Human milk is recognized as the main component for growth, metabolism, and immune development in infants. Furthermore, during lactation, human milk is an important source of microorganisms for the intestinal colonization of newborns. Mother-related factors have been associated with the human milk microbiota composition. Nevertheless, apparently, there has not been any study in which the maternal diet was evaluated as a modulator of the human milk microbiota. Therefore, the aim of this study was to investigate the impact of the maternal diet on the human milk microbiota composition of healthy women, and subsequently, to evaluate the effect of fructooligosaccharides supplementation on the human milk microbiota. This study consisted of two parts; the first was a cross-sectional study, including 94 lactating women recruited at the University Hospital of the University of São Paulo (HU/USP), to investigate the association between the maternal nutrient intake during pregnancy and lactation over the first month and the human milk microbiota. The second part consisted of a randomized, placebo-controlled clinical trial with 53 lactating, classified as FOS group (n = 28), which received 4.5 g of fructooligosaccharides + 2 g of maltodextrin or placebo group (n = 25), which received 2 g of maltodextrin, over a period of 20 days. The DNA was isolated and used as template for amplification and sequencing by the Illumina MiSeq® System. Overall, the maternal diet during lactation (\"short-term\" food intake) influenced specific bacterial groups, including positive correlations between polyunsaturated fatty acids/linoleic fatty acids and Bifidobacterium. However, only the maternal diet during pregnancy (\"long-term\" food intake) was statistically significant (p = 0.02) for the clustering analyzes (community structure analyzes), in which higher levels of vitamin C intake during pregnancy was related to cluster 2, driven by the Staphylococcus genus. After the intervention period on the maternal diet, no differences were found for relative abundance of genera between the placebo and the FOS groups. However, the distances of the trajectories covered by the samples from the beginning to the end of the supplementation was higher for the FOS group (p = 0.0007). According to our results, the maternal age affects the response for FOS supplementation (p = 0.02), though no patterns in the differences of relative abundances were found between the groups. Our results suggest that the maternal diet may influence the human milk microbiota, and the diet during pregnancy is a stronger factor over the bacterial community structure. Minor changes were found by the maternal short-term food intake or the maternal intervention with the prebiotic, and the changes seem to be individual-dependent and influenced by the maternal age, particularly in the intervention study. / O leite humano é, reconhecidamente, o principal componente para o crescimento e o desenvolvimento metabólico e imunológico de lactentes. Adicionalmente, durante a lactação, o leite humano consiste em uma importante fonte de micro-organismos para a formação da microbiota intestinal de neonatos. Fatores relacionados à mãe têm sido associados à composição da microbiota do leite humano. Entretanto, poucos estudos avaliaram a dieta materna como componente modulador da microbiota do leite humano. Os objetivos deste estudo foram investigar o impacto da dieta materna sobre a composição da microbiota do leite humano de mães saudáveis e, posteriormente, avaliar a influência da intervenção com fruto-oligossacarídeo na microbiota do leite humano, durante 20 dias de lactação. O estudo foi dividido em duas partes; a primeira parte consistiu de um estudo transversal, com 94 lactantes atendidas no Hospital Universitário da Universidade de São Paulo (HU/USP), a fim de investigar a associação entre o consumo materno de nutrientes durante a gestação e durante o primeiro mês de lactação e a microbiota do leite humano. A segunda parte consistiu em um ensaio clínico, aleatorizado, placebo-controlado, com 53 lactantes, classificadas em grupo FOS, que recebeu 4.5 g de fruto-oligossacarídeo + 2 g de maltodextrina (n = 28) ou grupo placebo, que recebeu 2 g de maltodextrina (n = 25), suplementados por 20 dias. O DNA das amostras de leite foi isolado e utilizado como molde para amplificação e sequenciamento em Illumina MiSeq® System. Em geral, a dieta materna durante a lactação (consumo a curto prazo) apresentou influência pontual sobre diversos grupos de micro-organismos, incluindo correlações positivas entre ácidos graxos poli-insaturados/linoleico e o gênero Bifidobacterium. No entanto, somente a dieta materna durante a gestação (consumo a longo prazo) foi estatisticamente significante (p = 0.02) para as análises de agrupamento das amostras (análises de estrutura de comunidade), sendo o maior teor de vitamina C consumido durante a gestação relacionado ao agrupamento 2, direcionado por maiores populações do gênero Staphylococcus. Após o período de intervenção na dieta materna, não foram encontradas diferenças entre a abundância relativa de gêneros entre os grupos placebo e FOS. No entanto, as distâncias do percurso das amostras do início até o final da suplementação foram maiores para o grupo FOS (p = 0.0007). De acordo com os resultados, a idade materna influencia essa resposta à suplementação por FOS (p = 0.02), embora, não tenham sido encontrados padrões nítidos nas diferenças de abundância relativa entre os grupos. Os resultados obtidos sugerem que a dieta materna consiste em um fator de modulação da microbiota do leite humano, sendo a dieta durante a gestação um fator mais intenso sobre a estrutura da comunidade bacteriana do leite humano. No entanto, o consumo a curto prazo ou a intervenção alimentar com prebiótico sobre a dieta materna apresentou influência pontual sobre a dinâmica da microbiota do leite, ainda que mudanças observadas sejam indivíduo-dependentes e influenciadas pela idade materna, como no caso do estudo de intervenção.

Submitted by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2015-03-20T22:54:55Z No. of bitstreams: 2 Efeito da associação entre os probióticos Saccharomyces boulardii e Bacilus cereus var. Toyoi sobre a proteção contra desafio com Salmonella Typhimurium em camundongos.pdf: 950556 bytes, checksum: d9746b0e55dab14349d49ea0ff188774 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2015-03-20T23:36:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Efeito da associação entre os probióticos Saccharomyces boulardii e Bacilus cereus var. Toyoi sobre a proteção contra desafio com Salmonella Typhimurium em camundongos.pdf: 950556 bytes, checksum: d9746b0e55dab14349d49ea0ff188774 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2015-03-20T23:36:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Efeito da associação entre os probióticos Saccharomyces boulardii e Bacilus cereus var. Toyoi sobre a proteção contra desafio com Salmonella Typhimurium em camundongos.pdf: 950556 bytes, checksum: d9746b0e55dab14349d49ea0ff188774 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-20T23:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Efeito da associação entre os probióticos Saccharomyces boulardii e Bacilus cereus var. Toyoi sobre a proteção contra desafio com Salmonella Typhimurium em camundongos.pdf: 950556 bytes, checksum: d9746b0e55dab14349d49ea0ff188774 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-11-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito da associação entre os probióticos Saccharomyces boulardii e Bacillus cereus var. Toyoi sobre a proteção e a sobrevivência de camundongos contra a colonização intestinal, translocação e lesões intestinais após desafio com S. Typhimurium. Os animais foram alimentados 20 dias com rações contendo S. boulardii e B. Toyoi, administrados individualmente ou em associação, nas concentrações de 8 e 7 log UFC. g-1 de ração, respectivamente. Animais do grupo controle receberam ração comercial sem probióticos. No 10º dia após o início da administração dos probióticos, os animais foram desafiados por gavagem com 5,17 log UFC de S. Typhimurium (DL50). Proteção contra colonização de S. Typhimurium foi avaliada após eutanásia dos camundongos que sobreviverem após 10 dias, através de contagens de células viáveis do patógeno presentes nas fezes e intestino delgado. Para a avaliação da ocorrência de translocação, 2/3 dos órgãos (fígado e baço) foram macerados, ressuspensos em 1 mL de solução salina a 0,9% estéril e contagens de células viáveis do patógeno, em UFC.ml-1, foram realizadas em placas de XLD. Para a avaliação da ocorrência de lesão, 1/3 do intestino delgado foi avaliado através de histopatologia. O experimento foi repetido duas vezes. S. boulardii não protegeu os camundongos da morte induzida por S. Typhimurium e da ocorrência de lesões intestinais. Não houve sinergismo entre os dois micro-organismos avaliados. Entretanto, S. boulardii, assim como B. Toyoi reduziram a eliminação de S. Typhimurium pelas fezes e preveniram a translocação do patógeno para o fígado dos camundongos que sobreviveram ao desafio. B. Toyoi protegeu os animais da morte induzida pela infecção com S. Typhimurium e da ocorrência de lesões e o efeito obtido pela associação, ocorreu, provavelmente, devido somente ao efeito de B. Toyoi. Assim, novos estudos serão realizados para avaliar os efeitos da associação destes probióticos frente ao desafio com S. Typhimurium e para avaliar as causas do efeito antagônico apresentado entre eles sobre a persistência deste patógeno nas fezes dos animais e sobre a translocação para o fígado. / This study aimed to evaluate the effect of the association between the Saccharomyces boulardii and Bacillus cereus var. Toyoi probiotics on the survival and protection of mice against the occurrence of intestinal colonization, translocation and intestinal lesions after the challenge with S. Typhimurium. The animals were fed for 20 days with diet containing S. boulardii and B. Toyoi, administered individually or in association, in the food concentrations of 8 and7 log CFU. g-1, respectively. The control group animals were fed with commercial food without probiotics. On the 10th day after the start of administration of probiotics, the animals were challenged by the gavages with 5.17 log CFU of S. Typhimurium (LD50). Protection against colonization of S. Typhimurium was evaluated after euthanasia of the mice, which survived after 10 days, through the viable cell counts of the pathogen presented in the small intestine and stool. To evaluate the incidence of translocation, 2/3 of the organs (liver and spleen) were macerated, and resuspended in 1 ml of saline solution in 0.9% sterile, and viable cell counts of the pathogen were performed. To evaluate the occurrence of injury, 1/3 of the small intestine was evaluated through histopathology. The experiment was repeated twice. S. boulardii did not protect the mice from induced death by S. Typhimurium and the occurrence of intestinal lesions. For this reason, it was not possible to assess the occurrence of synergism between the two micro-organisms evaluated. However, S. boulardii as well as B. Toyoi reduced the elimination of S. Typhimurium through the stool and prevented the translocation of the pathogen to the liver of mice that survived the challenge. B. Toyoi protected animals from induced death through the infection with S. Typhimurium and through the occurrence of injuries, and the effect obtained by the association was, probably, due only by the effect of B. Toyoi. Thus, further studies will be conducted to evaluate the effects of the combination of these probiotics facing the challenge with S. Typhimurium and to assess the causes of the antagonistic effect presented among them on the persistence of this pathogen in the stool of animals and on the translocation to the liver.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carla_Yoko.pdf: 407649 bytes, checksum: 0233373b055e117aa382c307194d5d0e (MD5) Previous issue date: 2008-08-28 / This study was divided into two experiments, referring to incubation and early phase. The incubation experiment had as principal aims evaluated incubation yield, the capacity to penetrate through the eggshell and the ability to colonize the gastrointestinal tract. Four hundred fertilized turkey eggs for BUT9 strain were distributed in four treatments: CCS and CCM (inoculation of placebo in eggshell and air cell, respectively); ICS and ICM (inoculation with 4,2 X 104 UFC/mL of Salmonella enterica subspecies enterica sorovar Enteritidis in eggshell and air cell, respectively). Incubation parameters calculated were: fertility, total hatchability, hatchability of fertile eggs and poult yield. Salmonella was examined in eggshell, inner and outer membranes, albumen/yolk, embryo and, after hatched, in meconium in all poult. Qualitative results were analyzed by qui-square test. It was verified that the agent maintained feasible in eggshell during the hole incubation and migrated to egg components. Incubation parameters were not affected by the pathogen inoculated in eggshell. It was also observed that Salmonella Enteritidis inoculated in air cell determined early embryo mortality, while the control treatment influenced the mortality periods in relation with CCS. The intestinal colonization of Salmonella occurred in poults derived from eggshell experimental inoculation. In the second experiment, 135 poults derived from inoculation through eggshell and drinking water were evaluated by the effects of Salmonella Enteritidis to colonize the gastrointestinal tract, determine systemic infection, hurt the intestinal integrity and change the performance variables. At 10, 20 and 28 days, turkeys and feed were weighted to constitute calculation of performance variables. After weighage, five turkeys from each treatment were necropsied to obtain datas of weight and bacterial isolation of intestine, liver, spleen and heart. Qui-square test was employed to qualitative variables and the Anova procedure to quantitative variables and average compared by Tukey test (5%). The intestinal colonization increase significantly during early phase in treatment inoculate through eggshell, but none in treatment inoculated in drinking water. The intestine showed maximum development at 10 days and higher weight at first, 10th and 28th when Salmonella was present. The digestive and absorptive capacity was impaired in infected birds. Salmonella was capable of colonized gastrointestinal tract and established systemic infection. Mortality rate was high during first week of age, with less clinical signs or anatomopathological lesions / O presente estudo foi dividido em dois experimentos, referentes ao período de incubação e fase inicial. O estudo de incubação teve como objetivo avaliar o rendimento de incubação, a capacidade de penetração de Salmonella Enteritidis através da casca do ovo e a habilidade de colonização do trato gastrintestinal. Foram incubados 400 ovos embrionados de perus da linhagem BUT9, distribuídos em quatro tratamentos: CCS e CCM (inoculação com placebo na casca e na câmara de ar, respectivamente); ICS e ICM (inoculação com 4,2 X 104 UFC/mL de Salmonella enterica subespécie enterica sorovar Enteritidis na casca e na câmara de ar, respectivamente). Os parâmetros de incubação calculados foram: fertilidade, eclodibilidade total e de ovos férteis, rendimento de peruzinhos. Salmonella foi pesquisada na casca, membrana, albume/gema, embrião e ao nascimento no mecônio de todas as aves. As respostas qualitativas foram analisadas pelo teste do qui-quadrado (2). Constatou-se que o agente manteve-se viável na casca durante todo o período de incubação e migrou para o interior dos ovos nos tratamentos inoculados. Os parâmetros de incubação não foram afetados quando o patógeno foi inoculado na casca. Constatou-se também que a Salmonella Enteritidis inoculada na câmara de ar determinou mortalidade embrionária precoce, enquanto o tratamento controle (CCM) influenciou os períodos de mortalidade em relação ao CCS. A colonização intestinal pelo patógeno ocorreu em peruzinhos oriundos da inoculação experimental na casca. No segundo experimento, 135 perus de corte de um dia oriundos de inoculação via casca e via água de bebida foram avaliados quanto aos efeitos de Salmonella Enteritidis de colonizar o trato gastrintestinal, determinar infecção sistêmica, lesionar a integridade intestinal e alterar as variáveis de desempenho. Aos 10, 20 e 28 dias, as aves e a ração foram pesadas para constituir o cálculo das variáveis de desempenho. Após a pesagem, cinco aves de cada tratamento foram necropsiadas para obter os dados de peso e isolamento bacteriano do intestino, fígado, baço e coração. Foi empregado o teste do qui-quadrado para as variáveis qualitativas e o procedimento Anova Geral para as quantitativas, sendo as médias comparadas pelo teste de Tukey (5%). A colonização intestinal aumentou significativamente no tratamento inoculado na casca, mas não no tratamento inoculado na água de bebida. O intestino apresentou máximo desenvolvimento aos 10 dias e maior peso ao primeiro, décimo e 28º dias quando Salmonella esteve presente. Salmonella foi capaz de colonizar o trato gastrintestinal e estabelecer infecção sistêmica. A taxa de mortalidade esteve alta durante a primeira semana de idade, com discretos sinais clínicos ou lesões anatomopatológicas