Made available in DSpace on 2014-08-13T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-12Bitstream added on 2014-08-13T17:59:40Z : No. of bitstreams: 1 000776115.pdf: 505427 bytes, checksum: f0bd3aff54fc0a3a94372e461d90f65c (MD5) / Com o crescente aumento de cepas de Candida spp. resistentes a antifúngicos, torna-se importante e necessário a realização de pesquisas que avaliem os efeitos de novos métodos terapêuticos, como a Terapia Fotodinâmica (TFD), sobre fatores de virulência desse gênero. A produção das enzimas hidrolíticas aspartil-proteinase (SAP), lipase (LIP) e fosfolipase (PL) é considerado um importante fator de virulência de C. albicans. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre biofilmes de Candida albicans, avaliando seus efeitos sobre a expressão dos genes SAP5, LIP9 e PLB2 pelas leveduras. Foram utilizadas cepas clínicas de Candida albicans (n=9) que foram isoladas de pacientes portadores do vírus HIV e a cepa padrão ATCC 18804. A quantificação da expressão dos genes foi relacionada à produção de enzimas hidrolíticas (SAP5, LIP9 e PLB2) nas amostras clínicas e na cepa de referência utilizando-se o ensaio de PCR em tempo real. Para a terapia fotodinâmica foi utilizado laser de gálio-alumínio-arseneto de baixa potência (vermelho visível, 660 nm) como fonte de luz e o corante azul de metileno a 300 μM, como fotossensibilizador. Foram avaliados quatro grupos experimentais, para cada cepa: a) F+L+: sensibilização com azul de metileno e irradiação com laser; b) F+L-: somente tratamento com azul de metileno; c) F-L+: somente irradiação com laser e d) F-L-: grupo controle, sem sensibilização com azul de metileno e ausência de luz. Os resultados obtidos foram analisados pelo Software do equipamento de real-time. A TFD diminuiu a expressão dos genes em 60% das amostras para o gene SAP5 e em 50% das amostras diminuiu a expressão de LIP9 e PLB2. Pode-se concluir que a TFD teve um efeito sobre os genes SAP5, LIP9 e PLB2 de C. albicans, considerados fatores de virulência / With the increasing number of strains of Candida ssp. resistant to antifungal agents, becomes important and necessary the accomplishment of researches that evaluate the effects of new therapeutic methods, like Photodynamic therapy (PDT) in virulence factors of that gender, as the production of the hydrolytic enzymes aspartyl-proteinase (SAP), lipase (LIP) and phospholipase (PL). Thus, the objective of this study was to verify the effects of the photodynamic therapy on biofilms of Candida albicans, evaluating their effects on the expression of the genes SAP5, LIP9 and PLB2 for the yeast. Clinical strains of Candida albicans (n=9) isolated from patients bearers of the virus HIV and a pattern strain ATCC 18804 were used. The quantification of gene expression was related to the production of hydrolytic enzymes (SAP5, LIP9 and PLB2) in clinical samples and the reference strain using the PCR assay in real time. For photodynamic therapy were used laser-aluminum-gallium arsenide low power (red visible, 660 nm) as light source and the methylene blue to 300 μM, as a photosensitizer. We were assessed four experimental groups for each strain: a) F+L+: sensitization with methylene blue and laser irradiation; b) F+L-: only treatment with methylene blue; c) F-L+: only laser irradiation and d) F-L-: control group, without sensitization with methylene blue and light absence. The results were analyzed by the software of the real-time equipment. The PDT decreased gene expression in 60% of samples for gene SAP5 and 50% of the samples decreased expression of LIP9 and PLB2. It can be concluded that PDT had an effect on the genes SAP5, LIP9 and PLB2 of C. albicans

Investigamos a ocorrência de espécies de leveduras isoladas em um hospital infantil. Pesquisamos a presença de C. dubliniensis; investigamos as espécies do complexo Candida parapsilosis e estudamos as espécies deste complexo quanto a produção de biofilme. Pesquisamos os fatores relacionados a virulência e o perfil de sensibilidade pelo método Etest®. Dentre os anos em estudo C. albicans foi a levedura mais isolada com 36.45% seguida de C. tropicalis 23.36%, C. parapsilosis sensu stricto 21.49%, Pichia anômala 5.61%, C. guilliermondii 4.67%, C. krusei 2.80%; C. orthopsilosis 1.87%, C. glabrata 1.87%, C. metapsilosis 0.94%, C. pararugosa 0.94%. C. dubliniensis não foi isolada nesta pesquisa. No estudo do complexo Candida parapsilosis, C. parapsilosis sensu estricto foi a espécie mais prevalente. Produziram biofilme apenas oito amostras de C. parapsilosis sensu estricto e uma amostra de C. orthopsilosis. As espécies não-albicans produziram mais proteinase e hialuronidase do que C. albicans. No estudo da fosfolipase e hemolisina, C. albicans foi a espécie mais produtora. Todas as amostras foram sensíveis para anfotericina B e para fluconazol quatro amostras foram resistentes. Duas amostras foram resistentes para caspofungina. / We investigated the occurrence of yeast species isolated in a public hospital. We researched the presence of C. dubliniensis and investigated the species within the complex Candida parapsilosis and studied this complex in relation to biofilm´s production. We also investigated the factors related to virulence and studied the sensibility profile by the \"Etest ®\" method. During the years of study, C. albicans was the most isolated yeast with 36.45% followed by C. tropicalis 23,36%, C. parapsilosis sensu stricto 21,49%, Pichia anomala 5,61%, C. guilliermondii 4.67%, C. krusei 2.80%, C. orthopsilosis 1.87%, C. glabrata 1.87%, C. metapsilosis 0.94%, C. pararugosa 0.94%. C. dubliniensis was not isolated in this study. In the study of Candida parapsilosis complex, C. parapsilosis sensu stricto was the most prevalent species. Only eight strains of C. parapsilosis sensu stricto and one strain of C. orthopsilosis produce biofilm. The non-albicans species showed greater activity of the proteinase and hyaluronidase than C. albicans. In the study of hemolysin and phospholipase, C. albicans was the most producer. All strains were susceptible to amphotericin B and to fluconazole four were resistant. For caspofungin, two strains were resistant.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-23Bitstream added on 2014-06-13T19:14:53Z : No. of bitstreams: 1 piva_e_me_sjc.pdf: 760262 bytes, checksum: 326a357bb943563c3d204bcc238ce3ee (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A maioria das infecções por Candida estão relacionadas com biofilmes microbianos, que muitas vezes são formados por associações de diferentes espécies. O objetivo deste estudo foi avaliar as interações entre as diferentes espécies de Candida em biofilmes formados in vitro e verificar a sensibilidade dos biofilmes monotípicos de C. albicans e heterotípicos à terapia fotodinâmica (PDT). Foram estudadas cepas clínicas de C. albicans, C. tropicalis, C. glabrata e C. krusei. A partir de suspensões padronizadas de cada cepa (107 células/mL), biofilmes monotípicos e heterotípicos (formados por C. albicans e espécies não albicans) foram formados em placas de microtitulação de 96 poços durante 48 horas. A seguir, os biofilmes monotípicos de C. albicans e heterotípicos foram submetidos à PDT com fotossensibilizador eritrosina associado ao diodo emissor de luz (LED) verde. Os biofilmes foram analisados por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mL) em HiCrome Candida por 48h e pela viabilidade celular através do ensaio colorimétrico XTT (2 metoxi 4 nitro 5 sulfofenil 5 fenilalanina carbonil 2H tetrazolium hidróxido). Os resultados obtidos foram submetidos à ANOVA e teste de Tukey. Tanto na contagem de UFC/mL quanto no ensaio colorimétrico XTT, foi observado que o crescimento de C. albicans em biofilme monotípico e heterotípicos com C. tropicalis e C. glabrata foi semelhante. Entretanto, foi inibido em biofilme heterotípico com C. krusei. Foi demonstrado também que a PDT reduziu a viabilidade celular e a contagem de UFC/mL tanto dos biofilmes monotípicos quanto heterotípicos. Concluiu-se que C. albicans estabeleceu relações favoráveis com C. tropicalis e C. glabrata e relações antagônicas com C. krusei em biofilmes heterotípicos. Além disso, os biofilmes monotípicos e heterotípicos foram sensíveis à PDT mediada por LED e eritrosina / Most Candida infections are related to microbial biofilm, which are often formed by the association of different species. The objective of this study was to evaluate the interactions between different species of Candida biofilms in vitro and investigate the sensitivity of C. albicans monotypic biofilms and heterotypic biofilms to photodynamic therapy (PDT). From standardized suspensions of each strain (107 cells/ml), monotypic and heterotypic biofilms (formed by C. albicans and non-albicans species) were developed on flat-bottom 96-well microtiter plates for 48 hours. After that, C. albicans monotypic biofilms and heterotypic biofilms were subjected to PDT with photosensitizer erythrosine associated with green light emitting diode (LED). Biofilms were analysed by counting colony-forming units (CFU/m)l in Candida HiCrome for 48h and by cell viability using the XTT (2 methoxy 4 nitro 5 sulfophenyl 5 phenylamino carbonyl 2H tetrazolium hydroxide) colorimetric assay. The results were subjected to ANOVA and Tukey test. Both in the counting of CFU/ml as in the XTT colorimetric assay, it was observed that the growth of C. albicans in monotypic and heterotypic biofilm with C. glabrata and C. tropicalis was similar. However, it was inhibited in heterotypic biofilm with C. krusei. It was also demonstrated that PDT reduced cell viability and the number of CFU/mL of both monotypic and heterotypic biofilms. It was concluded that C albicans had favorable interaction with C. glabrata and C. tropicalis and antagonistic interaction with C.krusei in heterotypic biofilms. In addition, both of monotypic and heterotypic biofilms were sensitive to LED- and erythrosine-mediated Photodynamic Therapy

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-09Bitstream added on 2014-06-13T20:27:58Z : No. of bitstreams: 1 cardoso_m_me_sjc.pdf: 644379 bytes, checksum: 1cc6342f5a099baa07f73649f18af2d4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A técnica da espectroscopia infravermelha por transformada de Fourier (FT-IR) vem sendo largamente empregada como uma abordagem rápida e simples para a identificação de microrganismos, incluindo a do gênero Candida. A proposta deste estudo foi avaliar o emprego da microespectroscopia FT-IR na identificação e discriminação de 5 cepas clínicas de Candida albicans e 3 de Candida glabrata, as quais foram identificadas previamente por meio de métodos convencionais, e mais duas cepas ATCC de cada espécie. As amostras foram analisadas em triplicata, a partir de culturas independentes, por meio de filmes finos obtidos da suspensão em solução salina estéril a 0,85% da biomassa da colônia que ficou incubada por 24 horas em placas com ágar Saboraud Dextrose. Dez espectros com 32 varreduras foram obtidos na forma de ponto em 10 regiões selecionadas aleatoriamente nas amostras. A média foi obtida dos dez espectros de cada amostra para a análise estatística multivariada, dada pela análise de cluster. Além disso os espectros foram transformados em primeira derivada e três janelas espectrais foram determinadas (900-1250 cm-1, 1300-1600 cm-1, 2800-3000 cm-1). A representação dos resultados foi dada pela construção de um dendograma. Nesse, foi possível separar em dois grupos distintos as duas espécies de Candida estudadas. Dessa forma, pode-se concluir que a microespectroscopia FT-IR foi capaz de identificar e discriminar cepas clínicas de Candida albicans e de Candida glabrata, sendo um método promissor para identificação de leveduras / The technique of infrared spectroscopy Fourier transform (FT-IR) has been widely used as a new approach for rapid identification and simple micro-organisms, including the genus Candida. The purpose of this study was to evaluate the use of FT-IR microspectroscopy for the identification and discrimination of 5 clinical strains of Candida albicans and Candida glabrata 3, which were previously identified by conventional methods, and two-standard strains of each species. The samples were analyzed in triplicate from independent cultures by means of thin films obtained from a suspension in sterile saline and 0.85% of the biomass of the colony that was incubated for 24 hours in Sabouraud dextrose agar plates. Ten spectra with 32 scans were obtained in 10 randomly selected regions in the samples.The average of ten spectra was obtained from each sample for the multivariate analysis, given by cluster analysis. In addition, three windows were determined spectral (900-1250 cm-1, 1300-1600 cm-1, 2800-3000 cm-1) and the spectra were transformed into first derivative. The representation of the results was given by the construction of a dendrogram. In this, we separated into two groups of two Candida species studied. Thus, one can conclude that the FT-IR microspectroscopy was able to identify and distinguish clinical isolates of Candida albicans and Candida glabrata is an important method for identification of yeasts

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-29Bitstream added on 2014-06-13T20:29:34Z : No. of bitstreams: 1 prandini_thr_me_botib.pdf: 557611 bytes, checksum: d3fc30980a3b1907390cb1a9dcc2047b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Leveduras do gênero Candida são consideradas os principais agentes de micoses sistêmicas oportunistas, que aumentaram nas duas últimas décadas, devido ao número cada vez maior de hospedeiros com algum grau de comprometimento do sistema imune. Diferentes espécies podem apresentar diferentes perfis clínico-epidemiológicos, assim, um maior conhecimento do perfil molecular e uma correta identificação dos isolados faz-se necessária. Com o sequenciamento de genomas completos de algumas espécies de Candida, tornou-se possível a descoberta e melhor compreensão de algumas regiões gênicas peculiares com importantes implicações evolutivas, biotecnológicas e de desenvolvimento de novas opções terapêuticas. Dentre estas regiões gênicas, destacam-se alguns elementos genéticos parasitas, dentre eles os inteins ou internal proteins, descobertos recentemente e ainda pouco estudados em populações de Candida. Este trabalho avaliou a ocorrência dos inteins nos genes VMA (ATPase vacuolar) e ThrRS (treonil RNAt-sintetase) na população de Candida de interesse médico (C. albicans, C. parapsilosis, C. tropicalis e C. glabrata), possibilitando um maior conhecimento dos perfis moleculares e filogenéticos dos isolados causadores de infecção em nossa região. Foi comprovado também que ambos os inteins aqui pesquisados apresentam um potencial como marcador molecular para a identificação destas espécies, bem como as espécies crípticas do complexo psilosis / Not available

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Graziella Nuernberg Back-Brito / Resumo: A maioria das infecções por Candida estão relacionadas com biofilmes microbianos, que muitas vezes são formados por associações de diferentes espécies. O objetivo deste estudo foi avaliar as interações entre as diferentes espécies de Candida em biofilmes formados in vitro e verificar a sensibilidade dos biofilmes monotípicos de C. albicans e heterotípicos à terapia fotodinâmica (PDT). Foram estudadas cepas clínicas de C. albicans, C. tropicalis, C. glabrata e C. krusei. A partir de suspensões padronizadas de cada cepa (107 células/mL), biofilmes monotípicos e heterotípicos (formados por C. albicans e espécies não albicans) foram formados em placas de microtitulação de 96 poços durante 48 horas. A seguir, os biofilmes monotípicos de C. albicans e heterotípicos foram submetidos à PDT com fotossensibilizador eritrosina associado ao diodo emissor de luz (LED) verde. Os biofilmes foram analisados por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mL) em HiCrome Candida por 48h e pela viabilidade celular através do ensaio colorimétrico XTT (2 metoxi 4 nitro 5 sulfofenil 5 fenilalanina carbonil 2H tetrazolium hidróxido). Os resultados obtidos foram submetidos à ANOVA e teste de Tukey. Tanto na contagem de UFC/mL quanto no ensaio colorimétrico XTT, foi observado que o crescimento de C. albicans em biofilme monotípico e heterotípicos com C. tropicalis e C. glabrata foi semelhante. Entretanto, foi inibido em biofilme heterotípico com C. krusei. Foi demonstrado também que a PDT reduziu a viabilidade celular e a contagem de UFC/mL tanto dos biofilmes monotípicos quanto heterotípicos. Concluiu-se que C. albicans estabeleceu relações favoráveis com C. tropicalis e C. glabrata e relações antagônicas com C. krusei em biofilmes heterotípicos. Além disso, os biofilmes monotípicos e heterotípicos foram sensíveis à PDT mediada por LED e eritrosina / Abstract: Most Candida infections are related to microbial biofilm, which are often formed by the association of different species. The objective of this study was to evaluate the interactions between different species of Candida biofilms in vitro and investigate the sensitivity of C. albicans monotypic biofilms and heterotypic biofilms to photodynamic therapy (PDT). From standardized suspensions of each strain (107 cells/ml), monotypic and heterotypic biofilms (formed by C. albicans and non-albicans species) were developed on flat-bottom 96-well microtiter plates for 48 hours. After that, C. albicans monotypic biofilms and heterotypic biofilms were subjected to PDT with photosensitizer erythrosine associated with green light emitting diode (LED). Biofilms were analysed by counting colony-forming units (CFU/m)l in Candida HiCrome for 48h and by cell viability using the XTT (2 methoxy 4 nitro 5 sulfophenyl 5 phenylamino carbonyl 2H tetrazolium hydroxide) colorimetric assay. The results were subjected to ANOVA and Tukey test. Both in the counting of CFU/ml as in the XTT colorimetric assay, it was observed that the growth of C. albicans in monotypic and heterotypic biofilm with C. glabrata and C. tropicalis was similar. However, it was inhibited in heterotypic biofilm with C. krusei. It was also demonstrated that PDT reduced cell viability and the number of CFU/mL of both monotypic and heterotypic biofilms. It was concluded that C albicans had favorable interaction with C. glabrata and C. tropicalis and antagonistic interaction with C.krusei in heterotypic biofilms. In addition, both of monotypic and heterotypic biofilms were sensitive to LED- and erythrosine-mediated Photodynamic Therapy / Mestre

Orientador: Eduardo Bagagli / Coorientador: Raquel Cordeiro Theodoro / Banca: Robson Francisco Carvalho / Banca: Renata Castiglioni Pascon / Resumo: Leveduras do gênero Candida são consideradas os principais agentes de micoses sistêmicas oportunistas, que aumentaram nas duas últimas décadas, devido ao número cada vez maior de hospedeiros com algum grau de comprometimento do sistema imune. Diferentes espécies podem apresentar diferentes perfis clínico-epidemiológicos, assim, um maior conhecimento do perfil molecular e uma correta identificação dos isolados faz-se necessária. Com o sequenciamento de genomas completos de algumas espécies de Candida, tornou-se possível a descoberta e melhor compreensão de algumas regiões gênicas peculiares com importantes implicações evolutivas, biotecnológicas e de desenvolvimento de novas opções terapêuticas. Dentre estas regiões gênicas, destacam-se alguns elementos genéticos parasitas, dentre eles os inteins ou internal proteins, descobertos recentemente e ainda pouco estudados em populações de Candida. Este trabalho avaliou a ocorrência dos inteins nos genes VMA (ATPase vacuolar) e ThrRS (treonil RNAt-sintetase) na população de Candida de interesse médico (C. albicans, C. parapsilosis, C. tropicalis e C. glabrata), possibilitando um maior conhecimento dos perfis moleculares e filogenéticos dos isolados causadores de infecção em nossa região. Foi comprovado também que ambos os inteins aqui pesquisados apresentam um potencial como marcador molecular para a identificação destas espécies, bem como as espécies crípticas do complexo psilosis / Abstract: Not available / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Aguinaldo Silva Garcez Segundo / Resumo: Com o crescente aumento de cepas de Candida spp. resistentes a antifúngicos, torna-se importante e necessário a realização de pesquisas que avaliem os efeitos de novos métodos terapêuticos, como a Terapia Fotodinâmica (TFD), sobre fatores de virulência desse gênero. A produção das enzimas hidrolíticas aspartil-proteinase (SAP), lipase (LIP) e fosfolipase (PL) é considerado um importante fator de virulência de C. albicans. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre biofilmes de Candida albicans, avaliando seus efeitos sobre a expressão dos genes SAP5, LIP9 e PLB2 pelas leveduras. Foram utilizadas cepas clínicas de Candida albicans (n=9) que foram isoladas de pacientes portadores do vírus HIV e a cepa padrão ATCC 18804. A quantificação da expressão dos genes foi relacionada à produção de enzimas hidrolíticas (SAP5, LIP9 e PLB2) nas amostras clínicas e na cepa de referência utilizando-se o ensaio de PCR em tempo real. Para a terapia fotodinâmica foi utilizado laser de gálio-alumínio-arseneto de baixa potência (vermelho visível, 660 nm) como fonte de luz e o corante azul de metileno a 300 μM, como fotossensibilizador. Foram avaliados quatro grupos experimentais, para cada cepa: a) F+L+: sensibilização com azul de metileno e irradiação com laser; b) F+L-: somente tratamento com azul de metileno; c) F-L+: somente irradiação com laser e d) F-L-: grupo controle, sem sensibilização com azul de metileno e ausência de luz. Os resultados obtidos foram analisados pelo Software do equipamento de real-time. A TFD diminuiu a expressão dos genes em 60% das amostras para o gene SAP5 e em 50% das amostras diminuiu a expressão de LIP9 e PLB2. Pode-se concluir que a TFD teve um efeito sobre os genes SAP5, LIP9 e PLB2 de C. albicans, considerados fatores de virulência / Abstract: With the increasing number of strains of Candida ssp. resistant to antifungal agents, becomes important and necessary the accomplishment of researches that evaluate the effects of new therapeutic methods, like Photodynamic therapy (PDT) in virulence factors of that gender, as the production of the hydrolytic enzymes aspartyl-proteinase (SAP), lipase (LIP) and phospholipase (PL). Thus, the objective of this study was to verify the effects of the photodynamic therapy on biofilms of Candida albicans, evaluating their effects on the expression of the genes SAP5, LIP9 and PLB2 for the yeast. Clinical strains of Candida albicans (n=9) isolated from patients bearers of the virus HIV and a pattern strain ATCC 18804 were used. The quantification of gene expression was related to the production of hydrolytic enzymes (SAP5, LIP9 and PLB2) in clinical samples and the reference strain using the PCR assay in real time. For photodynamic therapy were used laser-aluminum-gallium arsenide low power (red visible, 660 nm) as light source and the methylene blue to 300 μM, as a photosensitizer. We were assessed four experimental groups for each strain: a) F+L+: sensitization with methylene blue and laser irradiation; b) F+L-: only treatment with methylene blue; c) F-L+: only laser irradiation and d) F-L-: control group, without sensitization with methylene blue and light absence. The results were analyzed by the software of the real-time equipment. The PDT decreased gene expression in 60% of samples for gene SAP5 and 50% of the samples decreased expression of LIP9 and PLB2. It can be concluded that PDT had an effect on the genes SAP5, LIP9 and PLB2 of C. albicans / Mestre

Orientador: Ana Claúdia Pavarina / Banca: Gilberto Ubida Leite Braga / Banca: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Resumo: Este estudo avaliou os efeitos da Terapia Fotodinâmica (PDT), mediada pelo Photodithazine® (PDZ) e luz LED, sobre Candida albicans resistente a fluconazol em um modelo de candidose oral induzida. Para isso, camundongos fêmeas de 6 semanas foram imunussuprimidos e inoculados com C. albicans (107 células/mL). Em seguida, aplicou-se 100 mg/L de PDZ (diluído em salina ou hidrogel) na cavidade bucal por 20 min e o dorso lingual foi iluminado (37,5 J/cm² dose de luz). Animais adicionais foram tratados somente com LED ou PDZ. O grupo controle positivo não recebeu nenhum tratamento e, adicionalmente, animais saudáveis receberam tratamento com PDT (n=5). Em seguida, foi feita a recuperação do micro-organismo da língua dos animais. O número de colônias viáveis foi quantificado e os valores de UFC/mL foram determinados. Os animais foram sacrificados e as línguas foram removidas cirurgicamente para análise histológica. Duas colônias de cada animal foram isoladas da placa de cultura para avaliação dos fatores de virulência: adesão e formação de biofilme em superfície abiótica, formas filamentares de crescimento e produção de exoenzimas. Os dados foram analizados por ANOVA (P < 0,05). Os resultados demonstraram que a PDT resultou em redução significativa de C. albicans resistente a fluconazol (1,91 e 1,96 log10) em relação ao grupo controle positivo. Somente a aplicação da luz ou PDZ não reduziu a viabilidade celular. A PDT não ocasionou efeitos adversos no tecido lingual dos animais e reduziu apenas a produção de fosfolipase. A PDT foi efetiva na inativação da C. albicans resistente a fluconazol, sem causar efeitos adversos no tecido lingual. / Abstract: This study evaluated the effects of Photodynamic Therapy (PDT), mediated by Photodithazine® (PDZ) and LED light, on fluconazole-resistant Candida albicans in a murine model of oral candidosis. For this, six-week-old female mice were immunosuppressed and inoculated with C. albicans (107 células/mL). Then, 100 mg/L of PDZ (diluted in saline or hydrogel) was applied on the oral cavity for 20 min and the dorsum of the tongue was illuminated (37.5 J/cm2 of fluence). The use of PDZ or light only was also investigated. Additionally, healthy animals received treatment with PDT. Positive control animals did not receive any treatment and negative control animals were not inoculated (n=5). After treatment the dorsum of the tongue was swabbed to recover C. albicans. The yeast colony counts were quantified and the number of CFU/mL was determined. The animals were killed and the tongues were surgically removed for histological analysis. Two yeast colony of each group were isolated from the culture plate for the evaluation of virulence factors: adhesion and biofilm formation in abiotic surface, filamentous forms of growth and production of exoenzymes. Data were analyzed by ANOVA (P < 0.05). PDT resulted in a significant reduction of fluconazole-resistant C. albicans (1.91 e 1.96 log10). The application of PDZ or LED only did not reduce the cell viability. PDT did not cause adverse effects in the local mucosa and it was able to reduce only phospholipase production. PDT was effective in the inactivation of fluconazole-resistant C. albicans without harming the tongue tissue. / Mestre

Lipases (E.C. 3.1.1.3) são serina-hidrolases e agem em sobre ésteres de ácidos graxos de cadeia curta. Elas exibem atividade específica e enantiosseletiva, e sendo assim, há vasto interesse comercial, em pesquisa e indústria de biotecnologia. Lipases microbianas são interessantes para indústria, devido à facilidade de purificação e alta produção que permitem. Muitas leveduras possuem capacidade de produzir naturalmente estas enzimas, permitindo a obtenção de lipases não-transgênicas e com maior rapidez. Este trabalho teve como objetivo avaliar a produção de lipase em leveduras selvagens e otimizar a sua produção em uma linhagem selecionada, bem como caracterizar esta enzima. Uma varredura inicial foi realizada em placas de Tween 80 e Ágar-óleo. Leveduras com crescimento positivo foram então cultivadas em meio mínimo sob agitação, suplementado com óleo de soja, e o sobrenadante teve a sua atividade enzimática testada sobre p-nitrofenil palmitato (pNPP). Foram testadas 133 linhagens provenientes de diferentes substratos, e treze apresentaram uma atividade lipolítica significativamente alta em comparação com as demais (p <0,001). Otimizações preliminares mostram condições ótimas de secreção da enzima produzida pela levedura selecionada, Candida parapsilosis QU110, em meios de cultura com pH inicial em torno de 6,0, contendo triptona e óleo de oliva como fontes de nitrogênio e carbono, respectivamente. O extrato bruto (sobrenadante livre de células) apresenta estabilidade a surfactantes não-iônicos e n-hexano, mas não a etanol ou metanol. Condições ótimas de atividade da enzima, avaliadas pela metodologia de superfície de resposta, foram observadas a 36 °C e pH 8,0. / Lipases (E.C. 3.1.1.3) are serine-hydrolases, and act on long chain fatty acid ester bonds. They exhibit specific and enantioselective activities, and as such there is plenty of interest for industry. Microbial lipases are interesting for industry, because its ease of purification and high yelds it permits. Several yeasts possess the ability of naturallly produce these enzymes, allowing the fast production of non-transgenic lipases. This work aimed at evaluating lipase production in wild yeast strains and optimizing its production, as well as characterizing this enzyme. An initial screening was made on Tween 80 and oil-agar plates. Growing yeasts were then cultivated under agitation in oil-supplemented minimum medium, and the supernatant had its enzymatic activity tested over p-nitrophenyl palmitate (pNPP). One-hundred and thirty-three strains isolated from different substrates were tested, and thirteen showed significantly high lipolytic activity when compared to the others (p<0,05). Preliminary optimization of lipase production by the selected yeast, Candida parapsilosis QU110, showed optimal enzyme secretion in media with initial pH 6.0, containing olive oil and tryptone as carbon and nitrogen sources, respectively. The crude extract (cell-free supernatant) showed stability against surfactants and n-hexan, but not against ethanol or methanol. Optimal enzyme activity conditions, evaluated through surface response methodology, were observed at 36 °C and pH 8.0.