio cromogênico para Candida para confirmação da PCR multiplex. Os procedimentos de identificação fenotípicas geraram um custo aproximado de R$82,00 por amostra. PCR multiplex teve um gasto de aproximadamente R$8,00 por amostra e o tempo gasto na técnica molecular levou aproximadamente 8 h, já a identificação por métodos clássicos e bioquímicos podem exigir até 72 h. Concluimos que a PCR methods is an accurate, easy, economical and quick to....

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:46:30Z : No. of bitstreams: 1 000846264.pdf: 4110745 bytes, checksum: 9413f0f4aa0915b943ec1e5d62692439 (MD5) / O objetivo do presente estudo in vitro foi avaliar a interação entre os microorganismos C. albicans, S. aureus sensível (MSSA) e resistente (MRSA) à meticilina com relação a alguns dos seus principais fatores de virulência. Estes fatores foram analisados considerando os micro-organismos isoladamente e em culturas mistas. Foi verificada a interação entre esses micro-organismos através da contagem do número de colônias viáveis (UFC/mL), análise da atividade metabólica por meio do ensaio XTT e quantificação da biomassa total por meio do corante cristal violeta nos tempos de 90 minutos, 12, 24 e 48 horas. Para análise da produção de proteinase (SAP) e fosfolipase (PL-C), kits fluorimétricos foram utilizados. A estrutura dos biofilmes foi avaliada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Culturas simples e mistas dos micro-organismos também foram utilizadas para infectar um epitélio oral humano reconstituído (EOHR). A capacidade de colonização e invasão foi avaliada após 24 horas utilizando a técnica de hibridização in situ (PNA-FISH). A avaliação do dano causado pelos micro-organismos ao tecido foi realizada por quantificação da liberação da enzima lactato desidrogenase (LDH). Técnicas moleculares (RT-qPCR) foram empregadas para quantificação do número de micro-organismos colonizando o epitélio e também para avaliação da expressão de genes de virulência. A expressão gênica foi avaliada em superfície biótica (EOHR) e abiótica (placa de poliestireno de 24 poços) para culturas simples e mistas dos micro-organismos. Os resultados dos ensaios de quantificação foram analisados utilizando ANOVA a dois critérios com teste post-hoc de Tukey (α = 0,05), enquanto os dados de atividade enzimática foram analisados por ANOVA a um critério com correção de Welch seguido pelo teste de Games-Howell. Os resultados da expressão gênica foram... (Resumo completo clicar acesso eletrônico) / The aim of this study was to evaluate, in vitro, the interaction between C. albicans and methicillinsusceptible (MSSA) and resistant (MRSA) S. aureus in relation to some of their major virulence factors. These factors were analyzed considering the three microorganisms in single and dual cultures. The interaction between these microorganisms was evaluated by counting colony-forming units (CFU/mL), analysis of metabolic activity by the XTT assay and quantification of the total biomass by crystal violet dye at 90 minutes, 12, 24, and 48 hours. To analyze the production of proteinase (SAP) and phospholipase (PL-C), fluorometric kits were used. The structure of the biofilms was acessed by scanning electron microscopy (SEM). Further, single and dual cultures of microorganisms were used to infect a reconstituted human oral epithelium (RHOE). The pattern of colonization and invasion of the RHOE was evaluated after 24 hours using the in situ hybridization technique (PNA-FISH). The damage caused by microorganisms in the tissue was evaluated by quantification of the lactate dehydrogenase enzyme (LDH) released. Molecular techniques (RT-qPCR) were also used to quantify the number of microorganisms colonizing the epithelium and to evaluate the expression of virulence genes. Gene expression was evaluated in biotic (RHOE) and abiotic (24-well polystyrene microplate) surfaces for single and dual cultures. The results from quantification assays were compared using two-way ANOVA with Tukey post-hoc test, while data from enzymatic activities were analyzed by one-way Welch-ANOVA followed by Games-Howell post hoc test. The results of gene expression were analyzed by one-way ANOVA with Tukey for data satisfying the assumptions of normality and homoscedasticity or one-way Welch-ANOVA followed by Games-Howell for heteroscedastic data. LDH results were also...(Complete abstract electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2014-12-02T11:21:11Z : No. of bitstreams: 1 000798443_20150226.pdf: 399987 bytes, checksum: 543d4cc46e39f73299988030facaa4b7 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-02-27T13:20:33Z: 000798443_20150226.pdf,Bitstream added on 2015-02-27T13:21:09Z : No. of bitstreams: 1 000798443.pdf: 3592822 bytes, checksum: 340bdbff7002bc9a19186e1b6b64a169 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O surgimento de biofilmes de Candida albicans como uma forma de resistência microbiana em superfícies sólidas é um problema de saúde pública crescente, uma vez que as opções terapêuticas eficientes para a redução e eliminação deste são escassas, sobretudo devido à sua alta resistência a antifúngicos. As enzimas produzidas por micro-organismos despertam um grande interesse por representarem uma opção biotecnológica aos enxaguatórios e antifúngicos disponíveis no mercado. O objetivo deste estudo foi produzir, determinar a atividade, fracionar três diferentes enzimas fúngicas (protease, amilase e lipase) e estabelecer a efetividade destas na redução de biofilme de C. albicans, além de avaliar os possíveis mecanismos de ação destas enzimas sobre o biofilme. A produção enzimática foi realizada por diferentes linhagens fúngicas a partir de fermentação submersa em biorreator, acompanhada de estudo dos parâmetros bioquímicos de cada enzima. A avaliação da efetividade frente ao biofilme de C. albicans foi realizada por diferentes métodos: redução de biofilme de C. albicans em microplaca de 96 orifícios por XTT; redução do número de unidades formadoras de colônia de biofilme por contagem em ágar Sabouraud dextrose com cloranfenicol (SDA); redução de biofilme em corpos de prova de resina acrílica por XTT e redução do número de unidades formadoras de colônia dos corpos de prova por contagem em ágar SDA. Ainda, foi analisada também a influência destas enzimas sobre fatores de virulência, ergosterol de parede e sobre o desenvolvimento e arquitetura do biofilme com a análise por microscopia eletrônica de varredura. As três enzimas foram eficientes nos ensaios de redução de biofilme, sobretudo frente a biofilmes maduros, de 48 horas, reduzindo cerca de 80-90% deste tanto em microplacas como em corpos de prova. Nos ensaios em microplacas, a amilase foi mais ativa dentre as três, em contato de 30 ... / The emergence of Candida albicans biofilms as a form of microbial resistance on solid surfaces is a increasing public health problem, since the effective therapeutic options for the few reduction and elimination, mainly due to its high resistance to antifungals. The enzymes produced by microorganisms attract great interest because they represent an option to biotechnology and antifungal mouthwashes available in the market. The aim of this study was to produce, determine the activity, fractionate three different microbial enzymes (protease, amylase and lipase), and to evaluate the effectiveness in reducing biofilm of C. albicans besides the possible mechanisms of action of these enzymes on the biofilm. For enzyme production were used fungal strains submitted the liquid fermentation in bioreactor, accompanied by study of biochemical parameters of each enzyme. The assessment of effectiveness against biofilms of C. albicans was performed by different methods: Evaluation of the ability to reduce biofilm of C. albicans in microplate 96 wells by XTT; Evaluation of the reduction in the number of colony forming units of biofilm by counting in Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol; Evaluation of biofilm reduction capacity of C. albicans in specimens of acrylic resin by XTT and reduction capacity of the number of colony forming units per count Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol. In addition, it is also analyzed the influence of these enzymes on virulence factors and the development of biofilm architecture and by analysis in scanning electron microscopy. The three enzymes were effective in reducing assays well microplate as specimens, especially against mature biofilms, 48 hours. The assays in microplates, amylase was the most active enzyme of the three, in contact of 30 minutes, while the protease was more effective in contact of 60 minutes and the lipase was less active in both periods analyzed. However, in specimens, the enzymes ...

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-12-12Bitstream added on 2015-01-26T13:30:15Z : No. of bitstreams: 1 000214602.pdf: 7397115 bytes, checksum: 517e467c2c728fcb27cd32698e43ccc4 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi avaliar o desenvolvimento de candidose e a recuperação de Candida albicans na cavidade bucal de ratas controles e ovariectomizadas. Foram utilizadas 124 ratas não portadoras do gênero Candida na cavidade bucal, divididas em dois grupos: controle e ovariectomizado. Em cada grupo, quatro ratas foram utilizadas para avaliação morfológica do dorso da língua por microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura; e 58 ratas receberam inoculações de C. albicans para estudo da candidose e recuperação de leveduras. O desenvolvimento de candidose no dorso da língua foi observado em microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura nos períodos de seis horas, 24 horas, sete e 15 dias após a última inoculação. A recuperação de C. albicans foi realizada através de coletas de amostras bucais em intervalos de tempo de um, dois, cinco, sete dias, e progressivamente, a cada 15 dias até a obtenção de culturas negativas para leveduras. Os resultados foram analisados estatisticamente pelos testes t de Student e Mann-Whitney. A morfologia do dorso da língua das ratas do grupo ovariectomizado não infectado por Candida foi semelhante ao controle. Entre as ratas infectadas, o grupo ovariectomizado exibiu menor quantidade de lesões de candidose em relação ao controle. A recuperação de C. albicans da cavidade bucal dos animais ovariectomizados foi inferior aos controles em todos os períodos de observação. Concluiu-se que a candidose e a recuperação de C. albicans na cavidade bucal das ratas foram menos freqüentes no grupo ovariectomizado em relação ao controle / The purpose of this work was to observe the development of candidosis and the recovery of C. albicans from the oral cavity of control and ovariectomized rats. Hundred twenty-four rats originally negative for the Candida spp. in the oral cavity were divided into two groups: control and ovariectomized. ln each group, four rats were used for tongue dorsum morphologic analysis by optical microscope and scanning electron microscope; and 58 rats received inoculations of C. albicans for the study of candidasis and recovery of yeasts. The development of candidosis on the tongue dorsum was observed in optical microscope and scanning electron microscope in the periods of six hours, 24 hours, seven days and 15 days after the last inoculation. The recovery of C. albicans was performed through oral samples collected at one, two, tive, seven days and progressively at each 15 days until negative cultures for the yeasts were obtained. The results were statistically analyzed by the t-student and Mann-Whitney tests. The tongue dorsum of the control and ovariectomized rats, not infected by Candida, presented normal aspect. Among lhe infected rats, the ovariectomized group showed less quantity of candidosis lesions in relation to control. The recovery of C. albicans from the oral cavity of ovariectomized animals was lower in relation to control in all periods of observation. lt could be concluded lhat candidosis and recovery of C. albicans ln the oral cavity of rats were less frequent in the ovariectomized group in relation to control

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-21Bitstream added on 2015-03-03T12:07:38Z : No. of bitstreams: 1 000797448.pdf: 1448139 bytes, checksum: 48dfe16fa3be080667b00a8cda3a288e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Na busca por fontes alternativas de antimicrobianos, diversos autores tem explorado o uso de plantas medicinais para o tratamento de várias doenças. A atividade antimicrobiana de várias espécies de plantas como, Cordia verbenacea DC, Mikania laevigata Schultz Bip. Ex Baker e Psidium cattleianum, popularmente chamadas de erva-baleeira, guaco e de araçá, respectivamente, tem sido relatada contra diversos microrganismos orais. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito antimicrobiano dos extratos hidroetanólico bruto e as suas respectivas frações aquosa, butanol, hexano e acetato de etila de Cordia verbenacea (CV) e Mikania laevigata (ML) e extratos aquoso e hidroetanólico de Psidium cattleianum (PC) contra Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Actinomyces israelii e Candida albicans, sob condições planctônicas e de biofilme. Os microrganismos foram analisados em condições planctônicas por meio de ensaios para a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração letal mínima (CLM), pelo método de microdiluição em caldo. Posteriormente, foram selecionados somente os extratos capazes de eliminar completamente cada microrganismo (CLM 100%), para a análise da atividade antimicrobiana em ensaios de biofilme. Os resultados mostraram que os valores de CIM e CLM variaram de 250 à 4000?g/ml. O biofilme formado por E. faecalis foi eliminado frente à ação dos extratos aquoso e hidroetanólico de PC e à fração acetato de etila de ML. A mesma fração de ML e o extrato hidroetanólico de PC também foram capazes de eliminar biofilme de P. aeruginosa. O mesmo ocorreu com as frações hexânicas de CV e ML e o extrato hidroetanólico de ML frente ao biofilme de A. israelii. Nenhum extrato/fração foi capaz de eliminar biofilme de C. albicans. Este estudo demonstrou o potencial antimicrobiano de extratos ou frações de Cordia verbenacea, Mikania laevigata... / Seeking for alternative sources of the antimicrobials, several authors have explored the use of herbal medicines for the treatment of diseases. The antimicrobial activity of various species of plants, such as Cordia verbenacea DC, Mikania laevigata Schultz Bip. Ex Baker and Psidium cattleianum, known as erva-baleeira, guaco and araçá, respectively, has been reported against several oral microorganisms. The present study aimed to evaluate the antimicrobial effect of Cordia verbenacea (CV) and Mikania laevigata (ML) hydroethanolic crude extracts and their fractions aqueous, butanol, hexane and ethyl acetate and aqueous and hydroethanolic extracts of Psidium cattleianum (PC) against Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Actinomyces israelii and Candida albicans, under planktonic and biofilm conditions. The microorganisms in planktonic conditions were analyzed by determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum lethal concentration (MLC) assays using the microdilution broth method. Posteriorly, only the extracts that were able to totally eliminate each microorganism (MLC 100%) were selected for the antimicrobial activity analysis in the biofilm assay. The results showed that the MIC and MLC values ranged between 250 and 4000?g/ml. E. faecalis biofilm was eliminated by PC aqueous and hydroethanolic extracts and the ML ethyl acetate fraction. The same ML fraction and PC hydroethanolic extract were also able to eliminate the P. aeruginosa biofilm. The same occurred with the CV and ML hexane fractions and ML hydroethanolic extract against the A. israelii biofilm. None of the extracts/fractions were able to eliminate the C. albicans biofilm. This study confirmed the antimicrobial activity potential of Cordia verbenacea, Mikania laevigata and Psidium cattleianum, suggesting their use for endodontic purposes due to their effectiveness against pathogens associated with persistent or se...