O Papilomavírus Humano (HPV), da família Papilomaviridae, são vírus epiteliotrópicos que provocam lesões de pele ou mucosa. O carcinoma do colo uterino é uma das principais causas de morte de mulheres em todo o mundo, sendo a infecção pelo HPV o principal fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma cervical. Durante o processo maligno, a migração descontrolada de células neoplásicas, é uma característica fundamental da invasão tumoral, sendo que as metaloproteinases de matriz (MMPs) participam largamente deste processo pois são responsáveis pela clivagem de proteínas da matriz extracelular. O projeto propôs investigar a expressão de MMP-9 total em amostras cérvico-vaginais com inflamação, lesão e tumor. Foram coletadas duas amostras cérvico-vaginais como esfregaços para diagnóstico citológico e imunocitoquímica. A coleta foi realizada em 630 pacientes da Penitenciária Feminina de Sant´ana, no período de agosto de 2009 a agosto de 2010. As lâminas foram submetidas à imunocitoquímica para detecção da expressão de MMP-9. Os resultados indicaram um aumento da expressão de MMP-9 total diretamente proporcional com o aumento do grau das lesões nos esfregaços, corroborando com dados de histologia da literatura. Portanto, tal método de correlação de MMP-9 total com esfregaços cérvico-vaginais poderá auxíliar o prognóstico em esfregaços. / The Human Papillomavirus (HPV) are epitheliotropic viruses from family Papillomaviridae, which cause skin or mucous lesions. Carcinoma of the cervix is a major cause of death in women worldwide, and HPV infection a major risk factor for development of cervical carcinoma. During the malignant process, cell migration is a fundamental characteristic of tumor invasion, and the matrix metalloproteinases (MMPs) are responsible for the cleavage of extracellular matrix proteins. This project aims to investigate the expression of MMP-9 in different degrees of injury in the smear. We collected two cervical smears for cytological diagnosis and immunocytochemistry. Data collection was conducted in 630 women of the Sant´ana Women\'s Penitentiary, during the period August 2009 to August 2010. The slides were submitted to immunocytochemistry to detect the expression of MMP-9 and noticed an increase in protein expression in parallel with the increased lesions grade, which corroborates the histology of the literature and could be a method prognostic aid in vaginal smears.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Juliana Braga de Andrade.pdf: 277168 bytes, checksum: e50d423b690ca866b106dbd90d193ab4 (MD5) Previous issue date: 2006-02-20 / In this study vaginal material was collected for microbiological and cytological evaluation in 39 female domestic cats, divided into two groups. The first group consisted of 21 whole animals, and the second of 18 neutered cats. All animals were apparently healthy, with ages varying from six months to 12 years, and were of different breeds; they came from domestic and county breeding centers in Rio de Janeiro. After mechanical containment, and cleansing of vulvar area, the proceeding for the microbiological isolation begun, for this two sterile pedriatic swabs previously embedded in a 0,9% saline solution were necessary. The first swab was used for bacterial isolation and preserved in Nutrient Agar transportation medium. The second swab was used for the fungal isolation and transported in Peptonated Water 1%. Afterwards, the material of both collections was refrigerated and sent to analysis. After this, the collection for cytological analysis was performed using a small interdental brush. The smears were fixated in absolute alcohol and dyed by the quick dyeing method (Diff Quick ?). In both groups studied differences were observed as to the number and species of bacteria. The first group had a higher frequency of Edwardsiella tarda (19,04%), followed by Enterobacter spp and Streptococcus spp, both with 17 isolations (16,19%). In relation to the neutered animals of the second group there was a higher predominance of Enterobacter spp (16,88%) and of Escherichia coli and of aeroginous Pseudomonas in the same proportion ( 14,28%). In the fungal isolation and identification it was also possible to observe differences related to the isolated ones in relation to the groups. In the first group there were 30,5% of Candida spp followed by Aspergillus spp (18,64%) and Curvularia spp (11,86%). Whereas in the second group, with castrated animals, there was a higher frequency of Penicillium spp (25%), Cladosporium (18,75%) and Candida spp (16,66%). As to the association between the microbiological and colpocytological exams it was observed that there was an agreement between the two auxiliary methods of diagnostic of vaginal microbiota of female cats only in the bacterial isolation, but not in the fungal isolation. / No presente estudo foi realizada a coleta de material vaginal para as avalia??es microbiol?gicas e citol?gicas em 39 gatas dom?sticas, divididas em dois grupos, sendo o primeiro composto de 21 animais inteiros e outro com 18 f?meas castradas, aparentemente saud?veis, com idade variando de seis meses a 12 anos, de diferentes ra?as, provenientes de cria??es domiciliares e particulares do munic?pio do Rio de Janeiro. Ap?s a conten??o mec?nica das f?meas e limpeza da regi?o vulvar, iniciou-se o procedimento para o isolamento microbiol?gico, para tal foram necess?rios dois swabs pedi?tricos est?reis, previamente umedecidos com solu??o salina est?ril a 0,9%. O primeiro swab foi utilizado para o isolamento bacteriano, sendo acondicionado em meio de transporte Agar Nutriente. O segundo swab para o isolamento f?ngico, transportado em ?gua Peptonada a 1%. Ap?s a coleta, ambos foram mantidos sob refrigera??o e encaminhados para an?lise. Em seguida procedeu-se a coleta para an?lise citol?gica com a utiliza??o da escova interdental fina. Os esfrega?os foram fixados em ?lcool absoluto e corados pelo m?todo de colora??o r?pida (Diff Quick?). Em rela??o aos dois grupos estudados observou-se diferen?as quanto ao n?mero e as esp?cies bacterianas encontradas. O primeiro grupo teve maior freq??ncia de Edwardsiella tarda (19,04%) seguido de Enterobacter spp e Streptococcus spp, ambos com 17 isolados (16,19%). Em rela??o aos animais castrados do segundo grupo, houve maior predomin?ncia de Enterobacter spp (16,88%) e de Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa com a mesma propor??o (14,28%). No isolamento e identifica??o f?ngica, foi poss?vel tamb?m observar diferen?as quanto aos isolados em rela??o aos grupos. No primeiro grupo houve 30,5% de Candida spp, seguido de Aspergillus spp (18,64%) e Curvularia (11,86%). No segundo grupo de animais castrados, houve maior freq??ncia de Penicillium spp (25%), Cladosporium (18,75%) e Candida spp (16,66%). Sobre a associa??o entre os exames microbiol?gicos e colpocitol?gicos, observou-se uma concord?ncia entre os dois m?todos auxiliares de diagn?stico da microbiota vaginal de gatas somente em rela??o ao isolamento bacteriano, mas n?o em rela??o ? f?ngica.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 383266.pdf: 823319 bytes, checksum: 310fb137797fb2ab616c91d119b2c6fa (MD5) Previous issue date: 2006-09-27 / A espectroscopia de infravermelho (IV) permite caracterizar molecularmente tecidos e flu?dos, uma vez que seus espectros s?o caracter?sticos e atuam como uma impress?o digital. O r?pido desenvolvimento da t?cnica de infravermelho na ?ltima d?cada tem aberto novas portas para o progn?stico e diagn?stico de patologias facilitando a procura de melhores tratamentos. Atualmente, o infravermelho (IV) vem sendo utilizado nos mais diversos modelos experimentais de sistemas biol?gicos. A sepse provoca mudan?as no ambiente celular e em suas trocas i?nicas, afetando o funcionamento da mitoc?ndria e aumentando a forma??o de esp?cies reativas de oxig?nio (EROs). O ?xido n?trico (NO) ? considerado um marcador da forma??o de radicais livres produzidos, enzimaticamente ou n?o, nos tecidos. O aumento dos radicais livres promove a oxida??o de res?duos de amino?cidos, aumentando a forma??o de grupos carbon?licos (CO) prot?icos que atuam como biomarcadores do estresse oxidativo. Devido a esses fatores, entre outros, as mitoc?ndrias e seus complexos v?m sendo avaliados pela espectroscopia de infravermelho nas regi?es das bandas de amidas I (espectro entre 1615 cm -? e 1700cm -?, referente a liga??es C=O) e II (espectro entre 1500 cm -? e 1600 cm -?, referente a liga??es C-H), caracter?stico de prote?nas, com o objetivo de observar altera??es que possam ocorrer nestas organelas. No presente trabalho de mestrado, nosso objetivo principal foi analisar as altera??es em mitoc?ndrias hep?ticas causadas pela sepse induzida por CLP em ratos (Rattus novergicus var. Wistar) atrav?s do FTIR-ATR. O experimento foi contemplado pela extra??o das mitoc?ndrias hep?ticas atrav?s de diferentes gradientes de centrifuga??o em meios contendo sacarose, heppes e EGTA. A dosagem de NO s?rico foi feita atrav?s da metodologia de Griess. Nossos resultados apresentaram diferen?as significativas nas bandas de amida I do espectro de infravermelho do grupo s?ptico em rela??o ao controle, controle anestesia e sham. As mesmas diferen?as foram percebidas para a dosagem de NO s?rico.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:55:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9374_1.pdf: 2655923 bytes, checksum: 4a8cd8dfda72129aa8308dbf088c4d10 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae var. anisopliae e Metarhizium flavoviride var. flavoviride são fungos entomopatogênicos com ação comprovada contra várias espécies, embora não tenham sido testados em Chrysomya albiceps, um díptero de importância na saúde pública. Assim, objetivou-se avaliar a ação de B. bassiana, M. anisopliae var. anisopliae e M. flavoviride var. flavoviride em ovos, larvas e adultos de C. albiceps, utilizando as concentrações 104, 105, 106, 107, 108 conídios.mL-1, considerando o percentual de eclosão de larvas, período de pré-pupa, pupa, percentual de emergência de adultos, ritmo de emergência, morte acumulativa, longevidade, período de postura e percentual de eclosão a partir de fêmeas infectadas. O comportamento dos fungos reisolados também foi avaliado através dos parâmetros biológicos: percentual de germinação, número de conídios, número e diâmetro de colônias, bem como a citologia no que se refere à descrição das estruturas vegetativas e reprodutivas. De acordo com a metodologia empregada, verificou-se que os três fungos apresentaram ação contra ovos, larvas e adultos de C. albiceps. Já em relação ao comportamento, foi observado que os fungos reisolados de larva apresentaram o melhor desempenho em relação ao controle e os aspectos citológicos não diferiram quando comparados ao controle. Esses resultados sugerem a possibilidade do emprego desses fungos no controle de C. albiceps.

As enfermidades reprodutivas representam um entrave à produção de bovinos leiteiros, à medida que a enfermidade diminui a fertilidade dos rebanhos e causa muitos prejuízos ligados ao custo de tratamento e perda produtiva. Entre estas as endometrites possuem papel de destaque. Existem diferentes técnicas para o diagnóstico destas enfermidades como a palpação uterina por via transretal, a vaginoscopia, o cultivo microbiológico de fluidos uterinos, a biópsia uterina, a citologia endometrial e a ultrassonografia que variam em grau de praticidade, especificidade e sensibilidade. O presente trabalho teve por finalidade avaliar e comparar a vaginoscopia, ultrassonografia, a histopatologia e suas possíveis associações para o diagnóstico da endometrite através da determinação da sensibilidade, da especificidade e do coeficiente de concordância kappa utilizando a citologia endometrial como padrão ouro. Para este fim foi necessário desenvolver um método adaptado para avaliação do exame histopatológico de útero bovino. Neste estudo, 106 bovinos do sexo feminino da raça Holandesa, foram submetidos ao exame ginecológico. Destes animais, os que não apresentaram secreção vaginal de aspecto catarral foram submetidos ao exame ultrassonográfico, à colheita de material para exames de citologia endometrial e a colheita de biópsia uterina. Os resultados demonstraram que a ultrassonografia constitui um método diagnóstico pratico e rápido, sendo da associação entre a determinação da presença de líquido uterino e a determinação do diâmetro cervical a maior eficiência diagnóstica neste contexto, com sensibilidade, especificidade e coeficiente de concordância kappa de 50%, 88% e 39% respectivamente. A histopatologia por sua vez também constituiu um bom método diagnóstico, no entanto menos prático que a ultrassonografia / Reproductive diseases are a great barrier to the dairy production, as it diminishes fertility and causes economical losses with treatment costs and lowering production. In this context, endometritis plays an important role. There are different diagnostic techniques for endometritis, rectal uterine palpation vaginoscopy, microbiological tests, uterine biopsies, endometrial cytology and ultrasonography, these tests vary in sensitivity and specificity. This work had as an objective evaluating and comparing vaginoscopic, ultrasongraphic and histopathological examinations, as well as their associations, for the endometritis diagnosis by determining their sensitivity, specificity and kappa agreement coefficient using endometrial cytology as gold standard. It was necessary developing an adaptive reading score to perform the uteris histological examination. In this study 106 female Holstein cows were submitted to a gynecological examination. The ones that had no vaginal catarrh were submitted to an ultrasonographic examination, to endometrial cytology examination and uterine biopsy. Results shows that ultrasonography is a practical and good diagnostic method, the association between the determination of intra-uterine fluid and cervical diameter was the most efficient ultrasonographic method, with 50%, 88% and 39% of sensitivity, specificity and agreement coefficient kappa respectively. Histopathological examination was good diagnostic method, even though not as practical as ultrasonography

ATP-difosfohidrolases, comumente denominadas de apirases, descritas pela primeira vez à cerca de quarenta anos atrás, são enzimas que hidrolisam nucleosídeos di ou trifosfatados por um mecanismo que parece ser sequencial, mas sem a formação de um intermediário energético, e de funções metabólicas ainda desconhecidas. Elas tem sido encontradas nas células dos mais diversos pró- e eucariotos investigados e também em tumores. A vasta abundância dessas enzimas e a sua alta atividade enzimática sugerem que as mesmas estariam envolvidas em importantes funções do metabolismo celular. No presente trabalho, identificamos e caracterizamos a presença de uma nova enzima em Trypanosoma cruzi, o agente causador da doença de Chagas, uma apirase, com características semelliantes à outras apirases já descritas em diversos organismos. Diversos ensaios enzimáticos foram feitos mostrando uma atividade enzimática que não foi anulada pelos inibidores clássicos de ATPases tipo-P, tipo-F ou tipo-V. Esta enzima mostrou depende~n·cla para Mg2+, na~o acontecendo o mesmo para Ca2+. Experimentos usando soros imunes contra apirases de outras fontes, reveleram não apenas reação cruzada, mas também sugeriram que a massa molecular dessa enzima no T cruzi, estaria em tomo de 57,5 kDa. Ensaios citoquímicos (imunoflorescência) com o soro imune anti- NTPase de Toxoxplasma gondii, apresentou fluorescência contra diferentes estágios desse protozoa. No entanto, a localização subcelular dessa enzima no T cruzi não ficou muito clara, tomando-se necessário uma microscopia eletrônica para resolver esse problema. Um dado interessante e particular nesse traballio, foi a presença dessa enzima nos diversos estágios do ciclo de vida do parasita, com atividades enzimáticas diferentes para esses mesmos estágios. / ATP-diphosphohydrolases which are generally called apyrases were described for the first time some forty years ago. These are enzymes which hydrolyze di- and triphosphate nucleosides through a mechanism which seems to be sequential, without forming a high-energy enzyme intermediate. Their metabolic function is yet unknown. ATP-diphosphohydrolases have been found in a number of pro- and eucariotic cells and also in tumor cells. The vast abundance ofthese enzymes and their high enzymatic activity suggest that they are involved in important functions in the cell metabolism. In the present work we have identified and characterized the presence of a new enzyme in Trypanosoma cruzi, the agent of Chagas disease, namely an apyrase with characteristics which are similar to other apyrases already described in different organisms. A number of enzymatic assays showed that the enzyme is not inhibited by the classical inhibitors of P-type, F-type or V-type ATPases. The enzyme exhibited a marked dependence on Mg2+ and not on Ca2+. Experiments using immune sera against apyrases of other sources showed cross- reactivity and suggested that the molecular mass of the enzyme in cruzi is around 57.5 kDa. Immunofluorescence cytochemistry using antiToxoplasma gondii NTPase antibodies showed that fluorescence was present in different stages of the protozoa. However, the exact sub-cellular localization of the enzyme in T cruzi was not clear and electron microscopy will be necessary to answer this question. An interesting result of our work is the identification of the enzyme in different stages of the life cycle of the parasite, with different enzymatic activities among the stages.

Diferentes estudos têm demonstrado uma maior prevalência de rinite alérgica nas áreas urbanas, sugerindo um efeito decorrente da exposição à poluentes. Por esta razão, resolvemos estudar a relação da poluição atmosférica com os achados do citológico nasal em 11 pacientes com rinite alérgica nas quatro estações do ano e compará-los a 12 indivíduos normais. No verão, observamos um aumento significante de eosinófilos no grupo alérgico (p = 0,007) e um predomínio de células ciliadas no grupo controle (p = 0,021). No outono, houve um predomínio de neutrófilos no grupo controle (p = 0,027). No inverno, ocorreu um aumento de neutrófilos (p = 0,015) no grupo controle. Houve um aumento das células caliciformes (p = 0,019) no grupo alérgico. Na primavera, ocorreu um aumento dos neutrófilos (p = 0,025) no grupo controle / Different studies have demonstrated an increase in the prevalence of allergic rhinitis in urban areas, suggesting an effect resulting from exposure to pollutants. Therefore, we studied the relationship between atmospheric pollution and nasal cytological findings in 11 patients with allergic rhinitis during the four seasons of the year compared to 12 normal individuals. In summer, a significant increase in eosinophils was observed in the allergic group (p = 0.007) and there was a predominance of ciliated cells in the control group (p = 0.021). In autumn, neutrophils predominated in the control group (p = 0.027), and an increase in neutrophils (p = 0.015) was observed in winter. An increase in goblet cells (p = 0.019) was observed in the allergic group. In spring, there was an increase of neutrophils (p = 0.025) in the control group

Orientador: Karen Cristiane Martinez de Moraes / Banca: Camila Andrea de Oliveira / Banca: Dânia Elisa Christofoletti Mazzeo Morales / Resumo: O carcinoma hepatocelular (CHC) ocupa o 5º lugar entre os cânceres mais comum no mundo. No geral, cânceres apresentam alto risco de recorrência na forma de doença metastática. A identificação e caracterização funcional de genes associados à invasão e metástase é crucial para o desenvolvimento de novas terapias orientada contra esse processo. A proteína celular associada a migração e angiogênese (AAMP), está amplamente distribuída em muitos tipos de células com potencial migratório. Associado a isso, vários estudos apontam o papel crucial do metabolismo lipídico na iniciação das metástases. Estudos demonstram que os microRNAs (miRNAs) têm um papel central no controle das funções básicas das células. Um miRNA de grande interesse para este trabalho é o miRNA-149-3p. Em trabalhos realizados anteriormente pelo grupo de pesquisa, foi demonstrado que em células tumorais pulmonares (A549) esse miRNA foi apontado como um elemento de destaque no controle dos processos celulares de migração, pelo controle da proteína celular associada a migração e angiogênese (AAMP). Tendo em vista as doenças hepáticas, cabe avaliar os efeitos do miRNA-149-3p, considerando a existência de alvos putativos a esse miRNA, que se correlacionam diretamente com o metabolismo energético, buscando analisar pontos da via onde ocorre modulação ocasionada por este miRNA. Para as análises optou-se por trabalhar com as células SK-HEP-1 (linhagem metastática) e HEP-G2 (linhagem metabolizadora). Segundo as análises, de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hepatocellular carcinoma (CHC) ranks 5th among the most common cancers in the world. In general, cancers are at high risk of recurrence in the form of metastatic disease. The identification and functional characterization of genes associated with invasion and metastasis is crucial for the development of new therapies targeted against this process. Cellular protein associated with migration and angiogenesis (AAMP), is widely distributed in many cell types with migratory potential. Associated with this, several studies point to the crucial role of lipid metabolism in the initiation of metastases. Studies have shown that microRNAs (miRNAs) play a central role in the control of basic cell functions. A miRNA of great interest for this work is miRNA-149-3p. In previous studies by the research group, it was demonstrated that in lung tumor cells (A549) this miRNA was indicated as a prominent element in the control of cellular migration processes, by the cellular protein control associated with migration and angiogenesis (AAMP). Considering the hepatic diseases, the effects of miRNA-149-3p can be evaluated, considering the existence of putative targets for this miRNA, which correlate directly with the energetic metabolism, seeking to analyze points of the pathway where the miRNA modulation occurs. For the analyzes we opted to work with the SK-HEP-1 (metastatic line) and HEP-G2 (metabolizing line) cells. According to the analyzes, it has been shown that for both SK-HEP-1 and HEP-G2 the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

La tasa de proliferación celular resulta de un balance entre varios procesos celulares: mitosis, diferenciación celular y la muerte celular apoptótica. La regulación de este balance es fundamental durante el desarrollo embrionario, la regeneración celular y el envejecimiento, así como en distintos procesos degenerativos y patológicos. Recientemente se ha clonado un gen, designado Zac1, el cuál codifica un factor de transcripción que regula la apoptosis y el paro del ciclo celular, mediante vías independientes. Se ha determinado que en ratones adultos Zac1 se expresa en la glándula pituitaria, en el cerebro, y en distintos tejidos periféricos, así como en el tubo neural de embriones de ratón con 9 días. Distintos estudios han demostrado que Zac1 está implicado en el desarrollo tumoral, en la diabetes mellitus neonatal transitoria, en la activación y/o represión de receptores nucleares, en la coactivación de la vía apoptótica p53/Apaf-1, etc. Sin embargo, su función en el sistema nervioso central es aún desconocida.La presente tesis tiene como objetivo general, determinar el papel de Zac1 en el sistema nervioso central del ratón. En este sentido, se determinó el patrón de expresión de Zac1 durante el desarrollo embrionario del neuroectodermo y mesodermo, así como, durante la maduración del sistema nervioso central (mediante técnicas de hibridación in situ e inmunohistoquímicas). Además, se caracterizó el fenotipo de las poblaciones celulares que expresan Zac1 durante el desarrollo. En el desarroollo del neuroectodermo, los resultados obtenidos muestran que Zac1 se expresa en las células madre/progenitoras del sistema nervioso central, tanto en desarrollo como en el animal adulto (zonas germinativas). Su expresión en células diferenciadas se restringe a subpoblaciones neuronales de naturaleza GABAérgica y catecolinérgica. En el desarrollo del mesodermo, los resultados revelaron que Zac1 se expresa durante todas las fases del ciclo de vida de los condrocitos (condrogénesis) y del desarrollo de las células musculares (miogénesis), sugiriendo que Zac1 puede jugar un papel importante en el desarrollo del esqueleto y del músculo esquelético.Por otra parte, se estudió el papel de Zac1 en el sistema nervioso central, analizando el fenotipo neural de los ratones mutantes para Zac1, y estudiando el papel de Zac1 en los procesos neurodegenerativos asociados con la muerte celular apoptótica. Los animales mutantes para Zac1 presentan tasas de proliferación neural superiores a la de los animales salvajes, reforzando el papel de Zac1 en el control de la tasa de proliferación celular (ciclo celular y apoptosis). Además, los resultados obtenidos muestran que la expresión regional de Zac1 es imprescindible para la selección y/o diferenciación de distintos progenitores neurales (tales como en los oligodendrocitos, las neuronas, los astrocitos, etc). En los modelos neurodegenerativos, los resultados obtenidos muestran que Zac1 es imprescindible para activar los procesos apoptóticos que conducen a la fragmentación del DNA, apuntando a su implicación en las fases tempranas de la activación de las cascadas apoptóticas.Por tanto, los novedosos resultados obtenidos en este trabajo de tesis abren distintas líneas de enfoque sobre el papel de zac1 en el sistema nervioso central, concretamente en los procesos de proliferación y diferenciación celular, en los procesos apoptóticos y en los mecanismos de plasticidad neural que ocurren durante el desarrollo temprano del organismo, así como, tras la activación neural que se desarrolla en los procesos de neurodegeneración. / The proliferative rate results from a balance between cell division (mitosis), cell differentiation, and programmed cell death (apoptosis). Controlling this balance is fundamental during embryonic development, tissue regeneration, and aging, as well as in neurodegenerative process. In 1997, Spengler and collaborators cloned Zac1, a new zinc-finger transcription factor induces the cellular cycle arrest and the apoptosis, by means of independent routes, like p53. Zac1 is high expressed in the pituitary gland and in some brain areas. However, their role in the central nervous system had not been studied. In this way, this work, we study the pattern of expression of Zac1 during the maturation of the central nervous system (Valente and Auladell, 2001), as well as during the early development of neuroectoderm and mesoderm (Valente et al., 2005), in mice. In addition, we characterized these neural populations that express Zac1 during the development, demonstrating that initially (embryonic and postnatal mice) its expression is strong in neural cells with high mitotic activity (progenitors and stem cells) and later (adult mice) in interneurons of the GABAergic system. These results took to us to analyze if the strong expression of Zac1 in the central nervous system would be related to its apoptotic function. In this way, our results in neurodegenerative processes, as much in normal mice (Valente et al., 2004) as in mutant mice for Zac1 (Valente et al., 2005; results in preparation), show that although the expression of Zac1 is important in the induction of the apoptosis, is not their main function in the development and maturation of central nervous system, suggesting that Zac1 more would be implied in controlling the cellular cycle that in inducing the apoptosis. Moreover, a detail immunohistological study of the Zac1 mutant mice brain shows that the expression of Zac1 is important for the differentiation of the oligodendrocytes, interneurons and astrocytes, and suggest an important role of Zac1 in the differentiation and/or selection process of the progenitors/stem cells of the nervous system.

Les cèl·lules de llevat, al igual que les cèl·lules eucariotes d'organismes superiors, responen a situacions d'estrès extracel·lular activant la via de les MAP quinases, les quals transdueixen el senyal activant l'expressió de gens necessaris per a mantenir l'homeostasi cel·lular.Evidències experimentals recents ens indiquen que la nova quinasa Srk1, identificada en el nostre grup en cèl·lules de llevat, participa tant en la resposta a estrès cel·lular com en la regulació del cicle cel·lular (López-Avilés S, Grande M, Gonzalez M, Helgesen AL, Alemany V, Sánchez-Piris M, Bachs O, Millar JB, and Aligue R (2005). Inactivation of the Cdc25 phosphatase by the stress-activated Srk1 kianse in fission yeast. Mol Cell, 17, 49-59). Pel que fa al paper de la Srk1 en el cicle cel·lular normal, hem descrit que actua inhibint la transició g2/M mitjançant la fosforilació inhibidora de la fosfatsa CDc25, promovent la seva unió a una proteïna 14-3-3 (Rad24 en S. pombe) i la seva posterior exclusió del nucli tal i com s'havia descrit per a la quinasa de checkpoint Chk1. Pel que fa al paper de la Srk1 en resposta a estrès, estudis paral·lels duts a terme pel grup de la Dra. Quinn van descriure que la Srk1 és fortament induïda en resposta a estrès i que sota aquestes condicions és fosforilada de manera depenent de la MAPK Sty1. Amb la finalitat de determinar la naturalesa d'aquesta fosforilació i la seva rellevància en la resposta a estrès vam realitzar una sèrie d'assajos de fosforilació in vitro que demostren que la Srk1 és fosforilada i activada en la T463 per la MAP quinasa Sty1. A més a més, hem observat que l'activitat i estabilitat de la Srk1 depèn de la presència de la MAP quinasa, ja que en absència de Sty1 la Srk1 no és activa i es degrada via proteasoma. Per altra banda, hem establert el paper de la Srk1 en resposta a estrès: és la responsable d'aturar el cicle cel·lular en la transició G2/M per tal d'evitar que les cèl·lules continuin dividint-se fins que s'hagin adaptat a l'estrès imposat. Aquesta funció la realitza a través de la fosforilació de la Cdc25, promovent la seva unió a Rad24 i exclusió del nucli. A més a més, hem descrit que la fosforilació de la Srk1 per la MAPK és necessària per a que les cèl·lules responguin correctatment a l'estrès.Finalment, experiments recents indiquen un nou paper de la Srk1 controlant negativament la via de les MAP quinases de resposta a estrès. Hem observat que en absència de Srk1, Sty1 es manté fosforilada durant períodes de temps molt més llargs, fet que suggereix un paper en el mecanisme de silenciament de la via un cop la font d'estrès ha desaparegut o la cèl·lula s'ha adaptat a ella. Els nostres resultats indiquen que la Srk1 fosforila la T225 de la MAPKK Wis1 afectant la seva unió amb la MAPK Sty1, de manera que s'afavoreix la defosforilació per les fosfatses Pyp1 i Pyp2 i s'evita una possible reactivació de la via que resultaria tòxica per a la cèl·lula. / Activation and regulation of the Srk1 kinase in stress response in Schizosaccharomyces pombeControl of cell cycle progression by stress-activated protein kinases (SAPKs) is essential for cell adaptation to extracellular stimuli. The Schizosaccharomyces pombe SAPK Sty1/Spc1 orchestrates general changes in gene expression in response to diverse forms of cytotoxic stress. Here we show that Sty1/Spc1 is bound to its target, the Srk1 kinase, when the signaling pathway is inactive. In response to stress, Sty1/Spc1 phosphorylates Srk1 at threonine 463 of the regulatory domain, inducing both activation of Srk1 kinase, which negatively regulates cell cycle progression by inhibiting Cdc25, and dissociation of Srk1 from the SAPK, which leads to Srk1 degradation by the proteasome.Moreover, we have found a possible role for the Srk1 kinase in the inhibition of the MAPK pathway through a negative feedback mechanism. As srk1 gene is highly induced in response to several types of stress in a Sty1-dependent manner, it seems to be necessary to downregulate the pathway. Our results suggest that Srk1 phosphorylates Wis1 at threonine 225 to impair its binding with the MAPK Sty1, in order to avoid the reactivation of the stress response pathway. Therefore, Sty1 will be dephosphorylated and inactivated by the tyrosine phosphatases Pyp1 and Pyp2. The importance of these results lays on the inactivation of a MAPK pathway by a kinase.