Leucoplasia bucal (LB) é uma desordem potencialmente maligna, com risco de transformação maligna que varia de 0,13% a 17,5%. Muitos estudos vêm buscando estabelecer biomarcadores capazes de predizer o potencial de transformação maligna dessa lesão. O Ki-67 é uma proteína não-histônica nuclear que tem sido amplamente utilizada para avaliar proliferação celular. O BMI-1 é uma proteína considerada um marcador essencial para a manutenção das propriedades de autorrenovação e da tumorigenicidade do carcinoma espinocelular. O objetivo principal desse estudo observacional transversal foi avaliar proliferação e imortalização celulares em LB a partir da marcação imunoistoquímica do Ki-67 e do BMI-1, comparando lesões displásicas com não displásicas. Casos de LB não displásica - LBND (n=28), LB displásica - LBD (n=33) foram selecionados a partir de prontuários de pacientes e comparados com mucosa clinicamente normal - MN (n=9), hiperplasia inflamatória - HI (n=17) e carcinoma espinocelular - CEC (n=19). Os diagnósticos histopatológicos foram confirmados a partir da revisão de cortes histológicos corados por hematoxilina e eosina. Adicionalmente, cortes histológicos foram submetidos à técnica imunoistoquímica para avaliação de Ki-67 e BMI-1. Para a quantificação foi considerado o percentual de células positivas por 1000 células para o CEC e 1500 células para os demais grupos. O percentual de imunomarcação de Ki-67 e de BMI-1, quando avaliadas todas as camadas epiteliais em conjunto, foi mais alto no CEC quando comparado aos demais grupos (Kruskal-Wallis, p<0.05). A expressão de Ki-67 foi maior em LBND, LBD e HI quando comparada com MN (Kruskal-Wallis, p<0.05). Além disso, a imunomarcação de BMI-1 foi maior em LBD quando comparada com MN, quando analisadas todas as camadas em conjunto (Kruskal-Wallis, p<0.05). A partir da avaliação das camadas epiteliais separadamente, observou-se aumento da expressão de BMI-1 na camada parabasal e suprabasal em LBND quando comparada com MN. Houve correlação positiva entre Ki-67 e BMI-1 (Correlação de Spearman, R=0.37, p<0.05). Conclui-se que a proliferação e as alterações na transição epitélio-mesênquima são eventos relacionados e que estão presentes desde estágios precoces e se acentuam nos estágios mais tardios da carcinogênese. / Oral leukoplakia (OL) is potentially malignant disorder, with a risk of malignant transformation that ranges from 0.13% to 17.5%. Many biological markers have been used as an attempt to predict malignant transformation, but no reliable markers have been established so far. The Ki-67 is a nuclear non-histone regarded as reliable marker of proliferating cells .BMI-1 is a protein considered as an essential marker for maintenance of properties self-renewability and tumorigenicity of squamous cell carcinoma. The main aim this cross-sectional observational study was to evaluate cell proliferation and immortalization in oral leukoplakia, comparing non-dysplastic and dysplastic lesions. Cases of non-dysplastic – Non-dys OL (n=28), dysplastic – Dys OL (n=33) records were selected and compared with normal oral mucosa – NOM (n=9), inflammatory hyperplasia –IH (n=17), and oral squamous cell carcinoma - OSCC (n=19). The histopathological diagnosis was confirmed by the revision of Hematoxilin and Eosin stained slides. Additionally, histological sections were submitted to immunohistochemical technique for evaluation of Ki-67 and BMI-1. The labeling index was determined by counting the labeled nuclei of 1000 cells for OSCC cases and 1500 for the others comparison groups. Ki-67 and BMI-1 immunolabeling percentage were higher in OSCC in comparison of others groups when all epithelial layers were evaluated together (Kruskal-Wallis, p<0.05). Ki-67 immunolabeling increased in Non-dys OL, Dys OL and IH when compared to NOM (Kruskal-Wallis, p<0.05). Furthermore, BMI-1 immunolabeling was higher in Dys OL relation to NOM in the analysis of all epithelial layers together (Kruskal-Wallis, p<0.05). When the evaluation considered the epithelial layer separately, an increased BMI1 expression was observed in the parabasal and suprabasal layers of Non-dys OL when compared to NOM. A significant positive correlation was found between Ki-67 and BMI-1 (Spearman correlation coefficient, R=0.37, p<0.01). In conclusion, the present findings support that proliferation and changes toward epithelial-to-mesenchymal transition increase gradually since early stages of oral carcinogenesis.

O carcinoma espinocelular (CEC) é a segunda forma de neoplasia cutânea mais prevalente. Os mecanismos exatos envolvidos na progressão desse tipo de tumor ainda não estão elucidados. Estudos recentes têm mostrado que a citocina IL33 é uma citocina reguladora da resposta imune adaptativa, principalmente como potente indutor do perfil Th2. Juntamente com seu receptor ST2, apresenta-se com os níveis elevados em alguns tipos de câncer, corroborando para a evidência de que essa citocina contribui para a carcinogênese. Baseado nessas informações, testamos a hipótese de que a presença de IL33 em carcinoma espinocelular, poderia estar relacionada a um melhor prognóstico. Neste estudo foram utilizadas amostras de carcinoma espinocelular, em diferentes gradações de malignidade tumoral (Grau I, Grau II e Grau III). Os resultados mostraram um infiltrado inflamatório mais intenso em tumores com Grau I e II. Imunorreatividade para IL33 foi observada em tumores de Grau I e II tanto por células epiteliais como por células do infiltrado inflamatório. A análise por microscopia confocal evidenciou que um grande número de células TCD4+ e TCD8+ que expressavam IL33 foi observado em tumores de Grau II. Esses resultados indicam a presença de um intenso infiltrado inflamatório e expressão de IL33 em amostras de carcinoma espinocelular com níveis menores de malignidade tumoral. / Squamous cell carcinoma (SCC) is the second most common form of cutaneous neoplasm. The exact mechanisms involved in the progression of this type of tumor have not yet been elucidated. Recent studies have shown that the cytokine IL33 is a cytokine regulating the adaptive immune response, mainly as a potent inducer of Th2 profile. Together with its ST2 receptor, its presents with elevated levels in some types of cancer, corroborating to evidence that this cytokine contributes to carcinogenesis. Based on this information, we tested the hypothesis that the presence of IL33 in squamous cell carcinoma could be related to a better prognosis. In this study, squamous cell carcinoma samples were used in three different gradations of tumor malignancy (Grade I, Grade II and Grade III). The results showed that a more intense inflammatory infiltrate in Grade I and II tumors. Immunoreactivity for IL33 was observed in Grade I and Grade II tumor, by epithelial cells and by inflammatory infiltrate cells. The analysis by confocal microscopy evidenced that a great number of TCD8+ and TCD4+ cells expressing IL33 was observed in grade II tumors. These results indicate the presence of an intense inflammatory infiltrate and expression of IL33 in samples of squamous cell carcinoma with lower levels of tumor malignancy.

Introdução: A endoscopia de contato (EC) foi um exame descrito inicialmente como método de analise da histologia uterina e das cordas vocais. Os primeiros estudos utilizando a EC nas cavidades nasais mostraram resultados promissores na diferenciação de lesões benignas, considerando que a biópsia tradicional pode trazer algumas complicações. Objetivo: Descrever e comparar os achados da EC no papiloma schneideriano invertido e no carcinoma espinocelular nasossinusal e testar a efetividade do exame como método não invasivo in vivo para diferenciação entre esses tumores. Métodos: Os pacientes inclusos no estudo foram divididos em grupo A, com diagnóstico de papiloma invertido e grupo B, com diagnóstico de carcinoma espinocelular. Os resultados da EC de cada lesão foram comparados entre si. As imagens gravadas dos exames foram apresentadas à examinadores sem experiência com a EC. Resultados: Um total de vinte e dois pacientes foram examinados, treze no grupo A e nove no grupo B. As principais diferenças nos achados da EC entre os dois grupos foram: presença de vasos espiralados, mitoses, queratinização e pleomorfismo nuclear no carcinoma e presença de células vacuolizadas no papiloma. Os examinadores, mesmo não habituados a este novo método, tiveram um bom índice de acerto no diagnóstico diferencial das duas lesões nasais, baseados apenas nas imagens da EC. Conclusão: A EC pode ser um exame não invasivo e in vivo útil para o diagnóstico diferencial entre o papiloma invertido e o carcinoma espinocelular nasossinusal, principalmente quando usado no planejamento pré-operatório do paciente. / Background: Contact endoscopy (CE) was initially described as a method used in the analysis of uterine and vocal folds histology. The first nasal cavity CE studies achieved promising results regarding its use for the differentiation between benign and malignant lesions, considering that biopsy might cause some complications, especially bleeding. Objective: Describe and compare the findings of CE on inverted papilloma and nasosinusal squamous cell carcinoma and test the effectiveness of this exam as a noninvasive method for in vivo differentiation between these tumors. Methods: The patients included in this study were divided into Group A, whose diagnosis was inverted papilloma, and Group B, whose diagnosis was squamous cell carcinoma. CE results were compared amongst themselves. CE images were presented to examiners not experienced with the method. Results: Twenty-two patients were examined, thirteen in Group A and nine in Group B. The main relevant differences in CE findings between those two groups were: corkscrew vessels, presence of mitoses, keratinization and nuclear pleomorphism in carcinoma, and vacuolated cells in papilloma. The examiners were capable of defining the diagnosis of these nasal tumors only based on CE images. Conclusion: CE may be a useful noninvasive exam to be used in the in vivo diagnosis of inverted papilloma and nasosinusal squamous cell carcinoma, which may enable better preoperative planning.

Os carcinomas de cabeça e pescoço (CECPs) compreendem um grupo de tumores que atingem vários sítios do trato aerodigestivo superior, incluindo cavidade oral, orofaringe, hipofaringe e laringe. Esses carcinomas são clinicamente heterogeneous e resultam de modificações cumulativas em genes que regulam proliferação, migração celular e apoptose. São estimados aproximadamente 500.000 novos casos de CECP anualmente no mundo. No Brasil, cerca de 14.000 novos casos são esperados em 2010, somente para cavidade oral. As taxas de morbidade e mortalidade e as limitações das estratégias terapêuticas enfatizam a necessidade de um melhor entendimento dos padrões moleculares envolvidos na iniciação e na progressão desses tumores, e de abordagens preventivas e terapêuticas efetivas. Infelizmente, apesar da intensa pesquisa nessa área, poucos marcadores moleculares são conhecidos que exibam sensibilidade e especificidade para diagnóstico e prognóstico de CECP. Em um estudo prévio, nós avaliamos dados de três bibliotecas SAGE de carcinoma de laringe com a finalidade de identificar eventos associados ao desenvolvimento e à agressividade de CECP. Utilizando abordagens estatísticas e de Bioinformática, nós identificamos 60 genes com expressão elevada ou reduzida em tumores metastáticos versus não-metastáticos e em ambos os grupos versus tecidos normais. O objetivo do presente estudo foi avaliar a expressão de quatro genes desta lista, os das queratinas 6A (KRT6A) e 19 (KRT19), da mesotelina (MSLN) e da calicreína 8 (KLK8), em um conjunto de 63 carcinomas primários de cabeça e pescoço e suas margens cirúrgicas e em quarto linhagens celulares (Hep-2, FaDu, SCC9 e UM-SSC-38) por RT-PCR em tempo real. Como amostra de referência para as linhagens, foram utilizados queratinócitos orais humanos normais, cultivados sobre uma camada de sustentação de fibroblastos irradiados. Todos os genes exibiram níveis de transcritos reduzidos ou ausentes nas linhagens celulares, exceto MSLN, que mostrou um padrão irregular de expressão. Em tumores primários, os genes KRT19 e MSLN apresentaram expressão diminuída em laringe, o mesmo sendo observado para o gene KLK8 em tumores de língua metastático. Além disso, foi detectada expressão elevada de MSLN e KLK8 em tumores não metastáticos de soalho de boca e expressão reduzida de KRT19 em tumores de soalho de boca e língua metastáticos. Os resultados levantam questões sobre o papel desses genes em processos biológicos associados com a tumorigênese de cabeça e pescoço e sobre sua participação no fenótipo neoplásico. / Head and neck squamous cell carcinomas (HNSCCs) encompass a group of tumors that affect a variety of sites in the upper aero-digestive tract, including oral cavity, oropharynx, hypopharynx and larynx. These carcinomas are clinically heterogeneous and result from cumulative changes in genes that regulate cell proliferation, migration and death. It is estimated that approximately 500,000 new cases of HNSCC are diagnosed worldwide each year. In Brazil, about 14,000 new cases are expected in the year 2010, only in oral cavity. The morbidity and mortality rates and the limitations of therapeutic strategies emphasize the need for a better understanding of the molecular pathways involved in the initiation and progression of these tumors and for effective preventive and therapeutic approaches. Unfortunately, despite intense research, few molecular markers are known to exhibit sensitivity and specificity for the diagnosis or prognosis of HNSCC. In a previous study, we evaluated data from three SAGE libraries of larynx carcinoma in order to identify events associated with the development and aggressiveness of HNSCCs. Using statistical and bioinformatic tools, we identified sixty top-up and 60 top-downregulated genes in metastatic versus non-metastatic tumors and in both these tumors versus normal tissues. The objective of the present study was to evaluate the expression of four genes from this list, keratin 6A (KRT6A), keratin 19 (KRT19), mesothelin (MSLN) and kallikrein 8 (KLK8), in a set of 63 primary carcinomas of head and neck and their surgical margins and in four cell lines (Hep-2, FaDu, SCC9 and UM-SSC-38) by real time RT-PCR. As a reference sample for cell lines, we used normal human oral keratinocytes grown on irradiated fibroblast feeder layer. All genes exhibited no or decreased levels of transcripts in the cell lines, except MSLN, which displayed an irregular pattern of expression. In primary tumors, KRT19 and MSLN genes were downregulated in larynx, and KLK8 in metastatic tongue tumors. In addition, MSLN and KLK8 were upregulated in non-metastatic floor of the mouth tumors and KRT19 was down regulated in metastatic floor of the mouth and tongue tumors. The results open questions about the role of these genes on biological processes related to head and neck tumorigenesis and on neoplastic phenotype.

Leucoplasia bucal (LB) é uma desordem potencialmente maligna, com risco de transformação maligna que varia de 0,13% a 17,5%. Muitos estudos vêm buscando estabelecer biomarcadores capazes de predizer o potencial de transformação maligna dessa lesão. O Ki-67 é uma proteína não-histônica nuclear que tem sido amplamente utilizada para avaliar proliferação celular. O BMI-1 é uma proteína considerada um marcador essencial para a manutenção das propriedades de autorrenovação e da tumorigenicidade do carcinoma espinocelular. O objetivo principal desse estudo observacional transversal foi avaliar proliferação e imortalização celulares em LB a partir da marcação imunoistoquímica do Ki-67 e do BMI-1, comparando lesões displásicas com não displásicas. Casos de LB não displásica - LBND (n=28), LB displásica - LBD (n=33) foram selecionados a partir de prontuários de pacientes e comparados com mucosa clinicamente normal - MN (n=9), hiperplasia inflamatória - HI (n=17) e carcinoma espinocelular - CEC (n=19). Os diagnósticos histopatológicos foram confirmados a partir da revisão de cortes histológicos corados por hematoxilina e eosina. Adicionalmente, cortes histológicos foram submetidos à técnica imunoistoquímica para avaliação de Ki-67 e BMI-1. Para a quantificação foi considerado o percentual de células positivas por 1000 células para o CEC e 1500 células para os demais grupos. O percentual de imunomarcação de Ki-67 e de BMI-1, quando avaliadas todas as camadas epiteliais em conjunto, foi mais alto no CEC quando comparado aos demais grupos (Kruskal-Wallis, p<0.05). A expressão de Ki-67 foi maior em LBND, LBD e HI quando comparada com MN (Kruskal-Wallis, p<0.05). Além disso, a imunomarcação de BMI-1 foi maior em LBD quando comparada com MN, quando analisadas todas as camadas em conjunto (Kruskal-Wallis, p<0.05). A partir da avaliação das camadas epiteliais separadamente, observou-se aumento da expressão de BMI-1 na camada parabasal e suprabasal em LBND quando comparada com MN. Houve correlação positiva entre Ki-67 e BMI-1 (Correlação de Spearman, R=0.37, p<0.05). Conclui-se que a proliferação e as alterações na transição epitélio-mesênquima são eventos relacionados e que estão presentes desde estágios precoces e se acentuam nos estágios mais tardios da carcinogênese. / Oral leukoplakia (OL) is potentially malignant disorder, with a risk of malignant transformation that ranges from 0.13% to 17.5%. Many biological markers have been used as an attempt to predict malignant transformation, but no reliable markers have been established so far. The Ki-67 is a nuclear non-histone regarded as reliable marker of proliferating cells .BMI-1 is a protein considered as an essential marker for maintenance of properties self-renewability and tumorigenicity of squamous cell carcinoma. The main aim this cross-sectional observational study was to evaluate cell proliferation and immortalization in oral leukoplakia, comparing non-dysplastic and dysplastic lesions. Cases of non-dysplastic – Non-dys OL (n=28), dysplastic – Dys OL (n=33) records were selected and compared with normal oral mucosa – NOM (n=9), inflammatory hyperplasia –IH (n=17), and oral squamous cell carcinoma - OSCC (n=19). The histopathological diagnosis was confirmed by the revision of Hematoxilin and Eosin stained slides. Additionally, histological sections were submitted to immunohistochemical technique for evaluation of Ki-67 and BMI-1. The labeling index was determined by counting the labeled nuclei of 1000 cells for OSCC cases and 1500 for the others comparison groups. Ki-67 and BMI-1 immunolabeling percentage were higher in OSCC in comparison of others groups when all epithelial layers were evaluated together (Kruskal-Wallis, p<0.05). Ki-67 immunolabeling increased in Non-dys OL, Dys OL and IH when compared to NOM (Kruskal-Wallis, p<0.05). Furthermore, BMI-1 immunolabeling was higher in Dys OL relation to NOM in the analysis of all epithelial layers together (Kruskal-Wallis, p<0.05). When the evaluation considered the epithelial layer separately, an increased BMI1 expression was observed in the parabasal and suprabasal layers of Non-dys OL when compared to NOM. A significant positive correlation was found between Ki-67 and BMI-1 (Spearman correlation coefficient, R=0.37, p<0.01). In conclusion, the present findings support that proliferation and changes toward epithelial-to-mesenchymal transition increase gradually since early stages of oral carcinogenesis.

A espectroscopia Raman é uma das tecnologias ópticas que tem ganho cada vez mais destaque na oncologia. Esta tecnologia fornece a composição molecular dos mais variados tipos de amostras, inclusive biofluidos, células e tecidos. Na tentativa de avaliar sua aplicação em lesões bucais, o objetivo deste trabalho foi obter um perfil espectral dos distúrbios epiteliais nãodisplásicos, displásicos, e do carcinoma espinocelular bucal, bem como verificar a possibilidade diagnosticar estas alterações pelos espectros. Inicialmente, foram usados 44 amostras de mucosa bucal em blocos de parafina, com diagnóstico de hiperplasia epitelial, hiperparaceratose, displasia epitelial e carcinoma espinocelular bucal. Da porção epitelial de cada uma destas amostras foram obtidos 10 espectros Raman. A média dos espectros de cada alteração gerou um perfil espectral correspondente à sua composição química. Os resultados desta análise apresentaram picos ou bandas espectrais referentes a moléculas usualmente encontradas nos tecidos biológicos: proteínas, lipídios e DNA. Em seguida, os dados espectrais foram submetidos a análise dos componentes principais (PCA) e análise discriminante linear (LDA), onde foi encontrada uma eficiência de 86,36% no uso da Espectroscopia Raman para o diagnóstico de alterações epiteliais. A validade do método foi comprovada pela Curva Roc resultando em 91% de sensibilidade e 96,9% de especificidade. Em um segundo momento, com a finalidade de avaliar a influência da fixação com formalina nas análises espectrais, a superfície epitelial de uma amostra de tecido bucal fresca ex vivo foi submetida a análise pela Espectroscopia Raman e armazenada em formalina tamponada a 10% por 24h para posteriormente se obter outro espectro. A análise comparativa entre os perfis espectrais de uma mesma amostra antes e após a fixação, demonstraram diferenças em relação aos picos de proteínas e DNA, que podem modificar o perfil espectral da alteração analisada e, portanto, gerar algum erro de classificação. De maneira geral, pelos resultados desta pesquisa, observou-se que a Espectroscopia Raman é uma tecnologia eficiente para identificar a composição molecular de amostras de tecido, seja imediatamente após a excisão cirúrgica, fixação em formalina ou emblocadas em parafina. Entretanto, deve-se considerar que estas a diferentes formas de condicionamento influenciarão diretamente no resultado dos espectros. / Raman spectroscopy (RS) is one of the optical technologies that has garnered a great deal of interest in oncology. This technology provides the molecular composition of various types of samples, including biofluids, cells and tissues. In an attempt to assess its application in oral lesions, the purpose of this study was to obtain a spectral profile of epithelial disorders non-dysplastic, dysplastic, and oral squamous cell carcinoma, as well as checking the ability to diagnose these changes by the spectra. Initially, 44 samples of oral mucosa formali-fixed paraffin embebed were used with epithelial hyperplasia, hyperparakeratosis, epithelial dysplasia and oral squamous cell carcinoma. From the epithelial area of each sample were obtained 10 Raman spectra. The average of the spectra of each change generated a spectral profile corresponding to its chemical composition. Results of this analysis showed peaks or spectral bands related to molecules generally found in biological tissues: proteins, lipids and DNA. Then the spectral data were submitted to principal component analysis (PCA) and linear discriminant analysis (LDA), which was found 86.36% efficiency in the use of Raman spectroscopy (RS) for diagnosis of epithelial changes. The validity of the method was confirmed by Roc curve resulting in 91% sensitivity and 96.9% specificity. In a second step, in order to evaluate the influence of fixation with formalin in the spectral analysis, the epithelial surface of a sample of freshly biopsied oral tissue was subjected to analysis by RS and stored in 10% formalin for 24 hours for later obtain another spectrum. The comparative analysis of the spectral profiles of the same sample, before and after fixation, shows differences relative to spectral peaks of proteins and DNA that can modify the spectral profile of the analyzed change and thus generate some misclassification. In general, the results of this research, it was observed that Raman spectroscopy is an efficient technology to identify the molecular composition of tissue samples, either immediately after surgical excision, either after fixation in formalin and embedded in paraffin. However, it should be considered that these different means of conditioning will influence the outcome of the spectra.

O Carcinoma de células escamosas é o tipo histológico mais comum das neoplasia esofágicas no mundo.Tem sua origem no epitélio escamoso do esôfago e é achado com maior frequência no terço médio do órgão. A carcinogênese esofágica é um processo que resulta do acúmulo de mutações envolvendo diferentes genes, como o TP53. Este está mutado em mais de 50% dos tumores esofágicos. Inúmeras pesquisas têm sido direcionadas para restaurar a função da proteína p53, as quais resultaram na descoberta da PRIMA-1. Neste estudo, foram pesquisados possíveis efeitos protetores da PRIMA-1 no epitélio do esôfago sob efeito carcinogênico químico evitando o desenvolvimento neoplásico e induzindo involução da carcinogênese. Para testar esta hipótese, realizamos estudo, com utilização da PRIMA-1, em um modelo experimental de carcinogênese esofágica por dietilnitrosamina com indução de carcinoma de células escamosas. O estudo experimental foi realizado com 6 grupos de animais, onde os grupos I e II foram considerados controles, sendo diferenciados por uso da PRIMA-1. E os grupos III e IV, e Va e Vb, foram considerados estudos, os quais receberam dietilnitrosamina por 3 dias consecutivos semanalmente. Enquanto os grupos III e IV, foram diferenciados pelo uso de PRIMA-1 prévio ao início da carcinogênese, os grupos Va e Vb, foram diferenciados pelo uso de PRIMA-1 ao final da carcinogênese. O estudo apresentou data de eutanásia com colheita de peças esofágicas, aos 150 dias, grupos I, II, III e IV, e 180 dias, grupos Va e Vb, devido ao período de observação após uso tardio da PRIMA-1. Não foram detectadas alterações histopatológicas nos grupos controles, grupo I (DEN-/PRIMA-) e II (DEN-/PRIMA+). Não foram detectadas diferenças nas alterações histopatológicas estatisticamente significativas entre os grupos III (DEN+/PRIMA-) e IV (DEN+/ PRIMA+ inicial). Foram detectadas diferenças nas alterações histopatológicas estatisticamente significativas entre os grupos Va (DEN+/PRIMA-) e Vb (DEN+/PRIMA+ tardio). A análise imunohistoquímica do p53 evidenciou diferença estatística nos grupos que utilizaram a PRIMA-1, em relação as seus controles. A análise imunohistoquímica do Ki-67 demonstrou diferença estatística somente entre os dois grupos controles. Conclue-se que a PRIMA-1 teve efeito de redução da gravidade histopatológica em esôfago de camundongos previamente induzidos a carcinogênese com dietilnitrosamina e aumento da expressão imuno-histoquímica da proteína p53. / The esophageal squamous cell carcinoma is the most common histological type in the world. It is origin in the squamous epithelium of the esophagus and is found more often in the middle third of the organ. The esophageal carcinogenesis is a process that results from the accumulation of mutations in different genes such as TP53. This is mutate in more than 50% of esophageal tumors. Numerous researches have been directed to restore the function of the p53 protein, which resulted in the discovery of PRIMA-1. In this study, we investigated the possible protective effects of PRIMA-1 in the epithelium of the esophagus under chemical carcinogenic effect preventing neoplastic development and inducing regression of carcinogenesis. To test this hypothesis, a study with use of PRIMA-1 in an experimental model of esophageal carcinogenesis induced by diethylnitrosamine with squamous cell carcinoma. The experimental study was performed wth six groups of animals, where the groups I and II were considered controls being differentiated by the use of PRIMA-1. And the groups III and IV, and Va and Vb, were considered studies, which received diethylnitrosamine for 3 consecutive days weekly. While the groups III and IV, were differentiated by the use of PRIMA-1 prior to the beginning of carcinogenesis, the Va and Vb groups were differentiated by the use of PRIMA-1 at the end of carcinogenesis. The study presented date of euthanasia with crop esophageal parts, at 150 days, groups I, II, III and IV, and 180 days, Va and Vb groups because of the observation period after late use of PRIMA-1. Histopathological changes were detected in the control groups, Group I (DEN-/PRIMA-) and II (DEN-/PRIMA+). There were no statistically significant differences in pathological changes between the groups III (DEN+/PRIMA-) and IV (DEN+/PRIMA- first). Differences were found in statistically significant histopathological changes between Va groups (DEN+/PRIMA-) and Vb (DEN+/PRIMA+ late). Immunohistochemical analysis of p53 showed a statistically significant difference in the groups using PRIMA-1, compared to their controls. Immunohistochemical analysis of Ki-67 showed statistical difference only between the two control groups. It concludes that the PRIMA-1 was reduced by histopathological effect of gravity previously induced esophageal carcinogenesis in mice diethylnitrosamine and increased immunohistochemical expression of p53 protein.

Orientador: Maria Leticia Cintra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T13:46:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Watanabe_IsabelaConde_M.pdf: 15950287 bytes, checksum: cf82f8afd1a89bbb152ae3bb8ae77dd0 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O Ceratoacantoma (CA) é um tumor cutâneo de grande interesse devido às suas características peculiares e relação controversa com o carcinoma espinocelular (CEC). Em razão das similaridades histológicas e da ausência de critérios definitivos, o diagnóstico diferencial entre estas entidades de comportamento biológico distinto é frequentemente problemático. Na tentativa de compreender melhor a patogênese destas neoplasias e com o objetivo de investigar se a avaliação da angiogênese poderia ser útil na distinção entre CA e CEC, nós estudamos, com o auxílio de programa de morfometria digital, a densidade microvascular (DMV) e a expressão da proteína p53 e do antígeno de proliferação celular Ki67 em biópsias incisionais de 40 lesões ceratoacantoma-símiles das quais o curso clínico foi monitorado. Não foram encontradas diferenças estatísticas entre CAs e CECs quanto à expressão de p53 e DMV. O índice proliferativo foi significativamente maior nos CECs, porém com sobreposição entre os grupos dificultando a aplicação deste critério na rotina diagnóstica. Em ambos os tumores, foi demonstrada correlação indireta entre a densidade de vasos neoformados (DMV-CD105) e a densidade de vasos pré-existentes. Para os CAs, foi observada correlação positiva entre DMV-CD105 e índice de Ki67 enquanto os CECs revelaram correlações positivas entre tamanho da lesão e idade e tamanho e p53. A DMV não se mostrou ferramenta útil no diagnóstico diferencial entre CAs e CECs. No entanto, apesar destas neoplasias apresentarem muitas similaridades, as diferentes formas de interação entre as variáveis estudadas indicam que, provavelmente, mecanismos distintos estão envolvidos em sua patogênese / Abstract: Keratoacanthoma (KA) is a cutaneous tumor of great interest because of its unique characteristics and controversial relationship to squamous cell carcinoma (SCC). We hypothesized that differences in microvessel density (MVD), p53 expression and proliferation index could be related to the distinct behavior between KAs and SCCs and that their assessment could help distinguish between these entities. Immunohistochemical staining was performed with markers for vessels (CD34 and CD105), p53 oncoprotein and cell proliferation (Ki67). Microvessel densities and p53 and Ki67 quantifications were calculated using computer-assisted image analysis. There were no significant differences between KAs and SCCs regarding neither p53 expression nor microvessel density. The Ki67 proliferation index was significantly higher in SCCs, but there was considerable overlap between the groups. We found an indirect correlation between CD105-MVD and the density of pre-existing vessels in both tumors. For KAs we also observed a positive correlation between CD105-MVD and Ki67 index whereas SCCs demonstrated significant positive correlations between tumor size and age and tumor size and p53. MVD was not a useful tool in the distinction between KAs and SCCs. However, despite the fact that these neoplasms have more similarities than differences, there are probably distinct mechanisms involved in their pathogenesis / Mestrado / Anatomia Patologica / Mestre em Ciências Médicas

A alta taxa de replicação celular no tumor, aumenta a demanda de ácidos graxos para composição de membrana e de nucleotídeos para síntese de DNA. Visto que a síntese de ambos depende de intermediários do ciclo de Krebs e que no tumor a maior parte da glicose disponível é convertida a ácido lático (e não a acetil-coA, como ocorre na célula normal), a glutamina passa a ser a principal fonte de intermediários do ciclo de Krebs para síntese de ácidos graxos e de nucleotídeos. Além da glutamina, outros aminoácidos têm seu metabolismo alterado no tumor. Assim, os objetivos do trabalho foram comparar o perfil de ácidos graxos e de aminoácidos em tecido tumoral e tecido normal adjacente de pacientes com carcinoma espinocelular de mucosa de cabeça e pescoço, quantificar lipídeos totais nas amostras e avaliar o estado nutricional dos pacientes. Participaram da pesquisa pacientes internados junto ao Serviço de Cirurgia de Cabeça e Pescoço do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto-USP. As amostras de tecido tumoral e de tecido normal foram coletadas durante procedimento cirúrgico, após excisão do tumor. A extração dos lipídeos e dos aminoácidos livres foi realizada pelo método de Folch. A determinação de ácidos graxos livres e totais foi realizada por cromatografia gasosa/espectrometria de massa. A análise de aminoácidos foi realizada por cromatografia gasosa com detector de chama. A avaliação nutricional incluiu: aferição de peso, estatura, dobras cutâneas e exame de impedância bioelétrica para estimativa de composição corporal, além de avaliação da ingestão alimentar por questionário de freqüência alimentar. Não foi verificada diferença na concentração de lipídeos totais e dos ácidos palmítico, esteárico e oléico. Quanto à análise de aminoácidos, apenas a alanina, metionina e a lisina não mostraram diferença entre tecido tumoral e normal. Os demais aminoácidos apresentaram-se aumentados no tumor em relação à margem. A extração de aminoácidos a partir do método de Folch (desenvolvido para extração de lipídeos) possibilita a determinação de ácidos graxos e de aminoácidos livres em fragmentos bastante reduzidos de tecido, como, por exemplo, material obtido a partir de biópsia. O estado nutricional dos pacientes variou de eutrofia a sobrepeso, predominando excesso de gordura corporal, avaliado por impedância bioelétrica. A ingestão alimentar de macronutrientes mostrou-se adequada na maior parte da população avaliada. / Due to its rapid growth, tumor cells need more fatty acids for membrane composition and nucleotides for DNA synthesis. Both fatty acids and nucleotides synthesis depends on Krebs cycle intermediates. As most of glucose available is converted to lactic acid (and not to acetyl-CoA, as occur in normal cells), glutamine is used as major source for Krebs cycle intermediates for fatty acids and nucleotides synthesis. Not only metabolism of glutamine is altered in tumor cells, but also other amino acids. The aims of the study were to compare fatty acid and amino acid profiles in tumoral and adjacent normal tissue of patients with squamous cell carcinoma of the head and neck, to quantify total lipids in tissue samples and to asses nutritional status of patients. The study included patients diagnosed with squamous cell carcinoma of the head and neck, scheduled for cancer operation within Head and Neck Surgery Service of Clinics Hospital of Ribeirao Preto - University of Sao Paulo. Samples were collected immediately after tumor removal. Lipids and free amino acids were extracted using Folch method. Free and total fatty acids analyses were performed by gas chromatography/mass spectrometer. Amino acids analysis was performed by gas chromatography with flame ionization detector. Nutritional assessment included: weight, height and skinfold measurements, bioelectric impedance exam for estimative of body composition and dietetic assessment through food frequency questionnaire. We observed no difference in total lipids and of palmitic, stearic and oleic fatty acids concentrations in tumor and normal tissues. Only alanine, methionine and lysine showed no difference in tumor and normal tissues. Other amino acids concentrations were higher in tumor compared to normal tissue. Amino acids extraction through Folch method (created for lipid extraction purpose) enables the determination of fatty acid and amino acid in small slices of tissue, as that obtained from biopsy. Nutritional status of patients ranged from eutrophic to overweight, with excess of body fat, assessed by bioelectric impedance. Food intake was adequate in most of patients studied.

O carcinoma epidermóide da mucosa oral (CEMO) é uma neoplasia maligna comum; no Brasil, são estimados, para 2016, 15.490 novos casos. A invasão óssea ocorre em casos avançados.; esta é classificada em erosiva e infiltrativa. Aparentemente, o processo de transição epitélio-mesenquimal, com o envolvimento da E-caderina, é implicado. Foi investigada a expressão de E-caderina, por meio da imunoistoquímica em 15 casos avançados de CEMO e avaliada sua correlação com as características clínicas e histológicas da invasão óssea. A imunoexpressão da E-caderina foi estudada nos 15 casos de CEMO com evidência histológica de invasão óssea. A maioria dos pacientes eram homens (10 pacientes) e apresentavam invasão em mandíbula (9 casos). A expressão de E-caderina foi negativa em CEMOs com invasão erosiva e positiva nos casos que apresentavam infiltração óssea. A expressão de E-caderina na invasão óssea sugere que a participação do fenômeno de transição epitélio-mesenquimal é um fator diretamente envolvido com o tipo de invasão óssea. / Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a common malignancy; in Brazil it is estimated, in 2016,15.490 new cases. Bone invasion occurs in advanced cases; it is classified in erosive and infiltrative patterns. Apparently, the epithelial-mesenchymal phenomenon, with important participation of E-cadherin is implicated. We investigated the expression of E-cadherin in advanced OSSC and correlated its expression with the clinical characteristics and histologic patterns of bone invasion. Immunoexpression of E-cadherin was studied in 15 cases of OSCC with histological evidence of bone invasion. Most patients were men (10 patients) and presented mandible invasion (9 cases). The expression of E-cadherin was negative in OSCC in erosive bone invasion and positive in the infiltrative bone invasion. E-cadherin expression in bone invasion suggests that participation of epithelial-mesenchymal phenomenon is dependent on the patterns of tumour bone invasion.