Em estudos anteriores, mostramos que uma nanoemulsão artificial (NEm) de composição semelhante à da lipoproteína de baixa densidade se liga a receptores de lipoproteínas de baixa densidade após sua injeção na corrente sanguínea. Como tais receptores estão superexpressos em células com altas taxas de proliferação, como ocorre no cancer e na aterosclerose, a NEm pode ser utilizada como veículo para direcionar drogas a estas células, diminuindo sua toxicidade e aumentando sua ação farmacológica. Recentemente, reportamos que a associação de um derivado do agente antiproliferativo paclitaxel, o oleato de paclitaxel (OPTX) à NEm reduziu em 60% a área lesionada de aortas de coelhos submetidos à dieta rica em colesterol. Neste estudo, testamos o efeito sinérgico da terapia combinada do OPTX-NEm com um derivado do metotrexato, o di-dodecil metotrexato (DMTX), também associado à NEm. O MTX, além de sua ação antiproliferativa, também possui propriedades imunossupressoras. Coelhos machos da raça Nova Zelândia foram submetidos à dieta enriquecida com 1% de colesterol durante 8 semanas. A partir da quinta semana de consumo da dieta, 8 animais foram injetados semanalmente com solução salina por via endovenosa (grupo controle) e 8 receberam o tratamento combinado de OPTX-NEm (4mg/Kg) com DMTX-NEm (4mg/Kg), por 4 semanas. Ao final das 8 semanas, os animais foram sacrificados. As aortas dos animais foram retiradas, abertas longitudinalmente, fixadas em formalina tamponada a 10% e coradas com Escarlate R para a análise macroscópica da lesão. Os arcos aórticos foram seccionados em fragmentos de 5mm, embebidos em parafina e os cortes realizados foram corados com hematoxilina-eosina, para a determinação da área das camadas íntima e média. O tratamento combinado de OPTX-NEm com DMTX-NEm reduziu a área das lesões em 82%, em comparação ao grupo controle, e a razão da área da lesão/área total diminuiu de 0,82±0,08 para 0,08±0,06 (p<0,01). Por meio das avaliações da variação do consumo de ração, peso corporal e contagem de leucócitos totais (p>0,05), pode-se afirmar que os tratamentos não apresentaram toxicidade significativa, exceto pela queda na contagem de eritrócitos (p<0,05). Como conclusão, a quimioterapia combinada de OPTX e DMTX associados à NEm como veículo mostrou-se eficaz na redução da área de lesão aterosclerótica em coelhos e a toxicidade relacionada aos fármacos foi nitidamente reduzida. / In previous studies we have shown that an artificial nanoemulsion (NEm) that resemble LDL composition are taken-up by LDL receptors after injection into the bloodstream. As those receptors are upregulated in cells with higher proliferation rates, as occurs in cancer and atherosclerosis, NEm can be used as vehicle to direct drugs against those cells, diminishing toxicity and increasing pharmacological action. Recently, we reported that association of antiproliferative agent paclitaxel derivative, paclitaxel oleate (OPTX) to NEm reduced by 60% the lesion area of cholesterol-fed rabbits. In this study, the combined chemotherapy of OPTX-NEm with a methotrexate derivative, di-dodecil methotrexate (DMTX), also associated with NEm, was tested for synergistic effects. MTX, besides antiproliferative action, has also immunosuppressant properties. Male New Zealand rabbits were fed a 1% cholesterol diet for 60 days. Starting from day 30, 8 animals were treated with 4 weekly I.V. saline solution injections (control group) and 8 with combined OPTX-NEm (4 mg/kg) plus DMTX-NEm (4 mg/kg) for additional 30 days. On day 60, the animals were sacrificed for analysis. Aorta was excised, open longitudinally, placed in 10% buffered formalin and stained in Scarlet R for lesion macroscopic analysis. Segments of 5mm of the aortic arch were embedded in paraffin and sections were taken and stained in hematoxylin-eosin for intima and media area measurement. In comparison with controls, treatment with combined OPTX-NEm plus DMTX-NEm reduced the lesion area by 82% and the lesion/total area ratio was decreased from 0,82±0,08 to 0,08±0,06 (p<0.01). Except for decrease in erythrocyte count (p<0.05), treatments were devoid of significant toxicity, as evaluated by food intake, body weight and leucocyte count (p>0.05). In conclusion, this novel approach consisting in combined chemotherapy of OPTX and DMTX using NEm as a drug-targeting vehicle showed effective lesion area regression in rabbits and marked toxicity reduction.

Os gliomas apresentam comportamento amplamente infiltrativo e a invasão para o tecido cerebral sadio adjacente ao tumor o tornam um grande desafio para intervenções clínicas agressivas. Estudos recentes dos mecanismos de invasão de gliomas sugerem que as metaloproteinases (MMPs) desempenham papel crítico neste processo. As MMPs são super-expressas em quase todos os tumores humanos e vastos dados pré-clínicos as apontam como contribuintes do desenvolvimento maligno; portanto, a inibição de atividade de MMPs poderia ser adotada como uma estratégia de terapêutica anti-câncer. A atividade inibitória de MMP-2 e MMP-9 do extrato liofilizado da raiz de P. umbellata foi avaliada em estudos prévios de nosso laboratório por Ropke e colaboradores. Assim, esta dissertação teve como objetivo, primeiramente, explorar a citotoxicidade do extrato de P. umbellata e posteriormente, a avaliar o efeito do 4-neroridilcatecol (o princípio ativo isolado do extrato) quanto à citotoxicidade e potencial de inibição de MMPs durante o processo de invasão de duas linhagens de glioma humano, caracterizadas pelos diferentes níveis de invasividade. Os resultados revelam os índices de citotoxicidade do extrato bruto da raiz de P. umbellata e do composto 4-NC presente nesse extrato. Ensaios de invasão tumoral in vitro em concentrações não citotóxicas mostraram que há forte inibição desse processo pelo composto. Interessantemente, o 4-NC não alterou significativamente a atividade e expressões gênicas e protéicas de MMPs envolvidas na invasão deste tipo de tumor, nem de seus reguladores. O ensaio de fragmentação do DNA nos indica que a morte das células é, em parte, devido à apoptose, além da participação do processo autofágico. Ensaios analisando a expressão de proteínas e genes envolvidos na via de autofagia mostraram que há indução deste processo pelo composto estudado. Quando este processo é inibido farmacologicamente há incremento na morte celular causada pelo 4-NC. Considerando que em câncer, a autofagia é um processo essencial na modulação da resistência a quimioterápicos, descrevemos aqui, que 4-NC, a exemplo de seu poder citotóxico em melanomas, atua no processo invasivo de gliomas e induz morte celular além de desencadear o processo autofágico. / Gliomas present extensive invasive behavior and the invasion to healthy adjacent neural tissue makes this type of tumor a great challenge for aggressive clinical intervention. Recent studies concerning glioma invasion mechanisms suggest that metalloproteinases (MMPs) have a critical role in this process. MMPs are overexpressed in almost all types of human tumors and many pre-clinical data point to them as functional enhancers to malignant development; then, the inhibition of MMP activity could be adopted as an anti-cancer therapeutic strategy. P. umbellate root extract inhibitory activity over MMPs-2 and 9 was previously evaluated in studies from our group by Ropke et al. Thus, this dissertation has as an objective to evaluate the cytotoxic effect of 4-nerolidylcatechol (a compound purified from the P. umbellate extract), and its potential for MMP inhibition during the invasive process of two human glioma cell lines, characterized for their different invasive levels. Our results show the cytotoxic levels of the crude extract from the root of P. umbellate and from the 4-NC isolated from the extract. In vitro tumor invasion assay in non-cytotoxic drug concentrations indicate a strong inhibition of this process by the compound. Interestingly, 4-NC did not significantly alter enzyme activity, genetic or proteic expression of the MMPs involved in glioma invasion, or its regulators. The DNA fragmentation assay shows that cells die, in part, due to apoptosis, but autophagy pathway is also involved in cell death. Assays showing expression of proteins and genes involved in the autophagy pathway showed an increase of this process by the compound studied. Pharmacological inhibition of this process leads to an increase in cell death caused by 4-NC. Considering that in cancer, autophagy plays an essential role in the modulation of chemoresistance, we describe here that 4-NC, as described previously for melanomas, acts on glioma invasive process, induces cell death and is capable of up-regulating autophagic process.

A fração plasmática da lipoproteína de baixa densidade (LDL) é formada por partículas de diferentes tamanhos, carga e densidade. Baseada na diferença de carga das partículas, a LDL pode ser subfracionada em LDL nativa (nLDL) e LDL eletronegativa (LDL&#8254;). A LDL&#8254; está presente no plasma e possui propriedades aterogênicas e pró-inflamatórias, assim como, possui menor concentração de antioxidantes lipossolúveis, maior concentração de dienos conjugados, alterações conformacionais da apoliproteína B-100 e menor afinidade para o receptor da LDL em comparação com a nLDL. Concentrações elevadas de LDL&#8254; têm sido observadas em pacientes com alto risco para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, incluindo hipercolesterolemia familiar, diabetes. Considerando-se que os mecanismos envolvidos na formação endógena da LDL&#8254; ainda não estão elucidados, neste estudo foi investigado o efeito da glicoxidação e da lipólise sobre a partícula LDL para avaliar a contribuição destes processos para a formação da LDL&#8254; in vitro e in vivo. As modificações químicas da LDL e da imunorreatividade com anticorpo monoclonal anti-LDL&#8254; foi analisada antes e depois da incubação do plasma com lipoproteína lipase (LPL) ou fosfolipase A2 (PLA2), assim como mimetizando-se a lipólise intravascular. Além disso, na lipólise in vivo foi monitorado no periodo pós-prandial em indivíduos normolipidêmicos para investigar a LDL&#8254; formada endogenamente. A contribuição da glicoxidação para a geração de LDL&#8254; foi avaliada in vitro pela incubação da LDL com glicose. O efeito da glicoxidação endógena foi monitorada pela medida, ex-vivo, dos os produtos de glicação avançada (AGEs) e LDL&#8254; no plasma de pacientes diabéticos tipo I (DM I), tipo II (DM II) e indivíduos intolerantes à glicose (IGT). O processo de glicação não enzimática, in vitro, resultou no aumento da concentração de LDL&#8254;. Os indivíduos dos grupos DM I, DM II e IGT apresentaram concentrações plasmáticas elevadas de LDL&#8254; em relação aos seus respectivos controles, enquanto observou-se aumento de AGEs apenas nos grupos DM I e DM II. O processo de lipólise in vitro mediado pela LPL e PLA2, induziu aumento significante da concentração de LDL&#8254;; entretanto, somente pela ação da LPL foi associada com modificações oxidativas. Em concordância, o processo de lipólise in vivo (pós-prandial) também promoveu aumento significativo da concentração de LDL&#8254; associado com modificações oxidativas. Conclusão, nossos dados mostram que, glicoxidação e de lipólise, poderiam contribuir na formação da LDL&#8254; in vivo. / The low density lipoprotein (LDL) fraction in blood plasma is formed by particles with different size, charge and density. Based on particle charge differences, LDL fraction may be separated into native (nLDL) and electronegative (LDL&#8254;) subfractions. LDL&#8254; is present in blood plasma and has atherogenic and proinflammatory properties, as well as, lower concentrations of lipid soluble antioxidants, higher content of conjugated dienes, conformational alterations of apolipoprotein B-100 and lower affinity by LDL receptor in comparison to nLDL. Increased LDL&#8254; concentrations have been found in subjects with high risk for cardiovascular diseases, including those with familiar hypercholesterolemia, diabetes and hyperlipidemia. Considering that the mechanisms involved in the endogenous generation of LDL&#8254; are not yet well elucidated, in this study the effect of glucoxidation and lipolysis of LDL particles was investigated in order to evaluate their contribution to in vitro e in vivo LDL&#8254; formation. LDL chemical modifications and its reactivity towards a monoclonal anti-LDL&#8254; antibody were analyzed before and after incubation of either plasma or LDL with lipoprotein lipase (LPL) or phospholipase A2 (PLA2) as an in vitro lipolysis biomimetic system. Moreover, in vivo lipolysis was monitored at the post-prandial period in normolipidemic subjects to investigate LDL&#8254; endogenously formed. The contribution of glucoxidation to LDL&#8254; generation was evaluated in vitro by incubating LDL with glucose. The effect of endogenous glucoxidation was monitored by ex-vivo measurement of advanced glycation end products (AGES) and LDL&#8254; in blood plasma of type I (DM I) and II (DM II) diabetic patients, as well as, in subjects with glucose intolerance (IGT). The in vitro non-enzymatic glycation resulted in increased LDL&#8254; formation. The DM I, DM II and IGT groups showed higher LDL&#8254; concentrations than the respective control groups, while AGEs were increased only in DM I e DM II groups. The in vitro lipolysis mediated by LPL and PLA2 induced a significant increase of LDL&#8254;; however, only LPL action was also associated to LDL oxidative modification. In accordance, in vivo lipolysis (post-prandial) also promoted a significant increase of LDL&#8254; levels associated to LDL oxidative modification. In conclusion, our data show that both, glycoxidation and lipolysis, could contribute to in vivo LDL&#8254;generation.

Introdução: O risco de transmissão de agentes infeciosos por transfusão sangüínea é maior nos países em desenvolvimento. A hemoterapia na América Latina, embora tenha conquistado grandes avanços tecnológicos e políticos nos últimos anos, ainda apresenta diversos problemas que comprometem a qualidade dos resultados dos testes de triagem sorológica de doadores. A confiabilidade dos resultados emitidos pelos laboratórios que realizam testes de triagem sorológica de bancos de sangue pode ser determinada através de programas de avaliação externa, utilizando multipainéis específicos. Objetivos: Objetivou-se produzir multipainéis específicos para programas de avaliação externa em testes de triagem sorológica de bancos de sangue e determinar a qualidade dos resultados obtidos em 21 centros de referência da América Latina. Resultados: A seleção criteriosa da matéria-prima e a caracterização das amostras foram etapas importantes na determinação das características dos soros que constituíram os Multipainéis. Foram analisados os resultados de 5 programas, realizados no período de 1997 a 2000. A média da taxa de resultados falso-negativos (RFN) foi de 0,7% para anti-HIV, 2,89% para HBsAg, 4% para anti-H Bc, 10,7% para anti-HTLVI/II, 1,07% para anti-HCV, 3,22% para doença de Chagas e 6,25% para Sífilis. A média da taxa de resultados falsopositivos (RFP) variou de 0,73% para doença de Chagas a 5,28 % para antiHCV. Os resultados foram analisados sob diversos prismas, o desempenho de cada centro de referência, a concordância nos resultados das amostras, os \"kits\" utilizados e os parâmetros. Conclusão: Um programa sistemático como o aqui apresentado mostrou pontos importantes dentro do processo de triagem sorológica e auxiliou a elucidar algumas causas de erros. Houve uma melhora gradativa na qualidade dos resultados obtidos nos programas, do ano de 1997 para 1999. Quanto maior a proporção de amostras positivas, maior é a chance de laboratórios cometerem erros, como foi observado no multipainel do quinto programa, que teve aumento da taxa de RFN e RFP, evidenciando a existência de falhas no processo. A participação contínua nesses programas pareceu ser importante para o monitoramento das atividades realizadas no processo de triagem sorológica de doadores. / Background: In developing countries, the risk of acquiring infectious disease through blood transfusion is higher than developed countries. Although in the last 10 years, blood safety has improved in Latin America in terms of technology and politics, several problems remained unsolved that compromise the quality of the results obtained by the laboratories that perform infectious diseases screening tests. Externai evaluation program, using specific multipanel, may be an important tool to evaluate a laboratory that perform serological screening tests. Externai quality control program for blood bank serological test had not been previously performed in Latin America. Objectives: To develop the technology to produce panel of sera reactive to blood born infectious diseases and to determine the quality of the results of 21 reference centers of Latin America. Results: The criteria to select the raw material and to characterize the sample were important to determine the overall quality of the pane!. Using the Multipanel, tive Externai Quality Control programs were organized during 1997 to 2000 with 21 reference laboratories in 16 countries in Latin America. The mean rate of the false negative results was 0,7% for ant-HIV test, 2.89% for HBsAg, 4% for ant-HBc, 10.7% for ant-HTLVI/II, 1.07% for ant-HCV, 3.22% for Chagas diseases, and 6.25% for Syphilis. The mean rate of false positive results varied from 0.73% for Chagas diseases to 5.28% to ant-HCV. The results were also analyzed in terms of performance of each reference center and by the manufacture of the kits used. Conclusion: The program could provide clues about sources of common errors and was an important tool to validate the laboratory screening processo The quality of the results improved from the 1 st to the 4th programo The chance of doing errors was higher, when the proportion of positive samples were higher, as observed in the 5th program that registered elevated index of false positive and false negative results. The continuing participation in this kind of program seemed to be important to monitor the activities performed by the blood bank screening laboratory.

A fração plasmática da lipoproteína de baixa densidade (LDL) é formada por partículas de diferentes tamanhos, carga e densidade. Baseada na diferença de carga das partículas, a LDL pode ser subfracionada em LDL nativa (nLDL) e LDL eletronegativa (LDL&#8254;). A LDL&#8254; está presente no plasma e possui propriedades aterogênicas e pró-inflamatórias, assim como, possui menor concentração de antioxidantes lipossolúveis, maior concentração de dienos conjugados, alterações conformacionais da apoliproteína B-100 e menor afinidade para o receptor da LDL em comparação com a nLDL. Concentrações elevadas de LDL&#8254; têm sido observadas em pacientes com alto risco para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, incluindo hipercolesterolemia familiar, diabetes. Considerando-se que os mecanismos envolvidos na formação endógena da LDL&#8254; ainda não estão elucidados, neste estudo foi investigado o efeito da glicoxidação e da lipólise sobre a partícula LDL para avaliar a contribuição destes processos para a formação da LDL&#8254; in vitro e in vivo. As modificações químicas da LDL e da imunorreatividade com anticorpo monoclonal anti-LDL&#8254; foi analisada antes e depois da incubação do plasma com lipoproteína lipase (LPL) ou fosfolipase A2 (PLA2), assim como mimetizando-se a lipólise intravascular. Além disso, na lipólise in vivo foi monitorado no periodo pós-prandial em indivíduos normolipidêmicos para investigar a LDL&#8254; formada endogenamente. A contribuição da glicoxidação para a geração de LDL&#8254; foi avaliada in vitro pela incubação da LDL com glicose. O efeito da glicoxidação endógena foi monitorada pela medida, ex-vivo, dos os produtos de glicação avançada (AGEs) e LDL&#8254; no plasma de pacientes diabéticos tipo I (DM I), tipo II (DM II) e indivíduos intolerantes à glicose (IGT). O processo de glicação não enzimática, in vitro, resultou no aumento da concentração de LDL&#8254;. Os indivíduos dos grupos DM I, DM II e IGT apresentaram concentrações plasmáticas elevadas de LDL&#8254; em relação aos seus respectivos controles, enquanto observou-se aumento de AGEs apenas nos grupos DM I e DM II. O processo de lipólise in vitro mediado pela LPL e PLA2, induziu aumento significante da concentração de LDL&#8254;; entretanto, somente pela ação da LPL foi associada com modificações oxidativas. Em concordância, o processo de lipólise in vivo (pós-prandial) também promoveu aumento significativo da concentração de LDL&#8254; associado com modificações oxidativas. Conclusão, nossos dados mostram que, glicoxidação e de lipólise, poderiam contribuir na formação da LDL&#8254; in vivo. / The low density lipoprotein (LDL) fraction in blood plasma is formed by particles with different size, charge and density. Based on particle charge differences, LDL fraction may be separated into native (nLDL) and electronegative (LDL&#8254;) subfractions. LDL&#8254; is present in blood plasma and has atherogenic and proinflammatory properties, as well as, lower concentrations of lipid soluble antioxidants, higher content of conjugated dienes, conformational alterations of apolipoprotein B-100 and lower affinity by LDL receptor in comparison to nLDL. Increased LDL&#8254; concentrations have been found in subjects with high risk for cardiovascular diseases, including those with familiar hypercholesterolemia, diabetes and hyperlipidemia. Considering that the mechanisms involved in the endogenous generation of LDL&#8254; are not yet well elucidated, in this study the effect of glucoxidation and lipolysis of LDL particles was investigated in order to evaluate their contribution to in vitro e in vivo LDL&#8254; formation. LDL chemical modifications and its reactivity towards a monoclonal anti-LDL&#8254; antibody were analyzed before and after incubation of either plasma or LDL with lipoprotein lipase (LPL) or phospholipase A2 (PLA2) as an in vitro lipolysis biomimetic system. Moreover, in vivo lipolysis was monitored at the post-prandial period in normolipidemic subjects to investigate LDL&#8254; endogenously formed. The contribution of glucoxidation to LDL&#8254; generation was evaluated in vitro by incubating LDL with glucose. The effect of endogenous glucoxidation was monitored by ex-vivo measurement of advanced glycation end products (AGES) and LDL&#8254; in blood plasma of type I (DM I) and II (DM II) diabetic patients, as well as, in subjects with glucose intolerance (IGT). The in vitro non-enzymatic glycation resulted in increased LDL&#8254; formation. The DM I, DM II and IGT groups showed higher LDL&#8254; concentrations than the respective control groups, while AGEs were increased only in DM I e DM II groups. The in vitro lipolysis mediated by LPL and PLA2 induced a significant increase of LDL&#8254;; however, only LPL action was also associated to LDL oxidative modification. In accordance, in vivo lipolysis (post-prandial) also promoted a significant increase of LDL&#8254; levels associated to LDL oxidative modification. In conclusion, our data show that both, glycoxidation and lipolysis, could contribute to in vivo LDL&#8254;generation.

Introdução: O risco de transmissão de agentes infeciosos por transfusão sangüínea é maior nos países em desenvolvimento. A hemoterapia na América Latina, embora tenha conquistado grandes avanços tecnológicos e políticos nos últimos anos, ainda apresenta diversos problemas que comprometem a qualidade dos resultados dos testes de triagem sorológica de doadores. A confiabilidade dos resultados emitidos pelos laboratórios que realizam testes de triagem sorológica de bancos de sangue pode ser determinada através de programas de avaliação externa, utilizando multipainéis específicos. Objetivos: Objetivou-se produzir multipainéis específicos para programas de avaliação externa em testes de triagem sorológica de bancos de sangue e determinar a qualidade dos resultados obtidos em 21 centros de referência da América Latina. Resultados: A seleção criteriosa da matéria-prima e a caracterização das amostras foram etapas importantes na determinação das características dos soros que constituíram os Multipainéis. Foram analisados os resultados de 5 programas, realizados no período de 1997 a 2000. A média da taxa de resultados falso-negativos (RFN) foi de 0,7% para anti-HIV, 2,89% para HBsAg, 4% para anti-H Bc, 10,7% para anti-HTLVI/II, 1,07% para anti-HCV, 3,22% para doença de Chagas e 6,25% para Sífilis. A média da taxa de resultados falsopositivos (RFP) variou de 0,73% para doença de Chagas a 5,28 % para antiHCV. Os resultados foram analisados sob diversos prismas, o desempenho de cada centro de referência, a concordância nos resultados das amostras, os \"kits\" utilizados e os parâmetros. Conclusão: Um programa sistemático como o aqui apresentado mostrou pontos importantes dentro do processo de triagem sorológica e auxiliou a elucidar algumas causas de erros. Houve uma melhora gradativa na qualidade dos resultados obtidos nos programas, do ano de 1997 para 1999. Quanto maior a proporção de amostras positivas, maior é a chance de laboratórios cometerem erros, como foi observado no multipainel do quinto programa, que teve aumento da taxa de RFN e RFP, evidenciando a existência de falhas no processo. A participação contínua nesses programas pareceu ser importante para o monitoramento das atividades realizadas no processo de triagem sorológica de doadores. / Background: In developing countries, the risk of acquiring infectious disease through blood transfusion is higher than developed countries. Although in the last 10 years, blood safety has improved in Latin America in terms of technology and politics, several problems remained unsolved that compromise the quality of the results obtained by the laboratories that perform infectious diseases screening tests. Externai evaluation program, using specific multipanel, may be an important tool to evaluate a laboratory that perform serological screening tests. Externai quality control program for blood bank serological test had not been previously performed in Latin America. Objectives: To develop the technology to produce panel of sera reactive to blood born infectious diseases and to determine the quality of the results of 21 reference centers of Latin America. Results: The criteria to select the raw material and to characterize the sample were important to determine the overall quality of the pane!. Using the Multipanel, tive Externai Quality Control programs were organized during 1997 to 2000 with 21 reference laboratories in 16 countries in Latin America. The mean rate of the false negative results was 0,7% for ant-HIV test, 2.89% for HBsAg, 4% for ant-HBc, 10.7% for ant-HTLVI/II, 1.07% for ant-HCV, 3.22% for Chagas diseases, and 6.25% for Syphilis. The mean rate of false positive results varied from 0.73% for Chagas diseases to 5.28% to ant-HCV. The results were also analyzed in terms of performance of each reference center and by the manufacture of the kits used. Conclusion: The program could provide clues about sources of common errors and was an important tool to validate the laboratory screening processo The quality of the results improved from the 1 st to the 4th programo The chance of doing errors was higher, when the proportion of positive samples were higher, as observed in the 5th program that registered elevated index of false positive and false negative results. The continuing participation in this kind of program seemed to be important to monitor the activities performed by the blood bank screening laboratory.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Debora Vieira Lopes.pdf: 3694828 bytes, checksum: 3e94381bb182e551bbc0c29ed0f62ba5 (MD5) Previous issue date: 2009-08-14 / The urinary acidifiers as ammonium chloride and citric acid have been used in the treatment of urinary tract diseases. These illnesses lead to important losses to the brazilian and worldwide swine production. In the present work the hematological and biochemical parameters of sows getting citric acid and ammonium chloride in the food were evaluated. In the present study 48 animals were distributed into 6 groups: group sc-positive control, group nc-negative control, group sac-sows with urinary infection getting citric acid in the food, group sca-sows with urinary infection getting ammonium chloride in the food, nac-sows without urinary infection getting citric acid in the food and group ncasows without urinary infection getting chloride ammonium in the food. Significant differences were observed between the group of animals with urinary infection and the group of animals without urinary infection regarding the medium values of serum creatinine, hemoglobin, hematocrit and MCHC. The medium values of creatinine, hemoglobin and hematrocit were higher in the group of animals with urinary infection. The value of MCHC was higher in the group of animals without urinary infection. Regarding the different treatments, it was observed that the citric acid was able to increase the values of serum albumin in animals without urinary infection, to reduce the value of MCV and the white blood cells counting as well as it increased the value of MCHC in the group of animals with urinary infection and only the value of MCHC in this group was not according to the reference values. The ammonium chloride reduced significantly the values of hemoglobin and hematocrit in animals with and without urinary infection, as well as it reduced the MCV of animals with urinary infection, where the values were according to the reference values. The conclusion is that the presence of urinary infection changed the values of serum creatinine and that the use of citric acid and ammonium chloride didn t change significantly the hematological and biochemical parameters of sows with and without urinary infection. / Os acidificantes urinários tais como o cloreto de amônio e ácido cítrico vêm sendo largamente utilizados no controle de doenças do trato urinário. Estas enfermidades levam a prejuízos relevantes para a suinocultura brasileira e mundial. No presente trabalho foram estudados os parâmetros hematológicos e bioquímicos de matrizes suínas sem infecção urinária e com infecção urinária recebendo ácido cítrico ou cloreto de amônio. Foram utilizados 48 animais distribuídos em seis grupos: grupo sc-controle positivo, grupo nc-controle negativo grupo sac-matrizes com infecção urinária recebendo ácido cítrico, grupo scamatrizes com infecção urinária recebendo cloreto de amônio, grupo nac-matrizes sem infecção urinária recebendo ácido cítrico e grupo nca-matrizes sem infecção urinária recebendo cloreto de amônio. Comparando-se os grupos de animais com infecção e sem infecção urinária, foram observadas diferenças estatísticas significativas quanto aos valores médios de creatinina sérica, hemoglobina, hematócrito e concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM). Os valores médios de creatinina, hemoglobina, hematócrito e CHCM foram superiores no grupo de animais com infecção urinária. Com relação aos ratamentos, verificou-se que o ácido cítrico fornecido na ração aumentou significativamente o valor da albumina sérica, reduziu significativamente o valor do volume corpuscular médio (VCM) e a contagem de leucócitos totais no grupo de animais sem infecção urinária, bem como aumentou significativamente o valor do CHCM no grupo de animais com infecção urinária, sendo que apenas o último estava fora dos valores de referência. O cloreto de amônio reduziu significativamente os valores de hemoglobina e hematócrito em animais com e sem infecção urinária, bem como reduziu o VCM de animais com infecção urinária, sendo que todos os valores permaneceram dentro dos valores de referência. Conclui-se que a presença de infecção urinária elevou os valores de creatinina sérica e que a utilização de ácido cítrico e cloreto de amônio não alterou significativamente os valores bioquímicos e hematológicos de matrizes suínas em produção com e sem infecção urinária.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-12-21T08:12:55Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laura Garcia Vila - 2015.pdf: 2794084 bytes, checksum: ded55da11b6147f4147cce56cf18ec53 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-12-21T08:16:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laura Garcia Vila - 2015.pdf: 2794084 bytes, checksum: ded55da11b6147f4147cce56cf18ec53 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-21T08:16:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laura Garcia Vila - 2015.pdf: 2794084 bytes, checksum: ded55da11b6147f4147cce56cf18ec53 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-09-18 / Restraint induced stress in wild birds can be life threatening. Research for alternatives that minimize those risks iswell justified, sedation beinga suitable option. In the present study midazolam sedation was tested in two species of wild birds. Twenty-one blue-and-yellow macaws were randomly assigned in two groups, one receiving saline solution (control group) and the other approximately 7.5 mg/kg of midazolam (midazolam group) via an intranasal spray, in two different moments with a washout period of two months. Fourteen greater rheas were submitted to a similar protocol; however, the midazolam dosage was 1 mg/kg via an intramuscular route. After 10 min following sedative/saline application, physical exam (heart rate, respiratory rate and temperature) and venous blood collectionwere performed. Blood samples were processed for hemogasometry (only with macaws), hematology and biochemistry analyses. In macaws, midazolam application produced sedation; lower values for physical exam parameters and significantly (p<0.05) lower lactate, base excess and chloride concentrations, while pCO2, ctCO2 and HCO3 values were higher when compared with control group. In rheas, the only significant difference was the respiratory rate, being higher in the midazolam group. In macaws midazolam attenuated metabolic acidosis derived from restraint, showing a positive effect on stress reduction, proving an effective and safe alternative. In response to midazolam rheas showed inconstant reaction depending among individuals, with no reliable effect on stress restraint reduction. / O estresse produzido pela contenção em aves silvestres pode resultar em graves complicações. A procura por alternativas que minimizem tais riscos está plenamente justificada, sendo uma delas, a sedação. No presente estudo a sedação com midazolam foi testada em duas espécies de aves silvestres. Vinte e uma araras canindé foram randomizadas e divididas em dois grupos, um recebeu solução salina (grupo controle) e o outro aproximadamente 7,5 mg/kg de midazolam (grupo midazolam) via spray intranasal, em dois períodos de tempo diferentes, separados por dois meses. Catorze emas foram submetidas a um protocolo semelhante, porém a dose do midazolam foi 1 mg/kg,via intramuscular. Após 10 min do momento da aplicação do sedativo/salina foi feita a avaliação física (frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura) e a colheitado sangue por punção venosa. Foi realizada hemogasometria (somente nas araras), hematologia e bioquímica das amostras sanguíneas. Nas araras, a aplicação do midazolam produziu sedação, valores mais baixos para os parâmetros de avaliação física e concentrações significativamente (p<0.05) mais baixas de lactato, excesso de base e cloro enquanto que os valores de pCO2, ctCO2 e HCO3 foram mais elevados em comparação ao grupo controle. Nas emas, a única diferença significativa observada foi na frequência respiratória, sendo maior no grupo midazolam. Nas araras, o midazolam atenuou a acidose metabólica derivada da contenção, apresentando efeito na redução do estresse, mostrando-se uma alternativa segura e efetiva. A resposta ao midazolam nas emas variou em função do indivíduo,sem efeito consistente na redução do estresse.

Em estudos anteriores, mostramos que uma nanoemulsão artificial (NEm) de composição semelhante à da lipoproteína de baixa densidade se liga a receptores de lipoproteínas de baixa densidade após sua injeção na corrente sanguínea. Como tais receptores estão superexpressos em células com altas taxas de proliferação, como ocorre no cancer e na aterosclerose, a NEm pode ser utilizada como veículo para direcionar drogas a estas células, diminuindo sua toxicidade e aumentando sua ação farmacológica. Recentemente, reportamos que a associação de um derivado do agente antiproliferativo paclitaxel, o oleato de paclitaxel (OPTX) à NEm reduziu em 60% a área lesionada de aortas de coelhos submetidos à dieta rica em colesterol. Neste estudo, testamos o efeito sinérgico da terapia combinada do OPTX-NEm com um derivado do metotrexato, o di-dodecil metotrexato (DMTX), também associado à NEm. O MTX, além de sua ação antiproliferativa, também possui propriedades imunossupressoras. Coelhos machos da raça Nova Zelândia foram submetidos à dieta enriquecida com 1% de colesterol durante 8 semanas. A partir da quinta semana de consumo da dieta, 8 animais foram injetados semanalmente com solução salina por via endovenosa (grupo controle) e 8 receberam o tratamento combinado de OPTX-NEm (4mg/Kg) com DMTX-NEm (4mg/Kg), por 4 semanas. Ao final das 8 semanas, os animais foram sacrificados. As aortas dos animais foram retiradas, abertas longitudinalmente, fixadas em formalina tamponada a 10% e coradas com Escarlate R para a análise macroscópica da lesão. Os arcos aórticos foram seccionados em fragmentos de 5mm, embebidos em parafina e os cortes realizados foram corados com hematoxilina-eosina, para a determinação da área das camadas íntima e média. O tratamento combinado de OPTX-NEm com DMTX-NEm reduziu a área das lesões em 82%, em comparação ao grupo controle, e a razão da área da lesão/área total diminuiu de 0,82±0,08 para 0,08±0,06 (p<0,01). Por meio das avaliações da variação do consumo de ração, peso corporal e contagem de leucócitos totais (p>0,05), pode-se afirmar que os tratamentos não apresentaram toxicidade significativa, exceto pela queda na contagem de eritrócitos (p<0,05). Como conclusão, a quimioterapia combinada de OPTX e DMTX associados à NEm como veículo mostrou-se eficaz na redução da área de lesão aterosclerótica em coelhos e a toxicidade relacionada aos fármacos foi nitidamente reduzida. / In previous studies we have shown that an artificial nanoemulsion (NEm) that resemble LDL composition are taken-up by LDL receptors after injection into the bloodstream. As those receptors are upregulated in cells with higher proliferation rates, as occurs in cancer and atherosclerosis, NEm can be used as vehicle to direct drugs against those cells, diminishing toxicity and increasing pharmacological action. Recently, we reported that association of antiproliferative agent paclitaxel derivative, paclitaxel oleate (OPTX) to NEm reduced by 60% the lesion area of cholesterol-fed rabbits. In this study, the combined chemotherapy of OPTX-NEm with a methotrexate derivative, di-dodecil methotrexate (DMTX), also associated with NEm, was tested for synergistic effects. MTX, besides antiproliferative action, has also immunosuppressant properties. Male New Zealand rabbits were fed a 1% cholesterol diet for 60 days. Starting from day 30, 8 animals were treated with 4 weekly I.V. saline solution injections (control group) and 8 with combined OPTX-NEm (4 mg/kg) plus DMTX-NEm (4 mg/kg) for additional 30 days. On day 60, the animals were sacrificed for analysis. Aorta was excised, open longitudinally, placed in 10% buffered formalin and stained in Scarlet R for lesion macroscopic analysis. Segments of 5mm of the aortic arch were embedded in paraffin and sections were taken and stained in hematoxylin-eosin for intima and media area measurement. In comparison with controls, treatment with combined OPTX-NEm plus DMTX-NEm reduced the lesion area by 82% and the lesion/total area ratio was decreased from 0,82±0,08 to 0,08±0,06 (p<0.01). Except for decrease in erythrocyte count (p<0.05), treatments were devoid of significant toxicity, as evaluated by food intake, body weight and leucocyte count (p>0.05). In conclusion, this novel approach consisting in combined chemotherapy of OPTX and DMTX using NEm as a drug-targeting vehicle showed effective lesion area regression in rabbits and marked toxicity reduction.

INTRODUÇÃO: O uso da laserterapia concernente ao estímulo da formação óssea e da revascularização tem tornado objeto de estudo na área de saúde. OBJETIVO: O presente trabalho in vivo teve como objetivo avaliar quantitativamente os efeitos do laser de baixa potência (LBP) na remodelação óssea após a expansão rápida da maxila (ERM) em ratos jovens, através da expressão do RNAm dos genes RANK, RANK-L, Osteoprotegerina (OPG), e o Fator do Crescimento do Endotélio Vascular (VEGF) bem como a análise histológica. MATERIAL E MÉTODO: Utilizou-se 105 ratos Wistar (Rattus norvegicus, albinus), machos, divididos em 4 grupos: Grupo Controle (n=10) animais não tratados (sem ERM e sem aplicação do LBP; Grupo Experimental I (n=40) animais que tiveram apenas a ERM; sendo 25 animais sacrificados nos dias 1, 2, 3, 7, e 10 dias após a ERM para análise com RT-PCR e western blotting e 15 animais foram sacrificados nos dias 0, 7 e 10 dias para análise histológica; Grupo Experimental II (n=40) animais que tiveram ERM + LBP com diodo de Ga-Al-As (Gálio-Alumínio-Arsênio:160J/cm2) no primeiro dia do experimento; os animais foram sacrificados nos mesmos períodos que o Grupo Experimental I; Experimental III (n=15) animais que receberam 3 aplicações de LBP após ERM, totalizando 480J/cm2. Os animais foram sacrificados nos dias 3, 7 e 10 dias após a ERM para análise com RT-PCR e western blotting. A extração do RNAt da maxila foi feita com trizol. A síntese da fita de DNA complementar (cDNA) foi feita a partir de 1&#181;g de RNA, por meio de uma reação de transcrição reversa, com a utilização da enzima transcriptase reversa, e a análise da expressão gênica foi realizada pela reação em cadeia pela polimerase em tempo real (qRT-PCR) no sistema TaqMan®. A análise protéica do VEGF, RANK, RANK-L e OPG foi realizada por meio da técnica western blotting. O teste de variância (ANOVA) foi usado comparando os grupos entre si e inter-grupos seguida pelo teste complementar de Tukey, com nível de significância de 5%. RESULTADOS: A separação dos incisivos induzida pela ERM foi semelhante nos grupos experimentais I e II, o espaço entre os incisivos foi mantido durante toda a fase experimental, e não houve diferença significativa entre os grupos laser e não-laser (p<0,05), demostramdo a eficiência da metodologia usada para abertura da sutura palatina mediana. Para o grau de abertura da sutura, foi quantificada, a área de abertura sutural em todos os grupos após a ERM, e observou-se aumentou significativo comparado com o grupo controle, sendo que no grupo de laser o grau de abertura final foi significativamente menor no grupo laser do que não-laser aos 7 e 14 dias, mostrando que a formação óssea no grupo laser foi mais acelerada, o que pode ser comprovado com os dados histológicos, demonstrando que o laser acelerou o processo de formação óssea. Em relação à expressão relativa dos genes RANK/RANK-L/OPG tanto o grupo com laser quanto o sem-laser mostraram um aumento significativo da expressão comparado ao grupo controle (p < 0,05), principalmente nos períodos iniciais e quando comparou-se o grupo irradiado com o não irradiado observou-se que no grupo com laser houve uma maior expressão desses genes do que no grupo sem laser. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que a formação óssea após a ERM foi observada dentro da sutura palatina e o uso do LBP influenciou a formação óssea acelerando o processo de osteogênese durante a fase inicial do experimento. / BACKGROUND: The use of low-level laser terapy with bone stimulation has been studied in the health science field. OBJECTIVE: The aim of the present in vivo study was to quantitatively evaluate the effects of low-level laser therapy (LLLT) on bone healing after rapid maxillary expansion (RME) in young rats, and the RANK, RANK-L, OPG and VEGF gene expressions; and histological analyses. MATERIALS and METHODS: A total of 105 rats Wistar (Rattus norvegicus, albinus), male were assigned tofour groups: Control Group (n=10) with no treatment (no RME and no LLLT); Experimental I (n=40) with RME without LLLT: 25 animals were euthanized at days 1, 2, 3, 7 and 10 after RME for real time reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting analysis and 15 animals were euthanized at days 0, 7 and 10 after RME for histological evaluation; Experimental II (n=40) with RME and LLLT (160J/cm2): animals were euthanized at the same periods described for Experimental I. Experimental III (n=15) with RME and 3 aplication of LLLT (480J/cm2): animals were euthanized at days 3, 7 and 10 after RME for real time reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting analysis. Part of the sample was kept at -80&#176;C for genes expression and protein production, and another for histological analysis. The total RNA was extracted using trizol. Complementary DNA (cDNA) was synthesized using 1&#181;g of RNA in a reverse transcription reaction and for genes expression we used RT-PCR in the TaqMan® system. The RANK, RANK-L, OPG, and VEGF and proteins analysis was made using western blotting. The ANOVA and Tukey tests were used and significance level was set at 5%. RESULTS: The expansion-induced opening of the incisors was similar among the groups, the space between the incisors was kept during all the experimental phase and there was no difference between laser and no laser therapy groups (p<0,05) showing that this methodology was efficient to open the palatine suture. The the opened along the suture was quantified, the area in all RME groups significantly increased compared with control group. Following laser therapy, the palatal suture opening decreased at 7 and 14 days, showing that bone formation in laser group was accelerate, and it was proved with histological analysis, that showed that LLLT accelerated bone formation. Regarding RANK/RANK-L/OPG gene expression, both laser and no-laser therapy groups showed a significant increased in these genes expression, compared to the control group, mainly at the initial periods of healing. Laser therapy group showed a higher expression of these genes than no laser group. CONCLUSIONS: The results suggest that bone formation after RME was observed within palatal suture and the application of the LLLT influenced bone formation accelerating the process of bone mineralization during the initial experimental phase.