Submitted by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-06-15T14:59:20Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jessyca Luana Melo Costa Santos - 2018.pdf: 988766 bytes, checksum: e26f66c4c01ec695f377458e0e9daf89 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-06-15T15:00:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jessyca Luana Melo Costa Santos - 2018.pdf: 988766 bytes, checksum: e26f66c4c01ec695f377458e0e9daf89 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-15T15:00:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jessyca Luana Melo Costa Santos - 2018.pdf: 988766 bytes, checksum: e26f66c4c01ec695f377458e0e9daf89 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-05-03 / The light is used for treatment from the earliest days of civilization, considered as one of the oldest therapeutic modalities. Today, there are modern devices such as LEDs and lasers, which generate low-intensity light capable of interacting with biological tissues, triggering cellular responses and increased cellular metabolism necessary for the tissue repair process. The objective of this study was to evaluate the viability and activity of fibroblasts after irradiation with red LED 630nm in different potencies and fixed time. For the experiment, mouse fibroblast, L929 strain in RPMI medium supplemented with 10% fetal bovine serum, L-glutamine, Hepes, 2Mercaptoethanol, streptomycin and penicillin were cultured. After adequate confluence of the cells, the irradiation with fixed time of ten seconds was initiated, the power being varied according to each group: G50, power of 50mW; G75, 75 mW and G100, 100 mW and Control group (GC), without irradiation. The procedure was performed in triplicate. The cells were submitted to the MTT cytotoxicity test, evaluation of nitric oxide production (NO) and evaluation of collagen synthesis. Values were checked for normal distribution and, after failing to meet the assumptions (Kolmogorov-Smirnov, P <0.05), were analyzed by non-parametric Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests at a significance level of 5%. In the evaluation of cytotoxicity there was no significant difference between the control group, G50, G75 and G100. The results of nitrite production by fibroblasts show that there was a significant difference (P <0.05) between the control group and the experimental groups (G50, G75 and G100). Regarding the production of collagen, there was a significant difference (p ˂ 0.05) between the control group and the irradiated groups, but not between (G50, 752 and G100). In this study it was concluded that the irradiation of the L929 fibroblast culture by red led 630nm, at 50mW, 75mW and 100mW potentials for ten seconds, does not cause cell death, stimulates the production of nitric oxide and collagen. / Resumo: A luz vem é usada para tratamento desde os primórdios da civilização, considerada como uma das mais antigas modalidades terapêuticas. Hoje, existem modernos aparelhos como os LEDs e os lasers, que geram luz de baixa intensidade capazes de interagir com os tecidos biológicos desencadeando respostas celulares e aumento do metabolismo celular, necessárias para processo de reparação tecidual. O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade e atividade de fibroblastos após a irradiação com LED vermelho 630nm em diferentes potências e tempo fixo. Para o experimento foi feito o cultivo de fibroblastos de camundongo, linhagem L929 no meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal bovino, L-glutamina, Hepes, 2Mercaptoetanol, estreptomicina e penicilina. Após a confluência adequada das células, iniciou-se a irradiação com tempo fixo de dez segundos, variando-se a potência de acordo com cada grupo: G50, potência de 50mW; G75, 75 mW e G100, 100mW e Grupo controle (GC), sem irradiação. O procedimento foi realizado em triplicata. A células foram submetidas ao teste de viabilidade celular MTT, à avaliação da produção de Óxido Nítrico (NO) e à avaliação da síntese de colágeno. Os valores foram verificados e analisados utilizando ANOVA ao nível de significância de 5%. Na avaliação da citotoxicidade não houve diferença significativa entre o grupo controle, G50, 75 e G100. Os resultados da produção de nitrito pelos fibroblastos demonstram que houve diferença significativa (P < 0,05) entre o grupo controle, e os grupos experimentais (G50, 752 e G100). Em relação à produção de colágeno, houve diferença significativa (p ˂ 0,05) entre o grupo controle e os grupos irradiados, mas não entre o (G50, G75 e G100). Neste trabalho concluiu-se que a irradiação da cultura de fibroblastos L929 por led vermelho 630nm, nas potências de 50mW, 75mW e 100mW durante dez segundos, não ocasiona morte celular, estimula a produção de óxido nítrico e colágeno.

O efeito de fármacos pode ser potencializado através do desenvolvimento de novos sistemas de liberação como os sistemas mucoadesivos. Estes sistemas permanecem em contato íntimo com o tecido de absorção, às mucosas, liberando o fármaco no local de ação, com o consequente aumento da biodisponibilidade, podendo promover efeitos locais e sistêmicos. Através do desenvolvimento da bandagem bucal antimicrobiana e testadas sua eficiência sobre a cultura de algumas bactérias bucais (S. mutans e C. albicans) se fez necessário continuar os estudos desse material. O objetivo deste trabalho foi analisar as propriedades bioquímicas e funcionais da bandagem bucal antimicrobiana no que tange a: degradação no meio salivar; adequação da composição para a melhoria da aderência à mucosa bucal; desempenho quanto à liberação controlada de fármacos; absorção de água, perda de massa; medida do pH do líquido residual em diferentes períodos de tempo; citotoxicidade da bandagem em cultura de fibroblastos. As bandagens avaliadas tinham diferentes composições quitosana, quitosana com glicerol, quitosana e alginato com/sem glicerol, e todas com/sem fármaco. Através das análises realizadas foi possível observar que as bandagens que absorveram mais água em tampão foi a membrana híbrida (203%) e em saliva foi a híbrida com glicerol (30%). A membrana que perdeu mais massa em tampão e em saliva foi a híbrida com glicerol (40% e 30%), isso quer dizer que elas se decompõe e liberam suas propriedades no meio. A liberação controlada do fármaco pode avaliar que a membrana híbrida liberou de forma crescente o fármaco (0,075%), facilitando sua liberação. No teste de citotoxicidade todas as bandagens com fármaco foram citotóxicas, já as bandagens de quitosana e quitosana com glicerol promoveram o crescimento celular. / The effect of drugs may be enhanced through the development of new delivery systems as mucoadhesive systems. These systems remain in intimate contact with the tissue absorption, in this case the mucosa, releasing the drug at the site of action, with the consequent increase in bioavailability and may promote local and systemic effects. Mucoadhesion is currently explained by six theories: electronics, adsorption, wetting, diffusion, fracture and mechanics (Carvalho et al., 2010). In 2011, Kloster et al. developed an oral bandage and tested antimicrobial efficiency in the culture of some oral bacteria (S. mutans e C. albicans), the results were promising. The aim of this study was to analyze the biochemical and functional properties of oral antimicrobial bandage with respect to: the salivary environment degradation; the composition adjustment for improving the adherence to the buccal mucous membrane; the performance as to the controlled releasing of drugs; water absorption while analyzing the mass loss; pH measurements of the residual liquid in different periods of time; the plaster cytotoxicity in cell and fibroblast culture. Through the analyzes it was observed that the bandages absorb water and lose mass, it means that they decompose and release their property in the middle. The bandages with drug in viability analysis were cytotoxic cell and different concentrations of drug should be study.

A cocaína é uma droga amplamente utilizada, e seu abuso está associado a inúmeros problemas de ordem física, psiquiátrica e social. Anormalidades em recém-nascidos têm sido reportadas devido aos efeitos tóxicos da cocaína durante o desenvolvimento fetal. O mecanismo pelo qual a cocaína causa danos neurológicos é muito complexo e envolve interações da droga com diversos sistemas de neurotransmissão, como o aumento dos níveis extracelulares de dopamina e radicais livres e a modulação de fatores de transcrição. Neste estudo investigamos a toxicidade causada pela cocaína em culturas primárias de estriado e mesencéfalo e cultura de linhagem de células dopaminérgicas (PC 12). Observamos que a exposição à cocaína causou morte destas células. Na cultura primária de mesencéfalo, a morte celular foi revertida pelo prétratamento com superóxido dismutase (SOD). A exposição à cocaína também induziu a inibição do prolongamento dos neuritos nessas culturas primárias. Já na cultura de células PC 12, a cocaína ativou os fatores de transcrição NF-kB e CREB (após 6 horas), que regulam a transcrição de genes envolvidos na morte celular. O GBR 12909 (inibidor da recaptação de dopamina), a lidocaína (anestésico local) e a dopamina não ativaram o NF-kB de maneira semelhante à cocaína, porém, a diminuição da atividade do NF-kB após pré-tratamento das células com SCH 23390, antagonista do receptor D1, sugere que a ativação do NF-kB pela cocaína ocorre, pelo menos parcialmente, via ativação de receptores D1. O NF-kB parece exercer um papel protetor nas células PC 12, pois sua inibição com PDTC e Salicilato de Sódio aumentou a indução de morte celular pela cocaína. O aumento do RNAm do BDNF, também pode estar relacionado à proteção exercida por este fator de transcrição. A diminuição do Bcl-2, o aumento da atividade da caspase 3 e o aumento da caspase 3 clivada sugerem a participação da via de apoptose na morte celular induzida pela cocaína. A compreensão dos mecanismos de morte celular regulados pela cocaína no cérebro futuramente contribuirá para o desenvolvimento de novas terapias para dependentes, a qual poderá ajudar na interrupção do desencadeamento dos processos degenerativos. / Cocaine is a drug deeply used and its abuse is associated with physical, psychiatric and social problems. Abnormalities in newly born have been demonstrated due to the toxics effects of cocaine during fetal development. The mechanism by which cocaine causes neurological damages is very complex and involves interactions of the drug with several neurotransmitter systems, such as the increase of extracellular levels of dopamine and free radicals, and modulation of transcription factors. In this study we investigated the cocaine toxicity in striatum and mesencephalic primary cultures, and dopaminergic cells (PC 12). We observed that cocaine exposure causes death to these cells. In the mesencephalic primary culture, the cellular death was blunted by superoxide dismutase (SOD) pretreatment. Cocaine exposure also induced inhibition of neurite lengthening in these primary cultures. In PC 12 cells, cocaine activated the transcription factors NFkB and CREB (after 6 hours), which regulate genes involved in cellular death. GBR 12909, an inhibitor of dopamine reuptake; lidocaine, a local anesthetic; and dopamine did not activate NFkB as cocaine did, however, the attenuation of NFkB activity after the pretreatment of the cells with SCH 23390, a D1 receptor antagonist, suggests that the activation of NFkB by cocaine is, at least partially, due to activation of D1 receptors. NFkB seems to have a protective role in these cells, because its inhibition with PDTC and Sodium Salicilate increased cellular death caused by cocaine. The increase in BDNF RNAm, can also be related to the protective role of this transcription factor. The decrease in Bcl-2, the increase in caspase 3 activity, and the increase in caspase 3 cleavage suggest that apoptose participates in the development of cocaineinduced cell death. The understanding of the mechanisms by which cocaine induces cell death in the brain will contribute to the development of new therapies for drug abusers, which can help the interruption of the progress of degenerative processes.

A APECED é uma doença que apresenta autoimunidade e susceptibilidade a Candida albicans. Nosso grupo observou que a proteína AIRE participa da via da Dectina-1, importante contra a C. albicans. Neste projeto, investigamos como a ausência de AIRE influencia em eventos para a eliminação do patógeno via Dectina-1. Assim, avaliamos o burst oxidativo, expressão de moléculas do sistema NADPH oxidase e fagocitose por células de paciente com APECED e células THP-1 silenciadas para AIRE. Não houve diferença no burst oxidativo e na expressão dos componentes do sistema NADPH oxidase por estas células e as células silenciadas fagocitam menos que as células selvagens. Observamos que não há diferença na expressão flavocitocromo b558 e p40phox do paciente comparado ao controle. Em paralelo, mostramos que as células do paciente apresentaram um burst oxidativo e fagocitose diminuídos comparado ao controle. Estes resultados sugerem que há um defeito no reconhecimento via Dectina-1, gerando uma diminuição da fagocitose que pode dificultar sua eliminação. / The APECED is a syndrome with autoantibodies and Candida albicans susceptibility. Our group has noted that AIRE protein is required for dectin-1 signaling, important against C. albicans. In this project, we investigate how the absence of AIRE influences in events for elimination of pathogen via dectin-1. We evaluated reactive oxygen species production, expression of NADPH oxidase molecules and phagocytosis by APECED pacient cells or AIRE silent THP-1 cells. We didnt observe differences in oxidative burst and expression of NADPH oxidase components by these cells and silent cells phagocytize less than wild-type cells. We observed no difference in flavocytochrome b558 and p40phox expression in paciente cells and control. In parallel, we showed that pacient cells has a decrease in burst oxidative and phagocytosis compared to control. Our results suggest that there is a defect in pathogen recognition via dectin-1, resulting in decrease on phagocytosis that can hamper their elimination.

Os hormônios tireoidianos (HTs) promovem suas ações através de mecanismos genômicos, porém, há inúmeras evidências de que o HT também promove efeitos que ocorrem em curto espaço de tempo (poucos minutos), e que independem de, as quais são conhecidas como ações não genômicas ou extranucleares. É sabido que, na insuficiência cardíaca ocorre uma menor expressão dos receptores nucleares de T3, o que reduz em muito os efeitos cardioestimulantes deste hormônio, sendo muito vantajoso numa situação de contenção energética. Assim, o presente estudo visa avaliar o efeito agudo (não genômico) da administração de T3 sobre a translocação e expressão do GLUT4, e de proteínas-chave da atividade cardíaca, como GLUT1, Mb, SERCa2a, <font face=\"Symbol\">&#945; e <font face=\"Symbol\">b miosina, em: (1) ratos submetidos ou não à insuficiência cardíaca através de cirurgia de estenose aórtica, bem como em (2) cultura primária de cardiomiócitos neonatos e adultos. Nos modelos in vivo, observamos que, após 30 min da administração do T3 no grupo portador de ICC, há um aumento da expressão do mRNA do GLUT1, GLUT4 e Mb e da proteina GLUT1 e GLUT4. Quanto aos genes relacionados à função cardíaca, Atp2a2, Myh6 e Myh7, o tratamento com T3 por 30 min nos ratos portadores de ICC promoveu redução do conteúdo de mRNA dos três genes, bem como da proteína da beta MHC. O conteúdo de SERCa2a e da alfa MHC não se alterou em 30 min, mas aumentou após o tratamento com T3 por 60 min. No modelo in vitro de cardiomiócitos de neonatos, tivemos evidências de modulação do conteúdo de mRNA e proteínas, após 30 e 45 min, após a adição de T3 em diferentes doses (10-9 a 10-6 M). Quando avaliamos o efeito do T3 sobre o conteúdo de mRNA nos cardiomiócitos de adultos em cultura, também observamos uma resposta aleatória, não dependente de dose. O conjunto desses resultados aponta para a existência de um controle pós-transcricional do T3 sobre a expressão dos genes alvo desse estudo, podendo induzir uma melhora na função cardíaca na vigência de uma ICC, uma vez que essas ações são rapidamente desencadeadas e são fugazes, impedindo que os efeitos cardioestimulantes persistam, o que poderia ser deletério. / Through nuclear actions, thyroid hormones (TH) control the expression of several cardiac genes, but there are several evidences that TH also promotes effects that occur in a short time (few minutes), and which are independent of its interaction with specific nuclear receptors attached to the TH-responsive elements, known as non-genomic or extranuclear actions. In heart failure, there are a lower expression of nuclear T3 receptors, which reduce the cardiostimulating effects of the hormone, which is extremely advantageous in an energy contention. Thus, this study aims to evaluate the acute (nongenomic) administration of T3 on the expression and translocation of GLUT4, and key proteins of the cardiac activity, such as GLUT1, Mb, SERCa2a, <font face=\"Symbol\">&#945; and <font face=\"Symbol\">b myosin in: ( 1) rats with or without heart failure after aortic stenosis surgery, as well as (2) primary cultured cardiomyocytes neonates and adults. In the vivo model, after 30 min of the administration of T3 in the group with CHF, there is an increased in the mRNA expression in GLUT1, GLUT4 and Mb. Their proteins had an increase after 30 min (GLUT1 and GLUT4) and after 60 min (Mb). As for genes related to cardiac function, Atp2a2, Myh6 and MYH7, we observed that, the treatment with T3 for 30 min in rats with CHF promoted a decrease of the mRNA of three genes as well as the beta MHC protein. The content of alpha-MHC and SERCa2a did not change in 30 min, but increased after T3 treatment for 60 min. In the in vitro model of neonatal cardiomyocytes, we had evidence of modulation of mRNA and protein content after 30 and 45 min after the addition of T3 in different doses (from 10-9 to 10-6 M). When evaluating the effect of T3 on the mRNA content in adult cardiomyocytes in culture, we also observed a random response, not dependent on dose. All the data obtained so far points to the existence of a post-transcriptional control of T3 on the expression of target genes of this study, which could induce an improvement in cardiac function in the presence of an CHF, since these actions are elicited and fleeting, preventing cardiostimulating effects persist, which could be deleterious.

Comparou-se a eficácia da baciloscopia in natura e pós concentração (Coloração Ziehl Neelsen) e cultura tradicional e automatizada MA de amostras de escarro ou saliva/muco para a detecção do Complexo M. tuberculosis (MTB) em Centro de Referencia Ambulatorial para Tuberculose na Cidade de São Paulo. A identificação do grupo MTB baseou-se no crescimento em meio com Ácido para nitrobenzóico, e visualização do fator corda. Do total de 374 amostras, 228 eram de pacientes sob diagnóstico inicial e 146 em tratamento. 83 amostras eram saliva/muco. Destas, sete foram positivas à baciloscopia, 03 (3,6%) no material concentrado e uma (1,2%) in natura (p=0.5 McNemar Test). Cinco amostras (6%) positivas na cultura pelo método tradicional e 07 (8,4%) p=0.5 pelo MA. As amostras de escarro eram 74 foram positivas na baciloscopia, sendo 34 (11,7%) in natura e 45 (15,5%) no material concentrado, p=0.001. No método tradicional 56 (19,2%) e 67 (23%) pelo MA p=0.001. Independente da característica da amostra a baciloscopia pós concentração e a cultura pelo MA foram mais sensíveis. / Effectiveness of bacilloscopy were compared in natura and pos-concentrated (Ziehl Neelsen staining), and tradicional and automated culture-AM of sputum or saliva/mucus samples for detection of M. tuberculosis complex (MTB) in Ambulatory Reference Center in the city of São Paulo. Identification of MTB group was based on growth in medium with para nitrobenzoic acid, and cord factor visualization. From the total 374 samples, 228 were from patients under initial diagnostic and 146 in treatment. 83 samples were saliva/mucus. Seven of these were bacilloscopy positive, 03 (3.6%) in concentrated material and one (1.2%) in natura (p=.500ª McNemar Test). Five samples (6%) positive for culture by traditional method and 07 (8.4%) p=0.5 for AM. For sputum 74 were bacilloscopy positive, being 34 (11.7%) in in natura and 45 in concentrated material, p=0.001. In traditional method, 56 (19.2%) and 67 (23%) for AM, p=0.001. Independently of sample characteristics, pos-concentrated bacilloscopy and culture by AM were more effectiveness.

Os eventos celulares e extracelulares que ocorrem durante o processo de osseointegração do titânio (Ti) são bastante influenciados por suas propriedades de superfície, como morfologia, topografia e composição química. A modificação bioquímica da superfície do Ti consiste em imobilizar proteínas ou peptídeos nessa superfície com a finalidade de induzir respostas celulares e teciduais específicas na interface osso-implante que acelerem ou aumentem a osseointegração. O objetivo deste estudo foi avaliar o desenvolvimento do fenótipo osteoblástico em culturas de células crescidas sobre Ti revestido com colágeno tipo I. Para tanto, células osteoblásticas derivadas de fragmentos ósseos do processo alveolar de humanos foram cultivadas sobre discos de Ti usinados revestidos (Ti-col) ou não (Ti-usinado) com colágeno tipo I e foram avaliados os seguintes parâmetros: adesão, morfologia e proliferação celulares, síntese de proteína total, atividade de fosfatase alcalina (ALP), formação de matriz mineralizada, e expressão de genes marcadores do fenótipo osteoblástico por reação em cadeia da polimerase em tempo real (PCR em tempo real). O Ti-col alterou o crescimento e a expressão gênica das culturas e não teve efeito na adesão e morfologia celulares, síntese de proteína total, atividade de ALP e formação de matriz mineralizada comparado ao Ti-usinado. Esses resultados indicam que a superfície Ti-col pode favorecer um maior crescimento da cultura durante a fase proliferativa e um aumento e/ou aceleração da diferenciação, como indicado por alterações na expressão gênica de marcadores do fenótipo osteoblástico. Portanto, essa modificação de superfície pode ter um impacto nos processos de reparo e remodelação do tecido ósseo adjacente a implantes, favorecendo a ocorrência de maior formação óssea. / Cellular and extracellular events that occur during titanium (Ti) osseointegration process are highly influenced by its surface properties, such as morphology, topography and chemical composition. The objective of biochemical modification of Ti is to immobilize proteins or peptides on its surface in order to induce specific cellular and tissue responses at the boneimplant interface in order to accelerate or enhance osseointegration. The aim of this study was to evaluate the osteoblastic phenotype development in cells grown on collagen type I-coated Ti surface. Osteoblastic cells from human alveolar bone fragments were cultured on turned Ti either coated with collagen type I (col-Ti) or not (turned-Ti) and the following parameters were assessed: cell adhesion, morphology, and proliferation, total protein content, alkaline phosphatase (ALP) activity, bone-like formation and gene expression of osteoblastic markers by real-time polymerase chain reaction (real-time PCR). Col-Ti altered culture growth and gene expression of osteoblastic markers without affecting cell adhesion, morphology, protein synthesis, ALP activity, and matrix mineralization. These results demonstrated that col-Ti favours cell growth during the proliferative phase and osteoblastic differentiation, as demonstrated by changes in mRNA expression profile during the matrix mineralization phase, suggesting that this Ti surface modification may affect the processes of bone healing and remodelling.

Apesar da ampla aplicação clínica de plasma rico em plaquetas (PRP), a sua eficácia no reparo de defeitos ósseos e na osseointegração de implantes metálicos continua sendo questionada. Em vista disso, objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de um coquetel contendo os principais fatores de crescimento (GFs) e proteínas de PRP no desenvolvimento do fenótipo osteogênico in vitro sobre titânio (Ti). O coquetel referido continha PDGF-BB, TGF-&beta;1, TGF- &beta;2, albumina, fibronectina e trombospondina. Células da linhagem osteoblástica foram obtidas por digestão enzimática de osso alveolar humano e cultivadas sob condições osteogênicas convencionais até a subconfluência, sendo, em seguida, subcultivadas sobre superfície de Ti. As subculturas foram expostas durante os 7 primeiros dias a meio osteogênico, suplementado com GFs e proteínas, e apenas ao meio osteogênico nos 7 dias subseqüentes. Os grupos controles foram expostos apenas ao meio osteogênico. Nos experimentos dose-resposta foram utilizadas culturas primárias de calvária de ratos, as quais foram expostas ao coquetel de GFs e proteínas e às suas diluições de 1:10 e 1:100. Culturas derivadas de osso alveolar humano expostas ao coquetel de GFs e proteínas apresentaram: aumento significativo do número de células a partir do dia 4 e da proliferação celular em 1 e 4 dias; redução significativa nos níveis de atividade de fosfatase alcalina (ALP) em 4, 7 e 10 dias e ausência de marcação com vermelho de Alizarina em 14 dias. Apesar de as diluições 1:10 e 1:100 restaurarem a atividade proliferativa das culturas aos níveis controles, formações de matriz calcificada foram observadas apenas na diluição 1:100. Os resultados do presente trabalho mostram que o coquetel de GFs e proteínas inibe o desenvolvimento do fenótipo osteogênico de culturas de células osteoblásticas humanas e de ratos crescidas sobre Ti. / Background: Despite wide clinical application, the efficacy of platelet-rich plasma (PRP) for repairing bone defects and enhancing osseointegration of metal implants is still subject of debate. The objective of the present study was to evaluate the effects of a well-defined mixture of growth factors (GFs) and proteins (GFs+proteins) on the development of the osteogenic phenotype on titanium (Ti) in vitro. The composition of the mixture was based on the major components found in PRP preparations. Methods: The PRP-like mixture contained PDGF-BB, TGF-&beta;1, TGF-&beta;2, albumin, fibronectin, and thrombospondin. Osteoblastic cells were obtained by enzymatic digestion of human alveolar bone and cultured under standard osteogenic condition until subconfluence. They were then subcultured on Ti discs up to 14 days. Treated cultures were exposed during the first 7 days to osteogenic medium supplemented with GFs+proteins and to osteogenic medium alone thereafter. Control cultures were exposed to only osteogenic medium throughout the culture interval. Dose-response experiments were carried out using rat primary calvarial cells exposed to GFs+proteins and 1:10 or 1:100 dilutions of the mixture. Results: Treated human-derived cell cultures exhibited a significantly higher number of cells from day 4 on and of cycling cells at days 1 and 4, significantly reduced levels for alkaline phosphatase (ALP) activity, and no Alizarin red stained areas at day 14. Although the 1:10 and 1:100 dilutions restored the proliferative activity of rat calvaria-derived osteogenic cells to control levels, mineralized bone-like nodule formation was only observed with the 1:100 dilution. Conclusions: The present results demonstrated that a PRP-like protein mixture inhibits development of the osteogenic phenotype in both human and rat osteoblastic cell cultures grown on Ti.

Orientador: João Ernesto de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T17:18:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zafred_RafaelRosolenTeixeira_M.pdf: 2402931 bytes, checksum: 1695b8ad500015e973737d3b719cde53 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Astronium fraxinifolium Schott., conhecido popularmente como "Gonçalo Alves", é uma espécie vegetal característica de regiões tropicais e tem sua distribuição no Cerrado Brasileiro, possui o caule e as folhas ricos em substâncias tânicas. Relatados populares indicam a utilização de A. fraxinifolium no tratamento de diarreias, disenterias, anti-séptico, anti-microbiano, antihemorrágico, cicatrizante, anti-inflamatório e antiulcerogênico. Devido o uso popular e a insuficiência de dados na literatura, este trabalho teve por objetivo avaliar as potenciais atividades farmacológicas desta espécie em modelos experimentais in vitro (atividade antiproliferativa em cultura de células) e in vivo (toxicidade aguda, modelos de nocicepção, inflamação e tumor sólido murino) O material vegetal (cascas do caule e folhas) obtido das coletas foram secos e triturados, o pó obtido foi utilizado para obtenção dos extratos por maceração mecânica e sistema Soxhlet. Estes foram avaliados conforme seu rendimento e demonstraram a presença de taninos hidrolisáveis, como compostos majoritários, e flavonoides. No teste realizado em cultura de células tumorais e não tumorais de diferentes origens os extratos apresentaram, em sua maioria, uma ação citostática na maior concentração testada (250µg/mL). Por outro lado, nos testes relacionados com atividade antinociceptiva extrato bruto das folhas demonstrou atividade nas doses de 100 e 200mg/Kg no modelo da formalina em ambas as fases. Nos modelos inflamatórios (úlcera induzida por indometacina, edema de pata induzido por carragenina e edema de orelha induzido por óleo de cróton) as doses de 100 e 200mg/Kg, no modelo de edema de pata induzido por carragenina, e as doses de 150 e 300mg/Kg, no modelo de edema de orelha induzido por óleo de cróton, demonstraram atividade anti-inflamatória. Considerando que aproximadamente 25% dos tumores estão relacionados com inflamações crônicas, o extrato das folhas de A. fraxinifolium foi avaliado no modelo experimental do tumor sólido de Ehrlich no flanco, demonstrando inibição do crescimento tumoral na dose de 100mg/Kg. Sendo assim, os resultados experimentais sugerem que a espécie A. fraxinifolium possui atividade antiinflamatória dos componentes do extrato bruto, corroborando com sua utilização popular. Além de promover inibição do crescimento tumoral indicando que os componentes do extrato podem atuar em outros processos além do inflamatório. Porém, outros estudos necessitam ser realizados para identificar a classe de compostos que promoveram as atividades farmacológicas da espécie / Abstract: Astronium fraxinifolium Schott., popularly known as "Gonçalo Alves", is a species characteristic of tropical regions with their distribution in the Brazilian Cerrado, has stems and leaves rich in tannic substances. Reported the use of folk medicinal indicate A. fraxinifolium in the treatment of diarrhea, dysentery, antiseptic, anti-microbial, antihaemorrhagic, wound healing, anti-inflammatory and antiulcerogenic. Due to popular use and insufficient data in the literature, this study aimed to evaluate potential pharmacological activities of this species in vitro experimental models (antiproliferative activity in cell culture) and in vivo (acute toxicity models of nociception, inflammation and tumor solid murine) The plant material (stems and leaves) samples were obtained from dried and crushed, the powder obtained was used to obtain the extracts, mechanical maceration and soxhlet system. These were evaluated according to their yield and showed the presence of hydrolyzable tannins, as main compounds, and flavonoids. Testing conducted on cultured tumor and non-tumor cells of different origins, the extracts showed mostly a cytostatic action at the highest concentration tested (250?g/mL). Moreover, in tests related antinociceptive crude extract of the leaves showed activity at doses of 100 and 200mg/Kg in the formalin model in both phases. In inflammatory models (indomethacin-induced ulcer, paw edema induced by carrageenan and ear edema induced by croton oil) doses of 100 and 200mg/Kg in paw edema induced by carrageenan model, and the doses of 150 and 300mg/kg, in the ear edema induced by croton oil model, demonstrated anti-inflammatory activity. Considering that approximately 25% of tumors are associated with chronic inflammation, the extract of A. fraxinifolium was assessed in the experimental model of Ehrlich solid tumor in the flank, demonstrating inhibition of tumor growth at a dose of 100mg/kg. Thus, experimental results suggest that the species A. fraxinifolium has anti-inflammatory component of the crude extract activity, confirming its popular use. In addition to promoting tumor growth inhibition indicating that extract components can act in addition to other inflammatory processes. However, other studies should be performed to identify the class of compounds that promoted the pharmacological activity of the species / Mestrado / Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde / Mestre em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos

Orientador: Ibsen Bellini Coimbra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T06:48:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bombini_MarianaFreschi_M.pdf: 1816531 bytes, checksum: 7a3edba503588d6825d034f24c884991 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A utilização de células-tronco mesenquimais (CTM) para a reconstrução da cartilagem articular é uma promissora alternativa terapêutica, devido à vulnerabilidade do tecido a lesões e processo degenerativo irreversível. O objetivo deste estudo foi investigar o potencial condrogênico de CTM de líquido amniótico humano (CTM-LA) em sistema de cultura de micromass (alta densidade celular) com TGF-?3 por 21 dias. Métodos: 53 líquido amnióticos (LA) foram obtidos de mulheres submetidas à amniocentese durante o segundo trimestre de gravidez. A indicação da amniocentese foi feita pela obstetrícia, conforme protocolo específico do serviço de medicina fetal da UNICAMP. Foram selecionadas células-tronco mesenquimais, caracterizadas por citometria de fluxo. Estas células foram expandidas para obter um número populacional para o desenvolvimento do micromass. O micromass foi realizado em placa de cultura de 96 poços com fundo em "v", em cada poço foram pipetados 10?l contendo 5x105 CTM-LA e meio para diferenciação condrogênica contendo TGF-?3. Esta condição se manteve por 21 dias, e então, o potencial condrogênico foi avaliado pela presença da proteína do colágeno II pela técnica de western blotting, também foi avaliada a expressão gênica do Sox-9, colágeno II e agrecano pela técnica da PCR em tempo real (qRT-PCR). Comparamos CTM-LA em monocamada a CTM-LA submetidas ao sistema de cultura de micromass e como controle positivo utilizamos a cartilagem adulta humana. Resultados: Confirmamos o potencial condrogênico pela diferenciação das CTM-LA em condrócitos através da expressão dos genes SOX-9, colágeno tipo II e agrecano, bem como a proteína do colágeno II. A expressão de SOX-9 em micromass foi significativamente maior do que na cartilagem adulta. Conclusão: A condrogênese foi desenvolvida a partir da combinação de uma fonte de célula tronco recém descrita proveniente do líquido amniótico humano com o sistema de cultura de micromass. Esta fonte apresentou alto potencial condrogênico e dessa forma, fortes evidências para aplicações clínicas. Os resultados são promissores e sugerem a possibilidade de investimentos em bancos de líquido amniótico / Abstract: Introduction: The use of mesenchymal stem cells (MSC) for reconstruction of articular cartilage, leads to a promising therapeutic alternative, due to the tissue vulnerability to injuries and irreversible degenerative process. The aim of this study was to investigate the chondrogenic potential of MSC from human amniotic fluid in Micromass system (high-density cell culture) with TGF-?3 for 21 days. Methodology: The amniotic fluid was obtained from 53 pregnant women. The micromass was performed using MSC that was cultured in monolayer and chondrocytes from adult human normal cartilage as control groups. After 21 days, the chondrogenic potential was determined by metabolic products released from the cell, such as SOX-9, type II collagen and aggrecan. This study was approved by the ethics committee. Results: The proteic production of type II collagen was observed by Western Blotting. The genetic expression of SOX-9 was analyzed by PCR in real time, and this was found to be significantly higher than in adult cartilage. The same procedure was used to determinate the genetic expression of aggrecan and type II collagen, verifying positive result for both. Conclusion: Chondrogenesis was developed from the unique combination of the newly discovered source of mesenchymal stem cells from human amniotic fluid with micromass, and it demonstrated a satisfactory expression. Thus, this source is extremely viable for clinical applications, and the results suggest the possibility of investments in human amniotic fluid banks / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Clínica Médica