Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-10T19:51:52Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Mabel Lopes.pdf: 1091828 bytes, checksum: 47b93a86d5d35f490d12b9a9f43c4744 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-10T19:51:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Mabel Lopes.pdf: 1091828 bytes, checksum: 47b93a86d5d35f490d12b9a9f43c4744 (MD5) / Introdução: A Síndrome do Intestino Irritável (SII) é uma desordem funcional do trato gastrointestinal, caracterizada por dor abdominal e alteração da motilidade e sensibilidade intestinal, acompanhada por desconforto. As formas clínicas desta patologia são: diarréica, constipante e alternante. A patogenia da SII é complexa e pouco entendida. Estudos genéticos estão sendo desenvolvidos com o objetivo de identificar possíveis marcadores de predisposição ou proteção ao desenvolvimento desta doença. Alguns estudos sugerem que o desequilíbrio na produção de citocinas pró- e anti-inflamatórias tem um importante papel na SII. Porém, poucos estudos mostram a associação entre a SII e o polimorfismos em genes de citocinas. Dados da literatura sugerem que indivíduos caucasianos teriam maior risco de desenvolver esta doença, mas não há relato de estudos realizados com o objetivo de avaliar a possível associação entre os marcadores informativos de ancestralidade (AIMs) e a SII. Objetivo: Estudar a possível associação dos polimorfismos TNF -308 G >A; TGFB1 (10T>C, 25G>C); IL10 -1082G>A, -819T>C, -592 C>A; IL6 -174G>C e IFNG +874T>A com a Síndrome do Intestino Irritável e estimar a ancestralidade genômica segundo os AIMs PV92, AT3, Sb19.3, APO, CKMM, Fynull, LPL, GC e RB2300. Métodos: A população do estudo foi constituída por 55 pacientes diagnosticados com SII atendidos no Complexo Hospitalar Prof. Edgard Santos-UFBA e 116 doadores voluntários de sangue (grupo controle). O DNA genômico foi extraído dos leucócitos do sangue periférico pelo método de Salting-out (extração salina) e a genotipagem dos AIMs foi feita por PCR convencional, PCR-RFLP ou PCR Real Time e das citocinas por PCR-SSP utilizando o kit “Cytokine Genotyping Tray” (One Lambda Incorporation). Resultados: Não houve diferenças estatisticamente significantes nas frequências alélicas, genotípicas e fenotípicas dos polimorfismos em genes de citocinas entre os grupos. Foi observada uma frequência significativamente maior do locus AT3 na amostra de indivíduos com SII quando comparada ao grupo controle (p=0,0291). Os grupos de pacientes e controles são homogêneos do ponto de vista genético, visto que a estimativa de mistura foi semelhante em ambos, mostrando maior contribuição européia seguida da africana e ameríndia. Houve diferença estatisticamente significante na frequência do locus PV92, entre os subgrupos das diferentes formas clínicas, sendo maior entre os pacientes com a forma diarréica em relação às demais formas (p=0,012). A estimativa de mistura para as diferentes formas clínicas mostrou que todas apresentam maior contribuição européia, seguida da africana e ameríndia. No entanto, a forma clínica diarréica apresenta menor contribuição européia e maior ameríndia quando comparada às outras formas. Conclusões: Polimorfismos nos genes das citocinas não parecem estar envolvidos na predisposição e/ou proteção à SII. A maior contribuição da ancestralidade européia, analisada por marcadores moleculares informativos de ancestralidade, pode ser um fator de predisposição ao desenvolvimento da SII. A maior contribuição da ancestralidade ameríndia em indivíduos com SII, pode ser um fator de predisposição ao desenvolvimento da forma diarréica. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T19:23:45Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Raquel Crisóstomo Lima Verde.pdf: 2317368 bytes, checksum: 9ec788fa9a7fd79189cbb5ee2ca7e2f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso(pbarroso@ufba.br) on 2013-09-18T17:40:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Raquel Crisóstomo Lima Verde.pdf: 2317368 bytes, checksum: 9ec788fa9a7fd79189cbb5ee2ca7e2f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-18T17:40:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Raquel Crisóstomo Lima Verde.pdf: 2317368 bytes, checksum: 9ec788fa9a7fd79189cbb5ee2ca7e2f5 (MD5) / National Institutes of Health (NIH); Bolsa de Estudo da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / Introdução: A infecção pelo vírus linfotrópico humano de células T do tipo 1 é caracterizada por proliferação de linfócitos e elevada produção espontânea de citocinas do tipo Th1, como IFN- e TNF-α. A atopia é uma disfunção do sistema imunológico na qual há produção exacerbada de citocinas do tipo Th2, principalmente IL-4, IL-5 e IL-13, proliferação de linfócitos B, produção elevada de IgE e eosinofilia. Na literatura, a relação da influência do HTLV-1 na resposta imune do tipo Th2 e na prevalência de atopia não estão completamente esclarecidos. Objetivos: Avaliar se a atopia interfere no desenvolvimento e na gravidade das manifestações neurológicas associadas ao HTLV-1. Comparar a produção espontânea de citocinas em pacientes infectados com HTLV-1 com e sem atopia. Metodologia: Foram realizados um estudo de corte transversal e uma coorte retrospectiva. No primeiro foi determinada a prevalência de atopia em portadores de HTLV-1 e em pacientes com HAM/TSP. Adicionalmente foi comparada a produção espontânea de citocinas entre os indivíduos atópicos e não atópicos de cada grupo. Na coorte retrospectiva foi comparado o desenvolvimento de manifestações neurológicas em indivíduos atópicos e não atópicos. Resultados: Não houve diferença estatística na prevalência de atopia entre portadores de HTLV-1 e pacientes com HAM/TSP (p=0,884). Porém, pacientes com HAM/TSP atópicos tiveram uma maior produção espontânea de IL-5 do que os não atópicos (p=0,008), e apresentaram uma elevada produção de IFN-γ (1724±1201pg/ml). Não houve associação entre a presença de atopia e o desenvolvimento de manifestações neurológicas. Porém, houve associação estatísticamente significante entre a presença de rinite alérgica e o desenvolvimento de sinal de Babinsky (p=0,039) e bexiga hiperativa (p=0,007). Conclusões: Apesar de não haver diferença estatística entre a presença de atopia e o desenvolvimento de manifestações neurológicas ou de formas graves da infecção pelo HTLV-1, foi observado que, não só coexistem respostas Th1 e Th2 exacerbadas nos indivíduos infectados pelo HTLV-1, mas também, a doença alérgica pode interferir no curso clínico da infecção pelo HTLV-1. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T18:27:51Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Tiago de Morais Alves da Cunha.pdf: 2523166 bytes, checksum: 303dec88545fbebed3a6e8bae48043d8 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso(pbarroso@ufba.br) on 2013-09-18T17:44:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Tiago de Morais Alves da Cunha.pdf: 2523166 bytes, checksum: 303dec88545fbebed3a6e8bae48043d8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-18T17:44:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Tiago de Morais Alves da Cunha.pdf: 2523166 bytes, checksum: 303dec88545fbebed3a6e8bae48043d8 (MD5) / Introdução. Alguns vírus têm sido implicados na patogênese da doença periodontal, potencializando o efeito da reação pró-inflamatória e determinando a gravidade da doença periodontal. Objetivos. Avaliar a influência da infecção pelo HTLV-I na gravidade da periodontite crônica e determinar a relação entre produção de citocinas e carga pró-viral e a gravidade da periodontite crônica associada ao HTLV-1 Material e Métodos. Participaram do estudo 71 indivíduos infectados pelo HTLV-I com doença periodontal e 72 pacientes com doença periodontal não infectados pelo HTLV-1. Foram comparadas as frequências dos níveis de gravidade da periodontite crônica nos diferentes grupos. A carga pró-viral e a produção espontânea de TNF-α, IFN-, IL-5 e IL-10 em culturas não estimuladas de células mononucleares de sangue periférico (CMSP) foram comparadas na periodontite leve, moderada e grave de indivíduos infectados pelo HTLV-1. Resultados. Não houve diferença estatística na frequência da periodontite leve, moderada e grave nos pacientes infectados pelo HTLV-1 com ou sem HAM/TSP (P=0,916). Em comparação ao grupo controle (19,4%), a frequência da forma grave da doença periodontal foi maior nos indivíduos infectados pelo HTLV-1 sendo encontrada em 46,8% e 41,7% respectivamente no grupo de indivíduos infectados pelo HTLV-1 sem doença neurológica e nos pacientes com HAM/TSP (P=0,004). A carga pró-viral nos indivíduos infectados não apresentou diferença e foi de 77.731 cópias/106 células (IQ 10.449 – 198.314 cópias/106 células) na periodontite grave, 182.701 cópias/106 células (IQ 79.059 – 279.369 cópias/106 células) na periodontite moderada e 144.457 cópias/106cels (IQ 40.512 – 201.714 cópias/106 células) na periodontite leve (P> 0,05). A produção espontânea de TNF-α, IFN- e IL-5 por CMSP de indivíduos infectados pelo HTLV-1 não revelou diferença estatística entre as formas leve, moderada e grave da periodontite crônica. Nos infectados pelo HTLV-1 observou-se uma tendência para diminuição da produção de IL-10 nos indivíduos com periodontite grave (P=0,05). Conclusões. A infecção pelo HTLV-1 parece influenciar na gravidade da periodontite crônica. No entanto, a produção espontânea de citocinas e a carga pró-viral não apresentou relação com o aumento da gravidade da periodontite crônica associada ao HTLV-1. / Salvador

MOTA, A. G. M. Avaliação dos níveis de interleucina-8 e ativação do fator de transcrição nuclear NF–KB em pacientes portadores de síndromes mielodisplásicas. 2016. 80 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-09-20T16:02:06Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_agmmota.pdf: 2291506 bytes, checksum: 85df5283bc0894a9480182650b0198db (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-09-20T16:02:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_agmmota.pdf: 2291506 bytes, checksum: 85df5283bc0894a9480182650b0198db (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-20T16:02:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_agmmota.pdf: 2291506 bytes, checksum: 85df5283bc0894a9480182650b0198db (MD5) Previous issue date: 2016-08-30 / The pathogenesis of myelodysplastic syndromes (MDS) is complex and multifactorial and depends on the interaction between hematopoietic cells and their microenvironment. The definite pathogenetic mechanisms are still not fully understood. Objectives: (a) To evaluate CXC chemokine ligand 8 (CXCL8 or IL-8) plasma levels and nuclear transcription factor kappa B activation (NF-kB) in patients with MDS and the possible associations with clinicopathologic variables. (b) To test possible correlation between IL-8 and NF-kB. Patients and methods: A total of 25 adults de novo MDS patients (4 RARS, 16 RCDM, 1 RAEB-I, 4 RAEB-II) were analyzed according to WHO classification and IPSS-R. Sex and age-matched healthy elderly volunteers were included as controls. IL-8 analysis was performed by Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay kit BD OptEIA and DNA binding activity of NF-kB p65 was measured using TransAM NF-kB p65 kits®. Results: MDS patients showed higher level of IL-8 when compared to controls(p=0,0068). Patients aged 75 and above also showed significant higher levels (p=0,0357). No significant associations were found between level of IL-8 and the variables analyzed. NF-kB activity was significantly elevated in MDS patients when compared to controls (p<0,0001) and higher in patients older than 75 years(p=0,0475). NF-kB activity was significantly associated with higher serum ferritin (p=0,042) and higher percentage of blasts (p=0,0282). The study of correlation between IL8 and NF-kB showed a significant positive correlation (r=0.480; p=0.015). Discussion and conclusions: Many unraveled specific pathways involved in the complex pathophysiology of MDS have been recently described, including aberrations in cytokines and their signaling pathways. In this study elevated levels of IL-8 and NF-kB were demonstrated and an elevated NF-kB activity was significantly associated with higher serum ferritin and with blast excess, two markers of bad prognosis. A significant positive correlation between IL-8 and NF-kB was detected, corroborating the emerging concept of the important role of the niche and deregulated inflammatory signaling in MDS phenotype. The best comprehension of these mechanisms favors defining new targets for therapy. / A patogênese da síndrome mielodisplásica (SMD) é complexa e multifatorial e depende da interação entre células hematopoéticas e seu microambiente. Os mecanismos patogênicos envolvidos ainda não são totalmente compreendidos. Objetivos: (a) Avaliar níveis plasmáticos de interleucina-8 (CXCL8 ou IL-8) e a ativação do Fator Nuclear de Transcrição kappa B (NF-kB) em pacientes com SMD e as possíveis associações com variáveis clínico-patológicas. (b) Analisar possível correlação entre a IL-8 e NF-kB. Pacientes e métodos: Um total de 25 pacientes adultos portadores de SMD de novo (4 ARSA, 16 CRDM, 1 AREB-I, 4 AREB-II) foram analisados de acordo com a classificação da OMS e IPSS-R. Voluntários idosos saudáveis pareados por sexo e idade foram incluídos como controles. A análise da IL-8 foi realizada por reação imunoenzimática de acordo com o kit BD OptEIA e a ativação do NF-kB foi medida por quimioluminescência utilizando kit TransAM NF-kB p65. Resultados: Os pacientes com SMD apresentaram maior nível de IL-8 quando comparados aos controles (p=0,0068) e, dentre os pacientes, aqueles com 75 anos ou mais apresentaram níveis significativamente maiores (p=0,0357). Não foram encontradas associações significativas entre o nível de IL-8 e as variáveis analisadas. Nos pacientes com SMD, a ativação do NF-kB foi significativamente maior quando comparada aos controles (p<0,0001) e maior em pacientes com 75 anos ou mais (p=0,0475). Foi encontrada associação significativa entre a atividade de NF-kB e níveis elevados de ferritina sérica (p=0,042) e maior percentual de blastos (p=0,0282). O estudo da correlação entre IL8 e NF-kB mostrou uma correlação moderada, positiva e significativa (r = 0,480; p = 0,015). Discussão e conclusões: Estudos recentes sobre a fisiopatologia complexa da SMD incluem a desregulação de citocinas e suas vias de sinalização. Neste estudo, níveis significantemente elevados de IL-8 e NF-kB foram demonstrados e uma associação de maior ativação de NF-kB foi detectada em pacientes com sobrecarga de ferro e excesso de blastos, dois marcadores de pior prognóstico na doença. Uma correlação positiva entre IL-8 e NF-kB foi observada, corroborando o conceito emergente do papel relevante do microambiente e da sinalização inflamatória aberrante na patogênese da doença. A melhor compreensão desses mecanismos favorece a identificação de novos alvos terapêuticos.

PINTO, A. C. M. D. Efeito anti-inflamatório e imunomodulador de componentes de ascaris suum em artrite experimental, 2017.118 f.Tese (Doutorado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017 / Submitted by Ivone Sousa (ppgcm.ufc@gmail.com) on 2017-07-21T13:27:56Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_acmdpinto.pdf: 10927136 bytes, checksum: 4648aa6dab4dc5fb388eac8229d92bb9 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-07-21T15:51:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_acmdpinto.pdf: 10927136 bytes, checksum: 4648aa6dab4dc5fb388eac8229d92bb9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-21T15:51:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_acmdpinto.pdf: 10927136 bytes, checksum: 4648aa6dab4dc5fb388eac8229d92bb9 (MD5) Previous issue date: 2017-07-10 / Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic autoimmune inflammatory disease with multifactorial etiopathogenesis, involving genetic, immunological and environmental mechanisms, whose diagnosis and delayed treatment have a negative influence on the prevalence and severity of the disease. Therefore, patients residing in low-income countries should show increased morbidity and / or mortality from these diseases. Interestingly, the evolution seems to be similar, if not less severe, to that found in populations with better socioeconomic indexes. The hygienic hypothesis suggests an inverse relationship between the global distribution of autoimmune diseases and parasitic infections, where helminths tend to stimulate the development of Th2 responses and suppress Th-1 and Th-17 responses. The aim of this study was to isolate components in Ascaris suum extract and characterize its anti-inflammatory mechanism in experimental arthritis models. Ascaris suum crude extract was separated into fractions > 30 and <30 kDa. Four smaller fractions (1-4) were obtained, in the fraction <30 kDa, by native electrophoresis. In fraction 1, the ABA-1 protein was identified by mass spectrometry and after protein digestion with trypsin, seven peptides were isolated (Aba-AG). The genomic sequence of the Aba-B and Aba-F peptides was inserted into a commercial plasmid (VR2 -001-TOPO ™). Plasmids were cloned and expanded in E. coli and extraction of plasmid DNA was performed by commercial kit (Qiagen ™). Male Swiss mice received crude extract of A. suum (1mg), > 30kDa, <30kDa (50ng) or fractions 1, 2, 3 and 4 (1μL), diluted in sterile saline (200 μL), p.o., 30min before of the injection of Zy (0.1mg) i.a. Hypernociception was evaluated by the electronic von Frey and the cellular influx was evaluated in the joint fluid 6h or seven days after zymosan i.a. Swiss and Balb/c male mice, submitted to ZyA and AIA, respectively, received recombinant plasmids of Aba-B or Aba-F (50μg/30μL) at the back of each hind leg. The cell influx was evaluated 6h or seven days (ZyA) and 7h or 14 days (AIA) after the i.a stimulus. Cytokines were evaluated in the synovial fluid. Synovitis and joint damage were evaluated by H&E and safranin O, respectively, and mast cell by toluidine blue. Levels of cytokines (CXCL-1, IL-1β, IFN-γ, IL- 5, IL-6 and IL-10) were assessed by ELISA and the expression of iNOS, CD11b, F4/80 and CD206 by immunohistochemistry. The administration of fractions <30 kDa, 1 and 4 reduced hypernociception and acute and chronic cellular influx in the ZyA model. Transfection with both plasmids, Aba-B or F, significantly reduced the influx of cells in both the zymosan and acute and chronic mBSA arthritis models. Reduction of synovitis, mast cell numbers, joint damage and iNOS expression were observed. Levels of CXCL1, IFN-γ, IL-1β and IL-6 were reduced. However, IL-10 levels did not increase. Surprisingly, IL-5 levels were significantly reduced after plasmid injection. Plasmids increased the expression of M2 macrophages in the synovium. A qPCR analysis showed the expression of peptides in the thigh muscles of mice that received the plasmids. This is the first demonstration that peptide sequences derived from A. suum promote anti-inflammatory activity in arthritis models, and that it is associated with reduced release of inflammatory cytokines. Peptides promoted a change in the differentiation of macrophages in the synovial membrane at the same time, decreasing the release of IL-5. Despite the complex modulating mechanisms of helminths of inflammation, the data still support a protective effect of helminth products in chronic arthritis. / A artrite reumatoide (AR) é uma doença inflamatória autoimune crônica com etiopatogenia multifatorial, envolvendo mecanismos genéticos, imunológicos e ambientais, cujo diagnóstico e tratamento tardio influenciam negativamente na prevalência e gravidade da doença. Portanto, pacientes que residem em países com baixa renda deveriam apresentar um aumento da morbidade e / ou mortalidade por essas doenças. Curiosamente, a evolução parece ser semelhante, se não menos grave, à encontrada em populações com melhores índices socioeconômicos. A hipótese higiênica sugere relação inversa entre a distribuição global de doenças autoimunes e infecções parasitárias, onde helmintos tendem a estimular o desenvolvimento de respostas Th2, além de suprimir respostas Th-1 e Th-17. O objetivo deste estudo foi isolar componentes no extrato de Ascaris suum e caracterizar seu mecanismo antiinflamatório em modelos de artrite experimental. O extrato bruto de Ascaris suum foi separado em frações > 30 e <30 kDa. Foram obtidas quatro frações menores (1-4), na fração <30 kDa, por eletroforese nativa. Na fração 1, foi identificada a proteína ABA-1, por espectrometria de massa, e após digestão proteica com tripsina, sete peptídeos foram isolados (Aba-A – G). A sequência genômica dos peptídeos de Aba-B e Aba-F foi inserida em um plasmídeo comercial (VR2-001-TOPO ™). Os plasmídeos foram clonados e expandidos em E. coli e a extração do DNA plasmidial foi realizada por kit comercial (Qiagen™). Camundongos Swiss machos receberam extrato bruto de A. suum (1mg), >30 kDa , <30kDa (50ng) ou frações 1, 2, 3 e 4 (1μL), diluídos em salina estéril (200 μL), v.o., 30 min antes da injeção de Zy (0,1mg) i.a. Hipernocicepção foi avaliada pelo von Frey eletrônico e o influxo celular foi avaliado no fluido articular 6h ou sete dias após zymosan i.a. Camundongos Swiss e Balb/c machos, submetidos a artrite induzida por zymosan AZy e induzida por antígeno (AIA), respectivamente, receberam plasmídeos recombinantes de Aba-B ou Aba-F (50μg/30μL) na parte posterior de cada coxa traseira. O influxo celular foi avaliado 6h ou sete dias (AZy) e 7h ou 14 dias (AIA) após o estímulo i.a. Citocinas foram avaliadas no líquido sinovial. Sinovite e dano articular foram avaliados por H&E e safranina O, respectivamente, e número de mastócitos por azul de toluidina. Níveis de citocinas (CXCL-1, IL-1β, IFN-γ, IL-5, IL-6 e IL-10) foram avaliadaos por ELISA e a expressão de iNOS, CD11b, F4/80 e CD206 por imunohistoquímica. A administração das frações <30 kDa, 1 e 4 reduziu a hipernocicepção e influxo celular agudo e crônico no modelo de AZy. A transfecção com ambos os plasmídeos, Aba-B ou F, reduziu significativamente o influxo de células em ambos os modelos de artrite por zymosan e mBSA agudo e crônico. Foram observados a redução da sinovite, número de mastócitos, do dano articular e expressão de iNOS. Níveis de CXCL1, IFN-γ, IL-1β e IL-6 foram reduzidos. No entanto, os níveis de IL-10 não aumentaram. Surpreendentemente, os níveis de IL-5 foram significativamente reduzidos após a injeção de plasmídeos. Plasmídeos aumentaram a expressão de macrófagos M2 na sinóvia. Uma análise quantitativa por PCR mostrou a expressão de peptídeos Aba-B e Aba-F nos músculos da coxa de camundongos que receberam os plasmídeos. Esta é a primeira demonstração de que sequências peptídicas derivadas de A. suum promovem a atividade anti-inflamatória em modelos de artrite, e que está associada à redução da liberação de citocinas inflamatórias. Esses peptídeos promoveram mudança na diferenciação de macrófagos na membrana sinovial ao mesmo tempo, diminuindo a liberação de IL-5. Apesar dos complexos mecanismos de modulação de helmintos de inflamação, os dados suportam ainda um efeito protetor dos produtos de helmintos em modelos de artrite crônica.

Orientador: Sueli Aparecida Calvi / Resumo: A doença de Chagas (DC), causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi), é uma doença negligenciada e considerada um grave problema de saúde pública. A sua evolução no individuo infectado ocorre em duas fases distintas: a fase aguda que dura de 2 a 4 meses, caracterizada pela alta parasitemia, mas ausência de sinais e sintomas específicos, o que dificulta sua detecção, e a fase crônica na qual a maioria dos indivíduos é diagnosticada. Nessa fase, uma boa parte dos indivíduos apresenta a forma indeterminada ou assintomática da doença. No entanto, cerca de 30 a 40% dos indivíduos infectados desenvolvem a DC sintomática, que pode se apresentar na forma de doença cardíaca ou doença digestiva. Um dos desafios mais importantes no estudo da DC é a determinação dos mecanismos relacionados à resposta imune do hospedeiro que levam a essas diferentes apresentações clinicas. A resposta imune celular via liberação das citocinas pró-inflamatórias como IFN-y, TNF-α e IL-17 é considerada determinante na resistência do hospedeiro. No entanto, um fino controle da liberação dessas citocinas deve ocorrer para que a resposta não se intensifique ou não se perpetue e resulte em lesão tecidual, o que ocorre através da ativação de citocinas anti-inflamatórias como a IL-10 e o TGF-y. Esse controle de resposta seria responsável pelo não aparecimento de sintomas nos indivíduos com doença de Chagas assintomática. Os receptores de reconhecimento padrão (PRRs), particularmente os Toll-Like Receptors... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chagas disease (CD), caused by the protozoan Trypanosoma cruzi (T. cruzi), is a neglected disease and considered a serious problem of public health. Its evolution in a infected host occurs in two distinct stages: the acute stage which lasts 2 to 4 months and is characterized by high parasitemia, but no detection of specific signs and symptoms, which difficult its detection, and the chronic stage in which most individuals are diagnosed. At this second stage, most individuals present the indeterminate or asymptomatic chronic disease. However, about 30 to 40% of them become symptomatic and present the cardiac or digestive disease. One of the most important challenges in the CD study is to determine the mechanisms related to the host immune response that lead to these different clinical manifestations. The cellular immune response characterized by the release of pró-inflammatory cytokines such as IFN-y, TNF-α and IL-17 is considered crucial in host resistance. However, it is suggested that a fine control of this response must occur in order to avoid a perpetuated inflammatory process which results in tissue injury. This control was found to be responsible by the absence of clinical symptoms in individuals with the indeterminate chronic form and depends on activation of anti-inflammatory cytokines such as IL-10 and TGF-β. The pattern recognition receptors (PRRs), particularly the Toll-Like Receptors (TLRs) are extremely important in defining the cytokine profile that will be relea... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Os efeitos adversos da obesidade sobre a gestacao, tal como o desenvolvimento do Diabetes Mellitus Gestacional (DMG) tem sido relacionados a alteracoes da resposta imunologica materna. Objetivo: Avaliar o perfil imunologico de gestantes com sobrepeso/obesas, na tentativa de relacionar eventuais alteracoes deste padrao naquelas que desenvolveram DMG. Metodos: Este estudo observacional analitico transversal incluiu 72 gestantes eutroficas (46 saudaveis, 26 DMG) e 115 gestantes com sobrepeso (50 saudaveis, 65 DG). As subpopulacoes celulares foram avaliadas por citometria de fluxo, os niveis sericos e em sobrenadante de cultura de linfocitos das citocinas (TNF-A, IL-6, IL-10) por ELISA e os polimorfismos geneticos pela tecnica de PCR-RFLP. Resultados: As gestantes com DMG apresentaram maior porcentagem de celulas NK ativadas do que as saudaveis. Estas diferencas foram significantes quando comparamos as gestantes eutroficas com DMG com as saudaveis eutroficas e com sobrepeso (p=0,002 e p=0,008 respectivamente) e, tambem entre os grupos sobrepeso com DMG e eutroficas saudaveis (p= 0,02). A porcentagem de celulas TCD3+CD8+foi maior no grupo de gestantes eutroficas com DMG do que nas sobrepeso saudaveis (p=0,04). Detectamos niveis mais baixos s de IL-10 em sobrenadante de cultura com e sem estimulo (LPS) quando comparadas gestantes com sobrepeso e DMG com as sobrepeso saudaveis (p=0,03 e p=0,02 respectivamente). Nao detectamos outras diferencas significantes entre os grupos, nem em relacao aos outros parametros analisados. Conclusao: Estes resultados sugerem que aumento no numero de celulas NK ativadas e TCD8+, assim como menor producao de IL-10 estejam associados com DMG. Palavras-chave: subpopulacoes celulares, celulas NK, sobrepeso, Diabetes Mellitus Gestacional, citocinas / FAPESP: 2010/52547-5 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T18:00:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326949.pdf: 1612069 bytes, checksum: 73450c9c42f0b81ee0a19782f7e86ae3 (MD5) Previous issue date: 2014 / As Células-tronco progenitoras hematopoiéticas (CTPHs) do sangue de cordão umbilical e placentário (SCUP) tem sido utilizadas no tratamento de diversas doenças hematológicas neoplásicas ou não. O emprego de CTPHs do SCUP apresenta como principais vantagens a facilidade de obtenção, a ausência de riscos para a mãe e o(a) doador(a), disponibilidade de uso imediato pelo armazenamento de unidades testadas e tipadas para antígeno leucocitário humano (HLA), menor frequência e gravidade da doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) e a não exigência de total paridade na tipagem HLA. Como principais limitações estão o número reduzido de CTPHs que o SCUP pode prover para um transplante em função do volume limitado e a demora na pega do enxerto. Por sua vez, o sucesso do transplante de CTPHs é dependente da dose celular transplantada por kg de peso corporal do receptor, o que praticamente restringe a utilização do SCUP a pessoas com peso corporal até 50 kg. Para suplantar essa limitação têm sido utilizadas estratégias que envolvem o estabelecimento de critérios para a seleção e armazenamento das unidades de SCUP, transplante de mais de uma unidade de SCUP e a expansão ex vivo das CTPHs do SCUP. A cultura das CTPHs sem células do microambiente hematopoiético priva as CTPHs das interações celulares e moleculares que ocorrem no mesmo. O presente trabalho tem por objetivo avaliar a expansão ex vivo de CTPHs do SCUP, utilizando a co-cultura com células-tronco mesenquimais (CTMs) obtidas da membrana coriônica (MC) e do vilo de placentas humanas para suporte da hematopoiese em ambiente 2D e 3D. Para isso as CTMs foram caracterizadas morfologicamente e imunofenotipicamente (CD73, CD90, CD105, CD34 e CD45) e analisadas quanto à expressão gênica quantitativa das citocinas de interesse hematopoiético SCF, Flt3-L, TPO, IL6, IL16 e SDF1, nas passagens P1, P5 e P10. No SCUP foi realizado hemograma, contagem e separação de células CD34+ e subpopulações e avaliado o potencial clonogênico. Foram investigadas correlações entre os fatores materno-fetais e parâmetros do SCUP, taxas de expansão ex vivo e entre os próprios parâmetros do SCUP. Para expansão ex vivo foram realizadas co-culturas com CTMs da MC em P1 e do vilo em P5, em ambiente 2D e co-culturas com CTMs do vilo em P5, em ambiente 3D constituído de uma matriz de colágeno I e 6-sulfato de condroitina. Os resultados demonstraram que as CTMs da MC e do vilo apresentam características morfológicas e imunofenotípicas típicas de CTMs e expressam as citocinas de interesse hematopoiético, nas três passagens analisadas. As CTMs da MC em P1 e do vilo em P5 apresentaram o melhor perfil de expressão de citocinas e foram selecionadas para os experimentos de expansão ex vivo. A análise das correlações entre os diferentes fatores e parâmetros avaliados sugere a seleção de unidades de SCUP oriundas de doações com idade gestacional acima de 39,5 semanas, contagens de células nucleadas totais (CNT) acima de 13,05 x 106 células por mL, percentagem de eritroblastos (NRBC) maior de 2,875% e com contagem de células CD34+ superiores a 23,73 x 103 células por mL, para obtenção de amostras de melhor conteúdo hematopoiético e mais apropriadas para a expansão ex vivo. O suporte das CTMs foi crucial para a expansão ex vivo das CTPHs. As CTMs do vilo em P5 promoveram melhores taxas de expansão das CTPHs que as da MC em P1, em ambiente 2D e foram selecionadas para a expansão em ambiente 3D. A expansão das CTPHs com CTMs do vilo em ambiente 2D demonstrou melhores taxas de expansão que no ambiente 3D. Com base nos resultados conclui-se que a melhor condição para expansão ex vivo de CTPHs do SCUP, compreende a co-cultura de CTPHs oriundas de doações com idade gestacional acima de 39,5 semanas, contagens de CNT acima de 13,05 x 106 por mL, percentagem de NRBC igual ou maior de 2,875% e com contagem de células CD34+ superiores a 23,73 x 103 células por mL, em ambiente 2D e com suporte de CTMs do vilo em P5.<br> / Abstract : Umbilical cord blood (UCB) has been used as an alternative source of hematopoietic stem progenitor cells (HSPC) in HSPC transplantation to treat many hematological diseases. As a HSPC source, UCB has many practical advantages such as: easy procurement with no risks for donors and mothers, immediate availability if stored fully tested and human leucocyte antigen (HLA) typed, and a toleration of some degree of HLA mismatch. On the other hand, its major limitation is the low cell dose delivered. It is known that cell dose is the most important factor for engraftment. As a result, delayed neutrophil and platelet recovery are linked to UCB transplantation. Some strategies to overcome its main limitation include establishing criteria for the selection and storage units of UCB, transplanting more than one unit of UCB, and ex vivo expansion of CBHSPC (cord blood-derived hematopoietic stem progenitor cells). CBHSPC ex vivo expansion in 2D or 3D culture systems without cells from hematopoietic microenvironment deprived them of cell-to-cell contact and molecular interactions during hematopoiesis in vivo. This study is focused on ex vivo expansion of CBHSPC in a culture system with stromal support provided by MSC (mesenchymal stem cells) from human placental chorionic membrane (cMSC) and villi (vMSC). This approach includes cultures in 2D and 3D systems. The 3D cultures were performed on scaffold of cross-linked bovine collagen type I and chondroitin-6-sulfate. MSC morphology and phenotype (surface antigens CD73, CD90, CD105, CD34 and CD45) from both tissues were analyzed at three passages (P1, P5 and P10). In addition, real time PCR was performed to quantify gene expression of hematopoietic cytokines (SCF, Flt3-L, TPO, IL6, IL16 and SDF1) by MSC. Procedures in cord blood included CBC (complete blood count), CD34+ cells count and its subpopulations, CD34+ cell isolation, and clonogenic potential evaluation. Associations of maternal and fetal factors with UCB parameters and its clonogenic potential data as well as ex vivo expansion rates were addressed. cMSC from P1(cMSCP1) and vMSC from P5 (vMSCP5) were used in co-cultures for ex vivo expansion of CBHSPC. Results - cMSC and vMSC from all passages showed morphological and phenotypic features typically of MSC as well as expressed all hematopoietic cytokines evaluated in this study; cMSCP1 and vMSCP5 showed the best cytokines expression profile and were selected for further experiments. Analysis regarding associations among all results suggest that UCB from gestational age greater than 39,5 weeks, with nucleated cells count above 13,05 x 106 cells per mL, nucleated ed blood cells (NRBC) percentage greater than 2,875% and CD34+ cell counts greater than 23,73 x 103 cells per mL are the best UCB samples for ex vivo expansion and hematopoietic content. MSC presence was crucial for CBHSPC ex vivo expansion in both 2D and 3D cultures; vMSCP5 promoted greater expansion rates than cMSCP1 in 2D co-cultures. vMSCP5 was selected for 3D expansion cultures. When comparing expansion rates between 2D and 3D co-cultures (both with vMSCP5), 2D co-cultures promoted greater expansion rates than 3D cocultures.

Made available in DSpace on 2014-08-11T12:37:22Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) mayara_chambela_ipec_mest_2012.pdf: 742104 bytes, checksum: 539c5f43343ecbe7c2210f60bd4c0bba (MD5) mayara_chambela_ipec_mest_2012.pdf.txt: 105697 bytes, checksum: 68a4cd335d5a44f983249fa1fd40abb1 (MD5) mayara_chambela_ipec_mest_2012.pdf.jpg: 1466 bytes, checksum: 0ef650b996154e2ccb253b8e5bdde533 (MD5) Previous issue date: 2014-05-06 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A resposta imune é muito importante para a proteção contra doenças. Estudos têm avaliado a resposta imunológica de pacientes com doença de Chagas na tentativa de explicar a fisiopatologia da doença. O objetivo deste trabalho foi avaliar as concentrações das citocinas séricas IL-4, IL- 10, IL-12, TNF- e IFN- em pacientes nas diferentes formas clínicas da doença de Chagas. Foi realizado um estudo caso-controle de 115 indivíduos. Os indivíduos infectados foram divididos em estágios conforme o consenso brasileiro de doença de Chagas: indeterminados ou sem cardiopatia aparente (eletrocardiograma e ecocardiograma normais); cardíacos A (eletrocardiograma alterado e ecocardiograma normal); cardíacos C (eletrocardiograma e ecocardiograma alterados com ICC compensável) e cardíacos D (eletrocardiograma e ecocardiograma alterados com ICC refratária). Também foram incluídos indivíduos não infectados pelo T. cruzi. Foram incluídos 30 pacientes indeterminados; 31 cardíacos A; 14 cardíacos C, 11 cardíacos D e 29 indivíduos não infectados Entre as citocinas pró-inflamatórias, o IFN- apresentou maior concentração sérica em relação às citocinas IL-12 e TNF- . Os cardíacos no estágio A apresentaram maiores concentrações de TNF- , entretanto houve uma queda significativa nas concentrações desta citocina à medida que observamos os estágios mais avançados da CCC. Tanto os indeterminados quanto os cardíacos apresentaram altos níveis de TFN- e IFN- e baixos níveis de IL-4 e IL-10, demonstrando um perfil predominante de Th1, com uma resposta imune não balanceada. Este estudo demonstrou uma proporcionalidade direta nas concentrações das citocinas pró-inflamatórias e antiinflamatórias em relação à FEVE, em todos os grupos de pacientes estudados, sugerindo que essa correlação poderia ser utilizada como um possível marcador de evolução para a CCC / The immune response is very important for protectio n against diseases. Studies have evaluated the immune response of patients with Chagas’ diseas e in an attempt to explain the pathophysiology of the disease. The aim of this stu dy was to evaluate serum concentrations of cytokines IL-4, IL-10, IL-12, TNF- α and IFN- in patients in different clinical forms of Chagas’ disease. We conducted a case-control study of 115 i ndividuals. Infected individuals were divided into 4 stages as the Brazilian consensus of Chagas disease: indeterminate patients or without apparent heart disease (normal electrocardiogram an d echocardiogram) cardiac patients on the stage A (electrocardiogram changes and normal echoc ardiogram), cardiac patients on the stage C (electrocardiogram and echocardiogram altered with compensable CHF) and cardiac patients on the stage D (electrocardiogram and echocardiogram c hanged with refractory CHF). Also were included uninfected individuals with T. cruzi . We included 30 indeterminate patients, 31 cardiac patients on the stage A, 14 cardiac patients on the stage C, 11 cardiac patients on the stage D and 29 uninfected individuals. Among the pro-inflammato ry cytokines, IFN- showed higher serum levels in relation to IL-12 and TNF- α . The cardiac patients on the stage A had higher concentrations of TNF- α , however, there was a significant decrease in the concentrations of this cytokine in the same time that we observed the late r stages of the CCC. Both indeterminate and cardiac patients showed high levels of TFN- α and IFN- and low levels of IL-4 and IL-10, demonstrating a dominant Th1 profile with an imbala nced immune response. This study demonstrated a direct proportionality in concentrat ions of pro-inflammatory and anti- inflammatory cytokines with respect to the LVEF in all groups of patients, suggesting that this correlation could be used as a marker of progressio n to CCC.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:34:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 140.pdf: 1388646 bytes, checksum: 577741ef3784956408ba81f9fa41b743 (MD5) Previous issue date: 2006 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Em nosso trabalho, investigamos a resposta inflamatória produzida em camundongos por duas vacinas DTP de diferentes produtores (DTP-1 e DTP-2) em um estudo comparativo com as vacinas DT, DTP Acelular e uma vacina de Referência. Utilizando-se da metodologia da medida do edema de pata em camundongos que constitui-se de um modelo que permite a investigação de reações locais e do estudo das população de leucócitos, que constitui-se de um modelo de investigação da reação sistêmica, procuramos investigar a resposta inflamatória aguda induzida pela vacina DTP. Esta medida do edema foi tomada através de um pletismômetro e a contagem de células foi feita em câmaras de Neubauer. Paralelamente, foram também realizados: um estudo histopatológico, onde analisou-se o envolvimento dos tecidos epitelial e muscular; a dosagem do conteúdo de citocinas próinflamatórias (IL-1β, IL-6 e TNF-α) pelo método de ELISA; a quantificação do conteúdo de LPS através do LAL para todas as vacinas e a quantificação do conteúdo da PT pelo método do efeito clustering em células CHO para as vacinas que contêm o componente pertussis. Observamos que o edema de pata foi mais intenso nas vacinas onde o conteúdo de PT foi maior como na DTP-2 e Referência, não descartando um possível envolvimento do LPS. A vacina de Referência destacou-se pela alta concentração de LPS. Os leucócitos sofreram alterações após o tratamento com as vacinas DTP-1, DTP-2 e Referência, com promoção de acentuada neutrofilia, sendo também observado, em alguns casos discreto aumento dos linfócitos e dos monócitos. A análise histopatológica revelou a formação de intenso exsudato purulento e acúmulo de polimorfonucleares para todas as vacinas. Com relacão a produção de citocinas pró-inflamatórias, foi evidenciada somente a citocina IL-6, citocina característica de processos inflamatórios causados por bactérias. A presença desta interleucina foi detectada somente para as vacinas DTP-1, DTP-2 e Referência. / DTP vaccine has been used for more than 70 years and still represents a majorprophylactic measure in the control of pertussis, tetanus and diphtheria infectionsdespite being associated with severe adverse reactions such as neurologicalderangements, seizures and shock. Sparse information can be obtained regarding thecorrespondence between toxicity test in animal models and the occurrence of adversereactions upon vaccination of humans. The mechanisms implicated in the adversereactions associated with DPT vaccine is still not fully understood, but several evidencepoint to LPS and active residues of pertussis toxin (PT) as the main culprits for local andsystemic complications. In this work we investigated the inflammatory response inducedby two different DTP vaccines (originated from two different producers – DPT-1 andDPT-2) in mice and compared this with DT vaccine, acellular DPT vaccine, and aReference vaccine. We applied the paw edema model using a pletismograph, followedby systemic analysis of the leukogram, analysis of the blood levels of pro-inflammatorycytokines (IL-1 ,IL-6eTNF- ) and histopathological analysis of the paw tissue. LPSand PT contents were determined by the LAL and CHO cells clustering test,respectively. We observed that paw edema was more intense in those vaccines with ahigher content of PT, although the contribution of LPS to the reaction could not be ruledout. A marked neutrophilia and a discrete increase in lymphocyte and monocytenumbers were observed with DPT-1, DPT-2 and the Reference vaccine. Histologicalexaminations revealed an intense exsudative process with neutrophilia and pusformation in all vaccines tested. Cytokine analysis showed that IL-6 was the onlycytokine with increased levels detected after DTP-1, DPT-1 and Reference vaccinechallenge.