Nenhuma / O controle epidemiológico da leishmaniose visceral (LV) no Brasil envolve a eliminação de cães infectados, portanto, métodos diagnósticos confiáveis são essenciais para evitar a transmissão da doença ou o sacrifício desnecessário de animais. O programa de controle da LV no Brasil é baseado em inquéritos sorológicos. Os métodos sorológicos, no entanto, apresentam problemas de sensibilidade e especificidade. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) demonstrou ser uma técnica rápida e sensível para a detecção de Leishmania, no entanto amostras não invasivas representam um instrumento essencial, neste contexto, uma vez que elas são mais simples, indolores e mais facilmente aceitas pelos proprietários de cães. Um método útil é o swab conjuntival (SC) que utiliza um swab estéril para a realização de um esfregaço das conjuntivas do cão. O SC mostrou-se altamente sensível para o diagnostico da LV por PCR. O objetivo deste estudo foi avaliar através do SC a prevalência de animais infectados em dois grupos de cães: assintomáticos e vacinados contra a LV. O primeiro grupo foi composto por 30 animais assintomáticos, positivos nos diagnósticos sorológico e parasitológico. Os resultados do SC foram comparados com os obtidos através de duas amostras pouco invasivas, sangue (S) e biopsia de pele (BP). As amostras foram analisadas por dois métodos diferentes de PCR: kDNA PCR-hibridização e ITS-1 nPCR. O volume de amostra de DNA utilizada para o kDNA PCR-hibridização foi de 1,0 &#61549;L e para o ITS-1 nPCR o volume foi de 10,0 L. Utilizando-se o SC o método kDNA PCR- hybridização detectou DNA de Leishmania em 24/30 cães (80%) através da conjuntiva direita (CD) e 23/30 cães (76,6%) utlizando-se a conjuntiva esquerda (CE), 17/30 cães (56,7%) por meio de BP e 4/30 cães (13.3%) com S. A positividade do SC obtida combinando-se ambas as conjuntivas foi de 90% (27/30 cães). A análise das amostras de SC pelo método ITS-1 nPCR revelou que 25/30 cães (83,3%) foram positivos utilizando-se a CD e 20/30 cães (66,6%) foram positivos via a CE. Pelo mesmo método 15/30 cães (50,0%) foram positivos através de BP e 17/30 cães (56,7%) com S. A positividade obtida combinando-se ambas as oculares foi de 83,3%. Para o método kDNA PCR- hybridização as positividades do SC para a CD e CE foram significantemente superiores (p<0.05) as obtidas com BP e S. Diferença estatística em relação a BP e S foi verificada pelo método ITS-1 nPCR apenas para CD. Os métodos kDNA PCR-hibridação e ITS-1 nPCR apresentaram sensibilidade semelhante para SC e amostras BP. Por outro lado, a positividade do ITS-1 nPCR para amostras de S, foi significativamente maior que a obtida pelo kDNA PCR-hibridização, indicando que a sensibilidade dos métodos de PCR pode variar de acordo com o tecido examinado. A melhor sensibilidade neste estudo (90%) foi obtido através de amostras SC (combinando-se as duas conjuntivas) associada ao kDNA PCR-hibridização. Este nível de sensibilidade foi semelhante ao obtido em outros estudos utilizando SC para o diagnóstico da LV em cães sintomáticos. O segundo grupo foi de 42 cães militares, todos vacinados contra a LV. Neste grupo os resultados do SC foram comparados aos obtidos por testes sorológicos. Os testes sorológicos foram realizados de forma independente por três laboratórios. Os laboratórios 1 e 2 (Lab1 e Lab2) foram laboratórios comerciais. O laboratório 3 (Lab3) foi o Laboratório de Referência Nacional. A primeira triagem sorológica realizada pelo Lab1 mostrou 15 cães reativos e 4 cães foram classificados como indeterminados. Devido à alta positividade encontrada neste ensaio, animais com sorologia reativa e indeterminada, diagnosticados pelo Lab1, foram submetidos a novos testes sorológicos pelos Lab2 e Lab3. O Lab2 confirmou apenas 3 cães reativos e 2 animais foram indeterminados. O Lab3 confirmou 7 cães reativos e 3 cães foram classificados como indeterminados. Os cães que foram confirmados como reativos no diagnóstico sorológico do Lab3 foram submetidos à eutanásia. O diagnóstico molecular por PCR, utilizando o SC em todos os 42 animais foi capaz de detectar o DNA de Leishmania em 17 cães. Comparando os resultados da PCR com os obtidos através do teste sorológico do Lab1, a PCR foi positiva para 10 casos reativos e um caso indeterminado, mas foi negativo para 5 reativos e 3 casos indeterminados. Além disso, a PCR foi positiva em 5 casos não reativos. Os casos reativos e indeterminados, de acordo com o Lab1 que foram PCR negativos, apresentaram resultados negativos nos testes sorológicos dos Lab2 e Lab3. Para o Lab2, a PCR confirmou os 3 casos reativos e foi positiva para os 2 casos indeterminados. Em relação ao Lab3, a PCR confirmou todos os 7 casos reativos e foi positiva para os 3 casos indeterminados. O ensaio de PCR confirmou todos os casos, simultaneamente reativos nos testes sorológicos de dois laboratórios. Nossos resultados mostraram que o SC é um método sensível e prático para coleta de amostra permitindo diagnósticos confiáveis por PCR, além de apresentar sensibilidade superior a outras amostras pouco invasivas. Concluímos que o uso do SC deve ser considerado para os inquéritos caninos rotineiros para a LV / The epidemiological control of visceral Leishmaniasis (VL) in Brazil involves the elimination of infected dogs. Therefore, reliable diagnostic tests are essential to prevent the transmission of the disease or unnecessary culling of dogs. The VL control in Brazil is based on serological surveys, nevertheless serologic assays present problems related to sensitivity and specificity. Polymerase chain reaction (PCR) proved to be a rapid and sensitive technique for detection of Leishmania. However, non-invasive samples are an essential tool in this context, since they are simpler, painless and more easily accepted by dog owners. A useful method is the conjunctival swab (CS) that uses a sterile swab to sample the dog conjunctiva. The SC was highly sensitive for the VL diagnosis by PCR. The objective of this study was to evaluate by CS the prevalence of infected animals in two groups of dogs: asymptomatic and vaccinated against VL. The first group had 30 asymptomatic dogs with positive serological and parasitological tests. The SC samples were compared with two non-invasive samples: blood (B) and skin biopsy (SB). The samples were analyzed by two different PCR methods: kDNA PCR-hybridization and ITS-1 nPCR. The volume of DNA sample used for kDNA PCR-hybridization was 1.0 &#61549; L and ITS-1 nPCR volume was 10.0 L. The DNA sample volume used was of 1.0 L and 10.0 L respectively. Using CS samples the kDNA PCR- hybridization was able to detected parasite DNA in 24/30 dogs (80%) using the right conjunctiva (RC) and 23/30 dogs (76.6%) with the left conjunctiva (LC), 17/30 dogs (56.7%) by means of SB and 4/30 dogs (13.3%) with B. The CS positivity obtained combining RC and LC results was of 90% (27/30 dogs). The assay of CS samples by ITS-1 nPCR revealed that 25/30 dogs (83.3%) were positive when using RC and 20/30 dogs (66.6%) were positive when using LC. Via the same method 15/30 dogs (50.0%) were positive by SB and 17/30 dogs (56.7%) with B. The CS positivity obtained by ITS-1 nPCR combining RC and LC was of 83.3%. The CS positivities for RC and LC were significantly higher (p<0.05) than SB and B for kDNA PCR- hybridization method. Statistical difference in relation to SB and B was verified by ITS-1 nPCR only for RC. Methods kDNA PCR-hybridization and ITS-1 nPCR showed similar sensitivities to CS and SB samples. Moreover, the positivity of ITS-1 nPCR 11 for B samples, was significantly higher than that obtained by kDNA PCR-hybridization, indicating that the sensitivity of the PCR may vary with the tissue examined. The best sensitivity in this study (90%) was obtained from CS samples (by combining both conjunctivas) associated with kDNA PCR-hybridization. This level of sensitivity was similar to that obtained in other studies using CS for the VL diagnosis in symptomatic dogs. The second group was of 42 military dogs, all of them vaccinated against VL. In this group CS and compared with the results obtained by serological tests. The serological tests were carried out independently by three laboratories. Laboratories 1 and 2 (Lab1 and Lab2) were private laboratories. Laboratory 3 (Lab3) was the National Reference Laboratory. The first serological screening performed by the Lab 1 showed 15 reactive dogs and 4 dogs were classified as indeterminate. Due to the high positivity found in this test, animals with reactive and indeterminate serology according Lab 1 were subjected to new serological tests by Lab 2 and Lab 3. Lab 2 confirmed only 3 reactive dogs and 2 animals were undetermined. The Lab 3 found 7 reactive dogs and 3 dogs were classified as indeterminate. Dogs that were confirmed as reactive by Lab 3 were euthanized. The molecular diagnosis by PCR, using CS, was performed in all 42 animals and was able to detect Leishmanial DNA in 17 dogs. Comparing the PCR results with those obtained by serological test of Lab 1, PCR was positive for 10 reactive and one indeterminate case, but was negative for 5 reactive and 3 indeterminate cases. In addition, the PCR was positive in 5 non-reactive cases. The reactive and indeterminate cases according to Lab 1 that were PCR negatives, tested negative in the serologic assays of Lab 2 and Lab 3. For the Lab 2, the PCR confirmed the 3 reactive cases and was positive for the 2 indeterminate cases. In relation to Lab 3, the PCR confirmed all 7 reactive cases and test positive for the 3 indeterminate cases. The PCR assay confirmed all cases simultaneously reactive in the serologic tests of two laboratories. Our results showed that the SC is a sensitive and practical method for collecting samples, allowing reliable diagnostic tests by PCR and showed higher sensitivity than other low invasive samples. We conclude that the use of CS for the regular screenings of dogs by PCR should be considered.

Doutor -- Universidade de Sao Paulo. Faculdade de Saude Publica. Departamento de Epidemiologia, Sao Paulo, 2001.

A leishmaniose visceral (LV) no Brasil é causada pela espécie Leishmania chagasi (L. infantum) e os cães são considerados o principal reservatório doméstico desse parasita. Portanto, o diagnóstico correto e seguro é muito importante para evitar a transmissão da doença ou o sacrifício desnecessário de cães. O objetivo deste trabalho foi avaliar o swab conjuntival (SC), um método não invasivo de amostragem, para o diagnóstico da LV canina por PCR-hibridização. Primeiramente, um teste in vitro foi delineado utilizando-se swabs contaminados com 103 até 1,0 célula de L. chagasi. Três métodos de extração de DNA foram testados: fenol-clorofórmio, kit Wizard e fervura. Em seguida, dois grupos de 23 cães soropositivos foram utilizados. Foram feitos esfregaços por SC em ambos os olhos de cada animal. A extração de DNA de SC foi realizada utilizando-se o método fenolclorofórmio no grupo 1 e a técnica de fervura no grupo 2. Além disso, sangue foi coletado de cada cão sendo que 30&#956;L foram aplicados em papel filtro (PF) e 1,0mL foi tratado para obtenção do anel leucocitário (AL). A purificação de DNA para PF e AL foi realizada da mesma forma em ambos os grupos utilizando-se kits comerciais. A análise de todas as amostras foi feita por PCR seguida de hibridização com sondas de DNA marcadas com 32P. O experimento com swabs contaminados com L. chagasi mostrou positividade na PCR para até 25, 10 e 1,0 célula pelos métodos da fervura, kit Wizard e fenol-clorofórmio respectivamente. A hibridização aumentou a sensibilidade para até 10 e 1,0 célula pelos métodos da fervura e kit Wizard respectivamente. As positividades da PCR para os cães do grupo 1 e 2 foram respectivamente: 73,9% e 52,2% (SC), 8,7% e 30,4% (AL), 8,7% e 17,4% (PF). A hibridização aumentou essas positividades para: 91,3% e 65,2% (SC), 21,7% e 34,8% (AL), 30,4% e 43,5% (PF) respectivamente. Os melhores resultados foram obtidos pela associação de SC com o método de fenol-clorofórmio para extração de DNA. O resultado final obtido desse tratamento foi estatisticamente diferente daqueles referentes ao AL e PF no grupo 1 (p<0,01). No grupo 2, o resultado final proveniente do SC associado com a técnica de fervura para o isolamento de DNA foi estatisticamente distinto apenas do resultado referente ao AL (p<0,05). Concluiu-se que a combinação de SC com a extração de DNA por fenol-clorofórmio é uma ferramenta valiosa para o diagnóstico da LV canina e pode ser recomendada para o diagnóstico em cães sintomáticos. / The visceral leishmaniasis (VL) in Brazil is caused by Leishmania chagasi (L. infantum) and dogs are considered to be the main domestic reservoir. Therefore the correct diagnosis is very important in order to avoid the disease transmission or unnecessary culling of dogs. The aim of this study was to evaluate the conjunctival swab (CS) as a noninvasive sampling method for the canine VL diagnosis by the PCR-hybridization procedure. Firstly, an in vitro test was carried out using cotton swabs seeded with 103 to one cell of L. chagasi. Three DNA purification techniques were tested: phenol-chloroform, Wizard kit and boiling. After that, two groups of 23 seropositive dogs were used. CS samples were obtained from both eyes of each animal. The DNA extraction from CS was performed by the phenol chloroform method in group 1 and by boiling in group 2. In addition, blood was collected from each animal so that 30&#956;L were spotted onto filter paper (FP) and 1.0mL was treated to obtain the buffy coat (BC). The DNA extraction from the BC and FP was accomplished by the same way in both groups using commercial kits. The analysis of all samples was made by PCR associated to the hybridization with 32P labeled DNA probes. The in vitro test with seeded parasites showed positivity to until 25, 10 and one cell for boiling, Wizard kit and phenol chloroform methods respectively. The hybridization step increased the sensitivity until 10 and one cell for the boiling and Wizard respectively. The PCR positivities for the dogs in groups 1 and 2 were respectively: 73.9% and 52.2% (CS), 8,7% and 30.4% (BC), 8.7% and 17.4% (FP). The hybridization step increased the positivities for: 91.3% and 65.2% (CS), 21.7% and 34.8% (BC), 30.4% and 43.5% (FP) respectively. The best frequency of positivity was obtained by the association between CS and the DNA extraction by phenol chloroform. The final result obtained from this treatment was statistically different from the BC and FP data in group 1 (p<0,05). In group 2, the result from CS associated with DNA purification by boiling was distinct only from the BC data (p<0,05). We conclude that the CS associated with the DNA extraction by phenol chloroform is a valuable tool for diagnosis of canine LV and can be recommended for diagnosis of symptomatic dogs.

[pt] A medição de gás natural pelo princípio do ultrassom se mostra competitiva, sob diversos aspectos, quando comparada com medidores deprimogênios, em especial a placa de orifício. O presente trabalho apresenta uma avaliação técnica da utilização de medidores ultrassônicos de múltiplos feixes em sistemas fiscais e para transferência de custódia. Uma avaliação de conformidade em relação às principais normas internacionais relativas à medição de vazão de gás natural pelo princípio do ultrassom é realizada através de dados coletados, para um mesmo medidor, durante sua calibração em laboratório e durante sua operação no campo. Apresenta também uma análise das ferramentas de diagnósticos disponíveis pelo medidor, comparando os resultados obtidos em laboratório e no campo. Foi proposta uma metodologia para a determinação das estimativas de incerteza da medição da vazão instantânea e do volume de gás em determinado intervalo de tempo. As avaliações de conformidade com as normas e as análises das ferramentas de diagnósticos disponíveis mostram que a utilização de medidores ultrassônicos na medição fiscal de gás natural é tecnicamente viável; além disto, considerando um intervalo de tempo conveniente para a totalização dos volumes medidos, a incerteza de medição pode ser bastante reduzida. / [en] The measurement of natural gas by the ultrasonic principle is shown to be competitive in several aspects when compared with orifice plate meters. This paper presents a technical evaluation of the use of multipath ultrasonic meters for custody transfer. The analysis of the meter performance matching with the requirements of principal international standards for measuring of natural gas flowrate by the ultrasonic principle is made using data collected for the same meter during the calibration in laboratory and during operation in the field. It also presents an analysis of the diagnostic tools available by the meter, comparing the results obtained in laboratory and field. A methodology for determining estimates of measurement uncertainty of flow rate and totalize gas in a given time interval is proposed. Evaluations of compliance with the standards and the analysis of the diagnostic tools available show that the use of ultrasonic meters in the fiscal measurement of natural gas is technically feasible, and that, by varying the time for measuring volumes, the uncertainty of measurement can be quite reduced.

Made available in DSpace on 2016-04-28T18:24:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernanda Fudissaku.pdf: 740406 bytes, checksum: 1a15feddeb780d13966c330a426ae031 (MD5) Previous issue date: 2009-05-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This dissertation refers to interviews with parents in the language clinic, comprehending the children treatment. It debates the listening of the therapist to the parents speech. The starting point of this work was a bibliographic research; from this research it was raised a historic view, to provide foundation to the discussion of the subject into the speechlanguage pathology environment. It was identified that the theoretical discussion on the position the parents take inside the speech language clinic is defined by the approach of other study fields: Medicin, Psychology and Psychoanalysis. Inadvertent approaches though, once fragments of theoretical discussions and procedures are incorporated by the speech language pathology study, without taking into consideration the specifics of its main function. Considering this argument as a fact, this study made a carefull approach to the psychoanalitic clinic, in order to establish distinctions between language clinic and psychoanalitic clinic, and also point out positions that appeared to be possibly common. Finally, three clinical cases were presented, chosen by the author s interest to the parents interview. The study strove to raise a debate about the function of the interviews and the listening of the language clinic professional to the parents speech, based on a well limited theoretical position. This dissertation was accomplished thanks to the author s insertion into the Grupo de Pesquisa Aquisição, Patologias e Clínica de Linguagem (LAEL/PUCSP-CNPq), coordinated by Profª Dra Maria Francisca Lier-DeVitto e Profª Dra Lúcia Arantes / Esta dissertação trata das entrevistas com pais na clínica de linguagem que envolve o atendimento de crianças, nela coloco em discussão a escuta do clínico para a fala dos pais. O ponto de partida foi um levantamento bibliográfico, a partir dele tracei um breve panorama histórico, para discutir como o tema tem sido tratado na Fonoaudiologia. Constatei que a discussão teórica relativa ao lugar que pais ocupam na clínica fonoaudióloga é caracterizada pelas aproximações a outros campos, a saber: Medicina, Psicologia e Psicanálise. Aproximações inadvertidas, uma vez que fragmentos de discursos teóricos e procedimentos são incorporados pela Fonoaudiologia sem que se considere a especificidade de sua atuação. Após tal constatação, procurei realizar uma aproximação cuidadosa à clínica psicanalítica, para estabelecer distinções entre a clínica de linguagem e psicanalítica e, também, assinalar lugares que surgiram como possibilidade de encontro. Por fim, apresentei três casos clínicos, em que as entrevistas com pais me tocaram de modo especial. Procurei movimentar uma reflexão sobre a função das entrevistas e sobre a escuta do clínico de linguagem para a fala dos pais a partir de uma posição teórica bem delimitada. Esclareço que esta dissertação é fruto de minha inserção no Grupo de Pesquisa Aquisição, Patologias e Clínica de Linguagem (LAEL/PUCSP-CNPq), coordenado pelas Profª Dra Maria Francisca Lier-DeVitto e Profª Dra Lúcia Arantes

Em proteção radiológica dois conjuntos de grandezas são importantes, as de proteção e as operacionais. Ambas podem ser relacionadas a partir de coeficientes de conversão com grandezas físicas básicas como o kerma. Para feixes de radiação utilizados em radiodiagnóstico nas qualidades da Comissão Internacional de Eletrotécnica (IEC), os coeficientes de conversão e fatores de retroespalhamento ainda não foram determinados. É, portanto, necessário a determinação de coeficientes e fatores para a calibração dos dosímetros que serão utilizados para determinar o equivalente de dose pessoal ou a dose na entrada da pele. Foram determinados experimentalmente os coeficientes de conversão de kerma no ar para o equivalente de dose pessoal, Hp(d), e os fatores de retroespalhamento para as qualidades RQR e RQA da IEC que simulam feixes de raios X diagnósticos. Para a determinação dos coeficientes de conversão é necessário a determinação do kerma no ar dentro do simulador e a energia média do espectro. Foram utilizados dosímetros termoluminescentes do tipo 100H para a medida do kerma no ar no simulador. Os dosímetros foram calibrados utilizando uma câmara de ionização padrão terciário de 180cc da Radcal Corporation. Os dosímetros foram colocados no eixo central de um simulador tipo placa de 300 mm x 300 mm x 15 mm de polimetilmetalacrilato (PMMA) com o intuito de determinar a dose na profundidade. No procedimento de medida os dosímetros foram dispostos em cinco diferentes profundidades (5, 10, 15, 25 e 35 mm). Um outro parâmetro necessário para a determinação dos coeficientes de conversão é a energia média do espectro de raios X. A espectrometria dos feixes de raios X utilizados foi feita utilizando um detector semicondutor de CdTe. O detector foi calibrado utilizando fontes de radiação de 133Ba, 241Am e 57Co. Foram feitas correções em relação a eficiência intrínseca, absorção total de energia, fração de escape de raios X característicos, efeito Compton e atenuação devido a matérias que se encontravam entre o detector e o ponto onde foi determinado a energia média. As medidas do espectro de raios X foram corrigidas utilizado o método de stripping. Os valores das incertezas dos coeficientes de conversão e fatores de retroespalhamento foram da ordem de 12% e 6% respectivamente. / Two sets of quantities are import in radiological protection: the protection and operational quantities. Both sets can be related to basic physical quantities such as kerma through conversion coefficients. . For diagnostic x-ray beams the conversion coefficients and backscatter factors have not been determined yet, those parameters are need for calibrating dosimeters that will be used to determine the personal dose equivalent or the entrance skin dose. Conversion coefficients between air kerma and personal dose equivalent and backscatter factors were experimentally determined for the diagnostic x-ray qualities RQR and RQA recommended by the International Electrotechnical Commission (IEC). The air kerma in the phantom and the mean energy of the spectrum were measured for such purpose. Harshaw LiF-100H thermoluminescent dosemeters (TLD) were used for measurements after being calibrated against an 180 cm3 Radcal Corporation ionization chamber traceable to a reference laboratory. A 300 mm ×300 mm × 150 mm polymethilmethacrylate (PMMA) slab phantom was used for deep-dose measurements. Tl dosemeters were placed in the central axis of the x-ray beam at 5, 10, 15, 25 and 35 mm depth in the phantom upstream the beam direction Another required parameter for determining the conversion coefficients from was the mean energy of the x-ray spectrum. The spectroscopy of x-ray beams was done with a CdTe semiconductor detector that was calibrated with 133Ba, 241Am and 57Co radiation sources. Measurements of the x-ray spectra were carried out for all RQR and RQA IEC qualities. Corrections due to the detector intrinsic efficiency, total energy absorption, escape fraction of the characteristic x-rays, Compton effect and attenuation in the detector were done aiming an the accurate determination of the mean energy. Measured x-ray spectra were corrected with the stripping method by using these response functions. The typical combined standard uncertainties of conversion coefficients and backscatter factors were 12% and 6% respectively.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Muitos estudos já demonstraram a aplicabilidade da reação em cadeia da polimerase (PCR) para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC), cujo agente etiológico no Brasil é a Leishmania (Leishmania) chagasi. Um dos maiores obstáculos para a implementação desta técnica é a falta de padronização. Centenas de trabalhos foram publicados até o momento sobre o diagnóstico por PCR das leishmanioses, mas poucos foram realizados com a finalidade de comparar a eficiência dos diversos protocolos disponíveis. O objetivo deste trabalho foi comparar a sensibilidade de quatro métodos de PCR para o diagnóstico da LVC. As técnicas foram primeiramente testadas usando DNA purificado de promastigotas cultivados e em seguida em amostras coletadas de cães infectados pelo método do swab conjuntival. Todos os métodos de PCR utilizados neste trabalho apresentam duas etapas: amplificação seguida de hibridização ou de uma nova amplificação (nested ou semi nested). Dois dos métodos (kDNA PCR-Hibridização e kDNA snPCR) utilizam iniciadores endereçados aos minicírculos do cinetoplasto (kDNA) e os outros dois métodos apresentam como alvo a região codificante (LnPCR) e intergênica não codificante (ITS1 nPCR) dos genes do RNA ribossômico (RNAr). Quando foi utilizado DNA purificado de L. (L.) chagasi o kDNA snPCR apresentou a melhor sensibilidade detectando até 10 fg enquanto que os outros métodos detectaram até 100 fg. Estes resultados não se correlacionaram bem com os obtidos de cães infectados através do swab conjuntival. Dois grupos de 23 cães foram usados. No Grupo 1 o DNA foi extraído dos swabs pelo método do fenol-clorofórmio e no Grupo 2 por fervura. Para os cães do grupo 1 os métodos mais eficientes foram os baseados em alvos de kDNA. O kDNA PCR-Hibridização detectou parasitas em 22/23 cães (95,6%) e em 40/46 amostras (86,9%), considerando as conjuntivas direita e esquerda. O kDNA snPCR foi positivo para 21/23 cães (91,3%) e para 40/46 amostras (86,9%). As positividades destes métodos foram significativamente superiores as obtidas pelos métodos com alvos nos genes de RNAr (p<0,05). O método LnPCR obteve resultado positivo em 17/23 cães (73,9%) e em 30/46 amostras (65.2%). Já o ITS1 nPCR conseguiu detectar os parasitas em 16/23 cães (69,6%) e 28/46 (60,9%) das amostras. No grupo 2 o método kDNA PCR-Hibridização também mostrou melhor desempenho detectando parasitas em 18/23 cães (78,3%) e em 31/46 amostras (67,4%), resultado significativamente superior (p<0.05) aos outros três métodos. As positividades dos métodos kDNA snPCR e LnPCR foram abaixo do esperado e estes ensaios parecem ter sofrido algum tipo de inibição relacionada ao processo de extração de DNA. A maior sensibilidade dos métodos baseados em minicírculos de kDNA descrita por outros pesquisadores foi confirmada neste estudo. O kDNA PCR-Hibridização mostrou a melhor sensibilidade entre os métodos avaliados, entretanto a escolha do melhor método vai depender do tipo de informação requerida com o diagnóstico. Como um todo, nossos resultados apóiam a aplicabilidade do método do swab conjuntival para diagnóstico da LVC. / Many studies have demonstrated the applicability of Polymerase chain reaction (PCR) for diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL). The disease in Brazil is caused by Leishmania (Leishmania) chagasi. A major concern in the development and implementation of PCR for Leishmania ssp. diagnosis is the lack of standardization. Many works on PCR diagnosis of leishmaniasis have been published, but very few studies have compared different protocols. The aim this work was to compare the sensitivities of four PCR methods for CVL diagnosis. The comparison was firstly accomplished using DNA purified from cultured promastigotas and then using samples collected from infect dogs by the conjunctival swab procedure. All PCR methods presented two steps: a first amplification followed by hybrization or a new amplification (nested or semi nested). Two of the methods (kDNA PCR-Hibridization and kDNA snPCR) used primers addressed to kinetoplast minicircles and the other two methods to the coding (LnPCR) and intergenic noncoding regions (ITS1 nPCR) of the ribosomal rRNA genes. The assessment using purified DNA of L. (L.) chagasi demonstrated that the kDNA snPCR showed the best sensitivity detecting up 10 fg while all other methods detected up to 100 fg. These results did not correlate well with those obtained from infected dogs by the conjunctival swab procedure. Two groups of 23 dogs were used. In Group 1 the DNA was extracted from cotton swabs by phenol-chloroform and in Group 2 by boiling. In the Group 1 the most efficient methods were those based on kDNA targets. The kDNA PCR-Hybridization was able detect parasites in 22/23 dogs (95.6%) and in 40/46 samples (86.9%), considering the right and the left conjunctivas. The kDNA snPCR was positive for 21/23 dogs (91.3%) and for 40/46 samples (86.9%). The positivities of kDNA based methods were significantly higher than the positivities obtained by the two methods based on ribosomal rRNA genes (p<0.05). The method LnPCR was able to detect parasites in 17/23 dogs (73.9%) and 30/46 (65.2%) samples. The ITS1 nPCR was positive for 16/23 dogs (69.6%) and 28/46 (60.9%) samples. In Group 2 the kDNA PCR-Hybridization also showed the best performance. It was able to detected parasites in 18/23 dogs (78.3%) and 31/46 samples (67.4%), significantly higher (p<0.05) than the other three methods. The positivities of two methods, kDNA snPCR, and LnPCR, were below than the expected and these assays seem to be undergone some kind of inhibition related to DNA extraction procedure. The higher sensitivity of the minicircle kDNA based assays reported by others was confirmed in this study. The kDNA PCR-Hybridization showed the best sensitivity among the assays evaluated, however the choice of the best method will depend on the kind of information needed with the diagnosis. As a whole, our results support the applicability of the conjuntival swab procedure for CVL diagnosis.

[pt] O aumento, nas últimas décadas, de diagnósticos psiquiátricos infantis como TDAH e outros, cuja etiologia vem sendo atribuída a fatores orgânicos, impulsionou o interesse da presente pesquisa. A partir do referencial psicanalítico freudiano, procuramos traçar um histórico da valorização do fator orgânico para o entendimento e tratamento das doenças físicas ou psíquicas na medicina. A especificidade da infância e a evolução do olhar sobre os tratamentos infantis foi abordada assim como o tema da medicina preventiva e os riscos da mesma se tornar uma predição com efeitos iatrogênicos. / [en] The increase, in the last few decades, in the number of ADHD and other psychiatric diagnoses in children, whose etiology is being attributed to organic factors, has propelled the interest for this research dissertation. Using the Freudian psychoanalytical framework, we sought to delineate a history of the valorization of the organic factor for the understanding and treatment of physical or psychological ailments in Medicine. The specificity of childhood and the evolution of the gaze on treatments of children has been approached, as well as the subject of preventive medicine and its risks of becoming a prediction with iatrogenic effects.