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Caracterização genômica e molecular do guaranazeiro (Paullinia cupana var. Sorbilis)Freitas, Danival Vieira de 20 November 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-11-20 / Não informada / Paullinia cupana is originary from Amazon and is divided in two different varieties, P.
cupana var. cupana (Venezuela and Colombia) and P. cupana var. sorbilis (Brazil),
this last one is the true guarana plant. The few studies on this plant are concentrated,
mainly, in its bothanical aspects and effects of its seed extract over some medical
experimentation. The main objective of this work was to amplify knowledgment over
those informations about the guarana plant, moreover by the means of genetic
molecular. Aiming the following propositions: (1) to determine the guarana plant (P.
cupana var sorbilis) caryotype and its genome size; (2) to characterize and validate
sequences expressing in the guaraná berries, gathering especial information on
those related with caffeine synthesis (N-methil-transferases); (3) to determine its (Nmethil-
transferases) copy number in the plant genome; (4) to determine its (N-methiltransferases)
expression patterns in different organs/tissues. The results showed an
elevated number of chromosomes (210) and DNA content (2C = 22.5 pg DNA/cell).
The caryogram analysis presented two sets of chromosomes, one tetraploid and
other hexaploid. The transcripts sequencing yield a 15,387 ESTs databank, grouped
in 2,628 contigs and 5,969 singletons. Among these are enzymes genes involved in
caffeine synthesis, the so called caffeine sintases. The analysis of these guarana
sequences (denominated GNMT) shows it is homologous to N-methyltransferases of
other species such as coffee (Cofea arábica and C. canephora), cocoa (Theobroma cacao), and green tea (Camellia sinensis). Regarding to the number of genome
copies, the guarana plant presented three times more than its native wild plants (the
guaranaranas, Paullinia sp) correlates. Fruits posses the highest level of GNMT
transcript expression when it reach 70 days of development age, increasing the rate
as berries ripening process occurs. These results are especially interesting and can
collaborate with the experimentations in progress course which are proving the
healing properties attributed to this plant and its seed powder extract. / A espécie Paullinia cupana originária da Amazônia, é dividida em duas
variedades, P. cupana var. cupana (Venezuela e Colômbia) e P. cupana var. sorbilis
(Brasil). Os poucos estudos com o guaranazeiro concentraram, principalmente, nos
seus aspectos botânicos, no seu melhoramento e em testes experimentais sobre o
efeito de seu extrato para fins terapêuticos. O objetivo principal do presente trabalho
foi ampliar o conhecimento sobre as informações básicas do ponto de vista genético
e molecular do guaranazeiro. Deste modo foi proposto: (1) determinar o cariótipo e o
tamanho do genoma da planta (P. cupana var sorbilis); (2) caracterizar e validar
seqüências expressas em seus frutos, e em especial as das enzimas relacionadas
com a síntese de cafeína (N-metiltransferases); (3) determinar o seu número de
cópias; (4) determinar o padrão de expressão em diferentes órgãos/tecidos. A var.
sorbilis apresentaou elevado número de cromossomos (2n = 210) e conteúdo de
DNA (2C = 22,5 pg DNA/células). A análise do cariograma mostrou que os
cromossomos estão agrupados em dois conjuntos, um tetraplóide e outro
hexaplóide. O seqüenciamento de transcritos gerou um banco com 15.387 ESTs,
distribuídas em 2.628 contigs e 5.969 singletons. Entre estas estão as enzimas que
participam das vias de síntese da cafeína sintase, sendo o melhor hit com as
sequências de N-metiltransferases, aqui denominadas GNMT. As análises indicam que a sequência GNMT é homóloga as N-metiltransferases da via biossintética da
cafeína de outras espécies tais como café (Coffea arabica and C. canephora), cacau
(Theobroma cação), e chá verde (Camellia sinensis). O número de cópias gênicas
da N-metiltransferase da GNMT presentes no genoma do guaranazeiro foi cerca de
três vezes mais cópias que os espécimes selvagens (guaranarana, Paullinia sp). O
fruto do guaranazeiro com 70 dias de desenvolvimento tem o maior nível de
transcritos da GNMT, sendo que o número de transcritos aumentou gradualmente
com o processo de maturação do fruto do guaranazeiro. Os resultados aqui
discutidos são especialmente interessantes e podem colaborar com a
experimentação científica que estão, aos poucos, comprovando as propriedades
medicinais atribuídas ao guaraná e seu extrato obtido do pó de suas sementes.
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Hibridação Genômica Comparativa em Endometriose / Comparative Genomic Hybridization in EndometriosisLuciana Caricati Veiga Castelli 31 March 2008 (has links)
A endometriose é uma doença ginecológica benigna comum, mas agressiva, caracterizada pela presença de tecido endometrial ectópico. A teoria mais aceita para explicá-la é a teoria de Sampson, na qual o tecido endometrial descamado durante a menstruação sofre refluxo através das tubas uterinas, adere e se prolifera em sítios ectópicos da cavidade peritoneal. Por outro lado, apenas o refluxo tubário não é capaz de estabelecer a doença e vários estudos sugerem uma etiologia multidimensional incluindo fatores hereditários, hormonais e imunológicos. Várias metodologias têm sido propostas com o objetivo de identificar genes candidatos para a endometriose. A hibridação genômica comparativa (CGH) é uma técnica que permite que o genoma inteiro seja analisado em um só experimento, sem a necessidade de cromossomos metafásicos obtidos por cultura celular. Nossa proposta foi avaliar, por CGH, amostras de endometriomas ovarianos e de tecido endometrial eutópico de dez pacientes com diagnóstico firmado de endometriose, para screening do genoma. No grupo eutópico, 6/10 amostras apresentaram alterações caracterizadas por perdas ou ganhos de regiões cromossômicas e no grupo ectópico foram encontradas alterações em 7/10 casos. A presença de perdas e ganhos de regiões cromossômicas no endométrio eutópico, histologicamente normal, de mulheres com endometriose ovariana, pode ser considerada como alteração primária ao desenvolvimento da doença. A metodologia de CGH permitiu a detecção das regiões cromossômicas 11q12.3-q13.1, 17p11.1-p12 e 17q25.3-qter como regiões críticas, direcionando investigações futuras para identificação de genes associados à endometriose. / Endometriosis is a common benign gynecological disease, very aggressive, characterized by the presence of ectopic endometrial tissue. The most accepted theory to explain it is Sampson\'s implantation theory, which says that the endometrial tissue exfoliated during menstruation undergoes reflux through the uterine tubes, adheres and proliferates in ectopic sites of the peritoneal cavity. On the other hand, only reflux is not enough to the establishment of the disease and a number of studies suggest a multidimensional etiology including hereditary, hormonal and immunological factors. Several methodologies have been proposed for the identification of candidate genes for endometriosis. The comparative genomic hybridization (CGH) is a versatile technique that allows the entire genome to be analyzed in only one experiment without the necessity of metaphasic chromosomes from the sample, excluding the cell culture. We aimed to evaluate, by CGH, ovarian endometriomas and eutopic endometrial tissue samples from 10 patients with confirmed diagnosis of endometriosis, for a genomic screening. In the eutopic group, 6/10 samples presented genomic imbalances and 7/10 cases showed alterations in the ectopic group. The presence of losses and gains of chromosomic regions in the histologically normal eutopic endometrium from women with ovarian endometriosis can be considered as a primary alteration in the development of the disease. The CGH methodology allowed the detection of chromosomic regions 11q12.3-q13.1, 17p11.1-p12 and 17q25.3-qter as critical regions, leading to future investigations for the identification of genes associated to endometriosis.
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Biotecnologias da reprodução utilizadas como ferramentas auxiliares no manejo e conservação de duas espécies de felinos selvagens: Leopardus pardalis e Leopardus tigrinus. / Reproductive biotechnology as an important tool in the management and conservation of wild cats: Leopardus pardalis and Leopardus tigrinus.Regina Celia Rodrigues da Paz 17 September 2004 (has links)
Este estudo representa a primeira avaliação ovariana, imunológica e hormonal realizada em duas espécies de felinos brasileiros ameaçados: L. pardalis (n=5) e L. tigrinus (n=4), antes e após 4 a 6 tratamentos alternados com as gonadotrofinas exógenas eCG/hCG e pFSH/pLH. Os animais foram submetidos a superovulação alternada com eCG-hCG e pFSH-pLH a cada quatro meses pelo período de dois anos, perfazendo um total de 6 intervenções. Os oócitos foram recuperados por vídeo laparoscopia, caracterizados quanto à morfologia e utilizados para determinação dos estágios do ciclo meiótico por análise citogenética e maturação pela caracterização de metáfase II. Avaliação ultra-estrutural por microscopia eletrônica de transmissão e varredura foi realizada para caracterização da morfologia dos oócitos. Antes e após cada intervenção sangue foi colhido e utilizado em análises hormonais séricas (progesterona e estradiol) por RIE e pesquisa de anticorpos para gonadotrofinas exógenas por ELISA. Comparando os tratamentos, não houve diferença significativa (p>0,05) no número total de estruturas ovarianas observadas em superovulações alternadas sucessivas, nas duas espécies estudadas. Também não houve diferença significativa em relação ao total de estruturas ovarianas encontradas em cada tratamento (5,7±1,2 eCG/hCG; 7,9±0,9 pFSH/pLH) para L. pardalis e (eCG/hCG 2,6±0,7; pFSH/pLH 2,0±0,5) para L. tigrinus. Embora L. pardalis tenham apresentado maior número de estruturas ovarianas por estimulação que L. tigrinus (p<0,05), a porcentagem de oócitos maduros em relação aos oócitos totais não diferiu, indicando que a metodologia utilizada foi eficiente. L. pardalis apresentaram maior número de oócitos totais e maduros nos tratamentos com pFSH/pLH (p<0,05), sendo que em L. tigrinus ambos tratamentos se comportaram de maneira semelhante (p>0,05). Não foi possível a caracterização dos estágios do ciclo meiótico pela avaliação da configuração cromossômica nos oócitos, sendo que nenhum oócito apresentou-se em metáfase II. Ultraestruturalmente os oócitos apresentaram características semelhantes aos observados em mamíferos de maneira geral. Dosagens hormonais séricas demonstraram um aumento de estradiol após as superovulações. Elevações de progesterona foram observadas em alguns momentos pré e pós superovulações. Embora alguns animais tenham demonstrado desenvolvimento de títulos para imunoglobulinas anti-gonadotrofinas exógenas, essa resposta imune humoral não parece interferir com a indução da atividade ovariana produzida pela superovulação, já que os animais responderam bem aos tratamentos alternados. Com estes resultados podemos concluir que essas espécies podem ser manejadas intensivamente usando tratamentos alternados com gonadotrofinas exógenas para procedimentos de reprodução assistida sem comprometer a resposta ovariana a esses hormônios. / This study represents the first assessment of ovarian, immunological and hormonal responses of two endangered Brazilian felids: L. pardalis (n=5) and L. tigrinus (n=4), treated with two exogenous gonadotropin regimens eCG/hCG and pFSH/pLH. Females were treated with four to six times alternating eCG/hCG and pFSH/pLH protocols using an interval of four months between each treatment. Ovarian follicular development and oocytes recovery were performed through laparoscopy. Recovered oocytes were submitted to the cytogenetical analysis and to the electron microscopy in order to evaluate the maturation (metaphase II) and the morphological and ultrastructural status, respectively. Blood samples were collected before each treatment and during the laparoscopy in order to measure progesterone and estradiol by RIA and to evaluate the immunological response to the exogenous gonadotropins by ELISA. Our results suggest that L. pardalis and L. tigrinus do not show a decrease (p>0.05) in ovarian response after repeated and alternate exposure to different gonadotropin treatments. In both L. pardalis and L. tigrinus, no differences were found regarding to the number of total ovarian structures (p>0.05) during successive gonadotropin treatments. When comparing the eCG/hCG and the pFSH/pLH treatments, there were no differences (p>0.05) regarding to the total number of ovarian structures in L. pardalis (5.7 ± 1.2 and 7.9 ± 0.9, respectively) or L. tigrinus (2.6 ± 0.7 and 2.0 ± 0.5, respectively). Despite the fact that the L. pardalis showed a higher number of follicles and CLs per stimulation (p<0.05) when compared to the L. tigrinus, no differences were found when analyzing the percentage of mature oocytes (p>0.05). Within species, both gonadotropin regimens were equally effective (p>0.05) to induce the follicular growth. No decreases (p>0.05) on the total number of ovarian structures and on the oocyte maturation percentages were observed between the sequential stimulations, but. L. pardalis showed a higher number of mature and total oocytes when treated with pFSH/pLH (p<0.05). L. Tigrinus didnt show any differences regarding to the number of total and mature oocytes (p>0.05) when comparing both gonadotropin regimens. No oocytes in metaphase II were observed in the cytogenetic analyses. Oocytes histological evaluation showed that morphological characteristics were the same observed in others mammals. Hormonal analyses showed increased estradiol levels after superovulations. Higher levels of progesterone were observed before and after superovulations. Although some of these cats do demonstrate the development of anti-gonadotropin immunoglobulin titers, these humoral immune responses do not appear to interfere with gonadotropininduced ovarian stimulation. In this study, animals treated repeatedly with alternating regimens of eCG/hCG and pFSH/pLH showed no decrease in total ovarian structures after four to six successive treatments. These findings are potentially valuable for the ongoing efforts to develop and apply assisted reproductive technologies to the management and conservation of endangered felid populations.
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Caracterização do espectro fenotípico de pacientes com fissuras labiopalatinas associadas a múltiplas anomalias congênitas e alterações cromossômicas estruturais / Characterization of phenotypic spectrum in patients with cleft lip and palate associated with multiple congenital anomalies and structural chromosome abnormalitiesTânia Yoshico Kamiya 23 October 2009 (has links)
Objetivos: Caracterização de síndromes em indivíduos com FL/P associadas a MAC e anomalias cromossômicas e ampliação dos espectros fenotípicos de síndromes já descritas. Local de execução: Laboratório de Citogenética Humana e Serviço de Genética Clínica, HRAC-USP, Bauru-SP. Participantes: 15 indivíduos com fissura labiopalatina associada a múltiplas anomalias congênitas e alteração cromossômica estrutural em seu cariótipo. Intervenções/Variáveis: Avaliação genética-clínica, estudo citogenético/anomalias cromossômicas estruturais. Resultados: Dos 15 indivíduos, 8 eram do gênero masculino e 7, do gênero feminino, foram detectados: translocação equilibrada em 1 indivíduo, cromossomo derivado em 5, duplicação em 2, cromossomo recombinante com duplicação parcial de um cromossomo em 1, deleção em 2 e cromossomo em anel em 4. O indivíduo 14 apresentou associação de trissomia dos cromossomos sexuais e der(22)t(11;22) extranumerário. Conclusões: Caracterizou-se 7 quadros sindrômicos de etiologia cromossômica com fissura de lábio e/ou palato em seu quadro clínico (dup 3p, dup 4q, dup 7p, del 9p, del 18q, del 21q e dup 22q) e um quadro de padrão único com provável etiologia ambiental. Ampliou-se o espectro fenotípico das síndromes de duplicação 7p com a possível inclusão de esclerocórnea em seu quadro clínico, da deleção 9p com a adição de mais um caso de presença de hemangioma e da deleção 18q com a confirmação de dois casos adicionais de fístulas no lábio inferior. / Objective: Characterization of syndromes presented by patients with cleft lip and palate (CL/P) associated with associated with multiple congenital anomalies (MMC) and chromosomal abnormalities and expansion of the phenotyipc spectrum of syndromes already described. Setting: Human Cytogenetics Laboratory and Clinical Genetics Service, HRAC-USP, Bauru-SP. Participants: 15 patients with cleft lip and palate associated with multiple congenital malformation and structural chromosome abnormalities in their karyotypes. Interventions/Variables: Clinical-genetic evaluation, cytogenetic analysis/structural chromosome abnormalities. Results: Among the 15 patients, 8 were of the masculine gender and 7, of feminine gender. In this sample, was detected reciprocal translocation in 1 patient, derivative chromosome in 5, duplication in 2, recombinant chromosome with partial duplication of one chromosome in 1, deletion in 2 and ring chromosome in 4. The individual 14 presented association of trisomy of sexual chromosomes and der (22)t(11;22) extranumerary. Conclusions: Were characterized 7 chromosomal syndromes with cleft lip and/or palate on their clinical pictures (dup 3p, dup 4q, dup 7p, del 9p, del 18q, del 21q and dup 22q) and a single case with probable ambiental cause; and were extended the phenotypic spectum of syndromes of duplication 7p with the possible inclusion of sclerocornea on its clinical picture, deletion 9p with the addition of one more case of presence of hemangioma and deletion 18q with the confirmation of two additional cases of lip pits in the lower lip.
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Estudo Citogenético de Indivíduos Afetados por Deficiência Mental em Três APAES da Região de Ribeirão Preto / Cytogenetic Study of Individuals Affected by Mental Retardation in Three APAEs the Region of Ribeirao PretoLudmila Serafim de Abreu 26 March 2010 (has links)
Em estudos etiológicos sobre a deficiência mental (DM), as anomalias cromossômicas, tanto numéricas quanto estruturais, são fatores que apresentam frequência relativa significante. O objetivo deste trabalho foi estudar as frequências e os tipos de anomalias cromossômicas em afetados por DM nas APAEs (Associação de Pais e Amigos dos Deficientes) de Batatais, Altinópolis e Serrana, objetivando conhecer melhor a contribuição destas anomalias na DM nessa região, caracterizando os tipos e as freqüências das aberrações cromossômicas observadas e compará-las entre as APAEs. Pacientes com suspeita de anomalias cromossômicas foram selecionados para o estudo. O critério usado para a seleção da amostra foi a realização do cariótipo em todos os afetados por DM com anomalias estruturais maiores e/ou menores. A análise citogenética foi feita através de cultura de linfócitos do sangue periférico e a coloração utilizada foi banda G, sendo analisadas 20 metáfases por paciente. Dos 505 indivíduos avaliados nas três APAES, 265 realizaram estudo citogenético, sendo encontradas 61 alterações cromossômicas (12,1% do total e 23,0% dos selecionados para cariótipo). Na APAE de Batatais, dos 305 indivíduos avaliados, 174 realizaram cariótipo, sendo encontradas 33 (10,8% do total) anomalias cromossômicas. Em Altinópolis, dos 107 indivíduos avaliados, 54 realizaram cariótipo, sendo observados 16 cariótipos anômalos (14,9% do total). Na APAE de Serrana, dos 93 indivíduos avaliados, 37 realizaram cariótipo, sendo encontradas 12 (12,9% do total) anomalias cromossômicas. Esses resultados demonstram que anomalias cromossômicas contribuem significativamente para a etiologia da DM e que a citogenética clássica possui importantes implicações na prática médica para o diagnóstico dos indivíduos afetados, assim como, para o aconselhamento genético das famílias. Além disso, observa-se que a APAE de Batatais, por apresentar uma porcentagem menor de indivíduos afetados por DM grave, 60,7%, possui uma menor incidência de anomalias cromossômicas quando comparada as APAEs de Altinópolis e Serrana que apresentam uma frequência de 87,8% e 83,9% de indivíduos com DM grave, respectivamente, indicando que alterações cromossômicas são mais frequentes em indivíduos afetados por DM grave. / In etiological studies on mental retardation (MR), the chromosomal abnormalities, both numerical and structural, are factors that have significant relative frequencies. The objective was to study the frequencies and types of chromosomal abnormalities in patients affected by MR in APAEs (Associação de Pais e Amigos dos Deficientes) of Batatais, Altinópolis and Serrana. This aims to better understand the contribution of these abnormalities to MR in these regions, and thus characterizing the types and frequencies of chromosomal aberrations observed in order to compare them between APAEs. Patients suspected of chromosomal abnormalities were selected for the study. The criterion used for sample selection was the achievement of the karyotype of all patients affected by MR with major and/or minor structural abnormalities. Cytogenetic analysis was performed on cultures of peripheral blood lymphocytes, where the band G was used for staining. Twenty metaphases were analyzed per patient. Of the 505 individuals evaluated in three APAEs, a cytogenetic study was performed on 265 patients, and 61 chromosomal abnormalities were found (12.1% of the total and 23.0% of the selected karyotypes). In APAE of Batatais, karyotypes were performed on 174 of the 305 subjects studied, and we found 33 chromosomal abnormalities (10.8% of total). In Altinópolis, 54 karyotypes were performed out of the 107 subjects studied, and we observed 16 abnormal karyotypes (14.9% of total). In APAE Serrana, 37 karyotypes were performed out of the 93 subjects studied, and 12 chromosomal abnormalities (12.9% of total) were found. These results show that chromosomal abnormalities contribute significantly to the etiology of MR and that classical cytogenetics have important implications in medical practice for diagnosis of affected individuals as well as for genetic counseling of the families. Moreover, it is noted that in the APAE of Batatais, because of the smaller percentage of individuals affected by severe MR, 60.7% have a lower incidence of chromosomal abnormalities when compared to the APAEs of Altinópolis and Serrana which have frequencies of 87.8% and 83.9% of individuals with severe MR, respectively. This indicates that chromosomal abnormalities are more frequent in individuals affected by severe MR.
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Estudo citogenetico de Pseudopaludicola canga, P. mineira e P. saltica e de cinco populações de Pseudopaludicola sp. (Anura, Leiuperidae) / Cytogenetic study of Pseudopaludicola canga, P. mineira and P. saltica and five populations of Pseudopaludicola sp. (Anura, Leiuperidae)Duarte, Thiago Cellin 12 August 2018 (has links)
Orientadores: Shirlei Maria Recco Pimentel, Ana Cristina Prado Veiga Menocello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T03:22:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2008 / Resumo: O gênero Pseudopaludicola, atualmente pertencente à família Leiuperidae, é formado por 12 espécies amplamente distribuídas pela América do Sul, com nove delas relatadas para o Brasil. Com base em dados morfológicos, as espécies do gênero foram alocadas em dois grupos: "pusilla" e "falcipes". Mudanças taxonômicas freqüentes foram relatadas para o gênero e análises recentes com base em dados moleculares mostraram que as relações intergenéricas de Pseudopaludicola também permanecem pouco esclarecidas. Devido à grande semelhança morfológica dos exemplares de Pseudopaludicola, há suspeita de confusões na identificação das espécies para algumas localidades e da existência de espécies novas. De modo geral, existem poucas informações citogenéticas para o gênero que, em sua maioria, se restringem à determinação do número de cromossomos e análise do cariótipo por método de coloração convencional. Considerando que a análise citogenética mais detalhada constitui uma ferramenta importante que pode contribuir para a diferenciação de espécies de Pseudopaludicola e para o entendimento da sistemática do gênero, no presente trabalho foram estudadas as espécies Pseudopaludicola mineira, P. canga e P. saltica, provenientes de suas localidades-tipo (Serra do Cipó, MG; Serra dos Carajás, PA; e Chapada dos Guimarães, MT, respectivamente), P. saltica de Uberlândia, MG, Pseudopaludicola aff. saltica de Rio Claro (SP), Pseudopaludicola aff. falcipes de Icém (SP), e outras três amostras de Pseudopaludicola sp. (1, 2 e 3) provenientes, respectivamente, de Andaraí (BA), Barreirinhas (MA) e Uberlândia (MG). As metáfases foram obtidas de suspensões de células de epitélio intestinal e de testículo, e coradas com Giemsa ou submetidas às técnicas impregnação por prata (Ag-NOR) para detecção de região organizadora de nucléolo (NOR) e de bandamento C, para a localização de heterocromatina. As espécies estudadas dividem-se em dois grupos quanto ao número de cromossomos, 2n=18 e 2n=22. As espécies P. mineira, Pseudopaludicola sp.1, P. saltica e Pseudopaludicola aff. saltica apresentam 2n=22 cromossomos. Pseudopaludicola mineira diferiu de Pseudopaludicola sp.1 pela morfologia dos pares 7, 8 e 11, posição da NOR no par 8 e pela distribuição de blocos heterocromáticos. As duas populações de P. saltica e a população de Pseudopaludicola aff. saltica apresentaram cromossomos com a mesma morfologia, exceto o par 8 que em P. saltica caracteriza cromossomos sexuais do tipo XX/XY, sendo o X telocêntrico e o Y submetacêntrico, ambos portadores da NOR, enquanto em Psedopaludicola aff. saltica o par 8 é telocêntrico, heteromórfico em tamanho, e apresenta marcação da NOR e banda heterocromática apenas no cromossomo maior do par. Os cariótipos de P. canga, Pseudopaludicola sp.2, Pseudopaludicola sp.3 e Pseudopaludicola aff. falcipes apresentaram cariótipos idênticos com 2n=18 cromossomos. Esses cariótipos diferem, no entanto, quanto à localização da NOR pericentromérica no braço curto do par 3 em P. canga e Pseudopaludicola sp.2 e telomérica no braço longo do par 9 em Pseudopaludicola sp.3 e Pseudopaludicola aff. falcipes. O padrão de bandamento C destas espécies mostrou-se bastante similar diferindo apenas pela presença de uma banda no braço longo do par 2 em P. canga e Pseudopaludicola sp.2 e ausente em Pseudopaludicola sp.3 e Pseudopaludicola aff. falcipes. Os dados citogenéticos permitiram diferenciar Pseudopaludicola sp.1 das demais espécies de 22 cromossomos já cariotipadas, sugerindo que possa se tratar de uma nova espécie. O sistema de determinação do sexo do tipo XX?/XY? detectado em P. saltica não foi relatado anteriormente para o gênero Pseudopaludicola, sendo esse o primeiro caso. A hipótese de fissão seguida de perda do braço menor em um dos homólogos de um par de cromossomos submetacêntricos é sugerida para explicar a origem do cromossomo X. O heteromorfismo do par 8 observado em Pseudopaludicola aff. saltica, pode ter ocorrido por mecanismo de crossing-over desigual. As espécies Pseudopaludicola canga e Pseudopaludicola sp.2 não puderam ser citogeneticamente diferenciadas, no entanto, não descartamos a possibilidade de serem táxons distintos. A grande similaridade dos cariótipos 2n=18 sugere que Pseudopaludicola sp.2, Pseudopaludicola sp.3 e Pseudopaludicola aff. falcipes possam também pertencer ao mesmo grupo em que se encontra P. canga, atualmente grupo "pusilla". Os dados sugerem ainda que Pseudopaludicola aff. falcipes (2n=18) seja proximamente relacionada à P. canga (2n=18) e não a P. falcipes (2n=22), apesar das semelhanças morfológicas entre seus exemplares. Os resultados obtidos no presente estudo reforçam a necessidade de uma extensa revisão taxonômica no gênero Pseudopaludicola. / Abstract: The genus Pseudopaludicola, of the family Leiuperidae, comprises 12 frog species and is widely distributed in South America. In Brazil, nine species have been described within this genus. As based on morphological data, the Pseudopaludicola species were classified in two groups named "pusilla" and "falcipes". Although this genus has undergone several taxonomic changes, recent molecular analyses revealed still unclear intergeneric relationships. The high morphological similarities among diverse species of Pseudopaludicola, associated to their sympatry in several localities, suggest taxonomic misidentification which had been based only in morphological characteristics. Besides, recent studies seem to indicate the existence of cryptic Pseudopaludicola species in several Brazilian localities. Cytogenetics of Pseudopaludicola has been scarce and restricted to the determination of chromosome number and morphology. Further cytogenetic analysis can contribute to differentiate the Pseudopaludicola species and, therefore, improve the sistematics of this genus. The objective of this work was to analyze the karyotypes of several Brazilian Pseudopaludicola species aiming at providing their characterization and further understanding of their systematic relationships. The analyzed species were the P. mineira, P. canga and P. saltica, from their type-localities (Serra do Cipó, MG; Serra dos Carajás, PA, and Chapada dos Guimarães, MT, respectively), P. saltica from Uberlândia, MG, Pseudopaludicola aff. saltica from Rio Claro (SP), Pseudopaludicola aff. falcipes from Icém (SP), and specimens of Pseudopaludicola sp. 1, 2 and 3, respectively from Andaraí (BA), Barreirinhas (MA) and Uberlândia (MG). Metaphases were obtained from intestinal epithelium and testicular cell suspensions, and stained with Giemsa or submitted to silver staining, in order to detect the nucleolus organizing regions (Ag-NOR), and to C-banding technique for heterochromatin localization. As based on chromosome number, there were two groups of karyotypes, with 2n=22 and 2n=18. The species P. mineira, Pseudopaludicola sp.1, P. saltica and Pseudopaludicola aff. saltica had a diploid number of 2n=22. Pseudopaludicola mineira and Pseudopaludicola sp.1 differed in the morphology of pairs 7, 8 and 11, in the NOR location in the pair 8 and in the heterochromatin distribution. The P. saltica and Pseudopaludicola aff. saltica populations showed very similar chromosomal morphology and identical heterochromatin pattern, except for the pair 8. In P. saltica, the pair 8 was characterized as sex chromosomes XX?/XY?,
being the X classified as telocentric and Y submetacentric, whereas in Psedopaludicola aff. saltica, in both male and female specimens, the homologues of pair 8 are telocentrics, heteromorphic in size with the heterochromatin block present only in the longer homologue. The pair 8 is the NOR-bearing chromosome in both P. saltica and Psedopaludicola aff. saltica. High similarity was observed among the karyotypes of P. canga, Pseudopaludicola sp.2, Pseudopaludicola sp.3 and Pseudopaludicola aff. falcipes, all of them with 2n=18 chromosomes. However, these karyotypes differed in the NOR location, which was on pair 3 in P. canga and Pseudopaludicola sp.2, and on pair 9 in Pseudopaludicola sp.3 and Pseudopaludicola aff. falcipes. These species had similar heterochromatic blocks, except for one C-band on the long arm of pair 2 in P. canga and Pseudopaludicola sp.2, which was not observed in Pseudopaludicola sp.3 e Pseudopaludicola aff. falcipes). The cytogenetic data clearly distinguished Pseudopaludicola sp.1 from the other known species of this genus with 22 chromosomes, and suggested that this could be a not yet described species. The identification of sex chromosomes XX?/XY? in P. saltica, is the first case of sex chromosomes reported in the genus Pseudopaludicola. A mechanism of fission followed by loss of the short arm in one of homologues of a submetacentric pair could explain the origin of the X chromosome in P. saltica. The size heteromorphism in the homologues of the pair 8 of Pseudopaludicola aff. saltica, with the NOR site and heterochromatin present only in one of the homologues, could be explained by unequal crossing-over. The species Pseudopaludicola canga and Pseudopaludicola sp.2 could not be cytogenetically distinguished, suggesting that they belong to the same taxon. Since all the analyzed karyotypes of 2n=18 were very similar, we may suggest that Pseudopaludicola sp.2, Pseudopaludicola sp.3 e Pseudopaludicola aff. falcipes should be included in the same group of P. canga, which is currently allocated in the "pusilla" group. In addition, the results indicated that Pseudopaludicola aff. falcipes (2n=18) is more closely related to P. canga (2n=18) than to P. falcipes (2n=22), although the specimens are morphologically very similar and their identification is not unequivocal. Ultimately, the data presented herein reinforce the necessity of a taxonomic revision of the genus Pseudopaludicola. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural
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Taxonomia integrativa para a caracterização e diferenciação de espécies de veronicelídeos neotropicais (Mollusca, Gastropoda, Veronicellidae): recaracterização de Latipes erinaceus e descrição de uma nova espécie do gênero PhyllocaulisOliveira, Carlota Augusta Rocha de 07 March 2016 (has links)
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carlotaaugustarochadeolieira.pdf: 3150552 bytes, checksum: 3dab4f728294cd34a4cc90459bd1f542 (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: on 2017-08-24T11:27:38Z (GMT) / Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-24T13:03:51Z
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Previous issue date: 2016-03-07 / A família Veronicellidae Gray, 1840 inclui espécies facilmente reconhecíveis e amplamente distribuídas nas regiões tropicais e subtropicais, com maior representatividade na região Neotropical. A família inclui aproximadamente setenta e oito espécies neotropicais, divididas em dezessete gêneros. Algumas espécies atuam como hospedeiros intermediários de helmintos, ou como pragas de horticulturas, fruticulturas e floriculturas. Entretanto, apesar da importância médica e econômica da família, ainda existem significativas lacunas no conhecimento básico desses gastrópodes, particularmente no que concerne à morfologia, taxonomia e distribuição. Este trabalho objetivou estudar a variabilidade morfológica de espécimes de veronicelídeos, com uma abordagem taxonômica multidisciplinar, das espécies Latipes erinaceus, Phyllocaulis boraceiencis e Phyllocaulis sp. nov., incluindo uma abordagem comparativa com as demais espécies desses gêneros e a análise de sua distribuição geográfica. O presente estudo foi dividido em dois capítulos. No primeiro capitulo foi realizada a recaracterização de Latipes erinaceus com base em indivíduos provenientes de duas populações, visando acessar a variabilidade morfológica da espécie. Através da análise de características morfológicas descritas na literatura, realizamos o estudo comparativo das espécies incluídas nos gêneros Angustipes e Latipes, e propomos a redefinição destes gêneros, elegendo como caracteres mais relevantes a morfologia do pênis e do ducto da bolsa de copulação e a posição relativa de entrada do ducto de ligação na bolsa. Com base nas características mencionadas, propomos a transferência das espécies L. erinaceus, L. rosilus, L. ribeirensis e L. absumptus para o gênero Angustipes. No segundo capítulo, é descrita uma nova espécie do gênero Phyllocaulis e realizado o estudo morfológico detalhado da espécie P. boraceiensis. As duas espécies apresentam similaridades morfológicas superficiais, entretanto, o estudo aprofundado da morfologia permitiu sua distinção com base nas características do complexo peniano e musculatura associada, glândula pediosa, glândula peniana, rádula, além da pigmentação corporal. / The family Veronicellidae Gray, 1840 includes species that are easily recognizable and widely distributes along the tropical and subtropical regions. This family is specially rich in the neotropics. This family currently includes around 80 neotropical species placed in 17 genera. Some species act as intermediate host of helminths or as horticultural plagues. However, despite the medical and economic importance of this family, there are significant gaps in the knowledge of their morphology, taxonomy and distribution. Within this context, this study aimed to study the morphological variability of Latipes erinaceus, Phyllocaulis boraceiencis e Phyllocaulis sp. nov. including a comparative approach with other congeneric species, and also analyse their geographical distribution. This study is divided in two chapters. Ther first chapter includes a recharacterization of Latipes erinaceus based in sampling from two populations to access the morphological variability. Based on literature, we compared all species included in the genera Angustipes and Latipes. Then we proposed the redefinition of these genera, electing as more taxonomy relevant characters: penis morphology, bursa copulatrix duct, and the relative position of the duct entrance in the Bursa. Based on those characters, we propose the transfer of L. erinaceus, L. rosilus, L. ribeirensis e L. absumptus to the genus Angustipes. Within the second chapter we described a new species of Phyllocaulis and perform a deteiled morphological study with P. boraceiensis. Both species have superficial morphological similaraties, however, an extensive morphological analysis showed their distinction. Their distinction are based on characters of penile complex and associated musculature, pedal and penile glands, radula, and also body pigmentation.
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Caracterização cromossômica comparada no gênero Stylosanthes (Fabaceae)Franco, Ana Luiza 16 February 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-02-16 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O gênero Stylosanthes (Fabaceae) possui aproximadamente 50 espécies e algumas apresentam grande importância econômica. Algumas espécies são amplamente utilizadas como forrageiras, em recuperação de áreas degradadas e adubação verde graças a sua alta adaptabilidade aos solos de baixa fertilidade e capacidade de fixar nitrogênio. O gênero está distribuído em áreas tropicais e subtropicais e o
Brasil é considerado o maior centro de diversidade, com grande variação intra e interespecífica. Estudos de melhoramento genético relacionados ao gênero têm aumentado, porém a taxonomia permanece controversa. A ocorrência de poliploidia, híbridos e sinonímias reforçam a importância de adicionar novas informações sobre o gênero. Dados citogenéticos sobre o gênero são escassos mesmo constituindo
uma importante ferramenta para contribuir com informações relevantes sobre o genoma. Neste trabalho, descreveu-se pela primeira vez, aspectos cariotípicos e quantidade de DNA em espécies diploides (S. grandifolia, S. gracilis, S. hipocampoides, S. acuminata e quatro variedades de S. guianensis) por meio de
técnicas de citogenética molecular (bandeamento CMA/DAPI e hibridização fluorescente in situ- FISH) e citometria de fluxo. A germinação de sementes foi induzida em câmara de germinação variando-se a temperatura (18° a 40°C) e adicionando-se hormônio de crescimento (CEPA 0,1mM). Meristemas radiculares foram utilizados para a preparação das lâminas e os cromossomos foram corados
com fluorocromos CMA/DAPI para análise de padrões de bandas. Os sítios de DNA ribossomais 5S e 45S foram mapeados por hibridização fluorescente in situ (FISH). Para estimar a quantidade de DNA, Pisum sativum foi utilizado como padrão de referência nas análises de citometria de fluxo. A morfometria cromossômica realizada evidenciou, de uma maneira geral, a presença de um cariótipo simétrico,
com poucas variações entre as espécies. A localização de regiões ricas em CG foi similar (duas bandas em posição terminal) em S. gracilis, S. hipocampoides e em três das variedades de S. guianensis (1480, 1463 e 4171). Entretanto, uma variedade de S. guianensis (C.V mineirão) além de S. grandifolia e S. acuminata exibiram quatro marcas CMA positivas. Com relação ao DNAr 5S e 45S, dois sítios
foram observados na maioria das espécies, com exceção de S. acuminata, que apresentou quatro marcas 45S. Algumas variações também foram observadas entre as variedades de S. guianensis. A variedade 4171 apresentou metáfases com três ou quatro sítios de DNAr 45S. O valor médio do conteúdo de DNA estimado foi de aproximadamente 2,50 pg em todas as espécies. Tomados em conjunto, os dados constituem uma importante contribuição para o estudo da história evolutiva do grupo, revelando a estabilidade do genoma quando avaliado do ponto de vista cromossômico e de quantidade de DNA. O estudo contribui ainda para programas de melhoramento genético de espécies com importância econômica. / Stylosanthes (Leguminosae) comprises about 50 species being some of them with great economic importance. Some species are widely used as forages and, to recover degraded areas and as a green fertilizer due to its adaptability to low fertility soils and nitrogen fixing capacity . The genus is distributed in tropical and subtropicals areas. Brazil is considered the larger diversity center, with great inter
and intraspecific variation. Breeding studies have been increased although the taxonomic situation of the group remains controversial. The occurrence of polyploidy, hybrids and many additional synonyms reinforce the importance to add new information about the genus. Cytogenetics data about the genus are
scarce, even considering as an important tool to give relevant information about the genome. Here we describe, for the first time, karyotipic aspects and the DNA content of diploid species (S. grandifolia, S. gracilis, S. hipocampoides, S. acuminata and four varieties of S. guianensis) by using molecular cytogenetic techniques (CMA/DAPI banding and in situ hybridization) and flow cytometry. Seeds germination was induced by temperature variation (18° to 40°C) and growth hormones (CEPA 0.1mM) in a germination chamber. Meristematic roots were used to slides preparation. Chromosomes were stained with CMA/DAPI for banding patterns analysis and ribosomal 5S, 45S rDNA sites were mapped by in
situ hybridization. To estimate the DNA content, Pisum sativum were used as a reference standard in flow cytometry analysis. The chromosomal morphometry showed a symmetrical karyotype with few variations between species. The localization of the CG rich regions was similar (two bands at terminal position) in
S. gracilis, S. hipocampoides, and in three of the S. guianensis varieties (1480,1463 and 4171). However, one variety of S. guianensis (C.V mineirão), S. grandifolia and S. acuminata exhibited four CMA+ marks. Regarding 5S and 45S rDNA, two sites were observed in most species, excepting for S. acuminata, with
fours 45S marks. Some variations were also observed among S. guianensis accessions. In 4171, metaphases with three or four 45S rDNA sites were observed. DNA content estimation was about 2.50pg in all species. Nevertheless, for S. grandifolia, cells with two DNA C-values were observed suggesting a
variation in the DNA content. Taking together, the data constitutes an important contribution in the study of evolutionary history of the group, revealing the genome stability when chromosome and DNA content information were considered. The study also contribute for breeding programs of species with
economic importance.
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Estudo citogenético de Leptinaria unilamellata (d´Orbigny, 1835) (Mollusca, Gastropoda, Subulinidae)Ferreira, Paula Botelho 24 February 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-02-24 / Os moluscos pulmonados têm sido reconhecidos como modelos interessantes para o estudo de biodiversidade oculta em função de algumas características como a baixa vagilidade, capacidade de realizar auto-fecundação, além do histórico de identificações específicas baseadas somente nas conchas, caráter esse hoje sabidamente insuficiente para a distinção de espécies. A citogenética constitui uma abordagem que pode contribuir para a resolução taxonômica de grupos de moluscos terrestres, sendo, entretanto necessário o estabelecimento de protocolos experimentais. O objetivo do presente trabalho foi estabelecer protocolos para o estudo citogenético de moluscos terrestres, através da realização de bioensaios, visando testar diferentes tecidos, concentrações dos reagentes indicados e tempos de incubação. Para isso, foi realizada uma revisão prévia dos protocolos descritos para o filo Mollusca e delineados protocolos, posteriormente testados em bioensaios, utilizando-se a espécie Leptinaria unilamellata (Pulmonata, Subulinidae) como modelo experimental. O presente trabalho descreve o cariótipo da espécie L. unilamellata, com fórmula cariotípica 22m+6sm. Os resultados obtidos estão de acordo com os números cromossômicos descritos na literatura para espécies de moluscos terrestres da superfamília Achatinoidea, variando de 2n=44 a 2n=60 cromossomos. Além disso, com a técnica de coloração de nitrato de prata, observamos a presença de duas marcações no núcleolos correspondente às regiões organizadores de nucléolos, ou seja, regiões ativas do DNA. O estabelecimento de protocolos de citogenética adequados para o estudo de moluscos terrestres permitirá o aumento do número de espécies cariomorfologicamente estudadas, contribuindo para a melhor resolução da taxonomia e evolução desse grupo. / Pulmonate molluscs have been recognized as interesting models to study hidden biodiversity due to some biological characteristics as low vagility and self-fertilization capacity, besides the historic of species descriptions based solely on the shell. Cytogenetics is used to infer species relationships in several plant and animal taxa. This approach may contribute to the better resolution of the taxonomy within Pulmonata. The present study aimed to establish protocols to cytogenetic studies of terrestrial molluscs testing different target tissues, reagents concentrations and incubation times. We performed a review of the cytogenetic protocols described in the literature for phylum Mollusca and after that; we delineated protocols which were tested in bioassays, using the species Leptinaria unilamellata as experimental model. In the present study we found that L. unilamellata present diploid number of 56 chromosomes, 44 metacentrics e 12 submetacentrics. This result is in accordance with the chromosome numbers described to terrestrial snails from superfamily Achatinoidea, which varies from 2n=44 to 2n=60. Furthermore, with the technique of silver nitrate staining, we found the presence of two sites in the nucleus corresponding to nucleolus organizer regions, or active regions of DNA. The establishment of cytogenetic protocols adequate to terrestrial snails will allow increasing the number of land snail’ species karyomorphologically studied, contributing to the better resolution of the taxonomy and evolution of this group.
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Anormalidades citogenéticas e sua relação com a proliferação e a apoptose celular em portadores de mieloma múltiplo / Cytogenetic abnormalities and their relation to cell proliferation and apoptosis in multiple myeloma patientsCamila da Cruz Gouveia Linardi 14 January 2011 (has links)
Anormalidades citogenéticas recorrentes são encontradas nas células tumorais de portadores de mieloma múltiplo. No momento do diagnóstico a t(4;14)(p16;q32) e a del(17p13) ocorrem em 10-20% e 5-10% dos casos, respectivamente, e são associadas à evolução clínica desfavorável. A del(13q14), por sua vez, ocorre em cerca de metade dos pacientes, porém não apresenta valor prognóstico importante. Entretanto, há evidências na literatura de que a del(13q14) seja um pré requisito para a expansão tumoral. O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência destas anormalidades cromossômicas em portadores de mieloma múltiplo recém diagnosticado e correlacioná-las com as taxas de proliferação e apoptose celular na medula óssea e a quantificação de plasmócitos em sangue. Amostras de aspirado de medula óssea provenientes de 84 portadores de mieloma múltiplo recém diagnosticado foram avaliadas quanto à presença de del(13q14), t(4;14)(p16;q32) e del(17p13) pela técnica de marcação fluorescente dos plasmócitos seguida pela hibridação in situ por fluorescência (cIg-FISH). Desta forma, foi realizada a correlação entre estas alterações e a quantificação de plasmócitos em sangue periférico, a proporção de plasmócitos positivos para o marcador de proliferação celular Ki-67 e para o marcador de apoptose anexina V, obtidos pela técnica de citometria de fluxo. Concomitantemente, foram avaliados parâmetros clínicos e laboratoriais e realizada a análise de sobrevida global (SG) e sobrevida livre de eventos (SLE). Os pacientes foram divididos em quatro grupos de acordo com a anormalidade citogenética presente: (1) grupo com t(4;14)(p16;q32), (2) grupo com del(17p13), (3) grupo com del(13q14) e sem nenhuma das outras alterações e (4) grupo sem nenhuma das anormalidades pesquisadas. Foi possível realizar a pesquisa de todas as anormalidades cromossômicas em 76 pacientes dos quais: vinte nove (38,1%) possuíam somente del(13q14), seis (7,89%) possuíam t(4;14)(p16;q32) e seis (7,89%) possuíam del(17p13). Não foi observada diferença estatisticamente significante entre os diferentes grupos de anormalidades citogenéticas quanto à mediana de expressão de Ki-67 em plasmócitos (p=0,7), a mediana de marcação dos plasmócitos com anexina V (p=0,94), a razão entre expressão de Ki-67 e marcação com anexina V (p=0,57) e a quantidade de plasmócitos em sangue periférico (p=0,07). Entretanto, observou-se tendência à correlação entre porcentagem de células acometidas pela del(13q14) e expressão de Ki-67 (p=0,06). A maior expressão de Ki-67 e a maior quantidade de plasmócitos circulantes se associaram a características clínicas e laboratoriais de mau prognóstico. Em análise multivariada somente níveis séricos elevados de desidrogenase lática (DHL) (p=0,002) se associaram à SLE e DHL elevado (p=0,013), a não realização de quimioterapia em altas doses com resgate de células tronco hematopoéticas (p=0,016), sistema de estadiamento internacional (ISS) III (p=0,001) e t(4;14)(p16;q32) (p=0,04) se associaram à pior SG / Recurrent cytogenetic abnormalities are found in multiple myeloma tumour cells. Among them, t(4;14)(p16;q32) e a del(17p13) occur respectively in 10-20% and 5-10% cases in the moment of diagnosis, and are associated with unfavorable clinical outcome. Del(13q14) occurs in half of patients, although, it has no important prognostic value. However, there are evidence in literature that del(13q14) is a pre requisite for tumour expansion. The purpose of this work was to determine the prevalence of chromosomal abnormalities in newly diagnosed multiple myeloma patients and correlate these abnormalities with the quantification of plasmocytes in blood and the rates of cellular proliferation and apoptosis. Bone marrow samples from eighty four newly diagnosed multiple myeloma patients were evaluated for the presence of del(13q14), t(4;14)(p16;q32) and del(17p13) by fluorescent in situ hybridization coupled to cytoplasmic staining of specific imunoglobulin (clg-FISH). Therefore, a correlation between these alterations and the proportion of plasmocytes positive for the proliferation antigen Ki-67 and for the apoptosis marker annexin V, measured by flow cytometry, was done. The quantification of plasmocytes in peripheral blood by flow cytometry was also made. Concurrently, clinical and laboratorial parameters, overall survival (OS) and event free survival (EFS) were also evaluated. Patients were divided in four groups accordingly to the cytogenetical abnormality present (1) t(4;14)(p16;q32), (2) del(17p13), (3) del(13q14) and none of the other alterations and (4) group with no researched abnormality. The research of all chromosomal abnormalities was possible in 76 patients: 29 (38,1%) had only del(13q14), six (7,89%) had t(4;14)(p16;q32) and six (7,89%) had del(17p13). No significant statistical difference was observed between different groups comparing the median expression of Ki-67 in plasmocytes (p=0,7), the median plasmocytes positive for annexin V (0,94), the ratio between Ki-67 and annexin V (p=0,57), and the quantity of plasmocytes in peripheral blood (p=0,07). However, there was a tendency for a correlation between proportion of cells with del(13q14) and Ki-67 expression (p=0,06). Higher Ki-67 expression and higher number of blood plasmocytes correlated to clinical and laboratorial features associated with unfavorable outcome. In multivariate analyses, only elevated lactate dehydrogenase (p=0,002) was associated to inferior EFS, and elevated lactate dehydrogenase (p=0,013), treatment without high dose chemotherapy with stem cell support (p=0,016), International Staging System III (p=0,001) and presence of t(4;14)(p16;q32) (p=0,04) were associated to inferior OS
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