As células-tronco provenientes da polpa de dentes decíduos esfoliados (SHED) são uma fonte promissora de células-tronco para a terapia regenerativa. Já foi demonstrado que elas podem se diferenciar em células endoteliais, mas os mecanismos envolvidos nesse processo ainda são desconhecidos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo elucidar os mecanismos moleculares relacionados à diferenciação endotelial dessas células. Para isso, um meio de cultura para células endoteliais (EGM-2MV), suplementado por 50ng/mL rhVEGF, foi utilizado com sucesso como estímulo para as SHED se diferenciarem em células endoteliais em cultura de monocamada. Uma vez que, elas expressaram os marcadores endoteliais VEGFR-2 e CD-31. Além disso, quando as SHED foram expostas ao meio de diferenciação, a fosforilação de STAT-3 (um marcador de células-tronco) foi inibida de acordo com a concentração utilizada, enquanto a fosforilação de ERK e AKT foi estimulada. Quando um inibidor de ERK foi adicionado ao meio, a fosforilação de STAT-3 aumentou. Por outro lado, quando um inibidor de STAT-3 foi adicionado ao meio de cultura, a fosforilação de ERK aumentou. A inibição de ERK também impediu a diferenciação endotelial. Para confirmar esse resultado, shRNA MEK-1 SHED também falharam em expressar VEGFR-2 quando estimuladas. Além disso, scaffolds de fatias dentais foram semeadas com shRNA VEGFR-1 SHED ou shRNA controle e implantadas no subcutâneo de camundongos imunodeficientes. Após recuperados, um tecido muito semelhante à polpa dental foi formado no interior das fatias. No entanto, havia menos células CD-31 positivas nos vasos sanguíneos dos implantes semeados com VEGFR-1 shRNA SHED, sugerindo um papel do VEGFR-1 na formação de vasos sanguíneos. Em conclusão, o VEGFR-1 e a via de sinalização de ERK estão envolvidos no processo de diferenciação das SHED em células endoteliais. / Stem Cells from Exfoliated Deciduous Teeth (SHED) are a promising source of stem cells for regenerative therapy. It was already shown they can differentiate into endothelial cells, but the mechanisms involved in this process remain unclear. Therefore, the following study aimed to elucidate the molecular mechanisms related to endothelial differentiation of SHED. For this purpose, a culture media for endothelial cells (EGM-2MV), supplemented with 50ng/ml rhVEGF, was successfully used as stimuli for SHED to undergo endothelial differentiation in monolayer culture, as they expressed the endothelial markers VEGFR-2 and CD- 31. Moreover, when SHED were exposed to the differentiation medium, STAT-3 phosphorilation (a stemness marker) was inhibited while the ERK and AKT phosphorilation was stimulated. When an ERK inhibitor was added to the medium, the STAT-3 phosphorilation increased in a dependent concentration manner. On the other hand, when a STAT-3 inhibitor was added the ERK phosphorilation increased. The ERK inhibition also arrested endothelial differentiation. To confirm this results, shRNA MEK-1 SHED also failed to express VEGFR-2 when stimulated. Additionally, tooth slice scaffolds were seeded with shRNA VEGFR-1 SHED or shRNA control SHED and implanted, subcutaneously, into immunodeficient mice. After retrieved, a dental pulp-like tissue had been formed inside the tooth slice. However, there were fewer CD-31 positive blood vessels in the shRNA VEGFR-1 implants suggesting a role of VEGFR-1 in the formation of blood vessels by SHED. In conclusion, the VEGFR-1 and ERK pathway are involved in the process of differentiation of SHED into endothelial cells.

O desvio apical é um fator bastante relevante na terapia endodôntica pela possibilidade de conduzir o tratamento proposto ao insucesso. Este estudo se propôs a realizar uma avaliação in vitro da ocorrência de desvio apical e sua magnitude nas instrumentações manual com limas de aço-inoxidável, rotatória de giro contínuo com o sistema K3 e rotatória de giro alternado com contra-ângulo NSK e limas de aço-inoxidável, em raízes mésio-vestibulares de molares superiores. A amostra foi formada por 60 raízes que, após a inclusão numa modificação da mufla de Bramante, foram seccionadas longitudinalmente. De acordo com o ângulo e raio da curvatura do seu canal, as raízes foram paritariamente divididas em três grupos. Uma das metades de cada raiz teve sua face interna digitalizada por scanner de mesa. As raízes foram remontadas nas muflas e seus canais instrumentados. A mesma metade de cada raiz teve sua face interna novamente digitalizada em três momentos distintos: primeiro, na confecção do preparo apical com a lima 30, após com a lima 35 e, por fim, com a lima 40. Cada imagem pós operatória (limas 30, 35 e 40) foi sobreposta à imagem pré-opertória no programa Adobe Photoshop. Após, foram transferidas ao programa AutoCad, onde o desvio apical foi mensurado. Para a comparação entre as limas dos três grupos foram utilizados os testes nãoparamétricos de Friedman e Wilcoxon que encontraram diferença significativa. (p=0,000) Para a comparação entre os três grupos foi utilizado o teste não-paramétrico Kruskal-Wallis (p=0,000) que demonstrou haver diferença significativa entre os grupos estudados. / Apical transportation has considerable relevance in endodontic therapy, as it may lead to treatment failure. This study conducted an in vitro comparative analysis of apical transportation produced in mesiobuccal roots of upper molars by (i) manual instrumentation using stainless steel files, (ii) K3 rotary Ni-Ti system, and (iii) a reciprocating NSK handpiece, also with stainless steel files. The sample comprised 60 roots that were inserted in a Bramante muffle and then longitudinally sectioned. Roots were subdivided pair-wise into three groups according to canal angle and radius. The inner surface of one root half was digitized using a scanner. Roots were then reassembled onto the muffles and had their canals instrumented. The same root half had its inner surface digitized again after instrumentation with three different file sizes: 30, 35 and 40. Each image obtained therefrom was superimposed over the pre-operative image using the Adobe Photoshop software. After, images were transferred to the AutoCad software for apical transportation measurements. The non-parametric Friedman and Wilcoxon tests were adopted to compare results for the three different file sizes, and showed the statistically significant differences between the results obtained (p=0,000). Similarly, the comparison between the three treatment groups by the nonparametric Kruskal-Wallis test revealed statistically significant differences.

Embora diferentes estudos indiquem que há um aumento da resistência dos microrganismos aos agentes antimicrobianos prescritos, pouco se sabe a respeito da sua distribuição na cavidade oral. A presente dissertação está dividida em dois capítulos, representados por dois diferentes manuscritos. No manuscrito I, uma revisão sistemática foi realizada e teve como objetivo determinar quais genes de resistência a antimicrobianos foram pesquisados em saliva (S), no biofilme supragengival (SB) e canal radicular (RC). Os termos foram usados em várias combinações nas seguintes bases de dados eletrônicas (MEDLINE, EMBASE, ISI, SCOPUS e OPENGREY). Após seleção dos títulos e análise dos resumos, o texto integral de cada estudo foi obtido. Foram estabelecidos critérios de inclusão e exclusão. Dados epidemiológicos, características metodológicas e os resultados foram obtidos a partir dos estudos. Devido à falta de padronização da metodologia entre os trabalhos, não foi possível realizar uma meta-análise. Realizou-se análise descritiva dos dados. Um total de 151 títulos foram identificados para análise preliminar. Quarenta e nove resumos foram selecionados e 22 textos completos foram obtidos. Sete artigos contemplavam aos critérios de inclusão (S = 2; SB = 0 , e RC = 5). Vinte e seis diferentes genes-alvo foram avaliados. Os genes de resistência mais frequentemente descritos foram os relacionados às tetraciclinas e lactâmicos (5/7). Observa-se que poucos artigos foram selecionados pela estratégia de busca adotada para esta revisão sistemática. Este fato demonstra a falta de padronização nas metodologias dos estudos que utilizam técnicas moleculares para a detecção de genes de resistência bacteriana, tanto em condições de saúde ou doença. No manuscrito II, um estudo de observação clínica e laboratorial foi desenvolvido para detectar a presença de espécies-alvo de Prevotella e o gene cfxA/cfxA2 em amostras de saliva (S), biofilme supragengival (SB) e canais radiculares infectados (RC). Amostras pareadas de S, SB e RC foram coletadas de 42 indivíduos. Os pacientes foram divididos em três grupos: Grupo I - sem infecção aguda/crônica primária do canal radicular (n = 15), Grupo II - presença de infecção aguda primária no canal radicular (n = 12 ) e Grupo III - presença de infecção crônica no canal radicular (n = 15). Foram coletadas amostras de RC apenas para os Grupos II e III. Após o isolamento do DNA, a presença de Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi detectada através de PCR. Comparou-se a frequência das espécies e do gene de resistência, considerando diferentes ambientes e condições clínicas. A análise estatística foi realizada. Todas as amostras de S, SB e RC foram positivos para a detecção de DNA bacteriano. As taxas de detecção para espécies de Prevotella foram: S= 53,97%; SB=47,62%, e RC=34,56%. O gene cfxA não foi detectado simultaneamente em três ambientes do mesmo paciente. A presença ou ausência de sintomas espontâneos não influenciou as taxas de detecção para as espécies-alvo e para o gene cfxA/A2 em amostras de RC (teste exato de Fisher , P> 0,05). Espécies de Prevotella e o gene cfxA/cfxA2 foram frequentemente detectados na saliva, placa dental e amostras de canais radiculares. / Although different studies indicate that there is an increased resistance of microorganisms to antimicrobial agents prescribed in Endodontics, little is known about their distribution in the oral cavity. The present dissertation was divided into two chapters, represented by two different manuscripts. In manuscript I, a systematic review was conducted and aimed to determine which antimicrobial resistance genes were investigated in saliva (S), the supragingival biofilm (SB) and root canal (RC). The terms were used in various combinations in the following electronic databases (MEDLINE, EMBASE, ISI, SCOPUS and OPENGREY). After title screening and abstract analysis, the full text of each study was obtained. The relevance of each study to the question of interest was determined through inclusion and exclusion criteria. Epidemiologic data, methodological characteristics and results were collected from the studies. Due to lack of methodology standardization among the papers, it was not possible to perform a meta-analysis. Descriptive data analysis was performed. A total of 151 titles were identified for preliminary analysis. Forty-nine abstracts were selected, and full texts of 22 studies were obtained. Seven articles matched the inclusion criteria (S=2; SB= 0; and, RC=5). Twenty-six different targeted genes have been evaluated. The most frequently investigated groups of resistance genes were related to tetracycline and lactamics (5/7). Few articles in the literature fit in the search strategy adopted by this systematic review, demonstrating the lack of standardization in the methodologies of studies using molecular techniques for the detection of bacterial resistance genes to antibiotics in oral cavity, either in health or disease conditions. In the manuscript II, an observational clinical and laboratorial study was developed to identify the presence of targeted Prevotella species and the cfxA/cfxA2 gene in samples from saliva (S), supragingival biofilm (SB) and infected root canals (RC). Paired samples of S, SB and RC were collected from 42 subjects. Patients were divided into three groups: Group I - no acute or chronic root canal infection (n = 15); Group II - presence of acute root canal infection (n = 12), and Group III - presence of chronic root canal infection (n=15). RC samples were collected for Groups II and III. After DNA isolation, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and the cfxA/cfxA2 gene was detected through gene-specific PCR. The frequency of the species and of the resistance was compared, considering different environments and clinical conditions. Statistical analysis was carried out. All samples from S, SB and RC were positive for the presence of bacteria. The overall detection rates for Prevotella species were: S = 53.97%; SB = 47.62%; and, RC = 34.56%. The cfxA gene was not detected simultaneously in the three environments from the same patient. The presence of absence of spontaneous symptoms had not influenced the detection rates for the targeted species and for the cfxA/A2 gene in RC samples (Fisher Exact Test, P>.05). Prevotella species and the gene cfxA/cfxA2 were frequently detected in saliva, dental plaque and root canal samples.

Orientador: Brenda P. F. A. Gomes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-04T21:56:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_FernandoJoseCamellode_M.pdf: 4661786 bytes, checksum: 585044641889708ea8ca89cc73fd7064 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O presente estudo teve como objetivo investigar a moriologia dos canais radiculares dos molares permanentes de humanos, identificando a configuração dos canais radiculares (classificação de WEINE modificada), os istmos, canais em C, e a correlação entre anatomia externa e interna. Foram utilizados 131 dentes: primeiros e segundos molares superiores (1°Se 2°SMS) e primeiros e segundos molares inferiores (1°Se 2°8 MI), obtidos em Maceió, AL. Os dentes tiveram as suas características externas registradas, para aí serem seccionados na junção amelo-cementária (JAC), para a visualização dos soalhos e das entradas dos canais radiculares. As raízes foram seccionadas transversalmente a 1; 2,5; 4; 5,5 e 7 mm do ápice e examinadas pelo lado apical no estereomicroscópio. Os dados obtidos foram submetidos ao teste do qui-quadrado com significância de 5%. Encontraram-se todos os tipos estudados de canais radiculares nas raízes mésiovestibulares (MV) dos MS. As raízes palatinas (P) dos 1°SMS e distais (O) de 2°S MI só tiveram um canal, enquanto que esta configuração não foi encontrada nas raízes mesiais (M) de 1°SMI. Os istmos estiveram presentes nas raízes MV dos MS em 98,5%, disto-vestibulares (OV) de MS em 10,4% e nos MI, em 91,1% das raizes mesiais (M) e 46,4% das raizes (O). Seis dentes tiveram canais em C, desses, só um não apresentava fusionamento radicular. O soalho da câmara pulpar nos 1°SMS foi trapezoidal em 75% dos casos e triangular no 2° MS em 53,6% dos casos. Os MS com projeções de cúspides MV apresentaram 81,3% de casos nos 1°SMS e 60,7% nos 2°SMS com mais de um canal na raiz MV. Pode-se concluir que as raizes MV de MS e M de MI têm maior probabilidade de possuírem dois canais. Quanto aos istmos, exceto as raízes P e eventuais raízes V dos MS, todas as outras raízes apresentaram istmos nos canais radiculares, porém a maior incidência apareceu nas raizes MV dos 1°SMS, e nas raízes M dos MI. Quanto ao canal em C, todos os molares, exceto os 1°SMI, mostraram esta configuração anatômica ao nível de raiz, sendo isto mais encontrado nas raízes fusionadas. Os MS, principalmente os primeiros molares, com projeções de cúspides MV apresentam maior possibilidade de ter mais de um canal na raiz MV / Abstract: The aim of this study was to investigate the root canais morphology of permanent human molars, to identify the root canal configuration (Weine modified), to verify the presence of isthmus and C-shapes configuration in root canais, and to establish a correlation between internal/external anatomies. One hundred and thirty-one first and second upperllower molars obtained from Maceio, AL, Brazil, were used. Teeth were sectioned in the enamel- cement junction to investigate pulp canal chamber floar and orifice shapes. Then, the roots were transversally sectioned at 1; 2,5; 4; 5,5 and 7 mm from the apex. Afterwards, they were investigated in stereomicroscopy from an apex side view. Data obtained were submitted to chi-square test. The major diversity of root canal types was found in mesial-buccalroots of the uppermolars. Palatal roots of 1st upper molar and distal roots of 2nd lower molars presented only one root canal, while it did not happen in mesial roots of 1st lower molars. Isthmus were presentin mesial-buccalrootsof the upper molars (98,5%), distal-buccal roots of the upper molars (10,4%), mesial root of the lower molars (91,1%) and distal root of the lower molars (46,4%) of the cases. C-shape root canais were found in 6 teeth, in which, only one did not show root-fusion. Most chamber floar shapes were trapezoidal in 1st (75%) and triangle in the 2nd upper molars (53,6%). First upper molars presented in 81,3% a projection of the mesial-buccal cusps, and 60,7% of the 2nd upper molars showed greater possibility of presenting more than one canal in the mesial-buccal root. In conclusion, mesial-buccal roots in upper molars and mesial roots in lower molars presented more often two root canais. Isthmus was found in ali root canais, except from palatine and eventually buccal roots of upper molars. C-shape root canal morphology were found in ali molars besides first lower ones; being frequently found in teeth with fusioned roots. First upper molars with an overprojected mesial buccal cusp showed more frequently two root canais / Mestrado / Endodontia / Mestre em Clínica Odontológica

Orientador: Luis Alexandre Maffei Sartini Paulillo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T23:18:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ozaki_Jansen_M.pdf: 4599360 bytes, checksum: ecab3b09dc88aad3d46bc54a8a659ccb (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Este trabalho teve como objetivo avaliar a dureza Knoop (KHN) de cimentos resinosos duais na cimentação de pinos de fibra de vidro com diferentes sistemas adesivos e profundidades do canal radicular. Para este estudo foram utilizados 48 incisivos bovinos que tiveram suas coroas seccionadas e as raízes tratadas endodonticamente. Para a restauração utilizando pino de fibra de vidro e os sistemas de cimentação as raízes foram aleatoriamente dividas em 6 grupos: Grupo 1: Single Bond (3M ESPE)/RelyX ARC (3M ESPE), grupo 2: ED Primer (Kuraray)/Panavia F (Kuraray), grupo 3: Single Bond (3M ESPE)/Panavia F (Kuraray), grupo 4: ED Primer (Kuraray)/RelyX ARC (3M ESPE), grupo 5: sem adesivo/RelyX ARC (3M ESPE) e grupo 6: sem adesivo/Panavia F (Kuraray). As raízes restauradas foram armazenadas por 48 horas sob abrigo da luz e seccionados longitudinalmente para se avaliar a KHN nas profundidades cervical, média e apical. Para a microscopia eletrônica de varredura (MEV) foram selecionadas e preparadas 4 hemi-raízes para se observar à qualidade da formação de tags de resina no interior dos túbulos. Os maiores valores de dureza foram encontrados no grupo 6 que não utilizou nenhum tipo de sistema adesivo, e não apresentou nenhuma diferença estatística significativa entre a profundidade média e apical. O grupo 4 apresentou os menores valores de KHN comparado aos demais grupos. O sistema adesivo frasco único para a técnica do condicionamento ácido total apresentou uma camada de lama dentinária na região do terço apical, nas demais regiões demonstrou formação homogênea de tags de resina. O cimento Panavia F apresentou a maior dureza KHN em relação ao Rely X ARC em todas as profundidades testadas e o sistema adesivo influenciou a microdureza KHN dos cimentos resinosos na cimentação de pinos pré-fabricados nas regiões mais profundas do canal radicular / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the Knoop hardness (KHN) of dual cure resin cements used to bond fiber posts at different regions of root canal dentin. Forty eight extracted roots of bovine teeth were used. After root canal treatment they were randomly divided into six groups of 8 roots each. Fiber posts were inserted with two different adhesive systems and dual cure luting resin cements. Group 1: Single Bond (3M ESPE)/RelyX ARC/(3M ESPE), group 2: ED Primer (Kuraray)/Panavia F (Kuraray), group 3: Single Bond (3M ESPE)/Panavia F (Kuraray), group 4: ED Primer (Kuraray) RelyX ARC/(3M ESPE), group 5: no adhesive system/RelyX ARC/(3M ESPE) and group 6: no adhesive system/Panavia F (Kuraray). The fixed and bonded specimens were stored for 48 hours, sectioned longitudinally and Knoop hardness measured at coronal, medium and apical regions. Four root halves of each group was then processed for evaluation by SEM of resin tags formation in dentin. The highest KHN were obtained with group 6 that it didn't use adhesive system none, not presenting any significant difference among the medium and apical depth. The group 4 had the lowest KHN compared to the other groups. Conditioning of the root canal dentine with phosphoric acid and use one-bottle bonding systems gave a more uniform penetration of resin tags than observed after the use of ¿self-etching¿ adhesives. Dual cure resin cements used with different adhesive systems and the depth, influenced in the Knoop hardness, which was significantly reduced in the apical region. Panavia F resin cement showed the highest KHN means in all of the tested depths / Mestrado / Dentística / Mestre em Clínica Odontológica

Orientadores: Alexandre Augusto Zaia, Sergio Roberto Peres Line / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-13T01:17:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendonca_ThaisAccorsi_D.pdf: 1140557 bytes, checksum: edc0e3c618eed2eddfe927042cc99ba1 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: As metaloproteinases de matriz (MMPs) são enzimas zinco dependentes secretadas por diversas células e que possuem uma importante função no remodelamento da matriz extracelular tanto em processos fisiológicos quanto patológicos. Essas enzimas são secretadas na forma inativa (zimógeno) e sua atividade pode ser modulada por inibidores teciduais endógenos (TIMPs). As MMPs são subdivididas de acordo com seu substrato, sendo as MMPs -2 e -9 conhecidas como gelatinases por degradar gelatina, ou seja, colágeno denaturado. Em uma inflamação pulpar intensa ocorre degradação tecidual similar à qualquer outro processo inflamatório. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar polpas dentais humanas sadias e inflamadas quanto à expressão gênica de MMP-2, MMP-9 e TIMP-2 utilizando o PCR em tempo real; valores proteicos de TIMP-2 através do ELISA e atividade gelatinolítica de MMP-2 e MMP-9 por meio da técnica zimográfica. A técnica de quantificação de mieloperoxidase (MPO) também foi realizada em todas as amostras para identificar e quantificar a presença de células neutrofílicas na polpa. Foram utilizadas polpas sadias (n=20) de terceiros molares inclusos e polpas inflamadas (n=20), caracterizadas clinicamente. Os resultados mostraram uma expressão gênica 9 vezes maior para MMP-9 em polpas inflamadas quando comparadas a polpas sadias. Para a quantificação proteica, os valores absolutos evidenciaram maiores valores de TIMP-2 em polpas inflamadas quando comparadas com polpas sadias (p<0,0039). A atividade gelatinolítica para o grupo sadio evidenciou maior presença de bandas para pro-MMP-2, com ausência de MMP-9. Em polpas inflamadas, a proteína que apresentou maior atividade foi a MMP-9, com atividade significantemente maior (p=0,00081) quando comparada com MMP-2 ativa. O resultado da quantificação da proteina MPO evidenciou para algumas amostras inflamadas, caracterizadas clinicamente, um padrão similar ao encontrado para polpas sadias. E em amostras inflamadas com alto índice de MPO, caracterizando assim presença de muitos neutrófilos, houve presença de atividade gelatinolítica para MMP-9. Assim, pode-se concluir que a proteína MMP-2, em polpas inflamadas, tornou-se ativa mesmo com o aumento da produção de TIMP-2. Entretanto, o aumento em níveis proteicos para TIMP-2 na inflamação, não foi acompanhado do aumento do RNAm para este gene. Em processos inflamatórios, MMP-2 e MMP-9 foram encontradas de forma ativa, o que não ocorreu em polpas sadias. Não houve correlação entre sintomatologia e presença da proteína mieloperoxidase ou atividade gelatinolítica em polpas inflamadas / Abstract: Matrix Metalloproteinases (MMPs) are members of a family of zinc-dependent endopeptidases which are involved in the degradation of extracellular matrix but also in a number of other biologic processes. Such as any other inflammatory process, the pulp inflammation is associated with tissue degradation which can be mediated by MMPs. MMP-2 and MMP-9, named gelatinases, are secreted in latent form (zymogen) and their activity can be modulated by tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs). The aim of this study was evaluated the role of MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 in inflammatory human dental pulp tissues. Twenty dental pulp clinically diagnosed as inflammatory tissues and twenty healthy pulp tissues from enclosed third molars were harvested and evaluated to: gene expression of MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 by real-time PCR; protein quantification of TIMP-2 by ELISA; gelatinolytic activity (MMP-2 and MMP-9) assessed by zymography technique, and neutrophils quantification by mieloperoxidase protein (MPO) assay. Data analysis showed an increased mRNA levels of MMP-9. Protein level of TIMP-2 in inflammatory pulp tissues was higher than healthy tissues (p<0,0039). The gelatinolytic activity for the healthy pulp tissues revealed a greater presence of bands for pro-MMP-2, with absence of MMP-9 bands. In inflammatory pulp tissues, MMP-9 demonstrated higher activity (p=0.00081) compared to MMP-2. Finally, the inflammatory pulp tissues with increased MPO protein levels were associated to the MMP-9 gelatinolityc activity. Taken together, these data suggest that MMP-2 in inflammatory pulp tissues was activated even at the presence of high levels of TIMP-2. However, the increased protein levels of TIMP-2 in inflammatory pulps were not followed by an increase of corresponding mRNA levels. During inflammatory process, MMP-2 and MMP-9 were found active, which did not occur in healthy pulps. Besides, it was not observed correlation between pain and the presence of mieloperoxidase protein or gelatinolytic activity in inflammatory pulp tissues / Doutorado / Endodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-09T16:41:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martinho_FredericoCanato_M.pdf: 2565020 bytes, checksum: d3b12dfab50de25f375d07ea0056245c (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O conhecimento das espécies microbianas assim como da suscetibilidade das mesmas à terapia endodôntica é importante para o sucesso do tratamento. Sendo assim, a proposta do presente estudo foi: 1) Analisar a microbiota endodôntica de dentes com necrose pulpar e presença de lesão periapical (C1) e correlacionar com os sinais e sintomas clínicos; 2) investigar mudanças microbiológicas após o preparo químico-mecânico (PQM) (C2); 3) investigar a presença de Entreococcus spp., Candida spp. e enterobactérias na saliva dos pacientes submetidos a terapia endodôntica; 4) quantificar endotoxinas antes (C1) e após PQM (C2); 5) determinar in vitro a suscetibilidade antimicrobiana de algunsmicrorganismos isolados das infecções endodônticas primárias. Amostras microbiológicas foram coletadas da saliva e do canal radicular de 30 pacientes. Foram identificados 182 microrganismos nos canais radiculares, sendo 65,38% anaeróbios estritos. As espécies mais freqüentemente encontradas foram P. micros (63,3%), P. intermedia (50%), S. mitis (30%). Associações positivas foram encontradas entre dor à percussão e E. lentum; dor à palpação e G.haemolysans e E. lentum; fístula e P. micros; exsudato purulento e Bifidobacterium spp. As espécies Peptostreptococcus spp., Fusobacterium spp., Porphyromonas spp., Prevotella spp. foram analisadas e mostraram-se suscetíveis a ação da amoxicilina e da mesma associada ao ácido clavulânico. Maiores concentrações de endotoxinas foram quantificadas nos dentes com sintomatologia clínica. Associação positiva entre LPS e a presença de dor à percussão foi encontrada (p<0,01) Conclusão: A infecção endodôntica primária caracterizou-se ser do tipo mista e polimicrobiana, com predomínio de microrganismos anaeróbios estritos, principalmente bacilos Gramnegativos; a presença de sinais e/ou sintomas clínicos mostrou estar relacionada com determinadas espécies tais como Eubacterium lentum, Gemella haemolysans, Peptostreptococcus micros e Bifidobacterium spp. comumente isoladas em infecções endodônticas primárias; Candida spp. e Enterococcus spp. foram mais freqüentemente isolados da saliva do que as Enterobacteria spp. O isolamento das espécies C. albicans e E. faecalis no canal radicular foram associados com a identificação das espécies na saliva; o PQM dos canais radiculares foi eficaz na redução do número de microrganismos. Mudança na microbiota foi encontrada após PQM. Amoxicilina associada ao ácido clavulânico mostrou ser uma potente combinação contra microrganismos envolvidos na infecção de origem endodôntica. Altas concentrações de endotoxinas nos canais radiculares parecem estar relacionadas com a presença de sintomatologia clínica, particularmente com a dor à percussão. O PQM foi capaz de reduzir a concentração inicial de endotoxinas em todos os canais radiculares, entretanto não foi capaz de eliminá-las / Abstract: Bacteria and their by-products play an important role in the etiology and development of pulp and periapical diseases. The knowledge of endodontic microbiota and its susceptibility to endodontic therapy is important to a successful treatment. Therefore the aims of this study were: 1) to analyse the root canal microbiota in infected teeth with pulp necrosis and periapical lesions (C1) and its correlation with the clinical signs and symptoms; 2) to investigate the variations in the susceptibilities of endodontic microflora to biomechanical procedures (C2); 3) to investigate Candida spp., Enterococcus spp. and enterobacteria in saliva from the patients under endodontic therapy; 4) to quantify endotoxins before (C1) and after chemo-mechanical preparation (CMP) (C2); 5) to determine in vitro the antimicrobial susceptibility rates of the microrganisms recovered from the root canals with primary endodontic infections. Thirty root canals were microbiologically sampled before (C1) and after CMP (C2). At the baseline samples (C1), a total of 182 microrganisms were identified. Strict anaerobic or microphilic species predominated in 65.38%. P. micros (63.3%), P. intermedia (50%), S. mitis (30%) were the most frequent species recovered from the root canals at the baseline samples (C1). Associations between terderness to percussion and the presence of E. lentum; pain on palpation and G. haemolysans and E. lentum; sinus tract and P. micros; Purulent exudate and Bifidobacterium spp. (p<0.05) were found. Peptostreptococcus spp., Fusobacterium spp., Porphyromonas spp., Prevotella spp. were susceptible to amoxicilin and amoxicillin + clavulanate. Higher levels of endodotoxin were detected in teeth with clinical symtphomatology. A positive association was found between the presence of LPS and tenderness to percussion (p<0.01).It was concluded that microbiota from infected root canals with pulp necrosis and periapical lesions was comprised by a mixed and polimicrobial flora, dominated by strict anaerobes, particulary Gram-negative rods. Signs and symptoms seemed to be related to the presence of specific bacteria species Eubacterium lentum, Gemella haemolysans, Peptostreptococcus micros e Bifidobacterium spp.. Candida spp. and Enterococcus were more requently recovered from saliva than Enterobacteria spp. Isolation of C. albicans and E. faecalis from root canals were associated with their identification in the saliva samples. CMP was efficient in reducing the number of microorganisms. Changing in root canal flora was detected after endodontic procedures. Amoxicilin associated with clavulanate was an effective and a strong antimicrobial agent against microorganisms involved in endodontic infections. High contents of LPS seem to be related to the presence of clinical symptomatology, particulary tenderness to percussion. CMP was effective in reducing the initial amount of endotoxin in all root canal samplings but was not able to eliminate it / Mestrado / Endodontia / Mestre em Clínica Odontológica

Ciente de que o principal objetivo do tratamento endodÃntico consiste na eliminaÃÃo de microorganismos e evitar a reinfecÃÃo dentro do canal radicular, e que as infecÃÃes sÃo polimicrobianas e difÃceis de serem eliminadas, o preparo biomecÃnico alÃm de ser primordial para a desinfecÃÃo, à incapaz de erradicar todos os microorganismos. EntÃo, utiliza-se da medicaÃÃo intracanal como coadjuvante ao tratamento, reduzindo a microbiota endodÃntica e favorecendo o reparo da lesÃo periapical. Contudo, esta dissertaÃÃo à constituÃda de dois artigos e propÃe-se, mediante uma revisÃo de literatura, apresentar e discutir as medicaÃÃes intracanais mais utilizadas atualmente na Endodontia â hidrÃxido de cÃlcio e clorexidina, e, por meio de uma pesquisa, avaliar o efeito antibacteriano do preparo biomecÃnico e de uma pasta à base de hidrÃxido de cÃlcio associada ou nÃo à clorexidina a 2 %, como medicaÃÃo intracanal, no tratamento de dentes necrosados apÃs trauma, bem como verificar a presenÃa dos microorganismos Fusobacterium nucleatum e bacilo pigmentado negro no interior do canal radicular desses dentes. De acordo com os critÃrios de inclusÃo, a amostra constituiu-se de 14 incisivos necrosados apÃs trauma. As coletas microbiolÃgicas foram adquiridas apÃs a abertura coronÃria (C1), preparo biomecÃnico (C2), medicaÃÃo intracanal (C3) e 72h depois da retirada da medicaÃÃo (C4). Mediante sorteio, oito pacientes utilizaram como medicaÃÃo intracanal o hidrÃxido de cÃlcio e seis pacientes a pasta de hidrÃxido de cÃlcio associada à clorexidina a 2 %. As coletas foram realizadas introduzindo sequencialmente trÃs cones de papel absorvente estÃril, de diÃmetro compatÃvel com o do canal radicular, no interior deste por aproximadamente um minuto e transferidas para um tubo contento um fluido reduzido para transporte e levadas ao laboratÃrio para processamento microbiolÃgico. Os resultados foram avaliados pelos testes Friedman, Conover-Inman e Kruskall-Wallis (p<0.05). Os microorganismos foram encontrados em 100 % dos canais radiculares, das amostras iniciais (C1), enquanto na C2 foram detectados em apenas 3/14 (21.4 %) das amostras, resultando numa reduÃÃo do nÃmero de unidades formadoras de colÃnias, estatisticamente significante (p<0.001) entre C1 e C2. O mesmo nÃo ocorreu quando comparados C2 com C3, C2 com C4 e C3 com C4, independentemente da medicaÃÃo. Foi constatada em C1 a predominÃncia de cocos Gram-positivos (8/14) e negativos (9/14), representando 57.1 % e 64.3 %, respectivamente. Na C2 sà foram detectados morfotipos bacterianos positivos, num total de 3/14 (21,4 %) de cocos Gram-positivos e 2/14 (14.3 %) de bacilos Gram-positivos. O microorganismo Fusobacterium nucleatum e o bacilo pigmentado negro foram observados em 8/14 (57.1 %) e 3/14 (21.4 %), respectivamente, das amostras iniciais, sendo apenas o primeiro encontrado em 1/6 (16.1 %) amostras, apÃs a utilizaÃÃo do hidrÃxido de cÃlcio. Concluiu-se que o preparo biomecÃnico de dentes necrosados apÃs trauma, utilizando NaOCl a 2.5 %, desempenha seu papel em reduzir significantemente a microbiota dos canais radiculares, porÃm o hidrÃxido de cÃlcio ou a sua associaÃÃo com clorexidina a 2 % possuem efeito antibacteriano limitado, nÃo sendo capazes de prevenir o recrescimento de bactÃrias apÃs seu uso como medicaÃÃo intracanal. / Aware that the main objective of endodontic treatment is the removal of microorganisms and the prevention of re-infection inside the root canal, and that the infections are polymicrobial and difficult to eliminate, the biomechanical preparation is essential for disinfection, though it is unable to eradicate all microorganisms. The intracanal medication is used as an adjunct to treatment, reducing the endodontic microbiota, and favoring the repair of periapical lesions. However, this dissertation consists of two papers and it is proposed, through a written review, to examine and discuss the intracanal medications most frequently used at present in endodontics - calcium hydroxide and chlorhexidine. Further, through research, to evaluate the antibacterial effect of biomechanical preparation and a calcium hydroxide based paste containing or not 2% chlorhexidine, as intracanal medication in the treatment of necrotic teeth after trauma, as well as to verify the presence of the microorganisms Fusobacterium nucleatum and black-pigmented bacilli inside the root canal of teeth. According to the inclusion criteria, the sample consisted of 14 incisors necrotic after trauma. The microbiological samples were acquired before (S1) and after biomechanical preparation (S2), after intracanal medication (S3) and 72 hours after removal of medication (S4). Selected at random, eight patients used calcium hydroxide as intracanal medication and six patients the calcium hydroxide based paste containing 2% chlorhexidine. The samples were collected sequentially, inserting three sterile absorbent paper cones with a diameter compatible with the root canal, and after a minute the paper points were removed and placed in a tube containing a reduced transport fluid, and sent to the laboratory for microbiological evaluation. The results were analyzed by the Friedman, Conover-Inman and Kruskal-Wallis tests (p <0.05). Microorganisms were found in 100 % of root canals in the initial samples (S1), while in S2 were detected in only 3 out of the 14 samples (21.4 %), resulting in a reduction in the number of colony forming units, a statistically significant result (p <0.001) between S1 and S2. No statistically significant reduction was observed when comparing S2 with S3, S2 with S4, and S3 with S4, regardless of the medication used. It was found that in S1, there was a predominance of Gram-positive cocci - 8 out of 14 (57.1 %) and Gram-negative cocci - 9 out of 14 (64.3 %). In S2 only Gram-positive bacterial morphotypes were detected, in 3 out of 14 samples (21.4 %) of Gram-positive cocci and 2 out of 14 (14.3%) of Gram-positive bacilli. The microorganisms Fusobacterium nucleatum found in 8 of the 14 samples (57.1%) and the black-pigmented bacilli found in 3 of the 14 (21.4%) of the initial samples, and were found in only one out of 6 (16.1%) samples taken after the use of calcium hydroxide. It was concluded that mechanical preparation of necrotic teeth after trauma, using 2.5% NaOCl, plays its role in significantly reducing the microbiota of root canals, but the calcium hydroxide, or the calcium hydroxide based paste containing 2% chlorhexidine, have a limited antibacterial effect, not being able to prevent the re-growth of bacteria after its use as an intracanal medication.

A retina é composta por células neuronais especializadas, que quando danificadas são incapazes de se regenerar. CTIPD são uma promissória fonte para substituir o tecido lesado pois são capazes de se diferenciar em quase todos os tipos celulares. O objetivo do estudo é avaliar o potencial de diferenciação das CTIPD em neurônios retinais. As CTIPD foram submetidas a formação de neuroesfera, a qual foi avaliada pela expressão de nestin, <font face=\"Symbol\">b-III-tubulin e Pax-6. A partir da neuroesfera foi realizada a indução da diferenciação em neurônios retinais, a qual foi avaliada pela expressão dos marcadores específicos da diferenciação retinal. Observou-se a reação positiva com nestin, <font face=\"Symbol\">b-III-tubulin e Pax-6 na esfera, sugerindo um comprometimento com a linhagem neural/retinal. Nas células diferenciadas observamos uma maior expressão de Chx-10 e Crx e menor de Nrl, Calbindin, Recoverin e Rhodopsin. Este estudo sugere que CTIPD apresentam potencial de desenvolvimento em neurônios retinais. Entretanto, estudos adicionais são necessários para elucidar a formação da retina neural. / Retina is composed of specialized neuronal cells, which in case of damage are unable to regenerate. CTIPD is a promissory source to replace the injured tissue because they can differentiate into almost all cell types. The aim of the study was to evaluate the differentiation potential of CTIPD in retinal neurons. CTIPD were submitted to neurosphere formation and evaluated by the expression of nestin, <font face=\"Symbol\">b-III-tubulin and Pax-6. From the neurosphere was performed the induction of differentiation into retinal neurons, which was assessed by the expression of specific markers of retinal differentiation. We observed a positive reaction with nestin, <font face=\"Symbol\">b-III-tubulin and Pax-6 in the sphere, suggesting a commitment to the neural/retinal lineage. In differentiated cells we found a higher expression of Chx-10 and Crx and a lower expression of Nrl, Calbindin, Recoverin and Rhodopsin. This study suggests that CTIPD show potential development into retinal neurons. However, additional studies are needed to elucidate the formation of the neural retina.

O objetivo do presente estudo foi avaliar por meio de observações clínicas e radiográficas a resposta in vivo do complexo dentino-pulpar de dentes decíduos humanos após a realização da remoção parcial e total do tecido cariado. Quarenta e nove molares decíduos de crianças com idades entre 5 a 9 anos foram criteriosamente selecionados. Os dentes foram divididos em dois grupos: Grupo I remoção parcial do tecido cariado; Grupo II remoção total do tecido cariado. As avaliações clínicas e radiográficas foram realizadas nos períodos de 4 a 6 meses do pós-operatório. A reprodutibilidade intra-examinador foi determinada pelo teste Kappa. O teste exato de Fisher foi utilizado para determinar a diferença estatística entre os grupos. Todos os dentes apresentaram sucesso clínico no período de avaliação de 4 a 6 meses. A avaliação radiográfica mostrou 94,2% e 89,6% de sucesso no Grupo I e no Grupo II, respectivamente. Os resultados radiográficos não mostraram diferença estatisticamente significativa nos grupos estudados em nenhum dos critérios avaliados (p>0,05). Com base nos resultados obtidos para amostra estudada, e de acordo com a metodologia aplicada, a remoção parcial do tecido cariado exibiu resultados clínicos e radiográficos satisfatórios, sugerindo que a abordagem minimamente invasiva para remoção de cárie dentária pode substituir a remoção total do tecido cariado quando indicada corretamente. / The aim of this study was to evaluate through clinical and radiographic observation the in vivo response of the dentin pulp complex of human deciduous teeth after the partial and total removal of the caries. Forty-nine deciduous molars in children with the age between 5 and 9 years old were carefully selected. The teeth were divided in two groups: Group I partial removal of caries; Group II total removal of caries. Clinical and radiographic evaluations were performed during the period of 4 to 6 months after procedure. The intra-examiner reproducibility was determined by the Kappa test. The exact fisher test was used to determine the statistical difference between the groups. All teeth showed clinical success in the evaluation period of 4 to 6 months. The radiographic evaluation showed 94,2% and 89,6% of success rate in Group I and in Group II, respectively. Radiographic results did not show statistically significant differences between the studied groups (p>0,05). Based on the obtained results to this sample, and according to the applied methodology, the partial removal of the caries showed satisfactory clinical and radiographic results, suggesting that the minimally invasive approach to the removal of dental caries might substitute the total removal of the caries when correctly indicated.