As células da polpa dental têm o potencial de responder a estímulos externos e reparar o tecido dentário lesionado. Nos dentes, as lesões cariosas profundas e as lesões traumáticas são frequentes e resultam em alterações pulpares. Com o desenvolvimento da ciência e a busca de formas inovadoras de tratamento utilizando biomateriais de tamanho cada vez menor, verificar a biocompatibilidade desses materiais antes da aplicação clínica se mostra necessário e promissor. Assim, a finalidade deste estudo foi avaliar a biocompatibilidade de uma nova nanopartícula de hidroxiapatita utilizando células pulpares humanas em cultura. As Nanopartículas de Hidroxiapatita (HAp) utilizadas em nosso estudo são um material novo e ainda não disponível para a prática clínica. Como parâmetro comparativo, foi utilizado o material já consagrado na Odontologia para tratamentos endodônticos, o Agregado Trióxido Mineral (MTA). Para tanto, foram realizados testes de biocompatibilidade (MTS (3-(4,5-dimetiltiazol-2-y)5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil-2H-tetrazolio)). Foi preparada uma solução de material na concentração de 0,1g/ml diluído em meio de cultura, proporção preconizada pela norma ISO 10.993-12 (ISO, 1996). Esta solução foi diluída em 3 diferentes concentrações (1/10, 1/100 e 1/1000). Também foram realizados testes de migração celular e testes de capacidade de diferenciação, na concentração de 1/100. Como resultados pudemos verificar que as células da polpa foram viáveis quando expostas a diferentes concentrações de HAp, proliferaram mais quando tratadas com HAp na concentração de 1/100, migraram em direção aos materiais estudados e diferenciaram-se em tecido mineralizado quando em contato direto com ambos materiais estudados. Concluímos que o novo material testado é biocompatível e capaz de induzir mineralização em células de polpa dental sugerindo que as HAp podem ter aplicações clínicas futuras em tecidos mineralizados como osso e dente. / The dental pulp cells have the potential to respond to external stimuli and repair the dental tissue injury. On teeth, deep carious lesions and traumatic injuries are common and result in pulp changes. With the development of science and the search for innovative treatment forms using reduced size biomaterials, to verify the biocompatibility of these materials before clinical application has become necessary and promising. Thus, the purpose of this study was to evaluate the biocompatibility of a new hydroxyapatite nanoparticle using human pulp cells in culture. The nanoparticles of hydroxyapatite (HAp) used in our study are new material and not yet available for clinical practice. As a comparator, we used the material already used in dentistry to root canal treatment, the Mineral Trioxide Aggregate (MTA). To do so, biocompatibility (MTS (3-(4,5-dimetiltiazol-2-y)5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil-2H-tetrazolio)). A solution of the material in a concentration of 0.1 g / ml diluted in culture medium recommended by ISO 10993-12 (ISO 1996) standard was prepared. This solution was diluted in three different concentrations (1/10, 1/100 and 1/1000). Were also performed cell migration and differentiation capacity assays at a concentration of 1/100. As results, we found that the pulp cells were viable when exposed to different concentrations of HAp, they proliferated more when treated with 1/100 HAp concentration, migrated toward the studied materials and differed into mineralized tissue when there was direct contact with both materials studied. We conclude that the new material tested is biocompatible and able to induce mineralization of dental pulp cells suggesting that the HAp may have future clinical applications in mineralized tissues such as bone and tooth.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-08-21T20:48:50Z No. of bitstreams: 1 erikamagestedealmeidacandido.pdf: 1656149 bytes, checksum: cb85adffa4639a0d053da59c714be89a (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-25T11:43:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 erikamagestedealmeidacandido.pdf: 1656149 bytes, checksum: cb85adffa4639a0d053da59c714be89a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-25T11:43:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 erikamagestedealmeidacandido.pdf: 1656149 bytes, checksum: cb85adffa4639a0d053da59c714be89a (MD5) Previous issue date: 2017-07-27 / O armazenamento celular e tecidual para uso em terapia regenerativa e desenvolvimento de pesquisas, torna-se uma questão importante à medida que a expectativa de vida aumenta. Este trabalho se propôs avaliar os efeitos de campos magnéticos estáticos unidirecionais durante o processo de criopreservação inicial de células e de tecido pulpar de dentes terceiros molares humanos hígidos. Foram obtidas polpas dentárias (n=39) de terceiros molares extraídos, que foram divididas para avaliação celular (n=3) de viabilidade e avaliação tecidual (n=36) para obtenção de células do tecido pulpar. Para avaliação celular, células isoladas e expandidas, compuseram os grupos: Grupo I: controle, células submetidas à criopreservação inicial por método convencional; Grupo II: controle, células submetidas à criopreservação inicial lenta; Grupo III: células submetidas à criopreservação inicial lenta, associado a 150mT; Grupo IV: células submetidas à criopreservação inicial lenta, associado a 290mT; Grupo V: células submetidas à criopreservação inicial lenta, associado a 360mT. Durante a criopreservação as células foram suspensas em meios de congelamento contento 0, 3 e 10% de DMSO (dimetilsulfóxido): GI-II III-IV-V 0%, GI-II-III-IV-V 3% e GI-II-III-IV-V 10%. Para avaliação tecidual as amostras criopreservadas inicialmente em método convencional, formaram os grupos: Grupo I: polpas submetidas à criopreservação inicial sem campo magnético (GI); Grupo II: polpas submetidas à criopreservação inicial associada a 150mT (GII); Grupo III: polpas submetidas à criopreservação inicial associada a 290mT (GIII); Grupo IV: polpas submetidas à criopreservação inicial associada a 360mT (GIV). Amostras das avaliações celular e tecidual, após criopreservação inicial, foram armazenadas em nitrogênio líquido por 7 dias. Após o processo de descongelamento a viabilidade celular foi mensurada por trypan blue e a eficiência de obtenção de células a partir da polpa criopreservada, por observação óptica diária. Os resultados foram semelhantes para as taxas de viabilidade imediatamente após descongelamento celular para GI-II-III-IV-V 0%, GI-II-III-IV-V 3% e GI-II-III-IV-V 10% (p>0.05). Enquanto a viabilidade após 96h de subcultivo celular, os valores de GI-II-III-IV-V 0% foram inferiores aos de GI-II-III-IV-V 3% e GI-II-III-IV-V 10% (p<0.05). As células de polpa dentária expostas ao campo magnético durante a criopreservação tiveram um efeito positivo nas taxas de viabilidade após 96h de subcultivo, quando o meio de congelamento foi de 0% DMSO (p<0.05). Foi possível obter células da polpa dos quatro grupos da avaliação tecidual, sendo que o GIV apresentou maior taxa de eficiência. Pode-se concluir que a intensidade do campo magnético e a concentração de DMSO testados não influenciaram na taxa de viabilidade mensurada por trypan blue, imediatamente após o descongelamento. Entretanto, promoveu diferença estatística nos valores de GI-II-III-IV-V 0% após 96h de subcultivo celular. A intensidade do campo magnético foi diretamente proporcional à eficiência de obtenção de células a partir de polpa criopreservada. / Cell and tissue banking for use in regenerative therapy and research development becomes an important issue as life expectancy increases. This work aimed to evaluate the effects of unidirectional static magnetic fields during the initial cryopreservation process of cells and pulp tissue of healthy human third molar teeth. Dental pulps (n = 39) were obtained from third molars extracted, which were divided for cellular evaluation (n = 3) of viability and tissue evaluation (n = 36) to isolate dental pulp cells. For cell evaluation, isolated and expanded cells comprised the following groups: Group I: control, cells submitted to initial cryopreservation by conventional method; Group II: control, cells submitted to initial slow freezing; Group III: cells submitted to initial slow freezing with 150mT; Group IV: cells submitted to initial slow freezing with 290mT; Group V: cells submitted to initial slow freezing with 360mT. During cryopreservation the cells were suspended in freezing medium containing 0, 3 and 10% DMSO (dimethylsulfoxide): GI-II-III-IV-V 0%, GI-II-III-IV-V 3% and GI- II-III-IV-V 10%. For tissue evaluation, samples initially freezing in a conventional method comprised the following groups: Group I: pulps submitted to initial freezing without magnetic field (GI); Group II: pulps submitted to the initial freezing with 150mT (GII); Group III: pulps submitted to initial freezing with 290mT (GIII); Group IV: pulps submitted to the initial freezing with 360mT (GIV). Samples from cellular and tissue evaluations, after initial cryopreservation were stored in liquid nitrogen for 7 days. After the thawing process the cellular viability was measured by trypan blue and the efficiency of obtaining cells from the cryopreserved pulp by daily microscopic observation. The results showed that cell survival rates were similar between control groups and experimental groups at concentrations of 0%, 3% and 10% DMSO (p>0.05). After 96h of culture, the proliferation rate was higher for the groups exposed to the freezing medium with 3% and 10% DMSO, than DMSO free groups (p<0.05). Dental pulp cells exposed to magnetic field during freezing had a positive effect on the proliferating rate when the freezing medium was DMSO free (p<0.05). It was possible to obtain cells from all groups of the tissue analysis, and the GIV exhibited the highest efficiency rate. In conclusion, the magnetic field strength and the DMSO concentration tested, did not influence the viability rate measured by trypan blue immediately after thawing. But that promoted difference in the values of GI-II-III-IV-V 0% after 96h of cellular culture. The increase of magnetic field was directly proportional to the efficiency rate of dental pulp cell isolation from cryopreserved tissue.

Orientadores: Gláucia Maria Bovi Ambrosano, Solange Maria de Almeida Bóscolo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T18:33:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Argento_Rafaela_M.pdf: 2501458 bytes, checksum: 709aab5737ed57d32fb079e1ff7ed405 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A radioterapia é uma modalidade terapêutica de tratamento contra neoplasias malignas, que pode ser usada isoladamente ou em conjunto com a quimioterapia e/ou cirurgia, tendo efeito curativo ou remissivo. Apesar de todos os benefícios, por não ser um tratamento específico, atinge células malignas e células saudáveis, podendo resultar em complicações. Assim, a radiação ionizante possui efeitos danosos, que podem ser agudos ou tardios. Quando o tumor maligno se encontra na região de cabeça e pescoço, os efeitos colaterais incluem mucosite, disfagia, xerostomia, digeusia, trismo, osteorradionecrose, entre outros. A polpa dental também está no campo de irradiação ou em suas imediações e, quando afetada, o dente pode ter resposta negativa ao teste de sensibilidade pulpar, sendo indicado o tratamento endodôntico ou mesmo a exodontia. Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito da radiação ionizante sobre o tecido pulpar de dentes de ratos Albinus Wistar por meio de análise morfológica. A amostra foi constituída por 35 ratos, que foram divididos em 7 grupos: o grupo controle (n=5), 3 grupos irradiados com 15 Gy (n=15) e 3 grupos irradiados com 25 Gy (n=15). Os grupos irradiados foram submetidos à dose única de radiação, e sacrificados 24 horas, 7 dias e 22 dias após a irradiação. Cinco animais do grupo irradiado com 25 Gy não sobreviveram por mais de 10 dias. A análise histológica dos cortes pelo método da hematoxilina e eosina não mostrou alterações como infiltrado inflamatório, edema ou fibrose, mas mostrou degeneração hialina nos vasos sanguíneos pulpares dos dentes irradiados, que foi estatisticamente significante (p<0,05). Concluiu-se que a radiação pode causar alterações vasculares no tecido pulpar / Abstract: Radiotherapy is a therapeutic modality for treatment against malignant neoplasms, which may be prescribed solely or together with chemotherapy and/or surgery; it has healing or remissive effects. Despite all the benefits, for not being a specific treatment it affects both malignant and healthy cells and complications may result; therefore, ionizing radiation has deleterious effects which may be acute or late. When a malignant tumor is found in the head and neck region the side effects include mucositis, dysphagia, xerostomia, dysgeusia, trismus, osteoradionecrosis, among others. The dental pulp also is in the radiation field or in its surroundings and when affected by radiation, the tooth may respond negatively to the pulp sensitivity test, in this case, it may receive the recommendation for endodontic treatment or even extraction. This work has aimed to evaluate the effects of ionizing radiation upon pulp tissue of Albinus Wistar rat teeth, by means of morphological analysis. The sample consisted of 35 rats divided into 7 groups: control group (n=5), 15 Gy irradiated groups (n=15) and 25 Gy irradiated groups (n=15). The irradiated groups were given a single dose of radiation and sacrificed after 24 hours, 7 days and 22 days. Five animals of the 25 Gy irradiated group did not survived for more than 10 days. The histological analysis of the slides, by the Hematoxylin-Eosin (HE) method, showed no changes such as inflammatory infiltrate, edema and fibrosis, though, it showed hyaline degeneration of pulpal blood vessels of irradiated teeth which was statistically significant (p<0,05). Therefore it can be concluded that radiation may cause vascular changes in pulpal tissue / Mestrado / Radiologia Odontologica / Mestra em Radiologia Odontológica

Orientadores: Adriana de Jesus Soares, Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T21:23:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nagata_JulianaYuri_D.pdf: 1885757 bytes, checksum: 6a26b8beb223d63399f25d6cc087da55 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O presente trabalho teve como objetivos: avaliar os resultados clínicos e radiográficos da utilização da pasta tripla antibiótica e do hidróxido de cálcio associado à clorexidina gel 2% para a revascularização pulpar (capítulo 1); avaliar a redução microbiana da descontaminação realizada com pasta tripla antibiótica e à base de hidróxido de cálcio e clorexidina gel 2% na revascularização pulpar, e identificar espécies microbianas por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) (capítulo 2); relatar dois casos clínicos de dentes reimplantados com rizogênese incompleta onde foi proposto o protocolo de revascularização pulpar (capítulo 3). Material e Métodos: Treze pacientes (7-17 anos de idade) com incisivos superiores necrosados devido a trauma dental foram divididos em dois grupos: grupo medicado com pasta tripla antibiótica (TAP) (n=7) e grupo medicado com a associação de hidróxido de cálcio e clorexidina gel 2% (CHP) (n=6). Os pacientes foram acompanhados por um período de 9 a 19 meses com avaliação dos dados clínicos e radiográficos (capítulo 1). Quinze pacientes (7-17 anos de idade) apresentando dentes imaturos foram tratados com revascularização pulpar e divididos em grupo TAP (n=7) e grupo CHP (n=8). As amostras microbianas foram coletadas inicialmente e após cada etapa de descontaminação dos canais radiculares. As bactérias cultiváveis foram contadas e identificadas por meio de PCR (capítulo 2). Dois pacientes (7 e 8 anos) foram acometidos por avulsão dentária no incisivo central superior esquerdo e no incisivo lateral superior esquerdo, respectivamente. Os dentes foram submetidos à revascularização pulpar consistindo de descontaminação passiva (hipoclorito de sódio 6%, solução fisiológica e clorexidina 2%), e medicação intracanal (hidróxido de cálcio e clorexidina gel 2%) por 21 dias. Na segunda sessão, a formação de coágulo sanguíneo foi estimulada e uma barreira de Agregado Trióxido Mineral (MTA) foi inserida (capítulo 3). Resultados: No capítulo 1, os dois grupos demonstraram completa redução da sintomatologia clínica, entretanto, escurecimento coronário foi observado em 6(85.71%) dentes do grupo TAP. Radiograficamente, todos os dentes do grupo TAP demonstraram reparo de lesão periapical, e apenas um dente do grupo CHP não demonstrou reparo periapical. Fechamento apical foi observado em 5(71,42%) dentes do grupo TAP e em 4(66.67%) dentes do grupo CHP. No capítulo 2, ambos os grupos apresentaram redução na contagem microbiana (UFC/mL) significativa entre a amostra inicial e após irrigação com NaOCl 6% (p<0.05). A utilização das medicações intracanais (grupos TAP ou CHP) não diferiu com relação às contagens de CFU/mL (p=0.95). A espécie bacteriana mais prevalente foi Actinomyces naeslundii (66,67%). Uma média de 2,13 espécies por canal foi encontrada. No capítulo 3, o primeiro caso apresentou fechamento apical e calcificação do terço apical do espaço do canal radicular no controle de 16 meses. O segundo caso demonstrou reabsorção radicular progressiva, sendo tratado com apicificação. Conclusões: A revascularização pulpar pode ser uma alternativa de tratamento para dentes acometidos por luxações traumáticas leves com rizogênese incompleta. Tanto a pasta tripla antibiótica quanto o hidróxido de cálcio associado a clorexidina gel 2% sugerem redução de sinais clínicos, radiográficos e redução microbiana na revascularização pulpar / Abstract: This study aims to: evaluate clinical and radiographic outcomes of the use of triple antibiotic paste and calcium hydroxide associated to 2% chlorhexidine gel paste for pulp revascularization therapy (chapter 1); evaluate microbial reduction of pulp revascularization performed with triple antibiotic paste and calcium hydroxide associated to 2% chlorhexidine gel, and identify bacteria species using Polymerase Chain Reaction (PCR) (chapter 2); report two clinical cases of immature replanted teeth which were treated with a protocol of pulp revascularization (chapter 3). Methods: Thirteen patients (7-17 years-old) with necrotic upper incisors due to dental trauma were divided in two groups: group treated with triple antibiotic paste (TAP) (n=7) and group dressed with the association of calcium hydroxide and 2% chlorhexidine gel (CHP) (n=6). Patients were followed-up for till 9 to 19 months, with evaluation of clinical and radiographic data (chapter 1). Fifteen patients (7-17 years-old) presenting immature teeth were treated with revascularization and divided in group TAP (n=7) and group CHP (n=8). Samples were taken initially and after each step of root canal decontamination. Cultivable bacteria recovered at the five stages were counted and identified by means of PCR assay (chapter 2). Two patients (7 and 8 years old) suffered tooth avulsion on maxillary left lateral incisor and on maxillary left central incisor, respectively. Treatment consisted of revascularization therapy using passive decontamination (6% sodium hypochlorite, 2% chlorhexidine and sterile saline) and intracanal medication (calcium hydroxide and 2% chlorhexidine gel) for 21 days. In the second session, blood clot was stimulated and Aggregate Trioxide Mineral was used as a cervical barrier of the canal (chapter 3). Results: In chapter 1, clinical evaluation in both groups (TAP and CHP) observed that there was complete reduction concerning clinical symptomatology, however, crown discoloration was observed in 6(85.71%) teeth of group TAP. In radiographic exam, all teeth of group TAP showed repair of periapical lesions, and only one tooth of group CHP did not show apical repair. Apical closure was observed in 5(71.42%) teeth of group TAP and in 4(66.67%) teeth of group CHP. In chapter 2, both groups presented bacteria counts (CFU/mL) decreasing significantly after irrigation with 6% NaOCl (p<0.05). Intracanal dressing did not differ in relation to CFU counts (p=0.95). The most prevalent bacteria identified were Actinomyces naeslundii (66.67%). An average of 2.13 species per canal was found. In chapter 3, it was observed apical closure and calcification in the apical third of root canal space at the 16-month follow-up. The second case presented progressive root resorption, being treated with apexification. Conclusions: Pulp revascularization may be an alternative of treatment for mild luxated traumatized immature teeth. Both triple antibiotic paste and calcium hydroxide associated to 2% chlorhexidine gel paste may be employed in pulp revascularization suggesting clinical, radiographic and microbial reduction after their use / Doutorado / Endodontia / Doutora em Clínica Odontológica

Orientador: Adriana de Jesus Soares / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-21T21:20:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_ThiagoFariasRocha_M.pdf: 1395193 bytes, checksum: 68c9957191a99a53eb7dcfb425e7aee7 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar, por meio de análise clínica e radiográfica, as principais sequelas de dentes luxados e reimplantados, e verificar o reparo periapical e periodontal após o tratamento dos dentes traumatizados. Foram avaliados 83 pacientes, que apresentaram 180 dentes traumatizados, dos quais 67 foram acometidos por luxação extrusiva, 69 por luxação lateral, 10 por intrusão e 34 dentes sofreram avulsão seguida de reimplante. Os pacientes foram avaliados no Serviço de Traumatismos Dentários da FOP-UNICAMP, Área de Endodontia, no período de 2007 a 2011, e preservados por um período mínimo de um ano. As sequelas verificadas foram: calcificação pulpar, necrose e reabsorções radiculares (inflamatórias e por substituição). O tratamento endodôntico foi realizado nos casos onde foi diagnosticada a necrose e a presença de reabsorções radiculares. Após o tratamento, avaliou-se o reparo periapical e periodontal dessas complicações. Os resultados revelaram que a necrose pulpar foi a principal sequela, ocorrendo em 147 dentes (82.7%). Houve diferença estatística quanto à prevalência de necrose entre os 4 tipos de traumatismos (p<0,0001/Teste Exato de Fisher), sendo que nas luxações intrusivas e nos reimplantes dentários todos os dentes apresentaram ausência de vitalidade. A reabsorção inflamatória foi verificada em 20.5% dos casos e a reabsorção por substituição foi mais frequente nos reimplantes dentários (94.1%), apresentando diferença estatística em relação às luxações dentárias (p<0,0001/ Teste Exato de Fisher). Nos casos que foram submetidos ao tratamento, observou-se que houve redução na porcentagem de todos os sinais e sintomas clínicos observados inicialmente e, radiograficamente, verificou-se redução significativa das áreas de radioluscências periapicais e reabsorções inflamatórias. Conclui-se que a necrose pulpar e as reabsorções radiculares foram as principais sequelas encontradas após luxações e reimplantes dentários, entretanto, quando diagnosticadas e tratadas precocemente, a maioria dessas complicações pode ser reparada, favorecendo o prognóstico dos dentes traumatizados / Abstract: The aim of this study was to evaluate, through clinical and radiographic analysis, the sequelae involving luxated and replanted teeth, as well as to assess the periapical and periodontal healing after the endodontic treatment of the traumatized teeth. This study included 83 patients who presented with dental traumas such as extrusive luxation (n=67), lateral luxation (n=69), intrusion (n=10), and avulsion followed by replantation (n=34). Patients were evaluated at the Dental Trauma Center of the Dental School of Piracicaba, Sate University of Campinas, SP, Brazil and followed for minimally 1 year. The sequelae assessed were pulp calcification and necrosis and root resorption. Endodontic treatment was provided for the patients diagnosed with pulp necrosis and root resorption. After the endodontic treatment, the periodontal and periapical healing was assessed. Pulp necrosis was the major sequel, affecting 147 teeth (82.7%). In the cases involving intrusive luxation and tooth replantation, necrosis occurred in all teeth. Statistical difference was observed for necrosis among the four types of trauma assessed (p<0.0001 - Fisher's exact test). Inflammatory resorption was observed in 20.5% of the cases and replacement resorption was more frequent in replanted teeth (94.1%). Clinical analysis revealed a reduction in the signs and symptoms concerning all the dental traumas in the subjects who underwent endodontic treatment. Radiographic images showed a significant decrease in periapical lesions and inflammatory resorption. In conclusion, pulp necrosis and root resorption were the main sequelae detected after dental replantation and luxation; however, when diagnosed and treated early, these complications might be repaired, improving the prognosis of the traumatized teeth / Mestrado / Endodontia / Mestre em Clínica Odontológica

Fatores nutricionais e metabólicos são capazes de comprometer o desenvolvimento pleno dos tecidos dentários, especialmente quando impingidos em períodos críticos. Estudos revelam que condições derivadas da subnutrição precoce e também tardia, interferem na atividade da insulina e do sistema IGF, demonstrando possível envolvimento com algumas patologias e apontando, em sua maioria, caráter permanente em alto grau, se não imediato, prospectivo e comprometedor da performance morfológica e funcional dos tecidos. Desta maneira, o presente estudo teve o propósito de avaliar os efeitos da subnutrição proteica pré e pós-natal e da renutrição pós-natal sobre o desenvolvimento da polpa dentária e do epitélio juncional do periodonto de ratos wistar, visando encontrar possível correspondência entre as alterações metabólicas e morfofuncionais decorrentes da subnutrição proteica, previamente relacionadas em estudos relativos à ação desses hormônios. Para tanto, formou-se grupos de animais heterogênicos (n=3) que, de acordo com a ração oferecida, normoproteica ou hipoproteica, e as respectivas idades, foram divididos nos seguintes grupos experimentais: nutridos (N) e subnutridos (S) com 60 dias de vida (fase na qual o período púbere termina) e renutridos (R), recuperados a partir de 22 até alcançarem 60 dias de vida. Após a eutanásia, os espécimes foram submetidos às técnicas de microscopia de luz (coradas com Azo-Carmim, Hematoxilina-Eosina e Picro-Sirius, esta última para a avaliação do componente colágeno) e imunohistoquímica para a identificação da expressão do IGF-I, insulina e respectivos receptores. A polpa dentária apresentou-se debilitada sob subnutrição o que foi verificado através da desorganização da camada odontoblástica e da estagnação dos componentes colágenos nos animais subnutridos. A renutrição não foi capaz de promover a recuperação de nenhum dos dois parâmetros. O estudo morfométrico permitiu verificar que a porcentagem média do número de expressões ao IGF-I foi maior nos animais do grupo N e que houve diferenças estatísticas significantes entre estes e os animais dos grupos S e R. Da mesma forma, a maior expressão de seus receptores (IGF-IR) foi encontrada nos animais do grupo N com indicação de diferença estatística apenas entre este e o grupo de animais subnutridos. A maior porcentagem média das expressões de insulina ocorreu nos animais nutridos (N), mas estatisticamente não foi detectada diferença significativa entre os grupos. Já em relação ao receptor de insulina (IR), foram constatadas diferenças estatísticas significativas entre o grupo N em relação aos grupos S e R. No epitélio juncional, a subnutrição determinou modificações no padrão das células e camadas epiteliais nos animais subnutridos, além de uma maior quantidade de colágeno do tipo III no tecido conjuntivo que o sustenta, caracterizando um atraso no desenvolvimento desses tecidos. A renutrição não foi capaz de recuperar satisfatoriamente os seus componentes estruturais. Sobre as expressões imunohistoquímicas a todos os anticorpos utilizados (para IGF-I, IGF-IR, I e IR), a análise estatística demonstrou não haver diferenças significativas entre os valores encontrados nos diferentes grupos N, S e R no epitélio juncional. / Nutritional and metabolic factors can cause serious injury of the development of dental tissue, especially when occurred in critical periods. Several studies reveal that conditions derived from early and later under nutrition interfere in insulin and IGF system activities; in these studies has been demonstrated the possible involvement of some pathologies most of them pointing to permanent in high degree (if not immediate) prospective and \"possible dangerous\" morphological and functional performance of tissues. Thus, the present study aimed to evaluate the effects of the pre and post-natal protein under nutrition, and, post-natal refeeding on the development of the dental pulp and periodontal junctional ephitelium of wistar rats, in order to find possible correlation between the metabolic and morph-functional changes arising from protein under nutrition, previously associated with studies related to the effects of these hormones. For this purpose, heterogenic animal groups were formed (n=3) divided in accordance of their diets (protein or hypo protein) and their ages into the following experimental groups: nourished (N) under nourished (S) aged 60 days (final of pubescent l periods) and renourish (R), recovered from the 22nd to 60th day old. After euthanasia, the specimens were analyzed by light microscopy (stained with Azo-carmine, Hematoxylin-Eosin and Picro Sirius, the later for collagen component analysis) and immunohistochemistry examination for identification of IGF-I expression, Insulin and respective receptors. The dental pulp turned out to be impaired in the context of undernutrition. This phenomenom was seen through disorganization of the odontoblastic layer and the stagnation of collagen components in undernourished animals. The refeeding procedure was unable to promote the recovery from any of the two parameters. With the immunohistochemistry on the dental pulp, it was found that the number of IGF-I expression was higher in group N and that there were significant differences involving these animals and those from groups S and R. Similarly, the highest expression of their receptors (IGF-IR) was found in group N, demonstrating statistical difference between this one and the group of undernourished animals. The highest average percentage of the expressions of insulin occurred in nourished animals (N), but no statistically significant difference was detected among the groups. In regard to the insulin receptor (IR), statistically significant differences were found when the group N was compared to groups S and R. In the junctional ephitelium, the undernutrition determined changes in the pattern of epithelial cells in undernourished animals and the prevalence of type III collagen fibers in the connective tissue that supports it, featuring a delay in the development of these tissues. The refeeding was not able to satisfactorily recover their structural components. About immunohistochemical expressions of all antibodies used for IGF-I, IGF-IR, I e IR in the junctional ephitelium, the statistical analysis showed no significant differences among the values found in the groups N, S and R.

Os tecidos dentais apresentam-se como fontes abundantes e de fácil obtenção de células-tronco de diferentes tipos, como é o caso das células-tronco derivadas do epitélio dental, papila dental, ligamento periodontal e folículo dental que possuem origem ectomesenquimal oriundas da crista neural, com a exceção do epitélio dental que é oriundo do ectoderma. As células-tronco de polpa dentária humana (CTPD) expressam estavelmente marcadores de células-tronco adultas (CTA), CD105 e CD73 durante as passagens contínuas, e um grupo de antígenos estágios-específicos de superfície celular, SSEA-3, SSEA-4 e fatores de transcrição de células-tronco embrionárias (CTE) TRA1-60, TRA1-81, Oct-4 e Nanog. Além disso, estas células são capazes de se diferenciar in vitro em vários tipos de células e tecidos: cartilagem, osso, tecido neural, músculo liso e esquelético. Em suínos, modelo animal amplamente utilizado para o estudo de várias doenças encontradas em humanos, os dentes caninos possuem crescimento contínuo que pode ser uma característica bastante interessante quando pensamos em células-tronco. Dessa forma, o estudo das células de polpa dentária desse animal merece destaque. Neste trabalho visamos estabelecer o cultivo e a caracterização de células-tronco derivadas da polpa dentária dos dentes caninos dos suínos com crescimento contínuo (PDS) e dos dentes molares visando um estudo comparativo. O cultivo das células-tronco de polpa dentária de canino e molar foi estabelecido e de acordo com os nossos resultados podemos dizer que as células-tronco de polpa dentária de suíno são de fácil obtenção, já que o dente é descartado após o abate do animal e não tem nenhum valor comercial. Até o momento não observamos diferenças relacionados ao crescimento contínuo dos dentes caninos e as células-troncos isoladas possuem características mesenquimais como era esperado. E ainda, os resultados obtidos neste trabalho poderão contribuir para aquisição de uma nova fonte de células-tronco, cuja obtenção em abatedouros poderá ser contínua, aumento assim a quantidade podendo ser utilizada na Terapia Celular. / The dental tissue presents itself as an easy and abundant source to obtain stem cells of different types, such as stem cells derived from dental epithelium, dental papilla, periodontal ligament and dental follicle origin that have originated from ectomesenquimal neural crest, with the exception of dental epithelium that arises from the ectoderm. Stem cells from human dental pulp (TCDC) stably express markers of adult stem cells (CTA), CD105 and CD73 during continuous passages, and a group of stage-specific antigens of cell surface SSEA-3, SSEA-4 and transcription factors of embryonic stem cells (ESC) TRA1-60, TRA1-81, Oct-4 and Nanog. Furthermore, these cells are able to differentiate in vitro into cartilage, bone, neural tissue, skeletal and smooth muscle. In pigs, an animal model widely used for the study of several human diseases, the canine teeth continues to grow and can be a very interesting feature regarding stem cells. Thus, the study of dental pulp cells in this species is worthy consideration. The aim of this work was to establish the cultivation and characterization of stem cells derived from dental pulp from pigs canine teeth with continuous growth (PDS) and the molar teeth, seeking a comparative study. The cultivation of stem cells from canine dental pulp and molar teeth have been established and, according to our results, we can say that stem cells from porcine dental pulp are easy to obtain, since the tooth is discarded when the animal is slaughtered and has no commercial value. So far no differences related to the continued growth of the canine teeth were observed and the isolated stem cells presented mesenchymal characteristics as expected. The results obtained in this study may contribute to the acquisition of a new source of stem cells, which can be obtained continuously in slaughterhouses, thus increasing the amount of samples to be used in cell therapy.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Bianca_Palma_Santana.pdf: 5946140 bytes, checksum: fbcbf4959ad9ccac3ca669ef232ffb3b (MD5) Previous issue date: 2011-12-06 / The development of scaffolds for tissue engineering should be biocompatible, where the degradation products should not be cytotoxic, tumorigenic, nephrotoxic or cause any toxic effects to the body. Despite the widespread use in tissue engineering, there is an effort to improve the functionality of this material for future applications. Important parameters should be observed in connection with properties that could influence the behavior of cells: pore size, pore shape, and surface treatment, for example. Among the materials used for the production of scaffolds, natural polymers have been the most widely used, given its high design flexibility and degradability. Scaffolds using nano-materials allow a greater similarity to natural extracellular matrix and these systems could be combined with biological inducers (eglectins) to address specific biological responses. The aim of our research is to obtain an alginate hydrogel functionalized nano/micro fiber based hydroxyapatite and titanium dioxide as well as bioactive substances (lectins), to the application in vitro for later use in the pulp tissue regeneration / O desenvolvimento de scaffolds para aplicação na engenharia tecidual deve ser biocompatível, onde os produtos de degradação não devam ser citotóxicos, tumorigênicos, nefrotóxicos ou causar qualquer outro efeito tóxico ao organismo. Apesar do largo uso em engenharia tecidual, existe um esforço para melhorar a funcionalidade deste material para futuras aplicações. Parâmetros importantes deveriam ser observados em relação às propriedades que poderiam influenciar o comportamento celular: tamanho dos poros, formato dos poros, e tratamento da superfície, por exemplo. Dentre os materiais utilizados pela produção de scaffolds, os polímeros naturais têm sido os mais empregados, dada a sua grande flexibilidade de desenho e degradabilidade. Scaffolds utilizando nano-materiais permitem uma similaridade maior com a matriz extracelular natural e estes sistemas poderiam ser combinados com indutores biológicos (por exemplolectinas) para direcionar respostas biológicas específicas. O objetivo geral de nossa pesquisa é obter um hidrogel de alginato funcionalizado com nano/micro fibras a base de hidroxiapatita e dióxido de titânio, bem como substâncias bioativas (lectinas), visando à aplicação in vitro para futura utilização em regeneração do tecido pulpar

Abstract The dentin-pulp complex comprises mineralized dentin and the vital soft tissues encased inside dentin, i.e. odontoblasts and pulp tissue. During caries progression, the dentinal minerals are dissolved and eventually the collagenous organic matrix is degraded. However, the exact mechanisms and enzymes responsible for the organic matrix breakdown remain unknown. Matrix metalloproteinases (MMPs), a family of endopeptidases capable of degrading in concert virtually all extracellular matrix components, are expressed during normal dentin-pulp complex formation and maintenance. MMP activity has also been suggested to contribute to the organic matrix degradation during dentin caries progression and to the repair and defense reactions elicited by caries in the dentin-pulp complex cells. The aim of the study was to further elucidate the role of host MMPs in dentin caries progression and the origin of MMPs in carious dentin as well as the possible changes in MMP expression in the cells of the dentin-pulp complex in response to caries. MMP inhibitors decreased the area of dentin caries lesions in vivo, suggesting the involvement of host MMPs in dentin caries pathogenesis. When the overall MMP gene expression was examined by cDNA microarray, pooled pulp samples demonstrated a high level of MMP-13 expression, but failed to show any unequivocal changes in MMP expression due to caries. MMP-13 expression is rare among normal human adult tissues. Real-time quantitative PCR of individual pulp and odontoblast samples demonstrated a rather large variation in relative MMP-13 mRNA expression between samples, especially pulp samples. Protein expression of MMP-13 was detected in pulp and odontoblasts without any major differences between the tissues of sound and carious teeth. This was also the case with the MMP-20 (enamelysin) protein, which was demonstrated in odontoblasts and the pulp tissue of fully developed human teeth. MMP-20, MMP-8, and gelatinases (especially MMP-2) were demonstrated in human dentin, and dentinal MMPs exhibited activity against native and denatured type I collagen when released. The study demonstrates the presence of MMPs in the soft and hard tissue compartments of the dentin-pulp complex. These enzymes may also contribute to dentin caries progression and response reactions to caries.

Ces dernières années, des thérapies à base de cellules mésenchymateuses ont été développées pour améliorer les thérapies qui visent à réparer l'homme et notamment la pulpe dentaire. Dans ce contexte, la dent apparait comme la source de cellules mésenchymateuses, souches ou progénitrices, permettant de réparer la pulpe dentaire. En effet, la pulpe dentaire est facile d'accès et les cellules pulpaires présentent un fort potentiel de différenciation. Actuellement, les différents organismes de contrôle recommandent d'utiliser des procédures standardisées pour l'isolement, le stockage et l'expansion des cellules en culture pour garantir une sécurité et une reproductibilité optimale lorsque les cellules sont utilisées en culture cellulaire. Cependant, la plupart des procédures utilisées pour la production de cellules à partir de la pulpe dentaire ne sont pas entièrement satisfaisante, car elles peuvent altérer les propriétés biologiques et la qualité des cellules. En effet, les procédures d'isolement cellulaire, d'enrichissement, de cryopréservation et d'amplification pendant de nombreux passages dans des milieux contenant des produits d'origine animale ou humaine sont connues pour affecter le phénotype des cellules, la viabilité, la prolifération et les capacités de différenciation. Ce travail de thèse s'intéresse à compiler les stratégies actuelles de fabrication de produits cellulaires à partir de la pulpe dentaire, puis il propose de nouveaux protocoles pour améliorer l'efficacité, la reproductibilité et la sécurité de ces nouvelles stratégies thérapeutiques. Ainsi nous avons isolé, amplifié et cryopréservé des cellules de la pulpe dentaire. Grace à un travail d'immunophénotypage, nous avons pu étudier différentes souspopulations à l'intérieur de la population totale. Enfin nous avons montré que ces cellules sont capables de rester congelées pendant plus de 500 jours sans présenter d'anomalies du caryotype et de conserver un potentiel de différenciation ostéo/odontogénique / Dental research currently explores the potential of cell-based products and tissue engineering protocols to be used as alternatives to usual pulp/dentin and bone therapies. In this context, stem/progenitor cells appear to be particularly appropriate because of their high expansion ability and differentiation potential both in vitro and in vivo. If bone marrow and adipose tissue are considered potential sources of stem/progenitor cells, painful collection protocols, the decline of the amount of stem/ progenitor cells with age, the necessity of general anesthesia, reduced proliferation capacity, and risk of morbidity at the collection site encourage the search for alternative candidates. Human impacted third molars are frequently removed for therapeutic reasons and the loose connective tissue they contain, the dental pulp, appears to be a valuable source of stem/progenitor cells for pulp/dentin and bone engineering. Indeed, it contains various cell populations that exhibit osteo/odontoblastic differentiation capabilities and that can be cryopreserved for periods of time greater than 6 months. Interestingly, human dental pulp cell (HDPC) populations were recently successfully used for regenerating human pulp/dentin and bone. Cell-based products for tissue engineering are now referred to as human cellular tissue-based products or advanced therapy medicinal products, and guidelines from the American Code of Federal Regulation of the Food and Drug Administration (21 CFR Part 1271) and the European Medicines Agency (European Directive 1394/2007) define requirements for appropriate cell production. These ‘‘good manufacturing practices’’ include recommendations regarding laboratory cell culture procedures to ensure optimal reproducibility, efficacy, and safety of the final medicinal product