Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Biologia Animal, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-13T17:54:43Z No. of bitstreams: 1 2014_FernandaPaulini.pdf: 3724578 bytes, checksum: ee26cd70cb930d0040e2ed6366a6a918 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-10-14T13:34:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_FernandaPaulini.pdf: 3724578 bytes, checksum: ee26cd70cb930d0040e2ed6366a6a918 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-14T13:34:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_FernandaPaulini.pdf: 3724578 bytes, checksum: ee26cd70cb930d0040e2ed6366a6a918 (MD5) / Avanços na pesquisa básica em reprodução animal e nas biotécnicas reprodutivas dependem da perfeita visualização e monitoramento das estruturas ovarianas no desenvolvimento folicular. Assim, o primeiro capítulo desta tese traz uma revisão bibliográfica sobre as principais técnicas utilizadas no estudo e na visualização de estruturas ovarianas, com foco no potencial, na aplicabilidade e nas limitações de cada técnica. O segundo capítulo foi conduzido com um experimento que teve como objetivo comparar as estruturas internas visualizadas no ovário em diferentes espécies por tomografia computadorizada (TC). Foram utilizados ovários de rata, cadela, gata, vaca, porca, égua e jumenta. Os ovários foram escaneados com uso de microtomógrafo computadorizado, e a reconstrução das imagens deu origem a representações bi e tridimensionais dos ovários. As mesmas amostras foram posteriormente processadas para avaliação histológica e validação dos resultados obtidos pelo microTC. A TC possibilitou distinguir as regiões de córtex e medula, observar folículos antrais, identificar os ovócitos dentro deles, visualizar corpos lúteos, bem como a distribuição e morfologia dos vasos sanguíneos de médio e grande calibre, embora não tenha possibilitado a visualização de folículos pré-antrais. Esta técnica apresenta possibilidades para o estudo das estruturas internas do ovário. O terceiro capítulo consiste em uma revisão de literatura que foi motivada pela percepção de que informações sobre a estrutura e ultraestrutura ovariana de diferentes espécies encontram-se dispersas e desassociadas na literatura. Abordando sete espécies domésticas, foram consideradas as principais diferenças na presença e distribuição das organelas citoplasmáticas em ovócitos e células da granulosa de folículos pré-antrais e antrais. Verificou-se que o padrão ultraestrutural de folículos e ovócitos varia entre espécies domésticas bem como entre as fases do desenvolvimento folicular. Este tipo de conhecimento permite melhorias na compreensão anatômica e fisiológica do ovário, e pode subsidiar avanços em diversas linhas de pesquisa, como na melhoria das biotecnologias reprodutivas e no auxílio da compreensão de danos e pontos limitantes da manipulação in vitro de ovócitos em diferentes espécies. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Monitoring ovarian structures during follicular development may enable great advances in reproductive biotechnologies and animal reproduction. In this sense, this thesis was divided in three chapters, aiming to empower the understanding of diagnostic imaging, the characterization of ovarian structures and the comparison between domestic species. The first chapter of the thesis is a bibliographic revision considering the main techniques that are useful to visualize the ovarian structures. We focused on the potential, applicability and general limitations of each technique. The second chapter consists of an experiment, undertaken to compare the internal structures of the ovary using computerized microtomography. We compared the ovaries of rats, bitches, quees, cows, mares, sows and female donkey and carried out the reconstruction of the tomographic images to originate two and three dimensional representations. After scanning, the same samples were prepared for histologic evaluation, used in this research as validation criteria for ovary research based on computerized microtomography. Microtomography enabled to distinguish the regions of the cortex and medulla, to identify oocytes, corpus luteum and to visualize the morphology and distribution of medium caliber blood vessels. However, it didn’t enable the visualization of pre antral follicles. The third chapter of the thesis is a bibliographic revision motivated by the fact that information comparing the ovarian ultrastructure between species is scarce. We emphasized major differences in seven domestic species, considering the presence and distribution of cytoplasmic organelles in oocytes, granulosa cells, pre antral and antral follicles. It was observed that the ultrastructure of follicles and oocytes vary between species and between the stages of follicular development. This research subsidizes advanced comprehension of the anatomy and physiology of the ovary in different species. It may enable the understanding of several limitations points related to in vitro manipulation of oocytes and, therefore, generate future adjustments in reproductive technologies.

Orientador: Eunice Oba / Resumo: As substâncias desreguladores endócrinas de diversas origens e propriedades químicas acomentem uma diversidade de mamíferos, animais silvestres e seres humanos, que podem interagir com o sistema reprodutivo feminino e prejudicar a homeostase hormonal. Dentro dessa classificação, os parabenos podem ser utilizados como conservantes em diversos produtos comerciais. Seus efeitos se tornam cada vez mais complexos em relação à idade, história reprodutiva, ambiente endócrino da espécime no momento da exposição, como também não é sabido todos os reais mecanismos desses compostos quando associados. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos dos parabenos em ratas Wistar durante um período de 90 dias consecutivos de exposição. Assim, as ratas foram distribuídas em quatro grupos experimentais: controle, que recebeu somente óleo de milho como veículo, e tratados com propil e buti-parabeno nas doses de 10 mg/kg, 100 mg/kg, ou 200 mg/kg e expostas via subcutânea. Foi utilizada a técnica de citologia vaginal para investigar a ciclicidade das fêmeas, bem como a caracterização das fases do ciclo estral pelo método Shorr. Além desses parâmetros, foram analisados aspectos morfológicos de ovários e útero, quantificação das estruturas ovarianas e avaliação ultraestutural de folículos pré-ovulatórios. Foram avaliados a concentração plasmática de estrógeno, peso corporal bem como o peso dos órgãos reprodutivos. Os resultados revelaram que o método Shorr, foi eficaz para identificar... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The endocrine disruption substances of many origins and chemistry properties affect a diversity of mammals, wild animals and human beings. These substances can interact with the female reproductive system and damage the hormonal homeostasis. In this classification, the paraben could be used as preservatives in different commercial products. Its effects get even worst and complex with the age, reproductive history, and endocrine environment of the specie in the moment of exposure of the drug. In complement, it is not known the actual mechanisms of those compounds when they are associated. Thus, the goal of this experiment was evaluate the effects of parabens in females Wistar during 90 consecutive days of exposure. Therefore, the females were divided in four experimental groups: Control group – Corn oil; and a mixture of propil and butyl paraben with 10 mg/kg, 100 mg/kg and 200 mg/kg and exposed through the subcutaneous pathway. The vaginal cytology was performed to investigate the cyclicality as well as the characterization of the estrous phases by the Shor method. Besides that, morphological aspects of the ovary and uterus, counting of ovaries structure and ultrastructural of pre-ovulatory follicle. To complete the evaluation, the plasmatic estrogen, body weight and reproductive organ weight were assessed. The Shor method was effective to characterize and identify the cells types of the vaginal epithelium and identify the estrous cycle phase. Moreover, the relative and absol... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:17:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FINALIZADA _ABRIL2015.pdf: 3170133 bytes, checksum: 1d4668fdaca4f714ff23eb80e3ac0b68 (MD5) Previous issue date: 2015-06-30 / The prevalence of obesity has increased in recent decades in many countries, and harmful effects to the body can begin in childhood and persist into adulthood. Obesity is associated with disturbances of reproductive function in women and in female rodents, such as early onset of puberty, change in menstrual / estrous cycle and infertility, with impaired ovulation or anovulation (lack of ovulation). Angiotensin II (Ang II) appears to exert effects on reproduction and obesity, contributing to the development of the deleterious effects of obesity and affecting pre-ovulatory surge of luteinizing hormone (LH), estradiol and progesterone, thus reducing ovulation in adult rats. The objective of this study was to evaluate losartan effect, an antagonist of Ang II AT1 receptor, administrated in adulthood, in follicular development of adult Wistar rats with obesity induced by cafeteria diet. After weaning at 21 days of life, female Wistar rats were divided into 02 groups: control (CTL) that received standard chow diet; Cafeteria (CAF) received the cafeteria diet. From 70 days of life began losartan administration by gavage. The CTL group received water in gavage (CTL) and CAF group was separated into 02 groups, CAF (which received water in gavage) and CAF + LOS (who received losartan in gavage), in total 03 groups were performed. 05 animals were used per group. Euthanasia was performed on the first proestrous after 30 days of administration of losartan or water. The retroperitoneal, perigonadal and subcutaneous fat were removed and weighed. Morphological analysis of ovaries was performed, proceeding to count the number of primary follicles, secondary, antral and mature follicles per ovary. Was also collected blood sample for determination of FSH, LH, prolactin and progesterone. Body weight and the weight of the 03 fats were measured, and the number of antral follicles were higher in group CAF in relation to the group CTL (p <0.001). However, FSH and LH levels were lower in the CAF animals compared to the animals of the group CTL (p <0.001). The administration of losartan normalized the body weight and accumulation of retroperitoneal and subcutaneous fat as well as the number of antral follicles. Thus, we suggest that the use of the antagonist of Ang II AT1 receptor, losartan, in adulthood, can improve follicular development in females with cafeteria diet-induced obesity and, can be, in the future, an coadjuvant drug in the treatment of infertility associated to obesity. / A prevalência da obesidade aumentou nas últimas décadas em vários países, tendo efeitos prejudiciais ao organismo que podem iniciar na infância e persistir até a vida adulta. A obesidade está associada a distúrbios da função reprodutiva, em mulheres e em fêmeas de roedores, como início precoce da puberdade, alteração do ciclo menstrual/estral e infertilidade, com alterações da ovulação (disovulias) ou anovulação (ausência da ovulação). A Angiotensina II (Ang II) parece exercer efeitos sobre a reprodução e a obesidade, contribuindo para o desenvolvimento dos efeitos deletérios da obesidade e afetando o pico pré-ovulatório do hormônio luteinizante (LH), progesterona e estradiol, reduzindo, consequentemente, a ovulação em ratas adultas. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do losartan, um antagonista do receptor AT1 da Ang II, sobre o desenvolvimento folicular de ratas Wistar adultas, com obesidade induzida pela dieta de cafeteria. Após o desmame, aos 21 dias de vida, ratas Wistar foram separadas em 02 grupos: controle (CTL) que recebeu ração padrão e Cafeteria (CAF) que recebeu a dieta de cafeteria. A partir dos 70 dias de vida iniciou-se a administração de losartan por gavagem. O grupo CTL recebeu água na gavagem (CTL) e o grupo CAF foi separado em 02 grupos, CAF (que recebeu água na gavagem) e CAF+LOS (que recebeu losartan na gavagem), totalizando 03 grupos. Foram utilizados 05 animais por grupo. A eutanásia foi realizada no primeiro proestro após 30 dias da administração de losartan ou de água. As gorduras retroperitoneal, perigonadal e subcutânea foram retiradas e pesadas. Foi realizada a análise morfológica dos ovários, procedendo-se a contagem do número dos folículos primários, secundários, antrais e maduros por ovário. Também foi coletado o sangue total para dosagens de FSH, LH, Prolactina e Progesterona. O peso corporal, bem como, o peso das 03 gorduras foram avaliados, e, o número de folículos antrais foi estatisticamente maior no grupo CAF em relação ao CTL (p<0,001). Todavia, as concentrações de FSH e LH foram menores nos animais CAF em relação ao CTL (p<0,001). A administração do losartan normalizou o peso corporal e o acúmulo das gorduras retroperitoneal e subcutânea, bem como, o número de folículos antrais. Dessa forma, sugerimos que o uso do antagonista do receptor AT1 da Ang II, o losartan, na vida adulta, possa contribuir para melhorar o desenvolvimento folicular em fêmeas com obesidade induzida pela dieta de cafeteria e, futuramente, ser uma droga coadjuvante no tratamento da infertilidade associada à obesidade.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Nitric oxide (NO) is an important regulator of ovarian activity, and is produced by a family of nitric oxide synthases (NOS), being inducible (iNOS) and endothelial (eNOS) isoforms present in the ovaries of several species. In cows, even though NO production had been demonstrated in follicular fluid and by granulosa cells (GC) cultured in vitro, it is not known which enzyme is responsible for NO synthesis or how expression is regulated during follicular development. The objectives of the present study were to determine the abundance of iNOS and eNOS mRNAs in dominant and subordinate follicles in vivo, to determine the regulation of iNOS expression by FSH, growth factors and estradiol (E2) in vitro, to stimulate NO production in bovine CG and to determine the action of iNOS on bovine granulosa cell health/apoptosis. The two largest follicles on days 1 to 5 of the first follicular wave of the cycle were collected from each pair of ovaries from six cows. Dominant follicles presented higher levels of mRNA for iNOS compared to subordinate follicles (P<0.01). GC cultures were performed with ovaries collected at abattoir. FSH (P<0.05) and IGF1 (P<0.01) stimulated E2 secretion and upregulated iNOS mRNA abundance in a dose-dependent manner. Moreover, both FGF2 (P<0.05) and EGF (P<0.01) decreased iNOS expression and E2 secretion in FSH and IGF-treated cells, respectively. Graded doses of FSH in the presence of a non-aromatizable androgen (DHT) did not stimulate iNOS mRNA level. In addition, both FSH and IGF1 in the presence of an estrogen receptor antagonist were not able to upregulate iNOS mRNA abundance, whereas E2 alone stimulated NO production in vitro. In terms of cell health/apoptosis, the treatment with an iNOS-selective inhibitor increased the pro-apoptotic factor FasL mRNA levels and the percentage of dead cells (P<0.05). In conclusion, bovine granulosa cells express predominantly iNOS, and increased iNOS mRNA levels are associated with emergence of the dominant follicle. FSH and IGF1 stimulate iNOS mRNA levels through increased E2 secretion, and physiological levels of NOS activity may contribute to growth and survival of bovine granulosa cells. / O óxido nítrico (NO) é um importante regulador da atividade ovariana que é produzido a partir da ação de uma família de enzimas denominadas sintases do óxido nítrico (NOS). As isoformas induzível (iNOS) e endotelial (eNOS) estão presentes nos ovários de diversas espécies. Em vacas, embora a produção de NO já tenha sido detectada no fluído folicular e também no meio de cultivo de células da granulosa (CG), não se sabe qual enzima é responsável pela síntese de NO nem como ocorre a regulação de sua expressão ao longo do desenvolvimento folicular. Os objetivos do presente estudo foram determinar a abundância de RNAm para iNOS e eNOS em CG provenientes de folículos dominantes e subordinados in vivo; determinar a regulação da expressão da iNOS por FSH, fatores de crescimento e estradiol (E2) in vitro; estimular a produção de NO e determinar a ação da iNOS na relação entre saúde e apoptose das CG bovina. Foram coletados os dois maiores folículos presentes em cada par de ovários de seis vacas entre os dias 1 e 5 da primeira onda folicular do ciclo estral. Folículos dominantes apresentaram níveis mais elevados de RNAm para iNOS comparados aos folículos subordinados (P<0.01). Cultivos de CG foram realizados com ovários coletados em abatedouro. Ambos FSH (P<0.05) e IGF1 (P<0.01) estimularam a secreção de E2 e a expressão de iNOS de maneira dose-dependente. Além disso, tanto FGF2 (P<0.05) como EGF (P<0.01) diminuiram a expressão de iNOS e a secreção de E2 em células tratadas com FSH e IGF1, respectivamente. Utilizando diferentes doses de FSH na presença de um andrógeno não-aromatizável (DHT), não foi possível estimular a expressão de iNOS. Ainda, tanto o FSH como o IGF1 não foram capazes de elevar a abundância de RNAm para iNOS na presença de um antagonista não seletivo dos receptores de E2, enquanto que, E2 sozinho estimulou a produção de NO em CG in vitro. No que diz respeito à relação saúde/apoptose das CG, o tratamento com um inibidor seletivo da iNOS aumentou os níveis de RNAm para o fator pró-apoptótico FasL e o percentual de células mortas (P<0.05). Concluindo, células da granulosa bovina expressam predominantemente iNOS, sendo que o aumento da expressão dessa isoforma está associado com a emergência do folículo dominante. FSH e IGF1 promovem o aumento dos níveis de RNAm para a iNOS através do estímulo da secreção de E2 e, níveis fisiológicos da atividade das NOS podem contribuir para o crescimento e sobrevivência das células da granulosa bovina.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-08Bitstream added on 2014-06-13T19:45:13Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_e_dr_jabo.pdf: 663672 bytes, checksum: f044bd71ec8b6a869bb1626ab1b3b25b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da suplementação energética e com diferentes fontes de gordura na produção de embriões FIV e no perfil metabólico em novilhas nelore. Foram realizados dois experimentos, no primeiro, vinte novilhas Nelore (Bos taurus indicus) com idade média de 30 meses, com peso médio de 417,0 ± 42,4 kg foram distribuidas aleatoriamente em 3 tratamentos: T1 (n= 7), animais receberam 100% das exigências de manutença de energia, calculados conforme NRC (1997), T2 onde os animais receberam 170% das exigências de manutenção de energia (1,7 X M), e T3, onde os animais receberam 170 % das exigências de manutenção de energia com adição de 200 g de gordura protegida-AGCL (Megalac®). No segundo experimento 12 novilhas Nelore (Bos taurus indicus) com idade variando de 14 a 18 meses, com peso médio inicial de 309,6 kg, foram distribuidas em 4 tratamentos, de acordo com peso e população folicular avaliada por ultrasonografia: T1, animais receberam 100% dos requerimentos de mantença de energia, calculados conforme NRC (1997), T2- animais receberam 170% das exigências de mantença de energia, T3- idem ao T2, com adição de 4% de óleo de soja na MS, e T4- idem ao T2, com adição de 200 g de AGCL (Megalac ®). O período de adaptação foi quinze dias, onde os animais receberam feno de capim Brachiaria e ração concentrada... / Two experiments were carried to evaluate the effect of the energy and fat in the metabolic profile, follicular dynamic, oocyte and in vitro embryo production in Nelore heifers (Bos taurus indicus). In the first, twenty Nelore heifers with 30 months old, and average weight 417,0 ± 42,4 were allocated in 3 treatments, in accordance with weight and follicular population evaluated by ultrasound: T1, animals received 100% of energy maintenance, calculated as NRC (1997), T2- animals received 170% of energy maintenance; T3: animals received 170% of energy maintenance with addition of 200 g Megalac ®. In the second experiment, 12 Nelore heifers with 14-18 months and 309,6 kg average weight, were allocated in 3 treatments, in tree periods: T1, animals received 100% of energy maintenance, calculated as NRC (1997), T2- animals received 170% of energy maintenance; T3: animals received 170% of energy maintenance with addition of 4% soybean oil in Dry Matter and T4: animals received 170% of energy maintenance with addition of 200 g Megalac ®. After adaptation period, the treatment initiated, animals had synchronized ovulation, blood samples were collected, and follicular aspiration was carried to evaluate the oocytes and in vitro embryo production. Follicular development was monitored daily by ultrasonography until day post heat. The consumption of MS and the weight gain were lower in group T1 (P< 0.05), in relation to the others treatments. The FSH, LH, and albumin concentrations were not different (P > 0.05) among treatments. The cholesterol concentrations were higher in the T3 and T4 groups (P< 0.05) only in the second experiment... (Complete abstract, click electronic access below)

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objective of this study was to investigate the factors controling the expression of angiotensin II (AngII) receptors and to determine the physiological role of AngII in granulosa cells. The AGTR2 receptor was localized in granulosa (and theca) cells from follicles of different sizes. Bovine ovaries were collected at a local abattoir and small follicles (2-5mm) were isolated for harvesting granulosa cells. The cells were cultured in free medium serum in non-luteinizing conditions without FSH (control group) or with graded doses of FSH or IGF1. In other cultures, cells were cultured with or without IGF1 and bone morphogenetic protein-7 (BMP-7), and fibroblast growth factor-2 (FGF-2). Treatment with FSH, IGF1 and BMP-7 increased (P<0.05) estradiol secretion and AGTR2 mRNA expression relative to control cultures. In contrast, none of these treatments affected AGTR1 receptor expression. Addition of FGF-2 significantly decreased estradiol secretion but did not affect AGTR1 or AGTR2 expression. Cells were cultured with FSH plus graded doses of FGF-7 or FGF-10, and the effects of these factors on AGTR2 protein levels were measured by Western blot. AGTR2 protein levels decreased in the groups treated with FGF-7 (10 and 100ng/ml) and FGF-10 (all concentrations; P<0.05), and estradiol secretion was significantly inhibited by the highest dose of each FGF (P<0.05). Bovine follicles greater than 5 mm diameter were dissected and granulosa and theca cells were separated for RNA extraction, and follicle fluid assayed for estradiol (E2) and progesterone (P) content. Non-atretic follicles (P less than 100ng/ml) were classed as estrogenic (E2 greater than 100ng/ml) or non-estrogenic (E2 less than 40ng/ml). There were no differences in AGTR1 receptor expression in theca and granulosa cells between estrogenic and nonestrogenic follicles. Likewise, there were no changes in AGTR2 receptor expression in theca cells with follicle state. However, AGTR2 receptor mRNA levels were significantly higher in granulosa cells of estrogenic compared to non-estrogenic follicles (P<0.01), and AGTR2 receptor mRNA was correlated with E2 concentrations in follicular fluid. To determine the physiological consequences of AT activation in granulosa cells, cells from small (2-5mm) bovine follicles were cultured in serum-free medium with FSH ± AngII. The addition of AngII had no effect on estradiol or progesterone secretion, but significantly inhibited protease nexin-1 (PN-1) mRNA levels and protein secretion (P<0.05). PN-1 is an inhibitor of proteases involved in extracellular matrix remodeling and follicle rupture. Bovine granulosa cells from large (>10 mm) follicles were cultured for 6h, 12h and 24h with LH (100ng/ml) or AngII, with or without angiotensin receptor blocker (losartan for AGTR1 and PD123,319 for AGTR2). These cells expressed Ptgs2 under basal culture conditions, which was not upregulated by either LH or AngII alone. However, LH and AngII in combination significantly enhanced Ptgs2 (P<0.05) mRNA and protein accumulation. Similarly, expression of the proteolytic enzymes uPA and tPA, and their inhibitor, PN-1, were upregulated by the combination of LH and AngII but not by either factor alone. The addition of AGTR blockers inhibited the effect of AngII. In conclusion, AGTR2 receptor is present in granulosa bovine cells, and mRNA and protein are regulated by FSH, IGF-1, BMP-7, FGF-7 and FGF-10 in bovine granulosa cells in vitro, AGTR2 but not AGTR1 receptor mRNA levels are regulated during follicular growth in cattle, and that AngII regulates granulosa PN-1 secretion. These data suggest that AngII is a physiological co-factor necessary for the expression of genes in granulosa cells that are critical for ovulation. / O objetivo deste trabalho foi estabelecer o controle de expressão dos receptores de angiotencina II (AngII) e determinar a ação fisiológica da AngII em células da granulosa (CG) cultivadas in vitro. Os receptores de AngII tipo 1 (AGTR1) e tipo 2 (AGTR2) foram localizados em folículos de bovinos de diferentes tamanhos. Verificouse que as CG de bovinos provenientes de folículos entre 2- 5 mm e cultivadas com FSH, IGF-1, BMP-7 apresentaram aumento na expressão do receptor AGTR2 (P<0,05) em relação ao grupo controle (GC), bem como aumento da secreção de estradiol (E2; P<0,05). Em contraste, as CG tratadas com 10 ng/ml de FGF-2 ou 10 e 100 ng/ml de FGF-7 e FGF-10 apresentaram uma redução na secreção de E2 (P<0,05), porém somente os grupos FGF-7 e 10 nas doses 10 e 100 ng/ml reduziram (P<0,05) a expressão do receptor AGTR2. Para os dois experimentos, não houve diferença na expressão do receptor AGTR1 entre o GC e os grupos tratados. As CG e células da teca (CT) foram coletadas de ovários provenientes de abatedouro para extração de RNA e o fluido folicular para dosagem de E2 e progesterona P4. Esses folículos foram classificados como dominantes (FD; P4<100ng/ml e E2>100ng/ml) e atrésicos (FA; P4>40ng/ml). A expressão dos receptores AGTR1 e AGTR2 foi mensurada por RTPCR. Não houve diferença na expressão do receptor AGTR1 entre FD e FA. No entanto, o receptor AGTR2 apresentou um aumento (P<0,05) na expressão em CG de FD em relação a FA. A expressão do receptor AGTR1 se manteve constante em CG e CT de FD e FA. Para determinar os afeitos da AngII através da ativação de seus receptores CG foram cultivadas em meio livre de soro com FSH e/ou AngII. A AngII não apresentou efeito na secreção de E2 ou P4, mas inibiu (P<0.05) mRNA e proteína para a protease nexin-1 (PN-1). Considerando a redução de expressão da PN-1 envolvida no controle do remodelamento da matriz extracelular (RME), é possível especular um efeito de AngII sobre RME durante o desenvolvimento folicular. Em um terceiro experimento, as CG de folículos grandes (>10mm) foram cultivadas durante 6h, 12h e 24h na presença de Ang (10-5) com ou sem LH (100ng/ml). A combinação de AngII e LH aumentou significativamente (P<0,05) a expressão de mRNA e proteína para COX-2, ativador do plasminogênio tipo U e T, bem como para PN-1. Entretanto, AngII ou LH não aumentaram a expressão de COX-2. O aumento da expressão destes gene indica uma função de AngII no processo de ovulação através das CG. Em um segundo momento, verificou-se através de qual receptor a AngII atua para controlar a expressão desses genes. As CG foram cultivadas por 6h com LH e/ou AngII com ou sem inibidores específicos para o receptor AGTR1 (losartan) e AGTR2 (PD123,319). Os resultados demonstraram que a presença do inibidor de AGTR2 bloqueou o efeito da associação de LH e AngII em relação ao grupo controle (P<0.05), demonstrado que a ação da AngII é mediada pelo receptor AGTR2 em CG. Em conclusão, o receptor AGTR2 está presente nas células da granulosa de bovinos e o mRNA para o receptor AGTR2 é regulado durante o crescimento folicular. Além disso, a expressão do mRNA e a tradução da proteína para o AGTR2 são reguladas por FSH, IGF-1, BMP-7, FGF-7 e FGF-10 em CG de bovinos cultivadas in vitro. Os dados também sugerem que AngII regula a proteína PN-1 em CG e age como um co-fator fisiológico necessário para a ovulação.