Leucotrienos (LTs) são mediadores lipídicos derivados do ácido araquidônico. Existem evidências que receptores da imunidade inata interagem com receptores para LTs amplificando funções efetoras de macrófagos. Investigamos se LTs modulam a fagocitose e a atividade microbicida via receptores Manose, Dectina -1 e PTX3 em macrófagos alveolares (AMs) e os mecanismos moleculares envolvidos. Nossos resultados mostram que: 1) AMs sintetizam LTs quando fagocitam C. albicans, Zy e Zy-PTX3; 2) LTs potencializam a fagocitose de C. albicans e Zy, mas não de Zy-PTX3. Este efeito dos LTs depende: do reconhecimento via receptor manose (LTB4) e Dectina-1 (LTD4); da integridade de lipid rafts; da ação em mecanismos de polimerização de actina; do aumento dos níveis de F-actina por inativação da Cofilina-1; da ativação das LIMKs, que regulam Cofilina-1; da ativação de PKC<font face=\"Symbol\">d e PI3K3) LTs aumentam a capacidade de AMs em matar C. albicans por ativação de NADPH oxidase. Em conjunto, mostramos que LTs potencializam programas de sinalização específicos para determinados PRRs. / Leukotrienes (LTs) are lipid mediators derived from arachidonic acid. There is evidence that innate immunity receptors and leukotrienes receptors interact and amplify macrophage effector functions. We investigated if LTs receptors modulate phagocytosis and microbicidal activity mediated by Mannose receptor, Dectin-1 and PTX3 in alveolar macrophages (AMs) and the molecular mechanisms involved. Our results showed that: 1) AMs produce LTs when stimulated with C.albicans, Zy, Zy-PTX3; 2) LTs enhance phagocytosis of C.albicans and Zymosan, but not Zy-PTX3. This is dependent on: recognition via mannose receptor (LTB4) and Dectin-1 (LTD4); integrity of lipid rafts; its action on actin polimerization mechanisms; enhancement of F-actin levels by induction of Cofilin-1 inactivation; activation of LIMKs that regulate Cofilin-1; activation of PKC<font face=\"Symbol\">d and PI3K3) LTs enhance killing of C.albicans by activation of NADPH oxidase. Taken together, our results showed that LTs specifically influence signaling programs of keys PRRs.

Os probióticos são organismos vivos que quando ingeridos em quantidades adequadas, conferem benefícios aos indivíduos. Um destes benefícios é a capacidade de inibir o crescimento de micro-organismos patogênicos como Candida. Para avaliar a redução ou inibição de Candida em usuários de próteses totais promovida pela ingestão de probióticos, foram recrutados 135 pacientes, dos quais 59 permaneceram até o final do período experimental de 8 semanas. A ingestão dos probióticos ocorreu através de sua incorporação em queijo minas frescal. Foram selecionados pacientes usuários de próteses totais, uni ou bimaxilares albergando Candida na cavidade bucal. As amostras foram coletadas através de um enxaguado bucal 1 semana antes do início do experimento e ao final do período experimental de 8 semanas. Foi determinado o número de UFC de Candida/ml da amostra. Os sujeitos da pesquisa (n=59) receberam embalagens com 20g de queijo minas frescal a cada 14 dias por 8 semanas consecutivas. Os participantes foram divididos aleatoriamente em três grupos, experimental 1 e 2, e controle. Os grupos experimentais receberam os queijos suplementados com probióticos, respectivamente, Lactobacillus acidophilus NCFM e Lactobacillus rhamnosus Lr-32, e o grupo controle recebeu o queijo sem suplementação probiótica. Os queijos possuíam semelhança quanto a aroma e cor. Além da quantificação de Candida, foram realizados testes para identificação das espécies e avaliação da atividade enzimática da fosfolipase e proteinase. Os resultados inferem que os probióticos L. acidophilus NCFM e L. rhamnosus Lr-32 suplementados em queijo minas frescal foram capazes de reduzir os níveis de Candida bucal, em pacientes usuários de próteses totais, após ingestão diária dos queijos por 8 semanas consecutivas. Antes e após 8 semanas do experimento, Candida albicans foi a espécie mais isolada dos pacientes nos três grupos avaliados. Não houve diferença significativa com relação à atividade enzimática da fosfolipase e proteinase, pelos isolados de Candida sp., antes e após 8 semanas de ingestão do queijo. Conclusão: os dados indicam que queijos contendo L. acidophilus NCFM ou L. rhamnosus Lr-32 tem o potencial de reduzir a colonização oral por Candida, sugerindo a sua utilização para reduzir o risco de candidoses da cavidade oral. / Probiotics are living organisms which when ingested in adequate amounts confer benefits to individuals. One of these benefits is the ability to inhibit the growth of pathogenic microorganisms such as Candida. Reduction or inhibition of Candida isolated from complete denture wearers, uni or bimaxillary, was evaluated by ingestion of minas frescal cheese supplemented with probiotics. 135 patients were recruited, who 59 remained until the end of the experiment. The participants were patients in treatment at the Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo. The samples were collected through a rinsed mouthwash at the base line and 8 weeks of experiment, before the installation of the new prosthesis. The samples were inoculated on Saubouraud agar dextrose with chloramphenicol plates, incubated for 24-48 hours, in order to quantify in colony-forming units per milliliter (CFU/mL) of Candida presents in the oral cavity of these patients. Subjects who presented fungus positive culture received packages containing 20g of minas frescal cheese every 14 days for 8 consecutive weeks. The participants were divided into three groups: two experimental and one control. The experimental groups received the cheeses supplemented with probiotics Lactobacillus acidophilus NCFM and Lactobacillus rhamnosus Lr-32. The control group received the cheese without probiotic supplementation. The cheeses had similarity as flavoring and coloring. In addition to the quantification of Candida, tests for species identification, phospholipase and proteinase activities were carried out. The results infer that L. acidophilus NCFM and L. rhamnosus Lr-32 supplemented in minas frescal cheese were able to reduce the levels of oral Candida in complete denture wearers, after daily intake of cheeses for 8 weeks of the experiment. At baseline and after 8 weeks of the experiment Candida albicans was the most frequently isolated from denture wearers in all groups. Furthermore, no significant difference was observed in the phospholipase and proteinase activities by isolates of Candida sp., before and after 8 weeks of ingestion of cheese. Conclusion: The data indicate that L. acidophilus NCFM and L. rhamnosus Lr-32 has the potencial to reduce Candida colonization in oral cavity, suggesting its use for reducing the risk of oral candidiasis.

A presença de Candida albicans nos biofilmes microbianos aderidos na superfície interna das próteses removíveis, principalmente totais superiores, está relacionada com uma doença inflamatória no palato, conhecida como estomatite protética (EP). Assim, torna-se fundamental a realização de novos estudos sobre alternativas terapêuticas, direcionados à prótese e não somente à mucosa, que sejam simultaneamente antimicrobianas, anti-inflamatórias, não tóxicas para os tecidos bucais e que produzam menos danos à prótese que os métodos convencionais. Os fitoterápicos podem representar uma destas alternativas. Objetivos: O objetivo deste trabalho foi estudar a ação fitoterápica do Equisetum giganteum, nas concentrações de 50, 25, 16, 8 e 4 mg/mL, sobre C. albicans e descartar sua ação citotóxica sobre o palato humano bem como sobre monócitos humanos. Material e Métodos: Após coleta, obtenção e identificação de compostos por espectrometria de massas do extrato hidroalcoólico de E. giganteum, sua atividade antimicrobiana foi determinada pela concentração inibitória mínima em meio líquido, contra as cepas clínicas Candida albicans SC 5314 e Escherichia coli O:124, e a cepa padrão Staphylococcus aureus ATCC 6538. Propriedades antiaderentes do extrato, sobre biofilmes de C. albicans induzidos sobre corpos de prova de resina acrílica, foram determinadas por imunofluorescência (LIVE/DEAD) e pela análise em microscópio de varredura confocal a laser. A atividade anti-inflamatória do fitoterápico foi averiguada através da análise da produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) por monócitos humanos estimulados por C. albicans e LPS, por meio da marcação fluorescente utilizando o reagente Cell Rox Deep Red®. Avaliação de citotoxicidade foi realizada in vitro com células epiteliais de palato humano e monócitos humanos, por meio do ensaio colorimétrico MTT. Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão e submetidos aos testes estatísticos Teste de Kruskal-Wallis; ANOVA one-Way; ANOVA two-Way, Teste de Miller; Teste de Tukey e Dunnet; Teste de Fisher, sendo p<0,05 considerado significante. Resultados: O estudo da composição química do extrato EtOH 70% de E. giganteum evidenciou a presença de compostos fenólicos derivados dos ácidos cafeico e ferúlico, heterosídeos de flavonoides derivados de quercetina e kaempferol, além de estirilpironas. A atividade bactericida/fungicida foi comprovada em todas as concentrações testadas do extrato e contra todas as cepas avaliadas. Todas as concentrações do extrato resultaram em redução significativa dos biovolumes de células viáveis em relação a resina não tratada, o que indica interferência do fitoterápico na aderência de C. albicans à resina termopolimerizável. A atividade anti-inflamatória foi determinada pelo retorno da produção de espécies reativas de oxigênio aos níveis basais, pelos monócitos humanos ativados, quando tratados com todas as concentrações do extrato. Houve manutenção da viabilidade celular de monócitos humanos e das células epiteliais de palato humano, após contato com o fitoterápico nos períodos de 1, 12 e 24 horas. Conclusão: Estes resultados sugerem que o fitoterápico E. giganteum possui propriedades: microbicida frente a C. albicans, E. coli e S. aureus, antiaderente para C. albicans sobre a superfície da resina acrílica termopolimerizável e anti-inflamatória sobre monócitos humanos ativados por C. albicans. Além disso, o fitoterápico não comprometeu a viabilidade de monócitos humanos e de células epiteliais de palato humano. / The presence of Candida albicans in the microbial biofilms adhered to the internal surface of the removable denture, mainly the full upper ones, is related to an inflammatory palate disease known as denture stomatitis (DS). Thus, it is essential that new studies are done about therapeutic alternatives directed to the dentures, not only to the buccal mucosa, and which are, at the same time, antimicrobial, antiinflammatory, non-poisoning to the buccal tissues and that they produce less harm to the denture than the current methods. The phytotherapeutic (herbal) remedies may represent a good alternative. Objectives: The aim of this paper is to study the phytotherapeutic action of Equisetum giganteum in the concentrations of 50, 25, 16, 8 and 4 mg/mL on C.albicans and discard the cytotoxic action on the human palate, as well as on human monocytes. Material and Methods: After collecting, obtaining and identifying the compounds by means of mass spectrometry of the hydroalcoholic extract of E. giganteum, its antimicrobial activity was determined by the inhibitory minimum concentration in liquid media, against clinic strains of Candida albicans SC 5314 and Escherichia coli O:124, and standard Staphylococcus aureus ATCC 6538 strains. The antiadherent, properties of the extract on biofilms of C. albicans over acrylic resin proof specimens were determined by immunofluorescence test (LIVE/DEAD) and by the analysis in a Confocal Laser Microscope Scanning. The anti-inflammatory activity of the phytotherapeutic (herbal) remedy was assessed through the analysis of the production of reactive oxygen species (ROS) to human monocytes stimulated by C. albicans and LPS, through fluorescent lighting using the reagent Cell Rox Deep Red®. The evaluation of cytotoxicity was done in vitro with epithelial cells of human palate and human monocytes, through colorimetric MTT assay. The results were expressed in means ± standard deviation and submitted to statistics Kruskal-Wallis Test; ANOVA Two-way, Miller Test; Tukey and Dunnet Test; Fisher Test, where p<0,05 was considered significant. Results: The study of the chemical composition of the extract EtOH 70% of E. giganteum has shown a clear presence of phenolic compounds derived from caffeic and ferulic acids, flavonoid heterosides derived from quercitin and kaempferol, in addition to estirilpirones. Its bactericidal/fungicide activity was proved in all extract concentrations tested and against all evaluated strains. All extract concentrations resulted in significant reduction of bio volumes of viable cells in relation to non-treated resin, which indicates interference of the phytotherapeutic in the adherence of C. albicans to the thermopolymerizable acrylic. The antiinflammatory activity was determined by the production return of reactive oxygen specimens to basal levels, by activated human monocytes, when treated with all extract concentrations. There was cell viability of human monocytes and of human palate epithelial cells, after the contact of with the phytoterapeutic in the periods of 1, 12 and 24 hours. Conclusion: These results suggest that the phytotherapeutic E. giganteum has properties: microbicide in relation to C. albicans, E.coli and S. aureus, antiadherent to C. albicans on thermopolymerizable acrylic and antiinflammatory on human monocytes activated by C. albicans. In addition to this, the phytotherapeutic did not compromise either human monocytes viability or human palate epithelial cells.

Orientador: Marcelo Macedo Crivelini / Resumo: Tem sido descrito que cerca de 30% do total leucoplasias possui tendência à malignização, a uma taxa de 2,9% ao ano. O envolvimento concomitante de leucoplasias com Candida albicans tem sido relacionado a possíveis processos de malignidade, tornando este questionamento uma fonte de debate. O presente trabalho avaliou a expressão qualitativa de p 53, Ki-67, PCNA e AgNOR em leucoplasias associadas à Candidose. Não foram observadas diferenças significativamente estatísticas (Tukey test, p<0,05) no grupo corado por AgNOR. Esses resultados discutem a taxa de proliferação celular epitelial e, talvez, indícios de alterações genéticas malignas presentes nas leucoplasias associadas à Candidose. / Abstract: It has been described that 30% of leukoplakia with tendences to malignization, in a rate of 2,9% per year. The envolvement of leukoplakia associated to Candida albicans has been related to possible process of malignity, witch makes this question a source of debate. The aim of this study was to evaluate the qualitative expression of p53, Ki-67, PCNA and AgNOR in leukoplakia related to Candidosis. It wasþt observated statistical diferences in the AgNOR group (F test, p<0,05-ANOVA one-way). This results discuss a rate of celular epitelial proliferation and possibly genetic alterations present in leukoplakia related to Candidosis. / Mestre

Orientador: Ana Lucia Machado / Banca: Francisco Assis de Mollo Jr / Banca: Luiz Antonio Borelli Barros / Banca: Rogério Margonar / Banca: Raphael Freitas de Souza / Resumo:Os materiais odontológicos atuam como substrato para a adesão dos microrganismos e, consequentemente, desenvolvimento do biofilme. Tendo em vista que as características de superfície dos materiais podem interferir na adesão inicial, alterações dessas características podem prevenir ou diminuir a adesão de bactérias e fungos, evitando assim, o desenvolvimento da doença. Outro aspecto a ser considerado é que, na cavidade oral, as superfícies são recobertas pela saliva, formando um fino filme denominado película adquirida. Para simular as condições bucais, os estudos in vitro têm utilizado o condicionamento prévio em saliva humana antes da formação do biofilme. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da deposição de filmes polimerizados a plasma a partir do composto organometálico hexametildisiloxano (HMDSO), nas características de superfície de materiais odontológicos (titânio, zircônia e resina acrílica), bem como na formação de biofilmes sobre esses materiais, com e sem armazenamento em saliva humana. Para isso, o HMDSO foi utilizado no processo PECVD (Plasma Enhanced Chemical Vapor Deposition) para a deposição de filmes nas superfícies dos corpos de prova, de maneira que resulte na formação de filmes com características hidrofóbicas ou hidrofílicas. Corpos de prova de cada um dos materiais foram mantidos sem deposição de filmes (grupos controles). A caracterização dos filmes obtidos foi realizada através de espectroscopia no infravermelho (FTIR), microscopia eletrônica de varredura (MEV), medida de ângulos de contato e energia de superfície, espectroscopia de fotoelétrons de raios-X (XPS) e perfilometria. Para avaliação da 13 formação de biofilmes, metade dos corpos de prova (10 × 2 mm) dos grupos experimentais e controles foram armazenados em saliva humana previamente preparada e, posteriormente, incubados com 1 × 107 ...(Resumo completo clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dental materials act as substrates for the adhesion of microorganisms, and consequently, for biofilm development. Given that the surface characteristics of materials may interfere in the initial adhesion, changes in these characteristics may inhibit or reduce the adhesion of bacteria and fungi, thus preventing the development of diseases. Another aspect to consider is that, in the oral cavity, surfaces are covered with saliva, forming a thin film referred to as acquired salivary pellicle. In order to simulate oral conditions, in vitro studies have used preconditioning in human saliva before biofilm formation. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of plasma polymerized films on the surface characteristics of dental materials (acrylic resin, titanium and zirconia), as well as on the biofilm formation on these materials, with and without preconditioning in human saliva. For this purpose, the monomer hexamethyldisiloxane HMDSO was used as precursor in the PECVD (Plasma Enhanced Chemical Vapor Deposition) process. Deposition parameters were varied to produce a range of films with hydrophobic or hydrophilic characteristics. Specimens of each material without film deposition were used as controls. Characterization of the films was performed by Fourier Transformed infrared spectroscopy (FTIR), scanning electron microscopy (SEM), contact angle measurements and surface free energy, X-ray photoelectron spectroscopy (XPS), and profilometry. To evaluate biofilm formation, half of the test specimens (10 × 2 mm) of the experimental and control groups were stored in previously prepared 16 human saliva and afterwards incubated with 1 × 107 cells/mL of both Candida albicans (for acrylic resin) and Porphyromonas gingivalis (for titanium and zirconia). Samples without preconditioning in saliva were also incubated in the respective microorganisms... (Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Mariella Vieira Pereira Leão / Resumo: O objetivo foi avaliar as interações entre Candida albicans (ATCC 18804) com Streptococcus mitis (49456) e Streptococcus sanguinis (10556) in vitro e in vivo avaliando-se a possível influência destas associações, na expressão de genes, na filamentação e formação de biofilme de Candida albicans. A formação de biofilme, foi realizado mono e multiespécie em placa de 96 poços por 48 h à 37 ºC com 5% CO2. Os biofilmes foram desagregados e diluídos para semeadura em ágar e após incubação as UFC/mL foram contadas. A filamentação de C. albicans, in vitro foi realizada em placas de 24 poços e in vivo em Galleria mellonella, com análise histológica e contagem de UFC/mL. A avaliação da expressão gênica de ALS1, ALS3, BRC1, CPH1, EFG1 e HWP1, foi realizada por PCR em tempo real utilizando o gene normalizador ACT1. Os resultados da UFC/mL (p < 0.05), demonstrou que o biofilme de C. albicans monoespécie apresentou maior crescimento, quando comparado com o biofilme associado com S. mitis (p = 0,001) ou com S. sanguinis (p = 0,001). A filamentação in vitro demonstrou que a interação com S. mitis inibiu a filamentação de C. albicans (p = 0,0006), entretanto, a interação com S. sanguinis não inibiu (p = 0,1554). Os genes ALS1, ALS3 e HWP1 foram super expressos na interação com S. mitis. A interação com S. sanguinis, promoveu super expressão dos genes ALS3 e HWP1. Os genes BRC1, CPH1 e EFG1 foram super expressos na interação com S. mitis e sub expressos, na interação com S. sanguinis. Não houve... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract :The objetive was to evaluate the interactions between Candida albicans (ATCC 18804) with Streptococcus mitis (49456) and Streptococcus sanguinis (10556) in vitro and in vivo evaluating the possible influence of these associations, in the expression of genes, in the filamentation and biofilm formation of Candida albicans. Biofilm formation was performed mono- and multispecies in 96-well plate for 48 h at 37 ºC with 5% CO2. Biofilms sonicated and diluted for sowing on agar and after incubation the colonies counted to obtain the colony forming units (CFU/mL). The filamentation in vitro was performed in 24-well plate and in vivo Galleria mellonella, with histological and CFU/mL. The evaluation of gene expression ALS1, ALS3, BRC1, CPH1, EFG1 and HWP1 was performed by real-time PCR using the normalizing gene ACT1. The results of CFU/ml (p<0.05), found that C. albicans biofilm monoespécie showed increased growth, as compared to the biofilm associated with S. mitis (p = 0.001) and S. sanguinis (p = 0.001). The filamentation in vitro demonstrated that the interaction with S. mitis inhibited C. albicans filamentation (p = 0.0006), interaction with S. sanguinis could not (p = 0.1554). The ALS1, ALS3, HWP1 gene, were superexpressed in S. mitis interaction. Interaction with S. sanguinis, promoted overexpression of ALS3 and HWP1 genes. The BRC1 genes, CPH1 and EFG1 were super expressed in interaction with S. mitis and sub expressed when there was interaction with S. sanguinis. There was no statistical difference in the in vivo studies of filamentation and CFU/mL. It follows that in vitro, S. mitis and S. sanguinis were able to inhibit the formation of C. albicans biofilms. Like the interaction with S. mitis inhibited its filamentation. The interaction with S. mitis appears to increase the virulence factors of C. albicans. ALS1, ALS3, HWP1 as the ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Mestre

A presença de Candida albicans nos biofilmes microbianos aderidos na superfície interna das próteses removíveis, principalmente totais superiores, está relacionada com uma doença inflamatória no palato, conhecida como estomatite protética (EP). Assim, torna-se fundamental a realização de novos estudos sobre alternativas terapêuticas, direcionados à prótese e não somente à mucosa, que sejam simultaneamente antimicrobianas, anti-inflamatórias, não tóxicas para os tecidos bucais e que produzam menos danos à prótese que os métodos convencionais. Os fitoterápicos podem representar uma destas alternativas. Objetivos: O objetivo deste trabalho foi estudar a ação fitoterápica do Equisetum giganteum, nas concentrações de 50, 25, 16, 8 e 4 mg/mL, sobre C. albicans e descartar sua ação citotóxica sobre o palato humano bem como sobre monócitos humanos. Material e Métodos: Após coleta, obtenção e identificação de compostos por espectrometria de massas do extrato hidroalcoólico de E. giganteum, sua atividade antimicrobiana foi determinada pela concentração inibitória mínima em meio líquido, contra as cepas clínicas Candida albicans SC 5314 e Escherichia coli O:124, e a cepa padrão Staphylococcus aureus ATCC 6538. Propriedades antiaderentes do extrato, sobre biofilmes de C. albicans induzidos sobre corpos de prova de resina acrílica, foram determinadas por imunofluorescência (LIVE/DEAD) e pela análise em microscópio de varredura confocal a laser. A atividade anti-inflamatória do fitoterápico foi averiguada através da análise da produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) por monócitos humanos estimulados por C. albicans e LPS, por meio da marcação fluorescente utilizando o reagente Cell Rox Deep Red®. Avaliação de citotoxicidade foi realizada in vitro com células epiteliais de palato humano e monócitos humanos, por meio do ensaio colorimétrico MTT. Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão e submetidos aos testes estatísticos Teste de Kruskal-Wallis; ANOVA one-Way; ANOVA two-Way, Teste de Miller; Teste de Tukey e Dunnet; Teste de Fisher, sendo p<0,05 considerado significante. Resultados: O estudo da composição química do extrato EtOH 70% de E. giganteum evidenciou a presença de compostos fenólicos derivados dos ácidos cafeico e ferúlico, heterosídeos de flavonoides derivados de quercetina e kaempferol, além de estirilpironas. A atividade bactericida/fungicida foi comprovada em todas as concentrações testadas do extrato e contra todas as cepas avaliadas. Todas as concentrações do extrato resultaram em redução significativa dos biovolumes de células viáveis em relação a resina não tratada, o que indica interferência do fitoterápico na aderência de C. albicans à resina termopolimerizável. A atividade anti-inflamatória foi determinada pelo retorno da produção de espécies reativas de oxigênio aos níveis basais, pelos monócitos humanos ativados, quando tratados com todas as concentrações do extrato. Houve manutenção da viabilidade celular de monócitos humanos e das células epiteliais de palato humano, após contato com o fitoterápico nos períodos de 1, 12 e 24 horas. Conclusão: Estes resultados sugerem que o fitoterápico E. giganteum possui propriedades: microbicida frente a C. albicans, E. coli e S. aureus, antiaderente para C. albicans sobre a superfície da resina acrílica termopolimerizável e anti-inflamatória sobre monócitos humanos ativados por C. albicans. Além disso, o fitoterápico não comprometeu a viabilidade de monócitos humanos e de células epiteliais de palato humano. / The presence of Candida albicans in the microbial biofilms adhered to the internal surface of the removable denture, mainly the full upper ones, is related to an inflammatory palate disease known as denture stomatitis (DS). Thus, it is essential that new studies are done about therapeutic alternatives directed to the dentures, not only to the buccal mucosa, and which are, at the same time, antimicrobial, antiinflammatory, non-poisoning to the buccal tissues and that they produce less harm to the denture than the current methods. The phytotherapeutic (herbal) remedies may represent a good alternative. Objectives: The aim of this paper is to study the phytotherapeutic action of Equisetum giganteum in the concentrations of 50, 25, 16, 8 and 4 mg/mL on C.albicans and discard the cytotoxic action on the human palate, as well as on human monocytes. Material and Methods: After collecting, obtaining and identifying the compounds by means of mass spectrometry of the hydroalcoholic extract of E. giganteum, its antimicrobial activity was determined by the inhibitory minimum concentration in liquid media, against clinic strains of Candida albicans SC 5314 and Escherichia coli O:124, and standard Staphylococcus aureus ATCC 6538 strains. The antiadherent, properties of the extract on biofilms of C. albicans over acrylic resin proof specimens were determined by immunofluorescence test (LIVE/DEAD) and by the analysis in a Confocal Laser Microscope Scanning. The anti-inflammatory activity of the phytotherapeutic (herbal) remedy was assessed through the analysis of the production of reactive oxygen species (ROS) to human monocytes stimulated by C. albicans and LPS, through fluorescent lighting using the reagent Cell Rox Deep Red®. The evaluation of cytotoxicity was done in vitro with epithelial cells of human palate and human monocytes, through colorimetric MTT assay. The results were expressed in means ± standard deviation and submitted to statistics Kruskal-Wallis Test; ANOVA Two-way, Miller Test; Tukey and Dunnet Test; Fisher Test, where p<0,05 was considered significant. Results: The study of the chemical composition of the extract EtOH 70% of E. giganteum has shown a clear presence of phenolic compounds derived from caffeic and ferulic acids, flavonoid heterosides derived from quercitin and kaempferol, in addition to estirilpirones. Its bactericidal/fungicide activity was proved in all extract concentrations tested and against all evaluated strains. All extract concentrations resulted in significant reduction of bio volumes of viable cells in relation to non-treated resin, which indicates interference of the phytotherapeutic in the adherence of C. albicans to the thermopolymerizable acrylic. The antiinflammatory activity was determined by the production return of reactive oxygen specimens to basal levels, by activated human monocytes, when treated with all extract concentrations. There was cell viability of human monocytes and of human palate epithelial cells, after the contact of with the phytoterapeutic in the periods of 1, 12 and 24 hours. Conclusion: These results suggest that the phytotherapeutic E. giganteum has properties: microbicide in relation to C. albicans, E.coli and S. aureus, antiadherent to C. albicans on thermopolymerizable acrylic and antiinflammatory on human monocytes activated by C. albicans. In addition to this, the phytotherapeutic did not compromise either human monocytes viability or human palate epithelial cells.

Existem poucos estudos a respeito da presença de constituintes fúngicos na circulação sanguínea de indivíduos com estomatite por dentadura (ED) (AHMAD et al., 2002), considerada uma forma localizada de candidose; o que poderia caracterizar o poder de invasão sistêmica do fungo nesta condição local, bem como um prévio reconhecimento desses antígenos por células presentes na circulação sanguínea do hospedeiro, o que poderia explicar aspectos específicos da resposta imune localizada e sistêmica. Assim sendo, este trabalho teve por objetivo avaliar a presença do fungo Candida albicans (C. albicans) no palato, na superfície interna das próteses totais superiores e no sangue de pacientes com ED, em dois momentos distintos. A população de estudo foi composta por indivíduos usuários de prótese total superior (PTS), com e sem estomatite por dentadura, avaliados e selecionados nas clínicas de graduação e pós-graduação da Disciplina de Prótese, do Departamento de Prótese, da Faculdade de Odontologia de Bauru da Universidade de São Paulo (FOB USP). Indivíduos não usuários de próteses removíveis constituíram o grupo controle. Assim o trabalho foi constituído por três grupos, cada um com 14 pacientes. As lesões de estomatite por dentadura foram diagnosticadas clinicamente e por meio de confirmação microbiológica em CHROMAgar Candida, a partir de material biológico coletado da mucosa palatal e da superfície interna da PTS. A PCR foi realizada quando da ocorrência do crescimento de colônias verdes para diferenciação das espécies C. albicans e C. dubliniensis. As amostras de sangue foram analisadas para a detecção de fragmentos de DNA responsáveis pela codificação da proteína da parede da hifa1(Hwp1) de C. albicans, utilizando a técnica da PCR. Os resultados demonstraram que nem os usuários de PTS, independentemente da presença de ED, nem os voluntários não usuários apresentaram a proteína Hwp1 no sangue, em nenhuma das amostras coletadas. A presença de fungos do gênero Candida foi mais frequente (p 0,005) entre os usuários de PTS com ED quando comparado com os outros indivíduos. Além disso, pudemos constatar que os pacientes com diagnóstico clínico e microbiológico de ED não apresentaram distribuição sanguínea de C. albicans. / There are few studies about the presence of yeast constituents in the bloodstream of patients with denture stomatitis (DE), a localizated kind of candidiasis; what could characterize the yeast systemic invasion power in this local condidition, and also previous acknowledgement of these antigens by cells of the entertainer bloodstream, and explain specific features of the immune located and systemic answer. So being, this work had as a goal to evaluate the presence of the yeast Candida albicans (C. albicans) at the palate, at the internal surface of the upper denture and in the blood of patients with DE, at two different moments. The population of study was composed by individuals both with and without upper denture, with and without stomatitis, assessed and selected in the clinics of graduation and postgraduation of the Discipline of Prosthesis, of the Department of Prosthesis, of the Faculdade de Odontologia de Bauru of the University of São Paulo (FOB USP). Individuals who are not users of removable dentures constituted the group control. So the work was constituted by three groups, each one with 14 patients. The injuries of stomatitis were diagnosed clinically and through microbiological confirmation in CHROMAgar Candida, from biological collected material of the palatal mucosa and of the internal surface of the upper denture. The PCR was carried out when the growth of green colonies for differentiation of the stain C. albicans and C. dubliniensis happened. The samples of blood were analyzed for the detection of fragments of DNA responsible for the codification of the hyphal wall protein (Hwp1) of C. albicans. The results demonstrated that not even the users of upper denture, independently of the presence of the DE, not even the volunteers who are not users presented the protein Hwp1 in the blood, in none of the collected samples. The yeast Candida presence was more frequent (p 0,005) in the group 1 when compared with the other groups. Morever, we can conclude that patients with clinic and microbiologic diagnostic have not presented bloodstream distribution of C. albicans.

Por muitos anos o fluconazol tem sido uma opção usual para tratamento de infecções por Candida. Entretanto, o uso indiscriminado desta terapia antimicótica tem favorecido o surgimento de microrganismos resistentes. A redução da afinidade da enzima alvo dos antifúngicos, 14--demetilase (ERG11p), tem sido descrita como um importante mecanismo de resistência, caracterizado por mutações em seu gene codificante ERG11. Neste estudo, foi investigada a suscetibilidade ao fluconazol de 87 isolados de C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei e C. glabrata, com valores de MIC determinados através do método de microdiluição em caldo M27-A3 (CLSI, 2008); verificou-se que dezessete isolados apresentavam decréscimo da suscetibilidade ao fluconazol. A triagem de mutações foi realizada através da amplificação de quatro regiões do gene ERG11 com primers específicos delineados neste estudo, para cada espécie de Candida, seguida de análise pela técnica de eletroforese SSCP e seqüenciamento automatizado. Foram identificadas 217 mutações, incluindo 185 silenciosas e 32 por troca de sentido (que altera o aminoácido resultante). Estas últimas foram observadas em 19 isolados e 17 resíduos distintos, sendo 7 deles ainda não descritos anteriormente: L321F em C. albicans; K53M em C. krusei; Y221F, K344T, V362M e R371S em C. tropicalis; e R398I em C. parapsilosis. Confrontando os resultados entre a técnica de eletroforese SSCP e seqüenciamento automatizado, não houve associação direta entre as mudanças na migração eletroforética e alterações na seqüência nucleotídica do gene ERG11. Sugerimos que a freqüência elevada de alterações no gene ERG11 de Candida deve ser considerada no design de novos fármacos que visem a enzima ERG11p / For many years, fluconazole has been a usual option for treatment of Candida infections. However, the indiscriminate use of antimycotic therapy has favored the emergence of resistant organisms. The decrease in the affinity of the enzyme target of antifungal agents, 14--demethylase (ERG11p), has been described as an important mechanism of resistance, characterized by mutations in its encoding gene ERG11. In this study, we investigated the susceptibility to fluconazole of 87 strains of C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei and C. glabrata with MIC values determined by broth microdilution M27-A3 (CLSI, 2008), found that seventeen isolates showed decreased susceptibility to fluconazole. Mutation screening was performed by the amplification of four regions of the ERG11 gene with specific primers designed in this study for each Candida species, followed by electrophoresis SSCP analysis and sequencing. We identified 217 mutations, including 185 silent mutations and 32 missense mutations. Missense mutations were observed in 19 isolates and 17 distinct residues, 7 of them still not described earlier: L321F in C. albicans, K53M in C. krusei; Y221F, K344T, V362M and R371S in C. tropicalis, and R398I in C. parapsilosis. Comparing the results between SSCP electrophoresis technique and sequencing, there was no direct association between changes in electrophoretic migration and changes in the nucleotide sequence of the ERG11 gene. We suggest that the high frequency of changes in ERG11 gene of Candida should be considered in the design of new drugs targeting the enzyme ERG11p

<p>&Scaron;iroka upotreba imunosupresivnih terapija zajedno sa antimikotičnim terapijama &scaron;itokog spektra značajno je povećala učestalost povr&scaron;inskih i sistemskih infekcija uzrokovanih patogenim kvascem Candida glabrata. Zbog povećane rezistentnosti vrste C. glabrata na klasične antimikotike, javila se potreba za pronalaskom novih alternativa u prevenciji i lečenju infekcija izazvanih ovim patogenom. Tokom poslednjih nekoliko godina se u velikoj meri razmatra potencijalni benefit probiotskih mikroorganizama na zdravlje ljudi. Pored primene brojnih probiotskih bakterija, Saccharomyces boulardii je jedina vrsta kvasca za koju je dokazano da poseduje svojstva koja karakteri&scaron;u probiotike.<br />Cilj istraživanja ove doktorske disertacije je ispitivanje uticaja probiotskog kvasca S. boulardii na adheziju kvasca C. glabrata na polistitren povr&scaron;inu pri različitim temperaturama, pH vrednostima i u prisustvu različitih koncentracija tri klinički važna antimikotika kao &scaron;to su flukonazol, itrakonazol i amfotericin B. Hidrofobnost povr&scaron;ine ćelije (CSH) sojeva kvasca C. glabrata je određena u cilju procene korelacije između ove fizičko-hemijske osobine i adhezije na polistiren povr&scaron;inu. Pored toga, ispitana je adhezija kvasca C. glabrata u ko-kulturi sa drugim vrstama mikroorganizama. Testirana su tri soja kvasca C. glabrata, kvasci Candida krusei i Saccharomyces cerevisiae, kao i dve vrste probiotskih bakterija Lactobacillus rhamnosus i Lactobacillus casei. Metoda kori&scaron;ćena za procenu adhezije bila je bojenje kristal violetom, dok je hidrofobnost povr&scaron;ine ćelije sojeva kvasca C. glabrata određena testom Mikrobne adhezije na ugljovodonike.<br />Na&scaron;i rezultati su pokazali da uprkos neadhezivnosti ćelija probiotskog kvasca S. boulardii, ovaj probiotik je značajno uticao na sposobnost adhezije kvasca C. glabrata. Ovaj efekat je bio veoma zavisan od sojeva vrste C. glabrata, i bio je antagonistički ili sinergistički. &Scaron;to se tiče faktora životne sredine, temperatura nije pokazala značajan uticaj na modulatorni efekat probiotskog kvasca S. boulardii, dok pri visokoj pH vrednosti, probiotski kvasac nije uspeo da potisne adheziju sojeva kvasca C. glabrata. Sličan efekat je primećen u eksperimentima sa antimikoticima, gde su povećane koncentracije antimikotika smanjile modulatorni efekat S. boulardii na adheziju C. glabrata. Sojevi vrste C. glabrata u ko-kulturi sa neadhezivnim patogenim sojevima vrsta C. krusei i S. cerevisiae su pokazali slabiju adheziju nego u ko-kulturi sa neadhezivnim probiotskim sojevima vrste S. boulardii, L. rhamnosus i L. casei. &Scaron;to ukazuje da se adhezivnost dve odvojene kulture ne može korisiti za predviđanje adhezivnosti njihove ko-kulture. Nije utvrđena korelacija između hidrofobnosti povr&scaron;ine ćelije i adhezije na polistiren povr&scaron;inu sojeva kvasca C. glabrata, &scaron;to ukazuje da hidrofobnost ćelijskog zida ne mora uvek da bude precizna mera adhezivnog potencijala.</p> / <p>Following the widespread use of immunosuppressive therapy together with broadspectrum antimycotic therapy, the frequency of mucosal and systemic infections caused by the pathogenic yeast Candida glabrata has increased in the past decades. Due to the resistance of C. glabrata to existing azole drugs, it is very important to look for new strategies helping the treatment of such fungal diseases. An increasing number of potential health benefits are being attributed to probiotic treatments. They include various bacterial probiotics, while among yeast only Saccharomyces boulardii (nom. nud.) is used extensively as a probiotic and often marketed as a dietary supplement.<br />The aim of this doctoral dissertation is to investigate the effect of the probiotic yeast S. boulardii on the adhesion of C. glabrata to polystyrene surface at different temperatures, pH values, and in the presence of three clinically important antifungal drugs, namely fluconazole, itraconazole, and amphotericin B. The cell surface hydrophobicity (CSH) of the tested C. glabrata strains has been determined as well in order to test for a possible correlation between this physico-chemical property and the ability to adhere to polystyrene surface. In addition, Candida krusei, Saccharomyces cerevisiae, two bacterial probiotics Lactobacillus rhamnosus and Lactobacillus casei were tested in a co-culture with C. glabrata as well. The method used to assess adhesion was crystal violet staining. The CSH of C. glabrata strains was determined using the Microbial Adhesion To Hydrocarbon (MATH) test. Our results showed that despite the nonadhesiveness of S. boulardii cells, this probiotic significantly affected the adherence ability of C. glabrata. This effect was highly dependent on C. glabrata strain and was either antagonistic or synergistic. Regarding the extrinsic factors, temperature did not indicate any significant influence on this S. boulardii modulatory effect, while at high pH, S. boulardii did not manage to repress the adhesion of C. glabrata strains. Similar effect was observed in the experiments with antimycotics, where increased concentrations of antimycotic reduced the modulatory effect of S. boulardii on C. glabrata adhesion. C. glabrata strains in the co-cultures with non-adhesive pathogenic strains C. krusei and S. cerevisiae showed weaker adhesion than in co-cultures with non-adhesive probiotic strains S. boulardii, L. rhamnosus and L. casei. This indicates that the adhesiveness of two separate cultures could not be used to predict the adhesiveness of their co-culture. Further, there is no correlation between cell surface hydrophobicity and adhesion of C. glabrata strains to the polystyrene surface, which indicates that the hydrophobicity of the cell wall must not always be the precise measure of the adhesive potential.</p>