Made available in DSpace on 2016-06-15T17:41:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 246.pdf: 2136338 bytes, checksum: b9442031a16ab0c4db2024b9f05eac73 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Made available in DSpace on 2016-07-05T22:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 3 246.pdf.txt: 255961 bytes, checksum: 3211134772743ab708a93be62021a5f2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 246.pdf: 2136338 bytes, checksum: b9442031a16ab0c4db2024b9f05eac73 (MD5) Previous issue date: 2011 / O presente trabalho teve por objetivo analisar os fatores demográficos e clínico-laboratoriais associados ao dengue grave em crianças internadas em três hospitais pediátricos no município do Rio de Janeiro. Inicialmente foi avaliada a literatura disponível sobre o tema por meio de revisão sistemática. Os parâmetros que demonstraram forte associação aos casos graves na revisão foram: letargia, hepatomegalia, hematócrito maior 50 por cento, hemoconcentração maior 22 por cento, sangramento, que constituem sinais de alerta definidos pela Organização Mundial de Saúde (OMS). Também estavam associados à síndrome do choque do dengue (SCD): tipo de vírus, infecção secundária pelo vírus dengue e obesidade. Houve importante variação nos resultados, o que apontou para a necessidade de realização de outros estudos, com desenho e métodos de análise adequados à investigação de fatores preditivos de gravidade em crianças, permitindo a comparação do padrão clínico-epidemiológico entre diferentes populações.Para avaliação dos fatores demográficos, clínicos e laboratoriais associados ao dengue grave em crianças no município do Rio de Janeiro, foi realizado estudo caso-controle em três hospitais de referência para internação. Foram avaliadas 308 crianças na faixa etária de 0 a 18 anos internadas por dengue: 89 casos, definidos como graves pela presença de choque e 219 controles. A média de idade entre os casos foi de 7,9 anos e 9,1 anos nos controles. Não houve associação significativa entre sexo e raça ao dengue grave. Todos os sinais de alarme descritos na literatura foram significativos na análise univariada: (...) O estudo demonstrou a importância do monitoramento dos sinais clínicos, confirmou a relevância dos sinais dealarme e definiu indicadores de evolução para o quadro de choque em crianças hospitalizadas com dengue. / The study aimed to evaluate demographic, clinical and laboratorial factors associated to severe dengue in hospitalized children from three pediatric hospitals in Rio de Janeiro. Initially, a systematic review about clinical and laboratorial aspects associated to severe dengue was developed. The parameters which revealed strong association to severe cases were: lethargy, hepatomegaly, hematocrit level more 50 percent, hemoconcentration more 22 percent and bleeding. Those are warning signs according to World Health Organization (WHO). The following signs were also associated to dengue shock syndrome (DSS): virus type, secondary dengue infection and obesity. The results presented important heterogeneity. Further studies with adequate designs and methods for the investigation of predictive factors of severity in children, allowing comparison of the clinical and epidemiological pattern in different populations, are needed.To evaluate demographic, clinical and laboratorial factors associated to severe dengue in children in Rio de Janeiro, a case-control study was conducted in three reference hospitals. A total of 308 children from 0 to 18 years old admitted with dengue diagnosis was evaluated: 89 cases of shock, according to the definition of the study, and 219 controls. The mean age was 7,9 years old for cases and 9,1 years old among controls. There was no significant association of sex and race with severe dengue. All the warning signs presented significant association with severe dengue in univariate analysis: (...) The study stressed the importance of monitoring clinical signs, confirmed the relevance of the warning signs and defined indicators of clinical evolution to shock in hospitalized children with dengue. (AU)^ien

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-29T12:56:33Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_IzabellaBatista_CPqRR2015 pdf.pdf: 11084546 bytes, checksum: 8c38bfafc90f14023e6dd82b69adc985 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-29T12:56:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_IzabellaBatista_CPqRR2015 pdf.pdf: 11084546 bytes, checksum: 8c38bfafc90f14023e6dd82b69adc985 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T12:56:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_BCM_IzabellaBatista_CPqRR2015 pdf.pdf: 11084546 bytes, checksum: 8c38bfafc90f14023e6dd82b69adc985 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:24:52Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Dissertacao_BCM_IzabellaBatista_CPqRR2015 pdf.pdf.txt: 157030 bytes, checksum: c1e93a8d2c64e66d80837be88c555677 (MD5) Dissertacao_BCM_IzabellaBatista_CPqRR2015 pdf.pdf: 11084546 bytes, checksum: 8c38bfafc90f14023e6dd82b69adc985 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A dengue é uma doença viral transmitida de mosquitos para humanos sendo a arbovirose mais prevalente em países tropicais e subtropicais, atingindo milhões de pessoas em diferentes regiões do mundo. A dengue é causada pelo Dengue vírus (DENV), membro da família Flaviviridae, que possuem 4 sorotipos geneticamente distintos conhecidos como DENV 1-4. Uma vacina eficiente necessita de gerar resposta imune tetravalente balanceada. Para alcançarmos essa imunidade tetravalente balanceada,trabalhamos com a hipótese de que proteínas quimérica s expressando epítopos imunogênicos dos quatro sorotipos do DENV possam ser utilizadas no desenvolvimento de uma vacina segura e/ou um sistema de diagnóstico eficiente. Para este estudo onze proteínas quiméricas foram desenhadas contendo regiões de proteínas com potencial imunogênico derivado do envelope, capsídeo, membrana e/ou da proteína não estrutural NS1, dos quatro sorotipos do DENV. Tais regiões foram selecionadas in silico utilizando- se o algoritmo BepiPred. Regiões com alta homologia entre os quatro sorotipos do DENV foram preferencialmente incluídas, mas regiões antigênicas de um ou mais sorotipos do DENV também foram utilizados. As proteínas quiméricas foram construídas pela adição de resíduos de aminoácidos entre as sequências selecionadas, chamados de espaçadores, para que a estrutura dos epítopos expressos fosse mantida. A sequência final de aminoácidos foi traduzida e a sequência de nucleotídeos foi otimizada utilizando o algoritmo LETO 1.0 (Entelechon). Todas as onze proteínas quiméricas foram produzidas utilizando os vetores de expressão pET 28 TEV, pQE-9 ou pET-21ª, transformados em E. coli BL21 ou M15 e foram purificadas por cromatografia de afinidade utilizando resina de níquel para realização de ensaios de Western blot e ELISA para testar a reatividade das proteínas com soros de indivíduos já infectados pelo DENV e indivíduos nunca infectados e testes de imunogenicidade através da imunização de camundongos das linhagens BALB/c e C57BL/6. Nossos resultados mostraram um reconhecimento específico de cinco proteínas quiméricas com soros de pacientes sabidamente infectados pelo DENV-1, DENV-2 ou DENV-3. Além disso, a imunização de camundongos com a proteína quimérica EnvEpII, mostrou que esta proteína foi capaz de estimular uma produção robusta de anticorpos IgG1, IgG2a e IgG2c nas duas linhagens de camundongos testadas e de anticorpos neutralizantes em C57BL/6. Além disso, foi observada a ativação de células T CD4+ e CD8+ em BALB/c e o aumento dos níveis das citocinas IL-2, IL-4, IL-17 e IFNγ, quando camundongos foram imunizados com a proteína EnvEpII. Nossos resultados demonstram que desenhar, sintetizar, expressar e purificar proteínas quiméricas em sistemas bacterianos é viável e, dessa forma, proteínas artificiais podem ser estudadas como candidatas para o desenvolvimento de vacinas e/ou sistemas de diagnóstico contra doenças infecciosas / Dengue is the most common mosquito-borne viral disease of humans and the most prevalent arbovirus in tropical and subtropical countries, infecting thousands individuals annually in different regions of the world. Dengue is caused by Dengue virus (DENV), members of the Flaviviridae familyand is composed by 4 genetically distinct serotypes referred to as DENV 1–4. A safe vaccine demands a balanced tetravalent immune response. To address the balanced immune response, we hypothesized that chimeric proteins with potential immunogenic epitopes from the four DENV serotypes can be used to develop a safe dengue vaccine and/or an efficient diagnostic system. We designed eleven chimeras, for this the most potentially immunogenic regions of proteins derived from envelope, capsid, membrane and/or non-structural protein 1, NS1, from all DENV serotypes were in silico selected using the BepiPred algorithm. High homology regions among the four DENV serotypes were preferentially included, but antigenic regions from single or pairs of DENV serotypes were also used. The chimeras were constructed by adding non immunogenic amino acid residues between the selected sequences, named spacers residues, thus the expressed epitopes structure was maintained. The final chimeric amino acid sequence was back translated and the nucleotide sequence was optimized using the LETO 1.0 algorithm (Entelechon). All the eleven chimeric proteins were produced using the expression vectors pET 28 TEV, pQE-9 and pET-21a, transformed in E. coli BL21 or M15, and purified by Nickel-affinity chromatography to perform the Western blot and ELISA assays to test their reactivity with sera of DENV-infected patients and DENV-negative sera and to test their immunogenicity through the immunization of mice strains BALB/c and C57BL/6. Our results showed a specific recognition of five proteins by sera DENV-1, DENV-2 or DENV-3 infected patients. Moreover, the immunization using the chimera EnvEpII, shows that this protein are able to stimulate a robust production of antibodies IgG1, IgG2a and IgG2c in both mice strains tested and neutralizing antibodies were produced in C57BL/6. We also noted the activation of T cells CD4+ and CD8 + in BALB/c and the production of IL-2, IL-4, IL-17 and IFNγ when we immunized the mice with EnvEpII. Our results indicating that design, synthesize, express and purify artificial proteins in bacterial systems is viable and, thus, these proteins can be studied as candidates for the development of vaccines and/or diagnostic systems against infectious diseases.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-29T17:23:45Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_JulianaBezerra_CPqRR2016.pdf: 3676658 bytes, checksum: 1c484257ff4f0afd2e68dee4683a720c (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-06-29T17:23:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_JulianaBezerra_CPqRR2016.pdf: 3676658 bytes, checksum: 1c484257ff4f0afd2e68dee4683a720c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T17:23:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_JulianaBezerra_CPqRR2016.pdf: 3676658 bytes, checksum: 1c484257ff4f0afd2e68dee4683a720c (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-22T13:27:34Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Tese_DIP_JulianaBezerra_CPqRR2016.pdf.txt: 263334 bytes, checksum: e775ad16f6eee3d59b589bcd13ad0273 (MD5) Tese_DIP_JulianaBezerra_CPqRR2016.pdf: 3676658 bytes, checksum: 1c484257ff4f0afd2e68dee4683a720c (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Dengue é considerada a mais relevante arbovirose que afeta seres humanos, e constitui grave problema de saúde pública. A detecção de Dengue vírus (DENV) por RT-PCR em Tempo Real, em mosquitos vetores do gênero Aedes, tem se mostrado importante ferramenta na vigilância epidemiológica. A presente pesquisa verificou a presença de DENV em mosquitos fêmeas de Ae. aegypti e Ae. Albopictus nos Distritos Sanitários (DS) Pampulha, Norte e Leste, de Belo Horizonte, Minas Gerais. Foram utilizadas armadilhas BG-Sentinel Full Version®, em capturas semanais de mosquitos, realizadas em quatro períodos: primeiro (dezembro de 2010 a maio de 2011), segundo (outubro de 2011 a maio de 2012), terceiro (outubro de 2012 a maio de 2013) e quarto (outubro de 2013 a maio de 2014). Foi instalado um total de 60 armadilhas (20 por DS). Após a identificação, as fêmeas de Ae. aegypti foram separadas em pools formados por um até 10 exemplares, e as fêmeas de Ae. albopictus foram separadas de forma individual. Procedeu-se com extração de RNA viral e RT-PCR em Tempo Real para a pesquisa de DENV. Foram coletadas 10.662 fêmeas de Ae. aegypti sendo 1.504 (14,10%), 2.516 (23,59%), 3.728 (34,98%) e 2.914 (27,33%) no primeiro, segundo, terceiro e quarto períodos respectivamente. Estas fêmeas foram agrupadas em 6.056 pools, dos quais 343 (5,66%) foram positivos para o DENV. Em relação ao Ae. Albopictus foram coletadas 511 fêmeas, sendo 117 (22,89%), 44 (8,61%), 199 (38,96%) e 151 (29,54%) no primeiro, segundo, terceiro e quarto períodos respectivamente . Destas, 79 (15,45%) foram positivas para o vírus. Houve elevada ocorrência de fêmeas de Ae. aegypti e Ae. albopictus nas áreas pesquisadas, positivas para o DENV. Isso mostra a importância da adoção de medidas de controle no sentido de reduzir as notificações da infecção em seres humanos. / Dengue is considered the most important arboviral disease that affects humans, and is a severe public health problem. Detection of Dengue virus (DENV) by RT-PCR Real Time in mosquitoes of the genus Aedes, has been an important tool in epidemiological surveillance. This research found the presence of DENV in female mosquitoes of Ae. aegypti and Ae. Albopictus in Sanitary Districts (SD) Pampulha, North and East, of Belo Horizonte, Minas Gerais. BG-Sentinel Full Version® traps were used in weekly catch mosquitoes, carried out in four periods: first (December 2010 to May 2011), second (October 2011 to May 2012), third (October 2012 to May 2013) and fourth (October 2013 to May 2014). A total of 60 traps (20 per SD) were installed. After identification, Ae. aegypti were separated in pools formed by one to 10 specimens, and Ae. albopictus were separated individually. After viral RNA extraction we performed RT-PCR in Real Time to test for DENV. We collected 10,662 Ae. Aegypti females been 1,504 (14.10%), 2,516 (23.59%), 3,728 (34.98%) and 2,914 (27.33%) in the first, second, third and fourth periods respectively. These females were grouped into 6,056 pools of which 343 (5.66%) were DENV positive. Regarding Ae. albopictus we collected 511 females been 117 (22.89%), 44 (8.61%), 199 (38.96%) and 151 (29.54%) in the first, second, third and fourth periods respectively. Of those, 79 (15.45%) were DENV positive. There was high occurrence of Ae. aegypti and Ae. albopictus in the surveyed areas, positive for DENV. This shows the importance of the adoption of control measures to reduce the cases of infection in humans.

Submitted by Gilvan Almeida (gilvan.almeida@icict.fiocruz.br) on 2016-10-11T17:34:20Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 72038.pdf: 3196059 bytes, checksum: 8c47650717cf5a0ee1266bcc0b5d389d (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-10-24T11:51:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 72038.pdf: 3196059 bytes, checksum: 8c47650717cf5a0ee1266bcc0b5d389d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-24T11:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 72038.pdf: 3196059 bytes, checksum: 8c47650717cf5a0ee1266bcc0b5d389d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A dengue é caracterizada como a principal arbovirose humana, representando um grave problema de saúde pública. A superativação de células do sistema imune pode ser destacada como um dos fatores envolvidos na progressão da doença para as formas mais graves. Embora os monócitos sejam reconhecidos como importante fonte de citocinas, a participação das plaquetas na patogênese da dengue permanece pouco explorada. Recentemente, nosso grupo mostrou a contribuição da interação plaqueta-monócito na resposta inflamatória observada durante a dengue. De fato, o papel das plaquetas na resposta imune e inflamatória é cada vez mais frequente. Dentro deste contexto, foi proposto que plaquetas ativadas por estímulo específico sinalizam para mudanças fenotípicas nos monócitos, incluindo a diferenciação em células espumosas que é caracterizada pelo aumento da biogênese de corpúsculos lipídicos (CL) \2013 organelas citoplasmáticas dinâmicas ricas em lipídios relacionadas a processos inflamatórios e infecciosos. Nossos estudos prévios demonstraram um aumento da biogênese de CL tanto em leucócitos isolados de pacientes com a forma grave da doença quanto em células infectadas com o vírus dengue (DENV) in vitro, com participação na localização da proteína do capsídeo viral e na produção de partículas virais infecciosas. Entretanto, os mecanismos que regulam a biogênese e a função destas organelas durante a infecção pelo DENV precisam ser melhor caracterizados. Assim, pretende-se com este trabalho (i) analisar os mecanismos que levam à biogênese de CL em distintos tipos celulares infectados com o DENV in vitro; (ii) estudar os efeitos de plaquetas ativadas com o DENV in vitro sobre a imunomodulação dos monócitos, no que diz respeito, principalmente, à formação de CL; (iii) investigar o efeito de drogas que atuam na gênese de CL e o seu impacto na replicação viral e na secreção de mediadores inflamatórios Inicialmente, nossos resultados demonstram um aumento na formação e/ou tamanho de CL em distintos tipos celulares infectados in vitro, de uma maneira dependente da integridade viral, visto que o vírus inativado por aquecimento falhou em induzir a biogênese destas organelas. Observamos que a modulação da lipogênese e da formação de CL afetam a capacidade replicativa do vírus. Além disso, constatamos que o DENV é capaz de modular positivamente a expressão de genes envolvidos no metabolismo de lipídios, de forma independente do MIF \2013 citocina que induz a gênese de CL em monócitos \2013 secretado durante a infecção. Na segunda parte deste estudo, observamos que plaquetas ativadas com o DENV in vitro rapidamente formam agregados com monócitos quando comparado com plaquetas estimuladas com mock. Adicionalmente, plaquetas ativadas com o DENV sinalizam para que monócitos aumentem a expressão de COX-2 e a secreção de PGE2 e CXCL8/IL-8. De forma recíproca, observamos que estas células contribuem para uma maior ativação das plaquetas, que então secretam níveis elevados de CCL5/RANTES e CXCL4/PF4. Em seguida, constatamos que plaquetas ativadas com o DENV in vitro são capazes de promover a biogênese de CL em monócitos, de uma maneira dependente da enzima ácido graxo sintase Ao utilizarmos o C75, inibidor desta enzima, também observamos uma redução nos níveis de PGE2, mas não de CXCL-8/IL-8, sugerindo um papel dos CL na produção deste mediador lipídico. O MIF, secretado durante a ativação de plaquetas pelo DENV in vitro, também está envolvido na sinalização que culmina na formação de CL em monócitos expostos a plaquetas ativadas. De forma surpreendente, o sobrenadante de plaquetas ativadas com o DENV não induz a biogênese de CL em monócitos, sugerindo a importância do contato direto entre essas células. De fato, a interação com plaquetas ativadas mostrou-se crucial para que os monócitos respondam funcionalmente, incluindo a secreção de mediadores inflamatórios e o aumento da formação de CL. Por fim, a biogênese destas organelas é maior nos agregados formados com plaquetas ativadas com o DENV, corroborando esta hipótese. Sendo assim, esses dados fortemente sugerem que a interação direta com plaquetas ativadas com o DENV seja crucial para que os monócitos respondam com funções específicas e contribuam para a patogênese da doença. Portanto, o conjunto dos resultados obtidos nos revela a importância em estabelecer estratégias terapêuticas adequadas para controlar a resposta do hospedeiro frente à infecção, onde a própria modulação dos CL possa vir a representar um potencial alvo terapêutico para o tratamento da dengue / Dengue is characterized as the most important arthropod-borne human viral disease worldwide, representing a public health problem. Increased activation of immune cells could be involved in the progression of disease to severe forms. Although monocytes have been recognized as important sources of cytokines, the role of platelets in dengue pathogenesis remains understood. Recently our group showed the contribution of platelet-monocyte interaction to inflammatory responses observed in dengue. In fact, it is becoming increasingly clear that platelets have inflammatory functions and can influence innate response. Evidences suggest that specific stimuli-activated platelets can promote phenotypic changes in monocytes, including enhanced foam cell formation, that is characterized by an increase in lipid droplets (LD) \2013 dynamic cytoplasmic lipid-rich organelles, associated to inflammatory and infectious conditions \2013 biogenesis. Our previous works showed a significant increase in LD accumulation in leukocytes from dengue hemorrhagic fever patients, as well as in different cell types infected in vitro. Besides, these organelles were involved in capsid protein localization and virus particle morphogenesis. However, the mechanisms involved in LD biogenesis and function during dengue virus (DENV) infection still unclear. Therefore, this study aim to (i) investigate the mechanisms related to LD formation in distinct cell types during DENV infection; (ii) evaluate the roles of DENV-activated platelets on monocytes immunomodulation in vitro, focusing on LD biogenesis; (iii) analyze the effects of drugs that abrogate LD formation and your impact on viral replication and secretion of inflammatory mediators Our results demonstrate a significant increase in LD number and/or area in distinct cell types infected in vitro. Importantly, heat inactivated DENV failed to induce LD biogenesis in vitro. Besides, modulation of lipogenesis and LD formation, by C75- or triacsin C-treated cells, impair DENV replication. We also observe that DENV is able to modulate genes involved in lipid metabolism, in a MIF \2013 cytokine that induces LD genesis in monocytes \2013 independent fashion. In the second part of this study, we show that platelets exposed to DENV in vitro form aggregates with monocytes and activate signaling cascade in these cells, which culminates in CXCL8/IL-8 secretion. In addition, platelet-monocyte aggregates formation reciprocally increase platelet activation, observed by an enhanced production of CCL5/RANTES and CXCL4/PF4. DENV-activated platelets increase LD formation and COX-2 activation in monocytes, leading to secretion of PGE2. Damping LD biogenesis through treatment with the fatty acid synthase (FAS) inhibitor C75 prevents PGE2, but not CXCL8/IL-8, secretion by platelet-monocyte aggregates. We also demonstrate that DENV-activated platelets secrete high levels of MIF. LD formation in monocytes exposed to DENV-activated platelets is partially dependent on platelet-derived MIF However, the supernatant from DENV-activated platelets is not sufficient to induce LD biogenesis in monocytes. Finally, LD formation is higher in monocytes which have platelets adhered on surface compared to monocytes that do not contact platelets, suggesting that beyond soluble mediators, platelet adhesion is a major event in platelet-mediated modulation of lipid metabolism in monocytes. Thus, our results indicate that DENV infection promotes LD biogenesis and that this event seems to be dependent of host lipid metabolism, since specific inhibition of enzymes involved in lipogenesis blocks the formation of these organelles. This inhibition also leads to decreased DENV replication, suggesting a role of LD in this process. Moreover, our data provide new evidence that DENV-activated platelets modulate LD formation as well as cytokine signaling in monocytes, during cellular aggregates formation, and these events may contribute to dengue pathogenesis. Therefore, the modulation of LD formation might represent an attractive therapeutic target for dengue

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2017. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: Conclusão e apêndice. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-07-25T13:24:20Z No. of bitstreams: 1 2017_MariaEstherJanssen_PARCIAL.pdf: 2653351 bytes, checksum: a3d023d59c04900adddd8298099f5e72 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-08-11T21:36:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_MariaEstherJanssen_PARCIAL.pdf: 2653351 bytes, checksum: a3d023d59c04900adddd8298099f5e72 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-11T21:36:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_MariaEstherJanssen_PARCIAL.pdf: 2653351 bytes, checksum: a3d023d59c04900adddd8298099f5e72 (MD5) Previous issue date: 2017-08-11 / Introdução: os óbitos por dengue têm sido bastante estudados, porém não se conhece suficientemente bem todos os fatores associados a esses óbitos.Objetivo: identificar os fatores associados à mortalidade por dengue no Distrito Federal no período de 2007 a 2015. Métodos: estudo epidemiológico descritivo e analítico tipo caso-controle, de base hospitalar, de 71 óbitos por dengue ocorridos no Distrito Federal, Brasil, entre janeiro de 2007 e dezembro de 2015. O grupo de casos (pacientes que tiveram dengue com pelo menos um sinal de alarme, internados na rede pública ou privada do DF e evoluíram para óbito), foi comparado com o grupo controle (pacientes que tiveram dengue com pelo menos um sinal de alarme, internados na rede pública ou privada do DF e que sobreviveram). Casos e controles foram confirmados por critério laboratorial. As informações foram coletadas a partir de prontuários médicos, sendo analisadas, entre outras, algumas variáveis relacionadas à qualidade da assistência médica. Utilizou-se a regressão logística para a identificação dos fatores associados aos óbitos. A regressão logística multivariada foi realizada utilizando-se a análise de variância (ANOVA) do modelo completo, empregando-se, posteriormente, o teste qui-quadrado. Resultados: as seguintes variáveis foram selecionadas: “idade maior que 45 anos”, “presença de diabetes”, de “hipertensão arterial sistêmica”, de valores de “uréia maiores que 50 mg/dl”, de “leucócitos menores ou iguais a 4.000/mm3”, “tempo entre o início dos sintomas e o primeiro atendimento maior ou igual a 3 dias” e “percorreu três ou mais serviços de saúde”. Conclusões: as variáveis selecionadas foram consideradas fatores importantes para a ocorrência dos óbitos por dengue no Distrito Federal. Sugere-se a adoção de medidas nos serviços de saúde que garantam um atendimento mais adequado a esses pacientes. / Introduction: while there have been many studies about deaths by dengue, it is not well known all the risk factors associated with such deaths.Objective: to identify the risk factors associated with dengue mortality in the Brazilian Federal District during the period 2007 to 2015.Methods: a case-control, hospital-based, descriptive and analytical epidemiological study of 71 deaths from dengue in the Federal District, Brazil, occurred from January 2007 to December 2015.The case group (patients who had at least one warning sign, from the public or private hospital networks of Federal District, who died) was compared to the control group (patients who had at least one warning sign, from the public or private hospital networks of Federal District, who did not die). Cases and controls were confirmed by laboratorial criteria. The information was gathered by means of medical records, which were also analysed for quality of the medical service offered to the inpatients. Logistic regression was performed to identify the factors associated to the deaths. Multivariate logistic regression was performed using the analysis of variance (ANOVA) of the complete model, the chi-square test being used aftwerwards. Results: the following variables were selected: "age greater than 45 years", "presence of diabetes", "systemic arterial hypertension", "urea values greater than 50 mg / dl", "leukocytes less than or equal to 4,000 / mm3 "," time between onset of symptoms and first care greater than or equal to 3 days "and" went through three or more health services”. Conclusions: the selected variables were considered important factors for the occurrence of dengue deaths in the Federal District, Brazil. It is suggested to adopt measures in the health services that guarantee a more adequate care for these patients.

Submitted by FABIANA DA SILVA FRANÇA (fabiana21franca@gmail.com) on 2017-11-09T15:38:24Z No. of bitstreams: 2 arquivototal.pdf: 3033279 bytes, checksum: f2b56b36fa23f100495d8d218c7e3669 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-09T15:38:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivototal.pdf: 3033279 bytes, checksum: f2b56b36fa23f100495d8d218c7e3669 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / Dengue is a viral systemic disease caused by an arboviral of Flaviviridae family, affecting about a 100 million cases per year in Brazil. It is endemic in tropical regions such as Southeast Asia, South Pacific, East Africa, Caribbean and Latin America. The disease is transmitted by Aedes aegypti (Linnaeus, 1762), a mosquito that is the main target for the disease control through strategies ranging from the larval to the adult combat. The larvicides commonly used to combat the vector, besides being toxic, present drop in larvicide efficacy since the A. aegypti larvae has developed resistance to these products. Thus, the search for new active principles that are effective in combating the mosquito is required. In this sense, Agave sisalana is a plant that is produced in several states in the Brazilian northeast region, which is used in the sisal industry. Only 5% of the plant is recovered, and its residual liquid completely wasted. In this way, the aim of this research project was to investigate the larvicidal action of the juice of Agave sisalana against larvae of A. aegypti. In larvicidal activity assays, fourth stage A. aegypti larvae were used, exposed to different concentrations of A. sisalana liquid waste during 24 hours. After the larvicidal activity assays, it was possible to determine the LC50 that was 5.9 mg / mL. Next we explored the cytotoxic activity of A. sisalana in hemocytes of A. aegypti larvae through the flow cytometry. The experiments showed an increase of cellular necrosis after 12 hours of exposure of the larvae to submaximal concentrations of sisal liquid waste (7.4% in control group vs. 28.5% in the experimental group after 12 hours; 6.2% in the control group vs. 22.7% in the experimental group after 24 hours). The histological alterations were confirmed by histopathological analysis, which showed lyses of the mesentery epithelial cells of larvae as well as peritrophic membrane destruction. Furthermore, nitric oxide (NO) production by hemocytes, an important defense strategy of mosquitoes, was checked after 3, 6 and 24 hours of larvae exposure to the A. sisalana liquid waste. There was a reduction in NO levels of approximately 76.6% after 3 hours, 83% after 6 hours and 83.8% after 24 hours of exposure. In this way, the A. sisalana liquid waste constitutes an effective alternative and economically feasible for the dengue vector combat. The outcomes of our research resulted in the patent application for an insecticide against A. aegypti larvae. / A dengue é uma doença viral sistêmica, causada por um arbovírus da família Flaviviridae, acometendo cerca de 700 mil casos por ano no Brasil. É endêmica de regiões tropicais como o sudeste asiático, sul do Pacífico, África Oriental, Caribe e América Latina. A dengue é transmitida pelo mosquito Aedes aegypti (Linnaeus, 1762), que é o principal alvo de combate para controle da doença, por meio de estratégias que vão desde o combate às formas larvares até o mosquito adulto. Os larvicidas comumente utilizados no combate do vetor, além de serem tóxicos, vêm apresentando queda na capacidade larvicida já que as larvas do A. aegypti tem desenvolvido resistência a esses produtos. Sendo assim, a busca por novos princípios ativos que sejam eficientes no combate do mosquito se faz necessária. Nesse sentido, a Agave sisalana é uma planta que é produzida em vários estados do nordeste brasileiro, a qual é utilizada na indústria sisaleira. Apenas 5% da planta é aproveitada, sendo o seu resíduo líquido completamente desperdiçado. Dessa forma, este projeto de pesquisa teve como objetivo investigar a ação larvicida do suco de Agave sisalana contra larvas de A. aegypti. Nos ensaios de atividade larvicida, utilizou-se larvas de quarto estágio de A. aegypti, testando-se diferentes concentrações de suco de A. sisalana durante 24 horas. Após os ensaios de atividade larvicida foi possível determinar a CL50, que foi de 5,9 mg/mL. A pesquisa também explorou a atividade citotóxica da A. sisalana em hemócitos de larvas de A. aegypti, através da citometria de fluxo. Verificou-se um aumento no percentual de necrose celular a partir de 12 horas de exposição das larvas a concentrações submáximas de suco de sisal (7,4% no grupo controle vs. 28,5% no grupo experimental após 12 horas; 6,2% no grupo controle vs.22,7% no grupo experimental após 24 horas). As alterações histológicas foram confirmadas em exames histopatológicos, que mostraram lise celular de células epiteliais do mesentério das larvas e destruição da membrana peritrófica. A produção de óxido nítrico (NO) pelos hemócitos, uma importante estratégia de defesa dos mosquitos, foi verificada após 3,6 e 24 horas de exposição das larvas ao suco de A. sisalana. Observou-se uma diminuição dos níveis de NO da ordem de 76,6% após 3 horas de exposição, 83 % após 6 horas de exposição, e 83,8 % após 24 horas de exposição. Sendo assim, o suco de A. sisalana pode se constituir numa alternativa efetiva e economicamente viável para o combate ao vetor da Dengue. Essa pesquisa resultou no pedido de patente de um inseticida formulação a base de A. sisalana para combate às larvas de A. aegypti.

Dengue é uma doença viral que atinge vários países, infectando milhares de pessoas anualmente. Sua transmissão ocorre pelo repasto sanguíneo feito pelas fêmeas dos mosquitos Aedes sp. infectadas e seus sintomas tem um amplo espectro de variação, que vão desde quadros assintomáticos até quadros graves com hipovolemia, podendo levar a óbito. A necessidade de adaptação do vírus a sistemas tão distintos (inseto e mamífero) restringe o espectro de variabilidade que o mesmo pode adquirir, permitindo que o vírus se adapte a ambos os hospedeiros com eficiência replicativa semelhante. Estudos com outros flavivírus já mostraram que a aquisição de variabilidade ocorre de maneiras distintas no hospedeiro mamífero e no inseto vetor, permitindo ao vírus máxima adaptação nas células infectadas. Levando em consideração estes estudos, este trabalho investigou a adaptação de duas cepas do vírus da dengue, a ACS-46, não neurovirulenta para camundongos adultos e a cepa JHA, neurovirulenta para camundongos adultos. O estudo foi feito utilizando cultura de células de mosquito (C6/36), cultura de células de mamífero (HepG2) e infecção em cérebro de camundongos neonatos. Utilizando sequenciamento de nova geração, foi possível verificar as mutações adquiridas ao longo de passagens em cada sistema de cultura. Foram realizadas 20 passagens seriadas em célula C6/36 e seis passagens alternadas entre C6/36 e HepG2. Os vírus obtidos na décima sexta e vigésima passagens do modelo seriado e na quarta e sexta passagens do modelo alternado foram completamente sequenciados utilizando a plataforma de sequenciamento em larga escala Ion Torrent. A análise das sequências revelou duas populações virais claramente distintas, já observadas a partir de décima sexta passagem, identificadas através da deleção de dois códons no sítio de glicosilação do domínio I da proteína de Envelope. Essa deleção induziu aumento na fusão do vírus à célula de mosquito, visto que a partir dessa passagem houve aumento no efeito citopático do vírus e na carga viral produzida durante infecções em células de mosquito. Contudo, essa mutação teve um perfil deletério em células humanas, fato deduzido pelo total desaparecimento da população com a deleção durante as passagens alternadas. Além desta deleção, foram detectadas sete mutações não sinônimas em região de proteínas não estruturais com porcentagens muito próximas, sugerindo que as mesmas fazem parte de uma mesma população. A cepa JHA teve seu caráter neurovirulento perdido após 29 passagens em C6/36, porém rapidamente recuperado após uma única passagem em cérebro de camundongo neonato. O sequenciamento dos vírus dessas passagens mostrou certa variabilidade em sítios distintos entre as variantes do vírus parental, vírus não neurovirulento e vírus neurovirulento passado em camundongo. Esse resultado indicou que aparentemente, não há sítios específicos determinantes de neurovirulência em DENV2, ao menos no nosso modelo, mas sim, um conjunto de mutações podem levar ao fenótipo neurovirulento, a depender das condições as quais o vírus é exposto. / Dengue is a viral disease that affects several countries, infecting thousands of people annually. It is transmitted by blood meal of the female Aedes sp mosquitoes infected. Symptoms have a wide range of variation, ranging from asymptomatic to severe symptoms, including hypovolemia and death. The need for adaptation in such distinct systems (insect and mammalian) restricts the variability that the viruses can acquire, allowing them to adapt to both hosts with similar replicative efficiency. Studies performed with other flaviviruses have shown that acquisition of variability occurs differently between the mammalian host and the insect vector, allowing the virus to adaptat in both systems. Therefore, this study investigated the adaptation of two strains of dengue virus, the ACS-46, not neurovirulent for adult mice and JHA strain, which is neurovirulent for adult mice. The study was done using mosquito cells culture (C6/36), mammalian cells (HepG2) and in vivo infection in newborn mouse brain. Using next-generation sequencing, we analyzed the mutations acquired over passages in each culture system. Twenty serial passages were conducted in C6/36 cells and six alternate passages between C6/36 and HepG2. Viruses obtained in the sixteenth and twenty passages from the serial experiment and the fourth and sixth passages from alternate model were completely sequenced using the next generation sequencing platform Ion Torrent. Sequence analysis revealed two clearly distinct viral populations observed from the sixteenth passage identified by deletion of two codons in the glycosylation site in the envelope protein domain I. This deletion led to increased fusion of the virus to mosquito cell, since the cytopathic effect increased from this passage to next as well as the viral load. However, this mutation had a deleterious profile in human cells since the mutated population was vanished during the alternate passages. It was also identified seven non-synonymous mutations in the region of nonstructural proteins with very similar percentages, suggesting that they belong to the same population. JHA strain lost the neurovirulent characteristic after 29 passages in C6/36, but quickly recovered it after a single passage in newborn mouse brain. The sequencing of the virus of these passages showed some variability in different sites among the parental virus, not neurovirulent viruses and neurovirulent virus after the single passage in mice. These data indicated that apparently there is no specific determinants of neurovirulence in DENV2, at least in our model, but rather a set of mutations can lead to neurovirulent phenotype, depending on the conditions in which the virus is exposed.

A introdução da dengue no município de São Paulo ocorreu de forma tardia em relação às demais grandes cidades do Brasil. Este estudo teve como objetivo descrever a ocorrência de dengue no município, desde a sua introdução, em 2002, até 2014, ano da primeira epidemia de maiores dimensões no território paulistano, bem como verificar possíveis associações entre a ocorrência de dengue e variáveis socioambientais. Foi realizado um estudo epidemiológico descritivo dos casos prováveis de dengue, autóctones, residentes no município, no período de 2007 a 2014. O estudo incluiu componente ecológico, de modo que se buscou verificar as possíveis associações entre a incidência de dengue nos distritos administrativos em que se divide o município e variáveis socioambientais. A incidência variou entre 2,04 em 2008, a 256,67 em 2014, no período analisado, por 100.000 habitantes. Não houve diferença na distribuição entre os gêneros. A doença foi mais frequente entre os adultos jovens. Observou-se uma distribuição espacial heterogênea entre as regiões e os distritos, com a maior incidência observada nos distritos da região Oeste da cidade, e a menor, nos distritos centrais. A proporção de casos graves foi baixa, assim como a letalidade. No período inicial, a incidência foi maior nos distritos cortados por rodovias e pelas vias marginais. Em 2014, com o aumento da incidência, essa associação desapareceu. A ocorrência de dengue no município de São Paulo apresenta características semelhantes às das primeiras décadas da ocorrência da doença no restante do país. / The emergence of dengue in the municipality of São Paulo occurred late, in relation to the other large cities of Brazil. This study aimed to describe the occurrence of dengue in the municipality, since its emergence, in 2002, until 2014, year of the first large epidemic in the municipality, and verify possible associations between dengue occurrence and social and environmental variables. A descriptive epidemiologic study was carried out, using the reported autochthonous dengue probable cases among residents in the municipality, from 2007 to 2014. It was not possible to analyze the period from 2002 to 2007, because the official data system for mandatory disease reporting (SINAN) had not been used in that period. The study also included an ecologic component. It was attempted to verify possible associations between dengue incidence in the administrative districts in which the municipality is divided with social and environmental variables. The incidence varied between 2.04 per 100,000, in 2008, and 256.67 in 2014, during the studied period. No difference in the distribution according to gender was observed. The disease was more frequent among young adults. Its spatial distribution was heterogeneous among the regions and districts, with higher incidence observed in the districts of the Western region, and lower in the Central districts. The proportion of severe cases was low, as was the case-fatality rate. In the initial phase the incidence was higher in the districts crossed by highways and by the \"marginal\" avenues. In 2014, with increasing incidence rates, this association disappeared. The occurrence of dengue in the municipality of São Paulo presents similar characteristics to those observed during the first decades of the disease occurrence elsewhere in Brazil.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O objetivo deste trabalho constitui-se realizar uma anÃlise sobre comportamento da dengue na cidade de Fortaleza-CE, levando em conta a influÃncia das condiÃÃes socioeconÃmicas e climÃticas, e enfocando as diferenÃas socioespaciais que garantem a produÃÃo de um clima urbano e a manutenÃÃo da dengue na cidade. Para isso, foram adquiridos dados de variÃveis atmosfÃricas, epidemiolÃgicas e socioeconÃmicas. Elaborarou-se mapas, grÃficos e cÃlculos geoestatÃsticos (Alfa de Crobach, CorrelaÃÃo de Pearson, autocorrelaÃÃo espacial â I de Moran e LISA). Executou-se uma anÃlise espaÃo temporal em uma perspectiva do geral ao particular e adentrou-se na anÃlise episÃdica dos fenÃmenos epidemiolÃgicos. A umidade relativa do ar foi a variÃvel atmosfÃrica que mais se correlacionou com os casos de dengue. Verificou-se correlaÃÃes mais elevadas em atà um mÃs de diferenÃa entre as chuvas e o aumento de casos da doenÃa, diminuindo com o adiantamento de 2 e 3 meses. Constataram-se correlaÃÃes negativas entre os casos de dengue e a temperatura mÃdia do ar devido à influÃncia da precipitaÃÃo. Fortaleza apresenta espaÃos onde coexistem populaÃÃes com precariedades sociais, vivendo em Ãreas frÃgeis ambientalmente e com elevada quantidade de casos de dengue. Os bairros da porÃÃo oeste, sudoeste e sudeste da cidade foram onde se iniciaram os episÃdios epidÃmicos de 2011 e 2012, e tambÃm onde a doenÃa se manteve endÃmica no episÃdio de 2013. Nessas regiÃes a dengue se proliferou com maior rapidez logo no inÃcio das epidemias investigadas. As correlaÃÃes entre as variÃveis epidemiolÃgicas e socioeconÃmicas sÃo mais fortes nos meses de inÃcio das epidemias, quando a doenÃa ainda nÃo està totalmente disseminada pela cidade. As variÃveis Renda MÃdia de Moradores por DomicÃlio e Porcentagem de DomicÃlios Ligados à Rede Geral de Esgoto ou Pluvial foram as variÃveis que mais se correlacionaram com a incidÃncia da doenÃa. A autocorrelaÃÃo espacial aponta os bairros com piores condiÃÃes de saneamento como aqueles com elevada incidÃncia no inÃcio dos episÃdios epidÃmicos. Nos episÃdios investigados a epidemia se anunciou com o aparecimento de alguns casos prÃximos entre si, para em seguida se configurar em uma epidemia explosiva.

A dengue foi objeto de estudo desta dissertação, devido ao elevado número de casos que ocorrem anualmente no Brasil, o que demonstra a importância de se conhecer mais as razões de sua incidência. A urbanização, industrialização e crescimento populacional acelerados do país, além das condições climáticas e nível de qualidade de vida, alteram as condições de saúde ambiental, o que favoreceu o aumento das ocorrências. A recéminstitucionalizada Região Metropolitana do Vale do Paraíba e Litoral Norte, que apresenta alta taxa de urbanização e níveis de desenvolvimento elevados, apresentou uma grande diversidade de ocorrências e incidência entre seus trinta e nove municípios. Este estudo analisou a distribuição dos casos dengue, considerando os níveis de atendimento do abastecimento de água, rede de esgoto e coleta de lixo na Região Metropolitana do Vale do Paraíba e Litoral Norte e o nível de inserção econômica das cidades, que revelou ser esta a provável causa do elevado número de casos em doze das trinta e nove cidades. A pesquisa desenvolveu-se a partir das notificações de dengue contidas no SINAN (Sistema de Informação de Agravos e Notificação), considerando notificações por ano do 1º sintoma e segundo o munícipio de residência. As informações a respeito da Região Metropolitana do Vale do Paraíba e Litoral Norte foram obtidas através das informações disponibilizadas e foram pesquisadas nos documentos desenvolvidos pela EMPLASA. Os dados socioambientais foram acessados no site da SEADE, com base nos censos de 2000 e 2010. Para calcular as taxas de incidências, foi utilizado o número estimado da população disponível no DATASUS, que tem como fonte os censos e projeções populacionais desenvolvidas pelo IBGE. Os resultados indicaram como provável causa da distribuição irregular da doença e seu elevado número de ocorrências em algumas cidades, o nível de inserção que ela apresenta no cenário regional, estadual e nacional. O estudo mostra a dificuldade de se estabelecer condicionantes quanto à dengue, indicando que há a necessidade de ampliar os dados a serem analisados, além de mudar a escala de regional para o local, visando desenvolver subsídios que possibilitem o planejamento de forma regionalizada . / The dengue fever was the subject of this study due to the numerous cases of the disease that occurs annually in Brazil, a fact that shows the urge to know more about the disease spreading reasons. The countrys fast urbanization, industrialization and population growth, besides the climatic conditions and welfare levels, changes the environmental and health conditions and has favored the increase of occurrences. The newly created Vale do Paraíba e Litoral Norte metropolitan area, a high urbanized and high developed region, showed a great diversity of occurrences and incidence between its thirty-nine municipalities. This study had analyzed the dengues cases distribution considering the elevated number of the disease subjects in twelve of the thirty-nine municipalities. This paper analyzed the distribution of the dengue fever considering the water supply, sewage treatment and waste collection levels in the metropolitan area and the level of economic relevance of its cities and revealed that the latter is the probable cause of the high number of the diseases incidence in the aforementioned cities. This research has been developed from notifications of the dengue disease based on SINAN (Sistema de Informação de Agravos e Notificação), considering the first symptom notifications per year and according the home city of the patient. The information related to the Vale do Paraíba e Litoral Norte metropolitan area were obtained from the documents developed and provided by EMPLASA. The socio-environmental data were accessed in the SEADEs website and based on the 2000 and 2010 census. In order to calculate the incidence taxes, the estimated population number provided by DATASUS had been used. This number is based on sources and population growth projections developed by IBGE. The results indicate that the probable cause of the diseases irregular distribution and its elevated number of occurrences in some cities was the level of the citys relevance and influence on its region or state. The study shows the difficulties of constraining dengue fever spreading, and indicates the need of widen the data to be analyzed and, furthermore, changing the data from regional to local scale, in order to develop subventions that will allow a region-organized planning.