Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-07-21T18:21:23Z No. of bitstreams: 1 Marcio Cerqueira de Almeida, Avaliação da associação... 2013.pdf: 1510563 bytes, checksum: 0e9c49e3f55ccee94564fa6d382253e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-21T18:21:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcio Cerqueira de Almeida, Avaliação da associação... 2013.pdf: 1510563 bytes, checksum: 0e9c49e3f55ccee94564fa6d382253e8 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A doença de Chagas (DC) é causada pelo protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi. Estima-se que ainda existam 10 milhões de pessoas infectadas na América Latina. Para a quimioterapia específica da DC o benzonidazol (BZ) é o medicamento de escolha. A eficácia terapêutica dos compostos atualmente em uso clínico tem sido questionada, tendo em conta os diferentes índices de cura já registrados na literatura. A associação do BZ, com medicamentos que apresentem um efeito anti-T. cruzi poderá potencializar a ação antiparasitária do mesmo e possivelmente permitirá o uso de doses menores e consequentemente diminuição dos efeitos tóxicos. O objetivo da presente investigação é avaliar o efeito do tratamento com o BZ associado aos medicamentos nifurtimox (NF) e cetoconazol (CETO), em duplas combinações, sobre o curso da infecção aguda pela cepa Y do T. cruzi, em camundongos suíços. Foram feitos três experimentos: A e B, nos quais os camundongos foram inoculados com 5 X 104 formas de tripomastigotas sanguícolas do T. cruzi e o C formado por animais não infectados. O tratamento foi feito por entubação (via oral) a partir do 6º dia pós-infecção e teve duração de 60 dias. Experimento A (A1 – controles infectados e não tratados; A2 – infectados e tratados com 100 mg/kg/dia BZ; A3 – infectados e tratados com dose inicial de 200mg/kg/dia e seguidos de 50 mg/kg/dia NF; A4 – infectados e tratados com BZ + NF); Experimento B (B1 – controles infectados e não tratados; B2 – infectados e tratados com 100 mg/kg/dia BZ; B3 – infectados e tratados com 120 mg/kg/dia CETO; B4 – infectados e tratados com BZ + CETO); Experimento C (C1 – tratados com 100 mg/kg/dia BZ; C2 – tratados com dose inicial de 200 mg/kg/dia seguido de 50 mg/kg/dia NF; C3 – tratados com 120 mg/kg/dia CETO; C4 – tratados com BZ + NF; C5 – tratados com BZ + CETO). Os níveis parasitêmicos e a mortalidade foram avaliados a partir do 6º dia pós-infecção, e trinta dias após o fim do tratamento foram realizados os testes de cura parasitológicos (parasitemia, xenodiagnóstico e hemocultura) e o teste sorológico de imunofluorescência indireta (IFI). O critério de cura foi baseado na combinação dos resultados dos testes de cura parasitológicos com a IFI. Os resultados do Experimento A indicaram uma taxa de mortalidade de 100% para o grupo controle, 5,26% para os grupos BZ e BZ + NF e 0% para o NF; o índice de cura foi de 80% para o grupo BZ, 5,26% para o NF e 100% para o BZ + NF; Os resultados do Experimento B mostraram uma taxa de mortalidade de 100% para o grupo controle, 0% para os grupos BZ e CETO, e 5,26% para o BZ + CETO; o índice de cura foi de 80% para o grupo BZ, 81,8% para o CETO e 100% para o BZ + CETO. O estudo histopatológico demonstrou que o tratamento com BZ isoladamente ou em combinação com o NF ou com o CETO determinou significativa diminuição da intensidade das lesões no miocárdio e músculo esquelético quando comparado aos controles não tratados. O grupo GC, não demonstrou alterações inflamatórias em miocárdio. Em conclusão, o tratamento combinado do BZ com outras drogas (NF e CETO) não determinou aumento significante dos índices de cura e diminuição das lesões histopatológicas do miocárdio quando comparado com o tratamento isolado com o BZ. Provavelmente, o uso neste trabalho, de doses previamente estabelecidas, influenciou no efeito das referidas associações. Novos experimentos são necessários, com o uso de doses decrescentes do BZ, para melhor avaliar o efeito das referidas combinações sobre a toxicidade da droga. / Chagas’disease (CD) is caused by the hemoflagelate protozoa Trypanosoma cruzi. It is estimated that 10 million infected people are still living in Latin America. For the specific chemotherapy of CD, the Benznidazole (BZ) is the drug of choice. However, the therapeutic efficacy of the compounds now in clinical use is not confirmed, taking into account that different cure rates have been registered. It is possible that the association of BZ with other drugs with an anti-T. cruzi action could improve its anti-parasitic effect, with the use of lower dose and consequent decrease of the toxic effects. The objective of the present investigation is to evaluate the effect of the treatment with BZ in association with the drugs Nifurtimox (NF) and Ketoconazole (CETO) in double combinations, on the evolution of the acute phase of the infection of Swiss mice, with the Y strain of T. cruzi. Three experimental groups were performed: Group A (GA) and Group B (GB) in which the mice were inoculated with 5x104 trypomastigote blood forms; Group GC of uninfected mice, submitted to the same treatment schedules. Treatment was performed by gavage (oral route) from the 6th day after infection, during 60 days; Group GA: I - infected, non treated controls; II - infected and treated with 100 mg/kg/day of BZ; III - infected and treated with NF ( initially 200 mg/kg/day, followed by 50 mg/kg/day); IV – infected and treated with BZ + NF; Group GB: I - infected, non treated controls; II - infected and treated with 100 mg/kg/day of BZ; III - infected and treated with 120 mg/kg/day CETO; IV – infected and treated with BZ + CETO; Group C: I - treated with 100 mg/kg/day of BZ; II - treated with NF ( initially 200 mg/kg/day, followed by 50 mg/kg/day); III - treated with 120 mg/kg/day CETO; IV - treated with BZ + NF; V - treated with BZ + CETO. Parasitemia and mortality were evaluated from the 6th day of infection. Thirty days after the end of treatment, parasitologic cure tests of the mice of the several groups were performed (parasitemia after Cyclophosphamide injection: 250mg/kg b.w, xenodiagnosis and hemoculture). Cure criteria was based on the combination of the results of parasitological tests and the serological titles (cut off 1:20). Results: GA – 100% of mortality for untreated control, 5,26% for sub-groups BZ and BZ +NF and 0% for NF group. Cure rate was of 80% for the subgroup BZ, 5.26%, for the NF group and 100% for the group BZ+NF Results – GB – 100% of mortality for untreated controls; 0% for the subgroups BZ and CETO and 5.26% for the group BZ + CETO. Cure rates: 80% for the subgroup BZ, 81.8% for the subgroup CETO and 100% for the group BZ + CETO. Histopatological study showed that treatment with BZ only or in combination with NF or CETO determined significant decrease in the intensity of the inflammatory lesions of the myocardium and skeletal muscles, as compared with untreated controls. However isolated treatment with NF or CETO did not determined regression of the inflammatory lesions. The group GC did not show inflammatory lesions in the myocardium or skeletal muscle. Conclusion – the combined treatment with BENZ and other drugs (NF and CETO) did not determine a significant increase of the cure indices when compared to the isolated treatment with BZ. These combinations have not determined a significant decrease of histopathological lesions of the myocardium, as compared to the treatment with BZ. Probably the use of previously established doses interferes with the analysis of the effect of the cited combinations. New experiments are necessary with the use of lower doses of BZ to a better evaluation of the efficacy and toxicity of the drug.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-10-29T18:55:27Z No. of bitstreams: 1 Bruno Teixeira Goes Desempenho....pdf: 1185695 bytes, checksum: 95359124751a99db60aa2e7cac925e8a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-29T18:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruno Teixeira Goes Desempenho....pdf: 1185695 bytes, checksum: 95359124751a99db60aa2e7cac925e8a (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A doença de Chagas é responsável por cerca de 15.000 óbitos por ano, principalmente nas Américas do Sul e Central, onde 7-8 milhões de pessoas encontram-se em risco de contrair a doença. A combinação de inflamação muscular e desnervação podem ocorrer durante o curso desta patologia podendo limitar a ativação neuromuscular durante a inflamação e após reparo ou remodelamento da lesão devido a uma complexa reorganização das unidades neuromotoras. Desta forma, faz-se necessário investigar o desempenho locomotor de camundongos com infecção chagásica experimental aguda. Camundongos suíços foram alocados em dois grupos portadores de infecção (cepa Y e Colombiana) e comparados ao grupo controle (sem infecção) quanto ao desempenho locomotor no teste do Campo Aberto, na Escala Basso de avaliação locomotora murina (BMS) e Rota-Rod. Avaliações histopatológicas do músculo cardíaco, esquelético (isquiotibiais e tríceps sural) e nervo isquiático foram realizadas. A infecção pela cepa Y e Colombiana provocou piora do desempenho locomotor a partir do 7º dia de infecção com redução significativa dos quadrados percorridos no teste do campo aberto. A qualidade da marcha foi prejudicada a partir do 9º dia para o grupo cepa Y e 23º dia para o grupo cepa Colombiana sendo caracterizada pela incapacidade de sustentação da cauda e instabilidade moderada ou grave do tronco. Modificação na coordenação e equilíbrio foi observada apenas no grupo cepa Y a partir do 11º dia de infecção quando os animais estavam impossibilitados de realizar o teste. Os resultados do desempenho locomotor estiveram associados a alterações histopatológicas no músculo cardíaco e esquelético e todos os dados deste estudo corroboram com os achados histológicos e com outros modelos de avaliação locomotora encontrados na literatura. O modelo de avaliação proposto neste trabalho possibilitou a caracterização de um padrão nas modificações do desempenho locomotor no modelo experimental de infecção aguda pela cepa Y e Colombiana do Trypanosoma cruzi. / Chagas disease is responsible for about 15,000 deaths per year, mainly in Central and South America, where 7-8 million people are at risk of contracting the disease. The combination of muscle inflammation and denervation may occur during the course of this pathology limiting neuromuscular activation during inflammation and remodeling after injury or repair due to a complex reorganization of neuromotor units. Thus, making it necessary to investigate the locomotor performance of mice with experimental acute Chagas infection. Swiss mice were divided into two groups with the infection (Y strain and Colombian) and compared to the control group (without infection) on the locomotor performance in the Open Field Test, Scale Basso locomotor evaluation murine (BMS) and Rota-Rod. Histopathological evaluations of cardiac muscle, skeletal (hamstrings and triceps surae) and sciatic nerve were performed. Infection by strain Y and Colombian caused worsening of locomotor performance from the 7th day of infection with significant reduction of squares traversed in the open field test. The quality of gait was impaired from the 9th day for group Y strain and 23 days for the group Colombian strain is characterized by the inability to support the tail and moderate or severe instability of the trunk. Change in coordination and balance was observed only in group Y strain from the 11th day of infection when the animals were unable to perform the test. The results of locomotor performance were associated with histopathological changes in cardiac and skeletal muscle and all data in this study corroborate the findings with other histological and locomotor assessment models found in the literature. The evaluation model proposed in this work allowed the characterization of a pattern of changes in locomotor performance in an experimental model of acute infection for the Y and Colombian strain of Trypanosoma cruzi.

Submitted by Andrea Hartke (andreamh@fiocruz.br) on 2014-11-24T17:22:58Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Saloê Bispo.pdf: 7313913 bytes, checksum: 084107e9ced08be104473d461e3b1102 (MD5) / Approved for entry into archive by Andrea Hartke (andreamh@fiocruz.br) on 2014-11-24T17:25:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Saloê Bispo.pdf: 7313913 bytes, checksum: 084107e9ced08be104473d461e3b1102 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-24T17:25:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Saloê Bispo.pdf: 7313913 bytes, checksum: 084107e9ced08be104473d461e3b1102 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Pós-Graduação em Biociências e Biotecnologia. Curitiba, PR, Brasil. / O Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da Doença de Chagas. O controle da expressão de genes é fundamental para gerar as mudanças morfológicas durante o ciclo de vida do parasita. Entretanto, os tripanosomatídeos possuem peculiaridades quanto a sua biologia molecular, como por exemplo, a transcrição policistrônica e a ausência de promotores definidos para a RNA polimerase II. Acredita-se, portanto, que grande parte da regulação da expressão gênica nestes parasitas ocorra em nível pós-transcricional por mecanismos que envolvem mudanças na estabilidade e no acesso dos mRNAs aos polissomos. Estudos prévios do nosso grupo mostraram que alguns mRNAs que codificam proteínas do complexo proceossomo (SSU) em T. cruzi são mais abundantes em tripomastigotas metacíclicos que em epimastigotas. No entanto, apesar da grande quantidade de mRNAs da proteína TcSof1 nas formas infectantes, o mRNA de TcSof1, esta imobilizado dentro dos polissomos e não é traduzido. O sequestro de mRNA dentro polissomos é uma maneira de bloquear a tradução, sugerindo um mecanismo de regulação negativa da tradução, provavelmente nas etapas de elongação e terminação. O objetivo do nosso trabalho foi caracterizar os mecanismos de regulação da expressão gênica envolvidos na expressão negativa do gene de TcSof1 na forma tripomastigota metacíclica de T. cruzi. Primeiramente isolamos e analisamos mais de 500 RNAs pequenos na forma metaciclica que pudessem estar regulando negativamente a tradução de TcSof1. Embora, nenhum RNA regulador tenha sido identificado, uma grande população de fragmentos de tRNAs foi encontrada. Sua participação na maquinaria de tradução ativa foi excluída, uma vez que os mesmos não foram detectados associados aos polissomos ou ribossomos. Padronizamos e empregamos a técnica de Ribossome Footprinting para a análise da eficiência de tradução em T. cruzi, avaliando a população de mRNA total e os mRNA que estavam associados aos ribossomos, provenientes da forma metacíclica. Os resultados mostraram que de aproximadamente 9.000 genes presentes nesta etapa do ciclo de vida, apenas 4.241 estavam associados aos ribossomos nas amostras do footprinting, ao contrário do que foi visto na forma epimastigota, onde dos 9.000 genes presentes 7. 419 genes estavam associados aos polissomos. Este resultado indica que quase a metade dos genes transcritos nas formas tripomastigotas estão sendo regulados negativamente, provavelmente em nível de tradução. Confirmamos com esta técnica a presença do mRNA de TcSof1 associado aos polissomos na forma metacíclica mesmo sem haver expressão da proteína nesta forma, e outros genes que apresentam o mesmo padrão de expressão também foram analisados. Através do tratamento dos parasitas com a droga harringtonina, um inibidor da tradução, seguido das análises por Ribosome Footprinting, foi possível evidenciar um acúmulo de ribossomos nos locais de inicio da tradução da maioria dos mRNAs mostrando que a droga bloqueia os ribossomos no sitio de inicio da tradução. Pelo contrario, o mRNA de TcSof1 apresentou marcas de ribossomo ao longo de toda a região codificante do gene nas formas metacíclicas, sugerindo que os ribossomos estão parados na etapa de elongação da tradução. Este resultado confirmou que a ausência de expressão desta proteína nesta etapa do ciclo de vida do parasita, é controlada em nível de tradução por um mecanismo de parada dos ribossomos nos polissomos. / Trypanosoma cruzi is the etiologic agent of Chagas disease. The parasite alternates between different morphological and functional forms during its life cycle. Control of gene expression is key to generate the morphological changes during the life cycle of the parasite. However, trypanosomatids display very peculiar cellular processes, as polycistronic transcription and the lack of canonical RNA II polymerase promoters. Therefore, gene expression regulation occurs mainly at the posttranscriptional level by mechanisms that involve changes in the stability of mRNAs and their access to polysomes. Previous studies from our group have shown that some mRNAs, which encode proteins of the proceossome complex (SSU) in T. cruzi, are more abundant in metacyclic trypomastigote than in epimastigote stages. However, even though a greater amount of TcSof1 mRNA is observed in the infective forms and is associated with the polysomes it is not translated. Trapping the mRNA in polysomes is a way to block translation, suggesting a mechanism of translation down-regulation, probably during the elongation and termination stages. The aim of our study was to characterize the mechanisms of gene expression regulation involved in the negative expression of TcSof1 gene in the metacyclic stage of T. cruzi. First, we isolated and analyzed more than 500 small RNAs in the metacyclic form that could be negatively regulating the translation of TcSof1 gene. Although no regulatory RNA was identified, a large population of tRNAs fragments was found. Their association to the active translation machinery was excluded, since they were not detected in association with polysomes or ribosomes. After that, we standardized and applied the Ribosome Footprinting technique to analyze translation efficiency in T. cruzi, and to assess which mRNAs were protected by ribosomes in the metacyclic form. Our results showed that from some 9,000 genes present in this life cycle stage, only 4,241 were associated with ribosomes. On the other hand, in epimastigote forms from 9,000 genes present, 7,419 genes were associated with polysomes. This indicates that almost half of the transcribed genes in metacyclic trypomastigotes are being negatively regulated, probably at translation level. Through the ribosome profiling technique we confirmed ours previous results and showed that TcSof1 mRNA is associated to metacyclic polisomes though the protein is not expressed in this form. Similarly, other genes that have the same TcSof1 expression pattern were also analyzed. By treating parasites with harringtonine, an inhibitor of translation, followed by Ribosome Footprinting analysis, it was possible to show an accumulation of ribosomes at the initiation translation sites of most mRNAs. We could observe the presence of ribosome footprints along the coding region of TcSof1 gene in metacyclic forms, suggesting that ribosomes are stalled onto the mRNA. This result confirms that the absence of protein expression at this stage is controlled at the translation level by a mechanism that stalls the ribosomes on the mRNA.

Orientador: Prof. Dr. Norberto Anibal Maidana / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Matemática , 2015. / O aumento do estudo de modelos matemáticos vem desempenhando um papel cada vez mais significativo para a compreensão e obtenção de resultados e previsões de fenômenos biológicos. Como no Brasil existe um alto risco de transmissão indireta de doenças por vetores, como mosquitos e outros insetos hematófagos, objetivou-se com este trabalho estudar a propagação da Doença de Chagas que é transmitida principalmente pelos triatomíneos. Para isso, propomos um modelo matemático para estudar e descrever a propagação desta doença na população humana. Primeiramente, discorreu-se sobre a doença e sobre suas principais características. A partir daí, por meio de um sistema de Equações Diferencias, modelamos a infecção e estudamos seu comportamento, calculando o Número Básico de Reprodução, verificando a estabilidade local dos pontos de equilíbrio e fazendo uma análise numérica dos resultados. Após, foi possível verificar a existência de soluções ondas viajantes e a velocidade mínima de propagação para o modelo geotemporal da doença, possibilitando avaliar estratégias de controle mediante os resultados obtidos através da modelagem. / The increase of the study of mathematical models has played a significant role in understanding and achieving results and predictions of biological phenomena. As in Brazil there is a high risk of indirect transmission of diseases by vectors such as mosquitoes and other blood sucking insects, we aim with this work is to study the spread of Chagas¿ Disease transmitted primarily by triatomines. For this, we propose a mathematical model to study and to describe the spread of this disease in the human population. First, we describe about the disease and its main features. Then, through a system of differential equations, we modelled the infection and studied its behaviour, calculating the basic reproduction number, checking the local stability of equilibrium points and making a numerical analysis of the results. After, it was possible to check the existence of travelling wave solutions and the wavefront speed for the spacial model, being able to evaluate control strategies using the results obtained by mathematical modelling.

Submitted by DANILA BLANCO DE CARVALHO null (28472552810) on 2016-04-12T17:41:32Z No. of bitstreams: 1 Tese - Dr. Danila Blanco de Carvalho.pdf: 6148040 bytes, checksum: 510e83862caa6edf09797bb1e816f80b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-04-13T16:58:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carvalho_db_dr_arafcf.pdf: 6148040 bytes, checksum: 510e83862caa6edf09797bb1e816f80b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-13T16:58:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carvalho_db_dr_arafcf.pdf: 6148040 bytes, checksum: 510e83862caa6edf09797bb1e816f80b (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A doença de Chagas é uma das principais parasitoses que ocorrem na América Latina, cujo agente etiológico é o protozoário Trypanosoma cruzi, que é veiculado por triatomíneos. Estima-se que entre oito milhões de pessoas estejam infectadas. Rhodnius é um dos gêneros que pode veicular T. cruzi e inclui espécies estreitamente relacionadas com baixos níveis de diferenciação morfológica. Atualmente, existem 19 espécies conhecidas, entre elas, Rhodnius montenegrensis que é considerada a fim de Rhodnius robustus. Para investigar as diferenças genéticas interespecíficas dessas duas espécies utilizou-se a metodologia de larga escala RNA-seq. Por essa técnica foram geradas quatro bibliotecas de RNA total de cabeças e glândulas salivares de machos de R. montenegrensis e R. robustus. Após filtrar pela qualidade, foram realizadas montagens de novo de cada uma das espécies. Esse processo resultou em 64952 contigs para R. montenegrensis e 70894 para R. robustus com N50 de 2100 para as duas espécies aproximadamente. Com base na montagem de R. robustus, foi feita uma procura por SNPs e foram encontrados 3055 polimorfismos interespecíficos fixados. Foram selecionados 216 transcritos com alta divergência contendo apenas polimorfismos fixados entre as duas espécies. O teste de enriquecimento nesses transcritos revelou uma sobrerepresentação de oito termos relacionados ao complexo da proteína clatrina. Os resultados obtidos mostram que R. montenegrensis e R. robustus apresentam uma quantidade substancial de polimorfismos interespecíficos fixados o que sugere um alto grau de divergência genética entre as duas espécies. / Chagas disease is one of the main parasitic diseases found in Latin America infecting an estimated eight million people worldwide. The protozoan Trypanosoma cruzi, its etiological agent, uses triatomines as a disease vector, among them the genus Rhodnius. This genus includes species that have been difficult to differentiate because they show low amounts of morphological differentiation. Despite that, there are currently 19 known species described, one of them Rhodnius montenegrensis, which has been confounded with Rhodnius robustus. Here we generated Large-scale RNA-sequencing data from heads and salivary glands to investigate genetic differences between these two species. We produced a total of four RNAseq libraries from heads and salivary glands of males of R. montenegrensis and R. robustus. de novo transcriptome assemblies produced for each species resulted in 64,952 contigs for R. montenegrensis and 70,894 contigs for R. robustus, with N50 of approximately 2100 for both species. We performed a search for SNPs based on the more complete R. robustus assembly and found 3,055 fixed interspecific differences. We identified two hundred and sixteen transcripts with high levels of divergence which contained fixed polymorphisms found between the two species. A Gene Ontology enrichment analysis revealed that these highly differentiated transcripts were enriched for the following terms: clathrin coat of endocytic vesicle, AP-2 adaptor complex, clathrin-coated endocytic vesicle, clathrincoated endocytic vesicle membrane, clathrin coat of coated pit, endocytic vesicle membrane, clathrin vesicle coat, and coated pit. The results reveal that R. montenegrensis and R. robustus show a substantial quantity of fixed interspecific polymorphisms, a finding which suggests a high degree of genetic divergence between the two species, which likely corroborates their species status. / CAPES: 23038.005285/2011-12

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-11-30Bitstream added on 2014-06-13T21:02:22Z : No. of bitstreams: 1 souza_ai_dr_jabo.pdf: 1146677 bytes, checksum: ac9276512764cc5723060e8848ecdce5 (MD5) / Fundação Manoel de Barros / O trabalho teve como objetivo descrever as características clínicas da infecção natural pelo T. cruzi em cães residentes em uma área rural do estado de Mato Grosso do Sul, Brasil. Foram utilizados métodos sorológicos convencionais e não convencionais em 75 cães residentes na área e avaliação cardiovascular e da bioquímica sérica em quatro animais confirmadamente chagásicos. Foram usados os testes de reação de imunofluorescência indireta (RIFI), ELISA com antígenos da forma epimastigota do T. cruzi (EAE ELISA) e ELISA com antígeno excretado e secretado da forma tripomastigota do T. cruzi (TESA-ELISA), que detectaram anticorpos em 45,33% (n=34), 24,0% (n=18) e 12,0% (n=09) dos cães, respectivamente. A real prevalência da infecção foi confirmada como 10,7% (n=08) pela técnica de immunoblotting com antígeno secretado e excretado da forma tripomastigota do T. cruzi (TESA-blot). O teste com melhor índice de concordância (Kappa; 0,93), sensibilidade (100%) e especificidade (98,5%) foi o TESA-ELISA, que quando associado à RIFI igualou-se aos dados obtidos com o TESA-blot (10,7%). Três dos quatro animais chagásicos apresentaram aumento da silhueta cardíaca direta, aumento da duração de onda P e do complexo QRS. Um cão apresentou bloqueio de ramo direto e outro, bloqueio atrioventricular de primeiro grau e parada sinusal. Notou-se, também, espessamento de parede livre de ventrículo esquerdo em diástole, redução da fração de encurtamento e inversão dos picos de velocidade das onda E e A, indicando disfunção sistólica e diastólica... / This study was conduted to describe the clinical characteristics of the natural infection caused by the T. cruzi in dogs residing in a rural area of Mato Grosso do Sul, Brazil. Conventional and nonconventional diagnosis methods were used in 75 dogs living in this area for screening T. cruzi infection. Cardiovascular and biochemical serum were also performed in four confirmed positive dogs. The following tests were used: indirect immunofluorescence test (IFAT), enzyme-linked immunosorbent assay with T .cruzi. epimastigote antigens (EAE ELISA) and enzymelinked immunosorbent assay with T.cruzi excreted-secreted trypomastigote antigens (TESA-ELISA) with detected antibodies in 45,33% (n=34), 24,0% (n=18) and 12,0% (n=09) of the dogs, respectively. The real prevalence of the infection was confirmed as 10,7% (n=08) by immunoblotting test with T. cruzi excreted-secreted antigens (TESAblot). The test with the best concordance index (Kappa; 0,93), sensibility (100%) and specifity (98,5%) was the TESA-ELISA, which, when associated with IFAT had the same as results those obtained with the TESA-blot (10,7%). Three out of the four chagasic animals showed enlarged cardiac silhouette on x-ray and an increase of the P-wave duration and QRS complex in electrocardiogram. Two dogs presented conduction disturbances, right bundle block in one dog and the first-degree atrioventricular block and sinus arrest in another...(Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-25Bitstream added on 2014-06-13T20:03:05Z : No. of bitstreams: 1 blau_l_dr_arafcf.pdf: 2905737 bytes, checksum: c4bc675e22ee081d46b59428973bb73a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A doença de Chagas ou Tripanossomíase americana é ainda um dos maiores problemas endêmicos na América Latina desde sua descoberta 100 anos atrás. Em 2006, havia aproximadamente 7,6 milhões de casos de infecção por Trypanosoma cruzi nos 21 países latino americanos. Cerca de 90 milhões de pessoas estão sobre o risco de contrair a infecção. O número de mortes e novos casos atribuídos a essa doença são respectivamente 21.000 e 200.000 no ano de 2000. Dois fármacos são usados particularmente para tratar esta doença, nifurtimox e benznidazol que são ativos somente na fase aguda da doença. No Brasil, somente benznidazol é disponível no mercado, por causa da resistência do nifurtimox às cepas de T. cruzi. Ambos os fármacos causam efeitos adversos graves que incluem polineuropatia periférica, agranulocitose e trombocitopenia púrpura. Embora o papel exato do sistema imune na patogenia não é totalmente entendido, é aceito que o sistema imune tenha um papel importante na proteção da infecção parasitária. Antígenos produzidos por T. cruzi afetam a função celular e induzem uma resposta caótica no hospedeiro, como a transialidase (TS) que é essencial para sobrevivência do parasita. TS é uma enzima envolvida na invasão de células hospedeiras mamíferas, na proteção contra componentes do sistema complemento e induz apoptose severa nas células do sistema imune, e que a administração de anticorpos é capaz de neutralizar esta enzima. Outro antígeno, J-18, um derivado recombinante da glicoproteína gp82, é capaz de se ligar à mucosa gástrica e isto é crucial para o estabelecimento da infecção oral. Então, um anticorpo contra esta glicoproteína poderia ser útil para inibir a invasão na mucosa gástrica. Cruzipaína é outra enzima importante do T. cruzi e suas funções parecem ser participar da nutrição, mecanismos de defesa e replicação do parasita... / Chagas disease or American trypanosomiasis is still one of the major endemic problems in Latin America since its discovery 100 years ago. In 2006, there were approximately 7.6 million cases of Trypanosoma cruzi infection in 21 Latin American countries. Around 90 million people are at risk of contracting the infection. The number of deaths and new cases attributed to this disease are respectively 21,000 and 200,000 in the year 2000. Two drugs are particularly used to treat this disease; nifurtimox and benznidazol are active only in its acute phase. In Brazil, just benznidazol is available in the market, because nifurtimox resistant to T. cruzi strains. Both drugs cause severe side-effects including peripheral sensitive polyneuropathy, agranulocytosis and thrombocytopenic purpura. Although the exact role of the host immune system in the pathogenesis is not still fully understood, it is accepted that the immune system plays an important role in protection from parasitic infection. Antigen derivatives from T. cruzi affect cellular function and induce chaotic immune system host response, like trans-sialidase (TS) being essential for the parasite survival. TS is an enzyme involved in the invasion of mammalian host cells, in the protection against components of complement system and induces severe apoptose in cells of the immune system, and that antibodies administration is able to neutralize this enzyme. Another antigen, J-18, a recombinant glyprotein gp82 derivative, is able to bind to gastric mucin and this is crucial for the establishment of T. cruzi infection by oral route. Then, an antibody against this glycoprotein could be useful to inhibit the gastric mucin invasion. Cruzain is another important enzyme of T. cruzi and its functions seem to participate in nutrition, defense host mechanisms and replication of intracellular parasite. While there are no strong inhibitors against TS... (Complete abstract click electronic access below)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Trypanosoma cruzi infection causes Chagas disease (CD), a chronic inflammatory disease. The most infected individuals present no apparent morbidity, consistent with the indeterminate form of Chagas disease (IFCD). Although parasite-related factors may influence the clinical progress of disease, factors such as immune and inflammatory responses of host have a fundamental participation in the dynamic of pathology. The cellular immune response is closely associated with the presence of a tissue inflammatory infiltrate, which is composed by mononuclear cells that proliferate and produce pro- and anti-inflammatory cytokines. The inflammatory reaction triggered by T. cruzi infection is maintained by persistence of parasite in the host, and produces systemic effects, including microvascular changes. The puricergic signaling system plays an important role in the modulatiib of immune and inflammatory responses as well as vascular thrombosis by adenine nucleotides (ATP, ADP and AMP) and their derivative nucleoside adenosine. These signaling molecules are released from cells such as lymphocytes and platelets in response to damage or cell stimulation by the action of pathogens. The effects of adenine nucleotides and adenosine are promoted through the agonism of specific purinergic receptors and controlled by an enzymatic complex located on the cell surface. The aim of this study was to evaluate the influence of purinergic signaling in the regulation of microvascular dysfunction triggered by infection and in the adaptive immune response induced by the host through ectoenzymes activities involved in the metabolism of ATP in lymphocytes and platelets of patients IFCD. It was observed a decrease in both E-NTPDase and E-ADA activities, representing an adaptive consequence of host to a low antigenic stimulation during the latent phase of disease. Therefore, low concentrations of extracellular ATP would lead the induction of a Th2 response that would protect the host from an intense Th1 response, while high concentrations of extracellular adenosine would be responsible for anti-inflammatory and immunosuppressive effects. It was not observed any change in E-NTPDase expression when compared with the control group, demonstrating that its decreased activity may be a result of some tridimencional alteration of the enzyme itself. In platelets of IFCD patients, there was an increase in E-NPP and E-5 -NT activities and a decrease in E-ADA activity, which could be related to tromboregulatory effects by nucleotides degradation as well as formation and preservation of extracellular adenosine levels, in view of its vasodilator and cardioprotective roles. The decreased platelet aggregation observed in IFCD patients probably occurred due to antiaggregating action of adenosine. In conclusion, the purinergic system ectoenzymes, which are responsible for ATP metabolism, contribute in tromborregulation and modulation of host immune responses during the indeterminate form of the disease. / A infecção pelo Trypanosoma cruzi causa a doença de Chagas (DC), uma doença inflamatória crônica. A maioria dos indivíduos infectados não apresenta morbidade aparente, compatível com a forma indeterminada da doença de Chagas (FIDC). Embora fatores relacionados ao parasito possam influenciar a evolução clínica da doença, fatores como resposta imune e inflamatória do hospedeiro têm fundamental participação na dinâmica da patologia. A resposta imune celular está intimamente associada à presença de um infiltrado inflamatório tecidual, composto por células mononucleares que proliferam e produzem citocinas pró e anti-inflamatórias. A reação inflamatória desencadeada pela infecção pelo T. cruzi é mantida pela persistência do parasito no hospedeiro, e produz alterações sistêmicas, incluindo alterações microvasculares. O sistema de sinalização purinérgica desempenha um importante papel na modulação da resposta imune e inflamatória, assim como da trombose vascular, através dos nucleotídeos da adenina (ATP, ADP e AMP) e seu derivado nucleosídeo adenosina. Estas moléculas sinalizadoras são liberadas de células como linfócitos e plaquetas em resposta ao dano ou ao estímulo celular por ação de patógenos. Os efeitos dos nucleotídeos de adenina e da adenosina são promovidos através da ativação de receptores purinégicos específicos e controlados por um complexo enzimático localizado na superfície das células. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da sinalização purinérgica na regulação das disfunções microvasculares desencadeadas pela infecção, bem como da resposta imune adaptativa induzida pelo hospedeiro, através da determinação da atividade de ectoenzimas envolvidas no metabolismo do ATP em linfócitos e plaquetas de pacientes FIDC. Foi observada uma diminuição nas atividades da E-NTPDase e da E-ADA, representando uma conseqüência adaptativa do hospedeiro frente a uma baixa estimulação antigênica durante o período de latência da doença. Logo, baixas concentrações do ATP extracelular liberadas, levariam à indução de uma resposta Th2 que protegeria o hospedeiro de uma intensa resposta Th1, enquanto, elevadas concentrações de adenosina extracelular seriam responsáveis por efeitos anti-inflamatórios e imunossupressores. Não foi observada alteração na expressão da E-NTPDase em relação ao grupo controle, demonstrando que a diminuição da sua atividade enzimática pode ser resultado de alguma modificação na conformação tridimensional da própria enzima. Em plaquetas de pacientes FIDC, foi observado um aumento nas atividades da E-NPP e E-5 -NT e uma diminuição na atividade da E-ADA, o que poderia estar relacionado a um efeito tromborregulatório, com a formação e preservação dos níveis extracelulares de adenosina, tendo em vista seu papel vadodilatador e cardioprotetor. A agregação plaquetária diminuída observada nos pacientes FIDC, provavelmente ocorreu devido à ação anti-agregante da adenosina circulante. Dessa forma, sugere-se que as ectoenzimas do sistema purinérgico, responsáveis pelo metabolismo do ATP contribuem na tromborregulação e na modulação das respostas imunes do hospedeiro durante a forma indeterminada da doença.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-22Bitstream added on 2014-06-13T18:19:59Z : No. of bitstreams: 1 pascon_jpe_me_jabo.pdf: 1382577 bytes, checksum: 3d53c5d2492fab41cb21aab12435f44c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A cardiomiopatia chagásica está presente na história da humanidade, desde os primórdios da civilização. No continente americano, aproximadamente 200 milhões de pessoas estão afetadas por essa doença, principalmente em seu Hemisfério Sul, ocasionando importantes danos econômicos e sociais. A grande variedade de cepas e seu comportamento clínico obscuro na fase crônica indeterminada intensificam as falhas de diagnóstico e morte súbita. Sendo o cão um modelo experimental adequado para o estudo dessa doença em humanos, realizou-se este trabalho visando a caracterizar as alterações eletrocardiográficas, ecodopplercardiográficas e hematimétricas, de cães experimentalmente infectados com Trypanosoma cruzi, cepa Colombiana, em sua fase crônica indeterminada. Para tanto, 13 cães adultos, fêmeas foram infectados com o referido protozoário e submetidos a avaliações eletrocardiográfica, hematimétrica, bioquímico-sérica e ecocardiográfica durante sua fase crônica (1997 a 2004). A arritmia sinusal respiratória foi o ritmo predominante durante todo o período experimental, com baixa prevalência de bloqueio de ramo direito e crescente incidência de bloqueio atrioventricular de primeiro grau. A avaliação ecodopplercardiográfica revelou inversão das ondas E e A mitral, confirmando o distúrbio diastólico nesses animais. A avaliação bioquímica revelou atividade enzimática aumentada, confirmando a lesão cardíaca provocada pela infecção mesmo nesta fase. Desta forma, o presente ensaio contribui de forma singular para o conhecimento clínico desta afecção, trazendo mais informações acerca da tênue e obscura linha que separa a fase crônica indeterminada e a fase crônica cardíaca, na espécie canina experimentalmente infectada pela cepa Colombina do Trypanosoma cruzi. / The Chagasic cardiomiopathy is present in the human history since the first civilization. In the American continent, 200 millions people have been affecting by this disease, mainly in south hemisphere, causing important economics and social damages. The great number of strains and obscure clinical behavior in the indeterminate phase, intensify diagnostic failure and increase sudden death. The dog is an excellent experimental model to study this disease in human, therefore this research was developed to characterize the electrocardiographic, echodopplercardiographic and haematological changes, in experimentally infected dogs with Trypanosoma cruzi, Colombian strain, in a chronic indeterminate phase. For that, thirteen infected adult dogs, female, were submitted to electrocardiographic, haematological, biochemical and echocardiographic evaluations during a chronic phase (1997 to 2004). The respiratory sinus arrhythmia was the most frequent rhythm during this research, with low prevalence of right bundle branch block and growing incidence of first degree atrioventricular block. The echocardiographic mitral waves E and A inversion, demonstrated the diastolic dysfunction on this animals. All tested serum enzymes had increased activity, confirming the cardiac lesion caused by the infection even in that phase. Therefore, this research contributed in a unique way for the clinic knowledge of this disease, bringing more information about this fine transition line between the indeterminate and cardiac phase, in experimentally Trypanosoma. cruzi, Colombian strain infection of canine species.

Submitted by ALICIA CRISTINA SUMAN null (aliciasuman@hotmail.com) on 2016-08-22T23:59:23Z No. of bitstreams: 1 Tese Alicia Suman.pdf: 1146493 bytes, checksum: d897435ea1f94d5b32f63cf38cfeff2f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-24T17:22:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 suman_ac_me_bot.pdf: 1146493 bytes, checksum: d897435ea1f94d5b32f63cf38cfeff2f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-24T17:22:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 suman_ac_me_bot.pdf: 1146493 bytes, checksum: d897435ea1f94d5b32f63cf38cfeff2f (MD5) Previous issue date: 2016-07-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Doença de Chagas é uma doença progressiva e incapacitante, principalmente quando a função cardiopulmonar é acometida. É possível também que, esta associação esteja relacionada com a fraqueza muscular respiratória devido ao processo incapacitante, mostra alguns sintomas como, cansaço aos esforços e fadiga, que pode exacerbar-se quando associada à Hipertensão Pulmonar, e como sintomas inicias apresenta uma importante dispneia e considerável limitação nas atividades de vida diária. O presente estudo teve como objetivo avaliar a musculatura respiratória, qualidade de vida, perfil de ansiedade e depressão em pacientes com forma crônica indeterminada de Doença de Chagas associada à Hipertensão Pulmonar. Foram avaliados 107 pacientes, separados em três grupos: G1(grupo controle, n=08), G2 (grupo chagásico, n=93) e G3 (grupo chagásico sugestivo de hipertensão pulmonar, n=06). Todos os indivíduos foram submetidos à avaliação clínica, da espirometria pré e pós-broncodilatador, distância percorrida no teste de caminhada de seis minutos, avaliação da musculatura respiratória através da mensuração da PImáx e PEmáx, avaliação do estado de saúde, por meio do Medical Outcomes Study 36 - item Short-Form Health Survey (SF - 36) e da Escala Hospitalar de Ansiedade e Depressão. Os pacientes avaliados tinham idade média de 55 ± 8,8 anos, sendo 58 do sexo masculino (54%), 23 % eram tabagistas, em relação à classe funcional, 53 indivíduos do G2 estavam na classe funcional I e 5 indivíduos do G3 estavam na classe funcional II. Não houve diferença estatisticamente significante entre os três grupos estudados na avaliação da PImáx e PEmáx. Grupo 3 apresenta diferença estatisticamente significativa na distância real percorrida no teste de caminhada de seis minutos em relação ao grupo 1 e grupo 2; e para a distância prevista o G1 (p<0,05) foi estatisticamente significante em relação ao G3. Os valores espirométricos, avaliação da escala hospitalar e ansiedade e depressão- HAD e o questionário SF-36 não diferiram entre os grupos. Portanto, pacientes com a forma crônica indeterminada da doença de chagas associada à HP, não apresentam comprometimento significativo em relação à musculatura respiratória, espirometria e nas avaliações de qualidade de vida através da escala hospitalar de ansiedade e depressão e SF-36, porém na distância percorrida no teste de caminhada de seis minutos mostrou-se com baixa tolerância ao exercício. / Chagas Disease is progressive and incapacitating, especially when cardiopulmonary function is affected. It may be related to respiratory muscular weakness due to an incapacitating process, causing such symptoms as: tiredness upon exertion and fatigue, which may be exacerbated when associated with Pulmonary Hypertension. The present study aimed to evaluate the respiratory musculature, quality of life, profile of anxiety and depression in patients with indeterminate chronic Chagas Disease associated with Pulmonary Hypertension. We evaluated 107 patients, separated into three groups: G1(control group, n=08), G2 (Chagastic group, n=93) and G3 (Chagastic group suggestive of Pulmonary Hypertension, n=06). All individuals were submitted to clinical evaluation, spirometry, six-minute walking test, evaluation of respiratory musculature by measurement of PImax and PEmax, evaluation health state and hospital scale of anxiety and depression. In the evaluation of PImax and PEmax, there was no statistically significant difference among the three groups studied. G3 differed statistically in the real distance covered in the six-minute walking test in relation to G1 and G2; and for the predicted distance, G1 (p<0.05) was statistically significant in relation to G3. The spirometric values, evaluation of the Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS) and the SF-36 questionnaire did not differ among the groups. Therefore, patients with the indeterminate chronic form of Chagas Disease associated with PH, did not show significant impairment in relation to the variables studied, except for the six-minute walking test, which revealed low exercise tolerance.